CN109837339A - 用于儿童安全用药相关基因检测的引物组、探针组、试剂盒及方法 - Google Patents
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- CN109837339A CN109837339A CN201910238522.8A CN201910238522A CN109837339A CN 109837339 A CN109837339 A CN 109837339A CN 201910238522 A CN201910238522 A CN 201910238522A CN 109837339 A CN109837339 A CN 109837339A
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Abstract
本发明公开了一种用于儿童安全用药相关基因检测的引物组、探针组、试剂盒及方法，设计了特异性高的引物组及TAQMAN‑MGB荧光检测探针、配合科学合理的PCR反应体系，通过检测荧光的释放和强度来检测基因多态性，并能够将上述引物组和探针组制成使用方便且检测结果可靠的试剂盒，使得本发明具有操作简单、检测快速、准确性高及特异性好的特点，能够为儿童安全用药提供提前检测和有效预防的方法和产品，提高儿童用药的安全性和有效性。
Description
技术领域
本发明涉及分子生物学检测技术领域，主要是涉及一种用于儿童安全用药相关基因检测的引物组、探针组、试剂盒及方法。
背景技术
在中国，中毒是儿童伤害死亡的主要原因之一。每年平均有约1500名儿童(0-14岁)因中毒而死亡，药物中毒的占比一直保持在40％以上；每5名中毒儿童中，就有2名儿童是药物中毒。据分析，80％的儿童药物中毒是可以预防的。每年大约有3万名儿童因用药不合理致聋；死于不合理用药的人群中，儿童占比高达32％，每三个人当中就有一个是儿童。我国儿童用药不良反应发生率为12.9％，为成人6.9％的2倍；其中新生儿高达24.4％，是成人6.9％的4倍。
根据药物基因组学的研究可知，对药物反应的个体差异，主要是遗传因素造成的，特别是个体的基因序列多态性将造成药物效应的多样性。这是因为个体特定的基因多态性影响药物代谢酶的活性，进而影响药物的代谢动力学和药效学。药物代谢酶活性降低(慢代谢型)，将导致药物在体内聚积，使得药效增强甚至产生毒副作用；而药物代谢酶活性增强(超快代谢型)，则导致药物代谢加快，不能达到有效的治疗浓度。
目前，随着人类基因组计划的完成，药物基因组学的发展，包括硫唑嘌呤、华法林等在内的一系列药物被美国FDA强制要求在说明书中增加基因组学相关信息。但目前在中国，鲜有针对儿童患者的个体化用药相关产品，临床上儿童用药的给药剂量全靠经验，儿童用药不良反应事件时有发生。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种用于儿童安全用药相关基因检测的引物组、探针组、试剂盒及方法，旨在为儿童安全用药提供提前检测和有效预防的方法和产品，提高儿童用药的安全性和有效性。
为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
本发明提供了一种用于儿童安全用药相关基因检测的引物组，包括：
针对GLCCI1基因突变位点rs37973的特异性引物：上游引物rs37973-F的序列如SEQ ID No.1所示，下游引物rs37973-R的序列如SEQ ID No.2所示；和/或，
针对ABCB1基因突变位点rs1045642的特异性引物：上游引物rs1045642-F的序列如SEQ ID No.3所示，下游引物rs1045642-R的序列如SEQ ID No.4所示；和/或，
针对CYP2D6*10基因突变位点rs1065852的特异性引物：上游引物rs1065852-F的序列如SEQ ID No.5所示，下游引物rs1065852-R的序列如SEQ ID No.6所示；和/或，
针对CYP2C19基因突变位点rs4244285的特异性引物：上游引物rs4244285-F的序列如SEQ ID No.7所示，下游引物rs4244285-R的序列如SEQ ID No.8所示；和/或，
针对UGT1A3基因突变位点rs7604115的特异性引物：上游引物rs7604115-F的序列如SEQ ID No.9所示，下游引物rs7604115-R的序列如SEQ ID No.10所示；和/或，
针对HLA-DQB1基因突变位点rs9274407的特异性引物：上游引物rs9274407-F的序列如SEQ ID No.11所示，下游引物rs9274407-R的序列如SEQ ID No.12所示；和/或，
针对CNEP1R1基因突变位点rs9933632的特异性引物：上游引物rs9933632-F的序列如SEQ ID No.13所示，下游引物rs9933632-R的序列如SEQ ID No.14所示。
本发明还提供了一种用于儿童安全用药相关基因检测的探针组，包括：
针对GLCCI1基因突变位点rs37973的基因型A的FAM修饰的探针rs37973-PF AA和基因型G的VIC修饰的探针rs37973-PV GG：rs37973-PF AA的序列如SEQ ID No.15所示，rs37973-PV GG的序列如SEQ ID No.16所示；和/或，
针对ABCB1基因突变位点rs1045642的基因型A的FAM修饰的探针rs1045642-PCFAA和基因型G的VIC修饰的探针rs1045642-PCV GG：rs1045642-PCFAA的序列如SEQ IDNo.17所示，rs1045642-PCV GG的序列如SEQ ID No.18所示；和/或，
针对CYP2D6*10基因突变位点rs1065852的基因型C的FAM修饰的探针rs1065852-PF CC和基因型T的VIC修饰的探针rs1065852-PV TT：rs1065852-PF CC的序列如SEQ IDNo.19所示，rs1065852-PV TT的序列如SEQ ID No.20所示；和/或，
针对CYP2C19基因突变位点rs4244285的基因型A的FAM修饰的探针rs4244285-PFAA和基因型G的VIC修饰的探针rs4244285-PV GG：rs4244285-PF AA的序列如SEQ ID No.21所示，rs4244285-PV GG的序列如SEQ ID No.22所示；和/或，
针对UGT1A3基因突变位点rs7604115的基因型G的FAM修饰的探针rs7604115-PCFGG和基因型A的VIC修饰的探针rs7604115-PCV AA：rs7604115-PCF GG的序列如SEQ IDNo.23所示，rs7604115-PCV AA的序列如SEQ ID No.24所示；和/或，
针对HLA-DQB1基因突变位点rs9274407的基因型T的FAM修饰的探针rs9274407-PFTT和基因型A的VIC修饰的探针rs9274407-PV AA：rs9274407-PF TT的序列如SEQ ID No.25所示，rs9274407-PV AA的序列如SEQ ID No.26所示；和/或，
针对CNEP1R1基因突变位点rs9933632的基因型G的FAM修饰的探针rs9933632-PFGG和基因型T的VIC修饰的探针rs9933632-PV TT：rs9933632-PF GG的序列如SEQ ID No.27所示，rs9933632-PV TT的序列如SEQ IDNo.28所示。
本发明还提供了一种用于儿童安全用药相关基因检测的试剂盒，包括上述引物组。
优选地，上述试剂盒还包括上述探针组。
优选地，上述试剂盒还包括用于qPCR反应的PCRbuffer、dNTP、高保真Taq酶以及无核酸酶水。
优选地，上述试剂盒20μl反应体系包括：
其中，qPCR Master Mix为PCR buffer、dNTP和高保真Taq酶的混合物，F-Primer引物和R-Primer引物选自所述引物组中任意一组引物，浓度均为10μM，FAM-Probe探针和VIC-Probe探针选自所述探针组中任意一组探针，浓度均为10μM，所述gDNA模板的浓度大于10ng/μl。
本发明还提供了一种将上述试剂盒用于儿童安全用药相关基因检测的方法，包括如下步骤：
1)提取待检测样本的gDNA，作为qPCR反应的模板；
2)配制qPCR反应体系；
3)进行qPCR扩增反应；
4)根据qPCR扩增反应结果分析得到儿童安全用药相关基因的基因型。
优选地，步骤3)中按照以下参数设置qPCR扩增反应程序：
本发明具有的有益效果是：
1、采用Taqman荧光探针法对个体的基因型进行检测，Taqman探针法是SNP检测的金标准，具有灵敏度和准确性都很高的特点。
2、本发明检测基因所对应的药物均为针对儿童的常用药物，并且检测的SNP位点具有代表性，证据可信。
附图说明
图1(a)为本发明实施例中18个样本GLCCI1-rs37973位点不同基因型特异性片段扩增曲线示意图；图1(b)为本发明实施例中另外16个样本GLCCI1-rs37973位点不同基因型特异性片段扩增曲线示意图。
图2(a)为本发明实施例中18个样本ABCB1-rs1045642位点不同基因型特异性片段扩增曲线示意图；图2(b)为本发明实施例中另外16个样本ABCB1-rs1045642位点不同基因型特异性片段扩增曲线示意图。
图3(a)为本发明实施例中18个样本CYP2D6*10-rs1065852位点不同基因型特异性片段扩增曲线示意图；图3(b)为本发明实施例中另外16个样本CYP2D6*10-rs1065852位点不同基因型特异性片段扩增曲线示意图。
图4(a)为本发明实施例中18个样本CYP2C19-rs4244285位点不同基因型特异性片段扩增曲线示意图；图4(b)为本发明实施例中另外16个样本CYP2C19-rs4244285位点不同基因型特异性片段扩增曲线示意图。
图5(a)为本发明实施例中18个样本UGT1A3-rs7604115位点不同基因型特异性片段扩增曲线示意图；图5(b)为本发明实施例中另外16个样本UGT1A3-rs7604115位点不同基因型特异性片段扩增曲线示意图。
图6(a)为本发明实施例中18个样本HLA-DQB1-rs9274407位点不同基因型特异性片段扩增曲线示意图；图6(b)为本发明实施例中另外16个样本HLA-DQB1-rs9274407位点不同基因型特异性片段扩增曲线示意图。
图7(a)为本发明实施例中18个样本CNEP1R1-rs9933632位点不同基因型特异性片段扩增曲线示意图；图7(b)为本发明实施例中另外16个样本CNEP1R1-rs9933632位点不同基因型特异性片段扩增曲线示意图。
具体实施方式
为了使公众能充分了解本发明的技术实质和有益效果，申请人将结合实施例对本发明做进一步详细描述，但申请人对实施例的描述并非对技术方案的限制，任何依据本发明构思作形式而非实质的变化都应当视为涵盖在本发明的保护范围之内。
实施例
一、本发明所选位点的意义如表1所示：
表1.不同基因突变位点对应的代谢药物及临床意义
二、引物和探针的设计与合成
针对人基因组中GLCCI1基因突变位点rs37973、ABCB1基因突变位点rs1045642、CYP2D6*10基因突变位点rs1065852、CYP2C19基因突变位点rs4244285、UGT1A3基因突变位点rs7604115、HLA-DQB1基因突变位点rs9274407和CNEP1R1基因突变位点rs9933632(序列参见NCBI数据库公开的人类全基因组序列)，使用Primer Express 3.0分别设计特异性引物及FAM/VIC标记的探针，由上海百力格生物技术有限公司合成，得到7组引物、7组探针(组别标记为X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7)。
本发明所选位点的引物和探针序列如表2所示：
表2.针对本发明所选位点的特异性引物组和探针组的列表
三、试剂盒组成
与其他用于基因检测的试剂盒相一致，在本发明提供的试剂盒内还包含qPCR反应所需的PCR buffer，dNTP、高保真Taq酶的混合物(命名为qPCR Master Mix，本实施例使用赛默飞的TaqPathTM ProAmpTMMaster Mix)，以及无核酸酶水。
四、基因检测
本发明提供的用于儿童安全用药相关基因检测的方法，主要包括如下步骤：
1、取待测样本已提取好的gDNA(按照英芮城生化科技有限公司的《磁珠法血液基因组DNA提取试剂盒》说明书进行操作)，作为qPCR反应的模板；本实施例中，待测样本来自与申请人合作的医院，为合作医院提供的受测者的静脉血样本(申请人是具有医疗机构资质的第三方医学检测中心，有权处理医院委托检测的血液样本)。
待测样本gDNA来自34个不同个体，均分为7等分，用于以下7组不同基因突变位点的基因检测，个体编号如表3所示：
表3.待测样本的编号列表
| 序号 | 个体编号 | 序号 | 个体编号 | 序号 | 个体编号 |
| 1 | 106606 | 2 | 484951 | 3 | 484956 |
| 4 | 484987 | 5 | 551878 | 6 | 551879 |
| 7 | 551880 | 8 | 551887 | 9 | 551888 |
| 10 | 551889 | 11 | 551890 | 12 | 551891 |
| 13 | 551900 | 14 | 551901 | 15 | 551902 |
| 16 | 551904 | 17 | 551906 | 18 | 552668 |
| 19 | 566573 | 20 | 566575 | 21 | 566704 |
| 22 | 568973 | 23 | 568974 | 24 | 568975 |
| 25 | 568976 | 26 | 568977 | 27 | 568978 |
| 28 | 568979 | 29 | 568980 | 30 | 568995 |
| 31 | 568996 | 32 | 568997 | 33 | 568998 |
| 34 | 569383 |
为便于区分及显示，在附图的扩增曲线中均按照突变位点+个体编号的方式命名及标注。
2、将7组(共34*7个)待测样本按照表4配制qPCR反应体系：
表4. 20μl反应体系试剂名称及体积列表
其中：
qPCR Master Mix为PCR buffer、dNTP和高保真Taq酶的混合物，F-Primer引物和R-Primer引物选自表2所示引物组中相应的引物，FAM-Probe探针和VIC-Probe探针选自表2所示探针组中相应的探针。
3、采用Applied Biosystems 7500荧光定量PCR仪进行qPCR扩增反应，仪器程序按照表5所示参数进行设置：
表5.程序设置参数列表
检测到FAM、VIC信号即确定为扩增成功。
7组待测样本qPCR扩增结果分别如图1(a)-图1(b)、图2(a)-图2(b)、图3(a)-图3(b)、图4(a)-图4(b)、图5(a)-图5(b)、图6(a)-图6(b)、图7(a)-图7(b)所示。
根据扩增曲线中7组待测样本的FAM/VIC比值，即可确定各样本的基因型，如表6所示：
表6.不同基因突变位点的基因型频率及等位基因频率列表
本发明设计了特异性高的引物组及TAQMAN-MGB荧光检测探针、配合科学合理的PCR反应体系，通过检测荧光的释放和强度来检测基因多态性，并能够将上述引物组和探针组制成使用方便且检测结果可靠的试剂盒，使得本发明具有操作简单、检测快速、准确性高及特异性好的特点，从而实现了对儿童安全用药相关基因多态性的快速及准确测定，可用于降低临床儿童常见用药的不良反应，进而能够降低医疗成本，节约社会资源。
序列表
<110> 西安奥蓝泰生物科技有限公司
<120> 用于儿童安全用药相关基因检测的引物组、探针组、试剂盒及方法
<130> 201903
<160> 28
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
tcttttcact gcataactac aaatg 25
<210> 2
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
cttattaatc aaaagaactt ct 22
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
cagcattgct gagaacattg 20
<210> 4
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
ggcagtgact cgatgaaggc 20
<210> 5
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
ggccatcttc ctgctcctgg t 21
<210> 6
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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gaagtccaca tgcagcaggt tgc 23
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
gcttggcata ttgtatctat acc 23
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<212> DNA
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atatcacttt ccataaaagc aagg 24
<210> 9
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
cattgctcaa aacttcactg tca 23
<210> 10
<211> 24
<212> DNA
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cgaaaattag ccttgctagt gttc 24
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<211> 28
<212> DNA
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cggttataga tgtatctggt cacaagac 28
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<211> 16
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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cgggctgggg cctgac 16
<210> 13
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
cttctagatc agaaaactta gttca 25
<210> 14
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
ggagactctt caaagcctga ag 22
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<211> 14
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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tttgttcaat gcag 14
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ttgttcagtg cag 13
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<212> DNA
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<211> 12
<212> DNA
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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acgctaccca cc 12
<210> 20
<211> 12
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 20
acgctactca cc 12
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<211> 12
<212> DNA
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<400> 21
tatttcccag ga 12
<210> 22
<211> 12
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 22
tatttcccgg ga 12
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<211> 13
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 23
tgatctgtgc cac 13
<210> 24
<211> 13
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 24
tgatctgtac cac 13
<210> 25
<211> 13
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 25
aaactggtac acg 13
<210> 26
<211> 13
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 26
aaactggaac acg 13
<210> 27
<211> 13
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 27
tggcctgttt caa 13
<210> 28
<211> 13
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 28
tggccttttt caa 13
Claims (8)
1.用于儿童安全用药相关基因检测的引物组，包括：
针对GLCCI1基因突变位点rs37973的特异性引物：上游引物rs37973-F的序列如SEQ IDNo.1所示，下游引物rs37973-R的序列如SEQ ID No.2所示；和/或，
针对ABCB1基因突变位点rs1045642的特异性引物：上游引物rs1045642-F的序列如SEQID No.3所示，下游引物rs1045642-R的序列如SEQ ID No.4所示；和/或，
针对CYP2D6*10基因突变位点rs1065852的特异性引物：上游引物rs1065852-F的序列如SEQ ID No.5所示，下游引物rs1065852-R的序列如SEQ ID No.6所示；和/或，
针对CYP2C19基因突变位点rs4244285的特异性引物：上游引物rs4244285-F的序列如SEQ ID No.7所示，下游引物rs4244285-R的序列如SEQ ID No.8所示；和/或，
针对UGT1A3基因突变位点rs7604115的特异性引物：上游引物rs7604115-F的序列如SEQ ID No.9所示，下游引物rs7604115-R的序列如SEQ ID No.10所示；和/或，
针对HLA-DQB1基因突变位点rs9274407的特异性引物：上游引物rs9274407-F的序列如SEQ ID No.11所示，下游引物rs9274407-R的序列如SEQ ID No.12所示；和/或，
针对CNEP1R1基因突变位点rs9933632的特异性引物：上游引物rs9933632-F的序列如SEQ ID No.13所示，下游引物rs9933632-R的序列如SEQ ID No.14所示。
2.用于儿童安全用药相关基因检测的探针组，包括：
针对GLCCI1基因突变位点rs37973的基因型A的FAM修饰的探针rs37973-PF AA和基因型G的VIC修饰的探针rs37973-PV GG：rs37973-PF AA的序列如SEQ ID No.15所示，rs37973-PV GG的序列如SEQ ID No.16所示；和/或，
针对ABCB1基因突变位点rs1045642的基因型A的FAM修饰的探针rs1045642-PCF AA和基因型G的VIC修饰的探针rs1045642-PCV GG：rs1045642-PCF AA的序列如SEQ ID No.17所示，rs1045642-PCV GG的序列如SEQ ID No.18所示；和/或，
针对CYP2D6*10基因突变位点rs1065852的基因型C的FAM修饰的探针rs1065852-PF CC和基因型T的VIC修饰的探针rs1065852-PV TT：rs1065852-PF CC的序列如SEQ ID No.19所示，rs1065852-PV TT的序列如SEQ ID No.20所示；和/或，
针对CYP2C19基因突变位点rs4244285的基因型A的FAM修饰的探针rs4244285-PF AA和基因型G的VIC修饰的探针rs4244285-PV GG：rs4244285-PF AA的序列如SEQ ID No.21所示，rs4244285-PV GG的序列如SEQ ID No.22所示；和/或，
针对UGT1A3基因突变位点rs7604115的基因型G的FAM修饰的探针rs7604115-PCF GG和基因型A的VIC修饰的探针rs7604115-PCV AA：rs7604115-PCF GG的序列如SEQ ID No.23所示，rs7604115-PCV AA的序列如SEQ ID No.24所示；和/或，
针对HLA-DQB1基因突变位点rs9274407的基因型T的FAM修饰的探针rs9274407-PF TT和基因型A的VIC修饰的探针rs9274407-PV AA：rs9274407-PF TT的序列如SEQ ID No.25所示，rs9274407-PV AA的序列如SEQ ID No.26所示；和/或，
针对CNEP1R1基因突变位点rs9933632的基因型G的FAM修饰的探针rs9933632-PF GG和基因型T的VIC修饰的探针rs9933632-PV TT：rs9933632-PF GG的序列如SEQ ID No.27所示，rs9933632-PV TT的序列如SEQ ID No.28所示。
3.用于儿童安全用药相关基因检测的试剂盒，包括引物组，所述引物组包括：
针对GLCCI1基因突变位点rs37973的特异性引物：上游引物rs37973-F的序列如SEQ IDNo.1所示，下游引物rs37973-R的序列如SEQ ID No.2所示；和/或，
针对ABCB1基因突变位点rs1045642的特异性引物：上游引物rs1045642-F的序列如SEQID No.3所示，下游引物rs1045642-R的序列如SEQ ID No.4所示；和/或，
针对CYP2D6*10基因突变位点rs1065852的特异性引物：上游引物rs1065852-F的序列如SEQ ID No.5所示，下游引物rs1065852-R的序列如SEQ ID No.6所示；和/或，
针对CYP2C19基因突变位点rs4244285的特异性引物：上游引物rs4244285-F的序列如SEQ ID No.7所示，下游引物rs4244285-R的序列如SEQ ID No.8所示；和/或，
针对UGT1A3基因突变位点rs7604115的特异性引物：上游引物rs7604115-F的序列如SEQ ID No.9所示，下游引物rs7604115-R的序列如SEQ ID No.10所示；和/或，
针对HLA-DQB1基因突变位点rs9274407的特异性引物：上游引物rs9274407-F的序列如SEQ ID No.11所示，下游引物rs9274407-R的序列如SEQ ID No.12所示；和/或，
针对CNEP1R1基因突变位点rs9933632的特异性引物：上游引物rs9933632-F的序列如SEQ ID No.13所示，下游引物rs9933632-R的序列如SEQ ID No.14所示。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，还包括探针组，所述探针组包括：
针对GLCCI1基因突变位点rs37973的基因型A的FAM修饰的探针rs37973-PF AA和基因型G的VIC修饰的探针rs37973-PV GG：rs37973-PF AA的序列如SEQ ID No.15所示，rs37973-PV GG的序列如SEQ ID No.16所示；和/或，
针对ABCB1基因突变位点rs1045642的基因型A的FAM修饰的探针rs1045642-PCF AA和基因型G的VIC修饰的探针rs1045642-PCV GG：rs1045642-PCF AA的序列如SEQ ID No.17所示，rs1045642-PCV GG的序列如SEQ ID No.18所示；和/或，
针对CYP2D6*10基因突变位点rs1065852的基因型C的FAM修饰的探针rs1065852-PF CC和基因型T的VIC修饰的探针rs1065852-PV TT：rs1065852-PF CC的序列如SEQ ID No.19所示，rs1065852-PV TT的序列如SEQ ID No.20所示；和/或，
针对CYP2C19基因突变位点rs4244285的基因型A的FAM修饰的探针rs4244285-PF AA和基因型G的VIC修饰的探针rs4244285-PV GG：rs4244285-PF AA的序列如SEQ ID No.21所示，rs4244285-PV GG的序列如SEQ ID No.22所示；和/或，
针对UGT1A3基因突变位点rs7604115的基因型G的FAM修饰的探针rs7604115-PCF GG和基因型A的VIC修饰的探针rs7604115-PCV AA：rs7604115-PCF GG的序列如SEQ ID No.23所示，rs7604115-PCV AA的序列如SEQ ID No.24所示；和/或，
针对HLA-DQB1基因突变位点rs9274407的基因型T的FAM修饰的探针rs9274407-PF TT和基因型A的VIC修饰的探针rs9274407-PV AA：rs9274407-PF TT的序列如SEQ ID No.25所示，rs9274407-PV AA的序列如SEQ ID No.26所示；和/或，
针对CNEP1R1基因突变位点rs9933632的基因型G的FAM修饰的探针rs9933632-PF GG和基因型T的VIC修饰的探针rs9933632-PV TT：rs9933632-PF GG的序列如SEQ ID No.27所示，rs9933632-PV TT的序列如SEQ ID No.28所示。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，还包括：用于qPCR反应的PCR buffer、dNTP、高保真Taq酶以及无核酸酶水。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的20μl反应体系包括：
其中，qPCR Master Mix为PCR buffer、dNTP和高保真Taq酶的混合物，F-Primer引物和R-Primer引物选自所述引物组中任意一组引物，浓度均为10μM，FAM-Probe探针和VIC-Probe探针选自所述探针组中任意一组探针，浓度均为10μM，所述gDNA模板的浓度大于10ng/μl。
7.将权利要求3-6任意一项所述的试剂盒用于儿童安全用药相关基因检测的方法，包括如下步骤：
1)提取待检测样本的gDNA，作为qPCR反应的模板；
2)配制qPCR反应体系；
3)进行qPCR扩增反应；
4)根据qPCR扩增反应结果分析得到儿童安全用药相关基因的基因型。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤3)中按照以下参数设置qPCR扩增反应程序：
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