CN109837295A - 一种用基因编辑创制的水稻单倍体诱导系及其创制方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明首次提供了一种利用CRISPR/Cas9技术在水稻中创制单倍体诱导系的方法，并在不同水稻品系中加以应用的范例。

Description

一种用基因编辑创制的水稻单倍体诱导系及其创制方法和 应用

技术领域

本发明涉及植物遗传学和基因工程领域。具体而言，本发明涉及一种基因编辑方法在水稻中的应用，特别涉及通过编辑水稻OsMATL基因能够创制水稻单倍体诱导系，能够应用于水稻育种以及在水稻中进行基因编辑。

背景技术

杂交优势在农业生产上有很广泛的应用，通过将两个亲本自交系进行杂交得到的杂一代杂交种，将其用于生产可以获得远高于亲本的产量和品质。在大规模生产中农民需要品质高度均一的种子来保证产出，种子公司要提供品质均一的杂交种就需要高度纯合的亲本自交系。传统遗传育种不断地通过杂交方式改良亲本系，将更多更优良的性状整合到亲本系中，在这过程中也导致亲本的遗传背景发生重组，大量位点变得杂合，需要通过后续不断地回交或自交来固定遗传背景，然后才能用于制种。为了获得纯合的亲本自交系，育种实践中通常需要6次或者更多次回交或自交使遗传背景接近纯合，周期漫长。育种家迫切希望有方法可以缩短育种过程。

在二倍体型被子植物整个生活史中，配子体是单倍体而体细胞是二倍体。花粉是单倍体型雄配子，由一个大的营养细胞和两个精细胞组成，在花药中发育成熟。雌配子在胚珠中发育成熟，成熟胚囊中含有一个卵细胞、两个助细胞、三个反足细胞及一个含有两个极核的中央细胞。在受精过程中花粉在亲和的柱头上萌发形成花粉管，花粉管根据雌蕊的结构并感受雌蕊分泌的化学物质来定向，沿着花柱迅速伸长，准确地经过胚珠的珠孔进入胚囊。在接触到胚囊的某一个助细胞之后，花粉管迅速破裂，释放出两个精细胞，两个精细胞穿过凋亡助细胞的细胞质分别与卵细胞和中央细胞融合形成受精卵和胚乳，这种受精方式称为双受精。如果双受精失败，则可以有另一个花粉管再次与残留的助细胞作用完成受精。处于单倍体状态的配子细胞经过染色体加倍过程可以转变成二倍体细胞，这样所有的遗传位点都变成纯合而被固定下来。这种方法称为双单倍体技术。植物学家希望充分了解双受精过程，直接或间接利用单倍型的配子体，通过染色体加倍来产生双单倍体，缩短育种周期，比如首先获得杂交亲本的单倍体，然后通过自然或者人工染色体加倍过程，如秋水仙素处理等方法，一代即可获得纯合的自交系。双单倍体使得重组群体可以以纯合的形式被快速筛选。简而言之，双单倍体技术是改良作物整合新性状的最便捷的方式。

利用双单倍体技术的前提条件是获得单倍体。获得植物单倍体的方法主要包括两大类，一类是组织培养，如小孢子培养、大孢子培养等。组织培养的方法大多与基因型密切相关，在很多作物中都有报道，但是成本高昂，而且尽管文献报道了很多，但是在很多作物中并没有成熟可靠的体系。另一类是基于种子的在体单倍体诱导方法。这是一种在胚胎早期发育过程中来自诱导系一方的染色体发生丢失的特殊现象，包括远缘杂交或者与单倍体诱导系进行种内杂交，通常都是诱导系的基因组丢失而只保留另一方的遗传物质。基于种子的在体诱导方式则通常与基因型无关。这种现象在自然界很少见，在玉米、高粱、大麦、小麦等作物中有报道，但在水稻自然资源中还没有被发现。

玉米单倍体诱导系的使用和研究时间比较长，体系也比较完善。玉米单倍体诱导系Stock 6在1959年首次报道，在其自交群体中或者作为父本产生的杂交群体中可以达到2～3％的自身或母本单倍体。正常发育的胚乳是保证单倍体种子存活的关键。2017年三个独立团队先后分别发表了对玉米中导致单倍体产生的效应基因的研究成果(Kelliher 2017；Liu 2017；Gilles 2017)，在玉米MATRILINEAL基因靠近末端的位置有4个核苷酸的插入，导致移码突变，直接导致后代中产生单倍体。玉米MATRILINEAL基因是一种磷脂酶，仅在精细胞中特异表达。MATRILINEAL基因的发现为单倍体诱导系的推广应用奠定了基础，也为在其它作物(如水稻)中建立相应的单倍体诱导系统提供了理论支持。

基因编辑技术近年来发展迅速，大量高效编辑系统被开发出来。这些系统都基于人工设计的序列特异性核酸酶(Sequence-specific nucleases，SSNs)来对特定位置的基因组DNA进行切割，如早期的锌指核酸酶(Zinc Finger Nuclease,ZFN)、类转录激活效应因子核酸酶(Transcription Activator-Like Effector Nuclease,TALEN)、大范围核酸酶(MegaNuclease，MN)以及2012年开始兴起的规律成簇间隔短回文重复及其相关系统(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats/CRISPR-associated9,CRISPR/Cas9)。CRISPR/Cas9系统由于其操作方便而日益占据主导地位。基因编辑技术作为一种新型基因工程技术在生物技术领域，包括农业生物技术领域有着广泛应用。

发明内容

本发明的发明人首次在水稻中应用基因编辑技术创制了水稻单倍体诱导系，并在3个不同水稻品系中检测了单倍体诱导效果，由此完成了本发明。

本发明涉及的水稻单倍体诱导系，用其花粉作为供体，与任何其它品种的母本水稻，包括自交系、杂交系或其它水稻品系，进行杂交，母本上结出的种子会包含正常的二倍体、只含有母本染色体的单倍体、以及或者其它倍性的种子。单倍体的种子可以通过细胞学检测、表型分析或者分子标记检测与二倍体种子区分，萌发后的单倍体种子可以培养成单倍体植株，经过自然加倍或者人工处理，如秋水仙素处理，转变成为双单倍体植株并可以生产纯合的自交系种子。

水稻单倍体诱导系对水稻育种具有很大大促进作用，可以降低水稻单倍体获得的技术难度和成本，显著缩短纯合自交系的选育周期。

水稻单倍体诱导系可以应用于其它品系的基因编辑，不需要对目标品系进行转化，只需要对单倍体诱导系进行操作，并可以应用于多个不同品系的编辑，且后代不携带转基因成分，可以显著降低育种成本，尤其对于遗传转化困难的品系有重大意义。

本申请首次报道了在水稻中创造单倍体诱导系的方法，并在3个不同水稻品系中成功测试了诱导单倍体的应用。

发明的有益效果

本研究中，发明人首次利用CRISPR/Cas9技术通过编辑水稻内源OsMATL基因，成功地创制了水稻单倍体诱导系，具有开创性的意义。野生型水稻OsMATL基因基因组核苷酸序列和氨基酸序列分别如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示。本发明中的水稻单倍体诱导系可以在不同水稻品系中作为父本诱导母本产生单倍体。数据显示，在不同品系中单倍体诱导率可以达到或超过5％。

下面通过若干附图和实施例，对本发明所涉及的技术方案做进一步的详细描述。

附图说明

图1为载体23843图谱。

图2为载体23844图谱。

图3为载体23845图谱。

图4为载体23846图谱。

图5为E0水稻编辑效率统计。

图6为E0水稻编辑植株自交结实率。

图7为E1自交群体中单倍体和二倍体的表现差异。

图8为E1水稻单倍体诱导系049A在2个不同水稻品系中诱导单倍体的效率。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

实施例1.材料与方法

材料

植物材料：籼稻自交系IR58025B，RL73，TB12，MN024529。

方法

植物生长条件：本发明中所涉及的水稻植株在温室中的培养条件为11小时光照(32摄氏度)13小时黑暗(22摄氏度)，温室湿度控制在60～80％。

引物和探针：本发明中使用的克隆测序扩增引物以及实时荧光定量PCR引物和探针均利用美国Applied Biosystem公司的Primer Express3.0软件设计，并由Invitrogen公司合成，序列信息见序列表(SEQ ID NO:9-33)。

实施例2.CRISPR/Cas9编辑载体的构建

改进版的Cas9在羧基端融合了核定位信号(cBCas9Nu-02)，并根据玉米中表达模式进行密码子优化，这种优化形式经过测试同样适用于水稻，以花椰菜花叶病毒35S启动子驱动Cas9表达。改进并优化的Cas9的核酸序列和氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1和SEQ IDNO:2所示。籼稻自交系IR58025B中OsMATL基因序列由内部基因组测序数据获得，并经过再次克隆测序验证。OsMATL基因的编辑位点设计基于两种方案，一种是在靠近基因末端的位置(4号外显子区域)产生移码突变以产生与玉米天然单倍体诱导系中类似的突变类型，另一种方案是在尽量靠近基因前端的位置(1号外显子区域)产生突变造成完全基因敲除的效果。引导RNA选择NGG上游临近的20个核苷酸，将核心12个核苷酸序列(紧邻NGG的12个核苷酸)连同NGG共15个核苷酸在内部数据库中进行BLAST分析，兼顾已有基因组信息的多个水稻基因组，包括籼稻和粳稻，确保在水稻基因组中只有唯一的精确匹配。同样的序列分别设计了单组分导向RNA和双组分导向RNA，分别用水稻U3和U6启动子驱动引导RNA和骨架RNA表达。单组分导向RNA指将crRNA和tracrRNA通过一小段核苷酸序列连接成为一个整体分子，双组分导向RNA指仍然保留crRNA和tracrRNA两个分子分离的结构，但是根据原始的crRNA和tracrRNA结构通过优化核苷酸序列增强二者的结合能力。玉米泛素启动子Ubi驱动的磷酸甘露糖异构酶(PMI)作为转基因筛选标记。最终选定的引导RNA及其单组分或双组分骨架由GenScript公司(www.genscript.com)提供全序列合成。构建载体及鉴定的一般方法为本领域技术人员所熟知。具体序列信息参见序列表(其中crRNA的骨架序列和tracrRNA的序列分别如SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示；并且通过将SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6与SEQ IDNO:7直接相连就得到完整的crRNA的序列)。载体图谱见附图1-4。

最后选定的由引导RNA所靶向的靶位点序列如下:

载体23843/23844(靶向1号外显子):TGCAGTCGAAGTAATCGGCG(SEQ ID NO:5)

载体23845/23846(靶向4号外显子):CGAGACCGGCAGGTACGTCG(SEQ ID NO:6)。

按照这样的方式，获得了4种编辑载体，即载体23843、23844、23845和23846。在这些载体中，载体23843和23844靶向1号外显子，但是载体23843涉及单组分导向RNA和载体23844涉及双组分导向RNA；载体23845和23846靶向4号外显子，但是载体23845涉及单组分导向RNA和载体23846涉及双组分导向RNA。

实施例3.水稻IR58025B的遗传转化

将构建好的编辑载体转化农杆菌EHA101并做鉴定，方法为本领域技术人员所熟知。由籼稻品种IR58025B种子诱导而来的胚性愈伤组织，与含有编辑载体的农杆菌EHA101共同孵育，经过筛选再生等一系列步骤完成遗传转化。具体的流程包括，水稻愈伤组织与农杆菌共培养3天后，将愈伤组织转移至含有300毫克每升Timentin的恢复培养基上恢复培养4～5天，之后将愈伤组织转移至含有300毫克每升Timentin的筛选培养基上筛选4周，然后将抗性愈伤转移至再生培养基上培养4周，最后将再生水稻小苗转移至无筛选的生根培养基上继续培养10天。水稻转化过程更详细的方法及各种培养基成分可参考Gui2014。

水稻愈伤和植株的生长条件如下：愈伤诱导25天，愈伤预培养7天，恢复培养5天，筛选培养28天，以上所有处理均在暗室进行；再生培养28天，生根培养10天在6000lux光照条件下，光周期为16小时光照8小时黑暗。温度始终控制在30摄氏度。

实施例4.OsMATL基因编辑水稻E0转化事件的筛选和鉴定

经过遗传转化直接产生的转化事件为E0代编辑植株，其自交产生的后代为E1代，以后世代依次类推。在生根过程中对小苗取样进行第一次转基因检测。植物基因组DNA的提取采用Promega植物基因组提取试剂盒(货号：FF3761)，每株植物取约10～20mg的叶片放入含有钢珠的96孔深孔板中，在-80℃超低温冰箱中放置30分钟以上，然后机械震荡破碎。具体提取操作步骤详见试剂盒说明书。提取的DNA溶于100微升双蒸水中。DNA样品用高通量实时荧光定量PCR(TaqMan)方法进行检测(具体操作参见TaqMan实验手册)，同时检测突变位点的情况和转基因拷贝数的情况，低拷贝的转基因植株，并且至少1条染色体发生突变的植株为候选编辑植株，送至温室进一步培养，鉴定繁种。在植株恢复正常生长后一段时间，重新取样用二次TaqMan进行编辑位点确认。经过TaqMan确认含有目标区域突变的植株进一步用PCR测序进行基因型分析，确定具体的突变类型。具体的，在靶位点上下游约300bp的位置设计一对PCR扩增引物，扩增目标区域跨越切割位点，使用高保真DNA聚合酶KOD-PLUS-Neo(TOYOBO)进行扩增，扩增片段切胶回收后克隆到pEASY(pEASY-Blunt Zero Cloning Kit,Transgen)载体上并转化大肠杆菌。具体操作步骤参考产品说明。随机挑选10个独立的大肠杆菌菌落进行测序(Life Technologies)。测序结果在Vector NTI中与参考序列进行比较，确定突变类型。如果10个克隆中有测序失败的情况则重新挑选克隆加测反应。如果所有克隆测序结果一致且与野生型序列不同，则该植株为纯合型编辑植株；如果测序克隆中包含一种突变类型和野生型，则该植株为杂合型编辑植株；如果测序克隆中包含两种突变类型且无野生型，则该植株为双等位基因型编辑植株；如果测序克隆中包含三种及以上突变类型或野生型，则该植株为嵌合型编辑植株。最终选出的纯合型或双等位基因型编辑植株作为进一步实验的材料。通过以上步骤得出转化效率(即转基因阳性率)平均约为40％，单组分系统编辑效率平均约为80％，双组分系统编辑效率平均约为15％。平均纯合型编辑植株比例约为36％。TaqMan和PCR测序引物具体序列见序列表。各载体最终E0编辑植株突变情况统计见附图5。

扩增引物列表:

Exon1-F:GCGTTCCTGCAAATCACAGTGACTA(SEQ ID NO:9)

Exon1-R:GATCGAAGAGAGGAGATCGAATTCG(SEQ ID NO:10)

Exon4-F:TAAGTTCCTGGTGCTGTCCGTGG(SEQ ID NO:11)

Exon4-R:TACAGTTACTAACGCTTGCACGCCA(SEQ ID NO:12)。

实施例5.E1水稻编辑植株的基因型及表型鉴定

来自于4个载体的100多个独立E0转化事件在温室中进行自交繁种。除少数个体外，大部分收获到500～1500粒E1种子。在E1种子收获时，对E0编辑植株和同期种植的野生型IR58025B植株进行结实率分析。将主分蘖剪下，单独统计主分蘖上饱满籽粒和空壳的数量，用以下公式计算结实率：

结实率＝饱满籽粒数量/(饱满籽粒数量+空壳数量)×100％。

通过统计不同载体E0编辑植株的结实率和编辑类型，发现在所有4个载体中，不含有野生型等位基因的植株结实率都显著低于野生型IR58025B(见附图6)。

E1水稻编辑植株的观察表型主要关注已知的与单倍体诱导系相关联的形状，如结实率，同时兼顾基本的农艺性状，如株高、分蘖数、叶长叶宽。株高在灌浆期进行测量，测量地上部分高度，从土壤表层到主茎上最高的穗子的自然距离。每个编辑事件随机取5棵植物用于测量株高和分蘖数，同时每棵植物随机取3片完全展开的真叶统计叶长度和叶宽度。统计发现所有E1代自交群体中分离出单倍体与群体中的二倍体均存在显著差异，株高、叶长叶宽均更下，分蘖数更少(见附图7)。

花粉活力通过碘化钾染色和萌发实验进行检测。收集上午9点左右自然开裂的花药释放出的新鲜花粉，加入碘化钾染色液，室温15分钟后在显微镜下观察花粉染色情况，统计被染色花粉的比例。在萌发实验中，2毫升花粉萌发液和新鲜花粉在培养皿中孵育，避光保湿，室温5至30分钟，然后在显微镜下观察花粉萌发情况并统计萌发率。统计发现E1编辑植株的花粉与野生型IR58025B的花粉在活力和萌发率上均没有明显差异。

每个独立编辑事件播种150～300粒种子，除去未萌发的种子，所有成活的植株均取样做倍性检测。植株体细胞倍性检测由北京市农林科学院蔬菜中心提供服务，采用BDFACSCalibur流式细胞仪。检测样品为四叶期新鲜植物叶片，样品制备参照检测仪器供应商Sysmex-Partec提供的标准样品制备流程。制备好的样品用Partec试剂染色，通过精确测量数以万计的细胞核的DNA含量，与野生型二倍体样品进行比较，确定待检测样品的倍性。结果用BD CellQuest Pro软件进行分析。每个转基因事件至少保证检测100株以上E1植株用以计算单倍体比例。E0自交单倍体产生频率平均约为6％。

E0单倍体诱导率＝E1群体中单倍体数量/E1群体数量×100％。

单倍体诱导系127A和003D用载体23843来获得，单倍体诱导系068A用载体23844来获得，单倍体诱导系049A和011A用载体23845来获得，和单倍体诱导系288A用载体23846来获得。与这些单倍体诱导系中相同的基因突变既可以由单组分载体获得也可以由靶位点相同的双组分载体获得，其诱导效果视为等同。这些单倍体诱导系中的突变型OsMATL基因的核酸序列如SEQ ID NO:34～41中任一个所示。

实施例6.水稻单倍体诱导系与不同品系的杂交

种植E1水稻编辑种子作为父本，苗期用前述TaqMan方法确定基因型，只保留不含有转基因成分的纯合突变植株用于杂交实验。播种不同批次的母本水稻，包括籼稻自交系RL73、TB12和MN024529，选择花期适合于杂交的批次用于实验。具体的，实验前一天把即将开花的母本进行修剪准备，只保留第二天会开花的分蘖，将多余的分蘖和会遮挡小花的叶片剪掉。实验当天8点开始处理母本，将颖壳已打开花药已伸出的小花去除，43摄氏度水浴5分钟，灭活花粉并促使颖壳打开。将处理完的母本与即将散粉的父本靠近，保证父本穗位高于母本，用纸袋将父母本分蘖包在一起，等到父本自然散粉，抖动父本让尽可能多的母本接受花粉。母本可以在连续3天内保持柱头活力，在接触花粉的情况下持续授粉。3天过后将母本转移至别处直至收获F1种子。特别的，对于细胞质型雄性不育系TB12，仅需温水浴促使颖壳打开，其余操作相同。更特别的，对于自交系RL73，由于其材料特殊性，高于43摄氏度的水温会严重影响雌蕊活性，而低于43摄氏度的水温不足以对花粉充分灭活，所以在42.5摄氏度的水浴处理之后，需要人工再将花药及未打开的小花去除，然后用于杂交。

实施例7.水稻单倍体诱导系在不同品系中诱导单倍体效果的检测

每个杂交组合播种150～300粒F1种子，除去未萌发的种子，所有成活的植株均取样做倍性检测。检测结果表明，来源于载体23845的单倍体诱导系049A在TB12中的单倍体诱导率可以达到5％，而在另两个测试品种中诱导率偏低，说明单倍体诱导系的诱导率依赖于基因型。水稻单倍体诱导系与不同水稻品系杂交的单倍体诱导率见附图8。

单倍体诱导率＝F1群体中单倍体数量/F1群体数量×100％。

以上结果表明，本发明了首次提供了应用CRISPR/Cas9技术在水稻中创制单倍体诱导系的方法，创制了若干水稻单倍体诱导系，并且可以在不同水稻品系中诱导单倍体产生，为在水稻中大规模生产单倍体提供了一种新的选择。

最后应予说明，尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，本领域技术人员将会理解，根据已经公开的所有教导，可以对那些细节进行各种修改或等同替换，这些改变均在本发明的保护范围之内。本发明的全部范围由所附权利要求及其任何等同物给出。

参考文献

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序列表

SEQ ID NO:1

改进并优化的Cas9核酸序列：

ATGGACAAGAAGTACAGCATCGGCCTGGACATCGGCACCAACAGCGTGGGCTGGGCCGTGATCACCGACGAGTACAAGGTGCCGAGCAAGAAGTTCAAGGTGCTGGGCAACACCGACAGGCACAGCATCAAGAAGAACCTGATCGGCGCCCTGCTGTTCGACAGCGGCGAGACCGCCGAGGCCACCAGGCTGAAGAGGACCGCCAGGAGGAGGTACACCAGGAGGAAGAACAGGATCTGCTACCTGCAGGAGATCTTCAGCAACGAGATGGCCAAGGTGGACGACAGCTTCTTCCACAGGCTGGAGGAGAGCTTCCTGGTGGAGGAGGACAAGAAGCACGAGAGGCACCCGATCTTCGGCAACATCGTGGACGAGGTGGCCTACCACGAGAAGTACCCGACCATCTACCACCTGAGGAAGAAGCTGGTGGACAGCACCGACAAGGCCGACCTGAGGCTGATCTACCTGGCCCTGGCCCACATGATCAAGTTCAGGGGCCACTTCCTGATCGAGGGCGACCTGAACCCGGACAACAGCGACGTGGACAAGCTGTTCATCCAGCTGGTGCAGACCTACAACCAGCTGTTCGAGGAGAACCCGATCAACGCCAGCGGCGTGGACGCCAAGGCCATCCTGAGCGCCAGGCTGAGCAAGAGCAGGAGGCTGGAGAACCTGATCGCCCAGCTGCCGGGCGAGAAGAAGAACGGCCTGTTCGGCAACCTGATCGCCCTGAGCCTGGGCCTGACCCCGAACTTCAAGAGCAACTTCGACCTGGCCGAGGACGCCAAGCTGCAGCTGAGCAAGGACACCTACGACGACGACCTGGACAACCTGCTGGCCCAGATCGGCGACCAGTACGCCGACCTGTTCCTGGCCGCCAAGAACCTGAGCGACGCCATCCTGCTGAGCGACATCCTGAGGGTGAACACCGAGATCACCAAGGCCCCGCTGAGCGCCAGCATGATCAAGAGGTACGACGAGCACCACCAGGACCTGACCCTGCTGAAGGCCCTGGTGAGGCAGCAGCTGCCGGAGAAGTACAAGGAGATCTTCTTCGACCAGAGCAAGAACGGCTACGCCGGCTACATCGACGGCGGCGCCAGCCAGGAGGAGTTCTACAAGTTCATCAAGCCGATCCTGGAGAAGATGGACGGCACCGAGGAGCTGCTGGTGAAGCTGAACAGGGAGGACCTGCTGAGGAAGCAGAGGACCTTCGACAACGGCAGCATCCCGCACCAGATCCACCTGGGCGAGCTGCACGCCATCCTGAGGAGGCAGGAGGACTTCTACCCGTTCCTGAAGGACAACAGGGAGAAGATCGAGAAGATCCTGACCTTCCGCATCCCGTACTACGTGGGCCCGCTGGCCAGGGGCAACAGCAGGTTCGCCTGGATGACCAGGAAGAGCGAGGAGACCATCACCCCGTGGAACTTCGAGGAGGTGGTGGACAAGGGCGCCAGCGCCCAGAGCTTCATCGAGAGGATGACCAACTTCGACAAGAACCTGCCGAACGAGAAGGTGCTGCCGAAGCACAGCCTGCTGTACGAGTACTTCACCGTGTACAACGAGCTGACCAAGGTGAAGTACGTGACCGAGGGCATGAGGAAGCCGGCCTTCCTGAGCGGCGAGCAGAAGAAGGCCATCGTGGACCTGCTGTTCAAGACCAACAGGAAGGTGACCGTGAAGCAGCTGAAGGAGGACTACTTCAAGAAGATCGAGTGCTTCGACAGCGTGGAGATCAGCGGCGTGGAGGACAGGTTCAACGCCAGCCTGGGCACCTACCACGACCTGCTGAAGATCATCAAGGACAAGGACTTCCTGGACAACGAGGAGAACGAGGACATCCTGGAGGACATCGTGCTGACCCTGACCCTGTTCGAGGACAGGGAGATGATCGAGGAGAGGCTGAAGACCTACGCCCACCTGTTCGACGACAAGGTGATGAAGCAGCTGAAGAGGAGGAGGTACACCGGCTGGGGCAGGCTGAGCAGGAAGCTGATCAACGGCATCAGGGACAAGCAGAGCGGCAAGACCATCCTGGACTTCCTGAAGAGCGACGGCTTCGCCAACAGGAACTTCATGCAGCTGATCCACGACGACAGCCTGACCTTCAAGGAGGACATCCAGAAGGCCCAGGTGAGCGGCCAGGGCGACAGCCTGCACGAGCACATCGCCAACCTGGCCGGCAGCCCGGCCATCAAGAAGGGCATCCTGCAGACCGTGAAGGTGGTGGACGAGCTGGTGAAGGTGATGGGCAGGCACAAGCCGGAGAACATCGTGATCGAGATGGCCAGGGAGAACCAGACCACCCAGAAGGGCCAGAAGAACAGCAGGGAGAGGATGAAGAGGATCGAGGAGGGCATCAAGGAGCTGGGCAGCCAGATCCTGAAGGAGCACCCGGTGGAGAACACCCAGCTGCAGAACGAGAAGCTGTACCTGTACTACCTGCAGAACGGCAGGGACATGTACGTGGACCAGGAGCTGGACATCAACAGGCTGAGCGACTACGACGTGGACCACATCGTGCCGCAGAGCTTCCTGAAGGACGACAGCATCGACAACAAGGTGCTGACCAGGAGCGACAAGAACAGGGGCAAGAGCGACAACGTGCCGAGCGAGGAGGTGGTGAAGAAGATGAAAAACTACTGGAGGCAGCTGCTGAACGCCAAGCTGATCACCCAGAGGAAGTTCGACAACCTGACCAAGGCCGAGAGGGGCGGCCTGAGCGAGCTGGACAAGGCCGGCTTCATTAAAAGGCAGCTGGTGGAGACCAGGCAGATCACCAAGCACGTGGCCCAGATCCTGGACAGCAGGATGAACACCAAGTACGACGAGAACGACAAGCTGATCAGGGAGGTGAAGGTGATCACCCTGAAGAGCAAGCTGGTGAGCGACTTCAGGAAGGACTTCCAGTTCTACAAGGTGAGGGAGATCAATAATTACCACCACGCCCACGACGCCTACCTGAACGCCGTGGTGGGCACCGCCCTGATTAAAAAGTACCCGAAGCTGGAGAGCGAGTTCGTGTACGGCGACTACAAGGTGTACGACGTGAGGAAGATGATCGCCAAGAGCGAGCAGGAGATCGGCAAGGCCACCGCCAAGTACTTCTTCTACAGCAACATCATGAACTTCTTCAAGACCGAGATCACCCTGGCCAACGGCGAGATCAGGAAGAGGCCGCTGATCGAGACCAACGGCGAGACCGGCGAGATCGTGTGGGACAAGGGCAGGGACTTCGCCACCGTGAGGAAGGTGCTGTCCATGCCGCAGGTGAACATCGTGAAGAAGACCGAGGTGCAGACCGGCGGCTTCAGCAAGGAGAGCATCCTGCCGAAGAGGAACAGCGACAAGCTGATCGCCAGGAAGAAGGACTGGGATCCGAAGAAGTACGGCGGCTTCGACAGCCCGACCGTGGCCTACAGCGTGCTGGTGGTGGCCAAGGTGGAGAAGGGCAAGAGCAAGAAGCTGAAGAGCGTGAAGGAGCTGGTGGGCATCACCATCATGGAGAGGAGCAGCTTCGAGAAGAACCCAGTGGACTTCCTGGAGGCCAAGGGCTACAAGGAGGTGAAGAAGGACCTGATCATTAAACTGCCGAAGTACAGCCTGTTCGAGCTGGAGAACGGCAGGAAGAGGATGCTGGCCAGCGCCGGCGAGCTGCAGAAGGGCAACGAGCTGGCCCTGCCGAGCAAGTACGTGAACTTCCTGTACCTGGCCAGCCACTACGAGAAGCTGAAGGGCAGCCCGGAGGACAACGAGCAGAAGCAGCTGTTCGTGGAGCAGCACAAGCACTACCTGGACGAGATCATCGAGCAGATCAGCGAGTTCAGCAAGAGGGTGATCCTGGCCGACGCCAACCTGGACAAGGTGCTGAGCGCCTACAACAAGCACAGGGACAAGCCGATCAGGGAGCAGGCCGAGAACATCATCCACCTGTTCACCCTGACCAACCTGGGCGCCCCGGCCGCCTTCAAGTACTTCGACACCACCATCGACAGGAAGAGGTACACCAGCACCAAGGAGGTGCTGGACGCCACCCTGATCCACCAGAGCATCACCGGCCTGTACGAGACCAGGATCGACCTGAGCCAGCTGGGCGGCGACAGCAGCCCGCCGAAGAAGAAGAGGAAGGTGAGCTGGAAGGACGCCAGCGGCTGGAGCAGGATGTGA

SEQ ID NO:2

改进并优化的Cas9氨基酸序列：

MDKKYSIGLDIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDHIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELVGITIMERSSFEKNPVDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGDSSPPKKKRKVSWKDASGWSRM

SEQ ID NO:3

水稻OsMATL基因基因组核苷酸序列：

GGGTGAGTGACTGGAGAGCCGTTGGTTGGGCACTTGCGGTTGATCTGGTCCGTTGCTTCAGCTCAGAGCTCTCACCCGTCTCTTCCACCAAAGCCGTGTGCCCGTGTGGGTGTGGGTGTGCGCGCACACTGCGCTCGAGCGCCCGCCAAAAATAGTTCGCCGTAGCTCAAAAACGCTCACGCCGCGCGTTCCTGCAAATCACAGTGACTAGTGACAAACGATCGATCGATCCCTCCATCCACAAACCCTCCTCGATCTCATCTTCCTTCGTCTCGTCAATGGCGGCGAGCTACTCGTGCCGGCGGACATGCGAGGCGTGCAGCACGAGGGCGATGGCCGGGTGCGTGGTGGGCGAGCCGGCGTCGGCGCCGGGGCAGCGGGTGACGTTGCTGGCGATCGACGGCGGCGGCATCAGGGGCCTCATCCCGGGCACCATCCTCGCCTTCCTCGAGGCCAGGCTGCAGGAGCTGGATGGCCCCGACGCGCGCCTCGCCGATTACTTCGACTGCATCGCCGGGACCAGCACCGGCGGCCTCATCACCGCCATGCTCGCCGCGCCCGGCGACCACGGCCGCCCGCTCTTCGCCGCCAGCGACATCAACCGCTTCTACCTCGACAACGGCCCACTCATCTTCCCACAAAAGTAACTGATCACCTCGAATTCGATCTCCTCTCTTCGATCTCTGCATTATTTGATTTGATTGGGGATTGTGGGCGGCGTGGCGTGGCGTCCAGGAGGTGCGGCATGGCGGCGGCCATGGCGGCGCTGACGAGGCCGAGGTACAACGGCAAGTACCTGCAGGGGAAGATCAGGAAGATGCTGGGCGAGACGAGGGTGCGCGACACGCTGACGAACGTCGTCATCCCCACGTTCGACGTCAGGCTGCTCCAGCCAACCATCTTCTCCACATACGACGTGCGTGCGTTGATTCCATCCGCATTGGCGTTGGAATCAGCTGATTGTTTGATTGATCGAACAATTGATCGGTTAAAATTTTGCAGGCGAAGAGCATGCCGCTCAAGAACGCGCTCCTCTCCGACATCTGCATCAGCACATCCGCGGCGCCGACCTACCTCCCCGCGCACTGCTTCCAGACCACCGACGACGCCACCGGCAAGGTCCGCGAGTTCGACCTCATCGACGGCGGCGTCGCCGCCAACAACCCGGTAACTAATCAATCAAGCAATCCATCAAACGAAGATCCACATGTGCATTCCTGTGGTACAAATGCTGATCGATCGATGGATGGATCGATTTTCGCGAGAACGTACAGACGATGGTGGCCATGACGCAGATCACCAAGAAGATAATGGTGAAGGACAAGGAGGAGCTGTACCCGGTAAAGCCGTCGGACTGCGGTAAGTTCCTGGTGCTGTCCGTGGGCACCGGGTCGACGTCGGACCAGGGGATGTACACGGCGAGGCAGTGCTCGCGGTGGGGGATCGTCCGGTGGCTGCGCAACAAGGGGATGGCGCCCATCATCGACATCTTCATGGCGGCCAGCTCCGACCTCGTCGACATCCACGCCGCCGTCATGTTCCAGTCGCTGCACAGCGACGGCGACTACCTCCGCATCCAGGACAACACGCTCCACGGCGACGCCGCCACGGTGGACGCCGCCACCAGGGACAACATGCGGGCGCTCGTCGGGATCGGCGAGCGGATGCTGGCGCAGCGGGTGTCGAGGGTCAACGTCGAGACCGGCAGGTACGTCGAGGTGCCCGGCGCCGGCAGCAACGCCGACGCGCTGAGGGGCTTCGCCAGGCAGCTCTCCGAGGAGAGGAGGGCGAGGCTAGGTCGGCGAAACGCCTGCGGCGGCGGCGGCGAAGGAGAGCCCAGCGGCGTGGCGTGCAAGCGTTAGTAACTGTACACGCATCATGCTGACGCGATCTTTTTTATTTTTCTTTTTTTTTTTTTACCTTTCTAGCGGACATGGGGAATAACAAGACGTGACAGTAGTGCAATCGGTTTGTAACGTGCGTATACCAACATTGATCCATTTCTTCATCACAGTTTCAGTTCATCAGTATCCGCGCAGCACAAACACGTACACGTACGTACAGTCGTACACAACGTACAAAAATGGATTATCTATAAATATGCCGCCATTTTTTTTAAAATAAAACGGTAAAATCATTTGGCATGTATTTATTTACACTATAAACTCTCACATGTTTTTATGGCAACTTTATATATTTACGCTGTTAAATCAAAAGTGATTGAAATAGGGCTAAAAGCAGCCATTTTTTTAAAGCAGAACCAATAGCAACACATAGGATAACATAGTTAATATTTCAAATTAAAAATTCACATTATATATAT

SEQ ID NO:4

水稻OsMATL基因氨基酸序列：

MAASYSCRRTCEACSTRAMAGCVVGEPASAPGQRVTLLAIDGGGIRGLIPGTILAFLEARLQELDGPDARLADYFDCIAGTSTGGLITAMLAAPGDHGRPLFAASDINRFYLDNGPLIFPQKRCGMAAAMAALTRPRYNGKYLQGKIRKMLGETRVRDTLTNVVIPTFDVRLLQPTIFSTYDAKSMPLKNALLSDICISTSAAPTYLPAHCFQTTDDATGKVREFDLIDGGVAANNPTMVAMTQITKKIMVKDKEELYPVKPSDCGKFLVLSVGTGSTSDQGMYTARQCSRWGIVRWLRNKGMAPIIDIFMAASSDLVDIHAAVMFQSLHSDGDYLRIQDNTLHGDAATVDAATRDNMRALVGIGERMLAQRVSRVNVETGRYVEVPGAGSNADALRGFARQLSEERRARLGRRNACGGGGEGEPSGVACKR

靶位点序列:

SEQ ID NO:5

载体23843/23844(靶向1号外显子):TGCAGTCGAAGTAATCGGCG

SEQ ID NO:6

载体23845/23846(靶向4号外显子):CGAGACCGGCAGGTACGTCG

双组分导向RNA：

SEQ ID NO:7

crRNA的骨架序列：GTTTTAGAGCTATGCTGTTTTGAATGGTCCCAAAAC

SEQ ID NO:8

tracrRNA的序列：

GGAACCATTCAAAACAGCATAGCAAGTTAAAATAAGGCTAGTCCGTTATCAACTTGAAAAAGTGGCACCGAGTCGGTGC

克隆测序扩增引物序列:

SEQ ID NO:9

Exon1-F:GCGTTCCTGCAAATCACAGTGACTA

SEQ ID NO:10

Exon1-R:GATCGAAGAGAGGAGATCGAATTCG

SEQ ID NO:11

Exon4-F:TAAGTTCCTGGTGCTGTCCGTGG

SEQ ID NO:12

Exon4-R:TACAGTTACTAACGCTTGCACGCCA

实时荧光定量PCR的引物和探针序列：

SEQ ID NO:13

LB-F:GGCACAAAATCACCACTCGAT

SEQ ID NO:14

LB-R:CCGTGCAGTCGATGATAAGCT

SEQ ID NO:15

LB-probe:CAGGCAGCCCATCAGAATTAATTCTCATGTT

SEQ ID NO:16

RB-F:AGGGATTTTGGTCATGAGATTATCA

SEQ ID NO:17

RB-R:GCATGCCAACCACAGGAATTA

SEQ ID NO:18

RB-probe:AAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTGATCCGGA

SEQ ID NO:19

Spec-F:TTGTTCACTACGTGAAAGGCGA

SEQ ID NO:20

Spec-R:GGGTACGGAGATCCACTAGAGCT

SEQ ID NO:21

Spec-probe:ACCAAAGTAGTCGGCAAA

SEQ ID NO:22

PMI-F:CCCTATCCCCGTTGACGAC

SEQ ID NO:23

PMI-R:CTGATAGTGGTCTCCTTGTCGCT

SEQ ID NO:24

PMI-probe:TTCGCCTTCAGCCTGCACGACCT

SEQ ID NO:25

Cas9-F:TTGTGCTGCTCCACGAACA

SEQ ID NO:26

Cas9-R:GCCAGCCACTACGAGAAGCT

SEQ ID NO:27

Cas9-probe:CTGCTTCTGCTCGTTGTCCTCCGG

SEQ ID NO:28

OsMATL-1-F:TGCAGGAGCTGGATGGCC

SEQ ID NO:29

OsMATL-1-R:GTGCTGGTCCCGGCG

SEQ ID NO:30

OsMATL-1-probe:CAGTCGAAGTAATCGGCGAG

SEQ ID NO:31

OsMATL-4-F:CGCAGCGGGTGTCGA

SEQ ID NO:32

OsMATL-4-R:CGTCGGCGTTGCTGC

SEQ ID NO:33

OsMATL-4-probe:CACCTCGACGTACCTG

部分诱导系中OsMATL基因序列:

SEQ ID NO:34

OsMATL-049A-1突变型核酸序列:

GGGTGAGTGACTGGAGAGCCGTTGGTTGGGCACTTGCGGTTGATCTGGTCCGTTGCTTCAGCTCAGAGCTCTCACCCGTCTCTTCCACCAAAGCCGTGTGCCCGTGTGGGTGTGGGTGTGCGCGCACACTGCGCTCGAGCGCCCGCCAAAAATAGTTCGCCGTAGCTCAAAAACGCTCACGCCGCGCGTTCCTGCAAATCACAGTGACTAGTGACAAACGATCGATCGATCCCTCCATCCACAAACCCTCCTCGATCTCATCTTCCTTCGTCTCGTCAATGGCGGCGAGCTACTCGTGCCGGCGGACATGCGAGGCGTGCAGCACGAGGGCGATGGCCGGGTGCGTGGTGGGCGAGCCGGCGTCGGCGCCGGGGCAGCGGGTGACGTTGCTGGCGATCGACGGCGGCGGCATCAGGGGCCTCATCCCGGGCACCATCCTCGCCTTCCTCGAGGCCAGGCTGCAGGAGCTGGATGGCCCCGACGCGCGCCTCGCCGATTACTTCGACTGCATCGCCGGGACCAGCACCGGCGGCCTCATCACCGCCATGCTCGCCGCGCCCGGCGACCACGGCCGCCCGCTCTTCGCCGCCAGCGACATCAACCGCTTCTACCTCGACAACGGCCCACTCATCTTCCCACAAAAGTAACTGATCACCTCGAATTCGATCTCCTCTCTTCGATCTCTGCATTATTTGATTTGATTGGGGATTGTGGGCGGCGTGGCGTGGCGTCCAGGAGGTGCGGCATGGCGGCGGCCATGGCGGCGCTGACGAGGCCGAGGTACAACGGCAAGTACCTGCAGGGGAAGATCAGGAAGATGCTGGGCGAGACGAGGGTGCGCGACACGCTGACGAACGTCGTCATCCCCACGTTCGACGTCAGGCTGCTCCAGCCAACCATCTTCTCCACATACGACGTGCGTGCGTTGATTCCATCCGCATTGGCGTTGGAATCAGCTGATTGTTTGATTGATCGAACAATTGATCGGTTAAAATTTTGCAGGCGAAGAGCATGCCGCTCAAGAACGCGCTCCTCTCCGACATCTGCATCAGCACATCCGCGGCGCCGACCTACCTCCCCGCGCACTGCTTCCAGACCACCGACGACGCCACCGGCAAGGTCCGCGAGTTCGACCTCATCGACGGCGGCGTCGCCGCCAACAACCCGGTAACTAATCAATCAAGCAATCCATCAAACGAAGATCCACATGTGCATTCCTGTGGTACAAATGCTGATCGATCGATGGATGGATCGATTTTCGCGAGAACGTACAGACGATGGTGGCCATGACGCAGATCACCAAGAAGATAATGGTGAAGGACAAGGAGGAGCTGTACCCGGTAAAGCCGTCGGACTGCGGTAAGTTCCTGGTGCTGTCCGTGGGCACCGGGTCGACGTCGGACCAGGGGATGTACACGGCGAGGCAGTGCTCGCGGTGGGGGATCGTCCGGTGGCTGCGCAACAAGGGGATGGCGCCCATCATCGACATCTTCATGGCGGCCAGCTCCGACCTCGTCGACATCCACGCCGCCGTCATGTTCCAGTCGCTGCACAGCGACGGCGACTACCTCCGCATCCAGGACAACACGCTCCACGGCGACGCCGCCACGGTGGACGCCGCCACCAGGGACAACATGCGGGCGCTCGTCGGGATCGGCGAGCGGATGCTGGCGCAGCGGGTGTCGAGGGTCAACGTCGAGACCGGCAGGTACGATCGAGGTGCCCGGCGCCGGCAGCAACGCCGACGCGCTGAGGGGCTTCGCCAGGCAGCTCTCCGAGGAGAGGAGGGCGAGGCTAGGTCGGCGAAACGCCTGCGGCGGCGGCGGCGAAGGAGAGCCCAGCGGCGTGGCGTGCAAGCGTTAGTAACTGTACACGCATCATGCTGACGCGATCTTTTTTATTTTTCTTTTTTTTTTTTTACCTTTCTAGCGGACATGGGGAATAACAAGACGTGACAGTAGTGCAATCGGTTTGTAACGTGCGTATACCAACATTGATCCATTTCTTCATCACAGTTTCAGTTCATCAGTATCCGCGCAGCACAAACACGTACACGTACGTACAGTCGTACACAACGTACAAAAATGGATTATCTATAAATATGCCGCCATTTTTTTTAAAATAAAACGGTAAAATCATTTGGCATGTATTTATTTACACTATAAACTCTCACATGTTTTTATGGCAACTTTATATATTTACGCTGTTAAATCAAAAGTGATTGAAATAGGGCTAAAAGCAGCCATTTTTTTAAAGCAGAACCAATAGCAACACATAGGATAACATAGTTAATATTTCAAATTAAAAATTCACATTATATATAT

SEQ ID NO:35

OsMATL-049A-2突变型核酸序列:

GGGTGAGTGACTGGAGAGCCGTTGGTTGGGCACTTGCGGTTGATCTGGTCCGTTGCTTCAGCTCAGAGCTCTCACCCGTCTCTTCCACCAAAGCCGTGTGCCCGTGTGGGTGTGGGTGTGCGCGCACACTGCGCTCGAGCGCCCGCCAAAAATAGTTCGCCGTAGCTCAAAAACGCTCACGCCGCGCGTTCCTGCAAATCACAGTGACTAGTGACAAACGATCGATCGATCCCTCCATCCACAAACCCTCCTCGATCTCATCTTCCTTCGTCTCGTCAATGGCGGCGAGCTACTCGTGCCGGCGGACATGCGAGGCGTGCAGCACGAGGGCGATGGCCGGGTGCGTGGTGGGCGAGCCGGCGTCGGCGCCGGGGCAGCGGGTGACGTTGCTGGCGATCGACGGCGGCGGCATCAGGGGCCTCATCCCGGGCACCATCCTCGCCTTCCTCGAGGCCAGGCTGCAGGAGCTGGATGGCCCCGACGCGCGCCTCGCCGATTACTTCGACTGCATCGCCGGGACCAGCACCGGCGGCCTCATCACCGCCATGCTCGCCGCGCCCGGCGACCACGGCCGCCCGCTCTTCGCCGCCAGCGACATCAACCGCTTCTACCTCGACAACGGCCCACTCATCTTCCCACAAAAGTAACTGATCACCTCGAATTCGATCTCCTCTCTTCGATCTCTGCATTATTTGATTTGATTGGGGATTGTGGGCGGCGTGGCGTGGCGTCCAGGAGGTGCGGCATGGCGGCGGCCATGGCGGCGCTGACGAGGCCGAGGTACAACGGCAAGTACCTGCAGGGGAAGATCAGGAAGATGCTGGGCGAGACGAGGGTGCGCGACACGCTGACGAACGTCGTCATCCCCACGTTCGACGTCAGGCTGCTCCAGCCAACCATCTTCTCCACATACGACGTGCGTGCGTTGATTCCATCCGCATTGGCGTTGGAATCAGCTGATTGTTTGATTGATCGAACAATTGATCGGTTAAAATTTTGCAGGCGAAGAGCATGCCGCTCAAGAACGCGCTCCTCTCCGACATCTGCATCAGCACATCCGCGGCGCCGACCTACCTCCCCGCGCACTGCTTCCAGACCACCGACGACGCCACCGGCAAGGTCCGCGAGTTCGACCTCATCGACGGCGGCGTCGCCGCCAACAACCCGGTAACTAATCAATCAAGCAATCCATCAAACGAAGATCCACATGTGCATTCCTGTGGTACAAATGCTGATCGATCGATGGATGGATCGATTTTCGCGAGAACGTACAGACGATGGTGGCCATGACGCAGATCACCAAGAAGATAATGGTGAAGGACAAGGAGGAGCTGTACCCGGTAAAGCCGTCGGACTGCGGTAAGTTCCTGGTGCTGTCCGTGGGCACCGGGTCGACGTCGGACCAGGGGATGTACACGGCGAGGCAGTGCTCGCGGTGGGGGATCGTCCGGTGGCTGCGCAACAAGGGGATGGCGCCCATCATCGACATCTTCATGGCGGCCAGCTCCGACCTCGTCGACATCCACGCCGCCGTCATGTTCCAGTCGCTGCACAGCGACGGCGACTACCTCCGCATCCAGGACAACACGCTCCACGGCGACGCCGCCACGGTGGACGCCGCCACCAGGGACAACATGCGGGCGCTCGTCGGGATCGGCGAGCGGATGCTGGCGCAGCGGGTGTCGAGGGTCAACGTCGAGACCGGCAGGTACGCTCGAGGTGCCCGGCGCCGGCAGCAACGCCGACGCGCTGAGGGGCTTCGCCAGGCAGCTCTCCGAGGAGAGGAGGGCGAGGCTAGGTCGGCGAAACGCCTGCGGCGGCGGCGGCGAAGGAGAGCCCAGCGGCGTGGCGTGCAAGCGTTAGTAACTGTACACGCATCATGCTGACGCGATCTTTTTTATTTTTCTTTTTTTTTTTTTACCTTTCTAGCGGACATGGGGAATAACAAGACGTGACAGTAGTGCAATCGGTTTGTAACGTGCGTATACCAACATTGATCCATTTCTTCATCACAGTTTCAGTTCATCAGTATCCGCGCAGCACAAACACGTACACGTACGTACAGTCGTACACAACGTACAAAAATGGATTATCTATAAATATGCCGCCATTTTTTTTAAAATAAAACGGTAAAATCATTTGGCATGTATTTATTTACACTATAAACTCTCACATGTTTTTATGGCAACTTTATATATTTACGCTGTTAAATCAAAAGTGATTGAAATAGGGCTAAAAGCAGCCATTTTTTTAAAGCAGAACCAATAGCAACACATAGGATAACATAGTTAATATTTCAAATTAAAAATTCACATTATATATAT

SEQ ID NO:36

OsMATL-011A突变型核酸序列:

GGGTGAGTGACTGGAGAGCCGTTGGTTGGGCACTTGCGGTTGATCTGGTCCGTTGCTTCAGCTCAGAGCTCTCACCCGTCTCTTCCACCAAAGCCGTGTGCCCGTGTGGGTGTGGGTGTGCGCGCACACTGCGCTCGAGCGCCCGCCAAAAATAGTTCGCCGTAGCTCAAAAACGCTCACGCCGCGCGTTCCTGCAAATCACAGTGACTAGTGACAAACGATCGATCGATCCCTCCATCCACAAACCCTCCTCGATCTCATCTTCCTTCGTCTCGTCAATGGCGGCGAGCTACTCGTGCCGGCGGACATGCGAGGCGTGCAGCACGAGGGCGATGGCCGGGTGCGTGGTGGGCGAGCCGGCGTCGGCGCCGGGGCAGCGGGTGACGTTGCTGGCGATCGACGGCGGCGGCATCAGGGGCCTCATCCCGGGCACCATCCTCGCCTTCCTCGAGGCCAGGCTGCAGGAGCTGGATGGCCCCGACGCGCGCCTCGCCGATTACTTCGACTGCATCGCCGGGACCAGCACCGGCGGCCTCATCACCGCCATGCTCGCCGCGCCCGGCGACCACGGCCGCCCGCTCTTCGCCGCCAGCGACATCAACCGCTTCTACCTCGACAACGGCCCACTCATCTTCCCACAAAAGTAACTGATCACCTCGAATTCGATCTCCTCTCTTCGATCTCTGCATTATTTGATTTGATTGGGGATTGTGGGCGGCGTGGCGTGGCGTCCAGGAGGTGCGGCATGGCGGCGGCCATGGCGGCGCTGACGAGGCCGAGGTACAACGGCAAGTACCTGCAGGGGAAGATCAGGAAGATGCTGGGCGAGACGAGGGTGCGCGACACGCTGACGAACGTCGTCATCCCCACGTTCGACGTCAGGCTGCTCCAGCCAACCATCTTCTCCACATACGACGTGCGTGCGTTGATTCCATCCGCATTGGCGTTGGAATCAGCTGATTGTTTGATTGATCGAACAATTGATCGGTTAAAATTTTGCAGGCGAAGAGCATGCCGCTCAAGAACGCGCTCCTCTCCGACATCTGCATCAGCACATCCGCGGCGCCGACCTACCTCCCCGCGCACTGCTTCCAGACCACCGACGACGCCACCGGCAAGGTCCGCGAGTTCGACCTCATCGACGGCGGCGTCGCCGCCAACAACCCGGTAACTAATCAATCAAGCAATCCATCAAACGAAGATCCACATGTGCATTCCTGTGGTACAAATGCTGATCGATCGATGGATGGATCGATTTTCGCGAGAACGTACAGACGATGGTGGCCATGACGCAGATCACCAAGAAGATAATGGTGAAGGACAAGGAGGAGCTGTACCCGGTAAAGCCGTCGGACTGCGGTAAGTTCCTGGTGCTGTCCGTGGGCACCGGGTCGACGTCGGACCAGGGGATGTACACGGCGAGGCAGTGCTCGCGGTGGGGGATCGTCCGGTGGCTGCGCAACAAGGGGATGGCGCCCATCATCGACATCTTCATGGCGGCCAGCTCCGACCTCGTCGACATCCACGCCGCCGTCATGTTCCAGTCGCTGCACAGCGACGGCGACTACCTCCGCATCCAGGACAACACGCTCCACGGCGACGCCGCCACGGTGGACGCCGCCACCAGGGACAACATGCGGGCGCTCGTCGGGATCGGCGAGCGGATGCTGGCGCAGCGGGTGTCGAGGGTCAACGTCGAGACCGGCAGGTACTCGAGGTGCCCGGCGCCGGCAGCAACGCCGACGCGCTGAGGGGCTTCGCCAGGCAGCTCTCCGAGGAGAGGAGGGCGAGGCTAGGTCGGCGAAACGCCTGCGGCGGCGGCGGCGAAGGAGAGCCCAGCGGCGTGGCGTGCAAGCGTTAGTAACTGTACACGCATCATGCTGACGCGATCTTTTTTATTTTTCTTTTTTTTTTTTTACCTTTCTAGCGGACATGGGGAATAACAAGACGTGACAGTAGTGCAATCGGTTTGTAACGTGCGTATACCAACATTGATCCATTTCTTCATCACAGTTTCAGTTCATCAGTATCCGCGCAGCACAAACACGTACACGTACGTACAGTCGTACACAACGTACAAAAATGGATTATCTATAAATATGCCGCCATTTTTTTTAAAATAAAACGGTAAAATCATTTGGCATGTATTTATTTACACTATAAACTCTCACATGTTTTTATGGCAACTTTATATATTTACGCTGTTAAATCAAAAGTGATTGAAATAGGGCTAAAAGCAGCCATTTTTTTAAAGCAGAACCAATAGCAACACATAGGATAACATAGTTAATATTTCAAATTAAAAATTCACATTATATATAT

SEQ ID NO:37

OsMATL-127A-1突变型核酸序列:

GGGTGAGTGACTGGAGAGCCGTTGGTTGGGCACTTGCGGTTGATCTGGTCCGTTGCTTCAGCTCAGAGCTCTCACCCGTCTCTTCCACCAAAGCCGTGTGCCCGTGTGGGTGTGGGTGTGCGCGCACACTGCGCTCGAGCGCCCGCCAAAAATAGTTCGCCGTAGCTCAAAAACGCTCACGCCGCGCGTTCCTGCAAATCACAGTGACTAGTGACAAACGATCGATCGATCCCTCCATCCACAAACCCTCCTCGATCTCATCTTCCTTCGTCTCGTCAATGGCGGCGAGCTACTCGTGCCGGCGGACATGCGAGGCGTGCAGCACGAGGGCGATGGCCGGGTGCGTGGTGGGCGAGCCGGCGTCGGCGCCGGGGCAGCGGGTGACGTTGCTGGCGATCGACGGCGGCGGCATCAGGGGCCTCATCCCGGGCACCATCCTCGCCTTCCTCGAGGCCAGGCTGCAGGAGCTGGATGGCCCCGACCAGCACCGGCGGCCTCATCACCGCCATGCTCGCCGCGCCCGGCGACCACGGCCGCCCGCTCTTCGCCGCCAGCGACATCAACCGCTTCTACCTCGACAACGGCCCACTCATCTTCCCACAAAAGTAACTGATCACCTCGAATTCGATCTCCTCTCTTCGATCTCTGCATTATTTGATTTGATTGGGGATTGTGGGCGGCGTGGCGTGGCGTCCAGGAGGTGCGGCATGGCGGCGGCCATGGCGGCGCTGACGAGGCCGAGGTACAACGGCAAGTACCTGCAGGGGAAGATCAGGAAGATGCTGGGCGAGACGAGGGTGCGCGACACGCTGACGAACGTCGTCATCCCCACGTTCGACGTCAGGCTGCTCCAGCCAACCATCTTCTCCACATACGACGTGCGTGCGTTGATTCCATCCGCATTGGCGTTGGAATCAGCTGATTGTTTGATTGATCGAACAATTGATCGGTTAAAATTTTGCAGGCGAAGAGCATGCCGCTCAAGAACGCGCTCCTCTCCGACATCTGCATCAGCACATCCGCGGCGCCGACCTACCTCCCCGCGCACTGCTTCCAGACCACCGACGACGCCACCGGCAAGGTCCGCGAGTTCGACCTCATCGACGGCGGCGTCGCCGCCAACAACCCGGTAACTAATCAATCAAGCAATCCATCAAACGAAGATCCACATGTGCATTCCTGTGGTACAAATGCTGATCGATCGATGGATGGATCGATTTTCGCGAGAACGTACAGACGATGGTGGCCATGACGCAGATCACCAAGAAGATAATGGTGAAGGACAAGGAGGAGCTGTACCCGGTAAAGCCGTCGGACTGCGGTAAGTTCCTGGTGCTGTCCGTGGGCACCGGGTCGACGTCGGACCAGGGGATGTACACGGCGAGGCAGTGCTCGCGGTGGGGGATCGTCCGGTGGCTGCGCAACAAGGGGATGGCGCCCATCATCGACATCTTCATGGCGGCCAGCTCCGACCTCGTCGACATCCACGCCGCCGTCATGTTCCAGTCGCTGCACAGCGACGGCGACTACCTCCGCATCCAGGACAACACGCTCCACGGCGACGCCGCCACGGTGGACGCCGCCACCAGGGACAACATGCGGGCGCTCGTCGGGATCGGCGAGCGGATGCTGGCGCAGCGGGTGTCGAGGGTCAACGTCGAGACCGGCAGGTACGTCGAGGTGCCCGGCGCCGGCAGCAACGCCGACGCGCTGAGGGGCTTCGCCAGGCAGCTCTCCGAGGAGAGGAGGGCGAGGCTAGGTCGGCGAAACGCCTGCGGCGGCGGCGGCGAAGGAGAGCCCAGCGGCGTGGCGTGCAAGCGTTAGTAACTGTACACGCATCATGCTGACGCGATCTTTTTTATTTTTCTTTTTTTTTTTTTACCTTTCTAGCGGACATGGGGAATAACAAGACGTGACAGTAGTGCAATCGGTTTGTAACGTGCGTATACCAACATTGATCCATTTCTTCATCACAGTTTCAGTTCATCAGTATCCGCGCAGCACAAACACGTACACGTACGTACAGTCGTACACAACGTACAAAAATGGATTATCTATAAATATGCCGCCATTTTTTTTAAAATAAAACGGTAAAATCATTTGGCATGTATTTATTTACACTATAAACTCTCACATGTTTTTATGGCAACTTTATATATTTACGCTGTTAAATCAAAAGTGATTGAAATAGGGCTAAAAGCAGCCATTTTTTTAAAGCAGAACCAATAGCAACACATAGGATAACATAGTTAATATTTCAAATTAAAAATTCACATTATATATAT

SEQ ID NO:38

OsMATL-127A-2突变型核酸序列:

GGGTGAGTGACTGGAGAGCCGTTGGTTGGGCACTTGCGGTTGATCTGGTCCGTTGCTTCAGCTCAGAGCTCTCACCCGTCTCTTCCACCAAAGCCGTGTGCCCGTGTGGGTGTGGGTGTGCGCGCACACTGCGCTCGAGCGCCCGCCAAAAATAGTTCGCCGTAGCTCAAAAACGCTCACGCCGCGCGTTCCTGCAAATCACAGTGACTAGTGACAAACGATCGATCGATCCCTCCATCCACAAACCCTCCTCGATCTCATCTTCCTTCGTCTCGTCAATGGCGGCGAGCTACTCGTGCCGGCGGACATGCGAGGCGTGCAGCACGAGGGCGATGGCCGGGTGCGTGGTGGGCGAGCCGGCGTCGGCGCCGGGGCAGCGGGTGACGTTGCTGGCGATCGACGGCGGCGGCATCAGGGGCCTCATCCCGGGCACCATCCTCGCCTTCCTCGAGGCCAGGCTGCAGGAGCTGGATGGCCCCGACGCGCGCCTCGCTCTTCGACTGCATCGCCGGGACCAGCACCGGCGGCCTCATCACCGCCATGCTCGCCGCGCCCGGCGACCACGGCCGCCCGCTCTTCGCCGCCAGCGACATCAACCGCTTCTACCTCGACAACGGCCCACTCATCTTCCCACAAAAGTAACTGATCACCTCGAATTCGATCTCCTCTCTTCGATCTCTGCATTATTTGATTTGATTGGGGATTGTGGGCGGCGTGGCGTGGCGTCCAGGAGGTGCGGCATGGCGGCGGCCATGGCGGCGCTGACGAGGCCGAGGTACAACGGCAAGTACCTGCAGGGGAAGATCAGGAAGATGCTGGGCGAGACGAGGGTGCGCGACACGCTGACGAACGTCGTCATCCCCACGTTCGACGTCAGGCTGCTCCAGCCAACCATCTTCTCCACATACGACGTGCGTGCGTTGATTCCATCCGCATTGGCGTTGGAATCAGCTGATTGTTTGATTGATCGAACAATTGATCGGTTAAAATTTTGCAGGCGAAGAGCATGCCGCTCAAGAACGCGCTCCTCTCCGACATCTGCATCAGCACATCCGCGGCGCCGACCTACCTCCCCGCGCACTGCTTCCAGACCACCGACGACGCCACCGGCAAGGTCCGCGAGTTCGACCTCATCGACGGCGGCGTCGCCGCCAACAACCCGGTAACTAATCAATCAAGCAATCCATCAAACGAAGATCCACATGTGCATTCCTGTGGTACAAATGCTGATCGATCGATGGATGGATCGATTTTCGCGAGAACGTACAGACGATGGTGGCCATGACGCAGATCACCAAGAAGATAATGGTGAAGGACAAGGAGGAGCTGTACCCGGTAAAGCCGTCGGACTGCGGTAAGTTCCTGGTGCTGTCCGTGGGCACCGGGTCGACGTCGGACCAGGGGATGTACACGGCGAGGCAGTGCTCGCGGTGGGGGATCGTCCGGTGGCTGCGCAACAAGGGGATGGCGCCCATCATCGACATCTTCATGGCGGCCAGCTCCGACCTCGTCGACATCCACGCCGCCGTCATGTTCCAGTCGCTGCACAGCGACGGCGACTACCTCCGCATCCAGGACAACACGCTCCACGGCGACGCCGCCACGGTGGACGCCGCCACCAGGGACAACATGCGGGCGCTCGTCGGGATCGGCGAGCGGATGCTGGCGCAGCGGGTGTCGAGGGTCAACGTCGAGACCGGCAGGTACGTCGAGGTGCCCGGCGCCGGCAGCAACGCCGACGCGCTGAGGGGCTTCGCCAGGCAGCTCTCCGAGGAGAGGAGGGCGAGGCTAGGTCGGCGAAACGCCTGCGGCGGCGGCGGCGAAGGAGAGCCCAGCGGCGTGGCGTGCAAGCGTTAGTAACTGTACACGCATCATGCTGACGCGATCTTTTTTATTTTTCTTTTTTTTTTTTTACCTTTCTAGCGGACATGGGGAATAACAAGACGTGACAGTAGTGCAATCGGTTTGTAACGTGCGTATACCAACATTGATCCATTTCTTCATCACAGTTTCAGTTCATCAGTATCCGCGCAGCACAAACACGTACACGTACGTACAGTCGTACACAACGTACAAAAATGGATTATCTATAAATATGCCGCCATTTTTTTTAAAATAAAACGGTAAAATCATTTGGCATGTATTTATTTACACTATAAACTCTCACATGTTTTTATGGCAACTTTATATATTTACGCTGTTAAATCAAAAGTGATTGAAATAGGGCTAAAAGCAGCCATTTTTTTAAAGCAGAACCAATAGCAACACATAGGATAACATAGTTAATATTTCAAATTAAAAATTCACATTATATATAT

SEQ ID NO:39

OsMATL-003D突变型核酸序列:

GGGTGAGTGACTGGAGAGCCGTTGGTTGGGCACTTGCGGTTGATCTGGTCCGTTGCTTCAGCTCAGAGCTCTCACCCGTCTCTTCCACCAAAGCCGTGTGCCCGTGTGGGTGTGGGTGTGCGCGCACACTGCGCTCGAGCGCCCGCCAAAAATAGTTCGCCGTAGCTCAAAAACGCTCACGCCGCGCGTTCCTGCAAATCACAGTGACTAGTGACAAACGATCGATCGATCCCTCCATCCACAAACCCTCCTCGATCTCATCTTCCTTCGTCTCGTCAATGGCGGCGAGCTACTCGTGCCGGCGGACATGCGAGGCGTGCAGCACGAGGGCGATGGCCGGGTGCGTGGTGGGCGAGCCGGCGTCGGCGCCGGGGCAGCGGGTGACGTTGCTGGCGATCGACGGCGGCGGCATCAGGGGCCTCATCCCGGGCACCATCCTCGCCTTCCTCGAGGCCAGGCTGCAGGAGCTGGATGGCCCCGACGCATCGCCGGGACCAGCACCGGCGGCCTCATCACCGCCATGCTCGCCGCGCCCGGCGACCACGGCCGCCCGCTCTTCGCCGCCAGCGACATCAACCGCTTCTACCTCGACAACGGCCCACTCATCTTCCCACAAAAGTAACTGATCACCTCGAATTCGATCTCCTCTCTTCGATCTCTGCATTATTTGATTTGATTGGGGATTGTGGGCGGCGTGGCGTGGCGTCCAGGAGGTGCGGCATGGCGGCGGCCATGGCGGCGCTGACGAGGCCGAGGTACAACGGCAAGTACCTGCAGGGGAAGATCAGGAAGATGCTGGGCGAGACGAGGGTGCGCGACACGCTGACGAACGTCGTCATCCCCACGTTCGACGTCAGGCTGCTCCAGCCAACCATCTTCTCCACATACGACGTGCGTGCGTTGATTCCATCCGCATTGGCGTTGGAATCAGCTGATTGTTTGATTGATCGAACAATTGATCGGTTAAAATTTTGCAGGCGAAGAGCATGCCGCTCAAGAACGCGCTCCTCTCCGACATCTGCATCAGCACATCCGCGGCGCCGACCTACCTCCCCGCGCACTGCTTCCAGACCACCGACGACGCCACCGGCAAGGTCCGCGAGTTCGACCTCATCGACGGCGGCGTCGCCGCCAACAACCCGGTAACTAATCAATCAAGCAATCCATCAAACGAAGATCCACATGTGCATTCCTGTGGTACAAATGCTGATCGATCGATGGATGGATCGATTTTCGCGAGAACGTACAGACGATGGTGGCCATGACGCAGATCACCAAGAAGATAATGGTGAAGGACAAGGAGGAGCTGTACCCGGTAAAGCCGTCGGACTGCGGTAAGTTCCTGGTGCTGTCCGTGGGCACCGGGTCGACGTCGGACCAGGGGATGTACACGGCGAGGCAGTGCTCGCGGTGGGGGATCGTCCGGTGGCTGCGCAACAAGGGGATGGCGCCCATCATCGACATCTTCATGGCGGCCAGCTCCGACCTCGTCGACATCCACGCCGCCGTCATGTTCCAGTCGCTGCACAGCGACGGCGACTACCTCCGCATCCAGGACAACACGCTCCACGGCGACGCCGCCACGGTGGACGCCGCCACCAGGGACAACATGCGGGCGCTCGTCGGGATCGGCGAGCGGATGCTGGCGCAGCGGGTGTCGAGGGTCAACGTCGAGACCGGCAGGTACGTCGAGGTGCCCGGCGCCGGCAGCAACGCCGACGCGCTGAGGGGCTTCGCCAGGCAGCTCTCCGAGGAGAGGAGGGCGAGGCTAGGTCGGCGAAACGCCTGCGGCGGCGGCGGCGAAGGAGAGCCCAGCGGCGTGGCGTGCAAGCGTTAGTAACTGTACACGCATCATGCTGACGCGATCTTTTTTATTTTTCTTTTTTTTTTTTTACCTTTCTAGCGGACATGGGGAATAACAAGACGTGACAGTAGTGCAATCGGTTTGTAACGTGCGTATACCAACATTGATCCATTTCTTCATCACAGTTTCAGTTCATCAGTATCCGCGCAGCACAAACACGTACACGTACGTACAGTCGTACACAACGTACAAAAATGGATTATCTATAAATATGCCGCCATTTTTTTTAAAATAAAACGGTAAAATCATTTGGCATGTATTTATTTACACTATAAACTCTCACATGTTTTTATGGCAACTTTATATATTTACGCTGTTAAATCAAAAGTGATTGAAATAGGGCTAAAAGCAGCCATTTTTTTAAAGCAGAACCAATAGCAACACATAGGATAACATAGTTAATATTTCAAATTAAAAATTCACATTATATATAT

SEQ ID NO:40

OsMATL-288A突变型核酸序列:

GGGTGAGTGACTGGAGAGCCGTTGGTTGGGCACTTGCGGTTGATCTGGTCCGTTGCTTCAGCTCAGAGCTCTCACCCGTCTCTTCCACCAAAGCCGTGTGCCCGTGTGGGTGTGGGTGTGCGCGCACACTGCGCTCGAGCGCCCGCCAAAAATAGTTCGCCGTAGCTCAAAAACGCTCACGCCGCGCGTTCCTGCAAATCACAGTGACTAGTGACAAACGATCGATCGATCCCTCCATCCACAAACCCTCCTCGATCTCATCTTCCTTCGTCTCGTCAATGGCGGCGAGCTACTCGTGCCGGCGGACATGCGAGGCGTGCAGCACGAGGGCGATGGCCGGGTGCGTGGTGGGCGAGCCGGCGTCGGCGCCGGGGCAGCGGGTGACGTTGCTGGCGATCGACGGCGGCGGCATCAGGGGCCTCATCCCGGGCACCATCCTCGCCTTCCTCGAGGCCAGGCTGCAGGAGCTGGATGGCCCCGACGCGCGCCTCGCCGATTACTTCGACTGCATCGCCGGGACCAGCACCGGCGGCCTCATCACCGCCATGCTCGCCGCGCCCGGCGACCACGGCCGCCCGCTCTTCGCCGCCAGCGACATCAACCGCTTCTACCTCGACAACGGCCCACTCATCTTCCCACAAAAGTAACTGATCACCTCGAATTCGATCTCCTCTCTTCGATCTCTGCATTATTTGATTTGATTGGGGATTGTGGGCGGCGTGGCGTGGCGTCCAGGAGGTGCGGCATGGCGGCGGCCATGGCGGCGCTGACGAGGCCGAGGTACAACGGCAAGTACCTGCAGGGGAAGATCAGGAAGATGCTGGGCGAGACGAGGGTGCGCGACACGCTGACGAACGTCGTCATCCCCACGTTCGACGTCAGGCTGCTCCAGCCAACCATCTTCTCCACATACGACGTGCGTGCGTTGATTCCATCCGCATTGGCGTTGGAATCAGCTGATTGTTTGATTGATCGAACAATTGATCGGTTAAAATTTTGCAGGCGAAGAGCATGCCGCTCAAGAACGCGCTCCTCTCCGACATCTGCATCAGCACATCCGCGGCGCCGACCTACCTCCCCGCGCACTGCTTCCAGACCACCGACGACGCCACCGGCAAGGTCCGCGAGTTCGACCTCATCGACGGCGGCGTCGCCGCCAACAACCCGGTAACTAATCAATCAAGCAATCCATCAAACGAAGATCCACATGTGCATTCCTGTGGTACAAATGCTGATCGATCGATGGATGGATCGATTTTCGCGAGAACGTACAGACGATGGTGGCCATGACGCAGATCACCAAGAAGATAATGGTGAAGGACAAGGAGGAGCTGTACCCGGTAAAGCCGTCGGACTGCGGTAAGTTCCTGGTGCTGTCCGTGGGCACCGGGTCGACGTCGGACCAGGGGATGTACACGGCGAGGCAGTGCTCGCGGTGGGGGATCGTCCGGTGGCTGCGCAACAAGGGGATGGCGCCCATCATCGACATCTTCATGGCGGCCAGCTCCGACCTCGTCGACATCCACGCCGCCGTCATGTTCCAGTCGCTGCACAGCGACGGCGACTACCTCCGCATCCAGGACAACACGCTCCACGGCGACGCCGCCACGGTGGACGCCGCCACCAGGGACAACATGCGGGCGCTCGTCGGGATCGGCGAGCGGATGCTGGCGCAGCGGGTGTCGAGGGTCAACGTCGAGACCGGCTCGAGGTGCCCGGCGCCGGCAGCAACGCCGACGCGCTGAGGGGCTTCGCCAGGCAGCTCTCCGAGGAGAGGAGGGCGAGGCTAGGTCGGCGAAACGCCTGCGGCGGCGGCGGCGAAGGAGAGCCCAGCGGCGTGGCGTGCAAGCGTTAGTAACTGTACACGCATCATGCTGACGCGATCTTTTTTATTTTTCTTTTTTTTTTTTTACCTTTCTAGCGGACATGGGGAATAACAAGACGTGACAGTAGTGCAATCGGTTTGTAACGTGCGTATACCAACATTGATCCATTTCTTCATCACAGTTTCAGTTCATCAGTATCCGCGCAGCACAAACACGTACACGTACGTACAGTCGTACACAACGTACAAAAATGGATTATCTATAAATATGCCGCCATTTTTTTTAAAATAAAACGGTAAAATCATTTGGCATGTATTTATTTACACTATAAACTCTCACATGTTTTTATGGCAACTTTATATATTTACGCTGTTAAATCAAAAGTGATTGAAATAGGGCTAAAAGCAGCCATTTTTTTAAAGCAGAACCAATAGCAACACATAGGATAACATAGTTAATATTTCAAATTAAAAATTCACATTATATATAT

SEQ ID NO:41

OsMATL-068A突变型核酸序列:

GGGTGAGTGACTGGAGAGCCGTTGGTTGGGCACTTGCGGTTGATCTGGTCCGTTGCTTCAGCTCAGAGCTCTCACCCGTCTCTTCCACCAAAGCCGTGTGCCCGTGTGGGTGTGGGTGTGCGCGCACACTGCGCTCGAGCGCCCGCCAAAAATAGTTCGCCGTAGCTCAAAAACGCTCACGCCGCGCGTTCCTGCAAATCACAGTGACTAGTGACAAACGATCGATCGATCCCTCCATCCACAAACCCTCCTCGATCTCATCTTCCTTCGTCTCGTCAATGGCGGCGAGCTACTCGTGCCGGCGGACATGCGAGGCGTGCAGCACGAGGGCGATGGCCGGGTGCGTGGTGGGCGAGCCGGCGTCGGCGCCGGGGCAGCGGGTGACGTTGCTGGCGATCGACGGCGGCGGCATCAGGGGCCTCATCCCGGGCACCATCCTCGCCTTCCTCGAGGCCAGGCTGCAGGAGCTGGATGGCCCCGACGCGCGCCTCGCATTACTTCGACTGCATCGCCGGGACCAGCACCGGCGGCCTCATCACCGCCATGCTCGCCGCGCCCGGCGACCACGGCCGCCCGCTCTTCGCCGCCAGCGACATCAACCGCTTCTACCTCGACAACGGCCCACTCATCTTCCCACAAAAGTAACTGATCACCTCGAATTCGATCTCCTCTCTTCGATCTCTGCATTATTTGATTTGATTGGGGATTGTGGGCGGCGTGGCGTGGCGTCCAGGAGGTGCGGCATGGCGGCGGCCATGGCGGCGCTGACGAGGCCGAGGTACAACGGCAAGTACCTGCAGGGGAAGATCAGGAAGATGCTGGGCGAGACGAGGGTGCGCGACACGCTGACGAACGTCGTCATCCCCACGTTCGACGTCAGGCTGCTCCAGCCAACCATCTTCTCCACATACGACGTGCGTGCGTTGATTCCATCCGCATTGGCGTTGGAATCAGCTGATTGTTTGATTGATCGAACAATTGATCGGTTAAAATTTTGCAGGCGAAGAGCATGCCGCTCAAGAACGCGCTCCTCTCCGACATCTGCATCAGCACATCCGCGGCGCCGACCTACCTCCCCGCGCACTGCTTCCAGACCACCGACGACGCCACCGGCAAGGTCCGCGAGTTCGACCTCATCGACGGCGGCGTCGCCGCCAACAACCCGGTAACTAATCAATCAAGCAATCCATCAAACGAAGATCCACATGTGCATTCCTGTGGTACAAATGCTGATCGATCGATGGATGGATCGATTTTCGCGAGAACGTACAGACGATGGTGGCCATGACGCAGATCACCAAGAAGATAATGGTGAAGGACAAGGAGGAGCTGTACCCGGTAAAGCCGTCGGACTGCGGTAAGTTCCTGGTGCTGTCCGTGGGCACCGGGTCGACGTCGGACCAGGGGATGTACACGGCGAGGCAGTGCTCGCGGTGGGGGATCGTCCGGTGGCTGCGCAACAAGGGGATGGCGCCCATCATCGACATCTTCATGGCGGCCAGCTCCGACCTCGTCGACATCCACGCCGCCGTCATGTTCCAGTCGCTGCACAGCGACGGCGACTACCTCCGCATCCAGGACAACACGCTCCACGGCGACGCCGCCACGGTGGACGCCGCCACCAGGGACAACATGCGGGCGCTCGTCGGGATCGGCGAGCGGATGCTGGCGCAGCGGGTGTCGAGGGTCAACGTCGAGACCGGCAGGTACGTCGAGGTGCCCGGCGCCGGCAGCAACGCCGACGCGCTGAGGGGCTTCGCCAGGCAGCTCTCCGAGGAGAGGAGGGCGAGGCTAGGTCGGCGAAACGCCTGCGGCGGCGGCGGCGAAGGAGAGCCCAGCGGCGTGGCGTGCAAGCGTTAGTAACTGTACACGCATCATGCTGACGCGATCTTTTTTATTTTTCTTTTTTTTTTTTTACCTTTCTAGCGGACATGGGGAATAACAAGACGTGACAGTAGTGCAATCGGTTTGTAACGTGCGTATACCAACATTGATCCATTTCTTCATCACAGTTTCAGTTCATCAGTATCCGCGCAGCACAAACACGTACACGTACGTACAGTCGTACACAACGTACAAAAATGGATTATCTATAAATATGCCGCCATTTTTTTTAAAATAAAACGGTAAAATCATTTGGCATGTATTTATTTACACTATAAACTCTCACATGTTTTTATGGCAACTTTATATATTTACGCTGTTAAATCAAAAGTGATTGAAATAGGGCTAAAAGCAGCCATTTTTTTAAAGCAGAACCAATAGCAACACATAGGATAACATAGTTAATATTTCAAATTAAAAATTCACATTATATATAT

序列表

<110> 先正达参股股份有限公司(Syngenta Participations AG),

先正达生物科技（中国）有限公司(Syngenta Biotechnology China Co., Ltd)

<120> 一种用基因编辑创制的水稻单倍体诱导系及其创制方法和应用

<130> 81612-CN-REG-ORG-NAT-1

<141> 2018-07-06

<160> 41

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 4170

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 改进并优化的Cas9核酸序列

<400> 1

atggacaaga agtacagcat cggcctggac atcggcacca acagcgtggg ctgggccgtg 60

atcaccgacg agtacaaggt gccgagcaag aagttcaagg tgctgggcaa caccgacagg 120

cacagcatca agaagaacct gatcggcgcc ctgctgttcg acagcggcga gaccgccgag 180

gccaccaggc tgaagaggac cgccaggagg aggtacacca ggaggaagaa caggatctgc 240

tacctgcagg agatcttcag caacgagatg gccaaggtgg acgacagctt cttccacagg 300

ctggaggaga gcttcctggt ggaggaggac aagaagcacg agaggcaccc gatcttcggc 360

aacatcgtgg acgaggtggc ctaccacgag aagtacccga ccatctacca cctgaggaag 420

aagctggtgg acagcaccga caaggccgac ctgaggctga tctacctggc cctggcccac 480

atgatcaagt tcaggggcca cttcctgatc gagggcgacc tgaacccgga caacagcgac 540

gtggacaagc tgttcatcca gctggtgcag acctacaacc agctgttcga ggagaacccg 600

atcaacgcca gcggcgtgga cgccaaggcc atcctgagcg ccaggctgag caagagcagg 660

aggctggaga acctgatcgc ccagctgccg ggcgagaaga agaacggcct gttcggcaac 720

ctgatcgccc tgagcctggg cctgaccccg aacttcaaga gcaacttcga cctggccgag 780

gacgccaagc tgcagctgag caaggacacc tacgacgacg acctggacaa cctgctggcc 840

cagatcggcg accagtacgc cgacctgttc ctggccgcca agaacctgag cgacgccatc 900

ctgctgagcg acatcctgag ggtgaacacc gagatcacca aggccccgct gagcgccagc 960

atgatcaaga ggtacgacga gcaccaccag gacctgaccc tgctgaaggc cctggtgagg 1020

cagcagctgc cggagaagta caaggagatc ttcttcgacc agagcaagaa cggctacgcc 1080

ggctacatcg acggcggcgc cagccaggag gagttctaca agttcatcaa gccgatcctg 1140

gagaagatgg acggcaccga ggagctgctg gtgaagctga acagggagga cctgctgagg 1200

aagcagagga ccttcgacaa cggcagcatc ccgcaccaga tccacctggg cgagctgcac 1260

gccatcctga ggaggcagga ggacttctac ccgttcctga aggacaacag ggagaagatc 1320

gagaagatcc tgaccttccg catcccgtac tacgtgggcc cgctggccag gggcaacagc 1380

aggttcgcct ggatgaccag gaagagcgag gagaccatca ccccgtggaa cttcgaggag 1440

gtggtggaca agggcgccag cgcccagagc ttcatcgaga ggatgaccaa cttcgacaag 1500

aacctgccga acgagaaggt gctgccgaag cacagcctgc tgtacgagta cttcaccgtg 1560

tacaacgagc tgaccaaggt gaagtacgtg accgagggca tgaggaagcc ggccttcctg 1620

agcggcgagc agaagaaggc catcgtggac ctgctgttca agaccaacag gaaggtgacc 1680

gtgaagcagc tgaaggagga ctacttcaag aagatcgagt gcttcgacag cgtggagatc 1740

agcggcgtgg aggacaggtt caacgccagc ctgggcacct accacgacct gctgaagatc 1800

atcaaggaca aggacttcct ggacaacgag gagaacgagg acatcctgga ggacatcgtg 1860

ctgaccctga ccctgttcga ggacagggag atgatcgagg agaggctgaa gacctacgcc 1920

cacctgttcg acgacaaggt gatgaagcag ctgaagagga ggaggtacac cggctggggc 1980

aggctgagca ggaagctgat caacggcatc agggacaagc agagcggcaa gaccatcctg 2040

gacttcctga agagcgacgg cttcgccaac aggaacttca tgcagctgat ccacgacgac 2100

agcctgacct tcaaggagga catccagaag gcccaggtga gcggccaggg cgacagcctg 2160

cacgagcaca tcgccaacct ggccggcagc ccggccatca agaagggcat cctgcagacc 2220

gtgaaggtgg tggacgagct ggtgaaggtg atgggcaggc acaagccgga gaacatcgtg 2280

atcgagatgg ccagggagaa ccagaccacc cagaagggcc agaagaacag cagggagagg 2340

atgaagagga tcgaggaggg catcaaggag ctgggcagcc agatcctgaa ggagcacccg 2400

gtggagaaca cccagctgca gaacgagaag ctgtacctgt actacctgca gaacggcagg 2460

gacatgtacg tggaccagga gctggacatc aacaggctga gcgactacga cgtggaccac 2520

atcgtgccgc agagcttcct gaaggacgac agcatcgaca acaaggtgct gaccaggagc 2580

gacaagaaca ggggcaagag cgacaacgtg ccgagcgagg aggtggtgaa gaagatgaaa 2640

aactactgga ggcagctgct gaacgccaag ctgatcaccc agaggaagtt cgacaacctg 2700

accaaggccg agaggggcgg cctgagcgag ctggacaagg ccggcttcat taaaaggcag 2760

ctggtggaga ccaggcagat caccaagcac gtggcccaga tcctggacag caggatgaac 2820

accaagtacg acgagaacga caagctgatc agggaggtga aggtgatcac cctgaagagc 2880

aagctggtga gcgacttcag gaaggacttc cagttctaca aggtgaggga gatcaataat 2940

taccaccacg cccacgacgc ctacctgaac gccgtggtgg gcaccgccct gattaaaaag 3000

tacccgaagc tggagagcga gttcgtgtac ggcgactaca aggtgtacga cgtgaggaag 3060

atgatcgcca agagcgagca ggagatcggc aaggccaccg ccaagtactt cttctacagc 3120

aacatcatga acttcttcaa gaccgagatc accctggcca acggcgagat caggaagagg 3180

ccgctgatcg agaccaacgg cgagaccggc gagatcgtgt gggacaaggg cagggacttc 3240

gccaccgtga ggaaggtgct gtccatgccg caggtgaaca tcgtgaagaa gaccgaggtg 3300

cagaccggcg gcttcagcaa ggagagcatc ctgccgaaga ggaacagcga caagctgatc 3360

gccaggaaga aggactggga tccgaagaag tacggcggct tcgacagccc gaccgtggcc 3420

tacagcgtgc tggtggtggc caaggtggag aagggcaaga gcaagaagct gaagagcgtg 3480

aaggagctgg tgggcatcac catcatggag aggagcagct tcgagaagaa cccagtggac 3540

ttcctggagg ccaagggcta caaggaggtg aagaaggacc tgatcattaa actgccgaag 3600

tacagcctgt tcgagctgga gaacggcagg aagaggatgc tggccagcgc cggcgagctg 3660

cagaagggca acgagctggc cctgccgagc aagtacgtga acttcctgta cctggccagc 3720

cactacgaga agctgaaggg cagcccggag gacaacgagc agaagcagct gttcgtggag 3780

cagcacaagc actacctgga cgagatcatc gagcagatca gcgagttcag caagagggtg 3840

atcctggccg acgccaacct ggacaaggtg ctgagcgcct acaacaagca cagggacaag 3900

ccgatcaggg agcaggccga gaacatcatc cacctgttca ccctgaccaa cctgggcgcc 3960

ccggccgcct tcaagtactt cgacaccacc atcgacagga agaggtacac cagcaccaag 4020

gaggtgctgg acgccaccct gatccaccag agcatcaccg gcctgtacga gaccaggatc 4080

gacctgagcc agctgggcgg cgacagcagc ccgccgaaga agaagaggaa ggtgagctgg 4140

aaggacgcca gcggctggag caggatgtga 4170

<210> 2

<211> 1389

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 改进并优化的Cas9氨基酸序列

<400> 2

Met Asp Lys Lys Tyr Ser Ile Gly Leu Asp Ile Gly Thr Asn Ser Val

1 5 10 15

Gly Trp Ala Val Ile Thr Asp Glu Tyr Lys Val Pro Ser Lys Lys Phe

20 25 30

Lys Val Leu Gly Asn Thr Asp Arg His Ser Ile Lys Lys Asn Leu Ile

35 40 45

Gly Ala Leu Leu Phe Asp Ser Gly Glu Thr Ala Glu Ala Thr Arg Leu

50 55 60

Lys Arg Thr Ala Arg Arg Arg Tyr Thr Arg Arg Lys Asn Arg Ile Cys

65 70 75 80

Tyr Leu Gln Glu Ile Phe Ser Asn Glu Met Ala Lys Val Asp Asp Ser

85 90 95

Phe Phe His Arg Leu Glu Glu Ser Phe Leu Val Glu Glu Asp Lys Lys

100 105 110

His Glu Arg His Pro Ile Phe Gly Asn Ile Val Asp Glu Val Ala Tyr

115 120 125

His Glu Lys Tyr Pro Thr Ile Tyr His Leu Arg Lys Lys Leu Val Asp

130 135 140

Ser Thr Asp Lys Ala Asp Leu Arg Leu Ile Tyr Leu Ala Leu Ala His

145 150 155 160

Met Ile Lys Phe Arg Gly His Phe Leu Ile Glu Gly Asp Leu Asn Pro

165 170 175

Asp Asn Ser Asp Val Asp Lys Leu Phe Ile Gln Leu Val Gln Thr Tyr

180 185 190

Asn Gln Leu Phe Glu Glu Asn Pro Ile Asn Ala Ser Gly Val Asp Ala

195 200 205

Lys Ala Ile Leu Ser Ala Arg Leu Ser Lys Ser Arg Arg Leu Glu Asn

210 215 220

Leu Ile Ala Gln Leu Pro Gly Glu Lys Lys Asn Gly Leu Phe Gly Asn

225 230 235 240

Leu Ile Ala Leu Ser Leu Gly Leu Thr Pro Asn Phe Lys Ser Asn Phe

245 250 255

Asp Leu Ala Glu Asp Ala Lys Leu Gln Leu Ser Lys Asp Thr Tyr Asp

260 265 270

Asp Asp Leu Asp Asn Leu Leu Ala Gln Ile Gly Asp Gln Tyr Ala Asp

275 280 285

Leu Phe Leu Ala Ala Lys Asn Leu Ser Asp Ala Ile Leu Leu Ser Asp

290 295 300

Ile Leu Arg Val Asn Thr Glu Ile Thr Lys Ala Pro Leu Ser Ala Ser

305 310 315 320

Met Ile Lys Arg Tyr Asp Glu His His Gln Asp Leu Thr Leu Leu Lys

325 330 335

Ala Leu Val Arg Gln Gln Leu Pro Glu Lys Tyr Lys Glu Ile Phe Phe

340 345 350

Asp Gln Ser Lys Asn Gly Tyr Ala Gly Tyr Ile Asp Gly Gly Ala Ser

355 360 365

Gln Glu Glu Phe Tyr Lys Phe Ile Lys Pro Ile Leu Glu Lys Met Asp

370 375 380

Gly Thr Glu Glu Leu Leu Val Lys Leu Asn Arg Glu Asp Leu Leu Arg

385 390 395 400

Lys Gln Arg Thr Phe Asp Asn Gly Ser Ile Pro His Gln Ile His Leu

405 410 415

Gly Glu Leu His Ala Ile Leu Arg Arg Gln Glu Asp Phe Tyr Pro Phe

420 425 430

Leu Lys Asp Asn Arg Glu Lys Ile Glu Lys Ile Leu Thr Phe Arg Ile

435 440 445

Pro Tyr Tyr Val Gly Pro Leu Ala Arg Gly Asn Ser Arg Phe Ala Trp

450 455 460

Met Thr Arg Lys Ser Glu Glu Thr Ile Thr Pro Trp Asn Phe Glu Glu

465 470 475 480

Val Val Asp Lys Gly Ala Ser Ala Gln Ser Phe Ile Glu Arg Met Thr

485 490 495

Asn Phe Asp Lys Asn Leu Pro Asn Glu Lys Val Leu Pro Lys His Ser

500 505 510

Leu Leu Tyr Glu Tyr Phe Thr Val Tyr Asn Glu Leu Thr Lys Val Lys

515 520 525

Tyr Val Thr Glu Gly Met Arg Lys Pro Ala Phe Leu Ser Gly Glu Gln

530 535 540

Lys Lys Ala Ile Val Asp Leu Leu Phe Lys Thr Asn Arg Lys Val Thr

545 550 555 560

Val Lys Gln Leu Lys Glu Asp Tyr Phe Lys Lys Ile Glu Cys Phe Asp

565 570 575

Ser Val Glu Ile Ser Gly Val Glu Asp Arg Phe Asn Ala Ser Leu Gly

580 585 590

Thr Tyr His Asp Leu Leu Lys Ile Ile Lys Asp Lys Asp Phe Leu Asp

595 600 605

Asn Glu Glu Asn Glu Asp Ile Leu Glu Asp Ile Val Leu Thr Leu Thr

610 615 620

Leu Phe Glu Asp Arg Glu Met Ile Glu Glu Arg Leu Lys Thr Tyr Ala

625 630 635 640

His Leu Phe Asp Asp Lys Val Met Lys Gln Leu Lys Arg Arg Arg Tyr

645 650 655

Thr Gly Trp Gly Arg Leu Ser Arg Lys Leu Ile Asn Gly Ile Arg Asp

660 665 670

Lys Gln Ser Gly Lys Thr Ile Leu Asp Phe Leu Lys Ser Asp Gly Phe

675 680 685

Ala Asn Arg Asn Phe Met Gln Leu Ile His Asp Asp Ser Leu Thr Phe

690 695 700

Lys Glu Asp Ile Gln Lys Ala Gln Val Ser Gly Gln Gly Asp Ser Leu

705 710 715 720

His Glu His Ile Ala Asn Leu Ala Gly Ser Pro Ala Ile Lys Lys Gly

725 730 735

Ile Leu Gln Thr Val Lys Val Val Asp Glu Leu Val Lys Val Met Gly

740 745 750

Arg His Lys Pro Glu Asn Ile Val Ile Glu Met Ala Arg Glu Asn Gln

755 760 765

Thr Thr Gln Lys Gly Gln Lys Asn Ser Arg Glu Arg Met Lys Arg Ile

770 775 780

Glu Glu Gly Ile Lys Glu Leu Gly Ser Gln Ile Leu Lys Glu His Pro

785 790 795 800

Val Glu Asn Thr Gln Leu Gln Asn Glu Lys Leu Tyr Leu Tyr Tyr Leu

805 810 815

Gln Asn Gly Arg Asp Met Tyr Val Asp Gln Glu Leu Asp Ile Asn Arg

820 825 830

Leu Ser Asp Tyr Asp Val Asp His Ile Val Pro Gln Ser Phe Leu Lys

835 840 845

Asp Asp Ser Ile Asp Asn Lys Val Leu Thr Arg Ser Asp Lys Asn Arg

850 855 860

Gly Lys Ser Asp Asn Val Pro Ser Glu Glu Val Val Lys Lys Met Lys

865 870 875 880

Asn Tyr Trp Arg Gln Leu Leu Asn Ala Lys Leu Ile Thr Gln Arg Lys

885 890 895

Phe Asp Asn Leu Thr Lys Ala Glu Arg Gly Gly Leu Ser Glu Leu Asp

900 905 910

Lys Ala Gly Phe Ile Lys Arg Gln Leu Val Glu Thr Arg Gln Ile Thr

915 920 925

Lys His Val Ala Gln Ile Leu Asp Ser Arg Met Asn Thr Lys Tyr Asp

930 935 940

Glu Asn Asp Lys Leu Ile Arg Glu Val Lys Val Ile Thr Leu Lys Ser

945 950 955 960

Lys Leu Val Ser Asp Phe Arg Lys Asp Phe Gln Phe Tyr Lys Val Arg

965 970 975

Glu Ile Asn Asn Tyr His His Ala His Asp Ala Tyr Leu Asn Ala Val

980 985 990

Val Gly Thr Ala Leu Ile Lys Lys Tyr Pro Lys Leu Glu Ser Glu Phe

995 1000 1005

Val Tyr Gly Asp Tyr Lys Val Tyr Asp Val Arg Lys Met Ile Ala Lys

1010 1015 1020

Ser Glu Gln Glu Ile Gly Lys Ala Thr Ala Lys Tyr Phe Phe Tyr Ser

1025 1030 1035 1040

Asn Ile Met Asn Phe Phe Lys Thr Glu Ile Thr Leu Ala Asn Gly Glu

1045 1050 1055

Ile Arg Lys Arg Pro Leu Ile Glu Thr Asn Gly Glu Thr Gly Glu Ile

1060 1065 1070

Val Trp Asp Lys Gly Arg Asp Phe Ala Thr Val Arg Lys Val Leu Ser

1075 1080 1085

Met Pro Gln Val Asn Ile Val Lys Lys Thr Glu Val Gln Thr Gly Gly

1090 1095 1100

Phe Ser Lys Glu Ser Ile Leu Pro Lys Arg Asn Ser Asp Lys Leu Ile

1105 1110 1115 1120

Ala Arg Lys Lys Asp Trp Asp Pro Lys Lys Tyr Gly Gly Phe Asp Ser

1125 1130 1135

Pro Thr Val Ala Tyr Ser Val Leu Val Val Ala Lys Val Glu Lys Gly

1140 1145 1150

Lys Ser Lys Lys Leu Lys Ser Val Lys Glu Leu Val Gly Ile Thr Ile

1155 1160 1165

Met Glu Arg Ser Ser Phe Glu Lys Asn Pro Val Asp Phe Leu Glu Ala

1170 1175 1180

Lys Gly Tyr Lys Glu Val Lys Lys Asp Leu Ile Ile Lys Leu Pro Lys

1185 1190 1195 1200

Tyr Ser Leu Phe Glu Leu Glu Asn Gly Arg Lys Arg Met Leu Ala Ser

1205 1210 1215

Ala Gly Glu Leu Gln Lys Gly Asn Glu Leu Ala Leu Pro Ser Lys Tyr

1220 1225 1230

Val Asn Phe Leu Tyr Leu Ala Ser His Tyr Glu Lys Leu Lys Gly Ser

1235 1240 1245

Pro Glu Asp Asn Glu Gln Lys Gln Leu Phe Val Glu Gln His Lys His

1250 1255 1260

Tyr Leu Asp Glu Ile Ile Glu Gln Ile Ser Glu Phe Ser Lys Arg Val

1265 1270 1275 1280

Ile Leu Ala Asp Ala Asn Leu Asp Lys Val Leu Ser Ala Tyr Asn Lys

1285 1290 1295

His Arg Asp Lys Pro Ile Arg Glu Gln Ala Glu Asn Ile Ile His Leu

1300 1305 1310

Phe Thr Leu Thr Asn Leu Gly Ala Pro Ala Ala Phe Lys Tyr Phe Asp

1315 1320 1325

Thr Thr Ile Asp Arg Lys Arg Tyr Thr Ser Thr Lys Glu Val Leu Asp

1330 1335 1340

Ala Thr Leu Ile His Gln Ser Ile Thr Gly Leu Tyr Glu Thr Arg Ile

1345 1350 1355 1360

Asp Leu Ser Gln Leu Gly Gly Asp Ser Ser Pro Pro Lys Lys Lys Arg

1365 1370 1375

Lys Val Ser Trp Lys Asp Ala Ser Gly Trp Ser Arg Met

1380 1385

<210> 3

<211> 2323

<212> DNA

<213> 水稻

<220>

<223> 水稻OsMATL基因基因组核苷酸序列

<400> 3

gggtgagtga ctggagagcc gttggttggg cacttgcggt tgatctggtc cgttgcttca 60

gctcagagct ctcacccgtc tcttccacca aagccgtgtg cccgtgtggg tgtgggtgtg 120

cgcgcacact gcgctcgagc gcccgccaaa aatagttcgc cgtagctcaa aaacgctcac 180

gccgcgcgtt cctgcaaatc acagtgacta gtgacaaacg atcgatcgat ccctccatcc 240

acaaaccctc ctcgatctca tcttccttcg tctcgtcaat ggcggcgagc tactcgtgcc 300

ggcggacatg cgaggcgtgc agcacgaggg cgatggccgg gtgcgtggtg ggcgagccgg 360

cgtcggcgcc ggggcagcgg gtgacgttgc tggcgatcga cggcggcggc atcaggggcc 420

tcatcccggg caccatcctc gccttcctcg aggccaggct gcaggagctg gatggccccg 480

acgcgcgcct cgccgattac ttcgactgca tcgccgggac cagcaccggc ggcctcatca 540

ccgccatgct cgccgcgccc ggcgaccacg gccgcccgct cttcgccgcc agcgacatca 600

accgcttcta cctcgacaac ggcccactca tcttcccaca aaagtaactg atcacctcga 660

attcgatctc ctctcttcga tctctgcatt atttgatttg attggggatt gtgggcggcg 720

tggcgtggcg tccaggaggt gcggcatggc ggcggccatg gcggcgctga cgaggccgag 780

gtacaacggc aagtacctgc aggggaagat caggaagatg ctgggcgaga cgagggtgcg 840

cgacacgctg acgaacgtcg tcatccccac gttcgacgtc aggctgctcc agccaaccat 900

cttctccaca tacgacgtgc gtgcgttgat tccatccgca ttggcgttgg aatcagctga 960

ttgtttgatt gatcgaacaa ttgatcggtt aaaattttgc aggcgaagag catgccgctc 1020

aagaacgcgc tcctctccga catctgcatc agcacatccg cggcgccgac ctacctcccc 1080

gcgcactgct tccagaccac cgacgacgcc accggcaagg tccgcgagtt cgacctcatc 1140

gacggcggcg tcgccgccaa caacccggta actaatcaat caagcaatcc atcaaacgaa 1200

gatccacatg tgcattcctg tggtacaaat gctgatcgat cgatggatgg atcgattttc 1260

gcgagaacgt acagacgatg gtggccatga cgcagatcac caagaagata atggtgaagg 1320

acaaggagga gctgtacccg gtaaagccgt cggactgcgg taagttcctg gtgctgtccg 1380

tgggcaccgg gtcgacgtcg gaccagggga tgtacacggc gaggcagtgc tcgcggtggg 1440

ggatcgtccg gtggctgcgc aacaagggga tggcgcccat catcgacatc ttcatggcgg 1500

ccagctccga cctcgtcgac atccacgccg ccgtcatgtt ccagtcgctg cacagcgacg 1560

gcgactacct ccgcatccag gacaacacgc tccacggcga cgccgccacg gtggacgccg 1620

ccaccaggga caacatgcgg gcgctcgtcg ggatcggcga gcggatgctg gcgcagcggg 1680

tgtcgagggt caacgtcgag accggcaggt acgtcgaggt gcccggcgcc ggcagcaacg 1740

ccgacgcgct gaggggcttc gccaggcagc tctccgagga gaggagggcg aggctaggtc 1800

ggcgaaacgc ctgcggcggc ggcggcgaag gagagcccag cggcgtggcg tgcaagcgtt 1860

agtaactgta cacgcatcat gctgacgcga tcttttttat ttttcttttt ttttttttac 1920

ctttctagcg gacatgggga ataacaagac gtgacagtag tgcaatcggt ttgtaacgtg 1980

cgtataccaa cattgatcca tttcttcatc acagtttcag ttcatcagta tccgcgcagc 2040

acaaacacgt acacgtacgt acagtcgtac acaacgtaca aaaatggatt atctataaat 2100

atgccgccat tttttttaaa ataaaacggt aaaatcattt ggcatgtatt tatttacact 2160

ataaactctc acatgttttt atggcaactt tatatattta cgctgttaaa tcaaaagtga 2220

ttgaaatagg gctaaaagca gccatttttt taaagcagaa ccaatagcaa cacataggat 2280

aacatagtta atatttcaaa ttaaaaattc acattatata tat 2323

<210> 4

<211> 432

<212> PRT

<213> 水稻

<220>

<223> 水稻OsMATL基因氨基酸序列

<400> 4

Met Ala Ala Ser Tyr Ser Cys Arg Arg Thr Cys Glu Ala Cys Ser Thr

1 5 10 15

Arg Ala Met Ala Gly Cys Val Val Gly Glu Pro Ala Ser Ala Pro Gly

20 25 30

Gln Arg Val Thr Leu Leu Ala Ile Asp Gly Gly Gly Ile Arg Gly Leu

35 40 45

Ile Pro Gly Thr Ile Leu Ala Phe Leu Glu Ala Arg Leu Gln Glu Leu

50 55 60

Asp Gly Pro Asp Ala Arg Leu Ala Asp Tyr Phe Asp Cys Ile Ala Gly

65 70 75 80

Thr Ser Thr Gly Gly Leu Ile Thr Ala Met Leu Ala Ala Pro Gly Asp

85 90 95

His Gly Arg Pro Leu Phe Ala Ala Ser Asp Ile Asn Arg Phe Tyr Leu

100 105 110

Asp Asn Gly Pro Leu Ile Phe Pro Gln Lys Arg Cys Gly Met Ala Ala

115 120 125

Ala Met Ala Ala Leu Thr Arg Pro Arg Tyr Asn Gly Lys Tyr Leu Gln

130 135 140

Gly Lys Ile Arg Lys Met Leu Gly Glu Thr Arg Val Arg Asp Thr Leu

145 150 155 160

Thr Asn Val Val Ile Pro Thr Phe Asp Val Arg Leu Leu Gln Pro Thr

165 170 175

Ile Phe Ser Thr Tyr Asp Ala Lys Ser Met Pro Leu Lys Asn Ala Leu

180 185 190

Leu Ser Asp Ile Cys Ile Ser Thr Ser Ala Ala Pro Thr Tyr Leu Pro

195 200 205

Ala His Cys Phe Gln Thr Thr Asp Asp Ala Thr Gly Lys Val Arg Glu

210 215 220

Phe Asp Leu Ile Asp Gly Gly Val Ala Ala Asn Asn Pro Thr Met Val

225 230 235 240

Ala Met Thr Gln Ile Thr Lys Lys Ile Met Val Lys Asp Lys Glu Glu

245 250 255

Leu Tyr Pro Val Lys Pro Ser Asp Cys Gly Lys Phe Leu Val Leu Ser

260 265 270

Val Gly Thr Gly Ser Thr Ser Asp Gln Gly Met Tyr Thr Ala Arg Gln

275 280 285

Cys Ser Arg Trp Gly Ile Val Arg Trp Leu Arg Asn Lys Gly Met Ala

290 295 300

Pro Ile Ile Asp Ile Phe Met Ala Ala Ser Ser Asp Leu Val Asp Ile

305 310 315 320

His Ala Ala Val Met Phe Gln Ser Leu His Ser Asp Gly Asp Tyr Leu

325 330 335

Arg Ile Gln Asp Asn Thr Leu His Gly Asp Ala Ala Thr Val Asp Ala

340 345 350

Ala Thr Arg Asp Asn Met Arg Ala Leu Val Gly Ile Gly Glu Arg Met

355 360 365

Leu Ala Gln Arg Val Ser Arg Val Asn Val Glu Thr Gly Arg Tyr Val

370 375 380

Glu Val Pro Gly Ala Gly Ser Asn Ala Asp Ala Leu Arg Gly Phe Ala

385 390 395 400

Arg Gln Leu Ser Glu Glu Arg Arg Ala Arg Leu Gly Arg Arg Asn Ala

405 410 415

Cys Gly Gly Gly Gly Glu Gly Glu Pro Ser Gly Val Ala Cys Lys Arg

420 425 430

<210> 5

<211> 20

<212> DNA

<213> 水稻

<220>

<223> 1号外显子靶位点序列

<400> 5

tgcagtcgaa gtaatcggcg 20

<210> 6

<211> 20

<212> DNA

<213> 水稻

<220>

<223> 4号外显子靶位点序列

<400> 6

cgagaccggc aggtacgtcg 20

<210> 7

<211> 36

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> crRNA的骨架序列

<400> 7

gttttagagc tatgctgttt tgaatggtcc caaaac 36

<210> 8

<211> 79

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> tracrRNA的序列

<400> 8

ggaaccattc aaaacagcat agcaagttaa aataaggcta gtccgttatc aacttgaaaa 60

agtggcaccg agtcggtgc 79

<210> 9

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 扩增引物Exon1-F

<400> 9

gcgttcctgc aaatcacagt gacta 25

<210> 10

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 扩增引物Exon1-R

<400> 10

gatcgaagag aggagatcga attcg 25

<210> 11

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 扩增引物Exon4-F

<400> 11

taagttcctg gtgctgtccg tgg 23

<210> 12

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 扩增引物Exon4-R

<400> 12

tacagttact aacgcttgca cgcca 25

<210> 13

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物LB-F

<400> 13

ggcacaaaat caccactcga t 21

<210> 14

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物LB-R

<400> 14

ccgtgcagtc gatgataagc t 21

<210> 15

<211> 31

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 探针LB-probe

<400> 15

caggcagccc atcagaatta attctcatgt t 31

<210> 16

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物RB-F

<400> 16

agggattttg gtcatgagat tatca 25

<210> 17

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物RB-R

<400> 17

gcatgccaac cacaggaatt a 21

<210> 18

<211> 32

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 探针RB-probe

<400> 18

aaggatcttc acctagatcc ttttgatccg ga 32

<210> 19

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物Spec-F

<400> 19

ttgttcacta cgtgaaaggc ga 22

<210> 20

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物Spec-R

<400> 20

gggtacggag atccactaga gct 23

<210> 21

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 探针Spec-probe

<400> 21

accaaagtag tcggcaaa 18

<210> 22

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物PMI-F

<400> 22

ccctatcccc gttgacgac 19

<210> 23

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物PMI-R

<400> 23

ctgatagtgg tctccttgtc gct 23

<210> 24

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 探针PMI-probe

<400> 24

ttcgccttca gcctgcacga cct 23

<210> 25

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物Cas9-F

<400> 25

ttgtgctgct ccacgaaca 19

<210> 26

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物Cas9-R

<400> 26

gccagccact acgagaagct 20

<210> 27

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 探针Cas9-probe

<400> 27

ctgcttctgc tcgttgtcct ccgg 24

<210> 28

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物OsMATL-1-F

<400> 28

tgcaggagct ggatggcc 18

<210> 29

<211> 15

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物OsMATL-1-R

<400> 29

gtgctggtcc cggcg 15

<210> 30

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 探针OsMATL-1-probe

<400> 30

cagtcgaagt aatcggcgag 20

<210> 31

<211> 15

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物OsMATL-4-F

<400> 31

cgcagcgggt gtcga 15

<210> 32

<211> 15

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物OsMATL-4-R

<400> 32

cgtcggcgtt gctgc 15

<210> 33

<211> 16

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 探针OsMATL-4-probe

<400> 33

cacctcgacg tacctg 16

<210> 34

<211> 2324

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> OsMATL-049A-1突变型核酸序列

<400> 34

gggtgagtga ctggagagcc gttggttggg cacttgcggt tgatctggtc cgttgcttca 60

gctcagagct ctcacccgtc tcttccacca aagccgtgtg cccgtgtggg tgtgggtgtg 120

cgcgcacact gcgctcgagc gcccgccaaa aatagttcgc cgtagctcaa aaacgctcac 180

gccgcgcgtt cctgcaaatc acagtgacta gtgacaaacg atcgatcgat ccctccatcc 240

acaaaccctc ctcgatctca tcttccttcg tctcgtcaat ggcggcgagc tactcgtgcc 300

ggcggacatg cgaggcgtgc agcacgaggg cgatggccgg gtgcgtggtg ggcgagccgg 360

cgtcggcgcc ggggcagcgg gtgacgttgc tggcgatcga cggcggcggc atcaggggcc 420

tcatcccggg caccatcctc gccttcctcg aggccaggct gcaggagctg gatggccccg 480

acgcgcgcct cgccgattac ttcgactgca tcgccgggac cagcaccggc ggcctcatca 540

ccgccatgct cgccgcgccc ggcgaccacg gccgcccgct cttcgccgcc agcgacatca 600

accgcttcta cctcgacaac ggcccactca tcttcccaca aaagtaactg atcacctcga 660

attcgatctc ctctcttcga tctctgcatt atttgatttg attggggatt gtgggcggcg 720

tggcgtggcg tccaggaggt gcggcatggc ggcggccatg gcggcgctga cgaggccgag 780

gtacaacggc aagtacctgc aggggaagat caggaagatg ctgggcgaga cgagggtgcg 840

cgacacgctg acgaacgtcg tcatccccac gttcgacgtc aggctgctcc agccaaccat 900

cttctccaca tacgacgtgc gtgcgttgat tccatccgca ttggcgttgg aatcagctga 960

ttgtttgatt gatcgaacaa ttgatcggtt aaaattttgc aggcgaagag catgccgctc 1020

aagaacgcgc tcctctccga catctgcatc agcacatccg cggcgccgac ctacctcccc 1080

gcgcactgct tccagaccac cgacgacgcc accggcaagg tccgcgagtt cgacctcatc 1140

gacggcggcg tcgccgccaa caacccggta actaatcaat caagcaatcc atcaaacgaa 1200

gatccacatg tgcattcctg tggtacaaat gctgatcgat cgatggatgg atcgattttc 1260

gcgagaacgt acagacgatg gtggccatga cgcagatcac caagaagata atggtgaagg 1320

acaaggagga gctgtacccg gtaaagccgt cggactgcgg taagttcctg gtgctgtccg 1380

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ccagctccga cctcgtcgac atccacgccg ccgtcatgtt ccagtcgctg cacagcgacg 1560

gcgactacct ccgcatccag gacaacacgc tccacggcga cgccgccacg gtggacgccg 1620

ccaccaggga caacatgcgg gcgctcgtcg ggatcggcga gcggatgctg gcgcagcggg 1680

tgtcgagggt caacgtcgag accggcaggt acgatcgagg tgcccggcgc cggcagcaac 1740

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tagtaactgt acacgcatca tgctgacgcg atctttttta tttttctttt ttttttttta 1920

cctttctagc ggacatgggg aataacaaga cgtgacagta gtgcaatcgg tttgtaacgt 1980

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tataaactct cacatgtttt tatggcaact ttatatattt acgctgttaa atcaaaagtg 2220

attgaaatag ggctaaaagc agccattttt ttaaagcaga accaatagca acacatagga 2280

taacatagtt aatatttcaa attaaaaatt cacattatat atat 2324

<210> 35

<211> 2324

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> OsMATL-049A-2突变型核酸序列

<400> 35

gggtgagtga ctggagagcc gttggttggg cacttgcggt tgatctggtc cgttgcttca 60

gctcagagct ctcacccgtc tcttccacca aagccgtgtg cccgtgtggg tgtgggtgtg 120

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tagtaactgt acacgcatca tgctgacgcg atctttttta tttttctttt ttttttttta 1920

cctttctagc ggacatgggg aataacaaga cgtgacagta gtgcaatcgg tttgtaacgt 1980

gcgtatacca acattgatcc atttcttcat cacagtttca gttcatcagt atccgcgcag 2040

cacaaacacg tacacgtacg tacagtcgta cacaacgtac aaaaatggat tatctataaa 2100

tatgccgcca ttttttttaa aataaaacgg taaaatcatt tggcatgtat ttatttacac 2160

tataaactct cacatgtttt tatggcaact ttatatattt acgctgttaa atcaaaagtg 2220

attgaaatag ggctaaaagc agccattttt ttaaagcaga accaatagca acacatagga 2280

taacatagtt aatatttcaa attaaaaatt cacattatat atat 2324

<210> 36

<211> 2322

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> OsMATL-011A突变型核酸序列

<400> 36

gggtgagtga ctggagagcc gttggttggg cacttgcggt tgatctggtc cgttgcttca 60

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accgcttcta cctcgacaac ggcccactca tcttcccaca aaagtaactg atcacctcga 660

attcgatctc ctctcttcga tctctgcatt atttgatttg attggggatt gtgggcggcg 720

tggcgtggcg tccaggaggt gcggcatggc ggcggccatg gcggcgctga cgaggccgag 780

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gcgcactgct tccagaccac cgacgacgcc accggcaagg tccgcgagtt cgacctcatc 1140

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gatccacatg tgcattcctg tggtacaaat gctgatcgat cgatggatgg atcgattttc 1260

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acaaggagga gctgtacccg gtaaagccgt cggactgcgg taagttcctg gtgctgtccg 1380

tgggcaccgg gtcgacgtcg gaccagggga tgtacacggc gaggcagtgc tcgcggtggg 1440

ggatcgtccg gtggctgcgc aacaagggga tggcgcccat catcgacatc ttcatggcgg 1500

ccagctccga cctcgtcgac atccacgccg ccgtcatgtt ccagtcgctg cacagcgacg 1560

gcgactacct ccgcatccag gacaacacgc tccacggcga cgccgccacg gtggacgccg 1620

ccaccaggga caacatgcgg gcgctcgtcg ggatcggcga gcggatgctg gcgcagcggg 1680

tgtcgagggt caacgtcgag accggcaggt actcgaggtg cccggcgccg gcagcaacgc 1740

cgacgcgctg aggggcttcg ccaggcagct ctccgaggag aggagggcga ggctaggtcg 1800

gcgaaacgcc tgcggcggcg gcggcgaagg agagcccagc ggcgtggcgt gcaagcgtta 1860

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<210> 37

<211> 2285

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> OsMATL-127A-1突变型核酸序列

<400> 37

gggtgagtga ctggagagcc gttggttggg cacttgcggt tgatctggtc cgttgcttca 60

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acaaaccctc ctcgatctca tcttccttcg tctcgtcaat ggcggcgagc tactcgtgcc 300

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cattggcgtt ggaatcagct gattgtttga ttgatcgaac aattgatcgg ttaaaatttt 960

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gacgccgcca cggtggacgc cgccaccagg gacaacatgc gggcgctcgt cgggatcggc 1620

gagcggatgc tggcgcagcg ggtgtcgagg gtcaacgtcg agaccggcag gtacgtcgag 1680

gtgcccggcg ccggcagcaa cgccgacgcg ctgaggggct tcgccaggca gctctccgag 1740

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agcggcgtgg cgtgcaagcg ttagtaactg tacacgcatc atgctgacgc gatctttttt 1860

atttttcttt tttttttttt acctttctag cggacatggg gaataacaag acgtgacagt 1920

agtgcaatcg gtttgtaacg tgcgtatacc aacattgatc catttcttca tcacagtttc 1980

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caaaaatgga ttatctataa atatgccgcc atttttttta aaataaaacg gtaaaatcat 2100

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tacgctgtta aatcaaaagt gattgaaata gggctaaaag cagccatttt tttaaagcag 2220

aaccaatagc aacacatagg ataacatagt taatatttca aattaaaaat tcacattata 2280

tatat 2285

<210> 38

<211> 2318

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> OsMATL-127A-2突变型核酸序列

<400> 38

gggtgagtga ctggagagcc gttggttggg cacttgcggt tgatctggtc cgttgcttca 60

gctcagagct ctcacccgtc tcttccacca aagccgtgtg cccgtgtggg tgtgggtgtg 120

cgcgcacact gcgctcgagc gcccgccaaa aatagttcgc cgtagctcaa aaacgctcac 180

gccgcgcgtt cctgcaaatc acagtgacta gtgacaaacg atcgatcgat ccctccatcc 240

acaaaccctc ctcgatctca tcttccttcg tctcgtcaat ggcggcgagc tactcgtgcc 300

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tcatcccggg caccatcctc gccttcctcg aggccaggct gcaggagctg gatggccccg 480

acgcgcgcct cgctcttcga ctgcatcgcc gggaccagca ccggcggcct catcaccgcc 540

atgctcgccg cgcccggcga ccacggccgc ccgctcttcg ccgccagcga catcaaccgc 600

ttctacctcg acaacggccc actcatcttc ccacaaaagt aactgatcac ctcgaattcg 660

atctcctctc ttcgatctct gcattatttg atttgattgg ggattgtggg cggcgtggcg 720

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tgattgatcg aacaattgat cggttaaaat tttgcaggcg aagagcatgc cgctcaagaa 1020

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acatgtgcat tcctgtggta caaatgctga tcgatcgatg gatggatcga ttttcgcgag 1260

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gaggagctgt acccggtaaa gccgtcggac tgcggtaagt tcctggtgct gtccgtgggc 1380

accgggtcga cgtcggacca ggggatgtac acggcgaggc agtgctcgcg gtgggggatc 1440

gtccggtggc tgcgcaacaa ggggatggcg cccatcatcg acatcttcat ggcggccagc 1500

tccgacctcg tcgacatcca cgccgccgtc atgttccagt cgctgcacag cgacggcgac 1560

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agggacaaca tgcgggcgct cgtcgggatc ggcgagcgga tgctggcgca gcgggtgtcg 1680

agggtcaacg tcgagaccgg caggtacgtc gaggtgcccg gcgccggcag caacgccgac 1740

gcgctgaggg gcttcgccag gcagctctcc gaggagagga gggcgaggct aggtcggcga 1800

aacgcctgcg gcggcggcgg cgaaggagag cccagcggcg tggcgtgcaa gcgttagtaa 1860

ctgtacacgc atcatgctga cgcgatcttt tttatttttc tttttttttt tttacctttc 1920

tagcggacat ggggaataac aagacgtgac agtagtgcaa tcggtttgta acgtgcgtat 1980

accaacattg atccatttct tcatcacagt ttcagttcat cagtatccgc gcagcacaaa 2040

cacgtacacg tacgtacagt cgtacacaac gtacaaaaat ggattatcta taaatatgcc 2100

gccatttttt ttaaaataaa acggtaaaat catttggcat gtatttattt acactataaa 2160

ctctcacatg tttttatggc aactttatat atttacgctg ttaaatcaaa agtgattgaa 2220

atagggctaa aagcagccat ttttttaaag cagaaccaat agcaacacat aggataacat 2280

agttaatatt tcaaattaaa aattcacatt atatatat 2318

<210> 39

<211> 2298

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> OsMATL-003D突变型核酸序列

<400> 39

gggtgagtga ctggagagcc gttggttggg cacttgcggt tgatctggtc cgttgcttca 60

gctcagagct ctcacccgtc tcttccacca aagccgtgtg cccgtgtggg tgtgggtgtg 120

cgcgcacact gcgctcgagc gcccgccaaa aatagttcgc cgtagctcaa aaacgctcac 180

gccgcgcgtt cctgcaaatc acagtgacta gtgacaaacg atcgatcgat ccctccatcc 240

acaaaccctc ctcgatctca tcttccttcg tctcgtcaat ggcggcgagc tactcgtgcc 300

ggcggacatg cgaggcgtgc agcacgaggg cgatggccgg gtgcgtggtg ggcgagccgg 360

cgtcggcgcc ggggcagcgg gtgacgttgc tggcgatcga cggcggcggc atcaggggcc 420

tcatcccggg caccatcctc gccttcctcg aggccaggct gcaggagctg gatggccccg 480

acgcatcgcc gggaccagca ccggcggcct catcaccgcc atgctcgccg cgcccggcga 540

ccacggccgc ccgctcttcg ccgccagcga catcaaccgc ttctacctcg acaacggccc 600

actcatcttc ccacaaaagt aactgatcac ctcgaattcg atctcctctc ttcgatctct 660

gcattatttg atttgattgg ggattgtggg cggcgtggcg tggcgtccag gaggtgcggc 720

atggcggcgg ccatggcggc gctgacgagg ccgaggtaca acggcaagta cctgcagggg 780

aagatcagga agatgctggg cgagacgagg gtgcgcgaca cgctgacgaa cgtcgtcatc 840

cccacgttcg acgtcaggct gctccagcca accatcttct ccacatacga cgtgcgtgcg 900

ttgattccat ccgcattggc gttggaatca gctgattgtt tgattgatcg aacaattgat 960

cggttaaaat tttgcaggcg aagagcatgc cgctcaagaa cgcgctcctc tccgacatct 1020

gcatcagcac atccgcggcg ccgacctacc tccccgcgca ctgcttccag accaccgacg 1080

acgccaccgg caaggtccgc gagttcgacc tcatcgacgg cggcgtcgcc gccaacaacc 1140

cggtaactaa tcaatcaagc aatccatcaa acgaagatcc acatgtgcat tcctgtggta 1200

caaatgctga tcgatcgatg gatggatcga ttttcgcgag aacgtacaga cgatggtggc 1260

catgacgcag atcaccaaga agataatggt gaaggacaag gaggagctgt acccggtaaa 1320

gccgtcggac tgcggtaagt tcctggtgct gtccgtgggc accgggtcga cgtcggacca 1380

ggggatgtac acggcgaggc agtgctcgcg gtgggggatc gtccggtggc tgcgcaacaa 1440

ggggatggcg cccatcatcg acatcttcat ggcggccagc tccgacctcg tcgacatcca 1500

cgccgccgtc atgttccagt cgctgcacag cgacggcgac tacctccgca tccaggacaa 1560

cacgctccac ggcgacgccg ccacggtgga cgccgccacc agggacaaca tgcgggcgct 1620

cgtcgggatc ggcgagcgga tgctggcgca gcgggtgtcg agggtcaacg tcgagaccgg 1680

caggtacgtc gaggtgcccg gcgccggcag caacgccgac gcgctgaggg gcttcgccag 1740

gcagctctcc gaggagagga gggcgaggct aggtcggcga aacgcctgcg gcggcggcgg 1800

cgaaggagag cccagcggcg tggcgtgcaa gcgttagtaa ctgtacacgc atcatgctga 1860

cgcgatcttt tttatttttc tttttttttt tttacctttc tagcggacat ggggaataac 1920

aagacgtgac agtagtgcaa tcggtttgta acgtgcgtat accaacattg atccatttct 1980

tcatcacagt ttcagttcat cagtatccgc gcagcacaaa cacgtacacg tacgtacagt 2040

cgtacacaac gtacaaaaat ggattatcta taaatatgcc gccatttttt ttaaaataaa 2100

acggtaaaat catttggcat gtatttattt acactataaa ctctcacatg tttttatggc 2160

aactttatat atttacgctg ttaaatcaaa agtgattgaa atagggctaa aagcagccat 2220

ttttttaaag cagaaccaat agcaacacat aggataacat agttaatatt tcaaattaaa 2280

aattcacatt atatatat 2298

<210> 40

<211> 2316

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> OsMATL-288A突变型核酸序列

<400> 40

gggtgagtga ctggagagcc gttggttggg cacttgcggt tgatctggtc cgttgcttca 60

gctcagagct ctcacccgtc tcttccacca aagccgtgtg cccgtgtggg tgtgggtgtg 120

cgcgcacact gcgctcgagc gcccgccaaa aatagttcgc cgtagctcaa aaacgctcac 180

gccgcgcgtt cctgcaaatc acagtgacta gtgacaaacg atcgatcgat ccctccatcc 240

acaaaccctc ctcgatctca tcttccttcg tctcgtcaat ggcggcgagc tactcgtgcc 300

ggcggacatg cgaggcgtgc agcacgaggg cgatggccgg gtgcgtggtg ggcgagccgg 360

cgtcggcgcc ggggcagcgg gtgacgttgc tggcgatcga cggcggcggc atcaggggcc 420

tcatcccggg caccatcctc gccttcctcg aggccaggct gcaggagctg gatggccccg 480

acgcgcgcct cgccgattac ttcgactgca tcgccgggac cagcaccggc ggcctcatca 540

ccgccatgct cgccgcgccc ggcgaccacg gccgcccgct cttcgccgcc agcgacatca 600

accgcttcta cctcgacaac ggcccactca tcttcccaca aaagtaactg atcacctcga 660

attcgatctc ctctcttcga tctctgcatt atttgatttg attggggatt gtgggcggcg 720

tggcgtggcg tccaggaggt gcggcatggc ggcggccatg gcggcgctga cgaggccgag 780

gtacaacggc aagtacctgc aggggaagat caggaagatg ctgggcgaga cgagggtgcg 840

cgacacgctg acgaacgtcg tcatccccac gttcgacgtc aggctgctcc agccaaccat 900

cttctccaca tacgacgtgc gtgcgttgat tccatccgca ttggcgttgg aatcagctga 960

ttgtttgatt gatcgaacaa ttgatcggtt aaaattttgc aggcgaagag catgccgctc 1020

aagaacgcgc tcctctccga catctgcatc agcacatccg cggcgccgac ctacctcccc 1080

gcgcactgct tccagaccac cgacgacgcc accggcaagg tccgcgagtt cgacctcatc 1140

gacggcggcg tcgccgccaa caacccggta actaatcaat caagcaatcc atcaaacgaa 1200

gatccacatg tgcattcctg tggtacaaat gctgatcgat cgatggatgg atcgattttc 1260

gcgagaacgt acagacgatg gtggccatga cgcagatcac caagaagata atggtgaagg 1320

acaaggagga gctgtacccg gtaaagccgt cggactgcgg taagttcctg gtgctgtccg 1380

tgggcaccgg gtcgacgtcg gaccagggga tgtacacggc gaggcagtgc tcgcggtggg 1440

ggatcgtccg gtggctgcgc aacaagggga tggcgcccat catcgacatc ttcatggcgg 1500

ccagctccga cctcgtcgac atccacgccg ccgtcatgtt ccagtcgctg cacagcgacg 1560

gcgactacct ccgcatccag gacaacacgc tccacggcga cgccgccacg gtggacgccg 1620

ccaccaggga caacatgcgg gcgctcgtcg ggatcggcga gcggatgctg gcgcagcggg 1680

tgtcgagggt caacgtcgag accggctcga ggtgcccggc gccggcagca acgccgacgc 1740

gctgaggggc ttcgccaggc agctctccga ggagaggagg gcgaggctag gtcggcgaaa 1800

cgcctgcggc ggcggcggcg aaggagagcc cagcggcgtg gcgtgcaagc gttagtaact 1860

gtacacgcat catgctgacg cgatcttttt tatttttctt tttttttttt tacctttcta 1920

gcggacatgg ggaataacaa gacgtgacag tagtgcaatc ggtttgtaac gtgcgtatac 1980

caacattgat ccatttcttc atcacagttt cagttcatca gtatccgcgc agcacaaaca 2040

cgtacacgta cgtacagtcg tacacaacgt acaaaaatgg attatctata aatatgccgc 2100

catttttttt aaaataaaac ggtaaaatca tttggcatgt atttatttac actataaact 2160

ctcacatgtt tttatggcaa ctttatatat ttacgctgtt aaatcaaaag tgattgaaat 2220

agggctaaaa gcagccattt ttttaaagca gaaccaatag caacacatag gataacatag 2280

ttaatatttc aaattaaaaa ttcacattat atatat 2316

<210> 41

<211> 2321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> OsMATL-068A突变型核酸序列

<400> 41

gggtgagtga ctggagagcc gttggttggg cacttgcggt tgatctggtc cgttgcttca 60

gctcagagct ctcacccgtc tcttccacca aagccgtgtg cccgtgtggg tgtgggtgtg 120

cgcgcacact gcgctcgagc gcccgccaaa aatagttcgc cgtagctcaa aaacgctcac 180

gccgcgcgtt cctgcaaatc acagtgacta gtgacaaacg atcgatcgat ccctccatcc 240

acaaaccctc ctcgatctca tcttccttcg tctcgtcaat ggcggcgagc tactcgtgcc 300

ggcggacatg cgaggcgtgc agcacgaggg cgatggccgg gtgcgtggtg ggcgagccgg 360

cgtcggcgcc ggggcagcgg gtgacgttgc tggcgatcga cggcggcggc atcaggggcc 420

tcatcccggg caccatcctc gccttcctcg aggccaggct gcaggagctg gatggccccg 480

acgcgcgcct cgcattactt cgactgcatc gccgggacca gcaccggcgg cctcatcacc 540

gccatgctcg ccgcgcccgg cgaccacggc cgcccgctct tcgccgccag cgacatcaac 600

cgcttctacc tcgacaacgg cccactcatc ttcccacaaa agtaactgat cacctcgaat 660

tcgatctcct ctcttcgatc tctgcattat ttgatttgat tggggattgt gggcggcgtg 720

gcgtggcgtc caggaggtgc ggcatggcgg cggccatggc ggcgctgacg aggccgaggt 780

acaacggcaa gtacctgcag gggaagatca ggaagatgct gggcgagacg agggtgcgcg 840

acacgctgac gaacgtcgtc atccccacgt tcgacgtcag gctgctccag ccaaccatct 900

tctccacata cgacgtgcgt gcgttgattc catccgcatt ggcgttggaa tcagctgatt 960

gtttgattga tcgaacaatt gatcggttaa aattttgcag gcgaagagca tgccgctcaa 1020

gaacgcgctc ctctccgaca tctgcatcag cacatccgcg gcgccgacct acctccccgc 1080

gcactgcttc cagaccaccg acgacgccac cggcaaggtc cgcgagttcg acctcatcga 1140

cggcggcgtc gccgccaaca acccggtaac taatcaatca agcaatccat caaacgaaga 1200

tccacatgtg cattcctgtg gtacaaatgc tgatcgatcg atggatggat cgattttcgc 1260

gagaacgtac agacgatggt ggccatgacg cagatcacca agaagataat ggtgaaggac 1320

aaggaggagc tgtacccggt aaagccgtcg gactgcggta agttcctggt gctgtccgtg 1380

ggcaccgggt cgacgtcgga ccaggggatg tacacggcga ggcagtgctc gcggtggggg 1440

atcgtccggt ggctgcgcaa caaggggatg gcgcccatca tcgacatctt catggcggcc 1500

agctccgacc tcgtcgacat ccacgccgcc gtcatgttcc agtcgctgca cagcgacggc 1560

gactacctcc gcatccagga caacacgctc cacggcgacg ccgccacggt ggacgccgcc 1620

accagggaca acatgcgggc gctcgtcggg atcggcgagc ggatgctggc gcagcgggtg 1680

tcgagggtca acgtcgagac cggcaggtac gtcgaggtgc ccggcgccgg cagcaacgcc 1740

gacgcgctga ggggcttcgc caggcagctc tccgaggaga ggagggcgag gctaggtcgg 1800

cgaaacgcct gcggcggcgg cggcgaagga gagcccagcg gcgtggcgtg caagcgttag 1860

taactgtaca cgcatcatgc tgacgcgatc ttttttattt ttcttttttt ttttttacct 1920

ttctagcgga catggggaat aacaagacgt gacagtagtg caatcggttt gtaacgtgcg 1980

tataccaaca ttgatccatt tcttcatcac agtttcagtt catcagtatc cgcgcagcac 2040

aaacacgtac acgtacgtac agtcgtacac aacgtacaaa aatggattat ctataaatat 2100

gccgccattt tttttaaaat aaaacggtaa aatcatttgg catgtattta tttacactat 2160

aaactctcac atgtttttat ggcaacttta tatatttacg ctgttaaatc aaaagtgatt 2220

gaaatagggc taaaagcagc cattttttta aagcagaacc aatagcaaca cataggataa 2280

catagttaat atttcaaatt aaaaattcac attatatata t 2321

Claims (23)

1.一种创制水稻单倍体诱导系的方法，其包括修饰或删除水稻OsMATL基因，从而使得该基因表达降低或失活。

2.根据权利要求1所述的方法，其中对所述水稻OsMATL基因进行基因编辑从而创制水稻单倍体诱导系，其包括通过序列特异性核酸酶编辑水稻OsMATL基因。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述序列特异性核酸酶选自CRISPR/Cas9、TALEN、meganuclease和ZFN。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述Cas9的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，或者所述Cas9的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述水稻OsMATL基因由SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列组成，或者编码SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列。

6.根据权利要求2-5中任一项所述的方法，其中用于实施编辑的导向RNA是单组分导向RNA或双组分导向RNA。

7.根据权利要求6所述的方法，其中用于实施编辑的导向RNA靶向水稻OsMATL基因的1号外显子或4号外显子。

8.根据权利要求7所述的方法，其中用于实施编辑的导向RNA靶向水稻OsMATL基因的1号外显子，靶位点序列为SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列。

9.根据权利要求7所述的方法，其中用于实施编辑的导向RNA靶向水稻OsMATL基因的4号外显子，靶位点序列为SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列。

10.根据权利要求6-9中任一项所述的方法，其中用于实施编辑的导向RNA是双组分导向RNA，并且在用于实施编辑的导向RNA中，crRNA的骨架序列如SEQ ID NO:7所示和tracrRNA的序列如SEQ ID NO:8所示。

11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述水稻为籼稻或粳稻。

12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中在所述方法中使用转基因筛选标记来进行筛选。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述转基因筛选标记为玉米泛素启动子Ubi驱动的磷酸甘露糖异构酶。

14.根据权利要求1-13中任一项所述的方法，其中所创制的水稻单倍体诱导系的OsMATL基因的核酸序列为SEQ ID NO:34～41中任一个所示的突变型核酸序列。

15.通过根据权利要求1-14中任一项所述的方法而创制的水稻单倍体诱导系用于水稻育种或者用于在水稻中进行基因编辑的用途。

16.通过根据权利要求1-14中任一项所述的方法而创制的水稻单倍体诱导系作为父本与其它水稻品种进行杂交的用途，其中杂交后代包括母本单倍体。

17.根据权利要求16所述的用途，其中其它水稻品种为籼稻自交系RL73、TB12或MN024529。

18.根据权利要求16或17所述的用途，其中在杂交后代中母本单倍体比例达到或超过5％。

19.通过根据权利要求1-14中任一项所述的方法而创制的水稻单倍体诱导系用于产生水稻单倍体的用途。

20.通过根据权利要求1-14中任一项所述的方法所创制的水稻单倍体诱导系用于产生新的单倍体诱导系的用途，其中在所述水稻单倍体诱导系中的OsMATL突变型基因通过杂交转育的方法而转到其它水稻品系中，从而产生新的单倍体诱导系。

21.水稻突变型OsMATL基因，其核酸序列由SEQ ID NO:34～41中任一个所示。

22.针对水稻OsMATL基因的1号外显子的靶位点序列，其由SEQ ID NO:5的核苷酸序列组成。

23.针对水稻OsMATL基因的4号外显子的靶位点序列，其由SEQ ID NO:6的核苷酸序列组成。