CN107525936B - 一种提升胶乳免疫比浊法中肌钙蛋白抗体稳定性的组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种提升胶乳免疫比浊法中肌钙蛋白抗体稳定性的组合物，其组合物包括25mM的pH＝7.4的磷酸盐缓冲液、0.025％氯化钾、0.01％氯化镁、0.05％明胶、1％海藻糖、0.2％甘露醇、7％甘油。该组合物提升了胶乳免疫比浊法中肌钙蛋白抗体的稳定性，保护了其生物学功能，不干扰它参与的反应过程，组合物的吸光度值为0.001‑0.003。该组合物成分简单，保护效果较好，自身本底值低，也可广泛的应用到其他检测试剂中，为提升检测试剂的稳定性能发提供了科学依据。

Description

一种提升胶乳免疫比浊法中肌钙蛋白抗体稳定性的组合物
技术领域
本发明涉及肌钙蛋白抗体技术领域，尤其是一种提升胶乳免疫比浊法中肌钙蛋白抗体稳定性的组合物。
背景技术
胶乳免疫比浊法是操作简便，快速的一种检测技术，适用于全自动生化分析仪，反应中偶联抗体的胶乳微粒与目的物结合，由于反应体系中浊度的变化，产生相应的检测信号。提升其抗体的稳定性是该试剂盒测定性能指标的关键。肌钙蛋白是心肌细胞重要的功能蛋白，是心肌损伤敏感、特异的生物学指标。但是偶联到胶乳微球上的抗体，稳定性较差，导致准确度、线性、精密度等指标较差，不利于用其进行体外诊断。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明提供了一种提升胶乳免疫比浊法中肌钙蛋白抗体稳定性的组合物，该组合物配置简单，本底值低，价格低廉，可用度高。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是：一种提升胶乳免疫比浊法中肌钙蛋白抗体稳定性的组合物，其特征在于，包括25mM的pH＝7.4的磷酸盐缓冲液、质量分数为0.025％的氯化钾、质量分数为0.01％的氯化镁、质量分数为0.05％的明胶、质量分数为1％的海藻糖、质量分数为0.2％的甘露醇、质量分数为7％的甘油，所述磷酸盐缓冲液由磷酸二氢钠，磷酸氢二钠组成。
进一步的，所述氯化钾和氯化镁的摩尔比为5:2。当物质中钾离子：镁离子的比例为5：2时，促进该蛋白活性和提升抗体的稳定性。
进一步的，所述海藻糖和甘露醇的质量比5：1。其中海藻糖：甘露醇的比例为5：1，增加了对抗体的保护力。
上述明胶为0.05％，增加抗体的稳定性。甘油7％时，对温度变化的差异有较好的缓冲能力。
采用上述方案，本发明中的组合物提升了胶乳免疫比浊法中肌钙蛋白抗体的稳定性，保护了其生物学功能，不干扰它参与的反应过程，组合物的吸光度值为0.001-0.003。组合物的配置方法简单，操作简便，干扰小，保护效果较好等优势，在人血清中肌钙蛋白含量的测定中发挥重要作用，提供临床诊断、监测治疗的科学依据。
下面结合附图对本发明作进一步描述。
附图说明
附图1为本发明实施例8试剂方法与参考方法检测结果相关分析图，采用化学发光仪，对40个血清样本进行测定，并对其进行相关分析。其中相关系数：r2＝0.999，线性方程为：y＝1.004x-0.003。
具体实施方式
本发明的保护范围不局限于下述具体实施方式，本领域一般技术人员根据本发明公开的内容，可以采用其他多种具体实施方式实施本发明的，或者凡是采用本发明的设计结构和思路，做简单变化或更改的，都落入本发明的保护范围。
下面实施例描述的是提升肌钙蛋白抗体稳定性的组合物，其包括25mM的pH＝7.4的磷酸盐缓冲液、质量分数为0.025％的氯化钾、质量分数为0.01％的氯化镁、质量分数为0.05％的明胶、质量分数为1％的海藻糖、质量分数为0.2％的甘露醇、质量分数为7％的甘油，所述磷酸盐缓冲液由磷酸二氢钠，磷酸氢二钠组成。氯化钾和氯化镁的摩尔比为5:2。海藻糖和甘露醇的质量比5：1。
将上述提升肌钙蛋白抗体稳定剂的组合物进行检测分析，检测过程中使用双试剂全自动生化分析仪，例如贝克曼DXC800、日立7600等全自动分析仪进行测定。试剂1由30mM的pH＝7.2磷酸盐缓冲液、质量分数为0.5％的PEG-6000、质量分数为0.05％的叠氮钠组成；试剂2由25mM的pH＝7.4的磷酸盐缓冲液、0.5％人偶联肌钙蛋白抗体胶乳微球组成；
将试剂1和试剂2放置所设置好的位置上，在样本盘中对应位置放好蒸馏水、标准品和待测样本，操作程序如下：
表1操作程序
Figure GDA0002120600030000021
结果计算：以测定管ΔA，根据校准曲线可求得肌红蛋白的含量。
实施例1
对于该组合物的缓冲液种类进行筛选：分别配置25mM，pH7.4的Tris-HCl缓冲液，HEPES缓冲液，磷酸盐缓冲液。检测其对理论浓度准确度的影响如5ug/L，10ug/L，20ug/L；检测结果如下表。
名称 5(ug/L) 10(ug/L) 20(ug/L)
Tris-HCl缓冲液 4.5 9.3 19.9
HEPES缓冲液 4.1 11.5 21.7
磷酸盐缓冲液 4.9 10.1 19.8
通过试验结果综合比较，三种缓冲液中检测目标物质的低值、中值、高值的实际浓度与理论浓度的差异变化，计算得出磷酸盐缓冲液的差异变化较小且它们的变化均小于2％。
实施例2
对于该组合物的确定缓冲液的pH值进行筛选：分别配置25mM，pH6.0磷酸盐缓冲液，pH6.5磷酸盐缓冲液，pH7.4磷酸盐缓冲液，检测其对理论浓度准确度的影响如5ug/L，10ug/L，20ug/L；检测结果如下表。
名称 5(ug/L) 10(ug/L) 20(ug/L)
pH6.0 4.6 10.3 20.9
pH6.5 4.5 11.1 18.7
pH7.4 4.8 10.5 20.3
通过试验结果综合比较，三种不同pH值的缓冲液中检测目标物质的低值、中值、高值的实际浓度与理论浓度的差异变化，计算得出pH7.4的磷酸盐缓冲液的差异变化较小且它们的变化均小于5％。
实施例3
对于该组合物的确定缓冲液的浓度进行筛选：分别配置10mM，25mM，50mM的磷酸盐缓冲液，检测其对理论浓度准确度的影响如5ug/L，10ug/L，20ug/L；检测结果如下表。
Figure GDA0002120600030000031
Figure GDA0002120600030000041
通过试验结果综合比较，三种不同浓度的缓冲液中检测目标物质的低值、中值、高值的实际浓度与理论浓度的差异变化，计算得出pH7.4的磷酸盐缓冲液的差异变化较小且它们的变化均小于10％。
实施例4
对于该组合物确定缓冲液体系的金属离子浓度进行筛选：由于金属离子浓度过高，抗体会出现沉淀，所以二者浓度均控制0.01％，检测其对理论浓度准确度的影响；检测结果如下表。
钾：镁 5(ug/L) 10(ug/L) 20(ug/L)
5：2 4.7 10.5 19.4
5：5 4.0 8.9 18.9
5：1 6.1 13.2 22.3
通过试验结果综合比较，三种不同浓度的缓冲液中检测目标物质的低值、中值、高值的实际浓度与理论浓度的差异变化，计算得出钾：镁为5：2时差异变化较小且它们的变化均小于6％。
实施例5
对于该组合物确定缓冲液体系的明胶，甘油含量进行筛选：由于这类保护物质的含量过高，液体粘稠度增加，保护作用达到饱和，本底值也会升高，所以明胶含量控制在0.1％内，甘油含量控制在10％内，同时检测对理论浓度准确度的影响，检测结果如下表。
甘油含量(％) 明胶含量(％) 吸光度值 5(ug/L)
3 0.01 0.001 4.6
7 0.05 0.001 4.9
10 0.1 0.005 5.1
通过试验结果综合比较，低浓度含量时，本底吸光度值偏小，选用明胶含量为0.01％和0.05％，但是考虑到实际浓度的变化差异，所以确定明胶含量为0.05％，甘油含量为7％。
实施例6
对于该组合物确定缓冲液体系的多羟基类物质浓度进行筛选：由于该类物质对于抗体有一定的保护作用，但是浓度过高会造成原材料的损失，浓度过低保护作用力较差，所以二者浓度均控制1％内，检测其对理论浓度准确度的影响；检测结果如下表。
海藻糖：甘露醇 5(ug/L) 10(ug/L) 20(ug/L)
5：1 4.8 9.9 19.8
5：3 4.8 10.1 19.9
5：5 5.1 10.2 20.3
通过试验结果综合比较，三种不同浓度的多羟基类物质中检测目标物质的低值、中值、高值的实际浓度与理论浓度的差异变化，计算得出海藻糖与甘露醇比例不同时差异变化都较小，出于成本考虑，选取最小比例。
实施例7
利用上述筛选的最优条件，配置成该试剂，对肌钙蛋白的含量进行测定，稳定性检测结果如下表：
Figure GDA0002120600030000051
综合上述试验结果表明：在三种不同温度条件下，对该目的物的理论浓度进行检测，三者的理论温度与实际浓度变化无差异，尤其在加速热破坏条件下，变化差异与低温一致，证明该组合物能够提升该抗体的稳定性。
实施例8
相关性检测：选取40个血清样本，分别用已有酶联免疫方法的检测试剂盒作为参考方法与上述制备发光板的检测结果作为试验方法，二者进行相关分析，结果显示线性关系良好，检测结果如下：
Figure GDA0002120600030000061

Claims (1)

1.一种提升胶乳免疫比浊法中肌钙蛋白抗体稳定性的组合物，其特征在于，包括25mM的pH＝7.4的磷酸盐缓冲液、质量分数为0.025％的氯化钾、质量分数为0.01％的氯化镁、质量分数为0.05％的明胶、质量分数为1％的海藻糖、质量分数为0.2％的甘露醇、质量分数为7％的甘油，所述磷酸盐缓冲液由磷酸二氢钠，磷酸氢二钠溶解形成。
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