CN109757469A - 一种脂肪组织运输液及制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种脂肪组织运输液及制备方法，每份运输液包括：DMEM培养液：50ml；抗生素与PBS缓冲液的混合溶液：1ml；所述混合溶液中抗生素的浓度为4.7～5.3mg/ml。制备方法：步骤1、制备抗生素与PBS缓冲液的混合溶液；对于每份混合溶液，称取0.94g～1.06g抗生素，加入40ml PBS缓冲液中充分溶解；用0.22μm滤器过滤，将其加入160ml DMEM培养液，形成4.7～5.3mg/ml的混合溶液；步骤2、量取10ml所述混合溶液，加入到500ml DMEM培养液中。本发明所述的运输液中加入了抗生素，可针对性的防止脂肪组织在运输过程中被微生物感染，具有更好的抗菌效果。

Description

一种脂肪组织运输液及制备方法

技术领域

本发明涉及细胞运输液技术，具体涉及一种脂肪组织运输液及制备方法。

背景技术

脂肪组织主要由脂肪细胞组成。脂肪细胞质内充满脂肪滴，胞质位于细胞边缘成一薄层，核亦被挤到细胞的边缘，压成扁形。

脂肪组织中的脂肪细胞在现代医学中具有举足轻重的作用。主要的，脂肪组织中包含有脂肪间充质干细胞(Adipose-Derived Stem Cells，ADSC)，这是来源于脂肪组织的多能干细胞，具有自我更新和多向分化能力.并能分泌多种生物活性因子，在组织损伤、修复方面蕴含着广阔的应用前景。近年来，ADSC在抗皮肤老化方面的作用也被证实，其具有广阔的临床应用前景。

保存和运输脂肪组织的最大障碍在于，脂肪细胞在体外以后，为了后续培养以及应用，其组织在制备培养的全过程中都需要处于无菌状态。而且，在保持脂肪组织在处于无菌状态的同时，还要保证组织的细胞活性。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明公开了一种脂肪组织运输液及制备方法。

本发明所采用的技术方案如下：

一种脂肪组织运输液，每份运输液包括：

DMEM培养液：50ml；

抗生素与PBS缓冲液的混合溶液：1ml；

所述混合溶液中抗生素的浓度为4.7～5.3mg/ml。

优选的：每份运输液包括：

PBS缓冲液：50ml；

抗生素与PBS缓冲液的混合溶液：1ml；

所述混合溶液中抗生素的浓度为4.9～5.1mg/ml。

优选的：所述抗生素为氨基糖苷类抗生素。更优选的：所述氨基糖苷类抗生素为链霉素、庆大霉素或者卡那霉素。更优选的：所述氨基糖苷类抗生素为庆大霉素。更优选的：所述庆大霉素为庆大霉素的硫酸盐制剂。

氨基糖苷类抗生素：氨基糖苷类抗生素(Aminoglycosides)是由氨基糖与氨基环醇通过氧桥连接而成的苷类抗生素，其对于细菌的作用主要是抑制细菌蛋白质的合成，妨碍初始复合物的合成，诱导细菌合成错误蛋白以及阻抑已合成蛋白的释放，从而导致细菌死亡。

庆大霉素的硫酸盐制剂为硫酸庆大霉素，硫酸庆大霉素该品为氨基糖甙类广谱抗生素，对多种革兰阴性菌及阳性菌都具有抑菌和杀菌作用。对绿脓杆菌、产气杆菌、肺炎杆菌、沙门氏菌属、大肠杆菌及变形杆菌等革兰阴性菌和金葡菌等作用较强。

根据如上所述的脂肪组织运输液的制备方法，包括：

步骤1、制备抗生素与PBS缓冲液的混合溶液；对于每份混合溶液，称取0.94g～1.06g抗生素，加入40ml PBS缓冲液中充分溶解；之后用0.22μm滤器过滤，再将其加入160mlPBS缓冲液，形成4.7～5.3mg/ml的混合溶液；

步骤2、量取10ml所述混合溶液，加入到500ml DMEM培养液中，得到运输液；

步骤3、对步骤2所得到的运输液进行分装，每瓶50ml；之后拧紧储液瓶瓶盖，用封口膜进行封口，再装入自封袋，最后装入真空封口袋中，进行真空封口；

步骤4、将分装、封口后的运输液放置于-20℃的环境下保存。

根据如上所述的脂肪组织运输液的制备方法，包括：

步骤1、制备抗生素与PBS缓冲液的混合溶液；对于每份混合溶液，称取0.98g～1.02g g抗生素，加入40ml PBS缓冲液中充分溶解；之后用0.22μm滤器过滤，再将其加入160mlPBS缓冲液，形成4.9～5.1mg/ml的混合溶液；

步骤2、量取10ml所述混合溶液，加入到500ml DMEM培养液中，得到运输液；

步骤3、对步骤2所得到的运输液进行分装，每瓶50ml；之后拧紧储液瓶瓶盖，用封口膜进行封口，再装入自封袋，最后装入真空封口袋中，进行真空封口；

步骤4、将分装、封口后的运输液放置于-20℃的环境下保存。

本发明的有益效果如下：

(1)本发明所述的运输液中加入了抗生素，可针对性的防止脂肪组织在运输过程中被微生物感染，具有更好的抗菌效果。

(2)本发明使用DMED培养液为基础，加入了各种抗生素，通过控制各个成分的含量，可以在运输过程中对脂肪组织起到很好的保护作用，维持脂肪组织的形态结构和生物活性，延长脂肪组织的保存时间，为后续的脂肪间充质干细胞的制备做好保障。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整的描述。

以下实施例中所使用的脂肪组织取自选取2017年9月～2018年1月某医院实施外科手术的正常体重患者。年龄20～40岁，身体健康，无其他急慢性疾病。对患者充分告知情况并取得允许后术中开腹时切取皮下脂肪组织。

实施例1～3均是制作了一份运输液，也可以根据比例制作不到一份(如半份、四分之一份等)或者多份运输液。实施例1～3的运输液组份见表1。

表1

上述实施例1～3中的脐带组织运输液的制备方法，具体包括以下步骤：

步骤1、制备抗生素与PBS缓冲液的混合溶液；对于每份混合溶液，按照实施例的顺序，在三次实施例中分别称取1g、0.94g和1.06g的硫酸庆大霉素，加入40ml PBS缓冲液中充分溶解；之后用0.22μm滤器过滤，再将其加入160mlPBS缓冲液，在三次实施例中依次形成5mg/ml、4.7mg/ml和5.3mg/ml的混合溶液；

步骤2、量取10ml所述混合溶液，加入到500ml DMEM培养液中，得到运输液；

步骤3、对步骤2所得到的运输液用125ml储液瓶分装，每个储液瓶装有50ml的运输液；之后拧紧储液瓶瓶盖，用封口膜进行封口，再装入自封袋，最后装入真空封口袋中，进行真空封口；

步骤4、将分装、封口后的运输液放置于-20℃的环境下保存。

将脂肪组织保存于上述脂肪组织运输液中的方法是：

步骤A、将置于-20℃的温度下保存的运输液解冻至4℃。

步骤B、将手术中取出的脂肪组织，离体后立刻置于4℃的脂肪运输液中保存。

步骤C、对装有脂肪组织的运输液降温保存于4℃环境的冷链运输箱中模拟运输过程。

步骤D、将步骤C处理后的脂肪组织取出、培养，观察脂肪组织的培养情况。

根据以上保存方法，设置一对照例如下：

对照例1：

制备对照例1的样品：

步骤A、取四组，每组100份运输液，之后将置于-20℃的温度下保存的运输液解冻至4℃。

步骤B、将手术中取出的脂肪组织，离体后立刻置于4℃的脂肪运输液中保存。

步骤C、将保存的脂肪组织，分为四组；每组包括100份。之后将其中三组溶液分别置于步骤A中得到的4℃的运输液中，另外一组置于DMED培养液中。

步骤D、对装有脂肪组织的运输液4℃冷链运输箱中模拟运输过程，保存5个小时。

步骤E、将步骤D处理后的脂肪组织取出、培养，观察脂肪组织细胞的培养情况，计数活细胞比例。

对照例1的结果见表2：

表2

	DMEM培养液	实施例1运输液	实施例2运输液	实施例3运输液
					运输总数	100	100	100	100
成活总数	50	97	92	93
					成活率	50％	97％	92％	93％

如表2所示，脂肪组织在运输液中保存之后，其结果均比在DMEM培养液中保存的存活率高。其中实施例1中的条件为最优的配置方法。

实施例4～6均是制作了一份运输液，也可以根据比例制作不到一份(如半份、四分之一份等)或者多份运输液。实施例4～6的运输液组份见表3。

表3

上述实施例4～6中的脐带组织运输液的制备方法，具体包括以下步骤：

步骤1、制备抗生素与PBS缓冲液的混合溶液；对于每份混合溶液，按照实施例的顺序，在三次实施例中分别称取1g、0.98g和1.02g的链霉素，加入40ml DMEM培养液中充分溶解；之后用0.22μm滤器过滤，再将其加入160mlDMEM培养液，在三次实施例中依次形成5mg/ml、4.9mg/ml和5.1mg/ml的混合溶液；

步骤2、量取10ml所述混合溶液，加入到500ml DMEM培养液中，得到运输液；

步骤3、对步骤2所得到的运输液用125ml储液瓶分装，每个储液瓶装有50ml的运输液；之后拧紧储液瓶瓶盖，用封口膜进行封口，再装入自封袋，最后装入真空封口袋中，进行真空封口；

步骤4、将分装、封口后的运输液放置于-20℃的环境下保存。

将脂肪组织保存于上述脂肪组织运输液中的方法与实施例1～3相同

根据以上保存方法，设置一对照例如下：

对照例2：

制备对照例2的样品：

步骤A、取四组，每组100份运输液，之后将置于-20℃的温度下保存的运输液解冻至4℃。

步骤B、将手术中取出的脂肪组织，离体后立刻置于4℃的脂肪运输液中保存。

步骤C、将保存的脂肪组织，分为四组；每组包括100份。之后将其中三组溶液分别置于步骤A中得到的4℃的运输液中，另外一组置于DMED培养液中。

步骤D、对装有脂肪组织的运输液4℃冷链运输箱中模拟运输过程，保存6个小时。

步骤E、将步骤D处理后的脂肪组织取出、培养，观察脂肪组织细胞的培养情况，计数活细胞比例。

对照例2的结果见表4：

表4

	DMEM培养液	实施例4运输液	实施例5运输液	实施例6运输液
					运输总数	100	100	100	100
成活总数	49	96	94	92
					成活率	49％	96％	94％	92％

如表2所示，脂肪组织在运输液中保存之后，其结果均比在DMEM培养液中保存的存活率高。其中实施例4中的条件为最优的配置方法。

以上描述是对本发明的解释，不是对发明的限定，本发明所限定的范围参见权利要求，在不违背本发明的基本结构的情况下，本发明可以作任何形式的修改。

Claims (8)

1.一种脂肪组织运输液，其特征在于，每份运输液包括：

DMEM培养液：50ml；

抗生素与PBS缓冲液的混合溶液：1ml；

所述混合溶液中抗生素的浓度为4.7～5.3mg/ml。

2.根据权利要求1所述的脂肪组织运输液，其特征在于：每份运输液包括：

PBS缓冲液：50ml；

抗生素与DMEM培养液的混合溶液：1ml；

所述混合溶液中抗生素的浓度为4.9～5.1mg/ml。

3.根据权利要求1或者2所述的脂肪组织运输液，其特征在于：所述抗生素为氨基糖苷类抗生素。

4.根据权利要求3所述的脂肪组织运输液，其特征在于：所述氨基糖苷类抗生素为链霉素、庆大霉素或者卡那霉素。

5.如权利要求4所述的脂肪组织运输液，其特征在于：所述氨基糖苷类抗生素为庆大霉素。

6.如权利要求5所述的脂肪组织运输液，其特征在于：所述庆大霉素为庆大霉素的硫酸盐制剂。

7.根据权利要求1所述的脂肪组织运输液的制备方法，其特征在于包括：

步骤1、制备抗生素与PBS缓冲液的混合溶液；对于每份混合溶液，称取0.94g～1.06g抗生素，加入40ml PBS缓冲液中充分溶解；之后用0.22μm滤器过滤，再将其加入160ml PBS缓冲液，形成4.7～5.3mg/ml的混合溶液；

步骤2、量取10ml所述混合溶液，加入到500ml DMEM培养液中，得到运输液；

步骤3、对步骤2所得到的运输液进行分装，每瓶50ml；之后拧紧储液瓶瓶盖，用封口膜进行封口，再装入自封袋，最后装入真空封口袋中，进行真空封口；

步骤4、将分装、封口后的运输液放置于-20℃的环境下保存。

8.根据权利要求2所述的脂肪组织运输液的制备方法，其特征在于包括：

步骤1、制备抗生素与PBS缓冲液的混合溶液；对于每份混合溶液，称取0.98g～1.02gg抗生素，加入40ml DMEM培养液中充分溶解；之后用0.22μm滤器过滤，再将其加入160ml PBS缓冲液，形成4.9～5.1mg/ml的混合溶液；

步骤2、量取10ml所述混合溶液，加入到500ml DMEM培养液中，得到运输液；

步骤3、对步骤2所得到的运输液进行分装，每瓶50ml；之后拧紧储液瓶瓶盖，用封口膜进行封口，再装入自封袋，最后装入真空封口袋中，进行真空封口；

步骤4、将分装、封口后的运输液放置于-20℃的环境下保存。