CN109852704A - 一种同时检测32个y染色体基因座的复合扩增试剂盒 - Google Patents
一种同时检测32个y染色体基因座的复合扩增试剂盒 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种同时检测32个染色体基因座的复合扩增试剂盒,其特征在于,包括56条扩增引物。本发明可提高基因多态性,用于法医学亲权鉴定及个人识别。
Description
技术领域
本发明属于法医DNA鉴定领域,尤其涉及一种同时检测32个Y染色体基因座的复合扩增试剂盒。
背景技术
短串联重复序列(short tandem repeats,STR),也称微卫星DNA(microsatelliteDNA),是由2~6个碱基作为核心基序,串联重复形成的一类DNA序列,广泛分布于人类基因组中,具有多态性高、信息量大以及易于检测等优点。自上世纪90年代发现以来,现已广泛应用于法医DNA鉴定、物种鉴别和遗传病诊断等领域。
Y染色体STR遗传标记是指存在于Y染色体特异区的短串联重复序列。在减数分裂时,Y染色体特异区不与X染色体进行重组交换,所以Y染色体STR遗传标记具有男性特有、父系单倍型遗传等特点。
目前,在法医领域,Y染色体STR遗传标记主要应用于家系排查和辅助个体识别。而满足上述应用的前提,则需要Y STR试剂盒具有足够高的整体多态性。而增加Y STR试剂盒位点数,是提高Y STR试剂盒的整体多态性,增加累计非父排除率和个体识别能力的有效途径。但是在现有技术条件下,Y STR试剂盒位点数的增加,具有一定的局限性。因此,当前市场上,主流的Y STR建库试剂盒均是以公安部发布的20个核心Y STR基因座为基础,然后再从公安部发布的优选和备选基因座中,选择10到20个基因座进行优化组合。此外,随着市场上差异化需求的不断增长,用户对于试剂盒包含的基因座数量、兼容性等提出了更高的要求。
发明内容
鉴于上述现有技术存在的缺陷,本发明的目的是提出一种同时检测32个Y染色体基因座的复合扩增试剂盒。本发明中的基因座是具有高多态性的基因座,其在实际应用过程中,不仅可用于家系排查,也可用于对主流建库试剂盒的功能进行补充,以满足客户的差异化需求。
本发明的目的将通过以下技术方案得以实现:
一种同时检测32个染色体基因座的复合扩增试剂盒,其中,包括56条扩增引物,分别依次为:SEQ ID NO:1~2、SEQ ID NO:3~4、SEQ ID NO:5~6、SEQ ID NO:7~8、SEQ IDNO:9~10、SEQ ID NO:11~12、SEQ ID NO:13~14、SEQ ID NO:15~16、SEQ ID NO:17~18、SEQ ID NO:19~20、SEQ ID NO:21~22、SEQ ID NO:23~24、SEQ ID NO:25~26、SEQ IDNO:27~28、SEQ ID NO:29~30、SEQ ID NO:31~32、SEQ ID NO:33~34、SEQ ID NO:35~36、SEQ ID NO:37~38、SEQ ID NO:39~40、SEQ ID NO:41~42、SEQ ID NO:43~44、SEQ IDNO:45~46、SEQ ID NO:47~48、SEQ ID NO:49~51、SEQ ID NO:52~53、SEQ ID NO:54~56。
在一些实施例中,所述56条扩增引物对应的Y染色体基因座依次分别为:DYS531、DYS630、DYS622、DYS510、DYS533、DYF404S1a/b、DYS459a/b、DYS446、DYS443、DYS388、DYS587、DYS522、DYS626、Yindel、DYS460、Y_GATA_A10、DYS520、DYS557、DYS527a/b、DYS481、DYS508、DYS444、DYS385a/b、DYS552、DYS526a/b、DYS617和DYS713,其中,所述DYF404S1a/b、所述DYS527a/b、所述DYS385a/b和所述DYS526a/b为双等位基因基因座。
在一些实施例中,所述Y染色体基因座所对应的引物对在扩增体系中的终浓度为0.027μM~0.82μM。
在一些实施例中,所述Y染色体基因座所对应的引物对在扩增体系中的终浓度依次分别为DYS531:0.52μM、DYS630:0.08μM、DYS622:0.82μM、DYS522:0.02μM、DYS460:0.78μM、Y_GATA_A10:0.06μM、DYS520:0.8μM、DYS481:0.41μM、DYS444:0.76μM、DYS552:0.24μM、DYS526a/b:0.3μM、和DYS510:0.124μM、DYS533:0.021μM、DYF404S1a/b:0.144μM、DYS459a/b:0.7μM、DYS446:0.09μM、DYS443:0.027μM、DYS388:0.53μM、DYS557:0.071μM、DYS587:0.184μM、DYS626:0.41μM、DYS527a/b:0.051μM、DYS508:0.14μM、DYS385a/b:0.17μM、DYS617:0.15μM、DYS713:0.45μM和Yindel:0.5μM。
在一些实施例中,所述每个基因座中的至少一条引物的5’端标记有荧光染料。
在一些实施例中,所述荧光染料包括6-FAM、HEX、SUM、LYN、PUR、和/或SIZ。
在一些实施例中,所述每个Y染色体基因座对应的扩增引物的长度为90-480bp。
一种根据上述所述的试剂盒的应用,其中,所述试剂盒用于亲权鉴定、个体识别。
与现有技术相比,本发明提供的一种同时检测32个Y染色体基因座的复合扩增试剂盒,达到的技术效果是:本发明通过提供市场上未被广泛使用的新Y染色体基因座位点,如DYF404S1a/b、DYS626、DYS508、DYS713、DYS617、DYS526a/b等,与市场上主流建库试剂盒,如PathFinder、Yfiler Platinum、DNA TyperTMY36、AGCU FS Y37联用,可检测多达60个Y STR基因座,以提高Y STR试剂盒的整体多态性,和增加累计非父排除率和个体的识别能力,满足用户对Y染色体基因座的数量和高多态性的要求。
附图说明
图1是根据本申请一些实施例所示的基因座的排布示意图;
图2是根据本申请一些实施例所示的等位基因Ladder分型图;
图3是根据本申请一些实施例所示的标准DNA 9948的分型图;
图4是根据本申请一些实施例所示的试剂盒对棉签提取样本的分型图;
图5是根据本申请一些实施例所示的试剂盒对FTA血卡样本的分型图;
图6是根据本申请一些实施例所示的试剂盒对唾液卡样本的分型图。
以下便结合实施例,对本发明的具体实施方式作进一步的详述,以使技术方案更易于理解、掌握。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明进行说明,但本发明并不局限于此。下述实施例中所述实验方法,如无特殊说明,均为常规方法;所述试剂和材料,如无特殊说明,均可从商业途径获得,下面实施例并非用以限制本发明的专利范围,凡未脱离本发明所为的等效实施或变更,均应包含于本专利保护范围中。
实施例1 32个Y染色体基因座的筛选
在一些实施例中,Y染色体基因座可以基于现有文献等记载进行获取,并对其进行筛选。在一些实施例中,可以基于获取的Y染色体基因座的多态性进行调查,筛选出高多态性基因座。其中,高多态性基因座可以包括低突变的高多态性基因座,或高突变的高多态性基因座等。在一些实施例中,低突变的高多态性基因座可以指突变率低于1%,多态性高于0.6的基因座为低突变的高多态性基因座(如表1);高突变的高多态性的基因座可以指突变率高于1%,多态性高于0.6的基因座为高突变的高多态性基因座(如表1)。
为了便于理解的目的,本实施例可以通过对DYS271、DYF380S1、DYS566、DYS611、DYF396S1、DYS441、DYS67、DYS11、DYS66、DYS551、DYS282、DYS564、DYS507、DYS148、DYS507、DYS712、DYS559、DYS512、DYS385a/b、DYS481、DYS533、DYS643、DYS460、DYS549、DYS387S1a/b、DYS449、DYS518、DYS627、DYS570、DYS 527a/b、DYS447、DYS444、DYS557、DYS596、DYS446、DYS510、DYS622、DYS443、DYS587、DYS522、Y_GATA_A10、DYS520、DYS552、DYS593、DYS531、DYS459a/b、DYS508、DYS388、DYS617、DYS645、DYS713、DYS630、DYF404S1a/b、DYS626、DYS526a/b等63个基因座,在中国人群中的多态性调查,优选出27个低突变、高多态性基因座:DYS531、DYS481、DYS510、DYS533、DYS459a/b、DYS446、DYS443、DYS388、DYS557、DYS587、DYS522、DYS520、DYS527a/b、DYS460、Y_GATA_A10、DYS508、DYS444、DYS385a/b、DYS552、DYS526a、DYS617、DYS630、DYS622、DYS713和4个高突变、高多态性基因座:DYF404S1a/b、DYS526b、DYS626以及一个Yindel。其中上述31个基因座(除Yindel)的详细信息见表1。
表1:31个Y STR基因座信息
为了进一步说明本发明优选的31个Y STR基因座和一个Yindel,与目前市场上主流的Y建库试剂盒(如表2所示的4个试剂盒)形成较好的互补,本发明将所筛选的31个Y STR基因座和一个Yindel与下述4个市场上主流的Y建库试剂盒中的基因座进行比较。详见表2,其中“+”指的是本发明可以识别的基因座,空格为本发明不能识别该STR基因座。其中,4个市场上主流的Y建库试剂盒可分别包括PathFinder、Yfiler Platinum、DNATyperTMY36、AGCU FS Y37。
表2:本发明所提供的试剂盒与国内外试剂盒比较
实施例2:基因座排布
根据实施例1中优选的32个Y染色体基因座序列及其多态性等特征,结合荧光染料的特性,可以设计独特的基因座排布方式。
在一些实施例中,荧光染料用于将每个基因座的扩增引物对中的至少一条引物5′端进行标记。
在一些实施例中,本发明可以将32个Y染色体基因座分为五组:第一组:DYS510、DYS533、DYS531、DYS630、DYS622、DYF404S1a/b;第二组:DYS443、DYS388、DYS459a/b、DYS446、DYS557、DYS587、DYS522、DYS626;第三组:Y_GATA_A10、DYS460、DYS527a/b、DYS520、Yindel;第四组:DYS385a/b、DYS481、DYS508、DYS444、DYS552;第五组:DYS617、DYS526a/b、DYS713。
在一些实施例中,本发明可以将32个Y染色体基因座分为五组:第一组:DYS510、DYS533、DYS531、DYS630、DYS622、DYF404S1a/b,采用蓝色荧光染料;第二组:DYS443、DYS388、DYS459a/b、DYS446、DYS557、DYS587、DYS522、DYS626,采用绿色荧光染料;第三组:Y_GATA_A10、DYS460、DYS527a/b、DYS520、Yindel,采用黄色荧光染料;第四组:DYS385a/b、DYS481、DYS508、DYS444、DYS552,采用红色荧光染料;第五组:DYS617、DYS526a/b、DYS713,采用紫色荧光染料。
在一些实施例中,本发明可以将32个Y染色体基因座分为五组:第一组:DYS510、DYS531、DYS622、DYS630、DYS533、DYF404S1a/b,蓝色荧光染料为:6-FAM;第二组:DYS446、DYS557、DYS443、DYS388、DYS587、DYS459a/b、DYS522、DYS626,绿色荧光染料为:HEX;第三组:Y_GATA_A10、DYS520、DYS460、DYS527a/b、Yindel,黄色荧光染料为:SUM;第四组:DYS444、DYS385a/b、DYS481、DYS508、DYS552,红色荧光染料为:LYN;第五组:DYS617、DYS526a/b、DYS713,紫色荧光染料为PUR,如图1所示,即图1为本发明的基因座排布图。
实施例3:基因座引物设计和复合扩增体系建立
引物设计时需要注意一下几点:a、避免引物间二聚体和发卡结构,以免影响引物的扩增效率;b、确保引物序列中不包含SNP位点,特别是引物3’端序列尤为重要,如果存在SNP点可能会出现扩增丢失;c、引物序列需要利用NCBI进行blast比对,保证序列的特异性;d、确保所有引物具有相近的熔炼温度,确保同一退火温度下,具有相近的扩增效率。
随着复合扩增系统中引物数量的增加,不同基因座引物之间的相互干扰也越来越严重,反应体系的动力学变得越来越复杂,因此需要设计大量的引物序列进行复杂的测试,最终保证试剂盒的扩增特异性及效率。
便于说明的目的,本申请仅仅提供一个实施例来保证试剂盒的扩增特异性及效率。
具体的,根据NCBI Genbank中公布的上述基因座的序列信息,采用Primer 5.0软件设计引物,然后使用Oligo 7软件对设计的引物进行评价,优选扩增效率高的引物,最后,再通过NCBI数据库中的primer blast在线引物比对工具,进一步筛选高特异性引物。通过上述步骤设计的引物,再经单扩测试,作进一步优选。
将上述筛选的32个基因座引物进行混合测试,排查可能引起非特异扩增的引物,然后重新设计,直至每个基因座引物的扩增子大小为90~480bp之间,且无二聚体峰和非特异扩增现象。最后,根据每个基因座的引物扩增效率,调整复合扩增体系中的引物浓度至表3所示。
表3:32个Y染色体基因座引物信息
其中,表3中的每个基因座的扩增引物序列中,至少一条采用荧光染料标记其5′端。关于荧光染料标记引物的详细描述可以在本申请的其他地方找到,如实施例2中所述。
在确定32个基因座的复合扩增引物体系的基础上,通过大量重复实验进一步确定扩增中的其他参数,如:酶量、缓冲液离子强度、模板DNA量、复合引物量、循环参数、退火温度以及延伸温度和时间等。以期达到试剂盒的分型精准度高、均衡性好、特异性强和灵敏度优等目标要求(如表4和表5)。
在一些实施例中,本申请的试剂盒可以包括反应混合液、热启动酶、32个基因座的复合引物、32个基因座的等位基因分型标准物、DNA标准品、荧光分子内标、和/或sdH2O。
在一些实施例中,人基因组DNA的提取方法可以包括利用Chelex法、磁珠提取法或有机抽提法。在一些实施例中,人基因组DNA可以采用免提取的滤纸、FTA卡、棉签、唾液卡、或纱布中一种或其任意组合的载体收集的含有人基因组DNA人类血液或口腔细胞。在一些实施例中,人基因组DNA的来源可以包括含有人基因组DNA的血液、血痕、精液、唾液、体液、毛发、肌肉或组织器官等中的一种或其任意组合。例如,人基因组DNA可以是1.0或1.2mm孔径的血斑;又例如,人基因组DNA可以是1.0或1.2mm孔径的唾液斑;再例如,人基因组DNA可以是采用磁珠法或者chelex-100法或者有机纯化法提取的0.1ng-2ng人基因组。
表4:PCR扩增体系及其组分
表5:PCR循环参数
实施例4试剂盒的应用
基于基因座引物设计和复合扩增体系建立,本申请的试剂盒可以应用于法医鉴定、亲权鉴定或DNA家谱构建。
本申请试剂盒具体使用步骤可以包括如下:
1、提取人基因组DNA,具体的操作方式可以参考实施例3中表4及其所述;
2、目标等位基因扩增:参照表4所示的组分,配制扩增体系,置于PCR仪上,然后参照表5的扩增程序,扩增目标等位基因,得到扩增产物;
3、扩增产物的电泳检测:取荧光分子量内标AGCU Marker SIZ-500与去离子甲酰胺,按体积比1/25的比例混合组成上样混合物;将12.5μL的上样混合物分别与1.0μL的扩增产物、32个基因座的等位基因分型标准物混合,于离心机中4000rmp离心3min,去除气泡;将其置于PCR仪上,95℃变性3min,然后转至低温冰箱中,静置3min,最后使用遗传分析仪进行电泳检测;
4、分型分析:采用片段分析软件GeneMapper ID-X分析上述遗传分析仪检测收集的数据。
实施例5:等位基因分型标准物组配
等位基因分型标准物为分型的标准,用于对个人进行分型鉴定。根据最终确定的每个基因座的引物特点,将上述收集的每个基因座的不同分型集合到一起。本发明所述的试剂盒的等位基因分型标准物的分型图,包含目前已发现的所有标准等位基因,如图2所示。
实施例6:种属特异性
试剂盒检验马、狗、猪、牛、羊、猫、鸡、鸭、鼠、兔、鱼和大肠杆菌DNA,在分型范围内,不出现特异的DNA分型,说明本发明具有较好的种属特异性。
实施例7:检材适用性
本发明检材适用性广,对人源的棉签采集提取样本、FTA血卡、唾液卡样本均能正确分型。如图4至图6所示。具体如下:
图3所示为标准DNA 9948的分型图,该图表明本发明可对阳性DNA标准品9948进行正确分型;
图4所示为试剂盒对棉签提取样本的分型图;其表明本发明可对棉签采集类样本,在提取的基础上进行正确分型;
图5所示为试剂盒对FTA血卡样本的分型图;其表明本发明可对血卡采集类样本,在不经提取的情况下进行直接检测,且能正确分型;
图6是所示的试剂盒对唾液卡样本的分型图;其表明本发明可对唾液卡采集类样本,在不经提取的情况下进行直接检测,且能正确分型。
上述说明示出并描述了本发明的若干优选实施例,但如前所述,应当理解本发明并非局限于本文所披露的形式,不应看作是对其他实施例的排除,而可用于各种其他组合、修改和环境,并能够在本文所述发明构想范围内,通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离本发明的精神和范围,则都应在本发明所附权利要求的保护范围内。
序列表
<110> 无锡市公安局刑事科学技术研究所
无锡中德美联生物技术有限公司
<120> 一种同时检测32个Y染色体基因座的复合扩增试剂盒
<141> 2019-04-04
<160> 56
<170> SIPOSequenceListing 1.0
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 30
aataagaata ccagaggaat ctgaca 26
<210> 31
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 31
aatggagata gtgggtggat 20
<210> 32
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 32
gcaacctgcc atctctattt atcttgcat 29
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<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 34
gtcgagttag agaacagcct 20
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 35
gcccagcatg tgttttgact a 21
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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actgtcacaa tgggtcctgt a 21
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<211> 22
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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attctaggaa gattagccac aa 22
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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cttattcgtg agccaagatc gc 22
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<212> DNA
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tttaccagaa ggttgcaaga ctc 23
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<212> DNA
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ttatacaatg gcaatcccaa att 23
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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gagcccatgc cattcaaac 19
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gctcattttc tctcttctcc actttaa 27
<210> 45
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ctattccaat tacatagtcc tcc 23
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<212> DNA
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<212> DNA
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accagaacta gatttattca cggttg 26
Claims (8)
1.一种同时检测32个染色体基因座的复合扩增试剂盒,其特征在于,包括56条扩增引物,分别依次为:SEQ ID NO:1~2、SEQ ID NO:3~4、SEQ ID NO:5~6、SEQ ID NO:7~8、SEQID NO:9~10、SEQ ID NO:11~12、SEQ ID NO:13~14、SEQ ID NO:15~16、SEQ ID NO:17~18、SEQ ID NO:19~20、SEQ ID NO:21~22、SEQ ID NO:23~24、SEQ ID NO:25~26、SEQ IDNO:27~28、SEQ ID NO:29~30、SEQ ID NO:31~32、SEQ ID NO:33~34、SEQ ID NO:35~36、SEQ ID NO:37~38、SEQ ID NO:39~40、SEQ ID NO:41~42、SEQ ID NO:43~44、SEQ IDNO:45~46、SEQ ID NO:47~48、SEQ ID NO:49~51、SEQ ID NO:52~53、SEQ ID NO:54~56。
2.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述56条扩增引物对应的Y染色体基因座依次分别为:DYS531、DYS630、DYS622、DYS510、DYS533、DYF404S1a/b、DYS459a/b、DYS446、DYS443、DYS388、DYS587、DYS522、DYS626、Yindel、DYS460、Y_GATA_A10、DYS520、DYS557、DYS527a/b、DYS481、DYS508、DYS444、DYS385a/b、DYS552、DYS526a/b、DYS617和DYS713,其中,所述DYF404S1a/b、所述DYS527a/b、所述DYS385a/b和所述DYS526a/b为双等位基因基因座。
3.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于,所述Y染色体基因座所对应的引物对在扩增体系中的终浓度为0.027μM~0.82μM。
4.根据权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,所述Y染色体基因座所对应的引物对在扩增体系中的终浓度依次分别为DYS531:0.52μM、DYS630:0.08μM、DYS622:0.82μM、DYS522:0.02μM、DYS460:0.78μM、Y_GATA_A10:0.06μM、DYS520:0.8μM、DYS481:0.41μM、DYS444:0.76μM、DYS552:0.24μM、DYS526a/b:0.3μM、DYS510:0.124μM、DYS533:0.021μM、DYF404S1a/b:0.144μM、DYS459a/b:0.7μM、DYS446:0.09μM、DYS443:0.027μM、DYS388:0.53μM、DYS557:0.071μM、DYS587:0.184μM、DYS626:0.41μM、DYS527a/b:0.051μM、DYS508:0.14μM、DYS385a/b:0.17μM、DYS617:0.15μM、DYS713:0.45μM和Yindel:0.5μM。
5.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于,所述每个基因座中的至少一条引物的5’端标记有荧光染料。
6.根据权利要求5所述的试剂盒,其特征在于,所述荧光染料包括6-FAM、HEX、SUM、LYN、PUR、和/或SIZ。
7.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于,所述每个Y染色体基因座对应的扩增引物的长度为90-480bp。
8.一种根据权利要求1-7任一项所述的试剂盒的应用,其特征在于,所述试剂盒用于亲权鉴定、个体识别。
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Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN116144797A (zh) * | 2023-04-10 | 2023-05-23 | 公安部鉴定中心 | 一种y-str荧光标记复合扩增检测体系及其应用 |
Citations (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103451311A (zh) * | 2013-09-24 | 2013-12-18 | 无锡中德美联生物技术有限公司 | 一种同时分析人基因组dna 26个基因座的荧光标记复合扩增的试剂盒及其使用方法和应用 |
CN103614361A (zh) * | 2013-08-20 | 2014-03-05 | 无锡中德美联生物技术有限公司 | 一种人基因组dna24个基因座的复合扩增的试剂盒 |
CN104164504A (zh) * | 2014-08-05 | 2014-11-26 | 广东华美众源生物科技有限公司 | 一种人类y染色体27个str基因座的荧光标记复合扩增试剂盒 |
CN105177146A (zh) * | 2015-09-21 | 2015-12-23 | 无锡中德美联生物技术有限公司 | 人类y染色体27个str基因座的荧光标记复合扩增试剂盒及其应用 |
CN105385763A (zh) * | 2015-12-11 | 2016-03-09 | 无锡中德美联生物技术有限公司 | 一种同时分析人基因组dna 24个基因座的荧光标记复合扩增的试剂盒及其应用 |
CN106148552A (zh) * | 2016-08-31 | 2016-11-23 | 无锡中德美联生物技术有限公司 | 人类y染色体30个str基因座的荧光标记复合扩增试剂盒及其应用 |
CN108220413A (zh) * | 2018-02-05 | 2018-06-29 | 浙江省公安物证鉴定中心 | 联合检测人Y染色体STR和Indel基因座的荧光复合扩增试剂盒及其应用 |
CN108531610A (zh) * | 2018-02-27 | 2018-09-14 | 苏州阅微基因技术有限公司 | 37个Y染色体STR基因座和一个Y-Indel的荧光复合扩增体系、试剂盒及其应用 |
CN109439765A (zh) * | 2018-11-20 | 2019-03-08 | 江苏苏博生物医学科技南京有限公司 | 一种同时检测60个常染色体及y染色体基因座的复合扩增检测试剂盒 |
-
2019
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Patent Citations (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103614361A (zh) * | 2013-08-20 | 2014-03-05 | 无锡中德美联生物技术有限公司 | 一种人基因组dna24个基因座的复合扩增的试剂盒 |
CN103451311A (zh) * | 2013-09-24 | 2013-12-18 | 无锡中德美联生物技术有限公司 | 一种同时分析人基因组dna 26个基因座的荧光标记复合扩增的试剂盒及其使用方法和应用 |
CN104164504A (zh) * | 2014-08-05 | 2014-11-26 | 广东华美众源生物科技有限公司 | 一种人类y染色体27个str基因座的荧光标记复合扩增试剂盒 |
CN105177146A (zh) * | 2015-09-21 | 2015-12-23 | 无锡中德美联生物技术有限公司 | 人类y染色体27个str基因座的荧光标记复合扩增试剂盒及其应用 |
CN105385763A (zh) * | 2015-12-11 | 2016-03-09 | 无锡中德美联生物技术有限公司 | 一种同时分析人基因组dna 24个基因座的荧光标记复合扩增的试剂盒及其应用 |
CN106148552A (zh) * | 2016-08-31 | 2016-11-23 | 无锡中德美联生物技术有限公司 | 人类y染色体30个str基因座的荧光标记复合扩增试剂盒及其应用 |
CN108220413A (zh) * | 2018-02-05 | 2018-06-29 | 浙江省公安物证鉴定中心 | 联合检测人Y染色体STR和Indel基因座的荧光复合扩增试剂盒及其应用 |
CN108531610A (zh) * | 2018-02-27 | 2018-09-14 | 苏州阅微基因技术有限公司 | 37个Y染色体STR基因座和一个Y-Indel的荧光复合扩增体系、试剂盒及其应用 |
CN109439765A (zh) * | 2018-11-20 | 2019-03-08 | 江苏苏博生物医学科技南京有限公司 | 一种同时检测60个常染色体及y染色体基因座的复合扩增检测试剂盒 |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN116144797A (zh) * | 2023-04-10 | 2023-05-23 | 公安部鉴定中心 | 一种y-str荧光标记复合扩增检测体系及其应用 |
CN116144797B (zh) * | 2023-04-10 | 2024-07-05 | 公安部鉴定中心 | 一种y-str荧光标记复合扩增检测体系及其应用 |
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