CN109893513B - 复合雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊及其制备方法与应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种复合雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊及其制备方法与应用。该软胶囊包括囊芯和囊壁，囊芯包含雨生红球藻虾青素或其提取物、植物油、乳化剂、助乳化剂、抗氧剂。本发明将植物油、抗氧化剂和雨生红球藻虾青素搅拌均匀，得到的溶液再与乳化剂和助乳化剂形成混合乳化剂，搅拌均匀、过滤，得到自乳化系统；将软胶囊囊材液和自乳化系统加入软胶囊机中，得到雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊。该软胶囊是将雨生红球藻虾青素与优化的植物油合理配伍得到，具有高度的分散性，优良的贮存稳定性，可增强衰老模型大鼠的抗疲劳能力和学习记忆能力，提高胃组织中SOD活性并降低MDA含量，清除体内自由基。

Description

复合雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊及其制备方法与应用

技术领域

本发明涉及医药技术领域，特别涉及一种复合雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊及其制备方法与应用。

背景技术

雨生红球藻虾青素是从红球藻科单细胞绿藻雨生红球藻(Haematococcuspluvialis)中提炼出来的一种疏水性物质，化学名称为3,3'-二羟基-4,4'-二酮基-β,β'-胡萝卜素，分子式为C₄₀H₅₂O₄，分子质量为596.84，是唯一能通过血脑屏障的类胡萝卜素的含氧衍生物，颜色为红色，为不饱和萜烯类化合物，碳链末端各有一个含羟基的β-紫罗兰酮环(见图1)，不溶于水，具脂溶性。虾青素的结构根据羟基与整个分子平面的位置关系可分为4种光学异构体，雨生红球藻积累的虾青素产物为纯S构象。研究表明，虾青素有极强的染色、抗氧化和增强机体免疫的能力，在化妆品中还能够有效地延迟皮肤老化，在临床医药上能够有效地促进癌细胞凋亡，抑制心血管疾病引发的炎症。近年来雨生红球藻虾青素的广泛用途与独特的营养、药理特性日益受到人们的关注。随着研究越来越热，人们对其生理功能的认识越来越深，主要包括抗氧化性、抑制肿瘤、提高免疫力、预防高血压、预防糖尿病、预防心脑血管疾病、保护视力、保护神经等方面。由于雨生红球藻虾青素分子中含有共轭双键，且分子末端有不饱和的酮基和羟基，因此电子效应比较活跃，能够吸引自由基中未配对的电子，清除游离的自由基，产生抗氧化作用，也正是由于这样的结构，使得雨生红球藻虾青素对光、热、氧极为敏感，长时间放置在空气中容易氧化，高温易破坏其分子结构。

因此，如何有效利用雨生红球藻虾青素，是人们亟待解决的一个技术问题。

发明内容

本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种复合雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊。

本发明的另一目的在于提供通过上述复合雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊的制备方法。

本发明的再一目的在于提供上述复合雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种复合雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊，包括囊芯和囊壁；其中，囊芯包含以下按质量分数计的组分：雨生红球藻虾青素或其提取物0.5～10％、植物油39～79％、乳化剂20～55％、助乳化剂0～20％、抗氧剂0.5～1％。

所述的囊芯优选包含以下按质量分数计的组分：雨生红球藻虾青素或其提取物0.5～7％、植物油45～70％、乳化剂20～45％、助乳化剂2～18％、抗氧剂0.5～0.8％；更优选为包含以下按质量分数计的组分：雨生红球藻虾青素或其提取物1.2～3％、植物油58～63％、乳化剂24.4～30％、助乳化剂5.4～14.4％、抗氧剂0.5～0.6％。

所述的雨生红球藻虾青素或其提取物与所述的植物油优选为按质量比＝1:20～90配比；更优选为按质量比＝＝1:20～40配比；最优选为按质量比＝1:21～32配比。

所述的植物油优选为牡丹籽油、紫苏籽油、杜仲籽油、亚麻籽油和美藤果油中的一种或至少两种；优选为紫苏籽油、杜仲籽油、亚麻籽油和美藤果油中的一种或至少两种，与牡丹籽油混合得到的油；更优选为牡丹籽油和紫苏籽油按质量比1：0.7～1.4配比得到的油，或是牡丹籽油：紫苏籽油：杜仲籽油＝质量比1：0.7～1.4：0.7～1.4配比得到的油，或是牡丹籽油：紫苏籽油：杜仲籽油：亚麻籽油＝质量比1：0.7～1.4：0.7～1.4：0.7～1.4配比得到的油，或是牡丹籽油：紫苏籽油：杜仲籽油：亚麻籽油：美藤果油＝质量比1：0.7～1.4：0.7～1.4：0.7～1.4：0.7～1.4配比得到的油；最优选为牡丹籽油和紫苏籽油按质量比1：0.9～1配比得到的油，或是牡丹籽油：紫苏籽油：杜仲籽油＝质量比1：0.8～0.9：0.7～0.8配比得到的油，或是牡丹籽油：紫苏籽油：杜仲籽油：亚麻籽油＝质量比1：1.3～1.4：1.2～1.3：0.9～1配比得到的油，或是牡丹籽油：紫苏籽油：杜仲籽油：亚麻籽油：美藤果油＝质量比1：1.2～1.3：1～1.1：0.9～1：0.8～0.9配比得到的油。

所述的乳化剂优选为大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、液态卵磷脂和脑磷脂中的一种或至少两种。

所述的助乳化剂优选为甘油、异丙醇、1,2-丙二醇、乙二醇、乙醇、聚氧乙烯脂肪酸酯和聚乙二醇400中的一种或至少两种。

所述的抗氧剂优选为维生素E和维生素C中的一种或两种。

所述的囊壁可按常规的软胶囊囊壁成分制备，优选包含如下成分：胶体和甘油；其中，胶体和甘油按质量比30～40：15～25配比；更优选按质量比38～39：18～19配比。

所述的囊壁还可包含防腐剂、着色剂和遮光剂中的至少一种。

所述的胶体优选为明胶。

所述的防腐剂优选为尼泊金乙酯。

上述复合雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊的制备方法，包括以下步骤：

(1)将雨生红球藻虾青素或其提取物、植物油和抗氧化剂搅拌均匀，得到复合雨生红球藻虾青素；

(2)将乳化剂、助乳化剂和步骤(1)得到的复合雨生红球藻虾青素，搅拌均匀，得到复合雨生红球藻虾青素自乳化系统；

(3)将软胶囊囊材液和步骤(2)得到的复合雨生红球藻虾青素自乳化系统加入软胶囊机中，制备得到雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊。

步骤(1)和步骤(2)在搅拌均匀后还含有过滤步骤。

步骤(1)优选为：将雨生红球藻虾青素和植物油搅拌混匀，再加入抗氧化剂搅拌均匀，过滤，得到复合雨生红球藻虾青素。

步骤(1)中所述的搅拌的时间为30～60min；优选为35～50min。

步骤(1)中所述的搅拌的转速优选为10～80r/min；更优选为40～50r/min。

步骤(1)的反应温度优选为20～60℃；优选为40～60℃。

步骤(2)优选如下：将乳化剂和助乳化剂搅拌均匀；再加入步骤(1)得到的复合雨生红球藻虾青素，混合均匀，过滤得到复合雨生红球藻虾青素自乳化系统。

所述的搅拌为剪切搅拌；优选为分次剪切搅拌。

所述的剪切搅拌的转速优选为6000～10000r/min；优选为8000r/min。

所述的剪切搅拌的次数优选为2次，其中，第一次剪切搅拌的时间优选为5～15min；第二次剪切搅拌的时间优选为2～10min。

步骤(2)中所述的复合雨生红球藻虾青素自乳化系统主要包含以下按质量分数计的组分：雨生红球藻虾青素或其提取物0.5～10％、植物油39～79％、乳化剂20～55％、助乳化剂0～20％、抗氧剂0.5～1％；优选为主要包含以下按质量分数计的组分：雨生红球藻虾青素或其提取物0.5～7％、植物油45～70％、乳化剂20～45％、助乳化剂2～18％、抗氧剂0.5～0.8％；更优选为主要包含以下按质量分数计的组分：雨生红球藻虾青素或其提取物1.2～3％、植物油58～63％、乳化剂24.4～30％、助乳化剂5.4～14.4％、抗氧剂0.5～0.6％。

所述的雨生红球藻虾青素或其提取物与所述的植物油优选为按质量比＝1:20～90配比；更优选为按质量比＝＝1:20～40配比；最优选为按质量比＝1:21～32配比。

所述的植物油优选为牡丹籽油、紫苏籽油、杜仲籽油、亚麻籽油和美藤果油中的一种或至少两种。

所述的植物油优选为紫苏籽油、杜仲籽油、亚麻籽油和美藤果油中的一种或至少两种，与牡丹籽油混合得到的油；更优选为牡丹籽油和紫苏籽油按质量比1：0.7～1.4配比得到的油，或是牡丹籽油：紫苏籽油：杜仲籽油＝质量比1：0.7～1.4：0.7～1.4配比得到的油，或是牡丹籽油：紫苏籽油：杜仲籽油：亚麻籽油＝质量比1：0.7～1.4：0.7～1.4：0.7～1.4配比得到的油，或是牡丹籽油：紫苏籽油：杜仲籽油：亚麻籽油：美藤果油＝质量比1：0.7～1.4：0.7～1.4：0.7～1.4：0.7～1.4配比得到的油；最优选为牡丹籽油和紫苏籽油按质量比1：0.9～1配比得到的油，或是牡丹籽油：紫苏籽油：杜仲籽油＝质量比1：0.8～0.9：0.7～0.8配比得到的油，或是牡丹籽油：紫苏籽油：杜仲籽油：亚麻籽油＝质量比1：1.3～1.4：1.2～1.3：0.9～1配比得到的油，或是牡丹籽油：紫苏籽油：杜仲籽油：亚麻籽油：美藤果油＝质量比1：1.2～1.3：1～1.1：0.9～1：0.8～0.9配比得到的油。

所述的乳化剂优选为大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、液态卵磷脂和脑磷脂中的一种或至少两种。

所述的助乳化剂优选为甘油、异丙醇、1,2-丙二醇、乙二醇、乙醇、聚氧乙烯脂肪酸酯和聚乙二醇400中的一种或至少两种。

所述的抗氧剂优选为维生素E和维生素C中的一种或两种。

步骤(3)中所述的软胶囊囊材液可为常规方法制备得到的软胶囊囊材液，其组成优选如下：胶体30～40％、甘油15～25％、防腐剂0～适量、遮光剂0～适量、着色剂0～适量、水余量；更优选如下：胶体37～38％、甘油18～19％、防腐剂0.03～0.04％、水余量。百分比单位为质量百分比。

所述的适量是指使用量符合相关的国家、行业规定。

所述的软胶囊囊材液优选通过如下步骤制备得到：将胶体、水、防腐剂、遮光剂和着色剂混合，密闭加热并搅拌至融化溶胀完全，加入甘油，搅拌，抽真空，得到软胶囊囊材液；

所述的胶体优选为明胶。

所述的水优选为蒸馏水。

所述的蒸馏水的温度为60～80℃。

所述的防腐剂优选为尼泊金乙酯。

步骤(3)中所述的软胶囊囊材液和所述的复合雨生红球藻虾青素自乳化系统优选按质量比1：1.5～2配比；更优选为按质量比1：1.8～1.9配比。

步骤(3)中所述的雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊还要经过干燥，洗涤，再干燥，分检，包装，得到成品。

步骤(3)中软胶囊机中制备雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊的方法为压制法。

上述复合雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊在制备抗衰老药物和保健品中的应用。

本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

1.本发明的复合雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊具有高度的分散性，优良的贮存稳定性，特别是雨生红球藻虾青素的不稳定性在与选用的植物油复合相溶时被抑制，克服了现有雨生红球藻虾青素产品的缺陷，生物利用度和效果明显提高。

2.雨生红球藻虾青素为油类物质，既是原料药有效成分，又是油相辅料，且本发明选用的其它植物油既可作为雨生红球藻虾青素的分散剂或载体，分散或溶解雨生红球藻虾青素的有效成分，减少雨生红球藻虾青素及其有效成分的被氧化性，稳定雨生红球藻虾青素，又可作为抗衰老作用或辅助抗衰老作用的原料药有效成分，相对增加活性药物成分的浓度，减少了乳化剂和助乳化剂的用量，突出了自乳化的效果，减少药物服用量。

3.本发明的复合雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊是将雨生红球藻虾青素与牡丹籽油、紫苏籽油、杜仲籽油、亚麻籽油和美藤果油等合理配伍得到，可明显增强衰老模型大鼠的抗疲劳能力和学习记忆能力，提高胃组织中SOD活性并降低MDA含量，清除体内自由基，抗衰老效果明显好于单一雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊。

4.本发明所选择的乳化剂和助乳化剂为药剂学上广泛应用的药用辅料，具有无毒、无刺激性的特性，既解决了油类成分的生物利用度的问题，又不增加产品的毒副作用。

5.本发明原料易得，工艺流程简单，操作方便，产品质量控制方便，安全可靠，适合于工业生产。

附图说明

图1是雨生红球藻虾青素的分子结构图。

具体实施方式

下面将结合实施方式对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施方式和实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

实施例1复合雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊一

(1)成分组成如表1所示：

表1

(2)制备方法(各成分的用量如表1所示)

1)将雨生红球藻虾青素加入配料容器中，在50℃的条件下依次加入牡丹籽油和维生素E，慢速(40～50rpm)搅拌35分钟，过滤后得到复合雨生红球藻虾青素保温，备用。

2)将大豆卵磷脂和甘油混合，用剪切机(8000转/分)搅拌二次，第一次5分钟，第二次2分钟；使其分散均匀，加入步骤1)制备的温热的复合雨生红球藻虾青素，搅拌3次，每次5分钟，过滤，形成均一的液体，即得复合雨生红球藻虾青素自乳化系统。

3)将明胶加入溶胶罐中，加入配比的温度为60-80℃的蒸馏水，加入防腐剂尼泊金乙酯，必要时加入遮光剂和着色剂，密闭的条件下加热，搅拌至融化溶胀完全，加入甘油，密闭配胶罐，混匀后关闭搅拌，开启真空泵，抽真空，待气泡抽净即得软胶囊囊材液。软胶囊囊材液于50-60℃保温，备用。

4)取软胶囊囊材液和复合雨生红球藻虾青素自乳化系统，上软胶囊机采用压制法制备软胶囊，经干燥，洗涤，再干燥，分检，包装，得到复合雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊成品。

(3)自乳化效果检测

取制得的复合雨生红球藻虾青素的自乳化系统0.5mL，加至10mL人工胃液中，用玻璃棒缓和搅拌，即可迅速形成带有蓝色乳光的乳剂。对乳剂的粒径用TSM超细颗粒粒径分析仪进行测定，测得结果为乳滴的平均粒径在0.16μm左右。

实施例2复合雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊二

(1)成分组成如表2所示：

表2

(2)制备方法

1)将雨生红球藻虾青素加入配料容器中，在45℃的条件下依次加入牡丹籽油、紫苏籽油、维生素E和维生素C，慢速(40～50rpm)搅拌50分钟，过滤后得到复合雨生红球藻虾青素，保温，备用。

2)将蛋黄卵磷脂、乙醇和甘油混合，用剪切机(8000转/分)搅拌二次，第一次10分钟，第二次8分钟，使其分散均匀；加入步骤1)制备的温热的复合雨生红球藻虾青素，搅拌3次，每次5分钟，过滤，形成均一的液体，即得复合雨生红球藻虾青素自乳化系统。

3)将明胶加入溶胶罐中，加入配比的温度为60-80℃的蒸馏水，加入防腐剂尼泊金乙酯，必要时加入遮光剂和着色剂，密闭条件下加热，搅拌至融化溶胀完全，加入甘油，密闭配胶罐，混匀后关闭搅拌，开启真空泵，抽真空，待气泡抽净即得软胶囊囊材液。软胶囊囊材液50-60℃保温，备用。

4)取软胶囊囊材液、复合雨生红球藻虾青素的自乳化系统，上软胶囊机采用压制法制备软胶囊，经干燥，洗涤，再干燥，分检，包装，得到复合雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊成品。

(3)自乳化效果检测

取制得的复合雨生红球藻虾青素自乳化系统0.5mL，加至10mL人工胃液中，用玻璃棒缓和搅拌，即可迅速形成带有蓝色乳光的乳剂。对乳剂的粒径用TSM超细颗粒粒径分析仪进行测定，测得结果为乳滴的平均粒径在0.15μm左右。

实施例3复合雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊三

(1)成分组成如表3所示：

表3

(2)制备方法

1)将雨生红球藻虾青素加入配料容器中，在56℃的条件下依次加入牡丹籽油、紫苏籽油、杜仲籽油、维生素E和维生素C，慢速搅拌35分钟，过滤后得到复合雨生红球藻虾青素，保温，备用。

2)取液态卵磷脂、乙醇和甘油混合，用剪切机(8000转/分)搅拌二次，第一次15分钟，第二次10分钟，使其分散均匀；加入温热的复合雨生红球藻虾青素，搅拌3次，每次5分钟，过滤，形成均一的液体，即得复合雨生红球藻虾青素自乳化系统。

3)将明胶加入溶胶罐中，加入配比的温度为60-80℃的蒸馏水，加入防腐剂尼泊金乙酯，必要时加入遮光剂和着色剂，密闭条件下加热，搅拌至融化溶胀完全，加入甘油，密闭配胶罐，混匀后关闭搅拌，开启真空泵，抽真空，待气泡抽净，即得软胶囊囊材液。软胶囊囊材液50-60℃保温，备用。

4)取软胶囊囊材液和复合雨生红球藻虾青素自乳化系统，上软胶囊机采用压制法制备软胶囊，经干燥，洗涤，再干燥，分检，包装，得到复合雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊成品。

(3)自乳化效果检测

取制得的复合雨生红球藻虾青素自乳化系统0.5mL，加至10mL人工胃液中，用玻璃棒缓和搅拌，即可迅速形成带有蓝色乳光的乳剂。对乳剂的粒径用TSM超细颗粒粒径分析仪进行测定，测得结果为乳滴的平均粒径在0.13μm左右。

实施例4复合雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊四

(1)成分组成如表4所示：

表4

(2)制备方法

1)将雨生红球藻虾青素加入配料容器中，在46℃的条件下依次加入紫苏籽油、杜仲籽油、牡丹籽油、亚麻籽油和维生素E，慢速搅拌45分钟，过滤后得到复合雨生红球藻虾青素，保温，备用。

2)取蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂和聚氧乙烯脂肪酸酯，用剪切机(8000转/分)搅拌二次，第一次15分钟，第二次10分钟，使其分散均匀，加入温热的复合雨生红球藻虾青素，搅拌3次，每次8分钟，过滤，形成均一的液体，即得复合雨生红球藻虾青素自乳化系统。

3)将明胶加入溶胶罐中，加入配比的温度为60-80℃的蒸馏水，加入防腐剂尼泊金乙酯，必要时加入遮光剂和着色剂，密闭条件下加热，搅拌至融化溶胀完全，加入甘油，密闭配胶罐，混匀后关闭搅拌，开启真空泵，抽真空，待气泡抽净，即得软胶囊囊材液。软胶囊囊材液50-60℃保温，备用。

4)取软胶囊囊材液和复合雨生红球藻虾青素的自乳化系统，上软胶囊机采用压制法制备软胶囊，经干燥，洗涤，再干燥，分检，包装，得到复合雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊成品。

(3)自乳化效果检测

取制得的雨生红球藻虾青素的自乳化系统0.5mL，加至10mL人工胃液中，用玻璃棒缓和搅拌，即可迅速形成带有蓝色乳光的乳剂。对乳剂的粒径用TSM超细颗粒粒径分析仪进行测定，测得结果为乳滴的平均粒径在0.14μm左右。

实施例5复合雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊五

(1)成分组成如表5所示：

表5

(2)制备方法

1)复合雨生红球藻虾青素的调和：按表4所示取雨生红球藻虾青素，加入配料容器中，在46℃的条件下，依次加入紫苏籽油、杜仲籽油、牡丹籽油、亚麻籽油、美藤果油、维生素E，慢速搅拌45分钟，过滤后得到复合雨生红球藻虾青素，保温，备用。

2)取液态卵磷脂、大豆卵磷脂和乙二醇，用剪切机(8000转/分)搅拌二次，第一次15分钟，第二次8分钟，使其分散均匀，加入温热的复合雨生红球藻虾青素，搅拌3次，每次8分钟，过滤，形成均一的液体，即得复合雨生红球藻虾青素自乳化系统。

3)将明胶加入溶胶罐中，加入配比的温度为60-80℃的蒸馏水，加入防腐剂尼泊金乙酯，必要时加入遮光剂和着色剂，密闭条件下加热，搅拌至融化溶胀完全，加入甘油，密闭配胶罐，混匀后关闭搅拌，开启真空泵，抽真空，待气泡抽净，即得软胶囊囊材液。软胶囊囊材液50-60℃保温，备用。

4)取软胶囊囊材液和复合雨生红球藻虾青素的自乳化系统，上软胶囊机采用压制法制备软胶囊，经干燥，洗涤，再干燥，分检，包装，得到复合雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊成品。

(3)自乳化效果检测

取制得的雨生红球藻虾青素自乳化系统0.5mL，加至10mL人工胃液中，用玻璃棒缓和搅拌，即可迅速形成带有蓝色乳光的乳剂。对乳剂的粒径用TSM超细颗粒粒径分析仪进行测定，测得结果为乳滴的平均粒径在0.15μm左右。

实施例6复合雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊对衰老模型大鼠的抗衰老作用研究

衰老的自由基学说认为，衰老是由于自由基产生过多而引起脂质过氧化反应，使生物膜、蛋白质(酶)及遗传物质等损伤并最终导致衰老。活性氧自由基(O₂ ^-和H₂O₂)清除剂超氧化物歧化酶(SOD)可使有毒的O₂ ^-和H₂O₂经过歧化和还原得到清除，从而阻止其引起自由基的链锁反应，因而降低自由基代谢产物丙二醛(MDA)的生成。因此，可将SOD活力大小作为机体抵抗衰老的一项重要指标。另外，也可将MDA作为抗氧化的一项指标。

本实验主要研究复合雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊对衰老动物的学习记忆障碍的改善、降低衰老小鼠脑组织内MDA的含量及增加SOD的活性来检测复合雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊的抗衰老作用。

(一)实验材料与方法

1.实验试剂

(1)雨生红球藻虾青素市购得到。

(2)雨生红球藻虾青素自乳化系统按上述实施例1的方法制备，将实施例1中的牡丹籽油以等量大豆油替代，命名为自乳化系统1；复合雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊分别以上述实施例1和实施例4制备的复合雨生红球藻虾青素自乳化系统分别命名为自乳化系统2和自乳化系统3；将实施例1中的雨生红球藻虾青素以等量的牡丹籽油替代，得到自乳化系统4。

(3)吡拉西坦片：山东仁和堂药业有限公司；D-半乳糖：德国Sigma公司；超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、总蛋白、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)测定试剂盒：上海常斤生物科技有限公司。其他试剂均为分析纯。

2.实验仪器与设备

Morris水迷宫系统：北京众实迪创科技发展有限责任公司；DY89-Ⅱ电动玻璃匀浆机：宁波新芝生物科技股份有限公司；HH-21-6电热恒温水浴锅：常州诺基仪器有限公司；WH-1微型漩涡混合仪：上海沪西分析仪器厂有限公司；GTR16-2高速冷冻离心机：北京时代北利离心机有限公司；752型紫外可见分光光度计：上海光谱仪器有限公司。

3.实验动物

清洁级Wistar大鼠60只，雄性，体重为200±20g，由广东省医学实验动物中心提供，动物质量合格证明编号：No.44411600000901。实验动物使用许可证号：SYXK(粤)2013-0002。饲养环境：SPF级，单笼饲养。

4.实验方法

(1)实验分组、造模和给药

1)动物分组：Wistar大鼠70只，先喂养一周以适应环境，然后随机法随机分为7组：阴性对照组，模型组、自乳化系统1组、自乳化系统2组、自乳化系统3组、自乳化系统4组和阳性对照组(使用吡拉西坦)。

2)衰老模型造模：，除阴性对照组外，其余各组每天均颈部皮下注射D-半乳糖，D-半乳糖剂量为125mg/kg，皮下注射体积应控制在0.2mL/100g，阴性对照组注射同体积生理盐水；各组均连续注射8周。造模过程中同时给予自乳化系统组药物灌胃。D-半乳糖溶液配制：6.25g溶入100mL生理盐水中。

3)给药：根据成人每人每天可食用雨生红球藻虾青素的较大剂量，通过换算得到大鼠的相应等效剂量约为10mg/kg。自乳化系统1组、自乳化系统2组、自乳化系统3组、自乳化系统4组(加入量与其他自乳化系统组相同)和阳性对照组中的大鼠每日经口灌胃给药，给药8周；阴性对照组和模型组正常喂养，不给药。实验结束后，进行负重游泳测试和水迷宫测试，期间持续给药。

(2)负重游泳测试实验

负重游泳测试实验选用直径80cm、高度100cm四周光滑的圆桶，负重物选用铅条，水温控制在28±2℃。将铅条绑在大鼠尾部根部，质量为大鼠体重的10％，从大鼠放入水中开始计时，当大鼠头部沉入水中10s以上时，实验结束，记录时间。负重游泳测试实验主要检测大鼠抗疲劳能力。

(3)Morris水迷宫实验

Morris水迷宫是由不锈钢圆形水槽、隐藏在水面以下的平台以及一套图像自动采集和处理系统(摄像机、显示器和分析软件等)。水槽内部直径1.5m、高0.5m，水槽四周光滑，内壁涂成黑色。将圆形水槽分为4个象限(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ)，在4个象限水槽壁处各选一处标记作为入水点，大鼠每次面向水槽壁放入水中。平台位于第Ⅱ象限，水面高过平台2cm为宜。水槽上方安置连接显示系统的摄像机，同步记录大鼠运动轨迹。房间内光照恒定，无光线直接照射水槽。整个实验过程中，水槽周围参照物不能移动，同时实验者不得在动物视力范围内出现，并保持安静，无噪音影响。实验前1d，所有组别大鼠各自进行自由游泳，适应水槽环境。实验历时5d，分两个阶段进行：

1)定位航行实验：每只大鼠进行4次训练，依此从第Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ象限的入水点面向水槽壁入水。记录大鼠从入水到找到平台的时间，此为逃避潜伏期(Escape latency)。大鼠登上平台后，使其在平台停留15s。如果大鼠90s内无法找到平台，则将其牵引至平台，也使其在平台停留15s，潜伏期此时记为90s。每次训练结束后，使大鼠休息15s，4个象限训练的潜伏期的平均值记为当天的逃避潜伏期。总共训练4d，以第4天的逃避潜伏期作为最终的成绩，以此检测大鼠的学习能力。

2)空间探索实验：第5天开始进行空间搜索实验，撤除水下平台，将大鼠从距原平台所处第Ⅱ象限最远的第Ⅳ象限入水点放入水中，记录大鼠90s内穿越原平台位置的次数以及有效时间比(即原平台所处象限游泳时间与总游泳时间的比值)，以此检测大鼠的记忆能力。

(4)生化指标测定

大鼠最后一天给药结束后禁食12h处死。断头处死，以15mL EP管取血。血液室温放置30min后离心，3000r/min 4℃离心10min，取上层血清，进行超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的检测。将大鼠头部置于冰盘上，迅速剥离大脑，用预冷的生理盐水冲洗，制10％的组织匀浆，3000r/min 4℃离心，取上清，进行总蛋白、一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)的检测。

(5)统计学方法

实验数据以“x±s”表示，使用SPSS17.0统计软件，多组间比较采用单因素方差分析，组间比较采用t检验，以P<0.05为差异具有统计学意义。

(二)实验结果

1.负重游泳测试结果

负重游泳测试结果见表6，与模型组相比，阴性对照组负重游泳时间明显长于模型组(P＜0.05)，说明衰老模型造模成功；与模型组相比，阳性对照组、自乳化1系统组、自乳化2系统组和自乳化3系统组游泳时间也明显长于模型组(P＜0.05)。结果表明，雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊及复合雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊均可增强衰老模型大鼠的抗疲劳能力，并且复合雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊对衰老模型大鼠抗疲劳能力比雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊明显增强，基本可与药物吡拉西坦的效果相当。

表6各组大鼠负重游泳测试结果(n＝12)

组别	游泳时间/min
		阴性对照组	18.75±0.39<sup>★</sup>
阳性对照组	18.73±0.32<sup>★</sup>
		模型组	11.67±0.30
自乳化系统1组	16.54±0.25<sup>★</sup>
		自乳化系统2组	18.28±0.40<sup>★</sup>
自乳化系统3组	18.53±0.37<sup>★</sup>
		自乳化系统4组	12.05±0.28

注：与模型组比较，^★P＜0.05，^★★P＜0.01。

2.水迷宫结果

水迷宫结果见表7，与模型组相比，阴性对照组大鼠的逃避潜伏期明显少于模型组(P＜0.05)，有效时间比和穿越平台次数明显高于模型组(P＜0.05)；与模型组相比，自乳化系统组各组大鼠的逃避潜伏期也明显少于模型组(P＜0.05)，自乳化系统1组(即雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊)的有效时间比高于模型组(P＜0.05)，自乳化系统1组的穿越平台次数无明显差异，自乳化系统2组和自乳化系统3组二组的有效时间比和穿越平台次数均明显高于模型组(P＜0.05)。综合自乳化系统1～4组的结果，可知，雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊能增强衰老模型大鼠的学习记忆能力，而且复合雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊对衰老模型大鼠的学习记忆能力的影响明显强于雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊。

表7各组大鼠Morris水迷宫实验结果(n＝12)

注：与模型组比较，^★P＜0.05，^★★P＜0.01。

3.生化指标结果

大鼠血清生化指标测定结果见表8，与模型组相比，阴性对照组SOD活力明显高于模型组(P＜0.05)，MDA含量明显低于模型组(P＜0.05)；与模型组相比，自乳化系统组的SOD活力明显高于模型组(P＜0.05)，MDA含量明显低于模型组(P＜0.05)，且复合雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊(自乳化2系统组和自乳化3系统组)的活力强于雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊(自乳化1系统组)的活力。

表8各组大鼠血清生化指标测定结果(n＝12)

组别	SOD/(U/mL)	MDA/(nmol/mL)
			阴性对照组	285.07±30.96<sup>★</sup>	4.97±0.35<sup>★</sup>
模型组	160.98±19.62	6.57±0.59
			阳性对照组	285.12±29.23<sup>★</sup>	4.96±0.41<sup>★</sup>
自乳化1系统组	271.69±47.18<sup>★</sup>	3.86±0.60<sup>★</sup>
			自乳化2系统组	285.92±48.39<sup>★</sup>	3.08±0.47<sup>★</sup>
自乳化3系统组	286.97±24.49<sup>★</sup>	2.03±0.40<sup>★</sup>
			自乳化系统4组	163.47±20.33	6.91±0.50

注：与模型组比较，^★P＜0.05，^★★P＜0.01。

(三)结论

造模实验结果表明：本实验复制的D-半乳糖亚急性衰老模型是可信的。负重游泳实验结果显示：雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊和复合雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊均可增强衰老模型大鼠的抗疲劳能力，并且复合雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊对衰老模型大鼠抗疲劳能力比雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊明显增强。水迷宫实验结果表明：雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊和复合雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊均能增强衰老模型大鼠的学习记忆能力，而且复合雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊对衰老模型大鼠的学习记忆能力的影响明显强于雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊。生化指标测定结果显示：雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊和复合雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊均可提高超氧化物歧化酶的活力，降低体内丙二醛的含量，清除体内自由基，从而达到保护机体的作用。但雨生红球藻虾青素与牡丹籽油、紫苏籽油、杜仲籽油、亚麻籽油、美藤果油复合后形成的复合雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊可明显增强雨生红球藻虾青素的抗衰老的作用，达到了更为理想的效果。

实施例7稳定性的研究

将实施例1～5制备的复合雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊一～五进行测试，同时按实施例1的方法制备软胶囊A和软胶囊B，软胶囊A是以等量的大豆油替代牡丹籽油，软胶囊B是以等量的牡丹籽油替代虾青素。

将测试样品置于40～50℃电热恒温培养箱中放置40天，每10天取样，置于室温自然冷却后，观察外观，并将胶囊内容物共计0.5mL，加至10mL人工胃液中，用玻璃棒缓和搅拌，对乳剂的粒径用TSM超细颗粒粒径分析仪进行测定。结果如下：

表9外观

表10粒径

	0天	10天	20天	30天	40天
						软胶囊一	0.16μm	0.16μm	0.18μm	0.21μm	0.25μm
软胶囊二	0.15μm	0.15μm	0.16μm	0.17μm	0.20μm
						软胶囊三	0.13μm	0.13μm	0.13μm	0.15μm	0.17μm
软胶囊四	0.14μm	0.14μm	0.14μm	0.15μm	0.17μm
						软胶囊五	0.15μm	0.15μm	0.16μm	0.16μm	0.19μm
软胶囊A	0.16μm	0.17μm	0.20μm	0.23μm	0.8μm
						软胶囊B	0.17μm	0.17μm	0.22μm	0.25μm	0.30μm

从表9和表10的结果可知，雨生红球藻虾青素与牡丹籽油、紫苏籽油、杜仲籽油、亚麻籽油和美藤果油等植物油制备得到的复合雨生红球藻虾青素稳定性更强。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种复合雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊，其特征在于：包括囊芯和囊壁，囊芯包含按以下质量分数计的组分：雨生红球藻虾青素0.5～10%、植物油39～79%、乳化剂20～55%、助乳化剂0～20%、抗氧剂0.5～1%；

所述的植物油为牡丹籽油、紫苏籽油、杜仲籽油、亚麻籽油和美藤果油中的一种或至少两种；

所述的乳化剂为大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂和液态卵磷脂中的一种或至少两种；

所述的助乳化剂为甘油、乙二醇、乙醇和聚氧乙烯脂肪酸酯中的一种或至少两种；

所述的抗氧剂为维生素E和维生素C中的一种或两种；

所述的囊壁包含如下成分：明胶和甘油；其中，明胶和甘油按质量比30～40：15～25配比。

2.根据权利要求1所述的复合雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊，其特征在于：所述的雨生红球藻虾青素与所述的植物油按质量比=1:20～90配比。

3.根据权利要求1或2所述的复合雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊，其特征在于：所述的植物油为紫苏籽油、杜仲籽油、亚麻籽油和美藤果油中的一种或至少两种，与牡丹籽油混合得到的油。

4.根据权利要求3所述的复合雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊，其特征在于：所述的植物油为牡丹籽油和紫苏籽油按质量比1：0.7～1.4配比得到的油，或是牡丹籽油：紫苏籽油：杜仲籽油=质量比1：0.7～1.4：0.7～1.4配比得到的油，或是牡丹籽油：紫苏籽油：杜仲籽油：亚麻籽油=质量比1：0.7～1.4：0.7～1.4：0.7～1.4配比得到的油，或是牡丹籽油：紫苏籽油：杜仲籽油：亚麻籽油：美藤果油=质量比1：0.7～1.4：0.7～1.4：0.7～1.4：0.7～1.4配比得到的油。

5.权利要求1～4任一项所述的复合雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）将雨生红球藻虾青素、植物油和抗氧化剂搅拌均匀，得到复合雨生红球藻虾青素；

（2）将乳化剂、助乳化剂和步骤（1）得到的复合雨生红球藻虾青素，搅拌均匀，得到复合雨生红球藻虾青素自乳化系统；

（3）将软胶囊囊材液和步骤（2）得到的复合雨生红球藻虾青素自乳化系统加入软胶囊机中，得到雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊。

6.根据权利要求5所述的复合雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊的制备方法，其特征在于：

步骤（1）为：将雨生红球藻虾青素和植物油搅拌混匀，再加入抗氧化剂搅拌均匀，过滤，得到复合雨生红球藻虾青素；

步骤（2）为：将乳化剂和助乳化剂搅拌均匀；再加入步骤（1）得到的复合雨生红球藻虾青素，混合均匀，过滤得到复合雨生红球藻虾青素自乳化系统；

步骤（3）中所述的软胶囊囊材液的组成如下：明胶 30～40%、甘油15～25%、防腐剂0～适量、遮光剂0～适量、着色剂0～适量、水 余量；百分比单位为质量百分比；

步骤（3）中所述的软胶囊囊材液和所述的复合雨生红球藻虾青素自乳化系统按质量比1：1.5～2配比。

7.根据权利要求6所述的复合雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊的制备方法，其特征在于：

所述的防腐剂为尼泊金乙酯。

8.权利要求1～4任一项所述的复合雨生红球藻虾青素自乳化软胶囊在制备抗衰老药物和保健品中的应用。

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