CN102793688A

CN102793688A - 乳糖酶纳米微囊的制备方法

Info

Publication number: CN102793688A
Application number: CN2011101490396A
Authority: CN
Inventors: 张启美
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2011-05-26
Filing date: 2011-05-26
Publication date: 2012-11-28

Abstract

本发明公开了一种乳酸酶纳米微囊的制备方法，所述的制备方法为复乳法，系将乳糖酶水溶加入含聚乳酸的表面活性剂水分散液中，经超声分散制成初乳液；初乳液加入含聚乙烯醇经乳化剂吐温80的水分散液，经分散乳化制得复乳液；在复乳液中加入羟丙基纤维素钛酸酯(HP55)的乙醇丙酮溶液，常温常压搅拌使溶剂挥发，HP55在纳米微囊表面沉积，经高速离心、水洗、冻干，即为乳糖酶纳米微囊。本发明的乳糖酶纳米微囊具有网状内皮系统靶向性、缓释性及表面可修饰性等特性。该产品具有改变药物体内分布、提高局部浓度、提高生物利用度等作用。

Description

乳糖酶纳米微囊的制备方法

技术领域

本发明涉及一种新型药剂技术领域，尤为乳糖酶纳米微囊的制备方法。

背景技术

乳糖酶(Lactase)，其系统名为B-D-半乳糖甘半乳糖水解酶(galactosidegalactohydrase)，或简称B-半乳糖苷酶(B-galactosidase)。一般来说，该酶有两种催化性质：一是催化水解反应，就是在特定条件下水解B-D-半乳苷键，将乳糖水解成a-D-葡萄糖和B-D-半乳糖：二是催化转移反应，在乳糖分子的半乳糖一侧连接1-4个半乳糖，生成低聚半乳糖(aglactooligosaccharide，GOS)，作为一中益菌作用因子而用于功能性食品的开发。乳糖酶是一种白色粉末，无臭无味，溶解后是一种浅棕色的液体，是一种无毒副作用的生物酶制剂，已有FDA、FCC、WHO/FAO和JACFA等权威机构评审确定为安全物质，国际生化编号为EC.3.2.1.23，CAS编号为9030-11-2。我国卫生部已于1998年10月同意将其列入食品添加剂卫生使用标准GB2760之中，允许在食品工业生产中使用。小肠中乳糖酶活性从十二子肠近段向远段逐渐增加，在空肠或近段回肠达高峰，末段回肠酶水平低。

乳糖酶可将人体内的乳糖分解成葡萄糖和半乳糖，葡萄糖是人体各部分代谢的能量来源，半乳糖则是人大脑和黏膜组织代谢时所必须的结构糖，是婴儿大脑发育的必要组织，与婴儿大脑迅速成长有着密切的联系。再者，乳糖酶还可以在人体内通过转糖苷作用生成低聚糖，这些低聚糖是一种低分量，不黏稠的水溶性膳食纤维，它在人体肠道内作为益菌增殖因子仅能被双歧杆菌所利用，却不能被腐败细菌所利用，如此可大大减少肠道内有害毒素物质的产生，对预防便秘和腹泻有很重要的作用。

载药微囊是将固态或液态药物用辅料包装成微小胶囊，在药剂学上把粒径在10nm～100nm的载药微囊称纳米囊。近年来，载药纳米微囊因其具有网状皮内系统靶向性、缓释性及表面可修饰性而成为医药学领域的热点研究对象。利用该系统的特点，在改变药物体内分布、提高局部浓度、减轻毒副作用、提高生物利用度等方面取得了引人注目的成绩。

发明内容

为了实现该发明目的，本发明乳糖酶纳米微囊的制备方法，是一种复乳法，该法用1.0％-3.0％的乳酸酶水溶液体第一水相W1；0.05％0.20％聚乙烯醇、0.1％-0.2％稳定剂吐温80的水溶液体第二水相；1.0％-2.0％浓度的聚乳酸的二氯乙烷与乙酸乙酯混合溶液(溶剂的比为1∶1)作为有机相0；浓度为0.1％羟丙基甲基纤维素(HP55)的乙醇一丙酮溶液为沉积色复剂。

第一水相W₁与有机相0以1；10比例混合，经超声乳化制成初乳液W₁/O，初乳相W/O经与第二水相以0.5-1.5∶10比例混合，经分散乳化制成复乳液w₁/o/w₂；复乳液用w₁/o/w₂；中滴加沉淀包复剂，在常温常压下经搅拌至溶剂完全挥发，HP55即在纳米微囊表面沉积包复，经高速离心，纯水洗涤、冻干即为乳糖酶纳米微囊；包复沉淀使用的试剂为0.1％羟丙基甲基纤维素(HP55)的乙醇-丙酮溶液，乙醇丙酮的比例为1∶1，该沉淀包复剂的用量与复乳液w₁/o/w₂的比例为体积1.0∶5.5。

具体实施方法

实施例一

1、称取0.25g(精确至0.001g)烯醇于250mL烧杯中，加水150mL，保鲜膜密封并扎几个小孔，于恒温磁力搅拌器上加热搅拌至聚乙烯醇完全溶解后，继续搅拌2min～3min后立即置于250mL容量瓶中，洗涤烧杯3次，并将洗涤液也转移到容量瓶中，冷却后定容至刻度；

2、称取0.1g(精确至0.001g)聚乳酸和0.05g(精确至0.001g)大豆卵磷脂与50*30高型称量瓶中，在通风橱内加2.5mL二氯甲烷和2.5mL乙酸乙酯，密封摇匀。(此有机相为0)；

3、取0.04g乳糖酶于另一称量瓶中，加2mL水(此第一水相溶液为w₁)；

4、分别向100mL烧杯和250mL烧杯中加入50mL和150mL(1)中溶解完全的聚乙烯醇，再分别加入0.2g吐温80电磁炉搅拌。(此第二水相溶液为w₂)；

5、采用复乳法(w₁/o/w₂)。首先，将0.5mL第一水相w₁注射入5mL有机相0，超声波分散制得初乳液(w₁/o)，然后加入50mL第二水相(w₂)中，经分散乳化，制得复乳液(w₁/o/w₂)。将该复乳液迅速倾入一定体积的水分散相中，然后上述体系中滴加10mL、0.1％羟丙基甲基纤维素钛酸酯(HP55)的无水乙醇-丙酮溶液(体积比为1∶1)常温常压下搅拌至溶剂会发完毕，HP55即可在纳米微囊的表面沉积，即得肠溶包衣乳糖酶纳米微囊悬浮液。20000ram离心收集纳米微囊，用超纯水洗3边后冻干，储存于干燥器中，即为成品。

实例二

1、称取250g聚乙烯醇于250L反应釜中，加水约150L保鲜膜封闭并扎几个小孔，于恒温磁力搅拌器上加热搅拌至聚乙烯醇完全溶解后，继续搅拌2min～3min后，迅速冷却，用水添加至250L；

2、称取100g聚乳酸和50g大豆卵磷脂于溶解釜中，在通风橱内加2.5L乙酸乙酯，密封摇匀。(此为有机相O)；

3、取40g乳糖酸于另一容器中，加2L水(此第一水相为W1)；

4、分别向200g和250L烧杯中加入150ml(1)中溶解完全的聚乙烯醇，在分别加入200g吐温80电磁炉搅拌。(此第二水相为w₂)；

5、、采用复乳法(w₁/o/w₂)。首先，将0.5L第一水相溶液(W1)注射入5L有机相(o)，超声波分散制成初乳液(w₁/o)，然后加入50L第二水相(w₂)中，经分散乳化，制得复乳液(w₁/o/w₂)。将该复乳液迅速倾入一定体积的水分散相中，然后在上述体系中滴加10L、0.1％羟丙基甲基纤维素钛酸酯(HP55)的无水乙醇-丙酮溶液(体积比为1∶1)，常温常压下搅拌至溶剂会发完毕，HP55即可在纳米微囊的表面沉积，即得肠溶包衣乳酸酶纳米微囊的悬浮液。20000g离心收集纳米微囊，用超纯水清洗3边后冻干，储存于干燥器中，即为成品。

以上所述，实施方式仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明技术的精神的前提下，本领域工程技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进，均应落入本发明的权利要求书确定的保护范围内。

Claims

1.乳糖酶纳米微囊的制备方法，其特征在于：使用了复乳法、即w/o/w法，将乳糖酶溶入水中，是为第一水相(w₁)，将聚乙烯醇加热搅拌溶于水中，再加入稳定剂吐温80搅拌溶解是为第二水相(w₂)，将聚乳酸和大豆卵磷脂溶于二氯甲烷与乙酸乙酯的混合溶液，是为有机相(O)；将(w₁)加入(O)中，超声分散制的初乳液(w₁/o)；将初乳液(w₁/o)加到(w₂)中分散乳化，得到复乳液(w₁/o/w₂)；在复乳液(w₁/o/w₂)中滴加羟丙基纤维素钛酸酯(HP55)的乙醇一丙酮溶液，在常温常压搅拌使有机溶剂挥发，HP55在纳米微囊表面沉积，得到肠溶包衣乳糖酶纳米微囊悬浊液，悬浊液经高速离心、纯水洗涤并冻干，即得乳糖酸纳米微囊成品。

2.根据权利要求所述的乳糖酶纳米微囊的制备方法，其特征在于：第一水相(w₁)乳糖酶的浓度为1％-3％；第二水相(w₂)中，聚乙烯醇的浓度为0.05％-0.20％稳定剂吐温80的浓度为0.1％-0.2％。

3.根据权利1所述的乳糖酶纳米微囊的制备方法，其特征在于：有机相溶剂二氯甲烷与乙酸乙酯的比例为1∶1，聚乳糖的浓度为1.0％-2.0％聚乳酸的浓度为0.5％-1.5％。

4.根据权利1所述的乳糖酶纳米微囊的制备方法，其特征在于：初乳液(w₁/o)中第一水相(w₁)与有机相(O)的比例为1∶10，经超声分散制取，初乳液(w₁/o)与第二水相(w₂)的比例为0.1～0.15∶1.0，经分散乳化制成复乳液(w₁/o/w₂)。

5.根据权利1所述的乳糖酶纳米微囊的制备方法，其特征是：复乳液(w₁/o/w₂)中滴加的羟丙基甲基纤维素(HP55)的乙醇-丙酮溶液，该溶液与复乳液(w₁/o/w₂)的体积e为1∶5.5，羟丙基甲基纤维素在共有机溶剂中的浓度为0.1％。