CN109828054A - Gpc-lc-ms-ms法测定食品中工业染料的方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于食品检测技术领域，特别公开了一种GPC‑LC‑MS‑MS法测定食品中工业染料的方法，其采用氨水‑乙腈溶液提取食品中苏丹红Ⅰ‑Ⅳ、碱性橙2、碱性橙21、碱性橙22、碱性嫩黄和罗丹明B这9种工业染料，收集总上清液，再用GPC柱去除总上清液中的油脂和色素，最后上液相‑串联质谱仪进行测定。本发明的检测方法省去了对样品分开检测，提高了食品中工业染料检测的效率，具有良好的检测准确度。

Description

GPC-LC-MS-MS法测定食品中工业染料的方法

技术领域

本发明属于食品检测技术领域，特别涉及GPC-LC-MS-MS法测定食品中工业染料的方法。

背景技术

色素可以分为天然色素和合成色素。天然色素着色力和耐光性较差，因此合成色素更受人们的青睐。根据《食品添加剂使用标准(GB 2760-2014)》，我国仅允许使用柠檬黄、胭脂红等11种合成色素。然而合成色素种类繁多，一些不法商家为了增强着色效果，在食品中添加我国明令禁止使用的工业染料，如苏丹红Ⅰ-Ⅳ、碱性橙2、碱性橙21、碱性橙22、碱性嫩黄、罗丹明B等，这些违禁的工业染料经人体代谢后可生成萘胺等致癌性物质，长期摄入会对人体造成损害。

食品中违禁的工业染料的检测方法主要包括高效液相色谱法和高效液相色谱串联质谱法。目前，许多实验室以及检测机构在检测食品中的工业染料时，采用GB/T 19681-2005的标准测定食品中苏丹红染料，同时采用DB33/T 703-2008的标准测定食品中多种碱性工业染料，如此将样品分开进行检测，需要不断的调整实验参数和步骤，使得食品中工业染料的检测效率较低。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供GPC-LC-MS-MS法测定食品中工业染料的方法，其可以采用同一种的检测方法对食品中苏丹红Ⅰ-Ⅳ、碱性橙2、碱性橙21、碱性橙22、碱性嫩黄和罗丹明B这9种工业染料加以测定，省去了将样品分开检测造成的麻烦，提高了食品中工业染料的检测效率。

为实现上述第一个目的，本发明提供了如下技术方案：

一种GPC-LC-MS-MS法测定食品中工业染料的方法，包括如下步骤：

①、样品前处理

a、称取2-5g样品于50mL离心管中，加入10-20mL氨水-乙腈溶液，漩涡振荡1min后，在超声波清洗器中超声提取10min，再放入冷冻高速离心机中以5000r/min离心10min，取上清液转移至鸡心瓶中；

b、在a中的离心管中再次加入10-20mL氨水-乙腈溶液，将离心管内的残渣和氨水-乙腈溶液漩涡振荡1min后，在超声波清洗器中超声提取10min，再放入冷冻高速离心机中以5000r/min离心10min，取上清液合并于a中的鸡心瓶中，得到总上清液；

②、GPC法净化

c、将b中得到的总上清液减压旋转蒸干至体积为5mL，环己烷-乙酸乙酯定容至10mL，滤膜过滤后上GPC柱，以环己烷和乙酸乙酯为流动相洗脱，收集洗脱液；

③、LC-MS-MS法测定

d、将步骤c收集的洗脱液转移至离心管中，在温度为40℃的氮吹仪上用氮气吹干，用甲酸-水溶液准确定容至1mL，滤膜过滤后得到待测液，上液相-串联质谱仪检测。

通过采用上述技术方案，当提取溶剂为纯有机试剂时，各物质的提取效率存在较大的差异，本发明采用氨水-乙腈溶液作为提取液，可有效提高苏丹红Ⅰ-Ⅳ、碱性橙2、碱性橙21、碱性橙22、碱性嫩黄和罗丹明B这9种工业染料的提取效率，以便于对食品中工业染料的测定，省去了将上述9种工业染料分开检测所造成的麻烦，提高了食品工业染料检测的效率。

此外，本发明采用GPC去除食品中的油脂和色素，以达到净化的目的，保证检测的精确度，以此省去了现行标准中去脂肪及去色素的步骤，提高了食品中工业染料检测的效率，具有检测步骤简洁、操作方便的特点。

进一步地，步骤①中，氨水-乙腈溶液中氨水的体积分数为3％。

通过采用上述技术方案，申请人经过大量试验获得，当氨水-乙腈溶液中氨水的体积分数为3％时，可最大化提高苏丹红Ⅰ-Ⅳ、碱性橙2、碱性橙21、碱性橙22、碱性嫩黄和罗丹明B这9种工业染料的提取效率。

进一步地，步骤②中，环己烷和乙酸乙酯的体积比为1:1。

通过采用上述技术方案，环己烷和乙酸乙酯对苏丹红Ⅰ-Ⅳ、碱性橙2、碱性橙21、碱性橙22、碱性嫩黄和罗丹明B这9种工业染料具有良好的溶解度，并对凝胶柱中的凝胶有一定的膨胀力，能够有效将大分子油脂以及色素与工业染料进行分离，有利于后续的液相-串联质谱对上述9种工业染料的检测。

进一步地，步骤②中的滤膜为孔径为0.22μm的有机相滤膜。

通过采用上述技术方案，一般的细菌等微生物难以通过孔径为0.22μm的滤膜，由此不但能够去除一些大分子物质，还能去除细菌等微生物，降低GPC柱堵塞的可能性；此外，由于环己烷和乙酸乙酯均为有机物，选用有机相滤膜能够便于环己烷和乙酸乙酯的快速透过，能够较好的提高样品的过滤效率。

进一步地，步骤③中，甲酸-水溶液中甲酸的体积分数为0.1％。

通过采用上述技术方案，甲酸-水溶液中甲酸的体积分数为0.1％时，能够较好的对苏丹红Ⅰ-Ⅳ、碱性橙2、碱性橙21、碱性橙22、碱性嫩黄和罗丹明B这9种工业染料具有良好的溶解度，对该工业染料加以缓冲，便于后续在液相-串联质谱仪上进行测定。

进一步地，步骤③中的滤膜为孔径为0.22μm的水系滤膜。

通过采用上述技术方案，甲酸-水溶液为水系，采用水系滤膜便于含有工业染料的甲酸-水溶液通过，使得细菌等异物被拦截，降低色谱柱发生堵塞的可能，具有较好的过滤效率。

进一步地，步骤③中，待测液所使用的色谱柱为C18色谱柱。

通过采用上述技术方案，C18色谱柱相对于其他色谱柱具有较长的碳链，由于苏丹红Ⅰ-Ⅳ、碱性橙2、碱性橙21、碱性橙22、碱性嫩黄和罗丹明B这9种工业染料的分子量通常较小，采用C18能够较好的对这9种工业染料加以分析和分离，保证液相-串联质谱良好的准确度。

进一步地，步骤③中，待测液的洗脱温度为20-25℃。

通过采用上述技术方案，在通常情况下，为了便于样品的快速洗脱，需要将液相-串联质谱仪的洗脱温度控制在30℃，而本发明在室20-25℃便能快速有效将工业燃料分离出，减少了测定食品中工业染料的能耗，降低了检测成本；另外，本发明的洗脱温度为20-25℃，一般实验室的室温能够达到这个标准，因此可以省去对色谱柱的加热控制，能够减少色谱柱加热时对元器件的损坏，在一定程度还能延长仪器的使用寿命。

进一步地，步骤③中，待测液以乙腈和甲酸体积分数为0.1％的甲酸-水溶液为流动相进行洗脱。

通过采用上述技术方案，乙腈和甲醇均是优良的有机溶剂，两者的极性和溶剂强度相差较小，但是乙腈的吸收远低于甲醇，在使用梯度洗脱的方式时，乙腈所引起的基线漂移远小于甲醇，使得得到的色谱图不仅美观，样品的检出限也能够降低许多；乙腈能与甲酸-水溶液无限互溶，将甲酸体积分数为0.1％的甲酸-水溶液与乙腈配合使用，能够便于工业染料的快速洗脱。

进一步地，步骤③中，流动相按体积分数计，待测液的洗脱步骤为：

0.00-2.00min：乙腈10％+甲酸-水溶液90％；

2.01-8.00min：乙腈40％+甲酸-水溶液60％；

8.01-20.00min：乙腈100％+甲酸-水溶液0％；

20.01-25.00min：乙腈10％+甲酸-水溶液90％。

通过采用上述技术方案，在洗脱过程中，0.00-2.00min是平衡色谱柱，2.01-8.00min是通过梯度洗脱的目的将苏丹红Ⅰ-Ⅳ、碱性橙2、碱性橙21、碱性橙22、碱性嫩黄和罗丹明B这9种工业染料洗脱出来，8.01-20.00min是保持高流动相比例的情况下将剩余物质洗脱出来，20.01-25.00min是完成了检测后将流动相比例调回到初始状态并平衡色谱柱，为下一次进样做好准备。相对于国标中检测苏丹红所需的40min，本发明有效缩短了苏丹红的洗脱时间，又能将碱性染料有效分离，具有较高的准确度。

综上所述，本发明具有以下有益效果：

1、本发明采用能够适用于食品中苏丹红Ⅰ-Ⅳ、碱性橙2、碱性橙21、碱性橙22、碱性嫩黄和罗丹明B这9种工业染料的测定，省去了对样品分开检测，再结合GPC法去除食品中的油脂和色素，提高了食品中工业染料检测的效率，具有良好的检测准确度。

2、本发明中待测液的洗脱温度为室温，减少了测定食品中工业染料的能耗，降低了检测成本，同时还能在一定程度上延长仪器的使用寿命。

3、本发明中以乙腈和甲酸体积分数为0.1％的甲酸-水溶液为流动相，并按制定的洗脱步骤来洗脱待测液，不但有效缩短了苏丹红的洗脱时间，又能将碱性染料有效分离，具有较高的准确度。

附图说明

图1为GPC-LC-MS-MS法测定食品中工业染料的方法步骤；

图2为苏丹红Ⅰ的定性及定量的色谱图；

图3为苏丹红Ⅱ的定性及定量的色谱图；

图4为苏丹红Ⅲ的定性及定量的色谱图；

图5为苏丹红Ⅳ的定性及定量的色谱图；

图6为碱性橙2的定性及定量的色谱图；

图7为碱性橙21的定性及定量的色谱图；

图8为碱性橙22的定性及定量的色谱图；

图9为碱性嫩黄的定性及定量的色谱图；

图10为罗丹明B的定性及定量的色谱图；

其中，在色谱图中，左边的1为定性色谱图，右边的2为定量色谱图。

具体实施方式

以下结合附图对本发明作进一步详细说明。

1、试剂与仪器

1.1、试剂

1.1.1实验室用水(经纯水机净化)。

1.1.2无水硫酸钠：化学纯。

1.1.3甲醇：色谱纯。

1.1.4环己烷：色谱纯。

1.1.5乙酸乙酯：色谱纯。

1.1.6乙腈：色谱纯。

1.1.7甲酸：色谱纯。

1.1.8无水乙醇：分析纯。

1.1.9丙酮：分析纯。

1.1.10正己烷：分析纯。

1.1.11苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ、碱性橙2，碱性橙21、碱性橙22、碱性嫩黄和罗丹明B标准物质，均为市售添加剂并含有对应的证书。

1.1.12氨水：分析纯。

1.2、试剂的配制

1.2.1混合标准储备液：分别准确称取苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ、碱性橙2、碱性橙21、碱性橙22、碱性嫩黄和罗丹明B的标准品各1mg于100mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，作为10μg/mL的混合标准储备液，在-4℃条件下可储存3个月。

1.2.2标准中间液：吸取0.1mL混合标准储备液于10mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，作为0.1μg/mL(100ng/mL)的标准中间液，在-4℃条件下可储存1个月。

1.2.3混合标准工作液：将标准中间液用乙腈稀释成1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL、50.0ng/mL的系列混合标准工作液，上机测试，做出相应的标准曲线。

1.2.4加标样品：将测试过的阴性样品内加入100ng/mL，作为回收率测试。本发明中，具体使用市售的辣椒粉、辣椒油、辣椒酱、腊鸡腿肉作为样品，分别代表粉状样品、油状样品、含水量较大的样品和肉制品加以验证。

1.3、仪器

1.3.1液相色谱-串联质谱仪(LC-MS-MS)：配备ESI电喷雾离子源，购自美国AB SCIEX科技有限公司，型号规格为1260LC/API4000MS。

1.3.2凝胶色谱仪(GPC)：购自德国Lctech公司，型号规格为Freestyle。

1.3.3冷冻高速离心机：购自宁波江东宇科仪器器材有限公司，型号规格为3K15。

1.3.4超声波清洗器：购自宁波新芝生物科技股份有限公司，型号规格为SB-8000DT。

1.3.5电子分析天平：为赛多利斯，精确度为0.01mg。

1.3.6分析天平:为赛多利斯，精确度为0.01g。

1.3.7旋涡振荡仪：购自上海精密仪器仪表公司，型号为XW-80A。

1.3.8旋转蒸发仪：购自宁波江东宇科仪器器材有限公司，型号为RV10C。

2、实施例及对比例

2.1、实施例1

2.1.1、GPC-LC-MS-MS法测定食品中工业染料的方法

包括如下步骤：

①、样品前处理

a、称取2g样品于50mL离心管中，加入氨水体积分数为3％的氨水-乙腈溶液10mL，漩涡振荡1min后，在超声波清洗器中超声提取10min，再放入冷冻高速离心机中以5000r/min离心10min，取上清液转移至鸡心瓶中。

b、在a中的离心管中再次加入氨水体积分数为3％的氨水-乙腈溶液10mL，将离心管内的残渣和氨水-乙腈溶液漩涡振荡1min后，在超声波清洗器中超声提取10min，再放入冷冻高速离心机中以5000r/min离心10min，取上清液合并于a中的鸡心瓶中，得到总上清液。

②、GPC法净化

c、将b中得到的总上清液减压旋转蒸干至体积为5mL，环己烷-乙酸乙酯(体积比为1:1)定容至10mL，0.22μm有机相滤膜过滤后上GPC柱，以体积比为1:1的环己烷和乙酸乙酯为流动相进行洗脱，收集洗脱液。

③、LC-MS-MS法测定

d、将步骤c收集的洗脱液转移至离心管中，在温度为40℃的氮吹仪上用氮气吹干，用甲酸的体积分数为0.1％的甲酸-水溶液准确定容至1mL，0.22μm水系滤膜过滤后得到待测液，上液相-串联质谱仪检测。

液相色谱条件为：

1)色谱柱：Kinetex(4.6mm*100mm，2.6μm)C18柱；

2)柱温：25℃；

3)进样量：10μL；

4)流速：400μL/min；

5)流动相：A为乙腈，B为甲酸体积分数为0.1％的甲酸-水溶液，洗脱梯度见下表一。

表一 液相洗脱梯度

时间/min	A/％	B/％
			0.00-2.00	10.00	90.00
2.01-8.00	40.00	60.00
			8.01-20.00	100.00	0.00
20.01-25.00	10.00	90.00

质谱条件为：

1)电喷雾电压(IS):5500V；

2)雾化气压力(GS1):10psi；

3)气帘气压力(CUR):20psi；

4)辅助气压力(GS2):30psi；

5)离子源温度(TEM)：450℃；

6)碰撞气(CAD):8；

7)离子源：电喷雾(ESI)，正离子模式；

8)检测方式：多反应离子监测(MRM)；

苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ、碱性橙2，碱性橙21、碱性橙22、碱性嫩黄和罗丹明B这9种工业染料对应的定性离子对、定量离子对、驻留时间(Dwelltime)、去簇电压(DP)、入口电压(EP)、碰撞能量(CE)及碰撞室出口电压(CXP)参数见下表二。

表二 九种工业染料的质谱检测参数

定性测定：

在相同实验条件下，样品中待测物与同时检测的标准物质具有相同的保留时间，且样品图谱中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的混合基质标准校准溶液谱图中对应的定性离子的相对丰度进行比较，若偏差不超过表三规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。

表三 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差

相对离子丰度	＞50	＞20-50	＞10-20	≤10
					允许的最大偏差	±20	±25	±30	±50

定量测定：

对20ng/mL的混合标准工作液进样，以强度为纵坐标、时间为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下，九种工业染料的定性和定量色谱图参见图2-图10，其中1代表定性色谱图，2代表定量色谱图。

2.1.2、线性关系及相关系数

将1.2.3中的混合标准工作液作为样品，按上述2.1.1的方法测定九种工业染料的含量，以浓度为横坐标、以离子丰度为纵坐标，绘制标准曲线，具体线性关系和相关系数见下表四。由表四可得，按本发明的方法检测时其线性关系r均＞0.998，具有良好的线性关系，由此获得的检测结果具有良好的稳定性和准确性。

表四 九种工业染料的线性关系及相关系数

名称	线性方程	相关系数r
			碱性嫩黄O	Y＝43168.0x+131282	0.99875
罗丹明B	Y＝85631.8x+297193	0.99824
			碱性橙21	Y＝37911.5x-4440.5	0.99831
碱性橙22	Y＝89753.3x-254356	0.99840
			碱性橙2	Y＝744.36527x+1682.93149	0.99875
苏丹红Ⅰ	Y＝11733.78908x-20858.7559	0.99890
			苏丹红Ⅱ	Y＝10841.86994x+31745.7	0.99873
苏丹红Ⅲ	Y＝3228.81591x-12069.59471	0.99954
			苏丹红Ⅳ	Y＝7096.59747x-18114.98046	0.99987

2.1.3、线性范围、检出限和定量限

将1.2.2中的标准中间液用乙腈稀释至适当浓度倍数后作为样品，按上述2.1.1的方法测定九种工业染料相应的线性范围、检出限和定量限，具体检测结果见下表五。由表五可得，采用本实施的方法在测定食品中九种工业染料的含量时，其检出限最低可达0.32μg/kg，定量限最低可达3.0μg/kg，由此本发明的检测方法具有较高的灵敏度，尤其对于碱性嫩黄、罗丹明B、碱性橙21和碱性橙22的检测灵敏度较高。

表五 九种工业染料的线性范围、检出限和定量限

名称	线性范围ng/mL	检出限μg/kg	定量限μg/kg
				碱性嫩黄O	1-200	0.32	3.0
罗丹明B	1-200	0.43	4.1
				碱性橙21	1-200	0.33	3.0
碱性橙22	1-200	0.35	3.8
				碱性橙2	10-200	1.8	12.0
苏丹红Ⅰ	2-200	0.6	8.2
				苏丹红Ⅱ	2-200	0.8	9.3
苏丹红Ⅲ	5-200	1.2	10.0
				苏丹红Ⅳ	2-200	0.9	8.2

2.1.4、回收率和相对标准偏差

将1.2.4中的加标样品按上述2.1.1的方法分别测定九种工业染料的含量，以此计算其对应的回收率和相对标准偏差(RSD)，具体检测结果见下表六、表七、表八和表九。由表六至表九可得，采用本发明的检测方法测定辣椒粉、辣椒油、辣椒酱和腊鸡腿肉中的九种工业染料时，其回收率在80.0％-95.6％中，相对标准偏差在0.2％-7.0％中，由此本发明的方法能够较好的对粉状样品、油状样品、含水量较大的样品以及肉制品中九种工业染料的含量加以测定，且具有良好的检测准确度。

表六 辣椒粉中九种工业染料的回收率和相对标准偏差

表七 辣椒油中九种工业染料的回收率和相对标准偏差

表八 辣椒酱中九种工业染料的回收率和相对标准偏差

表九 腊鸡腿肉中九种工业染料的回收率和相对标准偏差

2.2、实施例2

与实施例1的不同之处在于，本实施例在步骤①中，样品的添加量为5g，氨水-乙腈溶液的添加量为20mL；步骤③中，待测液洗脱温度为20℃。

2.3、实施例3

与实施例1的不同之处在于，本实施例在步骤①中，样品的添加量为3g，氨水-乙腈溶液的添加量为10mL；步骤③中，待测液洗脱温度为23℃。

2.4、实施例4

与实施例1的不同之处在于，本实施例在步骤①中，氨水-乙腈溶液的氨水体积分数为2％。

2.5、实施例5

与实施例1的不同之处在于，本实施例在步骤②中，环己烷和乙酸乙酯的体积比为2:1。

2.6、实施例6

与实施例1的不同之处在于，本实施例在步骤③中，甲酸-水溶液中甲酸的体积分数为0.2％。

2.7、实施例7

与实施例1的不同之处在于，本实施例在步骤③中，待测液洗脱温度为30℃。

2.8、实施例8

与实施例1的不同之处在于，本实施例在步骤③中，待测液以甲醇和甲酸体积分数为0.1％的甲酸-水溶液为流动相进行洗脱。

2.9、对比例1

与实施例1的不同之处在于，本对比例在步骤①中，将氨水-乙腈溶液换成无水乙醇。

2.10、对比例1

与实施例1的不同之处在于，本对比例在步骤③中，将甲酸-水溶液替换成丙酮体积分数为5％的丙酮-正己烷液。

将实施例2-实施例8以及对比例1-对比例2按照上述2.1.2-2.1.4的检测指标进行验证实验。其中，实施例2至实施例8所获得的检测结果与实施例1的检测结果之间的差异在实验误差范围内，且实施例2、实施例3、实施例7的检测结果与实施例1的检测结果更为接近，具有良好的线性关系、灵敏度和准确度，具体结果见下表十。

表十 实施例1至实施例8以及对比例1至对比例2的检测结果对比

综上所述，本发明所公开的检测方法能够准确快速的对食品中苏丹红Ⅰ-Ⅳ、碱性橙2、碱性橙21、碱性橙22、碱性嫩黄和罗丹明B这9种工业染料加以测定，省去了将样品分开检测造成的麻烦，提高了食品中工业染料的检测效率，具有良好的线性关系、灵敏度和准确度。

本具体实施例仅仅是对本发明的解释，其并不是对本发明的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本发明的权利要求范围内都受到专利法的保护。

Claims (10)

1.一种GPC-LC-MS-MS法测定食品中工业染料的方法，其特征在于，包括如下步骤：

①、样品前处理

a、称取2-5g样品于50mL离心管中，加入10-20mL氨水-乙腈溶液，漩涡振荡1min后，在超声波清洗器中超声提取10min，再放入冷冻高速离心机中以5000r/min离心10min，取上清液转移至鸡心瓶中；

b、在a中的离心管中再次加入10-20mL氨水-乙腈溶液，将离心管内的残渣和氨水-乙腈溶液漩涡振荡1min后，在超声波清洗器中超声提取10min，再放入冷冻高速离心机中以5000r/min离心10min，取上清液合并于a中的鸡心瓶中，得到总上清液；

②、GPC法净化

c、将b中得到的总上清液减压旋转蒸干至体积为5mL，环己烷-乙酸乙酯定容至10mL，滤膜过滤后上GPC柱，以环己烷和乙酸乙酯为流动相洗脱，收集洗脱液；

③、LC-MS-MS法测定

d、将步骤c收集的洗脱液转移至离心管中，在温度为40℃的氮吹仪上用氮气吹干，用甲酸-水溶液准确定容至1mL，滤膜过滤后得到待测液，上液相-串联质谱仪检测。

2.根据权利要求1所述的GPC-LC-MS-MS法测定食品中工业染料的方法，其特征在于，步骤①中，氨水-乙腈溶液中氨水的体积分数为3％。

3.根据权利要求1所述的GPC-LC-MS-MS法测定食品中工业染料的方法，其特征在于，步骤②中，环己烷和乙酸乙酯的体积比为1:1。

4.根据权利要求1所述的GPC-LC-MS-MS法测定食品中工业染料的方法，其特征在于，步骤②中的滤膜为孔径为0.22μm的有机相滤膜。

5.根据权利要求1所述的GPC-LC-MS-MS法测定食品中工业染料的方法，其特征在于，步骤③中，甲酸-水溶液中甲酸的体积分数为0.1％。

6.根据权利要求1所述的GPC-LC-MS-MS法测定食品中工业染料的方法，其特征在于，步骤③中的滤膜为孔径为0.22μm的水系滤膜。

7.根据权利要求1所述的GPC-LC-MS-MS法测定食品中工业染料的方法，其特征在于，步骤③中，待测液所使用的色谱柱为C18色谱柱。

8.根据权利要求1所述的GPC-LC-MS-MS法测定食品中工业染料的方法，其特征在于，步骤③中，待测液的洗脱温度为20-25℃。

9.根据权利要求1所述的GPC-LC-MS-MS法测定食品中工业染料的方法，其特征在于，步骤③中，待测液以乙腈和甲酸体积分数为0.1％的甲酸-水溶液为流动相进行洗脱。

10.根据权利要求9所述的GPC-LC-MS-MS法测定食品中工业染料的方法，其特征在于，步骤③中，流动相按体积分数计，待测液的洗脱步骤为：

0.00-2.00min：乙腈10％+甲酸-水溶液90％；

2.01-8.00min：乙腈40％+甲酸-水溶液60％；

8.01-20.00min：乙腈100％+甲酸-水溶液0％；

20.01-25.00min：乙腈10％+甲酸-水溶液90％。