CN109777768A - 一种脂肪组织清洗液及制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种脂肪组织清洗液及制备方法，每份清洗液包括：PBS缓冲液：500ml；抗生素与PBS缓冲液的混合溶液：10ml；所述混合溶液中抗生素的浓度为4.7～5.3mg/ml。脂肪组织清洗液的制备方法，包括：步骤1、制备抗生素与PBS缓冲液的混合溶液；对于每份混合溶液，称取0.94g～1.06g抗生素，加入40ml PBS缓冲液中充分溶解；之后再将其加入160ml PBS缓冲液，形成4.7～5.3mg/ml的混合溶液；步骤2、量取10ml所述混合溶液，加入到500ml PBS缓冲液中，摇晃均匀。本发明可以有效清洗掉脂肪组织上的血液和油脂，防止脂肪组织在清洗过程中被微生物感染。
Description
技术领域
本发明涉及细胞清洗技术，具体涉及一种脂肪组织清洗液及制备方法。
背景技术
脂肪组织主要由脂肪细胞组成。脂肪细胞质内充满脂肪滴，胞质位于细胞边缘成一薄层，核亦被挤到细胞的边缘，压成扁形。
脂肪组织中的脂肪细胞在现代医学中具有举足轻重的作用。主要的，脂肪组织中包含有脂肪间充质干细胞(Adipose-Derived Stem Cells，ADSC)，这是来源于脂肪组织的多能干细胞，具有自我更新和多向分化能力.并能分泌多种生物活性因子，在组织损伤、修复方面蕴含着广阔的应用前景。近年来，ADSC在抗皮肤老化方面的作用也被证实，其具有广阔的临床应用前景。
在脂肪组织离体之后，保存和运输之前，需要对脂肪组织上的血液、油脂等清洗干净，保证脂肪组织细胞的抗菌能力和存活率，方便对脂肪细胞进行后续的医学实验和应用效果。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明公开了一种脂肪组织清洗液及制备方法。
本发明所采用的技术方案如下：
一种脂肪组织清洗液，每份清洗液包括：
PBS缓冲液：500ml；
抗生素与PBS缓冲液的混合溶液：10ml；
所述混合溶液中抗生素的浓度为4.7～5.3mg/ml。
优选的：每份清洗液包括：
PBS缓冲液：500ml；
抗生素与PBS缓冲液的混合溶液：10ml；
所述混合溶液中抗生素的浓度为4.9～5.1mg/ml。
优选的：所述抗生素为氨基糖苷类抗生素。更优选的：所述氨基糖苷类抗生素为链霉素、庆大霉素或者卡那霉素。更优选的：所述氨基糖苷类抗生素为庆大霉素。更优选的：所述庆大霉素为庆大霉素的硫酸盐制剂。
氨基糖苷类抗生素：氨基糖苷类抗生素(Aminoglycosides)是由氨基糖与氨基环醇通过氧桥连接而成的苷类抗生素，其对于细菌的作用主要是抑制细菌蛋白质的合成，妨碍初始复合物的合成，诱导细菌合成错误蛋白以及阻抑已合成蛋白的释放，从而导致细菌死亡。
庆大霉素的硫酸盐制剂为硫酸庆大霉素，硫酸庆大霉素该品为氨基糖甙类广谱抗生素，对多种革兰阴性菌及阳性菌都具有抑菌和杀菌作用。对绿脓杆菌、产气杆菌、肺炎杆菌、沙门氏菌属、大肠杆菌及变形杆菌等革兰阴性菌和金葡菌等作用较强。
根据如上所述的脂肪组织清洗液的制备方法，包括：
步骤1、制备抗生素与PBS缓冲液的混合溶液；对于每份混合溶液，称取0.94g～1.06g抗生素，加入40ml PBS缓冲液中充分溶解；之后用0.22μm滤器过滤，再将其加入160mlPBS缓冲液，形成4.7～5.3mg/ml的混合溶液；
步骤2、量取10ml所述混合溶液，加入到500ml PBS缓冲液中，摇晃均匀，置于4℃的环境中保存。
根据如上所述的脂肪组织清洗液的制备方法，包括：
步骤1、制备抗生素与PBS缓冲液的混合溶液；对于每份混合溶液，称取0.98g～1.02g抗生素，加入40ml PBS缓冲液中充分溶解；之后用0.22μm滤器过滤，再将其加入160mlPBS缓冲液，形成4.9～5.1mg/ml的混合溶液；
步骤2、量取10ml所述混合溶液，加入到500ml PBS缓冲液中，摇晃均匀，置于4℃的环境中保存。
以上制备步骤均需在无菌环境中操作。
本发明的有益效果如下：
本发明提供了一种抗生素与PBS缓冲液组成的脂肪组织清洗液，可以有效清洗掉脂肪组织上的血液和油脂。清洗液中的PBS缓冲液可以在冲洗中保证脂肪组织的活性，而抗生素成分则可以有效提高冲洗过程的抗菌性，防止脂肪组织在清洗过程中被微生物感染。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整的描述。
以下实施例中所使用的脂肪组织取自选取2017年9月～2018年1月某医院实施外科手术的正常体重患者。年龄20～40岁，身体健康，无其他急慢性疾病。对患者充分告知情况并取得允许后术中开腹时切取皮下脂肪组织。
实施例1～3均是制作了一份清洗液，也可以根据比例制作不到一份(如半份、四分之一份等)清洗液或者多份清洗液。实施例1～3的清洗液组份见表1
表1
上述实施例4～6中的脂肪组织清洗液的制备方法，具体包括以下步骤：
步骤1、制备抗生素与PBS缓冲液的混合溶液；对于每份混合溶液，按照实施例的顺序，在三次实施例中分别称取1g、0.94g和1.06g的硫酸庆大霉素，加入40ml PBS缓冲液中充分溶解；之后用0.22μm滤器过滤，再加入160ml PBS缓冲液，在三次实施例中依次形成5mg/ml、4.7mg/ml和5.3mg/ml的混合溶液；
步骤2、量取10ml所述混合溶液，加入到500mlPBS缓冲液中，拧紧瓶盖，摇晃均匀，置于4℃的环境中保存。
设置对照例1，检验脂肪组织清洗液对于保证脂肪细胞活性上的效果。
对照例1的具体实施步骤是：
步骤A、取四组脂肪组织，每组100份；取三组分别由实施例1～3所述的组份制成的清洗液，每组100份，取一组生理盐水，100份。
步骤B、分别用三组清洗液冲洗第一组至第三组脂肪组织3～5min。用生理盐水冲洗第四组脂肪组织3～5min。
步骤C、将冲洗后的脂肪组织进行培养、观察脂肪组织细胞的培养情况，计数活细胞比例。
对照例1的结果见表2：
表2
| 生理盐水 | 实施例1清洗液 | 实施例2清洗液 | 实施例3清洗液 | |
| 运输总数 | 100 | 100 | 100 | 100 |
| 成活总数 | 46 | 96 | 93 | 92 |
| 成活率 | 46％ | 96％ | 93％ | 92％ |
如表2所示，脂肪组织通过清洗液清洗之后，可以通过其抗菌作用，保证脂肪细胞的活性。其结果均比单纯使用生理盐水清洗的存活率高。其中实施例1中的条件为最优的组份配置比例。
实施例4～6均是制作了一份清洗液，也可以根据比例制作不到一份(如半份、四分之一份等)清洗液或者多份清洗液。实施例4～6的清洗液组份见表3。
表3
上述实施例1～3中的脂肪组织清洗液的制备方法，具体包括以下步骤：
步骤1、制备抗生素与PBS缓冲液的混合溶液；对于每份混合溶液，按照实施例的顺序，在三次实施例中分别称取1g、0.98g和1.02g的链霉素，加入40ml PBS缓冲液中充分溶解；之后用0.22μm滤器过滤，再加入160ml PBS缓冲液，在三次实施例中依次形成5mg/ml、4.9mg/ml和5.1mg/ml的混合溶液；
步骤2、量取10ml所述混合溶液，加入到500mlPBS缓冲液中，拧紧瓶盖，摇晃均匀，置于4℃的环境中保存。
设置对照例2，检验脂肪组织清洗液对于保证脂肪细胞活性上的效果。
对照例2的具体实施步骤是：
步骤A、取四组脂肪组织，每组100份；取三组分别由实施例1～3所述的组份制成的清洗液，每组100份，取一组生理盐水，100份。
步骤B、分别用三组清洗液冲洗第一组至第三组脂肪组织3～5min。用生理盐水冲洗第四组脂肪组织3～5min。
步骤C、将冲洗后的脂肪组织进行培养、观察脂肪组织细胞的培养情况，计数活细胞比例。
对照例2的结果见表4：
表4
如表2所示，脂肪组织通过清洗液清洗之后，可以通过其抗菌作用，保证脂肪细胞的活性。其结果均比单纯使用生理盐水清洗的存活率高。其中实施例4中的条件为最优的组份配置比例。
以上描述是对本发明的解释，不是对发明的限定，本发明所限定的范围参见权利要求，在不违背本发明的基本结构的情况下，本发明可以作任何形式的修改。
Claims (8)
1.一种脂肪组织清洗液，其特征在于，每份清洗液包括：
PBS缓冲液：500ml；
抗生素与PBS缓冲液的混合溶液：10ml；
所述混合溶液中抗生素的浓度为4.7～5.3mg/ml。
2.根据权利要求1所述的脂肪组织清洗液，其特征在于：每份清洗液包括：
PBS缓冲液：500ml；
抗生素与PBS缓冲液的混合溶液：10ml；
所述混合溶液中抗生素的浓度为4.9～5.1mg/ml。
3.根据权利要求1或者2所述的脂肪组织清洗液，其特征在于：所述抗生素为氨基糖苷类抗生素。
4.根据权利要求3所述的脂肪组织清洗液，其特征在于：所述氨基糖苷类抗生素为链霉素、庆大霉素或者卡那霉素。
5.如权利要求4所述的脂肪组织清洗液，其特征在于：所述氨基糖苷类抗生素为庆大霉素。
6.如权利要求5所述的脂肪组织清洗液，其特征在于：所述庆大霉素为庆大霉素的硫酸盐制剂。
7.根据权利要求1所述的脂肪组织清洗液的制备方法，其特征在于包括：
步骤1、制备抗生素与PBS缓冲液的混合溶液；对于每份混合溶液，称取0.94g～1.06g抗生素，加入40ml PBS缓冲液中充分溶解；之后用0.22μm滤器过滤，再将其加入160ml PBS缓冲液，形成4.7～5.3mg/ml的混合溶液；
步骤2、量取10ml所述混合溶液，加入到500ml PBS缓冲液中，摇晃均匀，置于4℃的环境中保存。
8.根据权利要求2所述的脂肪组织清洗液的制备方法，其特征在于包括：
步骤1、制备抗生素与PBS缓冲液的混合溶液；对于每份混合溶液，称取0.98g～1.02g抗生素，加入40ml PBS缓冲液中充分溶解；之后用0.22μm滤器过滤，再将其加入160ml PBS缓冲液，形成4.9～5.1mg/ml的混合溶液；
步骤2、量取10ml所述混合溶液，加入到500ml PBS缓冲液中，摇晃均匀，置于4℃的环境中保存。
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| 陈霞等: ""人眼袋脂肪组织来源间充质干细胞的分离及生物学特性观察"", 《延安大学学报（医学科学版）》 * |
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