CN102793688A - 乳糖酶纳米微囊的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种乳酸酶纳米微囊的制备方法,所述的制备方法为复乳法,系将乳糖酶水溶加入含聚乳酸的表面活性剂水分散液中,经超声分散制成初乳液;初乳液加入含聚乙烯醇经乳化剂吐温80的水分散液,经分散乳化制得复乳液;在复乳液中加入羟丙基纤维素钛酸酯(HP55)的乙醇丙酮溶液,常温常压搅拌使溶剂挥发,HP55在纳米微囊表面沉积,经高速离心、水洗、冻干,即为乳糖酶纳米微囊。本发明的乳糖酶纳米微囊具有网状内皮系统靶向性、缓释性及表面可修饰性等特性。该产品具有改变药物体内分布、提高局部浓度、提高生物利用度等作用。
Description
技术领域
本发明涉及一种新型药剂技术领域,尤为乳糖酶纳米微囊的制备方法。
背景技术
乳糖酶(Lactase),其系统名为B-D-半乳糖甘半乳糖水解酶(galactosidegalactohydrase),或简称B-半乳糖苷酶(B-galactosidase)。一般来说,该酶有两种催化性质:一是催化水解反应,就是在特定条件下水解B-D-半乳苷键,将乳糖水解成a-D-葡萄糖和B-D-半乳糖:二是催化转移反应,在乳糖分子的半乳糖一侧连接1-4个半乳糖,生成低聚半乳糖(aglactooligosaccharide,GOS),作为一中益菌作用因子而用于功能性食品的开发。乳糖酶是一种白色粉末,无臭无味,溶解后是一种浅棕色的液体,是一种无毒副作用的生物酶制剂,已有FDA、FCC、WHO/FAO和JACFA等权威机构评审确定为安全物质,国际生化编号为EC.3.2.1.23,CAS编号为9030-11-2。我国卫生部已于1998年10月同意将其列入食品添加剂卫生使用标准GB2760之中,允许在食品工业生产中使用。小肠中乳糖酶活性从十二子肠近段向远段逐渐增加,在空肠或近段回肠达高峰,末段回肠酶水平低。
乳糖酶可将人体内的乳糖分解成葡萄糖和半乳糖,葡萄糖是人体各部分代谢的能量来源,半乳糖则是人大脑和黏膜组织代谢时所必须的结构糖,是婴儿大脑发育的必要组织,与婴儿大脑迅速成长有着密切的联系。再者,乳糖酶还可以在人体内通过转糖苷作用生成低聚糖,这些低聚糖是一种低分量,不黏稠的水溶性膳食纤维,它在人体肠道内作为益菌增殖因子仅能被双歧杆菌所利用,却不能被腐败细菌所利用,如此可大大减少肠道内有害毒素物质的产生,对预防便秘和腹泻有很重要的作用。
载药微囊是将固态或液态药物用辅料包装成微小胶囊,在药剂学上把粒径在10nm~100nm的载药微囊称纳米囊。近年来,载药纳米微囊因其具有网状皮内系统靶向性、缓释性及表面可修饰性而成为医药学领域的热点研究对象。利用该系统的特点,在改变药物体内分布、提高局部浓度、减轻毒副作用、提高生物利用度等方面取得了引人注目的成绩。
发明内容
为了实现该发明目的,本发明乳糖酶纳米微囊的制备方法,是一种复乳法,该法用1.0%-3.0%的乳酸酶水溶液体第一水相W1;0.05%0.20%聚乙烯醇、0.1%-0.2%稳定 剂吐温80的水溶液体第二水相;1.0%-2.0%浓度的聚乳酸的二氯乙烷与乙酸乙酯混合溶液(溶剂的比为1∶1)作为有机相0;浓度为0.1%羟丙基甲基纤维素(HP55)的乙醇一丙酮溶液为沉积色复剂。
第一水相W1与有机相0以1;10比例混合,经超声乳化制成初乳液W1/O,初乳相W/O经与第二水相以0.5-1.5∶10比例混合,经分散乳化制成复乳液w1/o/w2;复乳液用w1/o/w2;中滴加沉淀包复剂,在常温常压下经搅拌至溶剂完全挥发,HP55即在纳米微囊表面沉积包复,经高速离心,纯水洗涤、冻干即为乳糖酶纳米微囊;包复沉淀使用的试剂为0.1%羟丙基甲基纤维素(HP55)的乙醇-丙酮溶液,乙醇丙酮的比例为1∶1,该沉淀包复剂的用量与复乳液w1/o/w2的比例为体积1.0∶5.5。
具体实施方法
实施例一
1、称取0.25g(精确至0.001g)烯醇于250mL烧杯中,加水150mL,保鲜膜密封并扎几个小孔,于恒温磁力搅拌器上加热搅拌至聚乙烯醇完全溶解后,继续搅拌2min~3min后立即置于250mL容量瓶中,洗涤烧杯3次,并将洗涤液也转移到容量瓶中,冷却后定容至刻度;
2、称取0.1g(精确至0.001g)聚乳酸和0.05g(精确至0.001g)大豆卵磷脂与50*30高型称量瓶中,在通风橱内加2.5mL二氯甲烷和2.5mL乙酸乙酯,密封摇匀。(此有机相为0);
3、取0.04g乳糖酶于另一称量瓶中,加2mL水(此第一水相溶液为w1);
4、分别向100mL烧杯和250mL烧杯中加入50mL和150mL(1)中溶解完全的聚乙烯醇,再分别加入0.2g吐温80电磁炉搅拌。(此第二水相溶液为w2);
5、采用复乳法(w1/o/w2)。首先,将0.5mL第一水相w1注射入5mL有机相0,超声波分散制得初乳液(w1/o),然后加入50mL第二水相(w2)中,经分散乳化,制得复乳液(w1/o/w2)。将该复乳液迅速倾入一定体积的水分散相中,然后上述体系中滴加10mL、0.1%羟丙基甲基纤维素钛酸酯(HP55)的无水乙醇-丙酮溶液(体积比为1∶1)常温常压下搅拌至溶剂会发完毕,HP55即可在纳米微囊的表面沉积,即得肠溶包衣乳糖酶纳米微囊悬浮液。20000ram离心收集纳米微囊,用超纯水洗3边后冻干,储存于干燥器中,即为成品。
实例二
1、称取250g聚乙烯醇于250L反应釜中,加水约150L保鲜膜封闭并扎几个小孔,于恒温磁力搅拌器上加热搅拌至聚乙烯醇完全溶解后,继续搅拌2min~3min后,迅速冷却,用水添加至250L;
2、称取100g聚乳酸和50g大豆卵磷脂于溶解釜中,在通风橱内加2.5L乙酸乙酯,密封摇匀。(此为有机相O);
3、取40g乳糖酸于另一容器中,加2L水(此第一水相为W1);
4、分别向200g和250L烧杯中加入150ml(1)中溶解完全的聚乙烯醇,在分别加入200g吐温80电磁炉搅拌。(此第二水相为w2);
5、、采用复乳法(w1/o/w2)。首先,将0.5L第一水相溶液(W1)注射入5L有机相(o),超声波分散制成初乳液(w1/o),然后加入50L第二水相(w2)中,经分散乳化,制得复乳液(w1/o/w2)。将该复乳液迅速倾入一定体积的水分散相中,然后在上述体系中滴加10L、0.1%羟丙基甲基纤维素钛酸酯(HP55)的无水乙醇-丙酮溶液(体积比为1∶1),常温常压下搅拌至溶剂会发完毕,HP55即可在纳米微囊的表面沉积,即得肠溶包衣乳酸酶纳米微囊的悬浮液。20000g离心收集纳米微囊,用超纯水清洗3边后冻干,储存于干燥器中,即为成品。
以上所述,实施方式仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述,并非对本发明的范围进行限定,在不脱离本发明技术的精神的前提下,本领域工程技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进,均应落入本发明的权利要求书确定的保护范围内。
Claims (5)
1.乳糖酶纳米微囊的制备方法,其特征在于:使用了复乳法、即w/o/w法,将乳糖酶溶入水中,是为第一水相(w1),将聚乙烯醇加热搅拌溶于水中,再加入稳定剂吐温80搅拌溶解是为第二水相(w2),将聚乳酸和大豆卵磷脂溶于二氯甲烷与乙酸乙酯的混合溶液,是为有机相(O);将(w1)加入(O)中,超声分散制的初乳液(w1/o);将初乳液(w1/o)加到(w2)中分散乳化,得到复乳液(w1/o/w2);在复乳液(w1/o/w2)中滴加羟丙基纤维素钛酸酯(HP55)的乙醇一丙酮溶液,在常温常压搅拌使有机溶剂挥发,HP55在纳米微囊表面沉积,得到肠溶包衣乳糖酶纳米微囊悬浊液,悬浊液经高速离心、纯水洗涤并冻干,即得乳糖酸纳米微囊成品。
2.根据权利要求所述的乳糖酶纳米微囊的制备方法,其特征在于:第一水相(w1)乳糖酶的浓度为1%-3%;第二水相(w2)中,聚乙烯醇的浓度为0.05%-0.20%稳定剂吐温80的浓度为0.1%-0.2%。
3.根据权利1所述的乳糖酶纳米微囊的制备方法,其特征在于:有机相溶剂二氯甲烷与乙酸乙酯的比例为1∶1,聚乳糖的浓度为1.0%-2.0%聚乳酸的浓度为0.5%-1.5%。
4.根据权利1所述的乳糖酶纳米微囊的制备方法,其特征在于:初乳液(w1/o)中第一水相(w1)与有机相(O)的比例为1∶10,经超声分散制取,初乳液(w1/o)与第二水相(w2)的比例为0.1~0.15∶1.0,经分散乳化制成复乳液(w1/o/w2)。
5.根据权利1所述的乳糖酶纳米微囊的制备方法,其特征是:复乳液(w1/o/w2)中滴加的羟丙基甲基纤维素(HP55)的乙醇-丙酮溶液,该溶液与复乳液(w1/o/w2)的体积e为1∶5.5,羟丙基甲基纤维素在共有机溶剂中的浓度为0.1%。
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