CN102841206A - 肌钙蛋白T(Troponin-T,TNT)测定试剂盒 - Google Patents
肌钙蛋白T(Troponin-T,TNT)测定试剂盒 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102841206A CN102841206A CN2011101684495A CN201110168449A CN102841206A CN 102841206 A CN102841206 A CN 102841206A CN 2011101684495 A CN2011101684495 A CN 2011101684495A CN 201110168449 A CN201110168449 A CN 201110168449A CN 102841206 A CN102841206 A CN 102841206A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- tnt
- reagent
- solution
- kit
- kit according
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 102000004987 Troponin T Human genes 0.000 title abstract description 6
- 108090001108 Troponin T Proteins 0.000 title abstract description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 33
- 239000004816 latex Substances 0.000 claims abstract description 23
- 229920000126 latex Polymers 0.000 claims abstract description 23
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 14
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims abstract description 9
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims abstract 2
- 238000013016 damping Methods 0.000 claims description 18
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 18
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 16
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 11
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 7
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 6
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 235000013905 glycine and its sodium salt Nutrition 0.000 claims description 5
- 238000004879 turbidimetry Methods 0.000 claims description 5
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 4
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 4
- 238000007789 sealing Methods 0.000 claims description 4
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 claims description 3
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 3
- CCMKPCBRNXKTKV-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxy-5-sulfanylidenepyrrolidin-2-one Chemical compound ON1C(=O)CCC1=S CCMKPCBRNXKTKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 claims description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 claims description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 2
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 claims 2
- 244000309466 calf Species 0.000 claims 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 claims 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 claims 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims 1
- 239000012482 calibration solution Substances 0.000 claims 1
- 230000021523 carboxylation Effects 0.000 claims 1
- 238000006473 carboxylation reaction Methods 0.000 claims 1
- 239000012510 hollow fiber Substances 0.000 claims 1
- 238000000247 postprecipitation Methods 0.000 claims 1
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 10
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 abstract description 6
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 abstract description 3
- 102000004903 Troponin Human genes 0.000 abstract description 2
- 108090001027 Troponin Proteins 0.000 abstract description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 abstract 2
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 abstract 2
- 239000008213 purified water Substances 0.000 abstract 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 2
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 abstract 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 abstract 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 abstract 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 abstract 1
- 239000012898 sample dilution Substances 0.000 abstract 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 14
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 7
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 7
- 102100026893 Troponin T, cardiac muscle Human genes 0.000 description 6
- 101710165323 Troponin T, cardiac muscle Proteins 0.000 description 6
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 6
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 108010010803 Gelatin Chemical group 0.000 description 3
- 101100537532 Rattus norvegicus Tnni3 gene Proteins 0.000 description 3
- 208000007814 Unstable Angina Diseases 0.000 description 3
- 229920000159 gelatin Chemical group 0.000 description 3
- 239000008273 gelatin Chemical group 0.000 description 3
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 3
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 3
- 230000003680 myocardial damage Effects 0.000 description 3
- QYSGYZVSCZSLHT-UHFFFAOYSA-N octafluoropropane Chemical group FC(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F QYSGYZVSCZSLHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 230000008676 import Effects 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 6-aminohexanoic acid Chemical compound NCCCCCC(O)=O SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000911390 Homo sapiens Coagulation factor VIII Proteins 0.000 description 1
- 229960002684 aminocaproic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 1
- 238000012412 chemical coupling Methods 0.000 description 1
- 238000010219 correlation analysis Methods 0.000 description 1
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 102000057593 human F8 Human genes 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 229960003511 macrogol Drugs 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 1
- TZBAVQKIEKDGFH-UHFFFAOYSA-N n-[2-(diethylamino)ethyl]-1-benzothiophene-2-carboxamide;hydrochloride Chemical group [Cl-].C1=CC=C2SC(C(=O)NCC[NH+](CC)CC)=CC2=C1 TZBAVQKIEKDGFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 229920000151 polyglycol Polymers 0.000 description 1
- 239000010695 polyglycol Substances 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 229940047431 recombinate Drugs 0.000 description 1
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005201 scrubbing Methods 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M sodium hydroxide Substances [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明涉及一种测定血清中的肌钙蛋白T含量测定的试剂盒。所要解决的技术问题是克服上述背景技术的不足，提供一种样本无需稀释、操作简单、准确度高、重复性好，适用于各种类型的全自动生化分析仪以及各种特种蛋白仪的免疫比浊法检测肌钙蛋白T含量的试剂盒。技术方案是：免疫增强比浊法检测肌钙蛋白T试剂盒，包括：a、试剂R1：缓冲液、防腐剂、加速剂、无机盐、表面活性剂，其余为纯化水；b、试剂R2：缓冲液、结合有抗人的肌钙蛋白抗体、防腐剂，乳胶微球直径为60-150nm；c、参考校准品：缓冲液，稳定剂，防腐剂以及根据浓度需要确定的一定量的重组人蛋白肌钙蛋白T纯品，其余为纯化水。
Description
技术领域：
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种采用乳胶增强免疫比浊法测定人血清中肌钙蛋白含量的试剂盒。
背景技术
cTnT是反映心肌细胞损伤的灵敏性、特异性较高的生化指标。cTnT检测敏感性为87.5％，阴性预期值达92.9％，准确性66.7％。其对AMI的诊断具有较高的灵敏度和特异性。也有学者认为心肌损伤的标志物cTnT和cTnI是诊断AMI的“金标准”。cTnT诊断AMI窗口期为3小时至21日，更适用于确诊那些发病超过3日且心电图不能确定诊断的AMI病例。Msir等发现cTnT、cTnI和CK-MB(质量分析)的4小时AMI诊断的阳性率分别为55％、59％、64％。而另一个试验认为TnT在胸痛发作后6小时内是心肌损伤的敏感标志物，并且可以与“金标准”CK-MB(质量分析)相比较，同时发现cTnT的诊断特异性仅46％。分析其原因可能是一定数量的病人在不稳定型心绞痛时仅有微小心肌损伤的结果。亦有人认为与CK/CK-MB活性比较，cTnT和cTnI一致阴性的病例可排除诊断AMI/不稳定型心绞痛(UAP)，提示cTnT是一极有价值的临床指标。
目前在临床上使用的TNT检测方法有：放射免疫法(IRA)，此法直接可以测血浆，但该法有环境污染以及对操作者有一定的放射性辐射；化学发光法，该法较放射免疫法较为敏感，准确，但成本相对昂贵，需要配套的仪器才可以使用；酶免疫法(ELISA)，存在操作繁琐，标本需要预处理，检测时间长等缺点。而胶乳增强免疫比浊法具有操作简便，快速，检测灵敏度高、特异、定量准确等优点，在临床应用能得到广泛认可。
发明内容
本发明的目的是建立一种新的检测方法，通过羊抗人的肌钙蛋白T抗体与胶乳颗粒偶联，采用胶乳增强比浊法来测定人体血清中TNT的含量，运用该方法的试剂应具有不需要预处理标本，操作简单，准确度高，重复性好，且能够在全自动生化分析仪或者特种蛋白仪及分光光度计上使用。
为了解决上述的技术问题，本发明实现了以下技术：
1.一种采用胶乳增强免疫比浊法检测TNT含量的试剂盒，其特征在于，包含试剂R1，R2以及校准品；所述试剂R1：PH值为6.5-8.0的缓冲液，所述试剂R2为抗人TNT抗体胶乳试剂；所述标准品为含有定量的TNT的重组蛋白或者是从人血清中提取出来的天然TNT。
2.所述的TNT检测试剂盒中的R1试剂主要包含缓冲液，无机盐，加速剂和防腐剂。
3.所述的TNT检测试剂盒中R2试剂主要包含稳定剂，抗人单(多)克隆抗体胶乳颗粒，缓冲液，稳定剂和防腐剂。其中乳胶微球直径为60-150nm。
4.试剂R1所述的无机盐选自氯化钠，氯化镁，氯化钾一种或几种。缓冲液为：磷酸盐缓冲液，碳酸盐缓冲液，甘氨酸-氢氧化钠缓冲液。加速剂为聚乙二醇4000，聚乙二醇6000，聚乙二醇8000
5.试剂R2所选用的抗体为鼠抗人TNT单克隆抗体，羊抗人TNT单克隆抗体，兔抗人TNT单克隆抗体一种或者几种混合。也可以选鼠抗人TNT多克隆抗体，羊抗人TNT多克隆抗体，兔抗人TNT多克隆抗体其中一种。
6.试剂R2中的稳定剂选自小牛白蛋白，甘氨酸，明胶，吐温20，曲拉通一种或者几种。
7.本发明所述的试剂R2为抗人TNT抗体胶乳试剂，采用的是抗人的TNT抗体与胶乳颗粒相偶联。经过离心(过滤)的方法去掉未反应的偶联剂以及术反应的抗体，在含有稳定剂和防腐剂的缓冲液中分散而成。
8.所述抗人TNT抗体的胶乳试剂的制备包括以下步骤。
步骤1：将胶乳在PH6.5的溶液中活化。
步骤2：洗涤去掉溶液中的碳化二亚胺，加PH7.5-9.0的缓冲液，加入TNT抗体，在37度反应4小时。
步骤3：将步骤2所得的液体用PH7.5-9.0的固定液固定6小时。
步骤4：将步骤3所得的液体用PH7.5-9.0的封闭液体封闭12小时。
步骤5：将步骤4所得的液体洗涤去掉未结合抗体，溶液用含有稳定剂和防腐剂的缓冲液洗涤分散即得。
9.作为优选，步骤1中所用的缓冲液为PBS缓冲液，MES缓冲液，碳酸盐缓冲液中的任何一种缓冲液，且浓度在20-100mmol/L，PH在5.5-6.5之间。
10.作为优选，步骤1中所用的胶乳可以是羧基化的聚苯乙烯胶乳或者是氨基化的聚苯乙烯胶乳。其孔径在60nm-150nm均可。
11.作为优选，步骤1中含有1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐或N-羟基硫代琥珀酰亚胺中的一种或者多种。
12.作为优选，在步骤2中，去掉溶液1中所含的未反应的物质，采用的是高速冷冻离心机或者超微孔径的过滤膜进行过滤。
13.作为优选，在步骤5中，所用的稳定剂是小牛血清白蛋白，明胶，甘氨酸，脱脂奶粉一种或者几种相混合。
15本发明检测的原理是：利用抗原抗体反应，先加入试剂R1，使血清中的TNT的位点暴露，当加入抗人的TNT胶乳颗粒溶液，使溶液中的抗原抗体反应形成不溶于溶液的抗原抗体复合物，从而产生一定的浊度，在人血清中TNT的含量在一定的范围内TNT的含量与浊度成正比。再通过标准曲线进行计算，从而得到TNT的含量。
16本发明与现有技术相比，具有如下特点：
1)本发明试剂盒具有较高的检测灵敏度，最低检测能够达到0.1ng/L，操作简单，快速，从检测到出结果最多只需要10分钟，甚至更短。
2)本发明的试剂盒R2试剂中的抗体乳胶的制备由于采用的化学偶联法，稳定性好，在2-8度至少可以保存18个月。而采用物理吸附法的胶乳抗体试剂，批间差异比较大，而且稳定性不好。
3)本发明试剂盒与进口试剂盒对样品中TNT含量检测的数据经统计分析，无显著性差异，检测结果可靠，在临床上可以替代进口试剂或者化学发光试剂，大幅降低成本以及检测时间。
附图说明
图1为本发明实施例1的校准曲线
图2为本发明实施例1的测定值与化学分光试剂盒测定值的相关分析。
实施案例
本发明公开了一种检测TNT含量的试剂盒，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，他们都被视为包括在本发明内。本发明的产品及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围对本文所述的方法和应用进行改动或者适当变更与组合，本实现和应用本发明技术。
下面以具体的实施例对本发明做进一步说明。
一、TNT试剂R2即抗人TNT抗体胶乳试剂的制备
1：将2g孔径大小为80nm的羧基化的胶乳加入到50ml的含有1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺200mg/L的PH7.0的0.4mol/L的MES缓冲液中，反应2小时。
2：将反应液分成5ml/管，在转速为16000转/分的高速冷冻离心机中离心30分钟后，去掉上清液，每管加浓度为0.4mol/L的磷酸盐缓冲液5ml混匀。继续在速为16000转/分的高速冷冻离心机中离心30分钟后，去掉上清液，每管加浓度为0.4mol/L的磷酸盐缓冲液5ml混匀。
3，每管加入羊抗人TNT抗体100mg，在37度反应6小时。
4：向每管中加入含有5g/L的6氨基己酸PH 8.0的磷酸盐缓冲液10ml。
5：每管液体加小牛白蛋白0.08g，摇匀反应12小时。
5：将所得的液体通过2次离心，转速为16000转/分，洗涤去掉未结合抗体，溶液用含有0.5g/L的明胶和0.2g/L小牛白蛋白和0.05％的曲拉通以及0.1g/L叠氮钠的0.4mol/LPBS缓冲液分散即可。
二、TNT试剂R1即样品缓冲液的制备
三TNT试剂中校准品的制备
1)校准品稀释液
2)按照需要的TNT参考校准品浓度将相应的重组TNT纯品320ng加入校准品稀释液20ml的缓冲液中，制备得到16ng/ml浓度的TNT校准品在使用的时候在用缓冲液按照比例稀释成多个浓度。
四)TNT测定方法(日立7060全自动生化分析仪)
校准品浓度：16ng/ml 8ng/ml 4ng/ml 2ng/ml 0ng/ml
测定波长：主波长：576nm 副波长：800nm
试剂比例：R1∶R2∶S＝200ul∶50ul∶20ul
校准方式：spline
读点方式：在试剂R1与样品加入，反应5分钟，读点A1，然后加入R2后，反应5分钟，再读点A2，计算吸光度的变化。
校准曲线见图1
五)本发明所述试剂盒的分析性能评估
1.灵敏度测定
用本发明所述的试剂盒对空白样本(含有5％牛血清的生理盐水)重复测定20次，最低检测限度为空白的均值浓度加上二个标准差，得到最低检测限度为0.12ng/ml。
2.线性评估
取浓度将近50ng/ml(43.2ng/ml)的临床血清标本，进行稀释，至少稀释6个点，每个点重复测定3次，根据式(1)，(2)，(3)计算出直线方程y＝a+bx：
式中：b-回归线的斜率；
|a|-回归线截距的绝对值；
r-回归系数；
Xi-测定管溶液的浓度；
Yi-3次重复测定的与测定管溶液浓度对应的吸光度均值；
i-1，2，3，……，n；
n-测定样本数。
测定数据(见表1)表1
| 测定值 | 理论值 |
| 43.2 | 37.4 |
| 21.6 | 22.9 |
| 10.8 | 10.1 |
| 5.4 | 5.8 |
| 2.7 | 2.2 |
| 0 | 0.1 |
检测结果：R＝0.993，表明当血清中肌钙蛋白T的浓度在0.12-43.2ng/ml范围内，本试剂盒有良好的线性。
3.精密度测定
通过2个不同浓度的肌钙蛋白T血清来测定本发明所述的批内精密度以及批间精密度。结果表明。本发明的试剂盒批内精密度为5.1％和4.3％(见表2)，批间精密度为7.2％和5.7％ (见表3)。
表2
| 样品浓度 | 0.6l ng/ml | 10.3ng/ml |
| 测定均值 | 0.49ng/ml | 11.7ng/ml |
| 标准差 | 0.0249 | 0.5031 |
| 批内精密度 | 5.1％ | 4.3％ |
表3
| 样品浓度 | 0.61ng/ml | 10.3ng/ml |
| 测定均值 | 0.45ng/ml | 11.4ng/ml |
| 标准差 | 0.0324 | 0.6498 |
| 批间精密度 | 7.2％ | 5.7％ |
Claims (7)
1.一种采用胶乳增强免疫比浊法检测人血清中TnT含量的试剂盒，其特征在于，包含试剂R1，R2以及校准液；所述试剂R1PH值为6.5-8.0的缓冲液，所述试剂R2为抗人TNT抗体胶乳试剂；所述标准品为含有定量的TNT的重组蛋白或者是从人血清中提取出来的天然TNT。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述抗人TNT抗体的胶乳试剂的制备包括以下步骤。
步骤1：将羧化的胶乳在PH6.5的溶液活化。
步骤2：洗涤去掉溶液中的碳化二亚胺，加PH7.5-9.0的缓冲液，加入TNT抗体，在37度反应4小时。
步骤3：将步骤2所得的液体用PH7.5-9.0的固定液固定6小时。
步骤4：将步骤3所得的液体用PH7.5-9.0的封闭液体封闭12小时。
步骤5：将步骤4所得的液体离心去上清液，取沉淀后用含有稳定剂和防腐剂的缓冲液洗涤分散即得。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，步骤1所述溶液为含有1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐或N-羟基硫代琥珀酰亚胺中的一种或者二种。
4.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，步骤3所述溶液含有6-氨基己酸，甘氨酸
5.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，步骤2所述的洗涤过程为高速冷冻离心机离心或者是用孔径小于100nm的中空纤维管状进行过滤。
6.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，步骤4所述溶液含有的稳定剂选自甘氨酸，小牛血清，以及吐温-20、曲拉通等表面活性剂以及氯化钠、氯化镁中的一种或者几种。
7.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，步骤4所述溶液含有的甘氨酸，小牛血清的浓度为0.05-0.5％(质量分数)吐温-20或者曲拉通浓度为0.005-0.01％(体积分数)氯化镁、氯化钠的浓度为0.05-0.15％(质量分数)。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201110168449.5A CN102841206B (zh) | 2011-06-22 | 2011-06-22 | 肌钙蛋白T(Troponin-T,TNT)测定试剂盒 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201110168449.5A CN102841206B (zh) | 2011-06-22 | 2011-06-22 | 肌钙蛋白T(Troponin-T,TNT)测定试剂盒 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102841206A true CN102841206A (zh) | 2012-12-26 |
| CN102841206B CN102841206B (zh) | 2016-01-20 |
Family
ID=47368757
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201110168449.5A Active CN102841206B (zh) | 2011-06-22 | 2011-06-22 | 肌钙蛋白T(Troponin-T,TNT)测定试剂盒 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102841206B (zh) |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103389385A (zh) * | 2013-08-07 | 2013-11-13 | 上海睿康生物科技有限公司 | 一种乳胶包被的肌钙蛋白检测试剂盒 |
| CN104142406A (zh) * | 2014-08-22 | 2014-11-12 | 山东博科生物产业有限公司 | 一种稳定的肌钙蛋白i检测试剂盒 |
| CN106093418A (zh) * | 2016-05-26 | 2016-11-09 | 安徽伊普诺康生物技术股份有限公司 | 一种测定肌钙蛋白i的试剂盒及其制备方法 |
| CN107525936A (zh) * | 2017-07-21 | 2017-12-29 | 王贤俊 | 一种提升胶乳免疫比浊法中肌钙蛋白抗体稳定性的组合物 |
| CN108318698A (zh) * | 2017-01-17 | 2018-07-24 | 天津市协和医药科技集团有限公司 | 一种便潜血乳胶增强免疫比浊试剂盒 |
| CN109765382A (zh) * | 2018-12-12 | 2019-05-17 | 北京九强生物技术股份有限公司 | 一种心肌肌钙蛋白t的胶乳增强免疫比浊检测试剂盒 |
| CN110857935A (zh) * | 2018-08-24 | 2020-03-03 | 株式会社岛津制作所 | 分析用试样的制备方法、分析方法和分析用试样的制备用试剂盒 |
| CN114206920A (zh) * | 2019-08-09 | 2022-03-18 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 新型抗肌钙蛋白t抗体 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002039114A2 (en) * | 2000-11-13 | 2002-05-16 | Sigma-Aldrich Co. | Improved assay and reagents or immunological determination of analyte concentration |
| CN101377492A (zh) * | 2007-08-29 | 2009-03-04 | 北京九强生物技术有限公司 | 胱抑素c测定试剂盒 |
| CN101769932A (zh) * | 2010-01-26 | 2010-07-07 | 宁波美康生物科技有限公司 | 全量程c反应蛋白检测试剂盒 |
| CN101813700A (zh) * | 2010-03-31 | 2010-08-25 | 浙江伊利康生物技术有限公司 | 一种纳米微球免疫比浊法检测β2-微球蛋白试剂盒 |
| CN101819208A (zh) * | 2010-03-31 | 2010-09-01 | 浙江伊利康生物技术有限公司 | 一种纳米微球免疫比浊法检测脑钠肽试剂盒 |
| CN101819202A (zh) * | 2010-05-06 | 2010-09-01 | 上海太阳生物技术有限公司 | D-二聚体(D-Dimer)测定试剂盒(胶乳免疫比浊法) |
-
2011
- 2011-06-22 CN CN201110168449.5A patent/CN102841206B/zh active Active
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002039114A2 (en) * | 2000-11-13 | 2002-05-16 | Sigma-Aldrich Co. | Improved assay and reagents or immunological determination of analyte concentration |
| CN101377492A (zh) * | 2007-08-29 | 2009-03-04 | 北京九强生物技术有限公司 | 胱抑素c测定试剂盒 |
| CN101769932A (zh) * | 2010-01-26 | 2010-07-07 | 宁波美康生物科技有限公司 | 全量程c反应蛋白检测试剂盒 |
| CN101813700A (zh) * | 2010-03-31 | 2010-08-25 | 浙江伊利康生物技术有限公司 | 一种纳米微球免疫比浊法检测β2-微球蛋白试剂盒 |
| CN101819208A (zh) * | 2010-03-31 | 2010-09-01 | 浙江伊利康生物技术有限公司 | 一种纳米微球免疫比浊法检测脑钠肽试剂盒 |
| CN101819202A (zh) * | 2010-05-06 | 2010-09-01 | 上海太阳生物技术有限公司 | D-二聚体(D-Dimer)测定试剂盒(胶乳免疫比浊法) |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 郭德芝: "胶乳增强免疫比浊定量法测定肌钙蛋白T对急性心肌梗塞诊断应用的探讨", 《中国中医药咨讯》, vol. 3, no. 14, 31 May 2011 (2011-05-31) * |
Cited By (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103389385A (zh) * | 2013-08-07 | 2013-11-13 | 上海睿康生物科技有限公司 | 一种乳胶包被的肌钙蛋白检测试剂盒 |
| CN104142406A (zh) * | 2014-08-22 | 2014-11-12 | 山东博科生物产业有限公司 | 一种稳定的肌钙蛋白i检测试剂盒 |
| CN104142406B (zh) * | 2014-08-22 | 2016-03-30 | 山东博科生物产业有限公司 | 一种稳定的肌钙蛋白i检测试剂盒 |
| CN106093418A (zh) * | 2016-05-26 | 2016-11-09 | 安徽伊普诺康生物技术股份有限公司 | 一种测定肌钙蛋白i的试剂盒及其制备方法 |
| CN108318698A (zh) * | 2017-01-17 | 2018-07-24 | 天津市协和医药科技集团有限公司 | 一种便潜血乳胶增强免疫比浊试剂盒 |
| CN107525936A (zh) * | 2017-07-21 | 2017-12-29 | 王贤俊 | 一种提升胶乳免疫比浊法中肌钙蛋白抗体稳定性的组合物 |
| CN107525936B (zh) * | 2017-07-21 | 2020-02-07 | 王贤俊 | 一种提升胶乳免疫比浊法中肌钙蛋白抗体稳定性的组合物 |
| CN110857935A (zh) * | 2018-08-24 | 2020-03-03 | 株式会社岛津制作所 | 分析用试样的制备方法、分析方法和分析用试样的制备用试剂盒 |
| CN109765382A (zh) * | 2018-12-12 | 2019-05-17 | 北京九强生物技术股份有限公司 | 一种心肌肌钙蛋白t的胶乳增强免疫比浊检测试剂盒 |
| CN109765382B (zh) * | 2018-12-12 | 2021-10-08 | 北京九强生物技术股份有限公司 | 一种心肌肌钙蛋白t的胶乳增强免疫比浊检测试剂盒 |
| CN114206920A (zh) * | 2019-08-09 | 2022-03-18 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 新型抗肌钙蛋白t抗体 |
| CN114206920B (zh) * | 2019-08-09 | 2024-06-07 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 新型抗肌钙蛋白t抗体 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN102841206B (zh) | 2016-01-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102841206B (zh) | 肌钙蛋白T(Troponin-T,TNT)测定试剂盒 | |
| CN102692507B (zh) | 脂蛋白相关磷脂酶a2(lppla2)测定试剂盒(胶乳增强免疫比浊法) | |
| CN103364568B (zh) | 一种层粘连蛋白纳米磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法 | |
| CN102680698A (zh) | 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(ngal)测定试剂盒(胶乳增强免疫比浊法) | |
| CN107402308A (zh) | Il‑6定量检测试剂盒及其制备方法 | |
| CN102608325B (zh) | 心型脂肪酸结合蛋白(h-fabp)测定试剂盒(胶乳增强免疫比浊法) | |
| CN108152512A (zh) | 肝素结合蛋白检测试剂盒及其制备方法 | |
| CN103698535B (zh) | 脂蛋白相关磷脂酶a2定量检测试剂盒及制备、操作方法 | |
| CN102944679A (zh) | 一种胶乳比浊法进行视黄醇结合蛋白检测的试剂盒 | |
| CN102590497A (zh) | 胱氨酸蛋白酶抑制剂c检测试剂盒 | |
| WO2009026168A1 (en) | Anti-antibody reagent | |
| US20220113322A1 (en) | Rapid measurement of total vitamin d in blood | |
| CN110058013B (zh) | 一种提高微流控芯片检测准确度的方法 | |
| CN104237513A (zh) | 一种甲状腺过氧化物酶抗体磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒 | |
| CN101446586A (zh) | 免疫分析试剂和分析方法 | |
| WO2009054538A1 (ja) | 免疫学的微小粒子の凝集反応を用いる検体のアクロレイン付加体の測定方法および測定用キット | |
| KR20010025027A (ko) | 면역측정시약 및 면역측정법 | |
| CN110196336A (zh) | 促红细胞生成素化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法 | |
| CN108776231A (zh) | 一种人尿白蛋白胶乳增强二抗竞争免疫比浊检测试剂盒及其制作和使用方法 | |
| CN109085343A (zh) | 一种测定抗Jo-1抗体的试剂盒及检测方法 | |
| US20140011190A1 (en) | Method for performing a rapid test | |
| CN113138271A (zh) | 基于血糖仪信号读出的多种毒品快速检测方法 | |
| SU1367838A3 (ru) | Способ определени антистрептолизин- @ -овых антител в крови (его варианты) | |
| Samsonova et al. | Porous membrane strip microsampling: a dried biofluid collection format and application for quantitative enzyme immunoassay | |
| JPS605900B2 (ja) | 抗原性物質の定量法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| DD01 | Delivery of document by public notice |
Addressee: NANJING NORMAN BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co.,Ltd. Document name: the First Notification of an Office Action |
|
| C53 | Correction of patent of invention or patent application | ||
| CB02 | Change of applicant information |
Address after: 210031 building E, building 10, Spark Road, No. four, Spark Road, Nanjing hi tech Development Zone, Jiangsu, China Applicant after: NANJING NORMAN BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co.,Ltd. Address before: 210029, G building, 21 floor, Golden Eagle Hanzhoung new town, No. 1 Hanzhoung Avenue, Nanjing, Jiangsu Applicant before: NANJING NORMAN BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co.,Ltd. |
|
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CP03 | Change of name, title or address |
Address after: No.197, Yaogu Avenue, Jiangbei new district, Nanjing City, Jiangsu Province Patentee after: Nanjing Norman Biotechnology Co.,Ltd. Address before: 210031 building E, building 10, Spark Road, No. four, Spark Road, Nanjing hi tech Development Zone, Jiangsu, China Patentee before: NANJING NORMAN BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co.,Ltd. |
|
| CP03 | Change of name, title or address | ||
| EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract | ||
| EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract |
Application publication date: 20121226 Assignee: Nanjing Jiangbei new area Yangzi Technology Finance Leasing Co.,Ltd. Assignor: Nanjing Norman Biotechnology Co.,Ltd. Contract record no.: X2021320000066 Denomination of invention: Troponin-T (TNT) assay kit Granted publication date: 20160120 License type: Exclusive License Record date: 20210805 |
|
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right | ||
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right |
Denomination of invention: Troponin-T (TNT) assay kit Effective date of registration: 20210811 Granted publication date: 20160120 Pledgee: Nanjing Jiangbei new area green Financing Guarantee Co.,Ltd. Pledgor: Nanjing Norman Biotechnology Co.,Ltd. Registration number: Y2021320000166 |
|
| EC01 | Cancellation of recordation of patent licensing contract | ||
| EC01 | Cancellation of recordation of patent licensing contract |
Assignee: Nanjing Jiangbei new area Yangzi Technology Finance Leasing Co.,Ltd. Assignor: Nanjing Norman Biotechnology Co.,Ltd. Contract record no.: X2021320000066 Date of cancellation: 20220909 |
|
| PC01 | Cancellation of the registration of the contract for pledge of patent right | ||
| PC01 | Cancellation of the registration of the contract for pledge of patent right |
Date of cancellation: 20220908 Granted publication date: 20160120 Pledgee: Nanjing Jiangbei new area green Financing Guarantee Co.,Ltd. Pledgor: Nanjing Norman Biotechnology Co.,Ltd. Registration number: Y2021320000166 |