JP6772367B2 - ラクターゼを含む二重マイクロカプセル、その製造方法および用途 - Google Patents

ラクターゼを含む二重マイクロカプセル、その製造方法および用途 Download PDF

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Description

本発明は、ラクターゼを含む二重マイクロカプセル、その製造方法および用途に関し、より詳細には、ラクターゼを中心物質とし、前記中心物質を１次被覆物質と２次被覆物質で順次被覆して剤形化した、ラクターゼを含む二重マイクロカプセル、前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法、および前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの用途としての、ラクターゼを含む二重マイクロカプセルを含む乳製品に関する。
牛乳は、人類がＢＣ８０００年頃から食糧資源として活用してきた。ところが、世界の人口の２／３以上は、牛乳がまともに消化できない。これは、体内に十分な量の乳糖分解酵素（ラクターゼ、ｌａｃｔａｓｅ）が分泌されないことに起因するが、これを乳糖不耐症という。
ラクターゼは、小腸から分泌される酵素であって、二糖類である乳糖を単糖類であるグルコース（ｇｌｕｃｏｓｅ）とガラクトース（ｇａｌａｃｔｏｓｅ）に分解して消化吸収するようにする役割を果たす。乳糖不耐症を持っているヒトが牛乳を飲用する場合には、腹痛、下痢、吐き気、腹部膨満感などの症状が現れる。
かかる問題を解決するために、酵素固定化技術、ＵＦ／ＲＯシステムを利用した膜濾過技術、マイクロカプセル化技術などが開発されてきた。
酵素固定化技術は、少量の酵素で多量の牛乳を連続的に処理することができるが、乳糖がグルコースとガラクトースに分解され、牛乳の糖度が約４倍に増加するので、消費者が飲用を避ける結果をもたらした。
ＵＦ／ＲＯシステムを利用した膜濾過技術は、牛乳から乳糖だけを選択的に分離可能な技術である。しかし、この技術は、処理工程中に約５％の収率損失が発生し、乳糖除去による牛乳固有の甘味を損なう結果を生んだ。
さらに深刻なことは、乳糖の除去された牛乳を飲用する場合、牛乳のカルシウムが骨へ移行する比率が低下するというのである(Kwak et al., Int. Dairy J. 22, 147-151 (2012))。また、装置およびメンテナンス費用が高いので、製品価格の上昇の要因となっている。
ラクターゼマイクロカプセル化技術は、牛乳にいかなる物理的、化学的な処理もせず、マイクロカプセル化されたラクターゼを添加する技術であって、牛乳本来の味を損なわず、工程が簡単で、経済的である。しかし、従来のＷ／Ｏエマルションタイプのマイクロカプセルは、外層が油層であるため、空気中で容易に酸化するおそれがあり、粉末化が難しいので長期保存に非常に不利であった。
Ｗ／Ｏ／Ｗエマルションタイプのマイクロカプセルは、外層が水溶性のＷＰＩまたはマルトデキストリンを使用するので、粉末化が容易であり、長期保存および取り扱いに有利であるが、牛乳に添加した場合に安定性が低下するという欠点があった。
腸溶性被覆物質を利用したラクターゼマイクロカプセル化は、胃液では溶けず、小腸でのみ溶ける腸溶性被覆物質を使用するので、上述したマイクロカプセル化の利点だけでなく、牛乳内での安定性も大幅に向上させることができる方法である。
ところが、ラクターゼのマイクロカプセル化に関する従来技術としては、脂肪でマイクロカプセル化されたラクターゼが含有された牛乳の製造方法（韓国公開特許第１０−１９９３−００２２９５７号）、脂肪でマイクロカプセル化された牛乳添加用ラクターゼの製造方法（韓国公開特許第１０−１９９３−００２２９５８号）などが知られているだけであり、まだ腸溶性被覆物質を用いたラクターゼマイクロカプセル化に関する研究がまともに行われていないのが実情である。
しかも、急激に高齢化社会に移行しつつある昨今、高齢者の健康への関心が増大しつつあるが、このような技術の開発が切実に求められている。
韓国公開特許第１０−１９９３−００２２９５７号 韓国公開特許第１０−１９９３−００２２９５８号
Kwak et al., Int. Dairy J. 22, 147-151 (2012)
本発明は、上述した従来技術の問題点を解決するためのもので、その目的は、乳製品の乳糖不耐症を解決するためのラクターゼを含む二重マイクロカプセルを提供することにある。
本発明の他の目的は、前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法を提供することにある。
本発明の別の目的は、前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルを含有する乳製品を提供することにある。
上記の目的を達成するために、本発明は、ラクターゼを中心物質とし、前記中心物質を１次被覆物質および２次被覆物質で順次被覆して剤形化した、ラクターゼを含む二重マイクロカプセルを提供する。
また、本発明は、ラクターゼを中心物質とし、前記中心物質と１次被覆物質および１次乳化剤を攪拌してラクターゼの乳化液を得る段階と、前記ラクターゼの乳化液と２次被覆物質および２次乳化剤を攪拌してラクターゼの二重マイクロカプセル乳化液を得る段階と、前記ラクターゼの二重マイクロカプセル乳化液を剤形化する段階とを含んでなる、ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法を提供する。
また、本発明は、前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルを含有する乳製品を提供する。
本発明は、ラクターゼを中心物質とし、前記中心物質を１次被覆物質および２次被覆物質で順次被覆して剤形化した、ラクターゼを含む二重マイクロカプセルを提供することができる。
一方、本発明によるラクターゼを含む二重マイクロカプセルは、小腸でのみ溶ける腸溶性被覆物質を使用するので、マイクロカプセル化の利点だけでなく、牛乳中での安定性も大幅に向上させることができるだけでなく、乳製品の乳糖不耐症を解決することができる利点を提供することができる。
一実施例によるマイクロカプセル化の模式図である。 ＭＣＴ添加による吸湿量の変化を示すものである。 腸溶性コーティングされたラクターゼマイクロカプセルのマイクロカプセル化収率のための反応表面を示すものである。 ラクターゼマイクロカプセル化の工程最適化曲線を示すものであって、ｙはマイクロカプセルの収率、ｄは最適化された条件の統計的満足度（ｄｅｓｉｒａｂｌｅ ｓｃｏｒｅ）を意味する。 腸溶性ラクターゼマイクロカプセルの顕微鏡観察結果を示すものであって、Ａはヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート（ＨＰＭＣＰ）、Ｂはシェラック（ｓｈｅｌｌａｃ）、Ｃはゼイン（ｚｅｉｎ）の結果をそれぞれ示すものである。 腸溶性ラクターゼマイクロカプセルのゼータ電位を示すものである。 腸溶性ラクターゼマイクロカプセルの粒子径を示すものである。 腸溶性ラクターゼマイクロカプセル添加牛乳の理化学的特性を示すものであって、対照群（ｃｏｎｔｒｏｌ）は市販の牛乳製品である。 ラクターゼマイクロカプセルの安定性を示すものである。 ｐＨ２、３、４での腸溶性ラクターゼマイクロカプセルのｉｎ ｖｉｔｒｏ放出特性を示すものである。 ｐＨ６、７、８での腸溶性ラクターゼマイクロカプセルのｉｎ ｖｉｔｒｏ放出特性を示すものである。 ＨＰＭＣＰで被覆されたラクターゼマイクロカプセルが補充された牛乳を５００ｍＬ飲用した後の血糖の変化を示すものである。 ＨＰＭＣＰで被覆されたラクターゼマイクロカプセルが補充された牛乳を５００ｍＬ飲用した後の下痢（ｄｉａｒｒｈｅａ）について症状の強さを５点法で表示するようにして評価した結果を示すものである。 ＨＰＭＣＰで被覆されたラクターゼマイクロカプセルが補充された牛乳を５００ｍＬ飲用した後の腹痛（ａｂｄｏｍｉｎａｌ ｐａｉｎ）について症状の強さを５点法で表示するようにして評価した結果を示すものである。 ＨＰＭＣＰで被覆されたラクターゼマイクロカプセルが補充された牛乳を５００ｍＬ飲用した後の復命（ａｕｄｉｂｌｅ ｂｏｗｅｌ ｓｏｕｎｄ）について症状の強さを５点法で表示するようにして評価した結果を示すものである。 ＨＰＭＣＰで被覆されたラクターゼマイクロカプセルが補充された牛乳を５００ｍＬ飲用した後の腹部膨満感（ｆｌａｔｕｌｅｎｃｅ）について症状の強さを５点法で表示するようにして評価した結果を示すものである。 ＨＰＭＣＰで被覆されたラクターゼマイクロカプセルが補充された牛乳を５００ｍＬ飲用した後の吐き気（ｎａｕｓｅａ）について症状の強さを５点法で表示するようにして評価した結果を示すものである。
本発明は、ラクターゼを中心物質とし、前記中心物質を１次被覆物質および２次被覆物質で順次被覆して剤形化した、ラクターゼを含む二重マイクロカプセルに関する。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルにおいて、ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの中心物質であるラクターゼは、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｌａｃｔｉｓ、 Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ、 Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ、 Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｉｒｃｕｌａｎｓ、 Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉおよびＢｏｓ ｔａｕｒｕｓよりなる群から選択される菌株に由来するか、或いは遺伝子組換えラクターゼであり得る。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルにおいて、前記１次被覆物質はＭＣＴ（ｍｅｄｉｕｍ−ｃｈａｉｎ ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ）を使用することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルにおいて、前記１次被覆物質はトウモロコシ硬化油を使用することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルにおいて、前記１次被覆物質は大豆油を使用することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルにおいて、前記１次被覆物質はサフラワー油を使用することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルにおいて、前記１次被覆物質はバターオイルを使用することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルにおいて、前記１次被覆物質は、ＭＣＴ、トウモロコシ硬化油、大豆油、サフラワー油およびバターオイルよりなる群から選択される２種以上を使用することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルにおいて、前記１次被覆物質は、食用に適したものを使用することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルにおいて、前記２次被覆物質は、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート（Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ Ｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ Ｐｈｔｈａｌａｔｅ；ＨＰＭＣＰ）を使用することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルにおいて、前記２次被覆物質はゼイン（ｚｅｉｎ）を使用することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルにおいて、前記２次被覆物質はシェラック（ｓｈｅｌｌａｃ）を使用することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルにおいて、前記２次被覆物質は、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート（ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ ｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ｐｈｔｈａｌａｔｅ）、ゼイン（ｚｅｉｎ）、シェラック（ｓｈｅｌｌａｃ）、ユードラジット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）、セルロースアセテートフタレート（ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ａｃｅｔａｔｅ ｐｈｔｈａｌａｔｅ）、セルロースアセテートスクシネート（ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ａｃｅｔａｔｅ ｓｕｃｃｉｎａｔｅ）、ポリビニルアセテートフタレート（ｐｏｌｙｖｉｎｙｌ ａｃｅｔａｔｅ ｐｈｔｈａｌａｔｅ）、セルロースアセテートトリメリテート（ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ａｃｅｔａｔｅ ｔｒｉｍｅｌｌｉｔａｔｅ）、ハイプロメロースアセテートスクシネート（ｈｙｐｒｏｍｅｌｌｏｓｅ ａｃｅｔａｔｅ ｓｕｃｃｉｎａｔｅ）およびサリチル酸フェニル（ｐｈｅｎｙｌ ｓａｌｉｃｙｌａｔｅ）よりなる群から選択される１つ以上を使用することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルにおいて、前記ユードラジットの例としては、Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ−１００、Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｓ−１００などが挙げられる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルにおいて、前記２次被覆物質は、ユードラジット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）を使用することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルにおいて、前記２次被覆物質は、食用に適したものを使用することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルにおいて、前記二重マイクロカプセルは、粒子径が数ｎｍ〜数ｍｍであり得る。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルにおいて、前記二重マイクロカプセルは、粒子径が１００ｎｍ〜１ｍｍであり得る。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルにおいて、前記二重マイクロカプセルは、粒子径が１〜１０μｍであり得る。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルにおいて、前記剤形は、粉末、液剤、錠剤および顆粒よりなる群から選択できる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルにおいて、前記マイクロカプセルは、ラクターゼを中心物質とし、前記中心物質を１次被覆物質および２次被覆物質で順次被覆した後に粉末化された、ラクターゼを含む二重マイクロカプセル粉末であり得る。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルにおいて、前記マイクロカプセルは、ラクターゼを中心物質とし、前記中心物質を１次被覆物質および２次被覆物質で順次被覆した後に液剤化された、ラクターゼを含む二重マイクロカプセル粉末であり得る。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルにおいて、前記マイクロカプセルは、ラクターゼを中心物質とし、前記中心物質を１次被覆物質および２次被覆物質で順次被覆した後に錠剤化された、ラクターゼを含む二重マイクロカプセル粉末であり得る。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルにおいて、前記マイクロカプセルは、ラクターゼを中心物質とし、前記中心物質を１次被覆物質および２次被覆物質で順次被覆した後に顆粒化された、ラクターゼを含む二重マイクロカプセル粉末であり得る。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルにおいて、前記二重マイクロカプセルは、中心物質としてラクターゼ以外に機能性成分をさらに含むことができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルにおいて、前記中心物質としてラクターゼ以外に機能性成分をさらに含むとき、ラクターゼおよび機能性成分が１：９〜９：１の質量比で混合された混合物を使用することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルにおいて、前記機能性成分は、ネズ（Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ ｒｉｇｉｄａ Ｓ．ｅｔ Ｚ．）の実であるネズ果実抽出物を使用することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルにおいて、前記ネズ果実抽出物は、ネズの実を質量に対して５〜２０倍量の精製水に入れて混合した後、９０〜１２０℃の温度で最初精製水の体積に対して１０〜５０％となるように抽出し、濾過した１次濾過物を１次濾過物の体積に対して１０〜５０％となるように減圧濃縮した後、真空凍結乾燥して得たものを使用することができる。
本発明は、ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法を含む。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法は、ラクターゼを中心物質とし、前記中心物質と１次被覆物質および１次乳化剤とを攪拌してラクターゼの乳化液を得る段階と、前記ラクターゼの乳化液をアルコールに溶解させた２次被覆物質および２次乳化剤を攪拌してラクターゼの二重マイクロカプセル乳化液を得る段階と、前記ラクターゼの二重マイクロカプセル乳化液を粉末化する段階とを含んでなる、ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法であり得る。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法の前記ラクターゼの乳化液を得る段階で、中心物質を被覆する前記１次被覆物質は、ＭＣＴ（ｍｅｄｉｕｍ−ｃｈａｉｎｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ）を使用することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法の前記ラクターゼの乳化液を得る段階で、中心物質を被覆する前記１次被覆物質は、トウモロコシ硬化油を使用することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法の前記ラクターゼの乳化液を得る段階で、中心物質を被覆する前記１次被覆物質は、大豆油を使用することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法の前記ラクターゼの乳化液を得る段階で、中心物質を被覆する前記１次被覆物質は、サフラワー油を使用することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法の前記ラクターゼの乳化液を得る段階で、中心物質を被覆する前記１次被覆物質は、バターオイルを使用することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法の前記ラクターゼの乳化液を得る段階で、中心物質を被覆する前記１次被覆物質は、ＭＣＴ、トウモロコシ硬化油、大豆油、サフラワー油およびバターオイルよりなる群から選択される２種以上を使用することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法の前記ラクターゼの乳化液を得る段階で、中心物質を被覆する前記１次被覆物質は、食用に適したものを使用することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法の前記ラクターゼの乳化液を得る段階で使用する１次乳化剤は、ポリグリセロールポリリシノリエート（ｐｏｌｙｇｌｙｃｅｒｏｌ ｐｏｌｙｒｉｃｉｎｏｌｅａｔｅ）、スクロース脂肪酸エステル（ｓｕｃｒｏｓｅ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｅｓｔｅｒ）およびポリグリセロール脂肪酸エステル（ｐｏｌｙｇｌｙｃｅｒｏｌ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｅｓｔｅｒ）よりなる群から選択される１種以上を使用することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法において、前記１次乳化剤は、ＨＬＢ（ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｅ−ｌｉｐｏｐｈｉｌｅ ｂａｌａｎｃｅ）値０．５〜５のものを使用することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法において、前記１次乳化剤は、濃度０．２５〜１．２５％のものを使用することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法において、前記１次乳化剤は、ＨＬＢ値０．５〜５および濃度０．２５〜１．２５％のポリグリセロールポリリシノリエート（ｐｏｌｙｇｌｙｃｅｒｏｌ ｐｏｌｙｒｉｃｉｎｏｌｅａｔｅ）を使用することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法において、前記１次乳化剤は、ＨＬＢ値０．５〜５および濃度０．２５〜１．２５％のスクロース脂肪酸エステルを使用することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法において、前記１次乳化剤は、ＨＬＢ値０．５〜５および濃度０．２５〜１．２５％のポリグリセロール脂肪酸エステルを使用することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法の前記ラクターゼの乳化液を得る段階で、中心物質、１次被覆物質および１次乳化剤を攪拌してプレエマルジョン（ｐｒｅ−ｅｍｕｌｓｉｏｎ）を得た後、攪拌してラクターゼの乳化液を得ることができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法の前記ラクターゼの乳化液を得る段階で、中心物質、１次被覆物質および１次乳化剤は、３５〜４０℃で１０００〜２０００ｒｐｍにて２０〜４０分間攪拌してプレエマルジョンを得た後、３５〜４０℃で８５００〜９５００ｒｐｍにて１〜３分間攪拌してラクターゼの乳化液を得ることができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法の前記ラクターゼの乳化液を得る段階で、中心物質、１次被覆物質および１次乳化剤は、３７．５℃で１５００ｒｐｍにて３０分間攪拌してプレエマルジョンを得た後、３７．５℃で９０００ｒｐｍにて２分間攪拌してラクターゼの乳化液を得ることができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法の前記ラクターゼの乳化液を得る段階で、中心物質：１次被覆物質は、１：９（ｖ／ｖ）〜９：１（ｖ／ｖ）のの比率で混合して攪拌することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法の前記ラクターゼの乳化液を得る段階で、中心物質：１次乳化剤は、１：９（ｖ／ｖ）〜９：１（ｖ／ｖ）の比率で混合した後、攪拌することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法において、前記ラクターゼの二重マイクロカプセル乳化液の製造時に、２次被覆物質は、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート（Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ Ｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ Ｐｈｔｈａｌａｔｅ；ＨＰＭＣＰ）を使用することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法において、前記２次被覆物質は、ゼイン（ｚｅｉｎ）を使用することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法において、前記２次被覆物質は、シェラック（ｓｈｅｌｌａｃ）を使用することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法において、前記２次被覆物質は、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート（ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ ｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ｐｈｔｈａｌａｔｅ）、ゼイン（ｚｅｉｎ）、シェラック（ｓｈｅｌｌａｃ）、ユードラジット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）、セルロースアセテートフタレート（ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ａｃｅｔａｔｅ ｐｈｔｈａｌａｔｅ）、セルロースアセテートスクシネート（ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ａｃｅｔａｔｅ ｓｕｃｃｉｎａｔｅ）、ポリビニルアセテートフタレート（ｐｏｌｙｖｉｎｙｌ ａｃｅｔａｔｅ ｐｈｔｈａｌａｔｅ）、セルロースアセテートトリメリテート（ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ａｃｅｔａｔｅ ｔｒｉｍｅｌｌｉｔａｔｅ）、ハイプロメロースアセテートスクシネート（ｈｙｐｒｏｍｅｌｌｏｓｅ ａｃｅｔａｔｅ ｓｕｃｃｉｎａｔｅ）およびサリチル酸フェニル（ｐｈｅｎｙｌ ｓａｌｉｃｙｌａｔｅ）よりなる群から選択される１つ以上を使用することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法において、前記ユードラジットの例としては、Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ−１００、Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｓ−１００などが挙げられる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法において、前記２次被覆物質は、ユードラジット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）を使用することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法において、前記ラクターゼの二重マイクロカプセル乳化液の製造時に、２次被覆物質は、食用に適したものを使用することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法において、前記アルコールは、炭素数１〜４のアルコール、好ましくはエタノールであり得る。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法において、前記ラクターゼの二重マイクロカプセル乳化液の製造時に、２次乳化剤は、Ｔｗｅｅｎ ６０を使用することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法において、前記ラクターゼの二重マイクロカプセル乳化液の製造時に、２次乳化剤は、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート（ＰＳＭＬ）を使用することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法において、前記２次乳化剤は、ＨＬＢ（ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｅ−ｌｉｐｏｐｈｉｌｅ ｂａｌａｎｃｅ）値１３〜１７のものを使用することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法において、前記２次乳化剤は、濃度０．５〜１．５％のものを使用することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法において、前記２次乳化剤は、ＨＬＢ値１３〜１７および濃度０．５〜１．５％のポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート（ＰＳＭＬ）を使用することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法において、前記２次乳化剤は、ＨＬＢ値１３〜１７および濃度０．５〜１．５％のＴｗｅｅｎ ６０を使用することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法の前記ラクターゼの二重マイクロカプセル乳化液を得る段階で、ラクターゼの乳化液、２次被覆物質および２次乳化剤を攪拌して均質化した後、遠心分離してラクターゼの二重マイクロカプセル乳化液を得ることができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法の前記ラクターゼの二重マイクロカプセル乳化液を得る段階で、ラクターゼの乳化液、２次被覆物質および２次乳化剤を３５〜４０℃で１５００〜２５００ｒｐｍにて５〜３０分間撹拌して均質化した後、３〜５℃で３，０００×ｇ〜４，０００×ｇで１０〜２０分間遠心分離してラクターゼの二重マイクロカプセル乳化液を得ることができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法の前記ラクターゼの二重マイクロカプセル乳化液を得る段階で、ラクターゼの乳化液：２次被覆物質は、１：９（ｖ／ｖ）〜９：１（ｖ／ｖ）の比率で混合して攪拌した後、遠心分離してラクターゼの二重マイクロカプセル乳化液を得ることができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法の前記ラクターゼの二重マイクロカプセル乳化液を得る段階で、ラクターゼの乳化液：２次乳化剤は、１：９（ｖ／ｖ）〜９：１（ｖ／ｖ）の比率で混合して攪拌した後、遠心分離してラクターゼの二重マイクロカプセル乳化液を得ることができる。
本発明のラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法の一例として、ラクターゼを中心物質とし、前記中心物質と、１次被覆物質であるＭＣＴ（ｍｅｄｉｕｍ−ｃｈａｉｎｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ）、および１次乳化剤としての、ポリグリセロールポリリシノリエート、スクロース脂肪酸エステルおよびポリグリセロール脂肪酸エステルよりなる群から選択される１つ以上を攪拌してプレエマルジョンを得た後、さらに攪拌してラクターゼの乳化液を得るが、前記中心物質：１次被覆物質は１：９（ｖ／ｖ）〜９：１（ｖ／ｖ）の比率で混合し、中心物質：１次乳化剤は１：９（ｖ／ｖ）〜９：１（ｖ／ｖ）の比率で混合した後、撹拌してラクターゼの乳化液を得る段階と；前記ラクターゼの乳化液を中心物質とし、前記ラクターゼの乳化液に、２次被覆物質としてヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート（Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ Ｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ Ｐｈｔｈａｌａｔｅ）、ゼイン（ｚｅｉｎ）およびシェラック（ｓｈｅｌｌａｃ）よりなる群から選択されるいずれか一つ、および２次乳化剤としてＴｗｅｅｎ ６０およびポリオキシエチレンソルビタンモノラウレートの中から選択されるいずれか一つを添加し、攪拌して均質化した後、遠心分離してラクターゼの二重マイクロカプセル乳化液を得るが、前記ラクターゼの乳化液：２次被覆物質は１：９（ｖ／ｖ）〜９：１（ｖ／ｖ）の比率で混合し、ラクターゼの乳化液：２次乳化剤は１：９（ｖ／ｖ）〜９：１（ｖ／ｖ）の比率で混合した後、攪拌し、遠心分離してラクターゼの二重マイクロカプセル乳化液を得る段階と；前記ラクターゼの二重マイクロカプセル乳化液を剤形化する段階と；を含むようにして、ラクターゼを含む二重マイクロカプセルを製造することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法の他の一例として、ラクターゼを中心物質とし、前記中心物質、１次被覆物質としてのＭＣＴ、および１次乳化剤としての、ポリグリセロールポリリシノリエート、スクロース脂肪酸エステルおよびポリグリセロール脂肪酸エステルよりなる群から選択される１つ以上を３５〜４０℃で１０００〜２０００ｒｐｍにて２０〜４０分間攪拌してプレエマルジョンを得た後、３５〜４０℃で８５００〜９５００ｒｐｍにて１〜３分間攪拌してラクターゼの乳化液を得るが、前記中心物質：１次被覆物質は１：９（ｖ／ｖ）〜９：１（ｖ／ｖ）の比率で混合し、中心物質：１次乳化剤は１：９（ｖ／ｖ）〜９：１（ｖ／ｖ）の比率で混合した後、撹拌してラクターゼの乳化液を得る段階と；前記ラクターゼの乳化液を中心物質とし、前記ラクターゼの乳化液に、２次被覆物質としてヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート（Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ Ｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ Ｐｈｔｈａｌａｔｅ）、ゼイン（ｚｅｉｎ）およびシェラック（ｓｈｅｌｌａｃ）よりなる群から選択されるいずれか一つ、および２次乳化剤としてＴｗｅｅｎ ６０、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレートの中から選択されるいずれか一つを添加し、３５〜４０℃で１５００〜２５００ｒｐｍにて５〜３０分間撹拌して均質化した後、３〜５℃で、３，０００×ｇ〜４，０００×ｇの速度にて１０〜２０分間遠心分離してラクターゼの二重マイクロカプセル乳化液を得るが、前記ラクターゼの乳化液：２次被覆物質は１：９（ｖ／ｖ）〜９：１（ｖ／ｖ）の比率で混合し、ラクターゼの乳化液：２次乳化剤は１：９（ｖ／ｖ）〜９：１（ｖ／ｖ）の比率で混合した後、攪拌し、遠心分離してラクターゼの二重マイクロカプセル乳化液を得る段階と；前記ラクターゼの二重マイクロカプセル乳化液を剤形化する段階と；を含むようにして、ラクターゼを含む二重マイクロカプセルを製造することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法において、前記ラクターゼの二重マイクロカプセル乳化液を剤形化する段階は、食品産業分野で液状のラクターゼの二重マイクロカプセル乳化液を剤形化することが可能な方法を使用することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法において、前記剤形は、粉末、液剤、錠剤および顆粒よりなる群から選択できる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法において、前記ラクターゼの二重マイクロカプセル乳化液の剤形化方法の一例として、粉末化方法としては、スプレーチリング（ｓｐｒａｙ ｃｈｉｌｌｉｎｇ）、噴霧冷却（ｓｐｒａｙ ｃｏｏｌｉｎｇ）、噴霧乾燥（ｓｐｒａｙ ｄｒｙｉｎｇ）、懸濁法（ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ）、押出（ｅｘｔｒｕｓｉｏｎ）、コアセルベーション（ｃｏａｃｅｒｖａｔｉｏｎ）、共結晶化（ｃｏｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ）、分子内包（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ）、凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅ ｄｒｙｉｎｇ）および回転懸濁分離（ｒｏｔａｔｉｏｎａｌ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ）よりなる群から選択される少なくとも一つの方法を使用することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法において、前記噴霧乾燥方法は、最も一般的であり、経済的に産業化に有利であって、食品に適用される物質をカプセル化するために使用され、この方法は、被覆物質を水和（ｈｙｄｒａｔｉｏｎ）させた後、対象物質を分散させ、混合物を高温のチャンバへ噴霧する方法である。すなわち、被覆物質溶液が噴霧システムによって微粒化されて総比表面積が増大しながら熱風と接触して急速に蒸発を起こし、粉末の二重マイクロカプセルを形成する。噴霧乾燥による二重マイクロカプセル化の効率性は、使用されたカプセル材料（ｃｏａｔｉｎｇ ｍａｔｅｒｉａｌ）の形態に依存するため、これは、乾燥前の乳化安定性、乾燥後の物理的安定性および貯蔵寿命に影響を及ぼす。また、粉末化を行うことにより、保存性および利便性を増大させることができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造の際に、中心物質としてラクターゼ以外に機能性成分をさらに含むことができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法において、中心物質としてラクターゼ以外に機能性成分をさらに含むとき、ラクターゼおよび機能性成分が１：９〜９：１の質量比で混合された混合物を使用することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法において、前記機能性成分は、ネズ（Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ ｒｉｇｉｄａ Ｓ．ｅｔ Ｚ．）の実であるネズ果実抽出物を使用することができる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法において、前記ネズ果実抽出物は、ネズの実を質量に対して５〜２０倍量の精製水に入れて混合した後、９０〜１２０℃の温度で最初精製水の体積に対して１０〜５０％となるように抽出し、濾過した１次濾過物を１次濾過物の体積に対して１０〜５０％となるように減圧濃縮した後、真空凍結乾燥して得たものを使用することができる。
本発明は、上述したラクターゼを含む二重マイクロカプセル、または上述した方法によって製造したラクターゼを含む二重マイクロカプセルを含有する乳製品を含む。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルを含有する乳製品は、ラクターゼを含む二重マイクロカプセルが乳製品の全体質量に対して０．１〜１０質量％含まれ得る。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルを含有する乳製品において、前記乳製品は、牛乳、ヨーグルト、山羊乳（ｇｏａｔ ｍｉｌｋ）、濃縮乳漿蛋白（ｗｈｅｙ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｓ）およびアイスクリームよりなる群から選択されるものであり得る。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルを含有する乳製品において、前記乳製品は、牛乳（ｍｉｌｋ）であり得る。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルを含有する乳製品において、前記乳製品は、ヨーグルト（ｙｏｇｕｒｔ）であり得る。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルを含有する乳製品において、前記乳製品は、山羊乳（ｇｏａｔ ｍｉｌｋ）であり得る。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルを含有する乳製品において、前記乳製品は、濃縮乳漿蛋白（ｗｈｅｙ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｓ）であり得る。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルを含有する乳製品において、前記濃縮乳漿蛋白 （ｗｈｅｙ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｓ）は、ヘルスサプリメントに下痢防止用として添加できる。
本発明の前記ラクターゼを含む二重マイクロカプセルを含有する乳製品において、前記乳製品は、アイスクリームであり得る。
本発明のラクターゼを含む二重マイクロカプセル、その製造方法および用途について様々な条件で実施したが、本発明の目的を達成するために、上述した条件によってラクターゼを含む二重マイクロカプセル、その製造方法および用途を提供することが好ましい。
以下、本発明の内容を実験例、実施例および適用例によって具体的に説明する。しかし、これらは本発明をより詳細に説明するためのものであり、本発明の権利範囲はこれらによって限定されるものではない。
＜実験例＞ラクターゼ二重マイクロカプセルの製造
Ｉ．材料および方法
１．材料および試薬
１）材料
（１）中心物質（ｃｏｒｅ ｍａｔｅｒｉａｌ）
ラクターゼは、Ｇｏｄｏ ＹＮＬ−２（合同酒精株式会社、東京、日本）を使用した。この酵素は、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｌａｃｔｉｓ由来であり、ａｃｔｉｖｉｔｙは７，４４８ｕｎｉｔｓ／ｇであった。１ｕｎｉｔは、１μｍｏｌのｏ−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ β−Ｄ−ｇａｌａｃｔｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ（ＯＮＰＧ）を１分間ｏ−ニトロフェノール（ｏ−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｏｌ）とＤ−ガラクトース（Ｄ−ｇａｌａｃｔｏｓｅ）に分解するものと定義した。
（２）被覆物質（ｃｏａｔｉｎｇ ｍａｔｅｒｉａｌ）
１次被覆物質であるＭＣＴ（ｍｅｄｉｕｍ−ｃｈａｉｎ ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ）は（株）ウェルガ（Ｓｅｏｎｇｎａｍ、韓国）から購入し、２次被覆物質であるＨＰＭＣＰ、シェラック（ｓｈｅｌｌａｃ）、ゼイン（ｚｅｉｎ）はそれぞれ（株）サムスン精密化学、（株）シェラックコリア、（株）豊林ムヤクから購入して使用した。
（３）乳化剤
ポリグリセロールポリリシノレート（Ｐｏｌｙｇｌｙｃｅｒｏｌ ｐｏｌｙｒｉｃｉｎｏｌｅａｔｅ）（ＰＧＰＲ；ＨＬＢ０．６）とポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート（ｐｏｌｙｏｘｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｓｏｒｂｉｔａｎ ｍｏｎｏｌａｕｒａｔｅ）（ＰＳＭＬ；ＨＬＢ１６．７）は、（株）日新ウェルズ（Ｓｅｏｕｌ、韓国）から純度９５．０％以上の食品添加物グレードの製品を購入して使用した。
２．実験方法
１）ラクターゼの二重マイクロカプセル粉末の製造方法
腸溶性被覆物質を用いたラクターゼマイクロカプセル化は、文献［Quispe-Condori et al. (2011)］の方法を変形させて行った。ラクターゼ、および腸溶性被覆物質の可塑剤の役割を果たす１次被覆物質としてのＭＣＴを添加し、乳化剤としてＰＧＰＲ０．７５％（ｗ／ｖ）を添加して、高速ホモジナイザー（ＨＭＺ−２０ＤＮ、（株）豊林、Ｓｅｏｕｌ、韓国）によって１分間９，０００ｒｐｍの速度で均質化した。
図１のマイクロカプセル化の模式図の如く、腸溶性の２次被覆物質としてＨＰＭＣＰを８５％（ｖ／ｖ）エタノールに溶かして準備した後、ここに１次エマルジョンを混合して、２，５００ｒｐｍで４分間均質化し、これを０．２５％のＰＳＭＬが溶けている冷たい分散液（ｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ ｆｌｕｉｄ）にエアレススプレーガン（ａｉｒｌｅｓｓ ｓｐｒａｙ ｇｕｎ）（Ｗ−３００、Ｗａｇｎｅｒ ＧｍｂＨ、Ｍａｒｋｄｏｒｆ、ドイツ）を用いて噴霧した。
これを２，５００ｒｐｍで４分間遠心分離してマイクロカプセルを分離し、これを３回洗浄し、ディープ・フリーザー（ｄｅｅｐ ｆｒｅｅｚｅｒ）（ＭＤＦ−Ｕ５３Ｖ、山洋電気株式会社、東京、日本）を用いて−８０℃で凍結した後、凍結乾燥を行って粉末化した。
２）反応表面分析を用いた実験設計
マイクロカプセル化工程に影響を及ぼす工程変数を被覆物質（Ｘ１）とコア物質（Ｘ２）に設定し、その範囲をそれぞれ１〜１５ｇ／１００ｍＬ、３〜１５ｍＬとした。これを下記表１のようにそれぞれ−１、０、＋１の３レベルで符号化した。
中心合成計画法に基づいて、合計１１個の実験区を行った。この結果は、Ｍｉｎｉｔａｂ ｖｅｒｓｉｏｎ１６で統計処理し、下記数式１でまとめた。下記数式１において、Ｙは従属変数であり、β０、β１、β２は各項の定数である。
３）マイクロカプセル化収率
ラクターゼマイクロカプセル化収率を求めるために、文献［Kawaktsu et al. Colloids Surf. A, 189, 257-264 (2001)］の方法を変形させて適用した。
二重コーティングされたエマルジョンからカプセル化されていない濾液を分離するために、３，０００×ｇの速度で５分間遠心分離を行った。遠心分離で分離した濾液は、０．４５μｍのシリンジフィルター（ｓｙｒｉｎｇｅ ｆｉｌｔｅｒ）で濾過した。
こうして得られたサンプル０．５ｍＬに、水浴（ｗａｔｅｒ ｂａｔｈ）で３７℃、１５分間予熱しておいた２ｍＬの５ｍＭ ＯＮＰＧ溶液を加え、３７℃、１５分間反応させた。ここに冷たく冷却しておいた５００ｍＭの炭酸ナトリウム溶液０．５ｍＬを加えて反応を停止させ、４２０ｎｍで吸光度を測定した。
マイクロカプセル化収率は下記数式２を用いて計算した。サンプルの測定は３回繰り返し行った。
４）ラクターゼマイクロカプセルの顕微鏡観察
ＲＳＭを用いて最適化した工程で、ＨＰＭＣＰ、シェラック（ｓｈｅｌｌａｃ）、ゼイン（ｚｅｉｎ）の２次被覆物質でコーティングされたラクターゼマイクロカプセルを光学顕微鏡（Ｅｃｌｉｐｓｅ ８０ｉ、株式会社ニコン、東京、日本）を用いて１，０００倍拡大して観察した。
５）ラクターゼマイクロカプセル粉末の電子顕微鏡（ＳＥＭ）観察
ラクターゼマイクロカプセル粉末の表面特性を把握するために、ＳＥＭで観察した。
６）粒度分析
ラクターゼマイクロカプセル粉末の粒度分析は、粒度分析器（ｐａｒｔｉｃｌｅ ｓｉｚｅ ａｎａｌｙｚｅｒ）（Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ ２０００、Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｌｔｄ．、Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒｓｈｉｒｅ、ＵＫ）を用いた。最適条件を用いて、様々な２次被覆物質でコーティングされたラクターゼマイクロカプセルを１０ｍＬの蒸留水に１：４００（ｗ／ｖ）の比率で添加して２５℃で測定した。
７）ゼータ電位の測定
ラクターゼマイクロカプセルを牛乳に分散させたとき、その分布度を予測するために、 粒度分析器（ｐａｒｔｉｃｌｅ ｓｉｚｅ ａｎａｌｙｚｅｒ）（ＥＬＳＺ２−ＰＬＵＳ、大塚電池株式会社、大阪、日本）を用いてゼータ電位を測定した。
試料０．０１ｇをｐＨ２〜１２に調整した１０ｍＬの蒸留水に分散させ、５分間超音波処理を施した後、２５℃で１５分間静置した。上澄み液１ｍＬを取り、フローセル（ｆｌｏｗ ｃｅｌｌ）に注入した後、２５℃で測定した。このとき、測定ポイントはそれぞれ０．７、０．３５、０、−０．３５、−０．７であった。
８）腸溶性ラクターゼマイクロカプセルのｉｎ ｖｉｔｒｏ放出特性
人工胃液、人工小腸液を用いて腸溶性ラクターゼマイクロカプセルのｉｎ ｖｉｔｒｏ放出特性を観察した。人工胃環境での放出特性は、文献［Luan et al. Int. J. Pharm. 324, 168-175 (2006)］と文献［Papagianni et al. Enzyme Microb. Technol. 45, 514-552 (2009)］の方法を変形させて実施した。
ペプシン１ｇを２５ｍＬの０．１Ｍ塩酸に溶かして人工胃液を準備した。腸溶性マイクロカプセル１ｇを５％（ｗ／ｖ）乳糖溶液１００ｍＬに溶かし、６Ｍ塩酸を用いてｐＨ２、３、４に調整した後、１ｍＬの人工胃液を添加した。
これを振とう水槽（ｓｈａｋｉｎｇ ｗａｔｅｒ ｂａｔｈ）を用いて３７℃、１００ｒｐｍで２時間分解しながら、３０分間隔で試料を採取して腸溶性ラクターゼマイクロカプセルの分解率を測定した。
腸溶性ラクターゼマイクロカプセルの分解率は、残留乳糖の含有量を分析して測定した。残留乳糖の含有量分析は、文献［Kwak & Jeon, J. Food Sci. 53, 975-976 (1988)］の方法をやや変形させて実施した。
試料５ｍＬと３次蒸留水２５ｍＬとを混合して５０ｍＬのメスフラスコ（ｖｏｌｕｍｅｔｒｉｃ ｆｌａｓｋ）に入れ、アセトニトリルで定容した。これを混合して５，０００×ｇで１０分間遠心分離し、上澄み液を取って０．４５μｍのＰＶＤＦフィルターを用いて濾過した。
これをＨＰＬＣ（Ｄｉｏｎｅｘ Ｃｏ．、Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、ＣＡ、ＵＳＡ）、屈折率検出器（ｒｅｆｒａｃｔｉｖｅ ｉｎｄｅｘ ｄｅｔｅｃｔｏｒ）（ＲＩ−１０１、昭和電工株式会社、東京、日本）を用いて分析し、使用されたカラムは、ＮＨ２カラム（４．６×２５０ｍｍ、Ｈｅｃｔｏｒ−Ｍ、ＲＳ ｔｅｃｈ Ｃｏ．、大田、韓国）であり、移動相は７５％（ｖ／ｖ）アセトニトリルを２．０ｍＬ／ｍｉｎの速度で流した。
９）腸溶性ラクターゼマイクロカプセル添加牛乳の理化学的特性
腸溶性ラクターゼマイクロカプセルを添加した牛乳の理化学的特性を評価するために、本腸溶性マイクロカプセルを２００ｍＬの市乳に１％（ｗ／ｖ）添加して、４℃で１２日間保存しながらｐＨ、色度、ラクターゼ放出率を観察した。
このとき、ラクターゼ放出率は、上述した残留乳糖含有量分析で測定した。
１０）官能評価
腸溶性ラクターゼマイクロカプセルを添加した牛乳の官能検査のために、牛乳飲用に拒否感を持たない男女１０人（男：３人、女：７人）のパネルを選抜したが、これらの平均年齢は２６歳であった。
選抜されたパネルは、１時間ごとに甘味（ｓｗｅｅｔｎｅｓｓ）、オフテイスト（ｏｆｆ−ｔａｓｔｅ）に対して合計３回のトレーニングを経た。市乳に１％（ｗ／ｖ）のラクターゼマイクロカプセルを添加し、１２日間４℃で保管し、実験した。
サンプルは、５０ｍＬの蓋付きコップに入れ、任意の４桁を表記して提供した。甘味とオフテイストはそれぞれ５点法を用いて表記するようにした（１＝非常に弱い、３＝普通、５＝非常に強い）。
１１）臨床試験
ラクターゼマイクロカプセルを適用した牛乳の乳糖不耐症の改善効果を調べるために、まず、乳糖不耐症患者２０人（男：１２人、女：８人、平均年齢：４１．７歳）を選抜した。
これらは、消化管に対する病歴および糖尿病に対する病歴がなかった。市乳５００ｍＬ（２５ｇの乳糖に相当）を空腹状態で飲用した後、３０〜６０分内に血糖が２０ｍｇ／ｄＬ未満で上昇する場合には、乳糖不耐症と判定した(Finkenstedt et al., Brit. med. J. 292, 161-162, (1986); Greenberger & Isselbacher, harrison’s principles of internal medicine, New York: McGraw-Hill, 1735 (1983))。
このように選抜されたパネルに、空腹状態で１ｇのマイクロカプセルを混合した５００ｍＬの市乳を飲用するようにした後、３時間の間３０分ごとに血糖を測定した。
それと同時に、乳糖不耐症により誘発される諸症状（下痢、腹痛、腹部膨満感、復命、吐き気）について感じられる程度を５点尺度法（１＝なし（ｎｏｎｅ）、３＝緩やか（ｍｏｄｅｒａｔｅ）、５＝激しい（ｅｘｔｒｅｍｅ））を用いてアンケート用紙に記録するようにした。
１２）統計的処理
実験によって得たデータは、ＳＡＳ９．０を用いてＡＮＯＶＡテストを実施し、ＬＳＤを用いて５％有意水準で有意性検定を実施した。
３．結果
１）ＭＣＴ添加量の最適化
ＭＣＴ添加による吸湿量の変化は、図２のとおりである。図２に示すように、ＭＣＴの比率が増加するほど吸湿量は減少する傾向を示したが、ＭＣＴと腸溶性被覆物質の比率が０．５０：１．００以後からは、有意差が示されていない。
したがって、腸溶性被覆物質の可塑剤および１次被覆物質の役割を果たすＭＣＴ添加量の比率は０．５０：１．００であることが最も好ましいことが分かった。
２）ＲＳＭを用いたマイクロカプセル化工程の最適化
中心合成計画法によって設計された条件で、合計１１個の実験区を実験した。各実験区で得られた収率を測定した結果は、下記表２のとおりである。これをＭＩＮＩＴＡＢ１６を用いて統計的処理した（表３）。
上記の結果から、各独立変数が変化することによるマイクロカプセル化収率Ｙに対する回帰式は、図３および図４のように表現された。この時のＲ２値は０．７５５であった。
求められた回帰式によれば、被覆物質の濃度が１０．７５７６ｇ／ｍＬであり、コア物質の量が３．０ｍＬであるとき、９９．９８％の最高収率を示した。
３）腸溶性ラクターゼマイクロカプセルの顕微鏡観察
最適化された工程を用いて、様々な被覆物質（ＨＰＭＣＰ、シェラック（ｓｈｅｌｌａｃ）、ゼイン（ｚｅｉｎ））でコーティングされた腸溶性ラクターゼマイクロカプセルを光学顕微鏡（Ｅｃｌｉｐｓｅ ８０ｉ、株式会社ニコン、東京、日本）を用いて、１０００倍拡大して観察した。
カプセルの内部にラクターゼが捕集されたことを確認することができ、丸い形のカプセルが均一に分散されていることを確認することができた（図５）。
４）腸溶性ラクターゼマイクロカプセルのゼータ電位
最適化された工程を用いて、様々な被覆物質（ＨＰＭＣＰ、シェラック（ｓｈｅｌｌａｃ）、ゼイン（ｚｅｉｎ））でコーティングされた腸溶性ラクターゼマイクロカプセルのゼータ電位を測定した結果は、図６のとおりである。
図６に示すように、ｐＨを２から１２まで連続的に変化させながらゼータ電位を測定した結果、ｐＨが上がるほどゼータ電位の絶対値は増加する傾向を示し、特に牛乳のｐＨであるｐＨ６．８付近でそれぞれＨＰＭＣＰ、シェラック（ｓｈｅｌｌａｃ）およびゼイン（ｚｅｉｎ）でコーティングされたラクターゼマイクロカプセルのゼータ電位は、それぞれ−４１．２、−５９．１、−９０．０ｍＶを示した。
一般に、ゼータ電位が±３０ｍＶ以上である場合、その粒子の分散性が良いといえるが(Freitas & Muller, Int. J. Pharm., 168, 221-229 (1988))、このような結果からみて、腸溶性被覆物質でコーティングされたラクターゼマイクロカプセルは牛乳内での分散性に優れると考えられる。
文献［Kwak et al. J. Dairy Sci. 84, 1576-1582 (2001)］のＭＣＴおよびＰＧＭＳでコーティングした液状のラクターゼマイクロカプセルの場合、Ｗ／Ｏエマルション形態であるので、牛乳に添加したときに胃に浮上する欠点があり、このため、見かけ上良くないだけでなく、ラクターゼを包んでいる脂肪層が空気中の酸素と接触して酸敗し易いという欠点があったが、本マイクロカプセルは、牛乳内での分散性が優れるので、このような欠点を克服したといえる。
５）腸溶性ラクターゼマイクロカプセルのサイズ分布
腸溶性ラクターゼマイクロカプセルのサイズを測定した結果（図７）、ＨＰＭＣＰ、シェラック（ｓｈｅｌｌａｃ）およびゼイン（ｚｅｉｎ）でコーティングされたラクターゼマイクロカプセルの大きさは、それぞれ３．３７０、５．１９２および２．６８６μｍであった。
文献［Kobayashi et al., Lqangmuir, 21, 5761-5769 (2005)］は、粒子径の小さい粒子であるほど溶液内で凝集がゆっくりと生じ、より安定的であるとした。よって、上記のゼータ電位結果とサイズ（ｓｉｚｅ）分布の結果からみて、本腸溶性ラクターゼマイクロカプセルは牛乳でよく分散されると考えられる。
６）官能評価
保存１２日間の官能評価結果は、下記表４のとおりである。表４に示すように、ＨＰＭＣＰ、シェラック（ｓｈｅｌｌａｃ）およびゼイン（ｚｅｉｎ）は保存期間中に甘味が少しずつ増加する結果を示した。
しかし、ＨＰＭＣＰの場合、初期（ｉｎｉｔｉａｌ）と比較して有意な差が示されておらず、市乳（対照群（ｃｏｎｔｒｏｌ））と比較しても有意な差が示されていない（ｐ＜０．０５）。
シェラック（ｓｈｅｌｌａｃ）の場合、ＨＰＭＣＰより甘味がさらに多く現れ、保存８日および１０日目からは市乳および初期と比較したときに有意な差が示されている（ｐ＜０．０５）。ゼイン（ｚｅｉｎ）の場合、甘味の増加幅が他の二つの試料に比べて相対的に低いことが確認された。
Ｏｆｆ−ｔａｓｔｅは、ＨＰＭＣＰ、ｓｈｅｌｌａｃで保存期間中に多少増加する傾向を示し、ＨＰＭＣＰに比べてｓｈｅｌｌａｃでさらに多く観察され、両方の試料とも保存８日目からは市乳と比較して有意な差が示されることが分かった（ｐ＜０．０５）。
しかし、ｚｅｉｎの場合には、初期からｏｆｆ−ｔａｓｔｅが他の試料に比べて高い値を示し、保存期間の経過に伴って、その増加幅が最も大きかったが、対照群および他の試料に比べて有意に差が大きく示された（ｐ＜０．０５）。よって、官能的に、ｚｅｉｎは好ましくない結果を得ることができた。
ＨＰＭＣＰとｓｈｅｌｌａｃの場合、一般に市乳の消費期間が一週以内であることを勘案したとき、通常の消費期間中に市乳と比較して官能的に大きな差を示さないといえる。
７）腸溶性ラクターゼマイクロカプセル添加牛乳の理化学的特性
（１）ｐＨ値
図８に示すように、カプセルを入れていない市乳（対照群（ｃｏｎｔｒｏｌ））、ＨＰＭＣＰでコーティングしたカプセルを入れた牛乳（ＨＰＭＣＰ）、シェラック（ｓｈｅｌｌａｃ）でコーティングしたカプセルを入れた牛乳（ｓｈｅｌｌａｃ）のｐＨは、それぞれ６．７９〜６．８０、６．６５〜６．５３、６．８１〜６．８０を示し、保存期間中に大きな変動を示していない。
（２）色度
保存期間の色度変化を下記表５に示した。表５に示すように、Ｌ＊ｖａｌｕｅは、シェラック（ｓｈｅｌｌａｃ）の場合には、保存４日までは有意に減少したが、それ以後には有意な差は示されておらず（ｐ＜０．０５）、ＨＰＭＣＰの場合には、保存期間中に有意な差が示されていない（ｐ＜０．０５）。
一方、ａ＊ｖａｌｕｅは、ＨＰＭＣＰおよびシェラック（ｓｈｅｌｌａｃ）の場合、対照群（ｃｏｎｔｒｏｌ）に比べて多少高い値を示したが、有意な差はなかった（ｐ＜０．０５）。ｂ＊ｖａｌｕｅは、シェラック（ｓｈｅｌｌａｃ）の場合には、保存６日までは多少高い傾向を示したが、それ以後には有意な差は示していない（ｐ＜０．０５）。
以上の結果からみて、腸溶性ラクターゼマイクロカプセルの添加は、牛乳の色度に大きな影響を及ぼさないことが分かる。
（３）ラクターゼマイクロカプセルの安定性
保存期間の間に残留乳糖を測定し、ラクターゼマイクロカプセルの安定性を観察した結果、ＨＰＭＣＰおよびシェラック（ｓｈｅｌｌａｃ）はいずれも時間経過に伴って残留乳糖が少しずつ減少する傾向を示した（図９）。
保存１２日目での残留乳糖は、ＨＰＭＣＰの場合には８１．１８％、シェラック（ｓｈｅｌｌａｃ）の場合には６４．９１％を示して、ＨＰＭＣＰが牛乳中でより安定的であることが分かった。これは、文献［Kwak et al. J. Dairy Sci. 84, 1576-1582 (2001)］が報告したＰＧＭＳおよびＭＣＴでコーティングした液状ラクターゼマイクロカプセルを添加した牛乳の残留乳糖が保存１２日目で２８．８１％である場合よりも遥かに優れた結果である。
８）腸溶性ラクターゼマイクロカプセルのｉｎ ｖｉｔｒｏ放出特性
食べ物が胃に入って胃酸と混ざって漸次ｐＨが低下するが、これを模式化するために、ｐＨ２、３、４での放出率を観察した結果を図１０に示す。
図１０に示すように、１２０分間ｐＨ２．０での放出率は、ＨＰＭＣＰとシェラック（ｓｈｅｌｌａｃ）がそれぞれ０．１、０．２％を示し、酸性条件である胃環境では、コア物質であるラクターゼをほとんど放出せず、効果的に保護することが分かった。
これとは対照的に、人工小腸環境では、１２０分間ｐＨ７およびｐＨ８でＨＰＭＣＰとｓｈｅｌｌａｃがそれぞれ７５％、８７％、および９３％、９７％の放出率を示すため、腸溶性ラクターゼマイクロカプセルが小腸環境で短時間にて効果的にコア物質を放出して乳糖不耐症の改善に役立てることができることが分かった（図１１）。
９）臨床試験
乳糖不耐症を持っているヒトを対象に、空腹状態で腸溶性コーティングラクターゼマイクロカプセルを添加した牛乳を飲用するようにした後、３時間の間３０分間隔ごとに血糖を調べた結果は、図１２のとおりである。
図１２に示すように、一般市乳を飲用したとき（対照群（ｃｏｎｔｒｏｌ））に比べて飲用後６０分まで急激に血糖が上がることが観察された。これは、小腸で腸溶性ラクターゼマイクロカプセルから放出されたラクターゼによって単糖類に分解されて体内に吸収され、エネルギー源として使われることを意味し、乳糖不耐症が改善されることを意味する。
血糖検査を行う間、一般に知られている乳糖不耐症に起因する症状である下痢、腹痛、腹部膨満感、復命、吐き気などに対して、症状の強さを５点法（１＝非常に弱い、３＝普通、５＝非常に強い）で表示するようにして評価した結果を図１３〜図１７に示した。
図１２〜図１７における対照群（ｃｏｎｔｒｏｌ）は、市販の牛乳製品である。
図１３〜図１７を参照すると、マイクロカプセルの添加された牛乳を飲用した後、ほとんどの症状が市乳を飲用したときに比べて有意に減少したことを確認し、腸溶性ラクターゼマイクロカプセルを添加した牛乳が効果的に乳糖不耐症を改善することが分かる。
＜実施例１＞
ラクターゼを中心物質とし、前記中心物質と、１次被覆物質としてのＭＣＴ（ｍｅｄｉｕｍ−ｃｈａｉｎ ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ）、および１次乳化剤としての、ＨＬＢ値０．６および濃度１．０％のポリグリセロールポリリシノリエート（ＰＧＰＲ）を６０℃で１５００ｒｐｍにて３０分間攪拌してプレエマルジョンを得た後、６０℃で９０００ｒｐｍにて２分間攪拌してラクターゼの乳化液を得た。
このとき、中心物質：１次被覆物質は１：３（ｖ／ｖ）の比率、中心物質：１次乳化剤は１：３（ｖ／ｖ）の比率でそれぞれ混合した後、攪拌した。
前記ラクターゼの乳化液を中心物質とし、前記ラクターゼの乳化液に２次被覆物質としてのＨＰＭＣＰ（（株）三星精密化学）、および２次乳化剤としての、ＨＬＢ値１６．７および濃度１．０％のＰＳＭＬを添加し、６０℃で２０００ｒｐｍにて１０分間攪拌して均質化した後、４℃で３，５００×ｇにて１５分間遠心分離してラクターゼの二重マイクロカプセル乳化液を得た。
このとき、前記２次被覆物質は８５％（ｖ／ｖ）エタノールに溶解させて使用し、ラクターゼの乳化液：２次被覆物質は２．５：２．７５（ｖ／ｖ）の比率、ラクターゼの乳化液：２次乳化剤は２．５：２．７５（ｖ／ｖ）の比率でそれぞれ混合した後、攪拌し、遠心分離した。
前記ラクターゼの二重マイクロカプセル乳化液を噴霧乾燥によって粉末化することにより、ラクターゼを含む二重マイクロカプセルを製造した。
このとき、ラクターゼは、Ｇｏｄｏ ＹＮＬ−２（合同酒精株式会社、東京、日本）を使用した。
＜実施例２＞
２次被覆物質としてＨＰＭＣＰの代わりにシェラック（ｓｈｅｌｌａｃ）（（株）シェラックコリア）を使用した以外は、前記実施例１と同様にして、ラクターゼを含む二重マイクロカプセルを製造した。
＜実施例３＞
１次被覆物質としてＭＣＴの代わりにトウモロコシ硬化油を使用し、２次被覆物質としてＨＰＭＣＰの代わりにゼイン（ｚｅｉｎ）（（株）豊林ムヤク）を使用した以外は、前記実施例１と同様にして、ラクターゼを含む二重マイクロカプセルを製造した。
＜実施例４＞
１次被覆物質としてＭＣＴの代わりに大豆油を使用し、２次被覆物質としてＨＰＭＣＰの代わりにシェラック（ｓｈｅｌｌａｃ）（（株）シェラックコリア）を使用した以外は、前記実施例１と同様にして、ラクターゼを含む二重マイクロカプセルを製造した。
＜実施例５＞
１次被覆物質としてＭＣＴの代わりにサフラワー油を使用し、２次被覆物質としてＨＰＭＣＰの代わりにゼイン（ｚｅｉｎ）（（株）豊林ムヤク）を使用した以外は、前記実施例１と同様にして、ラクターゼを含む二重マイクロカプセルを製造した。
＜実施例６＞
ラクターゼと機能性成分とが１：１（ｖ／ｖ）の比率で混合された混合物を中心物質とし、前記中心物質、１次被覆物質としてのＭＣＴ、および１次乳化剤としての、ＨＬＢ値０．６および濃度１．０％のポリグリセロールポリリシノリエート（ＰＧＰＲ）を６０℃で１５００ｒｐｍにて３０分間攪拌してプレエマルジョンを得た後、６０℃で９０００ｒｐｍにて２分間攪拌してラクターゼの乳化液を得た。
このとき、中心物質：１次被覆物質は１：３（ｖ／ｖ）の比率、中心物質：１次乳化剤は１：３（ｖ／ｖ）の比率でそれぞれ混合した後、攪拌した。
前記ラクターゼの乳化液を中心物質とし、前記ラクターゼの乳化液に、２次被覆物質としてのＨＰＭＣＰ（（株）三星精密化学）、および２次乳化剤としての、ＨＬＢ値１６．７および濃度１．０％のポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート（ＰＳＭＬ）を添加し、６０℃で２０００ｒｐｍにて１０分間攪拌して均質化した後、４℃で３，５００×ｇにて１５分間遠心分離してラクターゼの二重マイクロカプセル乳化液を得た。
このとき、前記２次被覆物質は８５％（ｖ／ｖ）エタノールに溶解させて使用し、ラクターゼの乳化液：２次被覆物質は２．５：２．７５（ｖ／ｖ）の比率、ラクターゼの乳化液：２次乳化剤は２．５：２．７５（ｖ／ｖ）の比率でそれぞれ混合した後、攪拌し、遠心分離した。
前記ラクターゼの二重マイクロカプセル乳化液を凍結乾燥により粉末化して、ラクターゼおよび機能性成分を含む二重マイクロカプセルを製造した。
前記ラクターゼは、Ｇｏｄｏ ＹＮＬ−２（合同酒精株式会社、東京、日本）を使用し、機能性成分は、異物を除去し、水洗および乾燥したネズ（Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ ｒｉｇｉｄａ Ｓ．ｅｔ Ｚ．）の実をネズの実の質量に対して１０倍量の精製水に入れて混合した後、１００℃の温度で最初精製水の体積に対して２５％となるように抽出し、濾過した１次濾過物を１次濾過物の体積に対して３０％となるように減圧濃縮した後、真空凍結乾燥して得たネズ果実抽出物を使用した。
＜適用例１＞
前記実施例１で製造したラクターゼを含む二重マイクロカプセル５質量％を牛乳に添加して、ラクターゼを含む二重マイクロカプセルを含有する牛乳を製造した。
＜適用例２＞
前記実施例２で製造したラクターゼを含む二重マイクロカプセル５質量％を牛乳に添加して、ラクターゼを含む二重マイクロカプセルを含有する牛乳を製造した。
＜適用例３＞
前記実施例３で製造したラクターゼを含む二重マイクロカプセル５質量％を牛乳に添加して、ラクターゼを含む二重マイクロカプセルを含有する牛乳を製造した。
＜適用例４＞
前記実施例６で製造したラクターゼを含む二重マイクロカプセル５質量％を牛乳に添加して、ラクターゼを含む二重マイクロカプセルを含有する牛乳を製造した。
＜適用例５＞
前記実施例１で製造したラクターゼを含む二重マイクロカプセル１質量％を牛乳に添加して、ラクターゼを含む二重マイクロカプセルを含有する牛乳を製造した。
＜適用例６＞
前記実施例１で製造したラクターゼを含む二重マイクロカプセル１０質量％を牛乳に添加して、ラクターゼを含む二重マイクロカプセルを含有する牛乳を製造した。
＜適用例７＞
前記実施例１で製造したラクターゼを含む二重マイクロカプセル５質量％をヨーグルトに添加して、ラクターゼを含む二重マイクロカプセルを含有するヨーグルトを製造した。
＜適用例８＞
前記実施例６で製造したラクターゼを含む二重マイクロカプセル５質量％を山羊乳（ｇｏａｔ ｍｉｌｋ）に添加して、ラクターゼを含む二重マイクロカプセルを含有する山羊乳ヨーグルトを製造した。
＜適用例９＞
前記実施例１で製造したラクターゼを含む二重マイクロカプセル５質量％を濃縮乳漿蛋白（ｗｈｅｙ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｓ）に添加して、ラクターゼを含む二重マイクロカプセルを含有する濃縮乳漿蛋白ヘルスサプリメントを製造した。
＜適用例１０＞
前記適用例１で製造したラクターゼを含む二重マイクロカプセルを含有する牛乳を用いて、ラクターゼを含む二重マイクロカプセルを含有するアイスクリームを製造した。
上述したように、本発明の好適な実験例、実施例および適用例を参照して説明したが、当該技術分野における通常の技術者であれば、下記の請求の範囲に記載された本発明の思想および領域から逸脱することなく、本発明を多様に修正および変更させることができることが理解できるだろう。
本発明によるラクターゼを含む二重マイクロカプセルは、小腸でのみ溶ける腸溶性被覆物質を使用するため、マイクロカプセル化の利点だけでなく、牛乳中での安定性も大幅に向上させることができるうえ、乳製品の乳糖不耐症を解決することができるため、本発明の属する技術分野に有用に適用できる。

Claims (5)

  1. ラクターゼを中心物質とし、前記中心物質と１次被覆物質および１次乳化剤を攪拌してラクターゼの乳化液を得る段階と、
    前記ラクターゼの乳化液をアルコールに溶解させた２次被覆物質および２次乳化剤を攪拌してラクターゼの二重マイクロカプセル乳化液を得る段階と、
    前記ラクターゼの二重マイクロカプセル乳化液を剤形化する段階とを含んでなる、ラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法において、
    前記１次被覆物質と２次被覆物質の使用量が、０．５：１の質量比であって、
    前記２次被覆物質の濃度が、１０．７５７６ｇ／ｍＬであり、
    前記ラクターゼの使用量が、３．０ｍＬであることを特徴とする、二重マイクロカプセルの製造方法。
  2. 前記ラクターゼは、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｌａｃｔｉｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｉｒｃｕｌａｎｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉおよびＢｏｓ ｔａｕｒｕｓよりなる群から選択される菌株に由来するか、或いは遺伝子組換えラクターゼであることを特徴とする、請求項１に記載のラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法。
  3. ラクターゼを中心物質とし、前記中心物質と、１次被覆物質としてＭＣＴ（ｍｅｄｉｕｍ−ｃｈａｉｎ ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ）、トウモロコシ硬化油、大豆油、サフラワー油およびバターオイルよりなる群から選択される少なくとも１つと、１次乳化剤としてポリグリセロールポリリシノリエート（ｐｏｌｙｇｌｙｃｅｒｏｌ ｐｏｌｙｒｉｃｉｎｏｌｅａｔｅ）、スクロース脂肪酸エステルおよびポリグリセロール脂肪酸エステルよりなる群から選択される少なくとも１つとを攪拌してプレエマルジョンを得た後、さらに攪拌してラクターゼの乳化液を得る段階；
    前記ラクターゼの乳化液を中心物質とし、前記ラクターゼの乳化液に、２次被覆物質としてヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート（ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ ｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ｐｈｔｈａｌａｔｅ）、ゼイン（ｚｅｉｎ）、シェラック（ｓｈｅｌｌａｃ）、ユードラジット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）、セルロースアセテートフタレート（ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ａｃｅｔａｔｅ ｐｈｔｈａｌａｔｅ）、セルロースアセテートスクシネート（ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ａｃｅｔａｔｅ ｓｕｃｃｉｎａｔｅ）、ポリビニルアセテートフタレート（ｐｏｌｙｖｉｎｙｌ ａｃｅｔａｔｅ ｐｈｔｈａｌａｔｅ）、セルロースアセテートトリメリテート（ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ａｃｅｔａｔｅ ｔｒｉｍｅｌｌｉｔａｔｅ）、ハイプロメロースアセテートスクシネート（ｈｙｐｒｏｍｅｌｌｏｓｅ ａｃｅｔａｔｅ ｓｕｃｃｉｎａｔｅ）およびサリチル酸フェニル（ｐｈｅｎｙｌ ｓａｌｉｃｙｌａｔｅ）よりなる群から選択される１つ以上を添加し、攪拌して均質化した後、遠心分離してラクターゼの二重マイクロカプセル乳化液を得る段階；および
    前記ラクターゼの二重マイクロカプセル乳化液を剤形化する段階；を含むことを特徴とする、請求項１に記載のラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法。
  4. 前記アルコールが炭素数１〜４のアルコールであることを特徴とする、請求項１に記載のラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法。
  5. 前記剤形が、粉末、液剤、錠剤および顆粒よりなる群から選択されることを特徴とする、請求項１に記載のラクターゼを含む二重マイクロカプセルの製造方法。
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