RU2660708C1 - Способ получения питательной среды для выделения гемокультуры при диагностике инфекции кровотока - Google Patents
Способ получения питательной среды для выделения гемокультуры при диагностике инфекции кровотока Download PDFInfo
- Publication number
- RU2660708C1 RU2660708C1 RU2017133981A RU2017133981A RU2660708C1 RU 2660708 C1 RU2660708 C1 RU 2660708C1 RU 2017133981 A RU2017133981 A RU 2017133981A RU 2017133981 A RU2017133981 A RU 2017133981A RU 2660708 C1 RU2660708 C1 RU 2660708C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- agar
- blood
- medium
- mixture
- cardiac
- Prior art date
Links
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 title claims abstract description 26
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 title claims abstract description 11
- 238000002955 isolation Methods 0.000 title claims description 13
- 238000009640 blood culture Methods 0.000 title claims description 9
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 title claims description 8
- 208000037815 bloodstream infection Diseases 0.000 title claims description 8
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims abstract description 55
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 claims abstract description 54
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 54
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 54
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims abstract description 44
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 35
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 24
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 23
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 22
- MJVAVZPDRWSRRC-UHFFFAOYSA-N Menadione Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(C)=CC(=O)C2=C1 MJVAVZPDRWSRRC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 20
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims abstract description 19
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 claims abstract description 17
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims abstract description 16
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims abstract description 16
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 claims abstract description 14
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 12
- 241000206672 Gelidium Species 0.000 claims abstract description 11
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims abstract description 11
- 229940025294 hemin Drugs 0.000 claims abstract description 10
- BTIJJDXEELBZFS-QDUVMHSLSA-K hemin Chemical compound CC1=C(CCC(O)=O)C(C=C2C(CCC(O)=O)=C(C)\C(N2[Fe](Cl)N23)=C\4)=N\C1=C/C2=C(C)C(C=C)=C3\C=C/1C(C)=C(C=C)C/4=N\1 BTIJJDXEELBZFS-QDUVMHSLSA-K 0.000 claims abstract description 10
- FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N potassium nitrate Chemical compound [K+].[O-][N+]([O-])=O FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 235000012711 vitamin K3 Nutrition 0.000 claims abstract description 10
- 239000011652 vitamin K3 Substances 0.000 claims abstract description 10
- 229940041603 vitamin k 3 Drugs 0.000 claims abstract description 10
- ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 4-aminobenzoic acid Chemical compound NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 7
- LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N L-cystine Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CSSC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 claims abstract description 6
- 239000004158 L-cystine Substances 0.000 claims abstract description 5
- 235000019393 L-cystine Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 claims abstract description 5
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 claims abstract description 5
- DFPAKSUCGFBDDF-ZQBYOMGUSA-N [14c]-nicotinamide Chemical compound N[14C](=O)C1=CC=CN=C1 DFPAKSUCGFBDDF-ZQBYOMGUSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims abstract description 5
- 235000010333 potassium nitrate Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- 239000004323 potassium nitrate Substances 0.000 claims abstract description 5
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 claims abstract description 4
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 claims description 26
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 claims description 4
- QIJRTFXNRTXDIP-UHFFFAOYSA-N (1-carboxy-2-sulfanylethyl)azanium;chloride;hydrate Chemical compound O.Cl.SCC(N)C(O)=O QIJRTFXNRTXDIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 3
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960001305 cysteine hydrochloride Drugs 0.000 claims description 3
- 238000000227 grinding Methods 0.000 claims description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 37
- 244000052769 pathogen Species 0.000 abstract description 19
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 abstract description 9
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 abstract description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 5
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 abstract description 4
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 4
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 abstract description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 abstract description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 abstract description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 2
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 150000003385 sodium Chemical class 0.000 abstract 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 64
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 14
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 9
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 7
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 6
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 6
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 6
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 6
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 6
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 6
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 5
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 5
- AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N dimethyl 2-(3-ethyl-3-methylpentyl)propanedioate Chemical class CCC(C)(CC)CCC(C(=O)OC)C(=O)OC AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 5
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 5
- 229940066779 peptones Drugs 0.000 description 5
- SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N phylloquinone Natural products CC(C)CCCCC(C)CCC(C)CCCC(=CCC1=C(C)C(=O)c2ccccc2C1=O)C SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 4
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 4
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 4
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 4
- 239000011772 phylloquinone Substances 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 239000004386 Erythritol Substances 0.000 description 3
- UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N Erythritol Natural products OCC(O)C(O)CO UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 3
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 3
- ABSPRNADVQNDOU-UHFFFAOYSA-N Menaquinone 1 Natural products C1=CC=C2C(=O)C(CC=C(C)C)=C(C)C(=O)C2=C1 ABSPRNADVQNDOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 3
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 3
- 229960002433 cysteine Drugs 0.000 description 3
- 229940009714 erythritol Drugs 0.000 description 3
- UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N erythritol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)CO UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N 0.000 description 3
- 235000019414 erythritol Nutrition 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 3
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 3
- 235000019175 phylloquinone Nutrition 0.000 description 3
- MBWXNTAXLNYFJB-NKFFZRIASA-N phylloquinone Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(C/C=C(C)/CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)=C(C)C(=O)C2=C1 MBWXNTAXLNYFJB-NKFFZRIASA-N 0.000 description 3
- 229960001898 phytomenadione Drugs 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 3
- WIIZWVCIJKGZOK-IUCAKERBSA-N 2,2-dichloro-n-[(1s,2s)-1,3-dihydroxy-1-(4-nitrophenyl)propan-2-yl]acetamide Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@@H](CO)[C@@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 description 2
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 2
- 235000019733 Fish meal Nutrition 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 229930003448 Vitamin K Natural products 0.000 description 2
- 241001148470 aerobic bacillus Species 0.000 description 2
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 239000006161 blood agar Substances 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- 239000012568 clinical material Substances 0.000 description 2
- 238000010411 cooking Methods 0.000 description 2
- YPHMISFOHDHNIV-FSZOTQKASA-N cycloheximide Chemical compound C1[C@@H](C)C[C@H](C)C(=O)[C@@H]1[C@H](O)CC1CC(=O)NC(=O)C1 YPHMISFOHDHNIV-FSZOTQKASA-N 0.000 description 2
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 2
- 235000013345 egg yolk Nutrition 0.000 description 2
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 239000004467 fishmeal Substances 0.000 description 2
- 244000053095 fungal pathogen Species 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 235000008935 nutritious Nutrition 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 239000013630 prepared media Substances 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 230000007065 protein hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 108010009004 proteose-peptone Proteins 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 241001148471 unidentified anaerobic bacterium Species 0.000 description 2
- 235000019168 vitamin K Nutrition 0.000 description 2
- 239000011712 vitamin K Substances 0.000 description 2
- 150000003721 vitamin K derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 229940046010 vitamin k Drugs 0.000 description 2
- PWKSKIMOESPYIA-UHFFFAOYSA-N 2-acetamido-3-sulfanylpropanoic acid Chemical compound CC(=O)NC(CS)C(O)=O PWKSKIMOESPYIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 1
- 208000035049 Blood-Borne Infections Diseases 0.000 description 1
- 241000167854 Bourreria succulenta Species 0.000 description 1
- 241000589562 Brucella Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 208000002330 Congenital Heart Defects Diseases 0.000 description 1
- 108010082495 Dietary Plant Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- XKVYZLLWKHGKMT-BEJOYRPXSA-N Gemin D Natural products O([C@@H]([C@@H](O)C=O)[C@@H]1[C@@H](O)COC(=O)c2c(c(O)c(O)c(O)c2)-c2c(O)c(O)c(O)cc2C(=O)O1)C(=O)c1cc(O)c(O)c(O)c1 XKVYZLLWKHGKMT-BEJOYRPXSA-N 0.000 description 1
- 241000590002 Helicobacter pylori Species 0.000 description 1
- 241000222722 Leishmania <genus> Species 0.000 description 1
- 108010070551 Meat Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 description 1
- BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N NAD zwitterion Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 241001486863 Sprattus sprattus Species 0.000 description 1
- 241000295644 Staphylococcaceae Species 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- 238000011203 antimicrobial therapy Methods 0.000 description 1
- 238000004500 asepsis Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 235000019693 cherries Nutrition 0.000 description 1
- 230000004087 circulation Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 208000028831 congenital heart disease Diseases 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 230000037149 energy metabolism Effects 0.000 description 1
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 235000013332 fish product Nutrition 0.000 description 1
- 235000012041 food component Nutrition 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 229930192479 gemin Natural products 0.000 description 1
- 229940037467 helicobacter pylori Drugs 0.000 description 1
- 230000008676 import Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 201000007119 infective endocarditis Diseases 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 239000006225 natural substrate Substances 0.000 description 1
- 229960005419 nitrogen Drugs 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 1
- 235000021049 nutrient content Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 235000011837 pasties Nutrition 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- MBWXNTAXLNYFJB-LKUDQCMESA-N phylloquinone Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(C/C=C(C)/CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)=C(C)C(=O)C2=C1 MBWXNTAXLNYFJB-LKUDQCMESA-N 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N serine phosphoethanolamine Chemical compound [NH3+]CCOP([O-])(=O)OCC([NH3+])C([O-])=O UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical class [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 108010046845 tryptones Proteins 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/001—Enzyme electrodes
- C12Q1/004—Enzyme electrodes mediator-assisted
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине и биотехнологии и раскрывает способ получения питательной среды. Способ включает следующие стадии. Готовят сердечный и мозговой экстракты. Далее готовят смесь №1, растворяя в дистиллированной воде 100 мг L-глютамина, 1 мг аденина, 200 мг парааминобензойной кислоты, 11 мг L-цистина, 2,5 мг никотинамида, 260,0 мг солянокислого цистеина, 500,0 мг азотнокислого калия. Затем в дистиллированной воде растворяют 15,0 г агар-агара, добавляют к нему 10,0 г пептона, 2,0 г глюкозы, 5,0 г хлористого натрия, 2,5 г фосфорнокислого двухзамещенного натрия, получая смесь №2. После чего к смеси №2 добавляют смесь №1, 100 мл мозгового и 150 мл сердечного экстрактов, 4 мл 1% раствора гемина. Доводят рН полученного сердечно-мозгового агара до 7,4±0,2. Разливают полученный состав по флаконам. Для приготовления чашек Петри расплавляют агар-агар полученного состава, добавляют к его содержимому 1% раствор менадиона и гемолизированную кровь. Изобретение позволяет увеличивать спектр выделяемых из крови клинически значимых микроорганизмов, включая аэробных, микроаэрофильных и анаэробных возбудителей, и может быть использовано при диагностике инфекции кровотока. 1 табл.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторным методам исследования, клинической микробиологии, а именно, микробиологическому исследованию крови, и биотехнологии, а именно, к способу приготовления питательной среды. Изобретение может быть использовано для диагностики инфекции кровотока путем выделения широкого спектра возбудителей, циркулирующих в кровотоке при микробиологическом исследовании. Использование предлагаемой среды позволяет получить из крови и культивировать чистую культуру аэробных, микроаэрофильных и анаэробных микроорганизмов - возбудителей инфекции кровотока в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений.
Питательные среды считаются ведущей составляющей в микробиологическом исследовании любого клинического материала. Соответствующий подбор состава питательной среды обеспечивает выделение широкого спектра микроорганизмов и способствует диагностике инфекционного заболевания.
В качестве питательных сред в микробиологии используют смеси, состоящие из различных соединений, способствующие размножению микроорганизмов в искусственных условиях. В связи с этим, любая питательная среда должна быть полноценной и содержать все необходимые для микроорганизмов вещества: белковый гидролизат, углеводы, хлористый натрий, минеральные соли. Ведущими питательными компонентами являются гидролизаты мяса (пептоны), казеина, рыбных продуктов и растительных белков.
В России научные разработки по созданию питательных сред начали проводить с 1980 года [1]. Панкреатический гидролизат рыбной муки, как полноценный пептон, был положен в основу питательных сред в России. До настоящего времени панкреатический гидролизат рыбной муки является основой более половины питательных сред промышленного отечественного производства [2].
Отечественными производителями выпускаются среды с номенклатурой более 400 наименований. Одновременно на российский рынок для практического здравоохранения поступают дорогостоящие импортные среды, различных зарубежных фирм (Becton Dickinson - США, Merck - Германия, Oxoid - Англия, Bio-Meriux - Франция, Pronadisa - Испания, Hi-Media - Индия).
Среды, приготовленные на натуральных природных субстратах, имеют все необходимые компоненты, поэтому на них хорошо растет большинство микроорганизмов, включая самые требовательные. Эти среды используют с диагностической целью.
Среды специального назначения, пригодные для выделения микроорганизмов из крови, готовят на сердечно-мозговом экстракте [3].
Диагностика инфекции в крови предусматривает выделение возбудителя из крови, получение его в виде колоний в качестве чистой культуры, проведение идентификации возбудителя и определение его антимикробной резистентности к антибиотикам. С этой целью в мировой практике используют высоко питательную плотную среду в виде сердечно-мозговой агаровой среды на чашке Петри. В России сердечно-мозговая жидкая и плотная среды промышленным способом не производятся.
В связи с этим отечественные лаборатории используют или эритрит-агар, как наиболее эффективный из всех имеющихся на нашем рынке отечественных плотных сред, или закупают дорогостоящие импортные агары [4].
Действующий до настоящего времени приказ МЗ СССР №535 от 1985 года [5] предлагает в качестве плотной среды использовать мясо-пептонный агар с добавлением 5% цельной крови для получения роста персистирующих бактерий и бактерий в L-форме, что теоретически и практически не эффективно. Рост возбудителей на плотном агаре позволяет исследовать биологические характеристики микроорганизма, готовить мазки для оценки их морфологических и тинкториальных свойств. Определение грамвариабельности микроорганизма (окрашивание мазков по Граму) позволяет врачу-клиницисту назначить целевую антибактериальную терапию.
При приготовлении мясной воды фарш заливают водой в соотношении 1:1, оставляют в условиях холодильника на 18-24 часа для экстракции и на следующий день смесь кипятят в течение 1 часа. Мясная вода содержит по отношению к массе: 0,3% общего азота, 0,07%аминного азота, 2,8% сухих веществ и 0,45% белка.
Для приготовления мясо-пептонного агара (МПА) к такой мясной воде добавляют 1% пептона, 0,5% хлорида натрия и 1,5-2,0% агар-агара. Для требовательных микроорганизмов дополнительно вводят в среду кровь, сыворотку, сахар и яичный желток.
Мясной экстракт получают идентично приготовлению мясной воды, при этом кипячение заменяется выпаркой мясного бульона до образования пастообразного продукта в автоклаве. Экстракт содержит: 18% воды, 61% органических веществ, 21% минеральных веществ, поэтому производство выпускает их в виде сухих порошков с содержанием: 12% общего азота, 1,1% аминного азота, 15,6% минеральных веществ.
Пептоны, как продукты ферментативного гидролиза белков мяса являются важным компонентом среды. Пепсинные пептоны содержат большое количество полипептидов, продуктов неглубокого гидролиза белка, а панкреатические пептоны - это смесь продуктов глубокого гидролиза белка и состоят из простых полипептидов, аминокислот с высоким содержанием аминного азота (1200 мг %). Пептоны обладают высокой питательной ценностью [6].
МПА, как базовая среда, используется в микробиологии более 80 лет для выделения из биологического материала наиболее распространенных аэробных, не требовательных к питанию, микроорганизмов (стафилококки, стрептококки, грамотрицательные палочки кишечной группы).
МПА имеет следующий состав:
| мясная вода | до 1000 мл |
| ферментативный пептон | 10,0 г |
| хлорид натрия | 5,0 г |
| агар-агар | -5,0-20,0 г |
| рН | 7,3±0,2 |
В настоящее время существуют различные композиции, включающие в МПА кровь, сыворотку крови, яичный желток, селективные факторы, глюкозу и другие ингредиенты в зависимости от цели исследования.
Для выделения и культивирования возбудителей из крови используется 5% мясо-пептонный кровяной агар, регламентированный приказом МЗ СССР №535 от 1985 г [5].
5% Мясо-пептонный кровяной агар по упомянутому приказу имеет следующий состав:
| ферметативный пептон | 9,0 г |
| хлорид натрия | 5,0 г |
| дрожжевой экстракт | 3,0 г |
| гидролизат казеина ферментативный | 80 г |
| натрий гидроортофосфат | 2,0 г |
| агар-агар | 20,0 г |
| дистиллированная вода | до 1000 мл |
| дефибринированная кровь человека | 50,0 мл |
| и рН | 7,2 |
Однако среда не способна выделять высоко требовательные к питанию микроорганизмы (не содержит факторы роста и высоко питательные вещества), облигатные анаэробы (отсутствует цистеин для регулирования определенного ОВП и отсутствует анаэробная техника культивирования) и микроаэрофилов (отсутствует техника культивирования микроаэрофилов).
В среде отсутствуют необходимые питательные вещества, ростовые факторы и нет питательной основы среды - сердечно-мозговой экстракта, обеспечивающего рост большинства клинически значимых возбудителей инфекции кровотока.
К облигатным (строгим) анаэробным микроорганизмам относится группа микроорганизмов с анаэробным типом дыхания, требующая для роста высокопитательные среды и отрицательный окислительно-восстановительный потенциал среды (ОВП). В эти среды дополнительно вводят факторы роста и восстановители для создания определенного ОВП.
Согласно рекомендациям Научно-методического центра по клинической лабораторной диагностике [7] в качестве базовой питательной среды был предложен анаэробный гемагар на основе эритрит-агара следующего состава на литр среды:
| эритрит-агар | 36,0 г |
| крахмал растворимый | 1,0 г |
| аммоний сернокислый | 0,4 г |
| натрий углекислый кислый | 1,0 г |
| гемин (1% раствор) | 1,0 мл |
| твин 80 | 1,0 мл |
| витамин К1 (1% раствор) | 1,0 мл |
| кровь лизированная цитратная | 50,0 мл, |
| имеющий рН | 7,2 |
Другой вариант обогащенной питательной среды был предложен на основе промышленной среды «Контроля стерильности» (тиогликолевая среда) с добавлением в среду: пептона (5,0 г), экстракта кормовых дрожжей (2,5 г), натрия хлористого (1,8 г), аммония сернокислого (0,4 г), крахмала растворимого (1,0 г), гемина раствора 1% (1,0 мл), агар-агара (16,0 г), витамина К1 (1,0 мл 1% раствора) и 50 мл лизированной крови.
Для культивирования клинически значимых неспорообразующих облигатно-и факультативно анаэробных бактерий, имеющих высокие требования к составу питательной среды, зарубежные авторы используют сердечно-мозговой агар (ВHI-agar) в качестве среды общего назначения, обогащенную гемином и витамином К («Clinical Microbiology Procedures Hadbook», 1995 г.) [3].
В зарубежной практике для выделения и культивирования неспорообразующих облигатно анаэробных бактерий в качестве базовых питательных сред также применяют агар Шедлера (Schaedler agar), среду для бруцелл, обогащенные витамином К и гемином.
Таким образом, более «богатые» прописи содержат L-цистеин, гемин, витамин К1 [8].
Сегодня в нашей стране выпускают общеупотребительные среды на основе панкреатического гидролизата кильки - питательный агар (СПА) для микробиологической практики [9].
Учитывая все выше приведенное, при разработке сред необходимо учитывать следующее:
- среды должны содержать все необходимые источники питания и факторы роста;
- среды должны иметь определенный уровень рН (7,0-7,4) и окислительно-восстановительного потенциала (Eh);
- среды должны быть стерильными.
В качестве прототипа выбран способ получения питательной среды фирмы HIMedia Laboratories (Индия) - Brain Heart Infusion Agar (HIMEDIA) M211. Среда поступила на отечественный рынок более 10 лет назад и использовалась для получения гемокультур. Преимущество этой среды по сравнению с подобными других иностранных фирм - цена, которая была доступна.
Авторы рекомендуют использовать эту среду для культивирования высоко требовательных патогенных микроорганизмов: бактерий, истинных и дрожжеподобных грибов.
Этот агар относится к высоко питательным и обеспечивает рост разнообразных микроорганизмов. Он может быть в дальнейшем обогащен 5-10% стерильной дефибринированной кровью.
Главное назначение среды, по мнению авторов, - первичное выделение аэробных бактерий из крови. Добавление 50 мг/л хлорамфеникола (левомицетина) или 40 мг/л стрептомицина или смеси из 50 мг/л гентамицина и 50 мг/л хлорамфеникола авторами рекомендуется для выделения патогенных грибов, так как антибиотики подавляют рост бактерий.
Питательная среда-прототип имеет следующий состав ингредиентов в г/л на 1000 мл дистиллированной воды:
| мозговой экстракт теленка | 200,00 |
| сердечный экстракт быка | 250,00 |
| протеозный пептон | 10,00 |
| декстроза | 2,00 |
| хлорид натрия | 5,00 |
| двунатриевый фосфат | 2,500 |
| агар | 15,00. |
| рН (при 25°С) равен | 7,4±0,2 |
По мнению авторов, протеозный пептон и экстракты в среде служат источниками углерода, азота, витаминов, аминокислот наряду с основными факторами роста. Декстроза - источник энергии. Хлорид натрия удерживает осмотический баланс среды и двунатриевый фосфат является буфером среды. Добавленная к среде дефибринированная кровь обеспечивает основу факторов роста для большинства требовательных к питанию микроорганизмов.
Включенные в состав данной среды сердечный и мозговой экстракты обеспечивают среду факторами роста для микроорганизмов. Использование протеозного пептона (триптический гидролизат животной ткани) обеспечивает среду триптонами и аминокислотами. Хлорид натрия и двунатриевый фосфат обеспечивают буферный баланс среды, который необходим для полноценного роста микроорганизмов.
Сердечно-мозговой агар фирмы HIMEDIA (М-211) поступает на отечественный рынок в виде светло-желтого порошка. В лаборатории готовят по прописи среду. Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агару.
Способ приготовления:
Размешать 52,0 г порошка М211 в 1000 мл дистиллированной воды. Прокипятить для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Перед розливом тщательно перемешать. При необходимости приготовления селективной среды для грибов можно добавить к ней до 20 единиц/мл пенициллина и до 40 мкг/мл стрептомицина.
Данный сердечно-мозговой агар служит средой общего назначения для первичного выделения аэробных бактерий из клинического материала. Для подавления бактерий и выделения возбудителей системных микозов часто в среду, помимо стерильной дефибринированной крови (до 5-10%), рекомендуют добавлять хлорамфеникол (до 50 мкг/мл), стрептомицин (40 мкг/мл) или смесь гентамицина и хлорамфеникола (по 50 мкг/мл). Для селективного выделения патогенных грибов используют также добавление смеси циклогексимида (0,5 г на 1 литр) и хлорамфеникола (0,05 г на 1 литр). В этом случае инкубирование ведут при 25-30°С в течение 1-2 недель (3). На этой среде с добавлением 10% бараньей крови, гентамицина и хлорамфеникола рост некоторых грибов может быть подавлен.
Среда имеет светло-янтарную окраску, прозрачна или слегка опалесцирует при затвердевании. После добавления стерильной дефибринированной крови (до 5% вес/об) среда имеет вишнево-красный цвет и опалесцирует, если в чашках Петри формируется гель. Среда имеет рН 7,4±0,2.
Однако данная сердечно-мозговая среда предназначена для выделения только аэробных возбудителей из крови, что значительно ограничивает микробиологическую диагностику инфекции в крови.
Кроме того, она не обеспечивает микроорганизмы необходимыми факторами роста, витаминами. Данная среда не способна обеспечить рост клинически значимых неспорообразующих анаэробных микроорганизмов, играющих патогенетическую роль в современных воспалительных заболеваниях.
Техническая проблема заключается в создании стабильной, доступной, простой в изготовлении питательной среды, позволяющей выделять аэробные, микроаэрофильные и анаэробные возбудители из крови, изучать их биологические, морфологические и тинкториальные свойства, идентифицировать их и определять у них антимикробную резистентность в антибиотикам, что является неотъемлемым этапом в диагностике инфекции кровотока и любого патологического состояния при циркуляции микроорганизмов в кровотоке.
Технический результат, достигаемый при осуществлении патентуемого изобретения, состоит:
- в увеличении спектра выделяемых из крови клинически значимых микроорганизми, включая аэробные, микроаэрофильные и анаэробные возбудителей, за счет повышения питательности среды путем качественного подбора составляющих ее компонентов с включением факторов роста и витаминов;
- в обеспечении простоты, доступности получения твердой агаровой сердечно-мозговой питательной среды, обогащенной широким набором питательных веществ и витаминов, позволяющей эффективно выделять гемокультуры при диагностике инфекции кровотока;
- в повышении эффективности диагностики инфекции кровотока за счет возможности выделения грамположительных и грамотрицательных аэробных, микроаэрофильных и анаэробных микроорганизмов, включая высоко требовательные к питанию возбудители инфекции кровотока.
Включение L-глютамин, который рассматривается как незаменимая аминокислота и ключевой фактор роста, повышает питательность среды.
Достоинством среды является также включение в нее L-цистина и цистеина - важных аминокислот, содержащих серу. Они «взаимопревращаются», так как тесно связаны между собой и являются важнейшими факторами роста.
Никотинамид, включенный в состав предлагаемой питательной является важным компонентом кодегидрогеназы и участвует в окислительно-восстановительных процессах, входит в состав окислительно-восстановительных ферментов для энергетического обмена.
Азотнокислый калий включен в среду, как обязательный компонент искусственных сред, являющийся пищевым фактором роста. Гемин, один из важнейших факторов роста, предназначен для получения роста особо требовательных к питанию микроорганизмов (лейшмании, хеликобактер, анаэробы). Менадион (витамин К1) обеспечивает рост и выделение анаэробных микроорганизмов.
Сущность предлагаемого изобретения заключается в следующем.
Способ приготовления питательной среды включает следующие этапы.
Готовят сердечный и мозговой экстракты раздельно после измельчения сердца и мозгов крупного рогатого скота.
Отдельно готовят смесь №1, для чего в 50 мл дистиллированной воды растворяют 100 мг L-глютамина, 1 мг аденина, 200 мг парааминобензойной кислоты, 11 мг L-цистина, 2,5 мг никотинамида, 260,0 мг солянокислого цистеина, 500,0 мг азотнокислого калия.
Затем в 700 мл дистиллированной воды растворяют 15,0 г агар-агара, добавляют 10,0 г пептона, 2,0 г глюкозы, 5,0 г хлористого натрия, 2,5 г фосфорнокислого двухзамещенного натрия, получая смесь №2, которую кипятят в течение 5-10 минут. После чего к смеси №2 добавляют, смесь №1, 100 мл мозгового и 150 мл сердечного экстрактов и 4 мл 1% раствора гемина. Доводят рН полученного сердечно-мозгового агара до 7,2-7,6. Разливают полученный состав по флаконам (200 мл или 500 мл), которые закрывают резиновыми пробками, завальцовывают алюминиевыми колпачками и стерилизуют.
Для приготовления чашек Петри расплавляют приготовленный сердечно-мозговой агар во флаконе на водяной бане, остужают его до t°=+50°C, добавляют к агару 1% раствор менадиона и гемолизированную кровь из расчета объема среды во флаконе: на 100 мл сердечно-мозгового агара во флаконе - 0,1 мл раствора менадиона и 5 мл гемолизированной крови. Флакон перемешивают и разливают по чашкам Петри.
Приготовление сердечно-мозговой питательной среды по предлагаемому способу выполняют следующим образом: сначала готовят сердечный и мозговой экстракты раздельно, а затем производят сборку самой среды.
1. Приготовление сердечного и мозгового экстрактов.
Первый день.
Раздельно сердце и мозги крупного рогатого скота очищают от пленок, сосудов, оболочек, жира, измельчают при помощи мясорубки. Далее полученный материал заливают одинарным количеством водопроводной воды (на 1 кг ткани - 1 л воды) и оставляют на ночь в холодильнике при t° +4°С.
Второй день:
Настои при помешивании доводят до кипения и кипятят 5-10 минут. Горячие экстракты профильтровывают вначале через 3 слоя марли и затем через ватно-марлевый фильтр, затем разливают по флаконам емкостью: мозговой экстракт по 100 мл и сердечный - по 150 мл. Заполненные флаконы закрывают резиновыми пробками и завальцовывают металлическими колпачками, после чего автоклавируют 15 минут при 0,7 атмосферы. Готовые экстракты хранят в холодильнике при t° +4°C в течение 6 месяцев.
Приготовление сердечно-мозговой среды.
1 этап.
Приготовление смеси №1.
В 50,0 мл дистиллированной воды растворяют 100 мг L-глютамина, 1 мг аденина, 200 мг парааминобензойной кислоты, 11 мг L-цистина, 2,5 мг никотинамида, 260 мг солянокислого цистеина, 500 мг азотнокислого калия.
2 этап.
Приготовление сердечно-мозгового агара.
В 700 мл дистиллированной воды растворяют 15 г агар-агара, добавляют 10 г пептона. 2 г глюкозы, 5 г хлористого натрия, 2,5 г двухзамещенного фосфорнокислого натрия. Полученную смесь кипятят в течение 5-10 минут. Добавляют в горячую массу приготовленную смесь №1, 100 мл полученного мозгового экстракта, 150 мл сердечного экстракта, 4 мл 1% раствора гемина. Доводят рН приготовленной среды до 7,2-7,6 раствором 8 N NaOH. Приготовленную среду разливают по флаконам удобным для работы объемом, которые закрывают резиновыми пробками и завальцовывают алюминиевыми колпачками. Стерилизацию проводят автоклавированием при 0,5-0,6 атмосферы в течение 20 минут.
Агаровая сердечно-мозговая среда во флаконах может храниться в условиях холодильника (+4°С) в течение года.
Приготовление чашек Петри с предлагаемой твердой агаровой сердечно-мозговой средой производят непосредственно перед посевом крови.
Этап 1.
Приготовление гемолизированной крови.
Цельную кровь разливают по пробиркам объемом 10 мл и помещают в наклонном положении в морозильную камеру для замораживания. Перед добавлением в среду пробирки с кровью из расчета 5 мл крови на 100 мл агара помещают в водяную баню для оттаивания, при этом кровь гемолизуруется и приобретает темный цвет.
Этап 2.
Приготовление чашек Петри с предлагаемой твердой агаровой сердечно-мозговой средой производят непосредственно перед посевом крови.
Помещают флакон с полученной агаровой средой в водяную баню для расплавления агара. Расплавленный агар остужают до t° +50°С и добавляют 1% раствор менадиона и гемолизированную кровь из расчета на объем среды во флаконе: на 100 мл сердечно-мозгового агара во флаконе - 0,1 мл раствора менадиона и 5 мл гемолизированной крови. После добавления менадиона и крови все содержимое тщательно перемешивают и разливают по чашкам Петри по 15 мл. После застывания агара в чашках, среду подсушивают и используют для прямого посева крови или для субкультивирования "кровь-среда", т.е. подросшей крови в жидкой сердечно-мозговой среде.
Свежеприготовленный сердечно-мозговой гемагар в чашках Петри используют для аэробного, микроаэрофильного и анаэробного культивирования крови. Чашки с засеянной кровью помещают в термостат в аэробные условия, в эксикатор - для микроаэрофильного и в микроанаэростат - для анаэробного культивирования.
Приготовленные чашки хранят в условиях холодильника (+4°С) в течение 1-2 недель для аэробного и микрофэрофильного культивирования и в условиях микроанаэростата - для анаэробного.
Свежеприготовленный гемагар на чашках, оставленный при комнатной температуре на 2 часа с момента разлива среды и также хранившийся в микроанаэростате является пригодным для культивирования строгих анаэробов.
Выросшие колонии возбудителя идентифицируют, изучают биохимические свойства и определяют резистентность к антимикробным препаратам.
Для доказательств возможности реализации назначения предлагаемого изобретения и достижения указанного технического результата приводим следующие данные.
Были сопоставлены результаты выделения микроорганизмов из крови при инокуляции цельной крови на две различные агаровые среды.
Среда №1 - среда прототип - Brain Heart Infusion Agar (HIMEDIA) M211.
Среда №2 - предлагаемый «сердечно-мозговой гемагар».
Исследование проводилось на пробах крови терапевтических пациентов кардиологического профиля с диагнозами: инфекционный эндокардит, ревматизм, врожденный порок сердца, и лихорадочное состояние. Пробы крови отбирались при венопункции с соблюдением правил асептики.
Среды №1 и №2 были приготовлены в соответствии с их рецептурой, разлиты по чашкам Петри для аэробного, микроаэрофильного и анаэробного культивирования.
Всего было исследовано 220 проб крови. В таблице представлены результаты выделения микроорганизмов из крови на среде №1 и №2.
Таблица
После посева крови на агар среды №1 получили 58 случаев выделения микроорганизмов, что составило 26,4% лабораторной эффективности. На среде №2 получили 130 случаев выделения микроорганизмов, что составило 59,1% случаев эффективности выделения возбудителя из крови, что в 2,2 раза превышало показатели эффективности среды №1.
Необходимо отметить, что анаэробные микроорганизмы не были получены на среде-прототипе, так как она предназначена для роста только аэробных микроорганизмов. В среду прототипа не включены факторы роста, необходимые анаэробным микроорганизмам. Среда-прототип включает дефибринированную кровь, а предлагаемая среда - гемолизированную, которая дополнительно обогащает среду витаминами.
Таким образом, разработанная нами твердая агаровая сердечно-мозговая среда является оптимальной средой для микробиологического исследования крови при диагностике инфекции кровотока, так как она способна обеспечить рост аэробных, микроаэрофильных и анаэробных возбудителей, включая высоко требовательных к питанию.
Предлагаемая питательная среда способна создать необходимые условия для хорошего роста широкого спектра клинически важных микроорганизмов. При условии культивирования в анаэробных условиях имеется возможность получить рост анаэробных и факультативно-анаэробных возбудителей из крови. Специальные ростовые добавки гарантируют рост высоко требовательных к питанию аэробных, микроаэрофильных и анаэробных микроорганизмов в гемокультурах при диагностике инфекции кровотока.
Существенным отличием разработанной нами среды является то, что предлагаемая агаровая сердечно-мозговая среда имеет в своем составе полноценный набор питательных веществ и витаминов для обеспечения роста широкого спектра клинически значимых возбудителей инфекции кровотока, включая аэробные, микроаэрофильные и анаэробные микроорганизмы. Обогащение агаровой среды цистином, цистеином, гемином, менадионом и гемолизированной кровью позволяет ее использовать для выделения не только аэробных возбудителей, но и анаэробных.
Плотная агаровая сердечно-мозговая среда в чашке Петри позволяет также выполнить этап субкультивирования при получении гемокультуры. Этот этап предусматривает высев «кровь-среда» на агар с целью получения чистой культуры возбудителя инфекции в крови. Выросшие колонии подвергаются изучению морфологических, тинкториальных, биохимических особенностей выделенного микроорганизма и постановки определения резистентности к антибиотикам.
Качественный подбор состава питательной среды обеспечивает выделение микроорганизма, получение его чистой культуры, изучение морфологических и тинкториальных особенностей, идентификацию его и определение антимикробной резистентности к антибиотикам. Все это в совокупности способствует правильной диагностике инфекции в крови и выбору целевой антимикробной терапии.
Предлагаемая агаровая среда проста в изготовлении и может быть получена в промышленном масштабе.
Литература
1. Поляк М.С., Сухаревич В.И., Сухаревич М.Э., книга «Питательные среды для медицинской микробиологии», Санкт-Петербург, 2002.
2. Шепелин А.П., Дятлов И.А., Марчихина И.И., Миронова Е.Н., Разработка технологии приготовления панкреатического гидролизата рыбной муки - белковой основы бактериологических питательных сред, Клиническая лабораторная диагностика, 2011, 9, 48-49.
3. Washington JA., 2nd Blood cultures: Principles and techniques. Mayo Clin Proc. 1975; 50:91-8.
4. Багирова H.C. Диагностика бактериемии, Consilium Medicum, 2002, t. 4 (1).
5. Приказ МЗ СССР №535 от 22.04.1985 г.приложение 1 к приказу «Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений, Москва, стр. 5-10.
6. Меджидов М.М., Справочник по микробиологическим питательным средам, Москва, 2003.
7. Кочеровец В.И., Михайлова B.C. и др., Методы микробиологического анализа неспорообразующих анаэробных бактерий, Москва, 1996.
8. A. Papastathopoulou, E. Bezirtzoglou, N. Legakis, A new selective and differentiative medium for the isolation of Bacteroides fragilis, Microbial Ecology in Health and Disease, 1998, vol. 10, 110-113.
9. Шепелин А.П., Дятлов И.А., Современное состояние и тенденции в производстве питательных сред, Лаборатория, 2011, 2, 17-18.
Claims (1)
- Способ получения питательной среды для выделения гемокультуры при диагностике инфекции кровотока, в котором готовят сердечный и мозговой экстракты после измельчения сердца и мозгов крупного рогатого скота, далее готовят смесь №1, для чего растворяют в 50 мл дистиллированной воды 100 мг L-глютамина, 1 мг аденина, 200 мг парааминобензойной кислоты, 11 мг L-цистина, 2,5 мг никотинамида, 260,0 мг солянокислого цистеина, 500,0 мг азотнокислого калия; затем в 700 мл дистиллированной воде растворяют 15,0 г агар-агара, добавляют к растворенному агар-агару 10,0 г пептона, 2,0 г глюкозы, 5,0 г хлористого натрия, 2,5 г фосфорнокислого двухзамещенного натрия, получая смесь №2; после чего смесь №2 кипятят в течение 5-10 минут и добавляют в нее смесь №1, 100 мл мозгового и 150 мл сердечного экстрактов, 4 мл 1% раствора гемина, доводят рН полученного сердечно-мозгового агара до 7,4±0,2, разливают полученный состав по флаконам, которые закрывают резиновыми пробками, завальцовывают алюминиевыми колпачками и стерилизуют, для приготовления чашек Петри расплавляют агар-агар полученного состава, добавляют к его содержимому 1% раствор менадиона и гемолизированную кровь из расчета объема среды во флаконе: на 100 мл сердечно-мозгового агара - 0,1 мл 1% раствора менадиона и 5 мл гемолизированной крови.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017133981A RU2660708C1 (ru) | 2017-09-29 | 2017-09-29 | Способ получения питательной среды для выделения гемокультуры при диагностике инфекции кровотока |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017133981A RU2660708C1 (ru) | 2017-09-29 | 2017-09-29 | Способ получения питательной среды для выделения гемокультуры при диагностике инфекции кровотока |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2660708C1 true RU2660708C1 (ru) | 2018-07-09 |
Family
ID=62815406
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017133981A RU2660708C1 (ru) | 2017-09-29 | 2017-09-29 | Способ получения питательной среды для выделения гемокультуры при диагностике инфекции кровотока |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2660708C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115011480A (zh) * | 2022-01-12 | 2022-09-06 | 昆明理工大学 | 一种从动物组织中分离微生物的方法及其用途 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4693972A (en) * | 1984-01-16 | 1987-09-15 | Becton, Dickinson And Company | Composition and method for rapid detection of microorganisms in clinical samples |
| RU2391392C1 (ru) * | 2008-10-28 | 2010-06-10 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Всероссийский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства и океанографии" (ВНИРО) | Способ получения питательной основы для микробиологических сред |
-
2017
- 2017-09-29 RU RU2017133981A patent/RU2660708C1/ru active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4693972A (en) * | 1984-01-16 | 1987-09-15 | Becton, Dickinson And Company | Composition and method for rapid detection of microorganisms in clinical samples |
| RU2391392C1 (ru) * | 2008-10-28 | 2010-06-10 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Всероссийский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства и океанографии" (ВНИРО) | Способ получения питательной основы для микробиологических сред |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| Brain Heart Infusion Agar M211 HIMedia. Technical Data, 03.2017. * |
| Brain Heart Infusion Agar M211 HIMedia. Technical Data, 03.2017. ШЕПЕЛИН А.П. Качество питательных сред Эндо, представленных на отечественном рынке. Справочник заведующего КДЛ. 2014. N4. С.62-68. * |
| КОЗЛОВ Ю.А. Питательные среды в медицинской микробиологии. М.: Медгиз, 1950, с.187-190. * |
| ШЕПЕЛИН А.П. Качество питательных сред Эндо, представленных на отечественном рынке. Справочник заведующего КДЛ. 2014. N4. С.62-68. ШЕПЕЛИН А.П. Роль и место культуральных бактериологических методов в диагностике инфекционных болезней. Профилактическая и клиническая медицина. 2012. N4. С.100-103. КОЗЛОВ Ю.А. Питательные среды в медицинской микробиологии. М.: Медгиз, 1950, с.187-190. * |
| ШЕПЕЛИН А.П. Роль и место культуральных бактериологических методов в диагностике инфекционных болезней. Профилактическая и клиническая медицина. 2012. N4. С.100-103. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115011480A (zh) * | 2022-01-12 | 2022-09-06 | 昆明理工大学 | 一种从动物组织中分离微生物的方法及其用途 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN105176874B (zh) | 凝结芽孢杆菌fm603及其应用 | |
| RU2660708C1 (ru) | Способ получения питательной среды для выделения гемокультуры при диагностике инфекции кровотока | |
| CN110484467A (zh) | 一株多粘芽孢杆菌及其产生的抗菌肽和应用 | |
| RU2518304C2 (ru) | ДВУХФАЗНАЯ ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ТОНКОСЛОЙНОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ Helicobacter pylori И СПОСОБ ЕГО ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ | |
| RU2455351C1 (ru) | Питательная среда для культивирования дифтерийных микробов | |
| RU2759831C1 (ru) | Питательная среда для культивирования микроорганизмов из Burkholderia cepacia complex | |
| CN108157978A (zh) | 一种含牛蒡多糖的调节肠道菌群的多肽组合物及应用 | |
| RU2569456C1 (ru) | Питательная среда для выявления возбудителя некробактериоза | |
| RU2366448C2 (ru) | Способ получения препарата для лечения радиационных поражений организма животных и способ лечения радиационных поражений организма животных | |
| RU2678123C1 (ru) | Питательная среда для восстановления численности анаэробных бактерий после низкотемпературного хранения | |
| TWI627277B (zh) | Medium, including the set of the group, and its application | |
| RU2415922C1 (ru) | Питательная среда для культивирования лактобактерий | |
| RU2120762C1 (ru) | Способ получения жидкой или сухой бактериальной закваски для производства кисломолочных продуктов | |
| RU2694256C2 (ru) | Кормовая добавка для профилактики бактерионосительства микроорганизмов рода Salmonella у сельскохозяйственной птицы и способ ее применения | |
| RU2650863C1 (ru) | Сердечно-мозговая питательная среда для диагностики инфекции в кровотоке и способ ее получения | |
| CN109355226A (zh) | 用于军团菌的增菌培养和分离培养的双相培养基及其制备方法 | |
| Atmanto et al. | Culture media | |
| US20110256583A1 (en) | Method and medium for accelerating target analyte growth in a test sample | |
| RU2333948C2 (ru) | Питательная среда для выращивания возбудителя туляремии | |
| RU2738858C1 (ru) | Способ выделения некультивируемых форм стафилококков | |
| RU2758880C1 (ru) | Способ получения биопрепарата для коррекции метаболизма у поросят-сосунов | |
| CN107998153A (zh) | 基于乳酸菌和光合菌共生作用的微生态制剂及生产方法 | |
| CN106755279A (zh) | 用于检测细菌性阴道炎的培养液、试剂盒及检测方法 | |
| Abdelazim et al. | New Enriched Culture Media for Culturing Streptococcus pyogenes by using Spirulina Powder | |
| SU1751211A1 (ru) | Питательна среда дл выделени чумного микроба |