CN109797130B

CN109797130B - 一种细胞提取液及其应用

Info

Publication number: CN109797130B
Application number: CN201910109525.1A
Authority: CN
Inventors: 赵彬; 沈红安
Original assignee: Xiaogan Hongxiang Biomedical Instruments Co ltd
Current assignee: Xiaogan Hongxiang Biomedical Instruments Co ltd
Priority date: 2019-01-18
Filing date: 2019-01-18
Publication date: 2020-11-27
Anticipated expiration: 2039-01-18
Also published as: CN109797130A

Abstract

本发明提供了一种细胞提取液及其应用，属于药剂技术领域，所述细胞提取液包括以下重量份数的组分：丙三醇29～35份、氯化钾0.005～0.015份、磷酸二氢钾0.01～0.03份、磷酸氢二钠0.1～0.2份、氯化钠0.5～1份、乙二胺四乙酸二钠0.4～0.8份、苯氧乙醇0.05～0.15份和63～69份水。采用本发明提供的细胞提取液能够除去样品中的粘液和白带，能够提取得到鳞状细胞，使得杂质与鳞状细胞分离，以达到方便医师阅片诊断，提高医师在液基细胞学诊断中的效率及准确率。

Description

一种细胞提取液及其应用

技术领域

本发明涉及药剂技术领域，具体涉及一种细胞提取液及其应用。

背景技术

宫颈癌又称子宫颈癌，是宫颈被覆上皮和腺上皮发生的恶性肿瘤，系指发生在宫颈阴道部或移行带的鳞状上皮细胞及宫颈管内膜的柱状上皮细胞交界处的恶性肿瘤。宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤，其发病率近年在女性恶性肿瘤中高居第2位。

目前，常用的宫颈癌筛查是液基细胞学检查(TCT检查)，采用液基薄层细胞检测系统检测宫颈癌细胞并进行细胞学分类诊断。在TCT检查中，医师通常选用专门的子宫颈细胞取样刷进行细胞收集，在该收集过程中，往往也会因病患个体病变不同，采集到的粘液和白带等影响诊断医师阅片杂质，对医师阅片诊断造成了极大干扰。

发明内容

本发明的目的在于提供一种细胞提取液及其应用，采用本发明提供的细胞提取液能够除去样品中的粘液和白带，能够提取得到鳞状细胞，使得杂质与鳞状细胞分离，以达到方便医师阅片诊断，提高医师在液基细胞学诊断中的效率及准确率。

本发明提供了一种细胞提取液，包括以下重量份数的组分：

丙三醇29～35份、氯化钾0.005～0.015份、磷酸二氢钾0.01～0.03份、磷酸氢二钠0.1～0.2份、氯化钠0.5～1份、乙二胺四乙酸二钠0.4～0.8份、苯氧乙醇0.05～0.15份和63～69份水。

优选的，包括以下重量份数的组分：

丙三醇30份、氯化钾0.01份、磷酸二氢钾0.02份、磷酸氢二钠0.15份、氯化钠0.8份、乙二胺四乙酸二钠0.6份、苯氧乙醇0.1份和68.32份水。

优选的，所述细胞提取液的比重为1.06～1.07。

优选的，所述细胞提取液的pH值为6.8～7.2。

本发明还提供了上述技术方案所述的细胞提取液在提取鳞状细胞中的应用。

本发明还提供了上述技术方案所述的细胞提取液在除去粘液和/或白带中的应用。

本发明提供了一种细胞提取液，包括以下重量份数的组分：丙三醇29～35份、氯化钾0.005～0.015份、磷酸二氢钾0.01～0.03份、磷酸氢二钠0.1～0.2份、氯化钠0.5～1份、乙二胺四乙酸二钠0.4～0.8份、苯氧乙醇0.05～0.15份和63～69份水。液基细胞学检查中常见的杂质主要为粘液及白带，两者的比重均在1.06以下，可漂浮于提取液表面。在加入了本发明提供的细胞提取液的离心管中，再加入含有杂质的液基细胞样本液，经过一定时间和一定转速的离心后，鳞状细胞会进入到提取液中，而粘液及白带会聚集在提取液和液基细胞样本液的交界层，进而达到将鳞状细胞与杂质分离的目的，可完全除去粘液及白带。

附图说明

图1为实施例3在第一次离心前离心管内液体分层情况；

图2为实施例3在第一次离心后离心管内液体及杂质分层情况；

图3为对比例1在第一次离心前离心管内液体分层情况；

图4为对比例1在第一次离心后离心管内液体及杂质分层情况；

图5为实施例3制片后显微镜镜下细胞情况；

图6为对比例1制片后显微镜镜下细胞情况；

图7为实施例4在第一次离心前离心管内液体分层情况；

图8为实施例4在第一次离心后离心管内液体及杂质分层情况；

图9为实施例4制片后显微镜下细胞情况；

图10为对比例3制备的提取液提取后在第一次离心前离心管内液体分层情况；

图11为对比例3制备的提取液在第一次离心后离心管内液体及杂质分层情况；

图12为对比例3制备后显微镜下细胞情况；

图13为对比例2制备的提取液提取后在第一次离心前离心管内液体分层情况；

图14为对比例2制备的提取液提取后在第一次离心后离心管内液体及杂质分层情况；

图15为对比例2制片后显微镜下细胞情况。

具体实施方式

本发明提供了一种细胞提取液，包括以下重量份数的组分：

本发明提供的细胞提取液包括重量份数为29～35份的丙三醇，优选为30份。在本发明中，所述丙三醇作为比重维持剂，维持细胞提取液的比重为1.06～1.07。

本发明提供的细胞提取液包括重量份数为0.005～0.015份的氯化钾，优选为0.01份。

本发明提供的细胞提取液包括重量份数为0.5～1份的氯化钠，优选为0.8份。

在本发明中，所述氯化钠和氯化钾作为渗透压维持剂，调节细胞提取液的渗透压。

本发明提供的细胞提取液包括重量份数为0.01～0.03份的磷酸二氢钾，优选为0.02份。

本发明提供的细胞提取液包括重量份数为0.1～0.2份的磷酸氢二钠，优选为0.15份。

在本发明中，所述磷酸二氢钾和磷酸氢二钠具有缓冲作用。

本发明提供的细胞提取液包括重量份数为0.4～0.8份的乙二胺四乙酸二钠，优选为0.6。在本发明中，所述乙二胺四乙酸二钠作为金属螯合剂。

本发明提供的细胞提取液包括重量份数为0.05～0.15份的苯氧乙醇，优选为0.1份。在本发明中，所述苯氧乙醇具有防腐作用。

本发明提供的细胞提取液包括重量份数为63～69份的水，优选为68.32份。在本发明中，所述水优选为超纯水。

在本发明中，所述细胞提取液的比重优选为1.06～1.07。

在本发明中，所述细胞提取液的pH值优选为6.8～7.2。

下面结合具体实施例对本发明所述的一种细胞提取液及其应用做进一步详细的介绍，本发明的技术方案包括但不限于以下实施例。

实施例1

一种细胞提取液，按以下质量分数组成：丙三醇30％，氯化钾0.01％，磷酸二氢钾0.02％，磷酸氢二钠0.15％，氯化钠0.8％，乙二胺四乙酸二钠0.6％，苯氧乙醇0.1％，其余组分为超纯水，细胞提取液的比重为1.06。

实施例2

一种细胞提取液，按以下质量分数组成：丙三醇35％，氯化钾0.01％，磷酸二氢钾0.02％，磷酸氢二钠0.15％，氯化钠0.8％，乙二胺四乙酸二钠0.6％，苯氧乙醇0.1％，其余组分为超纯水，细胞提取液的比重为1.07。

实施例3

使用实施例1制备的细胞提取液进行样本实验

1、相关试剂的准备：

1.1缓冲液：配制10mM pH 7.2的Tris缓冲液。

1.2冲洗液：将无水乙醇和异丙醇按照等体积混合即可。

1.3巴氏染色液：本实施例中用到的巴氏染色液为孝感宏翔生物医械技术有限公司所生产的巴氏染色液。

1.4液基细胞保存液取样标本瓶：本实施例中用到的液基细胞保存液为孝感宏翔生物医械技术有限公司所生产的液基细胞保存液。

2、样本离心分层：取适量离心管编上与液基细胞保存液取样标本瓶相对应的号码，并分别加入4mL的实施例1制备的细胞提取液，再取振荡后的液基细胞保存液取样标本瓶中的液体6mL加入离心管中，放入离心机中1000转/分，离心2分钟。用吸管吸弃上部液体6.5mL，再向离心管中加入3.5ml缓冲液并混匀，放入离心机中2000转/分，离心10分钟。取出离心管迅速倒掉上清液。

3、混匀沉淀细胞：向离心管中加入500～800uL缓冲液在振荡器上振荡15±5秒。

4、吸取离心管中混匀的细胞悬液300～500uL移至制片槽中，槽下为细胞载玻片，静止自然沉淀10分钟，倾去玻片上多余液体。再向染色槽中加500uL冲洗液，30秒后弃之。

5、取下细胞载玻片并进行巴氏染色，染色后置于显微镜镜下观察。

实施例4

使用实施例2制备的细胞提取液进行样本实验，其余条件同实施例3。

对比例1

使用美国BD公司(Becton,Dickinson and Company)所生产的BDSurePath相关产品进行样本实验

1、相关试剂的准备：

1.1缓冲液：配制10mM pH 7.2的Tris缓冲液。

1.2冲洗液：将无水乙醇和异丙醇按照等体积混合即可。

1.3巴氏染色液：本实施例中用到的巴氏染色液为美国BD公司(Becton,Dickinsonand Company)所生产。

1.4液基细胞保存液取样标本瓶：本发明本实施例中用到的液基细胞保存液为美国BD公司(Becton,Dickinson and Company)所生产。

2、样本离心分层：取适量离心管编上与液基细胞保存液取样标本瓶相对应的号码，并加入4mL的美国BD公司的Density Reagent溶液，再取振荡后的液基细胞保存液取样标本瓶中的液体8mL加入离心管中，放入离心机中1000转/分，离心2分钟。用吸管吸弃上部液体8mL，放入离心机中2000转/分，离心10分钟。取出离心管迅速倒掉上清液。

3、混匀沉淀细胞：向离心管中加入500-800uL缓冲液在振荡器上振荡15±5秒。

4、吸取离心管中混匀的细胞悬液300-500uL移至制片槽中，槽下为细胞载玻片，静止自然沉淀10分钟，倾去玻片上多余液体。再向染色槽中加500uL冲洗液，30秒后弃之。

对比例2

一种细胞提取液，按以下质量分数组成：丙三醇25％，氯化钾0.01％，磷酸二氢钾0.02％，磷酸氢二钠0.15％，氯化钠0.8％，乙二胺四乙酸二钠0.6％，苯氧乙醇0.1％，其余组分为超纯水，细胞提取液的比重为1.05。

使用对比例例2制备的细胞提取液进行样本实验，其余条件同实施例3。

对比例3

一种细胞提取液，按以下质量分数组成：丙三醇50％，氯化钾0.01％，磷酸二氢钾0.02％，磷酸氢二钠0.15％，氯化钠0.8％，乙二胺四乙酸二钠0.6％，苯氧乙醇0.1％，其余组分为超纯水，细胞提取液的比重为1.1。

使用对比例3制备的细胞提取液进行样本实验，其余条件同实施例3。

综上所述：

如图1、图2所示，在经过低速离心后，实施例3中液基细胞保存液取样标本瓶中的样本液未与细胞提取液产生大面积的溶液交界层的溶液混合，且样本液中的杂质经离心均悬浮在细胞提取液与样本液的交界层，未进入到细胞提取液中，在后续操作中吸弃上方溶液即可将样本液中的杂质移去，达到了去除样本液中因取样时收集到的杂质的目的。

如图3、图4所示，在经过低速离心后，对比例1中液基细胞保存液取样标本瓶中的样本液与Density Reagent溶液产生一部分的溶液交界层的溶液混合，且在离心管底有明显的杂质沉淀。

如图5、图6所示，实施例3中所制得的TCT制片结果在显微镜下无明显杂质或大团组织，对比例1中所制得的TCT制片结果在显微镜下可观察到大量的组织碎屑。

如图7～9所示，使用实施例2制备的细胞提取液进行提取后，显微镜下情况，视野内鳞状细胞数量充足，且无粘液或白带。

如图10～12所示，对比例3制备的细胞提取液进行提取后，显微镜下情况，视野内无粘液或白带，但鳞状细胞较少，不满足诊断时所需细胞数量的要求。

如图13～15所示，对比例2制备的细胞提取液进行提取后，显微镜下情况，视野内鳞状细胞数量充足，但有大量粘液或白带。

由以上实施例和对比例可以得出，采用本发明提供的细胞提取液，能够除去样品中的粘液和白带，提取得到鳞状细胞，使得杂质与鳞状细胞分离，以达到方便医师阅片诊断，提高医师在液基细胞学诊断中的效率及准确率，而且能够满足诊断时所需细胞数量的要求。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.一种提取鳞状细胞提取液，其特征在于，按以下质量分数组成：

丙三醇30~35%、氯化钾0.01%、磷酸二氢钾0.02%、磷酸氢二钠0.15%、氯化钠0.8%、乙二胺四乙酸二钠0.6%、苯氧乙醇0.1%，其余组分为超纯水，所述鳞状细胞提取液的比重为1.06~1.07。

2.根据权利要求1所述的提取鳞状细胞提取液，其特征在于，所述细胞提取液的pH值为6.8~7.2。

3.权利要求1或2所述的提取鳞状细胞提取液在提取鳞状细胞中的应用。

4.权利要求1或2所述的提取鳞状细胞提取液在除去粘液和/或白带中的应用。