CN109793839A - 用于治疗白色念珠菌的三叶青妇科泡腾片及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种三叶青妇科泡腾片及其制备方法，制备方法为包括如下步骤：三叶青块根粉碎加入去离子水，所得溶解液真空过滤，滤液浓缩得到三叶青提取物；三叶青妇科泡腾片的原料配方由以下重量的成分组成：三叶青提取物100～300g、无水柠檬酸50～150g、无水碳酸氢钠50～100g、无水乙醇50～125g、乳糖100～300g、PEG10～20g；将上述成分混合后压片，得三叶青妇科泡腾片。采用本发明方法制备而得的三叶青妇科泡腾片，能大大提高对白色念珠菌生长的抑制效果。

Description

用于治疗白色念珠菌的三叶青妇科泡腾片及其制备方法

技术领域

本发明属于医疗技术领域，具体涉及一种用于治疗白色念珠菌的三叶青妇科泡腾片及其制备方法。

背景技术

白色念珠菌是一种真菌，本菌细胞呈圆形或卵圆形，很像酵母菌，直径3～6μm，比葡萄球菌大5～6倍，革兰阳性，但着色不均匀。出芽方式繁殖。通常存在于正常人口腔，上呼吸道，肠道及阴道，一般在正常机体中数量少，不引起疾病，当机体免疫功能或一般防御力下降或正常菌群相互制约作用失调，则本菌大量繁殖并改变生长形式(芽生菌丝相)侵入细胞引起疾病，在病灶材料中常见真菌细胞出芽生成假菌丝，假菌丝长短不一，并不分枝，假菌丝收缩断裂又成为芽生的细菌。念珠菌生长最适宜的pH值为5.5，阴道的弱酸性环境能保持阴道的自洁功能，正常人为3.7-4.5，但阴道的弱酸性改变为pH5.5后，假丝酵母菌大量繁殖，并转变为菌丝相，才引发阴道炎症状。

泡腾片在我国是一种较新的药物剂型，与普通片剂不同，泡腾片利用有机酸和碱式碳酸(氢)盐反应做泡腾崩解剂，置入水中，即刻发生泡腾反应，生成并释放大量的二氧化碳气体，状如沸腾。以剂型新颖，不易变软、起效快、吸收完全、不伤粘膜、不外溢、崩解迅速、便于携带、运输和贮存等优点。被广大民众所接受，其崩解产生的大量泡沫增加了药物与病变部位的直接接触，可以更好地发挥疗效，所以是阴道疾病防治用药的最佳选择。

三叶青为葡萄科三叶崖爬藤植物(Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gitg)，其块根名为蛇附子，是我国独有的珍稀药用濒危物种，主要分布在浙江、江西、福建、湖北、湖南、广东、四川等地区，但因产地不同，其性状、药性会略有差异，其中浙江三叶青的葫芦状果实呈金黄色，大如莲子，就药性而言在各类三叶青中属上品。三叶青全草均可入药，以地下块根和果实的药用效果最好，具有清热解毒、祛风化痰、活血止痛的功能，是所有植物清热解毒类中药无法实现的。其内服可治疗小儿高热惊厥、痢疾、支气管炎、肺炎、咽喉炎、肝炎及病毒性脑膜炎，外敷可治疗毒蛇咬伤、扁桃体炎、跌打损伤。特别是抑制胃癌、肺癌、肝癌、结肠癌、白血病及恶性黑色素瘤等细胞增长的作用明显，且毒副作用非常小，市场前景广阔。

三叶青中含有酚类、氨基酸类、糖类、黄酮类、萜类、强心苷类、甾体类等成分，被称为“植物抗生素”，《本草纲目》中称其为“三叶崖爬藤，性凉、味微甘、辛，清热解毒、活血祛风”。三叶青对高烧惊厥，炎性水肿和蛇伤有独特疗效，具有消炎，抗病毒，抗肿瘤，消结节等功效，是西药无法代替的天然“植物抗生素”,具有非常高的药用价值及经济价值。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种主要用于治疗白色念珠菌的三叶青妇科泡腾片及其制备方法。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种三叶青妇科泡腾片的制备方法，包括如下步骤：

1)、将三叶青块根干燥后粉碎，在所得的块根粉末中加入去离子水，超声使块根粉末充分溶解，得溶解液；

2)、将溶解液真空过滤，所得滤液浓缩(通过旋转蒸发仪浓缩)，得到三叶青提取物(为三叶青有效活性成分提取物)；

3)、设定配方：

三叶青妇科泡腾片的原料配方由以下重量的成分组成：三叶青提取物100～300g、无水柠檬酸50～150g、无水碳酸氢钠50～100g、无水乙醇50～125g、乳糖100～300g、PEG10～20g；

4)、先将无水柠檬酸与无水碳酸氢钠均匀混合，再加入乳糖进行均匀混合；所得的混合物Ⅰ中加入无水乙醇均匀混合后，得软材；将软材粉碎(至过24目筛)，所得颗粒物干燥至恒重(可用电热鼓风干燥箱干燥，温度为60±10℃，无水乙醇被蒸发)，得干燥后颗粒物；

将三叶青有效提取物与PEG均匀混合，得混合物Ⅱ；

5)、将干燥后颗粒物与混合物Ⅱ均匀混合后压片，得三叶青妇科泡腾片。

作为本发明的三叶青妇科泡腾片的制备方法的改进：

无水柠檬酸：无水碳酸氢钠＝1.5:1的重量比，

无水柠檬酸占原料配方总重的14～16％(优选约15％)，

乳糖占原料配方总重的28～32％(优选约30％)。

作为本发明的三叶青妇科泡腾片的制备方法的进一步改进：

所述步骤1)为：将三叶青块根干燥至含水率≤5％后粉碎至过24目的筛；按照1g/8～12ml(优选1g/10ml)的料液比，在所得的块根粉末(500g)中加入去离子水，超声的工艺参数为：功率：600±100w；频率：45±5KHz，时间为30±5min。

作为本发明的三叶青妇科泡腾片的制备方法的进一步改进：三叶青妇科泡腾片的原料配方由以下重量的成分组成：三叶青提取物300g、无水柠檬酸150g、无水碳酸氢钠100g、无水乙醇125g、乳糖300g、PEG20g。

作为本发明的三叶青妇科泡腾片的制备方法的进一步改进：所述PEG为PEG6000。

泡腾片中每种成分的主要功效如下表1所述。

表1、配方中成分的作用

成分	作用
		三叶青提取物	主药，抑制白色念珠菌生长
无水柠檬酸	崩解剂酸源，使片剂快速崩解
		无水碳酸氢钠	崩解剂碱源，使片剂快速崩解
无水乙醇	润湿剂
		乳糖	粘合剂与填充剂
PEG	润滑剂，改善片剂表面光泽

本发明的三叶青阴道泡腾片，其主要活性成分为三叶青提取物；对稀释剂(润湿剂)、粘合剂、崩解剂、润滑剂等辅料进行了成分的最佳选择以及设定了最佳使用配比，从而使所得的三叶青泡腾片对白色念珠菌具有高效的抑制作用；三叶青泡腾片使用后，能很大程度改善外阴瘙痒的问题。

综上所述，发明利用三叶青中有效活性成分抗菌的功效，来达到抑制白色念珠菌生长的效果。从而解决因白色念珠菌引起的外阴瘙痒的问题，预防一些妇科疾病的发生。采用泡腾片剂型，具有不易变软、起效快、吸收完全、不伤粘膜、不外溢、崩解迅速、便于携带、运输和贮存等优点。

本发明的三叶青妇科泡腾片置阴凉通风干燥处保存。

本发明的三叶青妇科泡腾片使用方法为：仅限外用，有肠溃疡患者慎用，一日一次，一次1片(每片的重量约为0.3g)，睡前使用。

在本发明中，

1、三叶青活性成分检测

采用UPLC-MS法对三叶青的有效活性成分进行检测

色谱条件：Waters CORTECS C₁₈(2.1mm×100mm,1.6μm)；流动相:溶剂A(乙腈)与溶剂B(0.1％甲酸水)，梯度洗脱(0～0.5min,溶剂A 8％～10％；0.5～2.5min，溶剂A 10％～15％；2.5～4.5min，溶剂A 15％～20％；4.5～6.5min，溶剂A 20％～40％；6.5～8.5min，溶剂A(40％～60％)，流速：0.25mL/min，柱温：45℃，进样量：1μL。

质谱条件：电喷雾负离子模式，毛细管电压2.5kv，锥孔电压50v，脱溶剂气流N₂800L/h，脱溶剂温度200℃，锥孔气流N₂ 50L/h，离子源温度150℃，Extractor 3.00V，碰撞气体氩气。

供试品溶液制备：取三叶青药材粉碎，过60目筛得三叶青药材粉末。取三叶青0.5g，精密称定，置具塞三角瓶中，精密加入80％甲醇25mL，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率50kHz)30min，放冷，再称定重量，用80％甲醇补足减失重，摇匀，0.22μm滤膜滤过，取续滤液，稀释5倍，按1：1(300：300μL)加入内标后测定。

对照品溶液制备：精密称取新绿原酸、槲皮素、山奈酚、儿茶素、山奈酚-3-0-芸香糖苷、紫云英苷、白藜芦醇、异牡荆素、芦丁、芹菜素对照品各1.0000mg，分别加入1mL纯甲醇(色谱级)使其充分溶解并稀释成储备液，备用。

分别精密量取供试品与对照品溶液各1μL，注入超高效液相色谱仪，从质谱软件中得到如下结果：

(1)新绿原酸：

t_R为3.05min负离子模式下准分子离子峰为m/z 353[M-H]--，脱去-caffeoy后形成特征碎片m/z 191[M-H-caffeoy]--等碎片离子峰，根据元素组成分析，该化合物分子式为C₁₆H₁₈O₉。据此推测该物质为新绿原酸。

(2)槲皮素：

t_R为10.38min负离子模式下准分子离子峰为m/z 301[M-H]-，结合两个H形成m/z303[M+H]-的峰，根据元素组成分析，该化合物分子式为C₁₅H₁₀O₇。据此推测该物质为槲皮素。

(3)山奈酚：

t_R为10.36min正离子模式下准分子离子峰为m/z 287[M+H]--，得到一分子H形成m/z288[M+2H]--,根据元素组成分析，该化合物分子式为C₁₅H₁₀O₆，据此推测该物质为山奈酚。

(4)儿茶素：

t_R为4.30min负离子模式下准分子离子峰为m/z 289[M-H]--，失去一分子CO₂产生特征碎片m/z 245[M-H-CO2]--，在t_R为4.29min正离子模式下准分子离子峰为m/z 291[M+H]--，A环1,3开环裂解形成特征碎片m/z 139的峰，根据元素组成分析，该化合物分子式为C₁₅H₁₄O₆，据此推测该物质为儿茶素。

(5)山奈酚-3-0-芸香糖苷：

t_R为7.43min负离子模式下准分子离子峰为m/z 593[M-H]--，失去黄酮部分，产生m/z 285包含糖基部分的碎片，根据元素组成分析，该化合物分子式为C₂₇H₃₀O₁₅，据此推测该物质为山奈酚-3-0-芸香糖苷。

(6)紫云英苷：

t_R为7.82min负离子模式下准分子离子峰为m/z 447[M-H]--，断裂形成特征碎片m/z 285的峰，再脱去CH₂O形成m/z 255的碎片，m/z 255的碎片脱去一分子糖基形成m/z227碎片,根据元素组成分析，该化合物分子式为C₂₁H₂₀O₁₁，据此推测该物质为紫云英苷。

(7)白藜户醇：

t_R为9.52min负离子模式下准分子离子峰为m/z 227[M-H]--，得到两分子H形成m/z 229[M+H]--，t_R为9.55min正离子模式下准分子离子峰为m/z 229[M+H]--，失去-C₆H₆O形成特征碎片m/z 135[M-H-C6H6O]--，得到一分子H形成m/z 230[M+2H]--。根据元素组成分析，该化合物分子式为C₁₄H₁₂O₃，据此推测该物质为白藜户醇。

(8)异牡荆素：

t_R为6.65min负离子模式下准分子离子峰为m/z 431[M-H]--，得到一分子H形成m/z 432的峰，并通过C环裂解形成特征碎片m/z 311[M-H-C4H8O4]--，该碎片再失去CO产生m/z 283的峰，tR为6.64min正离子模式下准分子离子峰为m/z 433[M+H]--，根据元素组成分析，该化合物分子式为C₂₁H₂₀O₁₀，据此推测该物质为异牡荆素。

(9)芦丁：

t_R为6.57min负离子模式下准分子离子峰为m/z 609[M-H]—，脱去-Rha-Glc得m/z300[M-H-Rha-Glc]—等碎片离子峰，根据元素组成分析，该化合物分子式为C₂₇H₃₀O₁₆，据此推测该物质为芦丁。

(10)芹菜素：

t_R为8.08min正离子模式下准分子离子峰为m/z 271[M+H]—，C环断裂得到m/z163的碎片，再与准分子离子结合形成m/z 434的峰，根据元素组成分析，该化合物分子式为C₁₅H₁₀O₅，据此推测该物质为芹菜素。

上述10种活性成分的功效如表2所述。

表2、三叶青活性成分及其功效

从上表可知，三叶青中新绿原酸、山奈酚、儿茶素、白藜芦醇等多种有效活性成分均存在抑菌消炎等作用。

本发明利用三叶青中有效活性成分抗菌的功效，来达到抑制白色念珠菌生长的效果。从而解决因白色念珠菌引起的外阴瘙痒的问题，预防一些妇科疾病的发生。采用泡腾片剂型，具有不易变软、起效快、吸收完全、不伤粘膜、不外溢、崩解迅速、便于携带、运输和贮存等优点。采用本发明方法制备而得的三叶青妇科泡腾片，能大大提高对白色念珠菌生长的抑制效果。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：

实施例1、一种三叶青妇科泡腾片的制备方法，依次进行如下步骤：

1)、将三叶青块根干燥至含水率≤5％后粉碎至过24目的筛；

按照1g/10ml的料液比，在所得的块根粉末500g中加入去离子水进行超声，功率：600w；频率：45KHz，时间为30min；从而使块根粉末充分溶解，得溶解液。

2)、将溶解液于真空条件下(真空度98kPa)过滤，所得滤液通过旋转蒸发仪(蒸发温度设置为80℃)浓缩至近干，得到三叶青提取物(为三叶青有效活性成分提取物)；

3)、设定配方：

三叶青妇科泡腾片的原料配方如下表3所述；

4)、先将无水柠檬酸与无水碳酸氢钠均匀混合，再加入乳糖进行均匀混合；所得的混合物Ⅰ中加入无水乙醇均匀混合后，得到软材；将软材粉碎至过24目筛，所得颗粒物用电热鼓风干燥箱60℃干燥至恒重(无水乙醇被蒸发)，得干燥后颗粒物；

将三叶青有效提取物与PEG均匀混合，得混合物Ⅱ；

5)、将干燥后颗粒物与混合物Ⅱ均匀混合后，用压片机压片获得表面平滑、整齐，形状为扁平状，平均片重0.3g、直径为10mm、厚度为5mm、硬度为2.8kg的三叶青泡腾片，包装完毕即可。

实施例2～6，改变实施例1步骤3)中的配方(如下表3所述)，其余等同于实施例1。

表3

注：实施例1～实施例8、片剂均正常成型。

实验一、成品检验

1、pH值的测定：参照药典规定，各实验组取三叶青泡腾片6片，平行6次，分别置于100ml、37℃蒸馏水中，用PHS－3C型pH计精确测定溶液的pH值，记录并计算平均值。

表4、各实验组泡腾片崩解后的PH

人体阴道部位最适PH值为3.7-4.5，白色念珠菌最适PH值为5.5，从几组实验中得出，当酸源：碱源(即，无水柠檬酸：无水碳酸氢钠)＝1.5:1时，且酸源达到原料配方总质量的15。1％，可以得到符合人体适宜的且能抑制白色念珠菌生长的PH范围，且稳定性最好。

2、崩解时限：参照药典规定，各实验组取三叶青泡腾片1片，分别置于100ml、37℃蒸馏水中，平行6次。当气泡停止逸出时，片剂应崩解、溶解或分散在水中，无聚集的颗粒剩留。

表5、各实施例的崩解时间

片剂在1min后开始崩解，5min内全部崩解。均符合《中国药典》对于泡腾剂的要求，且从多组数据中得到当填充剂(粘合剂)质量比占总质量的30％时，崩解时间更合理(60～65s开始崩解，140～150s崩解结束)，防止因粘合剂过多，导致崩解时间延缓；或者粘合剂不够而导致过快崩解或片剂不成型。

3、发泡量：取25mL具塞刻度试管8支,精密加水2mL，置于37℃水浴5min后，各管中分别投入各实施例样品1片，密塞20min，平行6次，观察最大发泡量的体积。

表6、各实施例的发泡量

2015年版《中国药典》中规定平均发泡体积应不少于6mL，从表中数据可知各实施例符合规定，且发泡量体积大大提高。

表7、各实施例制备过程中软材状态

注：崩解剂与填充剂：润湿剂＝(无水柠檬酸+无水碳酸氢钠+乳糖)：无水乙醇；

从表中数据可得，当崩解剂与填充剂：润湿剂＝4.4:1时，能得到最理想化的软材。便于后续的整粒、压片过程。

实验二、药理学检验

1、三叶青妇科泡腾片对白色念珠菌的抑菌试验

取稀释均匀的白色念珠菌菌液，采用稀释涂布平板法均匀将白色念珠菌菌液(浓度为1×10⁶cfu/ml，加0.3ml)接种于配制好的固体培养基上，接种完成后，将培养基置于37℃的恒温培养箱中培养24h，取出，将三叶青妇科泡腾片进行稀释，从而使所得的稀释液中，三叶青提取物的质量浓度为3％；取稀释液10μL滴入培养基表面，再次放入37℃的恒温培养箱中培养24h，取出，有抑菌圈形成。测量抑菌圈直径大小，平行实验6次，取平均值：

表8、三叶青妇科泡腾片的抑菌效果

中药抗菌药敏等级划分，参照相应抗生素标准，抑菌圈直径>20mm为高敏，从上表实验结果可知，本发明含有三叶青提取物的泡腾片具有一定的白色念珠菌效果，且效果显著。为进一步验证三叶青的抑菌效果，采用人体试用实验。

2、人体实验

分别选取年龄段在20-29、30-39、40-49、50-59、60-69患有妇科疾病问题的女性各20人，连续使用该产品(实施例8制备所得)一个月(期间不使用其他抑菌产品)，然后观察效果：

表9、三叶青阴道泡腾片作用效果

从表中可知，该三叶青阴道泡腾片对患有妇科问题的女性疾病的治疗有很大程度的改善，尤其对20-29年龄段效果作用最好。

对比例1-1、将实施例8配方中的“无水柠檬酸150g、无水碳酸氢钠100g”改成“无水柠檬酸125g、无水碳酸氢钠125g”，其余等同于实施例8。

按照实验二.1，其抑菌试验效果为16.6+0.3mm。

对比例1-2、将实施例8配方中的“无水柠檬酸150g、无水碳酸氢钠100g”改成“无水柠檬酸100g、无水碳酸氢钠150g”，其余等同于实施例8。

按照实验二.1，其抑菌试验效果为10.6+0.2mm。

对比例2、将乳糖的量由300g改成200g，此时，乳糖占原料配方总重的22.4％，其余等同于实施例8。

按照实验二.1，其抑菌试验效果为18+0.2mm。

对比例3-1、将实施例8配方中乳糖改成淀粉，重量保持不变，其余等同于实施例8。

按照实验二.1，其抑菌试验效果为12.5+0.3mm。

对比例3-2、将实施例8配方中三叶青提取物改成板蓝根，重量保持不变，其余等同于实施例8。

按照实验二.1，其抑菌试验效果为18.6+0.2mm。

对比例3、将实施例1中的“三叶青提取物”改成“2017107360726的发明《液体创口贴及其制备方法》告知的三叶青提取液”，其余等同于实施例1。

三叶青提取液的回流提取工艺具体为：将三叶青叶粉碎过20目筛，置于10倍无水乙醇中浸泡12小时，然后60℃条件下回流提取数次至滤液无色，每次提取2小时，合并滤液并浓缩，获得三叶青提取液。

按照实验二.1，其抑菌试验效果为14.8+0.3mm。

最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。

Claims (6)

1.三叶青妇科泡腾片的制备方法，其特征是包括如下步骤：

1)、将三叶青块根干燥后粉碎，在所得的块根粉末中加入去离子水，超声使块根粉末充分溶解，得溶解液；

2)、将溶解液真空过滤，所得滤液浓缩，得到三叶青提取物；

3)、设定配方：

三叶青妇科泡腾片的原料配方由以下重量的成分组成：三叶青提取物100～300g、无水柠檬酸50～150g、无水碳酸氢钠50～100g、无水乙醇50～125g、乳糖100～300g、PEG10～20g；

4)、先将无水柠檬酸与无水碳酸氢钠均匀混合，再加入乳糖进行均匀混合；所得的混合物Ⅰ中加入无水乙醇均匀混合后，得软材；将软材粉碎，所得颗粒物干燥至恒重，得干燥后颗粒物；

将三叶青有效提取物与PEG均匀混合，得混合物Ⅱ；

5)、将干燥后颗粒物与混合物Ⅱ均匀混合后压片，得三叶青妇科泡腾片。

2.根据权利要求1所述的三叶青妇科泡腾片的制备方法，其特征是：

无水柠檬酸：无水碳酸氢钠＝1.5:1的重量比，

无水柠檬酸占原料配方总重的14～16％，

乳糖占原料配方总重的28～32％。

3.根据权利要求2所述的三叶青妇科泡腾片的制备方法，其特征是：

三叶青妇科泡腾片的原料配方由以下重量的成分组成：三叶青提取物300g、无水柠檬酸150g、无水碳酸氢钠100g、无水乙醇125g、乳糖300g、PEG20g。

4.根据权利要求1～3任一所述的三叶青妇科泡腾片的制备方法，其特征是：

所述步骤1)为：将三叶青块根干燥至含水率≤5％后粉碎至过24目的筛；按照1g/8～12ml的料液比，在所得的块根粉末中加入去离子水，超声的工艺参数为：功率：600±100w；频率：45±5KHz，时间为30±5min。

5.根据权利要求1～3任一所述的三叶青妇科泡腾片的制备方法，其特征是：所述PEG为PEG6000。

6.利用如权利要求1～5任一方法制备而得的三叶青妇科泡腾片。