CN112957378B - 抑制阴道炎病原菌的组合物、阴道清洁组合物以及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种抑制阴道炎病原菌的组合物、阴道清洁组合物以及其用途，具体地，本发明提供一种用以抑制阴道炎病原菌的组合物，其包含经分离且去活性的唾液乳酸杆菌AP‑32菌株。上述组合物可抑制阴道炎病原菌生长，并以医药及阴道清洁组合物的形式存在。较佳者，上述组合物结合益生元可进一步提升抑制阴道炎病原菌的效果。

Description

抑制阴道炎病原菌的组合物、阴道清洁组合物以及其用途
技术领域
本发明是有关一种组合物、阴道清洁组合物以及其用途，特别是关于一种用以抑制阴道炎病原菌的组合物、阴道清洁组合物以及其用途。
背景技术
有关于益生菌对于人体健康的研究十分广泛，一般来说，对于人的身体健康有特殊功效的菌株称为功能性益生菌(Guidelines for the evaluation of probiotics infood；Reportof joint FAO/WHO working group on drafting guidelines for theevaluation of probiotics in food；London Ontario,Canada April 30 and May 1,2002：1-7)。常见的功能性益生菌的特殊功效包含调整肠胃道功能、调节免疫能力、甚至是抗发炎反应等。需注意的是，上述功能性益生菌的特殊功效在于菌株(strain)的特异性而非菌种(species)，亦即，即使是相同的菌种，若为不同的菌株，仍可能具有不同的功效，甚至具有相反的功效。
一些研究指出，现代妇女约有超过50%的机率发生尿道或阴道感染。在门诊就诊的妇女中，常见诸如排尿困难、瘙痒和分泌物等下生殖道症状。最常见的原因是外阴道感染，育龄妇女的外阴道感染有三个常见原因：念珠菌病、细菌性阴道疾病，以及滴虫病，其中前两者都是由微生物所造成。阴道与外界相通，又靠近有很多潜在病原菌的肛门，因此会有很多机会遭到病原菌侵入，所以人体有一套防御系统以避免病原菌过度增生。
阴道的防御系统主要基础是pH值低于4.5的酸性环境。酸性环境不利于潜在病原菌的增生，而对嗜酸性的杆菌则是理想的环境，因此可以使嗜酸性杆菌持续产酸，维持一个健康的状态。然而，若是酸性细菌活性降低，例如使用广效抗生素等原因，则会使阴道酸碱度上升，导致病原菌增生并造成感染。
有鉴于此，开发具有抑制阴道带病原菌功效的产品是目前需努力的目标。
发明内容
本发明提供一种用以抑制阴道炎病原菌的组合物，其包含去活性的乳酸菌菌株。上述组合物可抑制阴道炎病原菌生长，且以医药及阴道清洁组合物的形式存在。
本发明一实施例的用以抑制阴道炎病原菌的组合物包含经分离且去活性的乳酸菌菌株以及赋形剂、稀释剂或载体，其中乳酸菌菌株包含保藏编号为CCTCC NO：M2011127的唾液乳酸杆菌(Lactobacillus salivariussubsp.salicinius) AP-32菌株，其保藏于中国典型培养物保藏中心（保藏日期：2011年4月10日；保藏单位：中国典型培养物保藏中心（CCTCC）；保藏单位地址：中国 武汉 武汉大学，邮编430072；分类命名：唾液乳酸杆菌(Lactobacillus salivariussubsp.salicinius)）。
本发明另一实施例的阴道清洁组合物包含经分离且去活性的乳酸菌菌株以及赋形剂、稀释剂或载体，其中乳酸菌菌株包含保藏编号为CCTCC NO：M2011127的唾液乳酸杆菌(Lactobacillus salivariussubsp.salicinius) AP-32菌株，其保藏于中国典型培养物保藏中心。
本发明又一实施例的以包含乳酸菌菌株的组合物作为抑制阴道炎病原菌的用途，其中包含乳酸菌菌株的组合物包含经分离且去活性的乳酸菌菌株以及赋形剂、稀释剂或载体，其中乳酸菌菌株包含保藏编号为CCTCC NO：M2011127的唾液乳酸杆菌(Lactobacillus salivariussubsp.salicinius) AP-32菌株，其保藏于中国典型培养物保藏中心。
以下藉由具体实施例配合所附的图式详加说明，当更容易了解本发明的目的、技术内容、特点及其所达成的功效。
附图说明
图1显示本发明的乳酸菌抑制多种阴道炎病原菌的结果。
图2为一直方图，显示本发明的去活性乳酸菌菌株结合益生元抑制多种阴道炎病原菌的结果。
用于专利程序的微生物保藏：
AP-32菌株
保藏编号：CCTCC NO：M2011127；
保藏日期：2011年4月10日；
保藏单位：中国典型培养物保藏中心（CCTCC）；
保藏单位地址：中国 武汉 武汉大学，邮编430072；
分类命名：唾液乳酸杆菌(Lactobacillus salivariussubsp.salicinius)。
具体实施方式
以下将详述本发明的各实施例，并配合附图作为例示。除了这些详细说明之外，本发明亦可广泛地施行于其它的实施例中，任何所述实施例的轻易替代、修改、等效变化都包含在本发明的范围内，并以请求保护范围为准。在说明书的描述中，为了使读者对本发明有较完整的了解，提供了许多特定细节；然而，本发明可能在省略部分或全部特定细节的前提下，仍可实施。此外，众所周知的步骤或组件并未描述于细节中，以避免对本发明形成不必要的限制。附图中相同或类似的组件将以相同或类似符号来表示。特别注意的是，附图仅为示意之用，并非代表组件实际的尺寸或数量，有些细节可能未完全绘出，以求附图的简洁。
本发明所述的乳酸菌菌株的冷冻干燥培养物已保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC，地址为中国武汉 武汉大学，430072)。保藏的详细资料如表1所示：
如表1所列已保藏的乳酸菌菌株被发现具有抑制阴道炎病原菌的活性效果。因此，表1所列已保藏的乳酸菌菌株可作为抑制阴道炎病原菌的用途。
于一实施例中，本发明的用以抑制阴道炎病原菌的组合物包含经分离的乳酸菌菌株以及赋形剂、稀释剂或载体。乳酸菌菌株为保藏编号为CCTCC NO：M2011127的唾液乳酸杆菌(Lactobacillus salivariussubsp.salicinius) AP-32菌株，上述乳酸菌菌株保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)。
于一实施例中，赋形剂、稀释剂或载体可为生理上可接受的赋形剂、稀释剂或载体，使本发明的组合物作为阴道清洁组合物使用。
于一实施例中，赋形剂、稀释剂或载体可为医药上可接受的赋形剂、稀释剂或载体，使本发明的组合物作为医药组合物使用。
于医药组合物的实施例中，医药组合物可为口服剂型或外用剂型。举例而言，口服剂型可为锭剂、胶囊、溶液剂或粉剂等；外用剂型可为粉剂、乳膏、喷雾剂、凝胶、溶液剂、散剂或霜剂等。
于阴道清洁组合物的实施例中，阴道清洁组合物可为锭剂、胶囊、粉剂、乳膏、喷雾剂、凝胶、溶液剂、散剂、霜剂或洗剂。
于一实施例中，本发明的乳酸菌菌株为去活性菌株。于一实施例中，本发明的用于抑制阴道炎病原菌的组合物中去活性菌体的粉剂含量为2%以上，其相当于菌数1109CFU。于一实施例中，去活性菌体的粉剂含量为2-10%。
于一实施例中，本发明的用以抑制阴道炎病原菌的组合物还包含益生元(prebiotic)。举例而言，最常见的益生元为水溶性纤维或膳食纤维。于一实施例中，益生元可为菠萝酶、壳聚糖、葡萄糖酸锌、木糖醇、山梨醇、巴拉金糖或以上的组合。于一实施例中，益生元的含量为3-50%。
于一实施例中，赋形剂、稀释剂或载体可为碳酸钙、柠檬酸、麦芽糊精、薄荷凉味粉或以上的组合。举例而言，赋形剂、稀释剂或载体的含量为0.2-40%。依据不同的组合物剂型设计，以纯水作为溶剂补充至100%。
实施例1：本发明的乳酸菌菌株的形态学以及一般性质
根据16S rDNA序列分析以及API细菌鉴定系统分析结果来确认菌株在分类学上的特征。本发明的乳酸菌菌株在形态学及一般性质上的特征详细列于表2：
实施例2：本发明的乳酸菌菌株的收集
本发明的乳酸菌菌株是以经分离的唾液乳酸杆菌AP-32菌株于适当培养液中进行培养，以获得乳酸菌的菌液。将乳酸菌的菌液进一步以100℃、30分钟去活性后，离心去除上清液即得乳酸菌的菌体，进一步干燥即得菌体粉末。
实施例3：本发明的乳酸菌菌株的抑制阴道炎病原菌分析
本发明的乳酸菌菌株的抑制阴道炎病原菌能力的检测方法是参考2005年Strus等人发表于Candida. Infectious Diseases in Obstetrics and Gynecology, 13(2), 69-75所使用的抗菌方法进行测试。首先，将活化至第3代的唾液乳酸杆菌AP-32菌株个别涂抹在相对应的固态培养基上并维持涂抹宽度为2 cm。以嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)作为对照组，控制组(control)则不涂抹乳酸菌。以乳酸菌相对应的培养条件培养2天后，注入14 mL用以培养阴道炎病原菌的培养基，待培养基凝固后，将阴道炎病原菌的菌液分别均匀涂抹于培养基上。受测的阴道炎病原菌包含白色念珠球菌(Candida albicans)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大肠杆菌(Escherichia coli)。将涂抹阴道炎病原菌的培养基以病原菌相对应的培养条件培养。当到达相应的培养时间后，将菌盘取出，以尺量测抑菌宽度，以评比乳酸菌菌株的抑菌力。分数越高者抑菌力越好，评价标准如表3所示。
本发明的乳酸菌菌株抑制阴道病原菌的结果如图1所示。由图1的结果可知，本发明的唾液乳酸杆菌AP-32菌株具有抑制阴道炎病原菌的活性效果。
实施例4：去活性乳酸菌菌株结合益生元抑制阴道炎病原菌的结果
去活性乳酸菌菌株结合益生元的抑制阴道炎病原菌能力的检测方法如下。首先，按适当比例秤取3%益生元(例如菠萝酶、壳聚糖、葡萄糖酸锌、木糖醇、山梨醇、巴拉金糖或以上组合)与少许的水搅拌至完全溶解。再加入本发明的唾液乳酸杆菌AP-32菌株的去活性菌粉2%并以纯水补至100%，再搅拌均匀；控制组仅有纯水；另两组实验组为唾液乳酸杆菌AP-32菌株的去活性菌粉2%以及3%益生元(例如菠萝酶、壳聚糖、葡萄糖酸锌、木糖醇、山梨醇、巴拉金糖或以上组合)。各别取0.1 ml已活化的阴道炎病原菌 (浓度为1×105～9×105CFU/ml 的白色念珠球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌) 加入上述各组实验中混合，混和均匀后静置20分钟。接着，分别添加22.5 ml的纯水稀释10倍后，再依适当序列稀释后取0.1ml进行涂盘并于37℃培养。最后依据抑菌率计算方法求得抑菌率。抑菌率计算方法为抑菌率(%) = (1-实验组/控制组)100%)。
本发明组合物的抑制阴道炎病原菌的检测结果如图2所示，其中符号***表示p值<0.001，亦即统计学上具有非常显著的差异；符号*表示p值<0.05，亦即统计学上具有显著差异。由图2结果可知，2%唾液乳酸杆菌AP-32菌株的去活性菌粉以及3%益生元对于阴道病原菌抑制率与控制组相比具有显著差异。2%唾液乳酸杆菌AP-32菌株的去活性菌粉抑制白色念珠球菌、金黄色葡萄球菌及大肠杆菌的抑菌率分别为25%、33%及40%。3%益生元抑制白色念珠球菌、金黄色葡萄球菌及大肠杆菌的抑菌率分别为17%、29%及33%。上述两组对于阴道病原菌抑制率皆低于40%。需注意的是，包含2%唾液乳酸杆菌AP-32菌株的去活性菌粉以及3%益生元的组合物对于白色念珠球菌、金黄色葡萄球菌及大肠杆菌具有相对突出的抑菌率，其抑菌率分别为82%、100%及96%。
综合上述，本发明的用以抑制阴道炎病原菌的组成物包含去活性的唾液乳酸杆菌AP-32菌株，其可抑制阴道炎病原菌生长，因此可作为抑制阴道炎病原菌的用途，并以医药组合物或阴道清洁组合物的形式存在。可以理解的是，相较于具有活性的菌株，包含去活性的唾液乳酸杆菌AP-32菌株的组合物的保存条件较为宽松，例如室温下即可有效保存。较佳者，本发明的用以抑制阴道炎病原菌的组成物还包含益生元或其它有效成分，以进一步提升抑制阴道炎病原菌的能力。
以上所述的实施例仅是为说明本发明的技术思想及特点，其目的在使熟习此项技艺的人士能够了解本发明的内容并据以实施，当不能以之限定本发明的专利范围，即大凡依本发明所揭示的精神所作的均等变化或修饰，仍应涵盖在本发明的专利范围内。

Claims (4)

1.一种用以抑制阴道炎病原菌的组合物，由以下所组成：
经分离且去活性的乳酸菌菌株，其中该乳酸菌菌株为保藏编号为CCTCC NO：M2011127的唾液乳酸杆菌(Lactobacillus salivarius subsp. salicinius) AP-32菌株，其保藏于中国典型培养物保藏中心；以及
菠萝酶；
其中，所述乳酸菌菌株的含量为2%，所述菠萝酶的含量为3%。
2.如权利要求1所述的用以抑制阴道炎病原菌的组合物，其为外用剂型，其中所述外用剂型包含粉剂、乳膏、喷雾剂、凝胶、溶液剂、散剂或霜剂。
3.一种乳酸菌菌株的组合物用在制备抑制阴道炎病原菌的组合物的用途，其中所述乳酸菌菌株的组合物由以下所组成：
经分离且去活性的乳酸菌菌株，其中该乳酸菌菌株为保藏编号为CCTCC NO：M2011127的唾液乳酸杆菌(Lactobacillus salivarius subsp. salicinius) AP-32菌株，其保藏于中国典型培养物保藏中心；以及
菠萝酶；
其中，所述乳酸菌菌株的含量为2%，所述菠萝酶的含量为3%。
4.如权利要求3所述的乳酸菌菌株的组合物用在制备抑制阴道炎病原菌的组合物的用途，其中所述抑制阴道炎病原菌的组合物为医药组合物或阴道清洁组合物。
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