CN109788769A - 含乳糖酶的双微胶囊、其制备方法及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供含乳糖酶的双微胶囊，其包括：作为芯材料提供的乳糖酶；和依次包覆在待配制的芯材料上的初级包衣材料和次级包衣材料，提供用于制备所述含乳糖酶的双微胶囊的方法和作为所述含乳糖酶的双微胶囊的用途的包含所述含乳糖酶的双微胶囊的乳制品。

Description

含乳糖酶的双微胶囊、其制备方法及其用途
技术领域
本发明涉及含乳糖酶的双微胶囊、其制备方法及其用途，更具体地，涉及含乳糖酶的双微胶囊，其包括：作为芯材料提供的乳糖酶；和依次包覆在待配制的所述芯材料上的初级包衣材料和次级包衣材料，涉及用于制备所述含乳糖酶的双微胶囊的方法和作为所述含乳糖酶的双微胶囊的用途的包含所述含乳糖酶的双微胶囊的乳制品。
背景技术
自大约公元前8000年以来，人类一直在使用奶作为食物资源。然而，世界上超过三分之二的人口无法正常地消化奶。这是因为不能向人体内分泌足够量的乳糖酶，这被称为乳糖不耐症。
乳糖酶是由小肠分泌的酶，并通过将乳糖(二糖)分解为葡萄糖和半乳糖(均是单糖)来消化和吸收奶。当患有乳糖不耐症的人喝奶时，可能出现诸如腹痛、腹泻、恶心、腹胀等症状。
为了解决上述问题，在本领域中已经开发了酶固定化技术、使用超滤(UF)/反渗透(RO)系统的膜过滤技术、微囊化技术等。
酶固定化技术可以用少量的酶连续处理大量的奶。然而，当乳糖分解成葡萄糖和半乳糖时，奶的糖含量增加约四倍，从而导致消费者拒绝饮用该奶。
使用UF/RO系统的膜过滤技术是一种可以选择性地仅从奶中除去乳糖的技术。然而，该技术在处理奶的过程中导致约5％的收率损失，从而由于乳糖的消除而导致奶的固有甜味劣化。
更严重的是，当饮用不含乳糖的奶时，降低了奶中含有的钙转移到骨中的速率(Kwak等,Int.Dairy J.22,147-151(2012))。另外，设备和维护的成本昂贵，从而导致产品价格的提高。
乳糖酶微囊化技术是一种在不进行任何物理或化学处理的情况下将微囊化的乳糖酶添加到奶中的技术，并且在具有简单并且经济的方法的同时不会导致奶的固有味道的劣化。然而，现有的油包水(W/O)乳液型微胶囊非常不利于长期储存，因为它可能容易地在空气中被氧化，并且难以被粉碎，因为其外层形成为油层。
水包油包水(W/O/W)乳液型微胶囊包括用作外层材料的水溶性乳清分离蛋白(WPI)或麦芽糖糊精，因此它易于粉碎并且有利于长期储存和处理。然而，当将上述组分添加到奶中时，存在奶中的稳定性降低的缺点。
由于使用不溶于胃液并且只在小肠中溶解的肠溶包衣材料，使用肠溶包衣材料的乳糖酶微囊化是一种不仅可以大大改进微囊化的上述优点而且可以大大改善奶中的稳定性的方法。
然而，作为用于乳糖酶微囊化的常规技术，仅已知用于制备含有用脂质微囊化的乳糖酶的奶的方法(韩国专利公开出版号10-1993-0022957)，以及用于制备用于添加到奶中的用脂质微囊化的乳糖酶的方法(韩国专利公开出版号10-1993-0022958)。然而，尚未进行使用肠溶包衣材料的乳糖酶微囊化的研究。
此外，近年来，随着向老龄化社会的快速行进，对老年人健康的兴趣日益增加，因此迫切需要开发上述技术。
发明内容
[发明所要解决的问题]
考虑到上述情况，本发明的一个目的是提供含乳糖酶的双微胶囊，用于解决乳制品的乳糖不耐症。
此外，本发明的另一个目的是提供用于制备所述含乳糖酶的双微胶囊的方法。
进一步地，本发明的另一个目的是提供包含所述含乳糖酶的双微胶囊的乳制品。
[解决问题的手段]
为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了含乳糖酶的双微胶囊，其包括：作为芯材料提供的乳糖酶；和依次包覆在待配制的所述芯材料上的初级包衣材料和次级包衣材料。
根据本发明的另一方面，提供了用于制备乳糖酶的方法，其包括：提供乳糖酶作为芯材料，并且将所述芯材料与初级包衣材料和初级乳化剂一起搅拌，以得到乳糖酶的乳液；将所述乳糖酶的乳液与次级包衣材料和次级乳化剂一起搅拌，以得到乳糖酶的双微胶囊乳液；以及对所得到的乳糖酶的双微胶囊乳液进行配制。
此外，根据本发明的另一方面，提供了包含所述含乳糖酶的双微胶囊的乳制品。
[有益效果]
根据本发明，可以提供含乳糖酶的双微胶囊，其通过提供乳糖酶作为芯材料并且依次用待配制的初级包衣材料和次级包衣材料包覆所述芯材料而进行配制。
同时，由于根据本发明的含乳糖酶的双微胶囊使用仅在小肠中溶解的肠溶包衣材料，因此其不仅可以大大提高微囊化的优点，而且可以大大提高在奶中的稳定性，也可以解决乳制品的乳糖不耐症。
附图说明
图1是说明根据一个实施方案的微囊化的示意图。
图2是说明吸收的水分的量随着中链甘油三酯(MCT)的添加而变化的图。
图3是说明肠溶包衣乳糖酶微胶囊的微囊化收率的反应表面的图。
图4是说明在乳糖酶微囊化过程中的优化曲线的图表，其中y和d分别代表微胶囊的收率和优化条件的统计学上期望的分数。
图5是说明使用显微镜的肠溶乳糖酶微胶囊的观察结果的照片，其中A、B和C分别代表羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯(HPMCP)、虫胶和玉米醇溶蛋白的结果。
图6是说明肠溶乳糖酶微胶囊的zeta电位的图。
图7是说明肠溶乳糖酶微胶囊的粒径的图。
图8是说明添加有肠溶乳糖酶微胶囊的奶的理化性质的图，其中对照是市场上的奶制品。
图9是说明乳糖酶微胶囊的稳定性的图。
图10是说明在pH 2、pH 3和pH 4下肠溶乳糖酶微胶囊的体外释放特性的图。
图11是说明在pH 6、pH 7和pH 8下肠溶乳糖酶微胶囊的体外释放特性的图。
图12是说明饮用500mL补充有HPMCP包衣的乳糖酶微胶囊的奶后血糖变化的图。
图13是说明饮用500mL补充有HPMCP包衣的乳糖酶微胶囊的奶5分钟后通过5分法评价腹泻症状强度的结果的图。
图14是说明饮用500mL补充有HPMCP包衣的乳糖酶微胶囊的奶后通过5分法评价腹痛症状强度的结果的图。
图15是说明在饮用500mL补充有HPMCP包衣的乳糖酶微胶囊的奶后通过5分法评价可听肠鸣音的症状强度的结果的图。
图16是说明在饮用500mL补充有HPMCP包衣的乳糖酶微胶囊的奶后通过5分法评价腹胀的症状强度的结果的图。
图17是说明在饮用500mL补充有HPMCP包衣的乳糖酶微胶囊的奶后通过5分法评价恶心的症状强度的结果的图。
具体实施方式
本发明公开了含乳糖酶的双微胶囊，其包括：作为芯材料提供的乳糖酶；和依次包覆在待配制的所述芯材料上的初级包衣材料和次级包衣材料。
在本发明的含乳糖酶的双微胶囊中，作为含乳糖酶的双微胶囊的芯材料的乳糖酶可以来源于选自由乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)、米曲霉(Aspergillusoryzae)、黑曲霉(Aspergillus niger)、环状芽孢杆菌(Bacillus circulans)、大肠杆菌(Escherichia coli)和牛(Bos Taurus)组成的组的品种，或者可以是重组乳糖酶。
在本发明的含乳糖酶的双微胶囊中，所使用的初级包衣材料可以包括中链甘油三酯(MCT)。
在本发明的含乳糖酶的双微胶囊中，所使用的初级包衣材料可以包括氢化玉米油。
在本发明的含乳糖酶的双微胶囊中，所使用的初级包衣材料可以包括大豆油。
在本发明的含乳糖酶的双微胶囊中，所使用的初级包衣材料可以包括红花籽油。
在本发明的含乳糖酶的双微胶囊中，所使用的初级包衣材料可以包括乳脂肪(butter oil)。
在本发明的含乳糖酶的双微胶囊中，所使用的初级包衣材料可以包括选自由MCT、氢化玉米油、大豆油、红花籽油和乳脂肪组成的组中的至少两种。
在本发明的含乳糖酶的双微胶囊中，所使用的初级包衣材料可以包括适合于食用目的的任何材料。
在本发明的含乳糖酶的双微胶囊中，所使用的次级包衣材料可以包括羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯(HPMCP)。
在本发明的含乳糖酶的双微胶囊中，所使用的次级包衣材料可以包括玉米醇溶蛋白。
在本发明的含乳糖酶的双微胶囊中，所使用的次级包衣材料可以包括虫胶。
在本发明的含乳糖酶的双微胶囊中，所使用的次级包衣材料可以包括选自由羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、玉米醇溶蛋白、虫胶、尤特奇(Eudragit)、醋酸邻苯二甲酸纤维素、醋酸琥珀酸纤维素、聚醋酸乙烯邻苯二甲酸酯、醋酸偏苯三酸纤维素、醋酸琥珀酸羟丙甲纤维素和水杨酸苯酯组成的组中的至少一种。
在本发明的含乳糖酶的双微胶囊中，尤特奇的实例可以包括尤特奇L-100、尤特奇S-100等。
在本发明的含乳糖酶的双微胶囊中，所使用的次级包衣材料可以包括尤特奇。
在本发明的含乳糖酶的双微胶囊中，所使用的次级包衣材料可以包括适合于食用目的的任何材料。
在本发明的含乳糖酶的双微胶囊中，所述双微胶囊可以具有几纳米至几毫米的粒径。
在本发明的含乳糖酶的双微胶囊中，所述双微胶囊可以具有100nm至1mm的粒径。
在本发明的含乳糖酶的双微胶囊中，所述双微胶囊可以具有1μm至10μm的粒径。
在本发明的含乳糖酶的双微胶囊中，制剂可以是选自由粉末、溶液、片剂和颗粒组成的组中的任何形式。
在本发明的含乳糖酶的双微胶囊中，所述微胶囊可以是含乳糖酶的双微胶囊粉末，其包括：作为芯材料提供的乳糖酶；和依次包覆在所述芯材料上的初级包衣材料和次级包衣材料，然后粉碎。
在本发明的含乳糖酶的双微胶囊中，所述微胶囊可以是含乳糖酶的双微胶囊粉末，其包括：作为芯材料提供的乳糖酶；和依次包覆在所述芯材料上的初级包衣材料和次级包衣材料，然后配制成溶液。
在本发明的含乳糖酶的双微胶囊中，所述微胶囊可以是含乳糖酶的双微胶囊粉末，其包括：作为芯材料提供的乳糖酶；和依次包覆在所述芯材料上的初级包衣材料和次级包衣材料，然后配制成片剂。
在本发明的含乳糖酶的双微胶囊中，所述微胶囊可以是含乳糖酶的双微胶囊粉末，其包括：作为芯材料提供的乳糖酶；和依次包覆在所述芯材料上的初级包衣材料和次级包衣材料，然后配制成颗粒。
在本发明的含乳糖酶的双微胶囊中，除了作为芯材料的乳糖酶之外，所述双微胶囊还可以包括功能组分。
在本发明的含乳糖酶的双微胶囊中，当除了作为芯材料的乳糖酶之外还包括所述功能组分时，可以使用其中乳糖酶和功能组分以1:9至9:1的重量比混合的混合物。
在本发明的含乳糖酶的双微胶囊中，所使用的功能组分可以包括杜松(Juniperusrigida)果实提取物，其是杜松(Juniperus rigida S.et Z.)的果实提取物。
在本发明的含乳糖酶的双微胶囊中，杜松果实提取物可以通过以下得到：在基于杜松果实重量5至20倍的净化水中放入杜松果实并混合；然后，在90℃至120℃的温度下，将其提取并过滤，使得具有基于初始净化水的体积的10％至50％的体积，以得到初级滤液；并且减压浓缩所述初级滤液，接着真空冷冻干燥，使得具有初级滤液的体积的10％至50％的体积，从而用作功能组分。
此外，本发明公开了用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法。
本发明的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法可以是包括以下的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法：提供乳糖酶作为芯材料，并且将所述芯材料与初级包衣材料和初级乳化剂一起搅拌，以得到乳糖酶的乳液；将所述乳糖酶的乳液与溶解在醇中的次级包衣材料和次级乳化剂一起搅拌，以得到乳糖酶的双微胶囊乳液；以及粉碎所述乳糖酶的双微胶囊乳液。
在本发明的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法中，在得到乳糖酶的乳液的步骤中，用于包覆所述芯材料的初级包衣材料可以包括中链甘油三酯(MCT)。
在本发明的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法中，在得到乳糖酶的乳液的步骤中，用于包覆所述芯材料的初级包衣材料可以包括氢化玉米油。
在本发明的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法中，在得到乳糖酶的乳液的步骤中，用于包覆所述芯材料的初级包衣材料可以包括大豆油。
在本发明的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法中，在得到乳糖酶的乳液的步骤中，用于包覆所述芯材料的初级包衣材料可以包括红花籽油。
在本发明的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法中，在得到乳糖酶的乳液的步骤中，用于包覆所述芯材料的初级包衣材料可以包括乳脂肪。
在本发明的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法中，在得到乳糖酶的乳液的步骤中，用于包覆所述芯材料的初级包衣材料可以包括选自由MCT、氢化玉米油、大豆油、红花籽油和乳脂肪组成的组中的至少两种。
在本发明的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法中，在得到乳糖酶的乳液的步骤中，用于包覆所述芯材料的初级包衣材料可以包括适合于食用目的的任何材料。
在本发明的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法中，在得到乳糖酶的乳液的步骤中，所使用的初级乳化剂可以包括聚甘油聚蓖麻酸酯、蔗糖脂肪酸酯和聚甘油脂肪酸酯。
在本发明的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法中，所述初级乳化剂可以以0.5至5的亲水亲油平衡(HLB)值使用。
在本发明的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法中，所述初级乳化剂可以以0.25％至1.25％的浓度使用。
在本发明的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法中，所述初级乳化剂可以包括聚甘油聚蓖麻酸酯，其以0.5至5的HLB值并且以0.25％至1.25％的浓度使用。
在本发明的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法中，所述初级乳化剂可以包括蔗糖脂肪酸酯，其以0.5至5的HLB值并且以0.25％至1.25％的浓度使用。
在本发明的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法中，所述初级乳化剂可以包括聚甘油脂肪酸酯，其以0.5至5的HLB值并且以0.25％至1.25％的浓度使用。
在本发明的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法中，在得到乳糖酶的乳液的步骤中，所述乳酸酶的乳液可以通过以下得到：搅拌所述芯材料、所述初级包衣材料和所述初级乳化剂以得到预乳液，然后搅拌该预乳液。
在得到本发明的含乳糖酶的双微胶囊的乳糖酶乳液的步骤中，所述乳糖酶乳液可以通过以下得到：在35℃至40℃和1000rpm至2000rpm下将所述芯材料、所述初级包衣材料和所述初级乳化剂搅拌20分钟至40分钟以得到预乳液，然后在35℃至40℃和8500rpm至9500rpm下将该预乳液搅拌1分钟至3分钟。
在得到本发明的含乳糖酶的双微胶囊的乳糖酶乳液的步骤中，所述乳糖酶乳液可以通过以下得到：在37.5℃和1500rpm下将所述芯材料、所述初级包衣材料和所述初级乳化剂搅拌30分钟以得到预乳液，然后在37.5℃和9000rpm下将该预乳液搅拌2分钟。
在得到本发明的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法的乳糖酶乳液的步骤中，所述芯材料和所述初级包衣材料可以以1:9(v/v)至9:1(v/v)的比例混合，然后搅拌。
在得到本发明的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法的乳糖酶乳液的步骤中，所述芯材料和所述初级乳化剂可以以1:9(v/v)至9:1(v/v)的比例混合，然后搅拌。
在本发明的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法中，当制备乳糖酶的双微胶囊乳液时，所使用的次级包衣材料可以包括羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯(HPMCP)。
在本发明的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法中，所使用的次级包衣材料可以包括玉米醇溶蛋白。
在本发明的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法中，所使用的次级包衣材料可以包括虫胶。
在本发明的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法中，所使用的次级包衣材料可以包括选自由羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、玉米醇溶蛋白、虫胶、尤特奇(Eudragit)、醋酸邻苯二甲酸纤维素、醋酸琥珀酸纤维素、聚醋酸乙烯邻苯二甲酸酯、醋酸偏苯三酸纤维素、醋酸琥珀酸羟丙甲纤维素和水杨酸苯酯组成的组中的至少一种。
在本发明的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法中，尤特奇的实例可以包括尤特奇L-100、尤特奇S-100等。
在本发明的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法中，所使用的次级包衣材料可包括尤特奇。
在本发明的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法中，当制备乳糖酶的双微胶囊乳液时，所使用的次级包衣材料可以包括适合于食用目的的任何材料。
在本发明的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法中，所述醇可以是具有1-4个碳原子的醇，并且优选使用乙醇。
在本发明的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法中，当制备乳糖酶的双微胶囊乳液时，所使用的次级乳化剂可以包括吐温60(Tween 60)。
在本发明的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法中，当制备乳糖酶的双微胶囊乳液时，所使用的次级乳化剂可以包括聚氧乙烯脱水山梨糖醇单月桂酸酯(PSML)。
在本发明的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法中，所述次级乳化剂可以以13至17的亲水亲油平衡(HLB)值使用。
在本发明的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法中，所述次级乳化剂可以以0.5％至1.5％的浓度使用。
在本发明的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法中，所述次级乳化剂可以包括聚氧乙烯脱水山梨糖醇单月桂酸酯(PSML)，其以13至17的HLB值和0.5％至1.5％的浓度使用。
在本发明的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法中，所述次级乳化剂可以包括吐温60，其以13至17的HLB值和0.5％至1.5％的浓度使用。
在本发明的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法中，在得到乳糖酶的双微胶囊乳液的步骤中，乳糖酶的双微胶囊乳液可以通过以下得到：搅拌所述乳糖酶的乳液、所述次级包衣材料和所述次级乳化剂以将其均化，然后将其离心。
在本发明的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法中，在得到乳糖酶的双微胶囊乳液的步骤中，乳糖酶的双微胶囊乳液可以通过以下得到：将所述乳糖酶的乳液、所述次级包衣材料和所述次级乳化剂在35℃至40℃和1500rpm至2500rpm下搅拌5分钟至30分钟以将其均化，然后在3℃至5℃和3000xg至4000xg下离心10分钟至20分钟。
在本发明的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法中，在得到乳糖酶的双微胶囊乳液的步骤中，所述乳糖酶的乳液和所述次级包衣材料可以以1:9(v/v)至9:1(v/v)的比例混合，然后搅拌，接着通过离心得到乳糖酶的双微胶囊乳液。
在本发明的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法中，在得到乳糖酶的双微胶囊乳液的步骤中，所述乳糖酶的乳液和所述次级乳化剂可以以1:9(v/v)至9:1(v/v)的比例混合，然后搅拌，接着通过离心得到乳糖酶的双微胶囊乳液。
作为本发明的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法的实例，含乳糖酶的双微胶囊可以通过包括以下制备：提供乳糖酶作为芯材料，并且将所述芯材料与作为初级包衣材料的中链甘油三酯(MCT)和作为初级乳化剂的选自由聚甘油聚蓖麻酸酯、蔗糖脂肪酸酯和聚甘油脂肪酸酯组成的组中的至少一种一起搅拌以得到预乳液，并进一步搅拌该混合物以得到乳糖酶的乳液，其中所述芯材料和所述初级包衣材料以1:9(v/v)至9:1(v/v)的比例混合，并且所述芯材料和所述初级乳化剂以1:9(v/v)至9:1(v/v)的比例混合，然后搅拌以得到乳糖酶的乳液；提供乳糖酶的乳液作为芯材料，向所得到的乳糖酶的乳液中加入作为次级包衣材料的选自由羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、玉米醇溶蛋白和虫胶组成的组中的任何一种和作为次级乳化剂的选自由吐温60和聚氧乙烯脱水山梨糖醇单月桂酸酯组成的组中的任何一种，搅拌以将其均化，接着通过离心得到乳糖酶的双微胶囊乳液，其中所述乳糖酶的乳液和所述次级包衣材料以1:9(v/v)至9:1(v/v)的比例混合，并且所述乳糖酶的乳液和所述次级乳化剂以1:9(v/v)至9:1(v/v)的比例混合，然后搅拌，接着通过离心得到乳糖酶的双微胶囊乳液；并对所得到的乳糖酶的双微胶囊乳液进行配制。
作为本发明的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法的另一个实例，含乳糖酶的双微胶囊可以通过包括以下制备：提供乳糖酶作为芯材料，并将该芯材料与作为初级包衣材料的MCT和作为初级乳化剂的选自由聚甘油聚蓖麻酸酯、蔗糖脂肪酸酯和聚甘油脂肪酸酯组成的组中的至少一种一起在35℃至40℃和1000rpm至2000rpm下搅拌20分钟至40分钟以得到预乳液，接着通过在35℃至40℃和8500rpm至9500rpm下搅拌1分钟至3分钟得到乳糖酶的乳液，其中所述芯材料和所述初级包衣材料以1:9(v/v)至9:1(v/v)的比例混合，并且所述芯材料和所述初级乳化剂以1:9(v/v)至9:1(v/v)的比例混合，然后搅拌以得到乳糖酶的乳液；提供乳糖酶的乳液作为芯材料，向所得到的乳糖酶的乳液中加入作为次级包衣材料的选自由羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、玉米醇溶蛋白和虫胶组成的组中的任何一种和作为次级乳化剂的选自由吐温60和聚氧乙烯脱水山梨糖醇单月桂酸酯组成的组中的任何一种，并且在35℃至40℃和1500rpm至2500rpm下搅拌5分钟至30分钟搅拌以将其均化，接着通过在3℃至5℃和3000xg至4000xg下离心10分钟至20分钟得到乳糖酶的双微胶囊乳液，其中所述乳糖酶的乳液和所述次级包衣材料以1:9(v/v)至9:1(v/v)的比例混合，并且所述乳糖酶的乳液和所述次级乳化剂以1:9(v/v)至9:1(v/v)的比例混合，然后搅拌，接着通过离心得到乳糖酶的双微胶囊乳液；并对所得到的乳糖酶的双微胶囊乳液进行配制。
在本发明的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法中，对所得到的乳糖酶的双微胶囊乳液进行配制的步骤可以使用食品工业领域中能够对液相的乳糖酶的双微胶囊乳液进行配制的方法。
在本发明的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法中，制剂可以是选自由粉末、溶液、片剂和颗粒组成的组的任何形式。
在本发明的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法中，作为对所得到的乳糖酶的双微胶囊乳液进行配制的方法的一个实例，可以使用选自由喷雾冷却(spray chilling)、喷雾降温(spray cooling)、喷雾干燥、悬浮加工、挤出、凝聚、共结晶、分子包合、冷冻干燥和旋转悬浮分离组成的组中的至少一种方法，它们是粉碎方法。
在本发明的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法中，喷雾干燥是最典型的方法，其对于工业化在经济上有利，并且用于封装待应用于食品的材料。喷雾干燥是一种方法，其包括：使包衣材料吸水，然后分散目标材料，并将其混合物喷射到高温室中。也就是说，通过喷雾系统对包衣材料溶液进行微粒化，使其与热空气接触，同时增加其总比表面积，并迅速蒸发以形成粉末的双微胶囊。通过喷雾干燥进行双微囊化的效率取决于用于封装的包衣材料的形式，其还影响干燥前双微胶囊的乳化稳定性，以及干燥后的物理稳定性和其储存寿命。另外，通过进行粉碎，可以提高双微胶囊的保存和处理的便利性。
当制备本发明的含乳糖酶的双微胶囊时，除了作为芯材料的乳糖酶之外，双微胶囊还可以包含功能组分。
在本发明的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法中，当除了作为芯材料的乳糖酶之外还包含功能组分时，可以使用其中乳糖酶和功能组分以1:9至9:1的重量比混合的混合物。
在本发明的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法中，所使用的功能组分可以包括杜松果实提取物，其是杜松(Juniperus rigida S.et Z.)的果实提取物。
在本发明的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法中，杜松果实提取物可以通过以下得到：在基于杜松果实重量5至20倍的净化水中放入杜松果实并混合；然后，在90℃至120℃的温度下，将其提取并过滤，使得具有基于初始净化水的体积的10％至50％的体积，以得到初级滤液；减压浓缩所述初级滤液，接着真空冷冻干燥，使得具有基于初级滤液的体积的10％至50％的体积，从而用作功能组分。
除了上述含乳糖酶的双微胶囊之外，本发明还公开了乳制品，其包含通过上述方法制备的含乳糖酶的双微胶囊。
本发明的包含含乳糖酶的双微胶囊的乳制品可以以基于乳制品总重量的0.1％至10％的量包含含乳糖酶的双微胶囊。
在本发明的包含含乳糖酶的双微胶囊的乳制品中，该乳制品可以是选自由奶、酸奶、山羊奶、乳清蛋白浓缩物和冰淇淋组成的组中的任何一种。
在本发明的包含含乳糖酶的双微胶囊的乳制品中，所述乳制品可以是奶。
在本发明的包含含乳糖酶的双微胶囊的乳制品中，所述乳制品可以是酸奶。
在本发明的包含含乳糖酶的双微胶囊的乳制品中，所述乳制品可以是山羊奶。
在本发明的包含含乳糖酶的双微胶囊的乳制品中，所述乳制品可以是乳清蛋白浓缩物。
在本发明的包含含乳糖酶的双微胶囊的乳制品中，可以将乳清蛋白浓缩物添加到用于预防腹泻的健康补充剂中。
在本发明的包含含乳糖酶的双微胶囊的乳制品中，所述乳制品可以是冰淇淋。
对于本发明的含乳糖酶的双微胶囊、其制备方法及其用途，本发明人在多种条件下进行了实验，并且基于含乳糖酶的双微胶囊的发现完成了本发明，为了实现本发明的目的，通过上述条件提供了其制备方法及其用途。
在下文中，将参考以下实验实施例、实施例和应用实施例详细描述本发明。然而，这些实施例旨在更详细地描述本发明，然而本发明的范围不限于此。
<实验实施例>乳糖酶的双微胶囊的制备
Ⅰ.材料和方法
1.材料和试剂
1)材料
(1)芯材料
使用Godo YNL-2(合同酒精株式会社(Godo Shusei Co.,Ltd.),东京,日本)作为乳糖酶。该酶来源于乳酸克鲁维酵母，活性为7,448单位/克。在本文中，1单位以这样的方式定义：每分钟1μmol邻硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷(ONPG)分解成邻硝基苯酚和D-半乳糖。
(2)包衣材料
作为初级包衣材料的中链甘油三酯(MCT)购自Wellga Co.,Ltd.(城南，韩国)。作为次级包衣材料的HPMCP、虫胶和玉米醇溶蛋白购自三星精密化学株式会社(Samsung FineChemicals Co.,Ltd.)、Shellac Korea Co.,Ltd.和Richwood Trading(Pooglimmuyark)Co.,Ltd.
(3)乳化剂
聚甘油聚蓖麻酸酯(PGPR；HLB 0.6)和聚氧乙烯脱水山梨糖醇单月桂酸酯(PSML；HLB 16.7)是纯度为95.0％或更高的食品添加剂级产品，购自IlshinWells(首尔，韩国)。
2.实验方法
1)乳糖酶的双微胶囊粉末的制备
使用肠溶包衣材料的乳糖酶的微囊化是通过改进Quispe-Condori等.(2011)的方法进行的。向乳糖酶中加入MCT(MCT是初级包衣材料并且用作肠溶包衣材料的增塑剂)和作为乳液的PGPR 0.75％(w/v)，然后通过高速匀浆器(HMZ-20DN,Poonglim Co.，首尔，韩国)以9000rpm的速率将混合物均化1分钟。
如图1中示出的微囊化的示意图，作为肠溶次级包衣材料的HPMCP通过以下制备：在85％(v/v)的乙醇中溶解，接着将初级乳液混入其中以在2500rpm下均化4分钟，然后使用无气喷枪(W-300，Wagner GmbH，马尔克多尔夫，德国)将该混合物喷雾到含有0.25％PSML的冷分散液中。
通过在2500rpm下离心4分钟来分离微胶囊。然后，将微胶囊洗涤三次并使用深度冷冻机(MDF-U53V，山洋电气株式会社(Sanyo Denki Co.,Ltd.)，东京，日本)在-80℃冷冻，并冷冻干燥，接着进行粉碎。
2)使用响应面分析的实验设计
将影响微囊化过程的工艺参数设定为包衣材料X1和芯材料X2，分别设定为在1g/100mL至15g/100mL和3mL至15mL的范围内。其结果以-1、0和+1三个等级编码，并在下表1中列出。
[表1]
根据中心组合设计，对总共11个实验组进行实验。用Minitab版本16对其结果进行统计学处理，并总结为下面的方程1。在以下方程1中，Y是因变量，并且β0、β1和β2是每个项的常数。
[方程1]
3)微囊化收率
为了测量乳糖酶的微囊化收率，将具有一些改进的Kawaktsu等.ColloidsSurf.A,189,257-264(2001)的方法应用于测量。
为了将未囊化的滤液从双包覆乳液中分离，以3000xg的速率离心5分钟。通过使用具有0.45μm孔径的注射器式过滤器对通过离心分离的滤液进行过滤。
将2mL在水浴中于37℃预热15分钟的5mM ONPG溶液加入0.5mL如上所述得到的样品中，并在37℃下反应15分钟。通过在冷却下向混合物中加入0.5mL的500mM碳酸钠溶液来终止反应，并测量其在420nm处的吸光度。
使用下面的方程2计算微囊化收率，并且重复样品测量三次。
[方程2]
4)乳糖酶微胶囊的显微观察
通过使用RSM的优化方法，使用光学显微镜(Eclipse 80i，尼康，东京，日本)，通过将其放大1000倍来观察包覆有HPMCP、虫胶和玉米醇溶蛋白的次级包衣材料的乳糖酶微胶囊。
5)乳糖酶微胶囊粉末的扫描电子显微镜(SEM)观察
通过SEM观察乳糖酶微胶囊粉末以确定其表面特征。
6)粒径的分析
使用粒径分析仪(Mastersizer 2000，马尔文仪器有限公司(MalvernInstruments Ltd.)，伍斯特郡，英国)进行乳糖酶微胶囊粉末的粒径的分析。使用最佳条件，将包覆有多种次级包衣材料的乳糖酶微胶囊以1:400(w/v)的比例加入到10mL蒸馏水中，并在25℃下进行测量。
7)zeta电位的测量
为了估计乳化酶微胶囊在奶中分散时的分布，使用粒径分析仪(ELSZ2-PLUS，大塚电子株式会社(Otsuka Electronics Co.,Ltd.)，大阪，日本)测量zeta电位。
将0.01g样品分散在调节至pH 2至pH 12的10mL蒸馏水中，并进行超声处理5分钟，然后在25℃下放置15分钟。取1mL上清液并注入流动池中，并在25℃下测量zeta电位。此时，测量点分别为0.7、0.35、0、-0.35和-0.7。
8)肠溶乳糖酶微胶囊的体外释放特性的评价
使用人工胃液和人工小肠液测量肠溶乳糖酶微胶囊的体外释放特性。通过改进Luan等.Int.J.Pharm.324,168-175(2006)和Papagianni等.Enzyme Microb.Technol.45,514-552(2009)的方法进行人工胃肠环境中释放特性的测量。
将1g胃蛋白酶溶解在25mL 0.1M盐酸中以制备人造胃液。将1g肠溶微胶囊溶于100mL 5％(w/v)乳糖溶液中，用6M盐酸调节至pH 2、pH 3和pH 4，并向其中加入1mL人造胃液。
通过以30分钟的间隔取样并使用37℃和100rpm的摇动水浴将其分解2小时来测量肠溶乳糖酶微胶囊的降解速率。
通过分析残留乳糖的含量来测量肠溶乳糖酶微胶囊的降解速率。通过稍微改进Kwak和Jeon,J.Food Sci.53,975-976(1988)的方法进行残留乳糖的含量分析。
将5mL样品和25mL三级蒸馏水混合并置于50mL容量瓶中并用乙腈稀释以固定其体积。混合后，以5000xg离心10分钟，取出上清液，使用0.45μm孔径的聚偏二氟乙烯(PVDF)过滤器过滤。
使用HPLC(Dionex Co.，森尼韦尔，加利福尼亚州，美国)和折射率检测器(RI-101,昭和电工株式会社(Showa Denko K.K.Co.)，东京，日本)分析样品。在这种情况下，使用NH2柱(4.6×250mm，Hector-M,RS tech Co.，大田，韩国)作为柱，并以2.0mL/min速率通过流动的75％(v/v)乙腈进给流动相。
9)添加有肠溶乳糖酶微胶囊的奶的理化性质评价
为了评价添加有肠溶乳糖酶微胶囊的奶的理化性质，将肠溶微胶囊以1％(w/v)加入到200mL市售奶中，并在4℃的环境中储存12天以观察PH、色度和乳糖酶的释放速率。
此时，如上所述，通过残留乳糖的含量分析来测量乳糖酶的释放速率。
10)感官评价
对于添加有肠溶乳糖酶微胶囊的奶的感官评价，选择了不反对喝奶的10个男性和女性测试组(3名男性和7名女性)，其平均年龄为26岁。
每1小时对所选测试组进行三次甜味和异味训练。将1％(w/v)乳糖酶微胶囊加入到市售奶中，并在4℃的环境中储存12天用于进行感官测试。
将样品放入带有盖子的50mL杯中，并通过标记任意4位数字提供给测试组。使用5分法(1＝非常弱，3＝中等，5＝非常强)表示甜味和异味。
11)临床试验
为了确定应用乳糖酶微胶囊的奶改善乳糖不耐症的效果，选择了前20名患有乳糖不耐症的患者(12名男性和8名女性，其平均年龄为41.7岁)。
这些患者没有胃肠道问题的病史，也没有糖尿病史。在饮用500mL市售奶(相当于25g乳糖)后，当患者的血糖在30分钟至60分钟内增加至低于20mg/dL时，患者被确定患有乳糖不耐症(Finkenstedt等.,Brit.med.J.292,161-162,(1986)；Greenberger和Isselbacher,harrison’s principles of internal medicine,纽约:麦格劳-希尔(McGraw-Hill),1735(1983))。
如上所述选择的测试组在空腹时饮用500mL混合有1g微胶囊的市售奶，然后在3小时内每30分钟测量其血糖。
同时，使用5分法(1＝无、3＝中度、5＝极端)记录测试组由乳糖不耐症引起的各种症状(腹泻、腹痛、腹胀、可听肠鸣音和恶心)的强度。
12)统计处理
使用统计分析系统(SAS)9.0对由实验得到的数据进行方差分析(ANOVA)，并使用最小显著性差异(LSD)以5％显著性水平进行显著性检验。
3.结果
1)MCT添加量的优化
图2说明了吸收水分的量随MCT添加的变化。如图2所示，随着MCT的比例增加，吸收的水分的量趋于减少。然而，当MCT和肠溶包衣材料的比例为0.50∪∶1.00时没有观察到显著差异。
因此，可以看出，作为初级包衣材料的MCT的添加量与肠溶包衣材料的增塑剂的比例最优选为0.50∶1.00。
2)使用RSM的微囊化过程的优化
在基于中心组合设计的条件下对总共11个实验组进行实验分析，并且从各个实验组得到的测量收率的结果在下表2中列出。然后，使用Minitab 16对得到的结果进行统计处理(表3)。
[表2]
1X1和X2分别是包衣材料的浓度(g/100mL)和β-半乳糖苷酶的量(mL)。
2Y是微囊化的收率
[表3]
1X1和X2分别是包衣材料的浓度和芯材料的量
根据上表中的结果，在图3和图4中示出了微囊化收率Y随每个自变量变化的回归方程。在这种情况下，R2值为0.755。
根据所得到的回归方程，当包衣材料的浓度为10.7576g/mL且芯材料的量为3.0mL时，显示出最高收率99.98％。
3)肠溶乳糖酶微胶囊的显微观察
使用优化的方法，使用光学显微镜(Eclipse 80i，尼康，东京，日本)通过将其放大1000倍来观察包覆有多种包衣材料(HPMCP、虫胶和玉米醇溶蛋白)的肠溶乳糖酶微胶囊。
可以确认乳糖酶被捕获在胶囊内，并且圆形胶囊均匀分散(图5)。
4)肠溶乳糖酶微胶囊的zeta电位的测量
使用优化的方法，测量包覆有多种包衣材料(HPMCP、虫胶和玉米醇溶蛋白)的肠溶乳糖酶微胶囊的zeta电位。测量结果如图6所示。
如图6所示，在连续将pH从2变为12时测量zeta电位。结果，随着pH增加，zeta电位的绝对值趋于增加。特别地，在pH 6.8(这是奶的典型pH)附近，包覆有HPMCP、虫胶和玉米醇溶蛋白的乳糖酶微胶囊的zeta电位分别显示为-41.2mV、-59.1mV和-90.0mV。
通常，当zeta电位为±30mV或更高时，可以说颗粒的分散性良好(Freitas和Muller,Int.J.Pharm.,168,221-229(1988))。基于这些结果，可以看出包覆有肠溶包衣材料的乳糖酶微胶囊在奶中的分散性方面可以是优异的。
在用Kwak等.J.Dairy Sci.84,1576-1582(2001)的MCT和PGMS包覆的液体乳糖酶微胶囊的情况下，存在一个缺点，即当加入到奶中时，微胶囊由于形成W/O乳液而漂浮。因此，存在其外观不好的缺点，并且乳糖酶周围的脂肪层通过与空气中的氧气接触而容易酸化。另一方面，本发明的微胶囊在奶中的分散性方面是优异的，并因此可以认为已经克服了上述缺点。
5)肠溶乳糖酶微胶囊的尺寸分布
作为测量肠溶乳糖酶微胶囊的尺寸(粒径)的结果(图7)，包覆有HPMCP、虫胶和玉米醇溶蛋白的乳糖酶微胶囊分别具有3.370μm、5.192μm和2.686μm的尺寸。
Kobayashi等Langmuir,21,5761-5769(2005)报道，粒径越小，溶液中颗粒的聚集越慢并且越稳定。因此，基于以上测量的zeta电位的结果和尺寸分布的结果，可以看出本发明的肠溶乳糖酶微胶囊可以很好地分散在奶中。
6)感官评价
12个储存日的感官评价结果如下表4所示。如表4所示，HPMCP、虫胶和玉米醇溶蛋白显示出在储存期间其甜度略微增加的结果。
然而，HPMCP与初始状态相比没有显著差异，并且与市售奶(对照)相比也没有显著差异(p<0.05)。
虫胶显示出比HPMCP更高的甜度，并且与市售奶和初始状态相比，从储存的第8天和第10天存在显著差异(p<0.05)。证实玉米醇溶蛋白的甜度增加相对低于其它两种样品。
对于异味的情况，HPMCP和虫胶在储存期间倾向于略微增加，并且在虫胶中观察到比HPMCP更高的异味。此外，可以看出，与市售奶相比，两种样品从储存的第8天显示出显著差异(p<0.05)。
然而，玉米醇溶蛋白从一开始就显示出比其它样品更高的异味值，并且在整个储存期间具有最高的异味增加，即与对照和其它样品相比，玉米醇溶蛋白在异味上具有显著差异(p<0.05)。因此，可以得出玉米醇溶蛋白在感官性质方面不是优选的结果。
可以看出，当考虑到市售奶的消费期通常为一周或更短时，在典型消费期内，与市售奶相比，HPMCP和虫胶在感官性质方面没有显示出大的差异。
[表4]
1 HPMCP：羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯
2通过邓肯多重范围检验，列(a-d)和行(A-F)中具有不同上标的值在p＜0.05时是显著的
3对照：市售奶
7)添加有肠溶乳糖酶微胶囊的奶的理化性质评价
(1)pH值
如图8所示，没有胶囊的市售奶(对照)、含有HPMCP包覆的胶囊的奶(HPMCP)和含有虫胶包覆的胶囊的奶(虫胶)分别显示出6.79至6.80、6.65至6.53和6.81至6.80的pH，并且在储存期间pH没有显示出显著变化。
(2)色度
储存期间色度的变化列于下表5中。如表5中所示，到储存的第4天虫胶具有显著降低的L*颜色值，但之后没有显著差异(p＜0.05)。此外，HPMCP在储存期间没有显示出显著差异(p＜0.05)。
同时，HPMCP和虫胶显示出略高于对照的a*颜色值，但没有显著差异(p＜0.05)。到储存的第6天，虫胶显示出比对照略高的b*颜色值，但之后没有显著差异(p＜0.05)。
从以上结果可以看出，肠溶乳糖酶微胶囊的添加不会显著影响奶的色度。
[表5]
1 HPMCP：羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯
2通过邓肯多重范围检验，列(a-c)和行(A-G)中具有不同上标的值在p＜0.05时是显著的
3对照：市售奶
(3)乳糖酶微胶囊的稳定性
通过在储存期间测量残留乳糖来观察乳糖酶微胶囊的稳定性。结果，HPMCP和虫胶均显示出残留乳糖随时间逐渐减少(图9)。
在储存的第12天，HPMCP和虫胶分别显示出81.18％和64.91％的残留乳糖，因此HPMCP在奶中比虫胶更稳定。这些结果比由Kwak等.J.Dairy Sci.84,1576-1582(2001)报道的添加了包覆有PGMS和MCT的液体乳糖酶微胶囊的奶中残留乳糖在储存的第12天时为28.81％的情况要好得多。
8)肠溶乳糖酶微胶囊的体外释放特性评价
当食物进入胃并与胃酸混合时，pH逐渐降低。为了说明这种现象，分别观察了pH2、pH 3和pH 4时的释放速率。其结果如图10所示。
如图10中所示，HPMCP和虫胶在pH 2.0时在120分钟内分别显示出0.1％和0.2％的释放速率，可以看出它们有效地保护了作为芯材料的乳糖酶，在酸性条件的胃肠环境中释放最少量的乳糖酶。
相比之下，在人工小肠环境中，HPMCP和虫胶在pH 7和pH 8时在120分钟内分别显示出75％、87％和93％、97％的释放速率。因此，可以看出肠溶乳糖酶微胶囊可以在小肠环境中在短时间内有效地释放芯材料，从而有助于改善乳糖不耐症(图11)。
9)临床实验
患有乳糖不耐症的人在空腹时饮用混合有肠溶包覆的乳糖酶微胶囊的奶，然后在3小时内每30分钟测量其血糖。测量结果如图12所示。
如图12所示，与饮用一般市售奶(对照)的情况相比，观察到饮用后血糖迅速增加直至第60分钟。这意味着在小肠中奶被肠溶乳糖酶微胶囊释放的乳糖酶分解成单糖并被吸收到体内以用作能量来源，从而改善乳糖不耐症。
在血糖测试期间，测试人员使用5分法(1＝非常弱，3＝中等，5＝非常强)记录感觉腹泻、腹痛、腹胀、可听肠鸣音、恶心等的强度，这些是由乳糖不耐症引起的典型已知症状。评价结果如图13至图17所示。
在图12至17中，市售奶制品用作对照。
参见图13至图17，证实了与饮用市售奶的情况相比，饮用添加有微胶囊的奶后，大多数症状显著减轻，并且可以看出添加有肠溶乳糖酶微胶囊的奶有效地改善了乳糖不耐症。
<实施例1>
乳糖酶的乳液通过以下得到：提供乳糖酶作为芯材料，并且将芯材料与作为初级包衣材料的中链甘油三酯(MCT)和作为初级乳化剂的具有0.6的HLB值并且浓度为1.0％的聚甘油聚蓖麻酸酯(PGPR)在60℃和1500rpm下一起搅拌30分钟，以得到预乳液，接着在60℃和9000rpm下将其搅拌2分钟。
此时，芯材料和初级包衣材料以1:3(v/v)的比例混合，并且芯材料和初级乳化剂以1:3(v/v)的比例混合，接着将其搅拌。
然后，通过以下得到乳糖酶的双微胶囊乳液：提供乳糖酶的乳液作为芯材料，并且将乳糖酶的乳液与作为次级包衣材料的HPMCP(三星精密化学株式会社)和作为次级乳化剂的具有16.7的HLB值并且浓度为1.0％的PSML在60℃和2000rpm下一起搅拌10分钟，以将其均化，接着在4℃和3500xg下离心15分钟。
此时，通过溶解在85％(v/v)乙醇中使用次级包衣材料。将乳糖酶的乳液和次级包衣材料以2.5:2.75(v/v)的比例混合，并且乳糖酶的乳液和次级乳化剂以2.5:2.75(v/v)的比例混合，接着将其搅拌并离心。
最后，通过喷雾干燥来粉碎所得到的乳糖酶的双微胶囊乳液，制备含乳糖酶的双微胶囊。
在此使用Godo YNL-2(合同酒精株式会社，东京，日本)作为乳糖酶。
<实施例2>
除了使用虫胶(Shellac Korea Co.,Ltd.)代替HPMCP作为次级包衣材料之外，根据与实施例1中所述相同的步骤来制备含乳糖酶的双微胶囊。
<实施例3>
除了使用氢化玉米油代替MCT作为初级包衣材料并且使用玉米醇溶蛋白(Pooglimmuyark Co.,Ltd.)代替HPMCP作为次级包衣材料之外，根据与实施例1所述相同的步骤来制备含乳糖酶的双微胶囊。
<实施例4>
除了使用大豆油代替MCT作为初级包衣材料并且使用虫胶(Shellac Korea Co.,Ltd.)代替HPMCP作为次级包衣材料之外，根据与实施例1中所述相同的步骤来制备含乳糖酶的双微胶囊。
<实施例5>
除了使用红花籽油代替MCT作为初级包衣材料并且使用玉米醇溶蛋白(Pooglimmuyark Co.,Ltd.)代替HPMCP作为次级包衣材料之外，根据与实施例1所述相同的步骤来制备含乳糖酶的双微胶囊。
<实施例6>
通过以下得到乳糖酶的乳液：提供其中乳糖酶和功能组分以1:1(v/v)的比例混合的混合物作为芯材料，并且将芯材料与作为初级包衣材料的MCT和作为初级乳化剂的具有0.6的HLB值并且浓度为1.0％的聚甘油聚蓖麻酸酯(PGPR)在60℃和1500rpm下一起搅拌30分钟，以得到预乳液，接着在60℃和9000rpm下将其搅拌2分钟。
此时，芯材料和初级包衣材料以1:3(v/v)的比例混合，并且芯材料和初级乳化剂以1:3(v/v)的比例混合，接着将其搅拌。
然后，通过以下得到乳糖酶的双微胶囊乳液：提供乳糖酶的乳液作为芯材料，并且将乳糖酶的乳液与作为次级包衣材料的HPMCP(三星精密化学株式会社)和作为次级乳化剂的具有16.7的HLB值并且浓度为1.0％的聚氧乙烯脱水山梨糖醇单月桂酸酯(PSML)在60℃和2000rpm下一起搅拌10分钟，以将其均化，接着在4℃和3500xg下离心15分钟。
通过溶解在85％(v/v)乙醇中使用次级包衣材料。将乳糖酶的乳液和次级包衣材料以2.5:2.75(v/v)的比例混合，并且将乳糖酶的乳液和次级乳化剂以2.5:2.75(v/v)的比例混合，接着将其搅拌并离心。
最后，通过喷雾干燥来粉碎所得到的乳糖酶的双微胶囊乳液，制备包含乳糖酶和功能组分的双微胶囊。
在上述实施例中，使用Godo YNL-2(合同酒精株式会社，东京，日本)作为乳糖酶并且使用杜松果实提取物作为功能组分，杜松果实提取物通过以下得到：在基于杜松果实重量10倍的净化水中放入杜松果实(其是杜松(Juniperus rigida S.et Z)的果实提取物)并混合，在去除异物后，洗涤并干燥；然后在100℃的温度下将其提取并过滤，使得具有基于初始净化水的体积的25％的体积，以得到初级滤液；减压浓缩初级滤液，接着真空冷冻干燥，使得具有基于初级滤液的体积的30％的体积。
<应用实施例1>
通过将按重量计5％的实施例1中制备的含乳糖酶的双微胶囊添加到奶中来制备包含含乳糖酶的双微胶囊的奶。
<应用实施例2>
通过将按重量计5％的实施例2中制备的含乳糖酶的双微胶囊添加到奶中来制备包含含乳糖酶的双微胶囊的奶。
<应用实施例3>
通过将按重量计5％的实施例3中制备的含乳糖酶的双微胶囊添加到奶中来制备包含含乳糖酶的双微胶囊的奶。
<应用实施例4>
通过将按重量计5％的实施例6中制备的含乳糖酶的双微胶囊添加到奶中来制备包含含乳糖酶的双微胶囊的奶。
<应用实施例5>
通过将按重量计1％的实施例1中制备的含乳糖酶的双微胶囊添加到奶中来制备包含含乳糖酶的双微胶囊的奶。
<应用实施例6>
通过将按重量计10％的实施例1中制备的含乳糖酶的双微胶囊添加到奶中来制备包含含乳糖酶的双微胶囊的奶。
<应用实施例7>
通过将按重量计5％的实施例1中制备的含乳糖酶的双微胶囊添加到酸奶中来制备包含含乳糖酶的双微胶囊的酸奶。
<应用实施例8>
通过将按重量计5％的实施例6中制备的含乳糖酶的双微胶囊添加到山羊奶酸奶中来制备包含含乳糖酶的双微胶囊的山羊奶酸奶。
<应用实施例9>
通过将按重量计5％的实施例1中制备的含乳糖酶的双微胶囊添加到乳清蛋白浓缩物中来制备包含含乳糖酶的双微胶囊的乳清蛋白浓缩物的健康补充剂。
<应用实施例10>
使用在应用实施例1中制备的包含含乳糖酶的双微胶囊的奶来制备包含含乳糖酶的双微胶囊的冰淇淋。
虽然已经参考优选实施方式、实施例和应用实施例描述了本发明，但是本发明不限于此，并且本领域技术人员会理解，在不脱离由所附权利要求限定的本发明的范围的情况下，可以在本发明的详细描述和所附附图范围内进行各种修改和变化。
[工业适用性]
由于根据本发明的含乳糖酶的双微胶囊使用仅在小肠中溶解的肠溶包衣材料，因此不仅可以大大提高微囊化的优点，而且可以大大提高在奶中的稳定性，以及解决对乳制品的乳糖不耐症。因此，本发明可以应用于本发明所属的技术领域。

Claims (11)

1.含乳糖酶的双微胶囊，其包含：作为芯材料提供的乳糖酶；和依次包覆在待配制的所述芯材料上的初级包衣材料和次级包衣材料。
2.根据权利要求1所述的含乳糖酶的双微胶囊，其中所述初级包衣材料包括选自由中链甘油三酯(MCT)、氢化玉米油、大豆油、红花籽油和乳脂肪组成的组中的至少一种。
3.根据权利要求1所述的含乳糖酶的双微胶囊，其中所述次级包衣材料包括选自由羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、玉米醇溶蛋白、虫胶、尤特奇、醋酸邻苯二甲酸纤维素、醋酸琥珀酸纤维素、聚醋酸乙烯邻苯二甲酸酯、醋酸偏苯三酸纤维素、醋酸琥珀酸羟丙甲纤维素和水杨酸苯酯组成的组中的至少一种。
4.根据权利要求1所述的含乳糖酶的双微胶囊，其中所述制剂为选自由粉末、溶液、片剂和颗粒组成的组中的任何形式。
5.用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法，其包括：
提供乳糖酶作为芯材料，并且将所述芯材料与初级包衣材料和初级乳化剂一起搅拌，以得到乳糖酶的乳液；
将所述乳糖酶的乳液与溶解在醇中的次级包衣材料和次级乳化剂一起搅拌，以得到乳糖酶的双微胶囊乳液；以及
对所得到的乳糖酶的双微胶囊乳液进行配制。
6.根据权利要求5所述的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法，其中所述乳糖酶来源于选自由乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)、米曲霉(Aspergillus oryzae)、黑曲霉(Aspergillus niger)、环状芽孢杆菌(Bacillus circulans)、大肠杆菌(Escherichiacoli)和牛(Bos Taurus)组成的组的品种或者为重组乳糖酶。
7.根据权利要求5所述的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法，其包括：
提供乳糖酶作为芯材料，并将所述芯材料与作为初级包衣材料的选自由中链甘油三酯(MCT)、氢化玉米油、大豆油、红花籽油和乳脂肪组成的组中的至少一种和作为初级乳化剂的选自由聚甘油聚蓖麻酸酯、蔗糖脂肪酸酯和聚甘油脂肪酸酯组成的组中的至少一种一起搅拌以得到预乳液，并进一步搅拌所述混合物以得到乳糖酶的乳液，
其中所述芯材料和所述初级包衣材料以1:9(v/v)至9:1(v/v)的比例混合，并且所述芯材料和所述初级乳化剂以1:9(v/v)至9:1(v/v)的比例混合，然后搅拌以得到乳糖酶的乳液；
提供所述乳糖酶的乳液作为芯材料，向所得到的乳糖酶的乳液中加入作为次级包衣材料的选自由羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、玉米醇溶蛋白、虫胶、尤特奇、醋酸邻苯二甲酸纤维素、醋酸琥珀酸纤维素、聚醋酸乙烯邻苯二甲酸酯、醋酸偏苯三酸纤维素、醋酸琥珀酸羟丙甲纤维素和水杨酸苯酯组成的组中的任何一种，并搅拌以将其均化，接着离心以得到乳糖酶的双微胶囊乳液，其中所述乳糖酶的乳液和所述次级包衣材料以1:9(v/v)至9:1(v/v)的比例混合，并且所述乳糖酶的乳液和所述次级乳化剂以1:9(v/v)至9:1(v/v)的比例混合，然后搅拌，接着通过离心得到乳糖酶的双微胶囊乳液；和
对所得到的乳糖酶的双微胶囊乳液进行配制。
8.根据权利要求5所述的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法，其中所述醇是具有1-4个碳原子的醇。
9.根据权利要求5所述的用于制备含乳糖酶的双微胶囊的方法，其中所述制剂为选自由粉末、溶液、片剂和颗粒组成的组中的任何形式。
10.乳制品，其包含根据权利要求1至4中任一项所述的含乳糖酶的双微胶囊。
11.根据权利要求10所述的乳制品，其中所述乳制品是选自由奶、酸奶、山羊奶、乳清蛋白浓缩物和冰淇淋组成的组中的任何一种。
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