CN109010188A

CN109010188A - 一种三叶青提取物在制备清痘驻颜凝胶中的应用

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Publication number: CN109010188A
Application number: CN201811168663.9A
Authority: CN
Inventors: 孙延芳; 梁宗锁; 孙知新; 许鑫瀚; 陈曦; 马蕾; 李伯齐; 屠仕俊
Original assignee: HANGZHOU SANYEQING AGRICULTURAL TECHNOLOGY CO LTD; Zhejiang Sci Tech University ZSTU
Current assignee: HANGZHOU SANYEQING AGRICULTURAL TECHNOLOGY CO LTD; Zhejiang Sci Tech University ZSTU; Zhejiang University of Science and Technology ZUST
Priority date: 2018-10-08
Filing date: 2018-10-08
Publication date: 2018-12-18

Abstract

本发明涉及日用护肤品领域，具体公开了一种三叶青提取物在制备清痘驻颜凝胶中的应用，其中，所述的三叶青提取物的相对密度为3.17～5.31；所述清痘驻颜凝胶由如下重量百分比组成：三叶青提取物10～20％；凝胶剂1.1～2.3％；甘油3～10％；三乙醇胺0.3～0.7％；EDTA二钠盐0.01～0.05％；余量为水。本发明利用三叶青提取物制备了清痘驻颜凝胶，制备工艺简单，所得产品对人体无毒无副作用，具有抗菌、增强皮肤抗氧化能力，还能促进胶原蛋白合成，具有很好的清痘、驻颜抗衰老的效果。

Description

一种三叶青提取物在制备清痘驻颜凝胶中的应用

技术领域

本发明涉及日用护肤品领域，具体涉及一种三叶青提取物在制备清痘驻颜凝胶中的应用。

背景技术

痘痘也称痤疮，是由内分泌失调而引起机体的代谢紊乱，油脂分泌增多，毛孔堵塞，从而导致痤疮丙酸杆菌增生，引发炎症所致。同时体内过量的自由基会导致脂质氧化，从而产生羰基化合物，并和皮肤中胶原蛋白发生异常交联，导致胶原蛋白生物性能发生变化，使得真皮内弹力纤维和胶原纤维功能减退，造成衰老。当今社会，工作的压力、熬夜、暴饮暴食等不好的生活习惯，导致皮肤出痘、衰老问题愈加明显。

三叶青为葡萄科三叶崖爬藤植物(Tetrastigmahemsleyanum Diels et Gitg)，其块根名为蛇附子，是我国独有的珍稀药用濒危物种，主要分布在浙江、江西、福建、湖北、湖南、广东、四川等地区，但因产地不同，其性状、药性会略有差异，其中浙江三叶青的葫芦状果实呈金黄色，大如莲子，就药性而言在各类三叶青中属上品。

三叶青全草均可入药，以地下块根和果实的药用效果最好，具有清热解毒、祛风化痰、活血止痛的功能，是所有植物清热解毒类中药无法实现的。三叶青内服可治疗小儿高热惊厥、痢疾、支气管炎、肺炎、咽喉炎、肝炎及病毒性脑膜炎，外敷可治疗毒蛇咬伤、扁桃体炎、跌打损伤，特别是抑制胃癌、肺癌、肝癌、结肠癌、白血病及恶性黑色素瘤等细胞增长的作用明显，且毒副作用非常小，市场前景广阔。

三叶青中含有酚类、氨基酸类、糖类、黄酮类、萜类、强心苷类、甾体类等成分，被称为“植物抗生素”，《本草纲目》中称其为“三叶崖爬藤，性凉、味微甘、辛，清热解毒、活血祛风”。三叶青对高烧惊厥，炎性水肿和蛇伤有独特疗效，具有消炎、抗病毒、抗肿瘤和消结节等功效，是西药无法代替的天然“植物抗生素”，具有非常高的药用价值及经济价值。

申请号为201810524560.5的中国发明申请，公开了一种天然祛痘组合物及其应用，包括如下质量百分含量的组分：乙烯基聚二甲基硅氧烷/月桂基聚二甲基硅氧烷交联聚合物1-3％、氢化聚环戊二烯1-3％、植物甾醇异硬脂酸酯0.1-1％、紫苏籽油0.1-1％、异十三醇异壬酸酯0.1-1％、环五聚二甲基硅氧烷0.1-1％、生育酚棕榈酸酯0.1-0.5％、硬脂酰肌氨酸0.1-0.5％、丙烯酸(酯)类/PEG-10马来酸酯/苯乙烯共聚物0.3-0.8％、透明质酸钠0.01-0.1％、多元醇5-15％、黄原胶0.1-0.3％、泛醇0.1-1％、EDTA二钠0.01-0.05％、精氨酸PCA0.3-0.8％、乙醇1-5％、葡萄糖0.1-0.5％、水余量。

上述组合物配方组成中含有乙醇，不适用于敏感型肤质，此外，该天然组合物中加入大量的不同种类的辅料成分，对人的肤质会产生一定的副作用，因此不适宜推广使用。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种成分及制备工艺简单、对人体无毒无副作用的三叶青清痘驻颜凝胶，所述凝胶具有抗菌、增强皮肤抗氧化能力，还能促进胶原蛋白合成，具有很好的清痘、驻颜抗衰老的效果。

本发明采用的技术方案为：

一种三叶青提取物在制备清痘驻颜凝胶中的应用，所述三叶青提取物的相对密度为3.17～5.31。

本发明所述的三叶青提取物中含有效活性成分新绿原酸、槲皮素、山奈酚、儿茶素、山奈酚-3-0-芸香糖苷、紫云英苷、白藜芦醇、异牡荆素、芦丁和芹菜素，所述有效活性成分的化学式和功效见下表1。

表1

由表1可知，三叶青中的有效活性成分具有抗菌、抗衰老、抗氧化、清除自由基、延缓衰老等作用，是制成清痘驻颜产品理想的天然来源，本发明利用三叶青中有效活性成分的诸多功效，制得了三叶青凝胶，达到了清痘驻颜的目的。

本发明利用上述相对密度为3.17～5.31的三叶青提取物为主要成分制备了三叶青清痘驻颜凝胶，将三叶青提取物浓缩至相对密度为3.17～5.31是为了极大的保留三叶青中的有效活性成分，避免其流失，而三叶青提取物中的有效活性成分具有显著的抑痤疮丙酸杆菌效果，还能将细胞膜层过氧化物还原为无毒醇类，从而起到保护细胞的作用而具有驻颜效果，使得三叶青清痘驻颜凝胶产品具有很好的清痘、驻颜抗衰老的效果。

所述的三叶青提取物的制备方法为：将干燥的三叶青块根粉末加入去离子水中，超声至充分溶解，将得到的溶液真空过滤，再将滤液浓缩至相对密度为3.17～5.32，得到三叶青提取物。

所述的滤液浓缩条件为：浓缩温度为100～120℃，浓缩真空度为0.09～0.1Mpa，在此条件下浓缩不会破坏提取物中的有效成分，保证提取物中有效成分不易流失，同时进一步保证了后续制得的清痘驻颜凝胶的治疗效果。

所述的清痘驻颜凝胶，由如下重量百分比组成：

上述清痘驻颜凝胶中添加凝胶剂，是为了使产品形成凝胶剂型，更加稳定，还具有保湿及清爽的作用；添加甘油作为保湿剂，对皮肤角质层进行保湿，改善使用感，还起到了溶解的作用；添加三乙醇胺作为缓冲剂，调节产品pH值；添加EDTA二钠盐作为螯合剂，防止褪色，增加产品稳定性。

本发明经过大量实验证明，上述辅料与三叶青提取物复合使用能生成使用感好、稳定性好的凝胶剂。甘油与三叶青提取物混合时具有很好的协同作用，能同时提高产品的保湿和清痘驻颜功效；凝胶剂、三乙醇胺和EDTA二钠盐复合使用，能形成温和、稳定性好的凝胶；本发明中添加了上述辅料不仅不会影响三叶青中有效活性成分的活性，还能充分发挥出其抗菌、抗衰老、抗氧化、清除自由基和延缓衰老的功效。

所述凝胶剂为卡波姆树脂和PVP，这是由于当卡波姆树脂与PVP复合使用时，凝胶效果更好，其中，卡波姆的水分散液与三乙醇胺中和时即生成透明凝胶。

优选地，上述清痘驻颜凝胶，由如下重量百分比组成：

所述的清痘驻颜凝胶的制备方法，包括如下步骤：

(1)将凝胶剂均匀分散于甘油和去离子水中，得到混合液A，再将去离子水与三乙醇胺、EDTA二钠盐混合均匀得到混合液B，将混合液B加入混合液A中，得到混合液C；

(2)将步骤(1)得到的混合液C进行脱气处理后，加入三叶青提取物，调节pH值，再次进行脱气处理，得到所述三叶青清痘驻颜凝胶。

步骤(1)中，所述的混合液A中去离子水添加量为混合液B去离子水添加量的1.5～2倍，这是由于凝胶剂需要吸收足量的水来溶胀。

步骤(2)中，调节pH值至5～6，这是由于人体皮肤表面pH值为5.8，将凝胶的pH值调至5～6则不会对人体皮肤产生刺激，使凝胶的效果更温和、更舒适。

本发明与现有技术相比，具有以下有益效果：

(1)本发明利用三叶青提取物制备得到的清痘驻颜凝胶对痤疮丙酸杆菌具有高效的抑制作用，可以用于平衡油脂分泌，疏通并收敛毛孔，清除皮肤内毒素杂质，其清痘效果显著；

(2)本发明利用三叶青提取物制备得到的清痘驻颜凝胶还能增强皮肤抗氧化能力，促进胶原蛋白合成，改善局部血液循环、润肤和生肌，具有一定的驻颜抗衰老的效果；

(3)本发明制备了凝胶剂型药妆品，其具有保湿及清爽的作用，且原料来源广泛，制备工艺简单、设备需求量小、化学试剂添加量少，对人体无任何毒副作用，安全有效。

具体实施方式

下面通过实施例和应用例进一步说明本发明。

实施例1

三叶青提取物的制备：取三叶青干燥的块根粉末50g，加入去离子水800mL，超声至充分溶解，再采用真空过滤法进行过滤，将所得滤液通过旋转蒸发仪浓缩，在浓缩温度为110℃，真空度为0.096MPa的条件下进行真空浓缩，浓缩至至相对密度为3.17～5.31，得到三叶青提取物。

(1)高效液相检测

采用UPLC-MS法对实施例1得到的三叶青提取物进行高效液相检测，具体检测条件和方法为：

(1)色谱条件：Waters CORTECS C₁₈(2.1mm×100mm，1.6μm)；流动相:溶剂A(乙腈)与溶剂B(0.1％甲酸水)，梯度洗脱(0～0.5min，溶剂A8％～10％；0.5～2.5min，溶剂A10％～15％；2.5～4.5min，溶剂A15％～20％；4.5～6.5min，溶剂A20％～40％；6.5～8.5min，溶剂A(40％～60％)，流速:0.25mL/min，柱温:45℃，进样量:1μL；

(2)质谱条件:电喷雾负离子模式，毛细管电压2.5kv，锥孔电压50v，脱溶剂气流N₂800L/h，脱溶剂温度200℃，锥孔气流N₂ 50L/h，离子源温度150℃，Extractor 3.00V，碰撞气体氩气；

(3)供试品溶液制备：取三叶青药材粉碎，过60目筛得三叶青药材粉末。取三叶青0.5g，精密称定，置具塞三角瓶中，精密加入80％甲醇25mL，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率50kHz)30min，放冷，再称定重量，用80％甲醇补足减失重，摇匀，0.22μm滤膜滤过，取续滤液，稀释5倍，按1∶1(300∶300μL)加入内标后测定；

(4)对照品溶液制备：精密称取新绿原酸、槲皮素、山奈酚、儿茶素、山奈酚-3-0-芸香糖苷、紫云英苷、白藜芦醇、异牡荆素、芦丁、芹菜素对照品各1.0000mg，分别加入1mL纯甲醇(色谱级)使其充分溶解并稀释成储备液，备用。

分别精密量取供试品与对照品溶液各1μL，注入超高效液相色谱仪，得到所述的三叶青提取物中含有效活性成分新绿原酸、槲皮素、山奈酚、儿茶素、山奈酚-3-0-芸香糖苷、紫云英苷、白藜芦醇、异牡荆素、芦丁和芹菜素。

(2)抗菌试验

取稀释均匀的痤疮丙酸杆菌菌液，采用稀释涂布平板法均匀的将痤疮丙酸杆菌菌液接种于配制好的固体培养基上，接种完成后，将培养基置于37℃的恒温培养箱中培养24h，取出，将三叶青提取物稀释液滴入培养基表面，再次放入37℃的恒温培养箱中培养24h，取出，有抑菌圈形成，测量抑菌圈直径大小，平行实验6次，三叶青提取物抑菌效果的测试结果如下表2所示。

表2

实验次数	抑菌圈直径(mm)
		1	21.2±0.6
2	22.6±0.2
		3	20.3±0.5
4	22.0±0.3
		5	23.5±0.4
6	22.7±0.3

中药抗菌药敏等级划分，参照相应抗生素标准，抑菌圈直径>20mm为高敏，从表2的实验结果可知，三叶青提取物具有显著的抑痤疮丙酸杆菌效果。

应用例1～8

按照下表3中给出的应用例1～8的配方利用三叶青提取物制备清痘驻颜凝胶，具体加工方法为：

(1)将Carbopol树脂与PVP均匀分散于甘油和去离子水中，得到混合液A，再将去离子水与三乙醇胺、EDTA二钠盐混合均匀得到混合液B，将混合液B加入混合液A中，得到混合液C，其中，混合液A中去离子水添加量为混合液B去离子水添加量的2倍；

(2)将步骤(1)得到的混合液C进行脱气处理后，加入实施例1制得的三叶青提取物，调节pH＝5.8，再次进行脱气处理，储存、充装得到所述清痘驻颜凝胶。

表3

对应用例1中制得的三叶青清痘驻颜凝胶的效果进行测试，具体如下：(1)清痘效果测试：

为验证三叶青清痘驻颜凝胶的清痘效果，采用人体试用实验。

分别选取面部具有痘痘问题的18-25，26-35，36-45三个年龄段各20人(男女各10人)，分别给予三叶青清痘驻颜产品，连续使用30d(在此期间不使用其他清痘产品)，记录人体试用效果的结果如下表4所示，效果显著(痘痘消失)、有效果(痘痘得到改善)、无效果(无变化)、反作用(痘痘问题加重)。由表4的实验结果可得，三叶青清痘效果显著，对年龄段18-25岁的效果最好。

表4

年龄段	效果显著(人)	有效果(人）	无效果(人）	反作用(人)
					18-25	11	9	0	0
26-35	8	11	1	0
					36-45	6	12	2	0

(2)驻颜效果测试：

试验1羟脯氨酸含量测定

实验动物选用家兔10只，分别在家兔脊背对称位置用剃毛器剃除两片2×2cm位置，一片涂抹适量的生理盐水作为对照，另一片涂抹清痘驻颜凝胶作为样本，30d后，取背部皮肤组织块。经生理盐水漂洗后除去皮下脂肪及结缔组织，然后将皮肤组织剪碎，加入预冷生理盐水，用电动玻璃匀浆器在冰水浴中匀浆，匀浆结束后在冰水浴中进行5次超声波处理30s，分别得到各个家兔皮肤的组织匀浆液。

采用羟脯氨酸试剂盒测定组织匀浆液中羟脯氨酸含量(μg/mg protein)，测试结果如下表5所示。

表5

序号	涂抹生理盐水的样本(μg/mg)	涂抹凝胶的样本(μg/mg)
			1	1.84	2.01
2	1.79	1.98
			3	1.81	2.05
4	2.03	2.37
			5	1.92	2.30
6	1.78	2.28
			7	1.86	2.09
8	1.96	2.31
			9	2.05	2.35
10	1.82	1.96

羟脯氨酸是蛋白纤维胶原蛋白中的重要组成部分，是皮肤胶原蛋白特有的氨基酸，分子中环上的羟基能与蛋白质中的羧基或氨基形成氢键，对强化胶原的三股螺旋的坚固性具有重要作用，皮层中羟脯氨酸含量下降可作为皮肤衰老程度的指标。此外，羟脯氨酸对黑色素的生成有抑制作用，可用作增白助剂。

实验结果表明，使用三叶青清痘驻颜凝胶的组织羟脯氨酸的含量高于未使用组织，可以说明三叶青清痘驻颜凝胶具有一定抗衰老功效。

试验2修复细胞膜实验

在细胞膜层，氧化压力首先引起磷脂的过氧化，生成对细胞膜损伤性物质，三叶青提取物中有效活性成分能高效的将该有害产物还原为无毒醇类，从而起到保护细胞膜作用，实验具体操作步骤如下：

(1)配制浓度为3.0mmol/mL、6.0mmol/mL、15.0mmol/mL的过氧化亚油酸水溶液各10mL；

(2)配制浓度为30mmol/ml的小牛血清(BSA)水溶液10mL；

(3)配置不同含量的三叶青提取物(0.1％、0.2％、0.3％)10mL；

(4)将配置好的溶液按一定顺序混合，混合顺序依次是BSA-三叶青提取物-过氧亚油酸；

(5)配好的反应液在37℃下孵育3h；

(6)反应产物进行稀释(约100-1000倍)，用HPLC法进行分析；

三叶青提取物对过氧化亚油酸的还原率如下表6所示，由表6可知，三叶青有效活性成分对于过氧化亚油酸具有很高的还原率，且有效活性成分浓度越大，还原率越高；三叶青有效活性成分能将细胞膜层过氧化物还原为无毒醇类，从而起到保护细胞的作用，进而有驻颜效果。

表6

注：还原率＝(反应前过氧亚油酸量-反应后过氧亚油酸量)/反应前过氧亚油酸量×100％

综上所述，本发明得到的三叶青清痘驻颜凝胶具有抗菌、增强皮肤抗氧化能力，能促进胶原蛋白合成，具有一定的清痘、驻颜抗衰老的效果。

Claims

1.一种三叶青提取物在制备清痘驻颜凝胶中的应用，其特征在于，所述三叶青提取物在室温条件下的相对密度为3.17～5.31。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的三叶青提取物的制备方法为：将干燥的三叶青块根粉末加入去离子水中，超声至充分溶解，将得到的溶液真空过滤，再将滤液浓缩至相对密度为3.17～5.31，得到三叶青提取物。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的滤液浓缩条件为：浓缩温度为100～120℃，浓缩真空度为0.09～0.1MPa。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的清痘驻颜凝胶由如下重量百分比组成：

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述凝胶剂为卡波姆树脂和PVP。

6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，由如下重量百分比组成：

7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的清痘驻颜凝胶的制备方法，包括如下步骤：

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，步骤(1)中，所述的混合液A中去离子水添加量为混合液B去离子水添加量的1.5～2倍。

9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，步骤(2)中，调节pH值至5～6。