CN109745316A - 用于治疗癌症的联合治疗 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及包含人组蛋白甲基转移酶EZH2的抑制剂以及一种或多种其它治疗试剂(尤其是抗癌试剂诸如波尼松)的组合物，以及用于治疗癌症的向有需求的主体施用的联合治疗的方法。

Description

用于治疗癌症的联合治疗
本申请是申请日为2013年4月12日，申请号为201380030860.3，发明名称为“用于治疗癌症的联合治疗”的中国专利申请的分案申请。
关联申请
本申请要求享有2012年4月13日提交的美国临时申请61/624,194以及2013年3月14日提交的美国临时申请61/785,169的优先权和权益，它们的全部内容都通过引用并入本申请中。
技术领域
本发明涉及组合物，其包括人组蛋白甲基转移酶EZH2的抑制剂、PRC2复合物的催化亚基(其催化组蛋白H3上的赖氨酸27(H3-K27)的单甲基化至三甲基化)，和一种或多种其它治疗试剂尤其是抗癌试剂，以及用于治疗癌症的联合治疗的方法。
背景技术
对于癌症的联合治疗疗法已经变得更为常见，某种程度上这是由于通过多种途径攻击疾病的被感知到的优点。虽然在过去的几十年间许多有效的联合治疗疗法已被验证，但考虑到每年由于癌症导致的持续的高死亡人数，对于验证用于抗癌治疗的有效治疗疗法仍存在持续的需求。
发明内容
一方面，本发明描述了一种组合物，其包含具有下面化学式(IIa)的化合物和一种或多种其它治疗试剂或其药学上可接受的盐或酯。
式(IIa)的化合物可以包括一个或多个以下特征；
Ra和Rb中的每一个都独立地为H或C1-C6烷基；
Ra和Rb连同其连接的N原子为具有0或1个额外的杂原子的4至7元杂环烷基环，C1-C6烷基和4至12元(例如，4至7元)杂环烷基环任选地被一个或多个-Q3-T3取代。
Q3是键或者取代的或未取代的C1-C3烷基连接物。
T3是H、卤素、4至7元杂环烷基、C1-C3烷基、ORd、COORd、-S(O)2Rd或–NRdRe，Rd和Re中的每一个都独立地是H或C1-C6烷基
R7是C1-C6烷基、C3-C8环烷基或4至12元(例如，4至7元)杂环烷基，其每个都任选地被一个或多个-Q5-T5取代。例如R7不为H。
R7是4至7元杂环烷基，其任选地被一个或多个-Q5-T5取代。
R7是哌啶基、四氢吡喃、环戊基或环己基，其每个都任选地被一个-Q5-T5取代。
T5是H、卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基或4至12元(例如，4至7元)杂环烷基。
Q5是键并且T5是C1-C6烷基、C3-C8环烷基或4至12元(例如，4至7元)杂环烷基。
Q5是CO、S(O)2、或NHC(O)；并且T5是C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C8环烷基或4至12元(例如，4至7元)杂环烷基。
Q5是C1-C3烷基连接物并且T5是H或C6-C10芳基。
Q5是C1-C3烷基连接物并且T5是C3-C8环烷基，4至7元杂环烷基或者S(O)qRq。
R7是环戊基或环己基，其每种都任选地被一个-Q5-T5取代。
Q5是NHC(O)并且T5是C1-C6烷基或C1-C6烷氧基。
R7是异丙基。
R2和R4的每一个都独立地为H或C1-C6烷基，其任选地被氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基或C6-C10芳基取代。
R8是H、甲基或乙基。
R8是甲基。
R8是乙基。
R8是4至7元杂环烷基，例如，四氢吡喃。
本发明描述了一种组合物，其包含选自表1的化合物或其药学上可接受的盐或酯和一种或多种其它治疗试剂的化合物。
本发明描述了一种组合物，其包含化合物44
或其药学上可接受的盐或酯和一种或多种其它治疗试剂。
在本发明的该方面和其它方面，在一个实施方式中，其它治疗试剂是抗癌试剂。
在本发明的该方面和其它方面，在一个实施方式中，其它治疗试剂是糖皮质激素。
在本发明的该方面和其它方面，在一个实施方式中，其它治疗试剂选自泼尼松(prednisone)、泼尼松龙(prednisolone)、环磷酰胺、长春新碱、阿霉素(doxorubicin，又称多柔比星)、马磷酰胺、顺铂、阿糖胞苷(AraC)、依维莫司(everolimus)、地西他滨(decitabine)、地塞米松(dexamethasone)及其类似物、衍生物或其组合。
在本发明的该方面和其它方面，在一个实施方式中，其它治疗试剂是泼尼松或其类似物或衍生物。
本发明还提供了药物组合物，其包含选自在本文中公开的式(IIa)的那些化合物或其药学上可接受的盐，以及一种或多种治疗试剂和药学上可接受的载体。
本发明还提供了药物组合物，其包含选自表I的化合物，一种或多种其它治疗试剂或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。
本发明还提供了药物组合物，其包含选自在本文中公开的式(IIa)的那些化合物或其药学上可接受的盐，以及一种或多种其它治疗试剂和药学上可接受的载体。
本发明的另一个方面是通过向需要其的主体施用药学有效剂量的组合物来治疗或预防疾病的方法，所述组合物包含式(IIa)化合物或其药学上可接受的盐，以及一种或多种额外的治疗试剂。本发明的疾病可以通过调整组蛋白或其它蛋白的甲基化状态而被影响、治疗或预防。例如，该疾病是癌症、癌前状态、或者神经性疾病。优选地，淋巴瘤是非霍奇金淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤或弥漫大B细胞淋巴瘤。可选地，白血病是慢性骨髓性白血病(CML)。癌前状态是，例如，骨髓增生异常综合征(MDS，曾被认为是白血病前期)。
本发明的适用主体包括已被诊断为具有癌症或癌前状态的病症或者具有发展癌症或癌前状态危险的任何人类主体。本发明的主体包括表达突变体EZH2的任何人类主体。例如，突变体EZH2包含一个或多个突变，其中该突变是置换突变、点突变、无义突变、错义突变、缺失或插入。本发明的突变体EZH2可以包含如SEQ ID NO:6所限定的底物袋结构域(substrate pocket domain)内的突变。突变体EZH2可能具有在氨基酸Y641处的置换。优选地，突变体EZH2具有以下突变中的一种：在SEQ ID NO:1的氨基酸位点641处，苯丙氨酸(F)对野生型残基酪氨酸(Y)的置换(Y641F)；在SEQ ID NO:1的氨基酸位点641处，组氨酸(H)对野生型残基酪氨酸(Y)的置换(Y641H)；在SEQ ID NO:1的氨基酸位点641处，天冬酰胺(N)对野生型残基酪氨酸(Y)的置换(Y641N)；在SEQ ID NO:1的氨基酸位点641处，丝氨酸(S)对野生型残基酪氨酸(Y)的置换(Y641S)；以及在SEQ ID NO:1的氨基酸位点641处，半胱氨酸(C)对野生型残基酪氨酸(Y)的置换(Y641C)。
EZH2的其它突变可能包括但不仅限于：在SEQ ID NO:1的氨基酸位点677处，甘氨酸(G)对野生型残基丙氨酸(A)的置换(A677G)；在SEQ ID NO:1的氨基酸位点687处，缬氨酸(V)对野生型残基丙氨酸(A)的置换(A687V)；在SEQ ID NO:1的氨基酸位点674处，甲硫氨酸(M)对野生型残基缬氨酸(V)的置换(V674M)；在SEQ ID NO:1的氨基酸位点685处，组氨酸(H)对野生型残基精氨酸(R)的置换(R685H)；在SEQ ID NO:1的氨基酸位点685处，半胱氨酸(C)对野生型残基精氨酸(R)的置换(R685C)；在SEQ ID NO:3的氨基酸位点322处丝氨酸(S)对野生型残基天冬酰胺(N)的置换(N322S)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点288处谷氨酰胺(Q)对野生型残基精氨酸(R)的置换(R288Q)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点573处异亮氨酸(I)对野生型残基苏氨酸(T)的置换(T573I)，在SEQ ID NO:3号的氨基酸位点664处谷氨酸(E)对野生型残基天冬氨酸(D)的置换(D664E)，在SEQ ID NO:5的氨基酸位点458处谷氨酰胺(Q)对野生型残基精氨酸(R)的置换(R458Q)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点249处赖氨酸(K)对野生型残基谷氨酸(E)的置换(E249K)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点684处半胱氨酸(C)对野生型残基精氨酸(R)的置换(R684C)，在SEQ ID NO:21的氨基酸位点628处组氨酸(H)对野生型残基精氨酸(R)的置换(R628H)，在SEQ ID NO:5的氨基酸位点501处组氨酸(H)对野生型残基谷氨酰胺(Q)的置换(Q501H)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点192处天冬酰胺(N)对野生型残基天冬氨酸(D)的置换(D192N)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点664处缬氨酸(V)对野生型残基天冬氨酸(D)的置换(D664V)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点704处亮氨酸(L)对野生型残基缬氨酸(V)的置换(V704L)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点132处丝氨酸(S)对野生型残基脯氨酸(P)的置换(P132S)，在SEQ ID NO:21的氨基酸位点669处赖氨酸(K)对野生型残基谷氨酸(E)的置换(E669K)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点255处苏氨酸(T)对野生型残基丙氨酸(A)的置换(A255T)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点726处缬氨酸(V)对野生型残基谷氨酸(E)的置换(E726V)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点571处酪氨酸(Y)对野生型残基半胱氨酸(C)的置换(C571Y)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点145处半胱氨酸(C)对野生型残基苯丙氨酸(F)的置换(F145C)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点693处苏氨酸(T)对野生型残基天冬酰胺(N)的置换(N693T)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点145处丝氨酸(S)对野生型残基苯丙氨酸(F)的置换(F145S)，在SEQ ID NO:21的氨基酸位点109处组氨酸(H)对野生型残基谷氨酰胺(Q)的置换(Q109H)，在SEQ ID NO:21的氨基酸位点622处半胱氨酸(C)对野生型残基苯丙氨酸(F)的置换(F622C)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点135处精氨酸(R)对野生型残基甘氨酸(G)的置换(G135R)，在SEQ ID NO:5的氨基酸位点168处谷氨酰胺(Q)对野生型残基精氨酸(R)的置换(R168Q)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点159处精氨酸(R)对野生型残基甘氨酸(G)的置换(G159R)，在SEQ ID NO:5的氨基酸位点310处半胱氨酸(C)对野生型残基精氨酸(R)的置换(R310C)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点561处组氨酸(H)对野生型残基精氨酸(R)的置换(R561H)，在SEQ ID NO:21的氨基酸位点634处组氨酸(H)对野生型残基精氨酸(R)的置换(R634H)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点660处精氨酸(R)对野生型残基甘氨酸(G)的置换(G660R)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点181处半胱氨酸(C)对野生型残基酪氨酸(Y)的置换(Y181C)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点297处精氨酸(R)对野生型残基组氨酸(H)的置换(H297R)，在SEQ ID NO:21的氨基酸位点612处丝氨酸(S)对野生型残基半胱氨酸(C)的置换(C612S)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点694处酪氨酸(Y)对野生型残基组氨酸(H)的置换(H694Y)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点664处丙氨酸(A)对野生型残基天冬氨酸(D)的置换(D664A)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点150处苏氨酸(T)对野生型残基异亮氨酸(I)的置换(I150T)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点264处精氨酸(R)对野生型残基异亮氨酸(I)的置换(I264R)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点636处亮氨酸(L)对野生型残基脯氨酸(P)的置换(P636L)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点713处苏氨酸(T)对野生型残基异亮氨酸(I)的置换(I713T)，在SEQ ID NO:5的氨基酸位点501处脯氨酸(P)对野生型残基谷氨酰胺(Q)的置换(Q501P)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点243处谷氨酰胺(Q)对野生型残基赖氨酸(K)的置换(K243Q)，在SEQ ID NO:5的氨基酸位点130处天冬氨酸(D)对野生型残基谷氨酸(E)的置换(E130D)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点509处甘氨酸(G)对野生型残基精氨酸(R)的置换(R509G)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点566处组氨酸(H)对野生型残基精氨酸(R)的置换(R566H)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点677处组氨酸(H)对野生型残基天冬氨酸(D)的置换(D677H)，在SEQ ID NO:5的氨基酸位点466处天冬酰胺(N)对野生型残基赖氨酸(K)的置换(K466N)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点78处组氨酸(H)对野生型残基精氨酸(R)的置换(R78H)，在SEQ ID NO:6的氨基酸位点1处甲硫氨酸(M)对野生型残基赖氨酸(K)的置换(K6M)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点538处亮氨酸(L)对野生型残基丝氨酸(S)的置换(S538L)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点149处谷氨酰胺(Q)对野生型残基亮氨酸(L)的置换(L149Q)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点252处缬氨酸(V)对野生型残基亮氨酸(L)的置换(L252V)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点674处缬氨酸(V)对野生型残基亮氨酸(L)的置换(L674V)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点656处缬氨酸(V)对野生型残基丙氨酸(A)的置换(A656V)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点731处天冬氨酸(D)对野生型残基丙氨酸(A)的置换(Y731D)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点345处苏氨酸(T)对野生型残基丙氨酸(A)的置换(A345T)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点244处天冬氨酸(D)对野生型残基丙氨酸(A)的置换(Y244D)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点576处色氨酸(W)对野生型残基半胱氨酸(C)的置换(C576W)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点640处赖氨酸(K)对野生型残基天冬酰胺(N)的置换(N640K)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点675处赖氨酸(K)对野生型残基天冬酰胺(N)的置换(N675K)，在SEQ ID NO:21的氨基酸位点579处酪氨酸(Y)对野生型残基天冬氨酸(D)的置换(D579Y)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点693处异亮氨酸(I)对野生型残基天冬酰胺(N)的置换(N693I)，以及在SEQ ID NO:3的氨基酸位点693处赖氨酸(K)对野生型残基天冬酰胺(N)的置换(N693I)。
EZH2的其它突变可以包括：在SEQ ID NO:3、5或21的氨基酸位点730、391、461、441、235、254、564、662、715、405、685、64、73、656、718、374、592、505、730、或363处，或者在编码SEQ ID NO:3、5或21的核酸序列的相应的核苷酸位点上的移码突变；在SEQ ID NO:3、5或21的氨基酸位点148和149处的谷氨酸(E)和亮氨酸(L)的缺失突变，或者在SEQ ID NO:3、5或21的氨基酸位点733、25、317、62、553、328、58、207、123、63、137、或60处的无义突变。
本发明的主体可能对任意一种或多种其它治疗试剂或者在本文中描述的任何化合物有抗药性。例如，该主体可能对EZH抑制剂或泼尼松有抗药性。
本发明描述了一种抑制癌细胞增殖的方法，其包包括所述的癌细胞接触一种组合物，该组合物包含任意式(IIa)的化合物或其药学上可接受的盐，以及一种或多种额外的治疗试剂。抑制癌细胞增殖包括延缓癌细胞生长、诱导细胞死亡、减少癌细胞活性、抑制或延缓肿瘤生长或者减小肿瘤的尺寸。
本发明描述了联合治疗的方法，其中式(IIa)的任意化合物或其药学上可接受的盐，以及一种或多种其他治疗试剂被同时或顺序地施用。例如，式(IIa)的任意化合物或其药学上可接受的盐可在施用一种或多种其它治疗试剂之前施用。例如，式(IIa)的任意化合物或其药学上可接受的盐可以在组合物的施用之前施用，该组合物包含式(IIa)的任意化合物或其药学上可接受的盐，以及一种或多种其他治疗试剂。同时或顺序施用式(IIa)的任意化合物和/或每种治疗试剂可以通过任意合适的途径实现，其包括但不限于口服途径、静脉注射途径、肌肉注射和通过黏膜组织的直接吸收。治疗试剂可以通过相同或不同的途径施用。
本发明所描述的联合治疗的方法可能导致协同效应，其中化合物或者其它治疗试剂结合的效果强于任意化合物或其它治疗试剂作为单个试剂施用时带来的效果的总和。协同作用也可以是任意化合物或其它治疗试剂作为单个试剂施用时所不能达到的效果。协同作用可以包括但不限于通过减小肿瘤尺寸、抑制肿瘤生长或增加主体存活率来治疗癌症的效果。协同作用还可以包括降低癌细胞活性、诱导癌细胞死亡以及抑制或延迟癌细胞生长。
本发明的组合物可以以0.01mg/kg每天至大约1000mg/kg每天的剂量施用。式(IIa)的任意化合物或其药学上可接受的盐可以以0.01mg/kg每天至大约1000mg/kg每天的剂量施用。任意其它治疗试剂可以以0.01mg/kg每天至大约1000mg/kg每天的剂量施用。
除非另有限定，本文中使用的所有技术和科学术语均具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所了解的相同含义。在说明书中，除非上下文明确地另行指示，单数形式也包括复数。虽然与在本文中所描述的类似或等价的方法和材料可以用在本发明的实施或测试中，但是合适的方法和材料在下文描述。本文中所提及的所有出版物、专利申请以及其它参考文献通过引用并入本文中。本文中所引用的参考文献不被认可为所要求保护的发明的现有技术。在抵触的情况下，以本说明书(包括定义)为准。此外，所述的材料、方法和实施例仅为阐释性的，而并不意在限制。
通过下面详细描述和权利要求，本发明的其它特点及优势将是显而易见的。
附图说明
图1是详细描述用于测定联合治疗对于细胞活性的影响的体外治疗程序的示意图。(A)在施用化合物44和CHOP(环磷酰胺、阿霉素、长春新碱和泼尼松龙)的成分前施用化合物44。(B)在施用CHOP成分前施用化合物44。(C)在施用化合物44和CHOP成分前施用CHOP的成分。4天后，测定细胞活性。
图2是体外测定单独或联合使用化合物44和CHOP成分治疗后的癌细胞活性的四副图。WSU-DLCL2细胞如图1A所示地处理。首先用多种浓度的化合物44处理细胞。4天后，使用多种浓度的化合物44与(A)Mafofsamide(环磷酰胺代谢物)、(B)阿霉素、(C)长春新碱或(D)泼尼松龙(泼尼松代谢物)的结合来处理细胞。使用DMSO处理对照细胞。对于每种化合物44浓度，将细胞活性对在DMSO处理的细胞活性的百分比进行标准化。
图3是测定在多种治疗程序后的癌细胞活性的三幅图。使用浓度增加的泼尼松龙和化合物44处理WSU-DCLC2细胞。使用化合物44和泼尼松龙按照在(A)图1A、(B)图1B或(C)图1C中的治疗程序处理细胞。细胞活性对DMSO/DMSO处理的样品进行标准化。
图4是测定对具有不同EZH2突变的细胞系内用泼尼松龙和化合物44处理后的癌细胞活性的三幅图。如图1A所示，并且使用增加浓度的泼尼松龙和化合物44处理细胞。细胞活性对DMSO/DMSO处理的样品进行标准化。(A)WSU-DLCL2细胞表达Y641F突变并且对EZH2抑制剂敏感。(B)RL细胞表达Y641N突变，其对EZH2抑制剂和泼尼松龙具有抗性。(C)OCI-LY19是在Y641处的野生型，并且对泼尼松龙显示出敏感性，但对化合物44不显敏感性或者对化合物44加上泼尼松龙的结合不显示增加的敏感性。
图5是显示化合物44和CHOP成分体内一起施用的一组药代动力学曲线的五幅图。向BALB/c小鼠单次经口服施用化合物44和CHOP成分。在施用后0-24小时的多个时间点上测定血浆中化合物44的浓度(ng/mL)。环磷酰胺以30mg/kg经腹腔内注射来施用。长春新碱以0.375mg/kg经静脉注射施用。阿霉素以2.475mg/kg经静脉注射施用。泼尼松龙以0.15mg/kg经口服施用。化合物44以225mg/kg经口服施用。
图6是证明化合物44和CHOP施用对SUDHL6异种移植模型中肿瘤生长和存活率的影响的两幅图。使用1x107SUDHL6人淋巴瘤细胞对无胸腺裸鼠皮下注射。肿瘤尺寸达到大约120mm3后，在28天内以所示的剂量一日三次(TID)或一日两次(BID)施用化合物44。在第1天和第8天向每天两次接受225mg/kg(225mg/kg BID和CHOP)的小鼠施用CHOP(环磷酰胺、长春新碱、阿霉素和泼尼松)，其。对照小鼠不接受任何化合物44(载体)或仅接受CHOP(CHOP)。每周测量两次肿瘤体积。当肿瘤体积达到2000mm3或首剂量60天后，对动物执行安乐死。(A)对于肿瘤生长延迟分析，通过每周两次测定肿瘤60天或直至肿瘤达到2000mm3，计算每个治疗组的肿瘤体积中位数。(B)Kaplan-meier曲线描述了小鼠的存活率。
图7是证明化合物44和CHOP的施用在WSU-DLCL2异种移植模型中对于肿瘤生长和存活率的影响的三幅图。使用1x107WSU-DLCL2人淋巴瘤细胞对SCID小鼠皮下注射。肿瘤尺寸达到大约120mm3后，在28天内以所示的剂量一日三次(TID)、一日两次(BID)或一日一次(QD)施用化合物44。在第1天和第22天向每天两次接受225mg/kg(225mg/kg BID和CHOP)的小鼠施用CHOP(环磷酰胺、长春新碱、阿霉素和泼尼松)。对照小鼠不接受任何化合物44(载体)或仅接受CHOP(CHOP)。肿瘤体积每周测量两次。首剂量28天后，对动物执行安乐死。(A)通过测量疗程中的平均肿瘤体积来确定疗效。(B)在第28天来自小鼠的血浆内，在施用前(谷)和施用后三小时时(峰)，测定化合物44的浓度(ng/mL)。(C)从第28天施用三个小时后的来自小鼠的肿瘤组织测定化合物44的浓度(ng/g)。
图8是蛋白质印迹法(蛋白质印迹法)分析和显示来自WSU-DLCL2异种移植模型的肿瘤样品的组蛋白甲基化状态的图。注射28天后收集肿瘤并提取组蛋白。(A)蛋白质印迹法使用特异性识别组氨酸H3的三甲基化的赖氨酸27(H3K27me3)和总的组氨酸H3蛋白质的抗体来检测。(B)通过ELISA测定肿瘤的甲基化状态。检测H3K27的三甲基化并对总的组氨酸H3水平进行标准化。
图9是证明化合物44和COP的施用在SUDHL10异种移植模型中对于肿瘤生长和存活率的影响的四幅图。使用1x107SUDHL10人淋巴瘤细胞对SCID小鼠皮下注射。肿瘤尺寸达到大约120mm3后，在28天内以所示的剂量一日两次(BID)施用化合物44。在第1天和第22天向接受每天两次250mg/kg(250mg/kg BID和COP)的小鼠施用COP(环磷酰胺、长春新碱和泼尼松)。对照小鼠不接受任何化合物44(载体)或仅接受COP(COP)。肿瘤体积每周测量两次。(A)通过测量疗程中的平均肿瘤体积来确定疗效。(B)在首剂量后28天，小鼠被执行安乐死后，测定平均肿瘤重量。(C)对于肿瘤生长延迟分析，通过每周两次测定肿瘤持续60天或直至肿瘤达到2000mm3计算每个治疗组的平均肿瘤体积和SEM。(D)Kaplan-meier曲线描述了处理后的小鼠的存活率。
图10是显示在SUDHL10异种移植模型中的COP和化合物44的施用后的药代动力学和药效学特性的四幅图。带肿瘤的小鼠在治疗28天后被执行安乐死，并且收集组织。(A)在第28天来自小鼠的血浆内，在施用前(谷)和施用后三小时时(峰)，使用LC-MS/MS测定化合物44的浓度(ng/mL)。使用ELISA测定来自带肿瘤的小鼠的多种组织的甲基化状态：(B)肿瘤，(C)脾，以及(D)骨髓。检测H3K27的三甲基化并对总的组蛋白H3水平位进行标准化。
具体实施方式
本发明基于EZH2组蛋白甲基转移酶抑制剂和其它抗癌试剂可以联合使用以治疗特定肿瘤并取得相对于单独使用EZH2组蛋白甲基转移酶抑制剂和抗癌试剂时较好的效果的发现。相应地，本发明提供了一种组合物，其包含EZH2组蛋白甲基转移酶抑制剂和一种或多种其它治疗试剂，以及它们用以治疗疾病的方法，可以通过调整组蛋白或其它蛋白质(例如癌蛋白)的甲基化状态来影响其过程。在一个特定的实施方式中，本发明描述了一种组合物，其包含式(IIa)的化合物和泼尼松。本发明还包括用于联合治疗以治疗癌症(例如滤泡性淋巴瘤(FL)和弥漫大B细胞淋巴瘤(DCLBL))的方法，其包括EZH2组蛋白甲基转移酶抑制剂以及一种或多种治疗试剂，例如(IIa)的化合物和泼尼松。特别地，本发明的方法对于治疗或预防癌症或者抑制癌细胞增殖有用。
EZH2是一种组蛋白甲基转移酶，它是催化组蛋白H3上的赖氨酸27(H3-K27)的单-至三-甲基化的PRC2复合体的催化亚基。组蛋白H3-K27的三甲基化是一种抑制靠近组蛋白修饰位点的特定基因的转录的机制。这种三甲基化已知是一种在癌症(例如前列腺癌(例如见美国专利申请2003/0175736，在此通过引用并入其全文))中具有改变的表达的癌症标记。其它研究提供了EZH2的失调表达、转录抑制和瘤性转化之间的功能性关联的证据。Varambally et al.(2002)Nature419(6907):624-9Kleer et al.(2003)Proc Natl AcadSci USA 100(20):11606-11.
本发明的一个方面涉及通过向表达突变型EZH2的主体施用药学上有效剂量的EZH2抑制剂和一种或多种其他治疗试剂以治疗或减轻主体的癌症或癌前状态的症状的方法。本发明的突变型EZH2涉及突变的EZH2多肽或编码突变型EZH2多肽的核酸序列。在特定的实施方式中，突变型EZH2包含一种或多种如SEQ ID NO:6所限定的底物袋结构域上的突变。例如，该突变可能是置换突变、点突变、无义突变、错义突变、缺失或插入
人EZH2核酸和多肽已在先前描述。例如见Chen et al.(1996)Genomics 38:30-7[746个氨基酸]；Swiss-Prot登录号Q15910[746个氨基酸]；GenBank Accession Nos.NM_004456和NP_004447(异形体751个氨基酸])；以及GenBank Accession Nos.NM_152998和NP_694543(异形体b[707个氨基酸])，在此通过引用将其全部内容合并于本文中。
基于核受体结合SET域蛋白1(NSD1)的A链的部分EZH2蛋白的结构模型在下文中给出。该模型对应SEQ ID NO:1的EZH2序列的氨基酸残基533-732。
本结构模型的对应的氨基酸序列在下文中给出。底物口袋域中的残基用下划线示出。SET域中的残基用斜体示出。
SCPCVIAQNFCEKFCQCSSECQNRFPGCRCKAQCNTKQCPCYLAVRECDPDLCLTCGAADHWDSKNVSCKNCSIQRGSKKHLLLAPSDVAGWGIFIKDPVQKNEFISEY 641CGEIISQDEADRRGKVYDKYMCSFLFNLNNDFV 6 74 VDA 677TRKGNKIR 685 FA 687NHSVNPNCYAKVMMVNGDHRIGIFAKRAIQTGEELFFDYRYSQAD(SEQ ID NO:6)
EZH2的催化位点被认为留在被认为在于作为SET域已知的蛋白质的保存区域。EZH2的SET域的氨基酸序列通过以下Swiss-Prot登录号Q15910的部分序列跨越氨基酸残基613-726(SEQ ID NO:1)给出：
HLLLAPSDVAGWGIFIKDPVQKNEFISEYCGEIISQDEADRRGKVYDKYMCSFLFNLNNDFVVDATRKGNKIRFANHSVNPNCYAKVMMVNGDHRIGIFAKRAIQTGEELFFDY(SEQ ID NO:7)。
在SEQ ID NO:7中以下划线示出的酪氨酸(Y)残基是Swiss-Prot登录号Q15910(SEQ ID NO:1)内的Tyr641(Y641)。
GenBank登录号NP_004447(SEQ ID NO:3)的SET域跨越氨基酸残基618-731，并且与SEQ ID NO:6等同。相当于在SEQ ID NO:7中以下划线示出的Swiss-Prot登录号Q15910的Y641的酪氨酸残基是GenBank登录号NP_004447(SEQ ID NO:3)中的Tyr646(Y646)。
GenBank登录号NP_694543(SEQ ID NO:5)的SET域跨越氨基酸残基574-687，并且与SEQ ID NO:7等同。相当于在SEQ ID NO:7中以下划线示出的Swiss-Prot登录号Q15910的Y641的酪氨酸残基是GenBank登录号NP_694543(SEQ ID NO:5)中的Tyr602(Y602)。
编码GenBank登录号NP_004447的SET域的核苷酸序列是
catctattgctggcaccatctgacgtggcaggctgggggatttttatcaaagatcctgtgcagaaaaatgaattcatctcagaatactgtggagagattatttctcaagatgaagctgacagaagagggaaagtgtatgataaatacatgtgcagctttctgttcaacttgaacaatgattttgtggtggatgcaacccgcaagggtaacaaaattcgttttgcaaatcattcggtaaatccaaactgctatgcaaaagttatgatggttaacggtgatcacaggataggtatttttgccaagagagccatccagactggcgaagagctgttttttgattac
(SEQ ID NO:8)，其中编码Y641的密码子用下划线示出。
出于本申请的目的，人EZH2的氨基酸残基Y641应被理解为涉及酪氨酸残基，该酪氨酸残基是Swiss-Prot登录号Q15910中的Y641或与之相对应。
同样出于本申请的目的，人EZH2的Y641突变体以及相等的EZH2的Y641突变体应被理解为涉及人EZH2，其中对应于野生型人EZH2的Y641的氨基酸残基被除酪氨酸以外的氨基酸取代。
在一个实施方式中，EZH2的Y641突变体的氨基酸序列与野生型人EZH2的氨基酸序列的区别仅在于对应于野生型人EZH2的Y641的单个氨基酸残基被除酪氨酸以外的氨基酸残基替换。
在一个实施方式中，EZH2的Y641突变体的氨基酸序列与野生型人EZH2的氨基酸序列的区别仅在于苯丙氨酸(F)对于对应于野生型人EZH2的Y641的单个氨基酸残基替换。根据该实施方式的EZH2的Y641突变体在本文中被称为Y641F突变体或(等价的)Y641F。
在一个实施方式中，EZH2的Y641突变体的氨基酸序列与野生型人EZH2的氨基酸序列的区别仅在于组氨酸(H)对于对应于野生型人EZH2的Y641的单个氨基酸残基替换。根据该实施方式中的EZH2的Y641突变体在本文中被称为Y641H突变体或(等价的)Y641H。
在一个实施方式中，EZH2的Y641突变体的氨基酸序列与野生型人EZH2的氨基酸序列的区别仅在于天冬酰胺(N)对于对应于野生型人EZH2的Y641的单个氨基酸残基替换。根据该实施方式中的EZH2的Y641突变体在本文中被称为Y641N突变体或(等价的)Y641N。
在一个实施方式中，EZH2的Y641突变体的氨基酸序列与野生型人EZH2的氨基酸序列的区别仅在于丝氨酸(S)对于对应于野生型人EZH2的Y641的单个氨基酸残基替换。根据该实施方式中的EZH2的Y641突变体在本文中被称为Y641S突变体或(等价的)Y641S。
在一个实施方式中，EZH2的Y641突变体的氨基酸序列与野生型人EZH2的氨基酸序列的区别仅在于半胱氨酸(C)对于对应于野生型人EZH2的Y641的单个氨基酸残基替换。根据该实施方式中的EZH2的Y641突变体在本文中被称为Y641C突变体或(等价的)Y641C。
在一个实施方式中，EZH2的A677突变体的氨基酸序列与野生型人EZH2的氨基酸序列的区别仅在于非丙氨酸(以甘氨酸(G)为优选)对于对应于野生型人EZH2的A677的单个氨基酸残基替换。根据该实施方式中的EZH2的A677突变体在本文中被称为A677突变体或(并且以A677G突变体为优选)或者(等价的)A677G。
在一个实施方式中，EZH2的A687突变体的氨基酸序列与野生型人EZH2的氨基酸序列的区别仅在于非丙氨酸(以缬氨酸(V)为优选)对于对应于野生型人EZH2的A687的单个氨基酸残基替换。根据该实施方式中的EZH2的A687突变体在本文中被称为A687突变体或(并且以A687V突变体为优选)或者(等价的)A687V。
在一个实施方式中，EZH2的R685突变体的氨基酸序列与野生型人EZH2的氨基酸序列的区别仅在于非精氨酸(以组氨酸(H)或半胱氨酸(C)为优选)对于对应于野生型人EZH2的R685的单个氨基酸残基替换。根据该实施方式中的EZH2的R685突变体在本文中被称为R685突变体(并且以R685C突变体或R685H突变体)为优选或者(等价的)R685H或R685C。
在一个实施方式中，EZH2的一个突变体的氨基酸序列与野生型人EZH2的氨基酸序列的区别在于其如SEQ ID NO:6所限定的底物袋结构域中的一个或多个氨基酸残基。根据在该实施方式中的EZH2的突变体在本文中被称为EZH2突变体。
其它示例性的氨基酸置换突变包括SEQ ID NO:1的氨基酸位点677、687、674、685或641处的替换，例如但不限于在SEQ ID NO:1的氨基酸位点677处的甘氨酸(G)对野生型残基丙氨酸(A)的置换(A677G)；在SEQ ID NO:1的氨基酸位点687处缬氨酸(V)对野生型残基丙氨酸(A)的置换(A687V)；在SEQ ID NO:1的氨基酸位点674处甲硫氨酸(M)对野生型残基缬氨酸(V)的置换(V674M)；在SEQ ID NO:1的氨基酸位点685处组氨酸(H)对野生型残基精氨酸(R)的置换(R685H)；在SEQ ID NO:1的氨基酸位点685处半胱氨酸(C)对野生型残基精氨酸(R)的置换(R685C)；在SEQ ID NO:1的氨基酸位点641处苯丙氨酸(F)对野生型残基酪氨酸(Y)的置换(Y641F)；在SEQ ID NO:1的氨基酸位点641处组氨酸(H)对野生型残基酪氨酸(Y)的置换(Y641H)；在SEQ ID NO:1的氨基酸位点641处天冬酰胺(N)对野生型残基酪氨酸(Y)的置换(Y641N)；在SEQ ID NO:1的氨基酸位点641处丝氨酸(S)对野生型残基酪氨酸(Y)的置换(Y641S)；或者在SEQ ID NO:1的氨基酸位点641处半胱氨酸(C)对野生型残基酪氨酸(Y)的置换(Y641C)。
本发明的突变还可能包括在SEQ ID NO:3的氨基酸位点322处丝氨酸(S)对野生型残基天冬酰胺(N)的置换(N322S)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点288处谷氨酰胺(Q)对野生型残基精氨酸(R)的置换(R288Q)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点573处异亮氨酸(I)对野生型残基苏氨酸(T)的置换(T573I)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点664处谷氨酸(E)对野生型残基天冬氨酸(D)的置换(D664E)，在SEQ ID NO:5的氨基酸位点458处谷氨酰胺(Q)对野生型残基精氨酸(R)的置换(R458Q)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点249处赖氨酸(K)对野生型残基谷氨酸(E)的置换(E249K)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点684处半胱氨酸(C)对野生型残基精氨酸(R)的置换(R684C)，在SEQ ID NO:21的氨基酸位点628处组氨酸(H)对野生型残基精氨酸(R)的置换(R628H)，在SEQ ID NO:5的氨基酸位点501处组氨酸(H)对野生型残基谷氨酰胺(Q)的置换(Q501H)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点192处天冬酰胺(N)对野生型残基天冬氨酸(D)的置换(D192N)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点664处缬氨酸(V)对野生型残基天冬氨酸(D)的置换(D664V)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点704处亮氨酸(L)对野生型残基缬氨酸(V)的置换(V704L)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点132处丝氨酸(S)对野生型残基脯氨酸(P)的置换(P132S)，在SEQ ID NO:21的氨基酸位点669处赖氨酸(K)对野生型残基谷氨酸(E)的置换(E669K)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点255处苏氨酸(T)对野生型残基丙氨酸(A)的置换(A255T)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点726处缬氨酸(V)对野生型残基谷氨酸(E)的置换(E726V)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点571处酪氨酸(Y)对野生型残基半胱氨酸(C)的置换(C571Y)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点145处半胱氨酸(C)对野生型残基苯丙氨酸(F)的置换(F145C)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点693处苏氨酸(T)对野生型残基天冬酰胺(N)的置换(N693T)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点145处丝氨酸(S)对野生型残基苯丙氨酸(F)的置换(F145S)，在SEQ ID NO:21的氨基酸位点109处组氨酸(H)对野生型残基谷氨酰胺(Q)的置换(Q109H)，在SEQ ID NO:21的氨基酸位点622处半胱氨酸(C)对野生型残基苯丙氨酸(F)的置换(F622C)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点135处精氨酸(R)对野生型残基甘氨酸(G)的置换(G135R)，在SEQ ID NO:5的氨基酸位点168处谷氨酰胺(Q)对野生型残基精氨酸(R)的置换(R168Q)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点159处精氨酸(R)对野生型残基甘氨酸(G)的置换(G159R)，在SEQ ID NO:5的氨基酸位点310处半胱氨酸(C)对野生型残基精氨酸(R)的置换(R310C)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点561处组氨酸(H)对野生型残基精氨酸(R)的置换(R561H)，在SEQ ID NO:21的氨基酸位点634处组氨酸(H)对野生型残基精氨酸(R)的置换(R634H)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点660处精氨酸(R)对野生型残基甘氨酸(G)的置换(G660R)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点181处半胱氨酸(C)对野生型残基酪氨酸(Y)的置换(Y181C)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点297处精氨酸(R)对野生型残基组氨酸(H)的置换(H297R)，在SEQ ID NO:21的氨基酸位点612处丝氨酸(S)对野生型残基半胱氨酸(C)的置换(C612S)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点694处酪氨酸(Y)对野生型残基组氨酸(H)的置换(H694Y)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点664处丙氨酸(A)对野生型残基天冬氨酸(D)的置换(D664A)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点150处苏氨酸(T)对野生型残基异亮氨酸(I)的置换(I150T)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点264处精氨酸(R)对野生型残基异亮氨酸(I)的置换(I264R)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点636处亮氨酸(L)对野生型残基脯氨酸(P)的置换(P636L)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点713处苏氨酸(T)对野生型残基异亮氨酸(I)的置换(I713T)，在SEQ ID NO:5的氨基酸位点501处脯氨酸(P)对野生型残基谷氨酰胺(Q)的置换(Q501P)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点243处谷氨酰胺(Q)对野生型残基赖氨酸(K)的置换(K243Q)，在SEQ ID NO:5的氨基酸位点130处天冬氨酸(D)对野生型残基谷氨酸(E)的置换(E130D)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点509处甘氨酸(G)对野生型残基精氨酸(R)的置换(R509G)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点566处组氨酸(H)对野生型残基精氨酸(R)的置换(R566H)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点677处组氨酸(H)对野生型残基天冬氨酸(D)的置换(D677H)，在SEQ ID NO:5的氨基酸位点466处天冬酰胺(N)对野生型残基赖氨酸(K)的置换(K466N)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点78处组氨酸(H)对野生型残基精氨酸(R)的置换(R78H)，在SEQ ID NO:6的氨基酸位点1处甲硫氨酸(M)对野生型残基赖氨酸(K)的置换(K6M)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点538处亮氨酸(L)对野生型残基丝氨酸(S)的置换(S538L)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点149处谷氨酰胺(Q)对野生型残基亮氨酸(L)的置换(L149Q)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点252处缬氨酸(V)对野生型残基亮氨酸(L)的置换(L252V)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点674处缬氨酸(V)对野生型残基亮氨酸(L)的置换(L674V)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点656处缬氨酸(V)对野生型残基丙氨酸(A)的置换(A656V)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点731处天冬氨酸(D)对野生型残基丙氨酸(A)的置换(Y731D)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点345处苏氨酸(T)对野生型残基丙氨酸(A)的置换(A345T)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点244处天冬氨酸(D)对野生型残基丙氨酸(A)的置换(Y244D)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点576处色氨酸(W)对野生型残基半胱氨酸(C)的置换(C576W)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点640处赖氨酸(K)对野生型残基天冬酰胺(N)的置换(N640K)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点675处赖氨酸(K)对野生型残基天冬酰胺(N)的置换(N675K)，在SEQ ID NO:21的氨基酸位点579处酪氨酸(Y)对野生型残基天冬氨酸(D)的置换(D579Y)，在SEQ ID NO:3的氨基酸位点693处异亮氨酸(I)对野生型残基天冬酰胺(N)的置换(N693I)，以及在SEQ ID NO:3的氨基酸位点693处赖氨酸(K)对野生型残基天冬酰胺(N)的置换(N693K)。
本发明的突变可能是在SEQ ID NO:3、5或21的氨基酸位点730、391、461、441、235、254、564、662、715、405、685、64、73、656、718、374、592、505、730或363或者编码SEQ ID NO:3、5或21的核酸序列的相应核苷酸位点处的移码。EZH2的突变还可能是在SEQ ID NO:3、5或21上的氨基酸位点148和149之间谷氨酸(E)的插入。EZH2突变的另一个例子是在SEQ IDNO:3、5或21的氨基酸位点148和149的谷氨酸(E)和亮氨酸(L)的缺失。突变体EZH2可能进一步包含SEQ ID NO:3、5或21上的氨基酸位点733、25、317、62、553、328、58、207、123、63、137和60处的无义突变。
EZH2的杂合细胞被预期为显示恶性表型，这是由于通过野生型酶有效地形成了H3-K27me1，以及通过突变体酶形式该先驱种向H3-K27me2以及尤其是向H3-K27me3的后续转变。
早先的结论表明对实施H3-K27单甲基化的酶和用于滤泡性淋巴瘤和弥漫大B细胞淋巴瘤中中发病的EZH2的某些突变体形式之间的酶耦合的依赖性。例如，表达Y641突变体EZH2的细胞对于小分子EZH2抑制剂可能比表达野生型(WT)EZH2的细胞更加敏感。具体而言，表达Y641突变的EZH2的细胞显示出降低的增长、分裂或增殖，或者甚至在EZH2抑制剂处理后进行细胞凋亡或坏死。相反地，表达WT EZH2的细胞对EZH2抑制剂的抗增殖作用没有反应。(美国专利申请61/381,684以其全部内容通过引用合并在本文中。)
本发明的一个方面是一种用于治疗或减轻主体中的癌症或癌前状态的症状的方法，其通过向表达突变体EZH2(其包含如SEQ ID NO:6限定的底物袋结构域中的突变)的主体施用如本文所限定的药学上有效剂量的EZH2抑制剂，例如与适用于同时、顺序或交替地一起施用的其它试剂联合的式(IIa)的化合物。
本发明的另一个方面是用于在主体中抑制由H3-K27向三甲基化的H3-K27的转化的方法。该抑制作用可以涉及在主体中抑制由未被甲基化的H3-K27向单甲基化的H3-K27的转化、由单甲基化的H3-K27向二甲基化的H3-K27的转化、由二甲基化的H3-K27向三甲基化的H3-K27的转化，或者其任意组合，其包括例如由单甲基化的H3-K27向二甲基化的H3-K27的转化以及由二甲基化的H3-K27向三甲基化的H3-K27的转化。本文中所使用的未被甲基化的H3-K27指的是没有甲基基团共价地连接至赖氨酸27的氨基基团的组蛋白H3。本文中所使用的单甲基化的H3-K27指的是单个甲基基团共价地连接至赖氨酸27的氨基基团的组蛋白H3。在本文中，单甲基化的H3-K27还可以用H3-K27me1表示。本文中所使用的二甲基化的H3-K27指的是两个甲基基团共价地连接至赖氨酸27的氨基基团的组蛋白H3。在本文中，二甲基化的H3-K27还可以用H3-K27me2表示。本文中所使用的三甲基化的H3-K27指的是三个甲基基团共价地连接至赖氨酸27的氨基基团的组蛋白H3。在本文中，三甲基化的H3-K27还可以用H3-K27me3表示。
组蛋白H3是长度为136个氨基酸的蛋白质，其序列已知。例如见GenBank登录号CAB02546，其内容通过引用并入本文。本文进一步公开，除了全长度的组蛋白H3外，包含相当于全长度组蛋白H3的K27的赖氨酸残基的组蛋白H3的肽碎片可以被用作EZH2(且同样适用于EZH2的突变体形式)的底物，以评价由H3-K27m1向H3-K27m2的转化以及由H3-K27m2向H3-K27m3的转化。在一个实施方式中，该多肽碎片相当于组蛋白H3的氨基酸残基21-44。该多肽碎片具有氨基酸序列LATKAARKSAPATGGVKKPHRYRP(SEQ ID NO:19)。
本发明的组合物包含式(IIa)的化合物和一种或多种其它治疗试剂，或者其药学上可接受的盐。式(IIa)的化合物适用于作为与适用于同时、顺序或交替施用的一种或多种其它治疗试剂或治疗方式联合治疗的一部分施用。适用于本发明的方法的式(IIa)的其它化合物在美国公开号20120264734中描述，其全部内容通过引用并入本文。
本发明提供了式(IIa)的化合物：
或者其药学上可接受的盐或酯，其中R7,R8,Ra和Rb在此被限定。
式(IIa)的化合物可以包括一个或多个以下特征：
例如，Ra和Rb中的每个独立地是H或C1-C6烷基，其任选地被一个或多个-Q3-T3取代。
例如，Ra和Rb中的一个是H。
例如，Ra和Rb与其连接的N原子一起形成具有0或1个除N原子外的额外的杂原子的4至7元杂环烷基环(例如，吖丁啶基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、噁唑烷基、异噁唑烷基、三唑烷基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、吗啉基、1,4-二氮杂环庚烷基(diazepanyl)、1,4-氧氮杂环庚烷基(oxazepanyl)、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基等)，并且该环任选地被一个或多个-Q3-T3取代。
例如，Ra和Rb连同其连接的N原子一起形成吖丁啶基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、噁唑烷基、异噁唑烷基、三唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基或吗啉基，并且该环任选地被一个或多个-Q3-T3取代。
例如，一个或多个-Q3-T3是羰基。
例如，Q3是键或者取代或未取代的C1-C3烷基连接物。
例如，T3是H、卤素、4至7元杂环烷基、C1-C3烷基、ORd、COORd、-S(O)2Rd或–NRdRe。
例如，Rd和Re中的每一个独立地是H或C1-C6烷基。
例如，R7是C3-C8环烷基或者4至7元杂环烷基，其每个任选地被一个或多个-Q5-T5取代。
例如，R7是哌啶基、四氢吡喃、四氢-2H-噻喃基、环戊基、环己基、吡咯烷基或环庚基，其每个任选地被一个或多个-Q5-T5取代。
例如，R7是环戊基、环己基或四氢-2H-噻喃基，其每个任选地被一个或多个-Q5-T5取代。
例如，Q5是NHC(O)并且T5是C1-C6烷基或C1-C6烷氧基，每个
例如，一个或多个-Q5-T5是氧基。
例如，R7是1-氧化-四氢-2H-噻喃基(thiopyranyl)或者1,1-二氧化-四氢-2H-噻喃基。
例如，Q5是键并且T5是氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基。
例如，Q5是CO、S(O)2或NHC(O)；并且T5是C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C8环烷基或者4至7元杂环烷基。
例如，R8是H或C1-C6烷基，其任选地被选自由卤素、羟基、COOH、C(O)O-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基和二-C1-C6烷基氨基构成的组中的一个或多个取代基取代。
例如，R8是H、甲基或乙基。
在一个实施方式中，本发明的化合物是化合物44
或其药学上可接受的盐。
在一个实施方式中，本发明的化合物是化合物自身，即游离碱或“裸”分子。在另一个实施方式中，该化合物是其盐，例如，裸分子的单-HCl或三-HCl盐、单-HBr或三-HBr盐。
本发明的代表性的化合物包括表1所列出的化合物。在下表中，每个出现的应被理解为
表1
在本文中使用的“烷基”、“C1、C2、C3、C4、C5或C6烷基”或者“C1-C6烷基”意在包括C1、C2、C3、C4、C5或C6直链(线性)饱和脂肪族碳氢化合物基团和C3、C4、C5或C6支链饱和脂肪族碳氢化合物基团。例如，C1-C6烷基意在包括C1、C2、C3、C4、C5和C6烷基基团。烷基的例子包括具有从1个到6个碳原子的部分，诸如但不仅限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、仲戊基或正己基。
在特定的实施方式中，直链或支链烷基具有六个或更少的碳原子(例如，对于直链为C1-C6，对于直链为C3-C6)，并且在另一个实施方式中，直链或支链烷基具有四个或更少的碳原子。
本文中所使用的术语“环烷基”指的是饱和或不饱和的非芳香碳氢化合物的单环或多环(例如，稠环、桥环或螺环)体系，其具有3个至30个碳原子(例如C3-C10)。环烷基的例子包括但不限于环丙烷基、环丁烷基、环戊基、环己基、环庚烷基、环辛烷基、环戊烯基、环己烯基、环庚烯基和金刚烷基。除非另有说明，术语“杂环烷基”指的是饱和或不饱和非芳香3-8元单环、7-12元双环(稠、桥或螺环)，或11-14元三环体系(稠、桥或螺环)，其具有一个或多个杂原子(诸如O、N、S或Se)。杂环烷基基团的例子包括但不限于，哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、二氧六环基、四氢呋喃基、异二氢吲哚基、二氢吲哚基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、四氢呋喃基、环氧乙烷基、吖丁啶基、氧杂环丁烷基、硫化环丙烷基、1,2,3,6-四氢吡啶基、四氢吡喃基、二氢吡喃基、吡喃基、吗啉基、1,4-二氮杂环庚烷基(diazepanyl)、1,4-氧氮杂环庚烷基(oxazepanyl)、2-氧杂-5氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2-氧杂-6氮杂螺[3.3]庚烷基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷基、1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷基等。
术语“任选取代的烷基”指的是未取代的烷基或者指定取代基取代碳氢化合物骨架的一个或多个碳原子上的一个或多个氢原子的烷基。这些取代基可以包括例如烷基、烯基、炔基、卤素、羟基、烷基碳酸酯基、芳基碳酸酯基、烷氧基碳酸酯基、芳基氧碳酸酯基、羧基、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷基硫代羰基、烷氧基、磷酸盐、磷酸基(phosphonato)、亚磷酸基(phosphinato)、氨基(包括烷基胺基、二烷基氨基、芳基胺基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、酰氨基(包括烷基酰胺基，芳基酰胺基，氨基甲酰和脲基)、甲脒基、亚氨基、巯基、硫代烷基、硫代芳基、硫代羧基、硫酸盐、烷基亚硫酰基、硫酸基(sulfonato)、氨磺酰基、磺酰氨基、硝基、三氟甲基、氰基、叠氮基、杂环基、烷基芳基或者芳香或杂环芳香部分。
“芳基烷基”或“芳烷基”部分是由芳基(例如，苯甲基(苄基))取代的烷基。“烷基芳基”部分是由烷基(例如，甲基苯基)取代的芳基。
本文中所使用的“烷基连接物”意在包括C1、C2、C3、C4、C5或C6直链(线性)饱和二价脂肪族碳氢基团以及C3、C4、C5或C6支链饱和脂肪族碳氢基团。例如C1-C6烷基连接物意在包括C1、C2、C3、C4、C5或C6烷基连接物基团。烷基连接物的例子包括具有1至6个碳原子的部分，例如但不仅限于甲基(-CH2-),、乙基(-CH2CH2-)、正丙基(-CH2CH2CH2-)、异丙基(-CHCH3CH2-)、正丁基(-CH2CH2CH2CH2-)、仲丁基(-CHCH3CH2CH2-)、异丁基(-C(CH3)2CH2-)、正戊基(-CH2CH2CH2CH2CH2-)、仲戊基(-CHCH3CH2CH2CH2-)或正己基(-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-)。
“烯基”包括长度类似的不饱和脂肪基团和如上文所述的烷基上的可能的取代，但是包含至少一个双键。例如术语“烯基”包括直链烯基基团(例如乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基、庚烯基、辛烯基、壬烯基、癸烯基)，和支链烯基基团。在特定的实施方式中，直链或支链烯基基团在其骨架内具有6个或更少的碳原子(例如，对于直链为C2-C6，对于支链为C3-C6)。术语“C2-C6”包括含有2至6个碳原子的烯基基团。术语“C3-C6”包括含有3至6个碳原子的烯基基团。
术语“任选取代的烯基”指的是未取代的烯基或者指定取代基取代一个或多个碳氢化合物骨架碳原子上的一个或多个氢原子的烯基。这些取代基可以包括例如烷基、烯基、炔基、卤素、羟基、烷基碳酸酯基、芳基碳酸酯基、烷氧基碳酸酯基、芳基氧碳酸酯基、羧基、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷基硫代羰基、烷氧基、磷酸盐、磷酸基、亚磷酸基、氨基(包括烷基胺基、二烷基氨基、芳基胺基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、酰氨基(包括烷基酰胺基、芳基酰胺基、氨基甲酰和脲基)、甲脒基、亚氨基、巯基、硫代烷基、硫代芳基、硫代羧基、硫酸盐、烷基亚硫酰基、硫酸基(sulfonato)、氨磺酰基、磺酰氨基、硝基、三氟甲基、氰基、杂环基、烷基芳基或者芳香或杂环芳香部分。
“炔基”包括不饱和脂肪基团等长类似物和如上文所述的烷基上的可能的取代物，但是其包含至少一个三键。例如“炔基”包括直链炔基基团(例如乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基、庚炔基、辛炔基、壬炔基、癸炔基)和支链炔基基团。在某些实施方式中，直链或支链炔基基团在其骨架内具有6个或更少的碳原子(例如，对于直链为C2-C6，对于支链为C3-C6)。术语“C2-C6”包括含有2至6个碳原子的炔基基团。术语“C3-C6”包括含有3至6个碳原子的炔基基团。
术语“任选取代的炔基”指的是未取代的炔基或者指定取代基取代一个或多个碳氢化合物骨架碳原子上的一个或多个氢原子的炔基。这些取代基可以包括例如烷基、烯基、炔基、卤素、羟基、烷基碳酸酯基、芳基碳酸酯基、烷氧基碳酸酯基、芳基氧碳酸酯基、羧基、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷基硫代羰基、烷氧基、磷酸盐、磷酸基、亚磷酸基、氨基(包括烷基胺基、二烷基氨基、芳基胺基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、酰氨基(包括烷基酰胺基，芳基酰胺基，氨基甲酰和脲基)、甲脒基、亚氨基、巯基、硫代烷基、硫代芳基、硫代羧基、硫酸盐、烷基亚硫酰基、硫酸基(sulfonato)、氨磺酰基、磺酰氨基、硝基、三氟甲基、氰基、叠氮基、杂环基、烷基芳基或者芳香或杂环芳香部分。
其它任选的取代部分(例如任选取代的环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基)包括未取代的部分和具有一个或多个指定取代基的部分。例如取代杂环烷基包括被一个或多个烷基基团(诸如2,2,6,6-四甲基-哌啶基和2,2,6,6-四甲基-1,2,3,6-四氢吡啶基)取代的那些。
“芳基”包括具有芳香性的基团，其包括具有至少一个芳香环并且在环结构内不包含任何杂原子的“共轭”或多环体系。例子包括苯基、苄基、1,2,3,4-四氢化萘基等。
“杂芳环基”是芳香基团，如前文限定，除了其在环结构内具有1至4个杂原子，并且还可以被称为“芳基杂环”或“芳香杂环”。本文中所使用的术语“杂芳环基”意在包括稳定的5-、6-或7-元单环或7-、8-、9-、10-、11-或12-元双环芳香杂环，其由碳原子和一个或多个杂原子组成，例如，1或1-2或1-3或1-4或1-5或1-6个杂原子，或者例如1,、2、3、4、5或6个杂原子，其独立地选自氮、氧和硫。氮原子可能是取代的或未取代的(即N或NR，其中R是H或其它取代基，如所限定的)。氮和硫杂原子可以任选地被氧化(即，N→O和S(O)p，其中p＝1或2)。要注意的是，芳香杂环中的S和O原子的总数不多于1。
杂环芳基基团的例子包括吡咯、呋喃、噻吩、噻唑、异噻唑、咪唑、三唑、四唑、吡唑、恶唑、异恶唑、吡啶、吡嗪、哒嗪、嘧啶等。
此外，术语“芳基”和“杂芳基”包括多环芳基和杂芳基基团，例如三环、双环，例如萘、苯并恶唑、苯并二恶唑、苯并噻唑、苯并咪唑、苯并噻吩、亚甲二氧基苯基、喹啉、异喹啉、二氮杂萘、吲哚、苯并呋喃、嘌呤、苯并呋喃、氮杂嘌啉、吲嗪。
对于多环芳香环的情况，仅其中一个环需要为芳香环(例如，2,3-二羟基吲哚)，但是所有环可能是芳香环(例如，喹啉)。第二个环也可以是稠环或桥环。
环烷基、杂环烷基、芳基或杂环芳基环可以在一个或多个环处被取代(例如，形成环的碳或杂原子如N)，取代基如前文所限定的，例如为烷基、烯基、炔基、卤素、羟基、烷氧基、烷基碳酸酯基、芳基碳酸酯基、烷氧基碳酸酯基、芳基氧碳酸酯基、羧基、烷基羰基、烷基氨基羰基、芳烷基氨基羰基、烯基氨基羰基、烷基羰基、芳基羰基、芳烷基羰基、烯基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基硫代羰基、磷酸盐、磷酸基、亚磷酸基、氨基(包括烷基胺基、二烷基氨基、芳基胺基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、酰氨基(包括烷基酰胺基，芳基酰胺基，氨基甲酰和脲基)、甲脒基、亚氨基、巯基、硫代烷基、硫代芳基、硫代羧基、硫酸盐、烷基亚硫酰基、硫酸基、氨磺酰基、磺酰氨基、硝基、三氟甲基、氰基、叠氮基、杂环基、烷基芳基或者芳香或杂环芳香部分。芳基和杂环芳基基团也可以与非芳香性的脂肪环或杂环稠合或桥接的而形成多环体系(例如，四氢萘、亚甲基二氧基苯基)。
本文中所使用的“碳环(carbocycle)”或“碳环(carbocyclic ring)”意在包括任何稳定的具有特定碳数的单环、双环或三环，其中任意的可以是饱和的、不饱和的或芳香性的。碳环包括环烷基和芳基。例如C3-C14碳环意在包括具有3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14个碳原子的单环、双环或三环。碳环的示例包括但不限于环丙基、环丁基、环丁烯基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环庚基、环庚烯基、金刚烷基、环辛烷基、环辛烯基、环辛二烯基、芴基、苯基、萘基、二氢茚基、金刚烷基和四氢化萘基。桥环也被包括在碳环的定义内，包括例如[3.3.0]二环辛烷、[4.3.0]二环壬烷、[4.4.0]二环癸烷和[2.2.2]二环辛烷。桥环产生于一个或多个碳原子连接两个非相邻碳原子时。在一个实施方式中，桥环为一个或两个碳原子。值得注意的是，桥通常将单环转变为三环。当一个环是桥环时，所列出的环上的取代基也可以出现在桥上。稠环(例如萘基、四氢化萘基)和螺环同样被包括在内。
本文中所使用的“杂环”或“杂环基团”包括包含至少一个杂环原子(例如N、O或S)的任意环结构(饱和、不饱和或芳香性的)。杂环包括杂环烷基和杂环芳基。杂环的示例包括但不限于，吗啉、吡咯烷、四氢噻吩、哌啶、哌嗪、氧杂环丁烷、吡喃、四氢吡喃、吖丁啶和四氢呋喃。
杂环基团的示例包括但不限于吖啶基、氮杂环辛四烯基(azocinyl)、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并呋喃基、苯并噻吩、苯并苯硫基、苯并恶唑基、苯并恶唑啉基、苯并噻唑基、苯并三唑基、苯并四唑基、苯并异恶唑基、苯并异噻唑基、苯并咪唑啉基、咔唑基、4aH-咔唑基、咔啉基、色满基、色烯基、噌啉基、十氢喹啉基、2H,6H-1,5,2-二噻嗪基，二氢呋喃并[2,3-b]-四氢呋喃基、呋喃基、呋咕基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、1H-吲唑基、indolenyl、二氢吲哚基、indolizinyl、吲哚基、3H-吲哚基、靛红酰基(isatinoyl)、异苯并呋喃基、异色满基、异吲唑基、isoindolizinyl、异吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异恶唑基、亚甲基二氧基苯基、吗啉基、萘啶基、八氢异喹啉基、恶二唑基、1,2,3-恶二唑基、1,2,4-恶二唑基、1,2,5-恶二唑基、1,3,4-恶二唑基、1,2,4-恶二唑5(4H)-酮、恶唑烷基、恶唑基、羟吲哚基、嘧啶基、菲啶基、菲罗啉基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噻恶基、吩恶嗪基、酞嗪基、哌嗪基、哌啶基、哌啶酮基、4-哌啶酮基、胡椒基、蝶啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑基、哒嗪基、吡啶并恶唑基、吡啶并咪唑基、吡啶并噻唑、吡啶基、吡啶基(pyridyl)、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、2H-吡咯基、吡咯基、喹唑啉、喹啉基、4H-喹嗪基、喹喔啉基、奎宁环基、四氢呋喃基、四氢异喹啉基、四氢喹啉基、四唑基、6H-1,2,5-噻二嗪基、1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、噻蒽基、噻唑基、噻吩基、噻吩并噻唑基、噻吩并恶唑基、噻吩并咪唑基、苯硫基、三嗪基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,2,5-三唑基、1,3,4-三唑基和氧杂蒽基。
本文中使用的术语“取代”是指在指定原子的正常价态未被超出并且取代生成稳定化合物的情况下，指定原子上的任意一个或多个氢原子被所示基团中的某个取代。当取代基是氧代或酮基(即，＝O)时，则该原子上的两个氢原子被取代。酮基取代基不出现在芳香片段。本文所使用的环双键，是在两个相邻环原子之间形成的双键(例如，C＝C、C＝N或N＝N)。“稳定化合物”和“稳定结构”意在表示足够稳固的化合物，其可以从反应混合物中历经分离达到可用程度的纯度，并加入有效治疗试剂的配方。
当一个连在取代基上的键被显示成与连接换上的两个原子间的键交叉时，则该取代基可能与环上的任意原子键合。当一个取代基被列出，而未标明该取代基通过哪个原子键合至给出化学式的化合物的其余片段，则该取代基可能通过该化学式中的任意原子键合。这些取代基的结合和/或变体是容许的，但仅在这种结合生成稳定化合物时。
当任意变体(例如，R1)在化合物的任意取代基或化学式中出现多于一次时，其每次出现时的定义与在其它处出现时的定义不相关。因此，例如，如果一个基团被显示出被0-2个R1片段取代，则该基团可能任选地由最多两个R1片段取代，并且每次出现的R1独立地选自R1的定义范围。同样，这些取代基的结合和/或变体是容许的，但仅在这种结合生成稳定化合物时。
术语“氢氧基”或“羟基”包括具有-OH或-O-的基团。
本文中所使用的“卤”或“卤素”指的是氟、氯、溴和碘。术语“全卤化”主要指的是所有氢原子都被卤原子取代的片段。术语“卤代烷及”或“卤代烷氧基”指的是被一个或多个卤原子取代的烷基或烷氧基。
术语“羰基”包括含有一个通过双键与氧原子连接的碳原子的化合物和片段。含有羰基的片段的示例包括但不限于，醛、酮、羧酸、酰胺、酯、酸酐等等。
术语“羧基”指的是–COOH或其C1-C6烷基酯。
“酰基”包括含有酰基基团(R-C(O)-)或羰基基团的片段。“取代酰基”包括酰基基团，其中一个或多个氢原子被例如，烷基基团、炔基基团、卤素、羟基、烷基碳酸酯基、芳基碳酸酯基、烷氧基碳酸酯基、芳基氧碳酸酯基、羧基、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷基硫代羰基、烷氧基、磷酸盐、磷酸基(phosphonato)、亚磷酸基(phosphinato)、氨基(包括烷基胺基、二烷基氨基、芳基胺基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、酰氨基(包括烷基酰胺基，芳基酰胺基，氨基甲酰和脲基)、甲脒基、亚氨基、巯基、硫代烷基、硫代芳基、硫代羧基、硫酸盐、烷基亚硫酰基、硫酸基(sulfonato)、氨磺酰基、硝基、三氟甲基、氰基、叠氮基、杂环基、烷基芳基或者芳香或杂环芳香片段，取代。
“芳酰基”包括具有芳基或杂芳基片段连接至羰基基团。芳酰基基团的示例包括苯基羧基、萘基羧基等等。
“烷氧基烷基”、“烷基氨基烷基”和“硫代烷氧基烷基”包括如前文描述的烷基，其中氧、氮或硫原子替换一个或多个碳氢骨架上的碳原子。
术语“烷氧”或“烷氧基”包括取代和未取代的烷基、烯基和炔基基团，其共价地与一个氧原子连接。烷氧基团或烷氧基基团的示例包括但不限于，甲氧基、乙氧基、异丙氧基、丙氧基、丁氧基和戊氧基基团。取代烷氧基基团的示例包括卤代烷氧基基团。烷氧基基团可以被诸如烯基、炔基、卤素、羟基、烷基碳酸酯基、芳基碳酸酯基、烷氧基碳酸酯基、芳基氧碳酸酯基、羧基、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷基硫代羰基、烷氧基、磷酸盐、磷酸基、亚磷酸基、氨基(包括烷基胺基、二烷基氨基、芳基胺基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、酰氨基(包括烷基酰胺基，芳基酰胺基，氨基甲酰和脲基)、甲脒基、亚氨基、巯基、硫代烷基、硫代芳基、硫代羧基、硫酸盐、烷基亚硫酰基、硫酸基、氨磺酰基、硝基、三氟甲基、氰基、叠氮基、杂环基、烷基芳基或者芳香或杂环芳香片段，取代。卤代烷氧基基团的示例包括但不限于，氟代甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、氯代甲氧基、二氯甲氧和三氯甲氧基。
术语“醚”或“烷氧基”包括包括化合物或部分，其含有连接至两个碳原子或杂原子的氧。例如，该术语包括“烷氧基甲基”，其涉及烷基、烯基或炔基基团，其与共价地连接至烷基基团的氧原子共价地连接。
术语“酯”包括化合物和部分，其含有连接至与羰基相连的氧原子的碳或杂原子。术语“酯”包括烷氧基羧基基团例如甲氧基羰基、乙氧基羰基、丙氧基羰基、丁氧基羰基、戊氧基羰基等等。
术语“硫代烷基”包括化合物和片段，其含有与硫原子连接的烷基基团。硫代烷基基团可以被诸如烷基、烯基、炔基、卤素、羟基、烷基碳酸酯基、芳基碳酸酯基、烷氧基碳酸酯基、芳基氧碳酸酯基、羧基、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷基硫代羰基、烷氧基、磷酸盐、磷酸基、亚磷酸基、氨基(包括烷基胺基、二烷基氨基、芳基胺基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、酰氨基(包括烷基酰胺基，芳基酰胺基，氨基甲酰和脲基)、甲脒基、亚氨基、巯基、硫代烷基、硫代芳基、硫代羧基、硫酸盐、烷基亚硫酰基、硫酸基、氨磺酰基、硝基、三氟甲基、氰基、叠氮基、杂环基、烷基芳基或者芳香或杂环芳香片段，取代。
术语“硫代羰基”或“硫代羧基”包括化合物和片段，其含有通过双键与硫原子相连接的碳原子。
术语“硫代醚”包括片段，其含有一个硫原子与两个碳原子或杂原子相连接。硫代醚的示例包括但不限于烷基硫代烷基、烷基硫代烯基、烷基硫代炔基。术语“烷基硫代烷基”包括烷基、烯基或炔基基团键合至一个与烷基基团键合的硫原子的片段。类似地，术语“烷基硫代烯基”指的是片段，其中烷基、烯基、炔基基团键合至一个与烯基基团共价键合的硫原子；并且“烷基硫代炔基”指的是片段，其中烷基、烯基、炔基基团键合至一个与炔基基团共价键合的硫原子。
本文中所使用的“胺”或“氨基”指的是未取代或取代的-NH2。“烷基氨基”包括化合物的基团，其中-NH2的氮连接至少一个烷基基团。烷基氨基基团的示例包括苄氨基、甲氨基、乙胺基、苯乙胺基等。“二烷基氨基”包括基团，其中-NH2的氮连接至少两个额外的烷基。二烷基氨基的示例包括但不限于二甲氨基和二乙胺基。“芳基氨基”和“二芳基氨基”包括基团，其中氮原子分别连接至少一个或两个芳基基团。“氨基芳基”和“氨基芳基氧基”指的是被氨基取代的芳基和芳基氧基。“烷基芳基氨基”、“烷基氨基芳基”或“芳基氨基烷基”指的是连接至少一个烷基基团和至少一个芳基基团的氨基基团。“烃基氨基烷基”(Alkaminoalkyl)指的是烷基、烯基、炔基基团，其与一个同样连接至烷基基团的氮原子连接。“酰基氨基”包括基团，其中氮原子连接至酰基基团。酰基氨基的示例包括但不限于，烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨基甲酰基和脲基基团。
术语“酰胺”或“氨基羧基”包括化合物和片段，其包含连接至羰基或硫代羰基基团的碳源子的氮原子。该术语包括“烃基氨基羰基”基团，其包括与一个连接至羰基或硫代羰基基团的碳源子的氨基连接的烷基、烯基、或炔基基团。它还包括“芳基氨基羰基”基团，其包括与一个连接至羰基或硫代羰基基团的碳源子的氨基连接的芳基或杂环芳基片段。术语“烷基氨基羧基”、“烯基氨基羧基”、“炔基氨基羧基”和“芳基氨基羧基”包括片段，其中烷基、烯基、炔基和芳基片段分别地连接至与相应地与羰基基团的碳连接的氮原子。酰胺可以被诸如直链烷基、支链烷基、环烷基、芳基、杂环芳基或杂环等取代基取代。酰胺基团上的取代基可以被进一步取代。
本发明中包含氮的化合物可以通过使用氧化试剂(例如，3-氯过氧苯甲酸(mCPBA)和/或过氧化氢)处理转化为N-氧化物，以提供本发明的其它化合物。因此，所有给出的和请求保护的含氮化合物被认为，当价态和结构允许时，包括给出的化合物及其N-氧化物衍生物(其可以被指定为N→O或N+-O-)。此外，在其它情况下，本发明的化合物中的氮可以被转化为N-羟基或N-烷氧基化合物。例如，N-羟基化合物可以通过使用诸如m-CPBA的氧化试剂氧化母胺制备。所有给出和请求保护的含氮化合物还被认为，当价态和结构允许时，覆盖所给出的化合物及其N-羟基(即N-OH)和N-烷氧基(即N-OR，其中R可以是取代或未取代的C1-C6烷基、C1-C6烯基、C1-C6炔基3-14元碳环或3-14元杂环)衍生物。
在本说明书中，在某些情况下，为了方便，化合物的结构式表示一个特定的异构体，但是本发明包括所有异构体，诸如几何异构体、基于不对称碳的光学异构体、立体异构体、互变异构体等。此外，由该式表示的化合物可能出现一种多晶型现象。值得注意的是，晶体形式、晶体形式混合物或者其酸酐或水合物被包括在本发明的范围中。此外，该化合物的体内降解生成的所谓的代谢产物被包括在本发明的范围中。
“异构现象”的意思是具有相同分子式但在其原子的键的序列或者原子的空间排布上不同的化合物。原子空间排布不同的异构体，被称为“空间异构体”。不是互为镜像的空间异构体被称为“非对映异构体”，并且互为不能重叠的景象的空间异构体被称为“对映异构体”。含有等量的相反手性的单独对映体形式的混合物被称为“消旋混合物”。
与四个不同取代基键合的碳原子被称为“手性中心”。
“手性异构体”的意思是具有至少一个手性中心的化合物。具有多于一个手性中心的化合物可能以独立的非对映异构体或非对映异构体的混合物存在，被称作“非对映体混合物”。当出现一个手性中心时，立体异构体可以通过该手性中心的绝对构型(R或S)表征。绝对构型指的是连接在手性中心上的取代基的空间排布。考虑范围内的，连接至手性中心的取代基以卡恩、因戈尔德和普雷洛格的顺序规则为规则排序，(卡恩等人，Angew.Chem.Inter.Edit.1966,5,385；勘误表511页；卡恩等人，78,413；卡恩和因戈尔德，J.Chem.Soc.1951(伦敦)，623；卡恩等人，Experientia 1956,12,81；卡恩，J.Chem.Educ.1964,41,116)。
“几何异构体”的意思是由于双键或环烷基连接物(例如，1,3-环丁基)旋转受阻而存在的非对映异构体。这些构型通过其名称的前缀顺(cis)和反(trans)或者Z和E来区分，其表明根据卡恩-因戈尔德-普雷洛格规则，分子中的基团在双键的相同或相反侧。
应该理解的是，本发明的化合物可能以不同的手性异构体或几何异构体描绘。同样应该理解的是，当化合物具有手性异构或几何异构形式时，所有的异构形式均意在被本发明的范围包括，并且化合物的命名不排除任意异构体形式。
此外，本发明中讨论的结构和其它化合物包括其中所有的阿托异构体。“阿托异构体”是一种立体异构体，其中两个异构体的原子在空间上不同排布。阿托异构体因其由于中心键上大基团的旋转位阻导致的受限旋转而存在。这种阿托异构体通常以混合物存在，然而，由于近来色谱技术的新发展，在某些情况下，有可能分离两个阿托异构体。
“互变异构体”是一个或两个平衡存在的结构异构体，并且容易从一个异构体转化成另一个。这种转变带来氢原子的正式迁移，其伴随着相邻共轭双键的交换。互变异构体以溶液中的一组互变异构体存在。在可能进行互变异构化的溶液中，将会达到互变异构体的化学平衡。互变异构体的准确比例取决于若干因素，包括温度、溶剂和pH。可以通过互变异构化而互相转化的互变异构体的概念被称作互变异构现象。
在可能的各种互变异构性现象中，有两种是经常能观测到的。在酮-醇互变异构现象中，发生电子和氢原子的同时转移。环-链异构现象的产生是糖链分子的醛基(-CHO)与在相同分子中的一个羟基(-OH)反应的结果，其生成如葡萄糖所展现出的环(环形的)形式。
常见的互变异构体对是：酮-醇、酰胺-腈、内酰胺-内酰亚胺、杂环中的(例如，在核碱基诸如鸟嘌呤、胸腺嘧啶和胞嘧啶中)酰胺-亚氨酸、亚胺-烯胺和烯胺-烯胺。酮-醇平衡的一个示例是如下图所示的吡啶-2(1H)-酮和相应的吡啶-2-醇之间的平衡。
应该理解的是，本发明的化合物可能被描绘为不同的互变异构体。还应该被理解的是，当化合物具有互变异构形式时，所有互变异构形式均意在被包括在本发明的范围内，并且化合物的命名不排除任意互变异构体形式。
术语“晶体形态”、“晶型”或“晶体形式”的意思是晶体结构，其中化合物(或盐或其溶剂化物)可以以不同的晶体堆砌排列结晶，其所有均具有相同的基本组分。不同的晶体形式通常具有不同的X射线衍射图、红外光谱、熔点、密度硬度、晶形、光学和电学性质、稳定性和溶解性。重结晶溶剂、结晶速率、储藏温度以及其它因素可能导致某一种晶体形式处于主导。化合物的晶体形态可以通过在不同条件下结晶制备。
本文公开的式(IIa)化合物包括化合物本身以及其可以应用的盐、酯、溶剂化物和前药。例如，盐可以由阴离子和芳基-或杂环芳基-取代的苯化合物上的带正电荷的基团(例如氨基)组成。合适的阴离子包括氯、溴、碘、硫、二硫、氨基磺酸根、硝酸根、磷酸根、柠檬酸根、甲磺酸根、三氟乙酸根、谷氨酸根、葡萄糖醛酸根、戊二酸根、苹果酸根、马来酸根、琥珀酸根、延胡索酸根、酒石酸根、甲苯磺酸根、水杨酸根、乳酸根、萘磺酸根和乙酸根(例如，三氟乙酸根)。术语“药学上可接受的阴离子”指的是适于形成药学上可接受的盐的阴离子。同样地，盐也可以由阳离子和芳基-或杂环芳基-取代的苯化合物上的带正电荷的基团(例如羧基)组成。合适的阳离子包括钠离子、钾离子、镁离子、钙离子和铵根阳离子诸如四甲基铵离子。芳基-或杂环芳基取代的苯化合物也包括含有季铵原子的盐。在盐的形式中，已知，化合物和阳离子或阴离子的比例可以是1:1或任意除1:1外的其它比例，例如3:1、2:1、1:2或1:3。
前药的示例包括酯和其它药学上可接受的衍生物，其当向主体施用时能够提供活性的芳基-或杂环芳基-取代的苯化合物。
此外，本发明的化合物，例如，化合物的盐，可以以水合或未水合(无水)的形式或与其它溶剂分子以溶剂化物的形式存在。水合物的非限定性示例包括单水合物、二水合物等等。溶剂化物的非限定性示例包括乙醇溶剂化物、丙酮溶剂化物等等。
“溶剂化物”的意思是溶剂添加形式，其包含化学剂量的或非化学剂量的溶剂。一些化合物有捕捉固定摩尔比例溶剂分子成结晶固体形态的倾向，因此形成溶剂化物。如果溶剂是水，所形成的溶剂化物是水合物；并且若溶剂是乙醇，所形成的溶剂化物是乙醇化物。水合物通过一分子或多分子的水与一分子的物质的结合形成，在该物质中，水维持其H2O的分子形态。
本文中使用的术语“类似物”指的是一种化学化合物，其与另一个化合物结构上相似但在组成上稍有区别(例如，一个原子被另一个不同元素的原子替代，或一个特定的官能团的出现，或一个官能团被另一个官能团替代)。因此，类似物是与参照化合物在功能和外观上，而不是结构或起源上，相似或可比较的化合物。
本文所限定的术语“衍生物”指的是化合物，其具有共同的母核结构，并且被各种本文所描述的基团取代的化合物。例如，由式(I)表述的所有化合物都是芳基-或杂环芳基-苯化合物，并且具有式(I)作为共同母核。
术语“生物电子等排体”指的是由于一个原子或一组原子与另一个或另一组大体相似的原子的交换而生成的化合物。生物电子等排替换的目的是创建与母化合物在生物学性质上相似的新化合物。生物电子等排替换可能为基于物理化学或拓扑学的。羧酸电子等排体的示例包括但不限于，酰基磺酰亚胺、四唑、磺酸盐和磷酸盐。参见，例如，Patani andLaVoie,Chem.Rev.96,3147-3176,1996.
本发明意在包含所有包括所有出现在当前化合物中的原子的同位素。同位素包括具有相同原子序数但是不同质子数目的原子。作为示例并且并非限定，氢的同位素包括氚和氘，并且碳的同位素包括C-13和C-14。
本文所述的，本发明中的任意式(IIa)化合物，可以是EZH2抑制剂。
在本发明的某些方向中，当EZH2抑制剂抑制突变EZH2的组蛋白甲基转移酶的活性比抑制野生型EZH2的组蛋白甲基转移酶更有效时，其“选择性地抑制”突变EZH2的组蛋白甲基转移酶活性。例如，在一个实施方式中，选择性抑制剂对于突变EZH2的IC50比其对于野生型EZH2的IC50低至少百分之40。在一个实施方式中,选择性抑制剂对于突变EZH2的IC50比其对于野生型EZH2的IC50低至少百分之50。在一个实施方式中,选择性抑制剂对于突变EZH2的IC50比其对于野生型EZH2的IC50低至少百分之60.在一个实施方式中,选择性抑制剂对于突变EZH2的IC50比其对于野生型EZH2的IC50低至少百分之70。在一个实施方式中,选择性抑制剂对于突变EZH2的IC50比其对于野生型EZH2的IC50低至少百分之80。在一个实施方式中,选择性抑制剂对于突变EZH2的IC50比其对于野生型EZH2的IC50低至少百分之90。
在一个实施方式中，突变EZH2的选择性抑制剂对野生型EZH2基本不发挥抑制作用。
在本发明的某些方向中，抑制剂抑制H3-K27me2向H3-K27me3的转化。在一个实施方式中，据称该抑制剂抑制H3-K27的三甲基化。因为H3-K27me1向H3-K27me2的转化先于H3-K27me2向H3-K27me3的转化，抑制H3-K27me1向H3-K27me2转化的抑制剂自然也抑制H3-K27me2向H3-K27me3的转化，即其抑制H3-K27的三甲基化。抑制H3-K27me2向H3-K27me3的转化而不抑制H3-K27me1向H3-K27me2的转化也是可能的。这类抑制将同样带来对H3-K27的三甲基化的抑制，尽管没有抑制H3-K27的二甲基化。
在一个实施方式中，抑制剂抑制H3-K27me1向H3-K27me2和H3-K27me2向H3-K27me3的转化。这种抑制剂可以直接地单独抑制H3-K27me2向H3-K27me3的转化。可选地，这种抑制剂可以直接抑制H3-K27me1向H3-K27me2的转化和H3-K27me2向H3-K27me3的转化。
在本发明的某些方向中，抑制剂化合物抑制组蛋白甲基转移酶的活性。对组蛋白甲基转移酶活性的抑制可以使用任意合适的方法检测。该抑制可以被测定，例如，以组蛋白甲基转移酶活性的比例为依据或以组蛋白甲基转移酶活性的产物为依据。
与合适的对照相比，该抑制是一种可以测定的抑制。在一个实施方式中，与合适的对照相比，该抑制是至少10％的抑制。即，有抑制剂时酶催化活性比例或产物的量少于或等于无抑制剂时相应的比例或量的百分之90。在多个其它实施方式中，与合适的对照相比，该抑制是至少百分之20、25、30、40、50、60、70、75、80、90、或95的抑制。在一个实施方式中，与合适的对照相比，该抑制是至少百分之99，即有抑制剂时酶催化活性比例或产物的量少于或等于无抑制剂时相应的比例或量的百分之1。
本发明的组合物包含式(IIa)化合物或其药学上可接受的盐，以及一种或多种其它治疗试剂，或其药学上可接受的盐。本发明提供以联用配方或单用配方形式的式(IIa)化合物或其药学上可接受的盐以及一种或多种其它治疗试剂，或其药学上可接受的盐的施用，其中配方的施用是同时的、顺序的或交替的。在特定的实施方式中，其它治疗试剂可以是在本领域内被认可为对于治疗疾病或使用本发明的组合物治疗的情况有用的试剂。在其它实施方式中，其它治疗试剂可以是在本领域内未被认可为对于治疗疾病或使用本发明的组合物治疗的情况有用的试剂。在一个方向，其它治疗试剂可以是施用本发明的组合物有益属性的试剂(例如，影响组合物粘度的试剂)。对于本发明的组合物有益的属性包括但不限于，由式(IIa)化合物和一种或多种其它治疗试剂联用带来的药代动力学和药效学的复合作用。例如，一种或多种其它试剂可以是抗癌试剂或化疗试剂。例如，一种或多种其它试剂可以是糖皮质激素。例如，一种或多种其它试剂可以选自松、泼尼松龙、环磷酰胺、长春新碱、阿霉素、马磷酰胺、顺铂、阿糖胞苷、依维莫司、地西他滨、地塞米松及其功能类似物、衍生物、前药和代谢产物。在另一个方向中，其它治疗试剂可以是泼尼松或其活性代谢产物，泼尼松龙。
下文所述的治疗试剂是为了说明而非意在限定。本发明包括至少一种其它治疗试剂选自下文的罗列。本发明可以包括多于一种其它治疗试剂，例如两种、三种、四种或物种其它治疗试剂以便本发明的组合物可以实现其预期的功能。
在一个实施方式中，其它治疗试剂是抗癌试剂。在一个实施方式中，抗癌试剂是一种影响组蛋白修饰的化合物，例如HDAC抑制剂。在特定的实施方式中，抗癌试剂选自化疗试剂(诸如2CdA、5-FU、6-巯嘌呤、6-TG、紫杉醇(AbraxaneTM)、爱优痛放线菌素-D、阿霉素爱宁达全反式维甲酸、氨甲蝶呤、阿糖胞苷、阿扎胞苷、氯化亚硝脲(BCNU)、博莱霉素伊立替康环己亚硝脲氯法拉滨、氯法拉滨(ClolarTM)、环磷酰胺盐酸柔红霉素、枸橼酸柔红霉素脂质体达克金DIC、盐酸多柔比星脂质体表阿霉素六甲密胺、和美新羟基脲伊达比星异环磷酰胺伊沙匹隆、伊沙匹隆左旋天冬醯胺、瘤可宁脂质体阿糖胞苷、左旋-苯丙氨酸氮芥、米托坦片剂(Lysodren)、盐酸甲苄肼mithracin、丝裂霉素-C(Mitomycin-C)、白消安诺维本 尼罗替尼(nilotinib)、喷司他丁氮芥、米托蒽醌培门冬酶 伯尔定顺铂prolifeprospan 20 with carmustine implant、善宁贝沙罗汀尼洛替尼泰索帝替莫唑胺三乙烯硫代磷酰胺(TESPA)、三氧化二砷戊柔比星长春碱维达扎(维达扎TM)、硫酸长春新碱、替尼泊苷(VM 26)、希罗达和链脲霉素)；生物制剂(诸如α干扰素、卡介苗、百克沙 埃罗替尼、赫赛汀白细胞介素-2、易瑞沙来那度胺、麦罗塔地尼白介素派罗欣来那度胺美罗华特罗凯(TarcevaTM)、反应停拉帕替尼万珂和泽娃灵(泽娃灵TM))；皮质类固醇，(诸如，地塞美松磷酸钠、强的松制剂和强的松龙制剂(Delta-))；激素疗法(诸如瑞宁得阿诺新康士得氨鲁米特醋酸亮丙瑞林氟他胺雷洛昔芬氟维司群弗隆氟甲睾酮甲地孕酮 他莫昔芬普来纳西(PlenaxisTM)和诺雷德)；以及放射性药物(诸如碘同位素氯化锶 和钐SM-153)。
在另一个实施方式中，其它治疗试剂是化疗试剂(同样指的是抗肿瘤试剂或者抗增殖试剂)，选自包括烷基化试剂的组；抗生素；抗代谢；排毒试剂；干扰素；多克隆或单克隆抗体；EGFR抑制剂；HER2抑制剂；组蛋白去乙酰化酶抑制剂；激素；有丝分裂抑制剂；MTOR抑制剂；多激酶抑制剂；丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂；酪氨酸激酶抑制剂；VEGF/VEGFR抑制剂；紫衫烷或紫衫烷衍生物、芳香酶抑制剂、蒽环霉素、微管靶向药物、拓扑异构酶毒物药物、分子靶标或酶的抑制剂(例如，激酶或蛋白质甲基转移酶)，胞苷类似物药物或任意化疗、抗肿瘤或抗增殖试剂，其在www.cancer.org/docroot/cdg/cdg_0.asp中列出。
示例性的烷基化试剂包括但不限于，环磷酰胺(癌得星；Neosar)；苯丁酸氮芥(瘤可宁)；苯丙氨酸氮芥(爱克兰)；卡氮芥(BiCNU)；白消安(白舒非)；环己亚硝脲(CeeNU)；氮烯唑胺(DTIC-Dome)；奥沙利铂(乐沙定)；卡氮芥(Gliadel)；异环磷酰胺(Ifex)；氮芥(盐酸氮芥)；白消安(马勒兰)；卡波铂(伯尔定)；顺铂(CDDP；Platinol)；替莫唑胺(Temodar)；噻替派(Thioplex)；苯达莫司汀(Treanda)；或链脲菌素(Zanosar)。
示例性的抗生素包括但不限于，多柔比星(阿霉素)；多柔比星脂质体(Doxil)；米托蒽醌(诺安托)；博来霉素(Blenoxane)；道诺霉素(柔红霉素盐酸盐)；道诺霉素脂质体(枸橼酸柔红霉素脂质体)；更生霉素(Cosmegen)；表柔比星(表阿霉素)；去甲氧基柔红霉素(Idamycin)；普卡霉素(Mithracin)；丝裂霉素(Mutamycin)；喷司他丁(Nipent)或戊柔比星(五星)。
示例性的抗代谢物包括但不限于，氟尿嘧啶(Adrucil)；卡培他滨(希罗达)；羟基脲(Hydrea)；巯嘌呤(Purinethol)；培美曲塞(爱宁达)；氟达拉滨(Fludara)；奈拉滨(Arranon)；克拉屈滨(Cladribine Novaplus)；氯法拉滨(Clolar)；阿糖胞苷(赛德萨-U)；地西他滨(达克金)；阿糖胞苷脂质体(DepoCyt)；羟基脲(Droxia)；普拉曲沙(Folotyn)；氟尿苷(FUDR)；吉西他滨(健择)；克拉屈滨(Leustatin)；氟达拉滨(Oforta)；甲氨蝶呤(MTX；Rheumatrex)；甲氨蝶呤(Trexall)；硫鸟嘌呤(Tabloid)；TS-1或阿糖胞苷(Tarabine PFS)。
示例性的排毒试剂包括但不限于氨磷汀(Ethyol)或巯乙磺酸钠(Mesnex)。
示例性的干扰素包括但不限于，干扰素alfa-2b(Intron A)或干扰素alfa-2a(Roferon-A)。
示例性的多克隆或单克隆抗体包括但不限于，曲妥单抗(赫赛汀)；奥法木单抗(Arzerra)；贝伐单抗(阿瓦斯丁)；利妥昔单抗(美罗华)；西妥昔单抗(爱必妥)；帕尼单抗(维克替比)；托西莫单抗/碘131托西莫单抗(百克沙)；阿仑单抗(Campath)；替伊莫单抗(泽娃灵；In-111；Y-90泽娃灵)；吉妥珠单抗(吉妥单抗)；依库丽单抗(Soliris)或狄诺塞麦。
示例性的EGFR抑制剂包括但不限于，吉非替尼(易瑞沙)；拉帕替尼(Tykerb)；西妥昔单抗(爱必妥)；埃罗替尼(特罗凯)；帕尼单抗(维克替比)；PKI-166；卡奈替尼(CI-1033)；马妥珠单抗(Emd7200)或EKB-569。
示例性的HER2抑制剂包括但不限于，曲妥单抗(赫赛汀)；拉帕替尼(Tykerb)或AC-480。
组蛋白去乙酰化酶抑制剂包括但不限于伏立诺他(Zolinza)。
示例性的激素包括但不限于它莫西芬(Soltamox；Nolvadex)；雷洛昔芬(Evista)；甲地孕酮(Megace)；亮丙瑞林(Lupron；Lupron Depot；Eligard；Viadur)；氟维司群(Faslodex)；来曲唑(弗隆)；曲普瑞林(Trelstar LA；Trelstar Depot)；依西美坦(Aromasin)；戈舍瑞林(诺雷德)；比卡鲁胺(康士得)；阿那曲唑(瑞宁得)；氟甲睾酮(Androxy；Halotestin)；甲羟孕酮(Provera；Depo-Provera)；雌氮芥(Emcyt)；氟他胺(Eulexin)；托瑞米芬(法乐通)；地加瑞克(Firmagon)；尼鲁米特(Nilandron)；阿巴瑞克(Plenaxis)；或睾内酯(Teslac)。
示例性的有丝分裂抑制剂包括但不限于，紫杉醇(Taxol；Onxol；Abraxane)；多西他赛(泰索帝)；长春新碱(Oncovin；Vincasar PFS)；长春碱(Velban)；依托泊苷(Toposar；Etopophos；VePesid)；长春碱(Velban)；依托泊苷(Toposar；Etopophos；VePesid)；替尼泊苷(威猛)；伊沙匹隆(Ixempra)；诺考达唑；埃博霉素；长春瑞滨(Navelbine)；喜树碱(CPT)；伊立替康(Camptosar)；拓扑替康(Hycamtin)；安吖啶或片螺素-D(LAM-D)。
示例性的MTOR抑制剂包括但不限于，依维莫司(Afinitor)或西罗莫司脂化物(驮瑞塞尔)；雷帕鸣，地磷莫司；或AP23573。
示例性的VEGF/VEGFR抑制剂包括但不限于，贝伐单抗(阿瓦斯丁)；索拉非尼(多吉美)；舒尼替尼(索坦)；兰尼单抗；哌加他尼；或凡德他尼。
示例性的微管靶向药物包括但不限于，泰素、多西他赛、长春新碱、长春碱、诺考达唑、埃博霉素和去甲长春碱。
示例性的拓扑异构酶毒药物，替尼泊苷,依托泊苷,阿霉素,喜树碱，道诺霉素,更生霉素,米托蒽醌，安吖啶，表柔比星和去甲氧基柔红霉素。
示例性的紫衫烷或紫衫烷衍生物包括但不限于，特素和多西他赛。
示例性的一般化疗、抗肿瘤、抗增殖试剂包括但不限于，六甲蜜胺(克瘤灵)；异维甲酸(爱优痛；Amnesteem；Claravis；Sotret)；维甲酸(Vesanoid)；阿扎胞苷(维达扎)；硼替佐米(万珂)天冬酰胺酶(爱施巴)；左旋咪唑(Ergamisol)；米托坦(Lysodren)；甲基苄肼(Matulane)；培门冬酶(Oncaspar)；地尼白介素(Ontak)；卟菲尔钠(光敏素)；阿地白介素(Proleukin)；来那度胺(Revlimid)；贝沙罗汀(Targretin)；萨力多胺(反应停)；西罗莫司脂化物(驮瑞塞尔)；三氧化二砷(Trisenox)；维替泊芬(维速达尔)；含羞草素(含羞草氨酸)；(1M喃氟啶-0.4M 5-氯-2,4-二羟基嘧啶-1M氧嗪酸钾)，或洛伐他汀
在另一个方面，其它治疗试剂是化疗试剂或细胞素，诸如G-CSF(粒细胞集落刺激因子)。
在另一个方面，其它治疗试剂可以是标准化疗联用药，诸如，但不限于，CMF(环磷酰胺、甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶)，CAF(环磷酰胺、阿霉素和5-氟尿嘧啶)，AC(阿霉素和环磷酰胺)，FEC(5-氟尿嘧啶、表柔比星和环磷酰胺)，ACT或ATC(阿霉素、环磷酰胺和泰素)，利妥昔单抗,希罗达(卡培他滨)，顺铂(CDDP),卡铂,TS-1(喃氟啶、吉美嘧啶和otastatpotassium，摩尔比1:0.4:1)，喜树碱-11(CPT-11,伊立替康或CamptosarTM)，CHOP(环磷酰胺、羟基道诺霉素、长春碱和泼尼松或泼尼松龙)，R-CHOP(利妥昔单抗、环磷酰胺、羟基道诺霉素、长春碱、泼尼松或泼尼松龙)或CMFP(环磷酰胺、甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶和泼尼松)。
在另一个方面，其它治疗试剂可以是酶抑制剂，诸如受体激酶或非受体激酶。受体和非受体激酶是，例如，酪氨酸激酶或丝氨酸/苏氨酸激酶。本文中所描述的激酶抑制剂是小分子、多核酸、多肽或抗体。
示例性的激酶抑制剂包括但不限于，贝伐单抗(以VEGF为靶标)，BIBW 2992(以EGFR和Erb2为靶标)，西妥昔单抗/爱必妥(以Erb1为靶标)，伊马替尼/格列卫(以Bcr-Abl为靶标)，曲妥单抗(以Erb2为靶标)，吉非替尼/易瑞沙(以EGFR为靶标)，兰尼单抗(以VEGF为靶标)，哌加他尼(以VEGF为靶标)，埃罗替尼/特罗凯(以Erb1为靶标)，尼罗替尼(以Bcr-Abl为靶标)，拉帕替尼(以Erb1和Erb2/Her2为靶标)，GW-572016/二甲苯磺酸拉帕替尼(以HER2/Erb2为靶标)，帕尼单抗/维克替比(以EGFR为靶标)，凡德他尼(以RET/VEGFR为靶标)，E7080(多个靶标，包括RET和VEGFR)，赫赛汀(以HER2/Erb2为靶标)，PKI-166(以EGFR为靶标)，卡奈替尼/CI-1033(以EGFR为靶标)，舒尼替尼/SU-11464/索坦(以EGFR和FLT3为靶标)，马妥珠单抗/Emd7200(以EGFR为靶标)，EKB-569(以EGFR为靶标)，Zd6474(以EGFR和VEGFR为靶标)，PKC-412(以VEGR和FLT3为靶标)，瓦他拉尼/Ptk787/ZK222584(以VEGR为靶标)，CEP-701(以FLT3为靶标)，SU5614(以FLT3为靶标)，MLN518(以FLT3为靶标)，XL99(以FLT3为靶标),VX-322(以FLT3为靶标),Azd0530(以SRC为靶标),BMS-354825(以SRC为靶标),SKI-606(以SRC为靶标),CP-690(以JAK为靶标),AG-490(以JAK为靶标)，WHI-P154(以JAK为靶标),WHI-P131(以JAK为靶标),索拉非尼/多吉美(以RAF激酶、VEGFR-1、VEGFR-2、VEGFR-3、PDGFR-β、KIT、FLT-3和RET为靶标),达沙替尼/Sprycel(BCR/ABL和Src),AC-220(以Flt3为靶标),AC-480(以所有HER蛋白“panHER”为靶标),二磷酸莫替沙尼(以VEGF1-3、PDGFR和c-kit为靶标),狄诺塞麦(以RANKL为靶标，抑制SRC),AMG888(以HER3为靶标)和AP24534(多靶标，包括Flt3)。
示例性的丝氨酸/苏氨酸蛋白酶抑制剂包括但不限于雷帕鸣(Rapamune，以mTOR/FRAP1为靶标)、Deforolimus(以mTOR为靶标)、Certican/依维莫司(Everolimus)(以mTOR/FRAP1为靶标)、AP23573(以mTOR/FRAP1为靶标)、Eril/盐酸法舒地尔(以RHO为靶标)、夫拉平度(Flavopiridol)(以CDK为靶标),Seliciclib/CYC202/Roscovitrine(以CDK为靶标),SNS-032/BMS-387032(以CDK为靶标),鲁伯斯塔(以PKC为靶标)、Pkc412(以PKC为靶标)、苔藓虫素(Bryostatin)(以PKC为靶标)、KAI-9803(以PKC为靶标)、SF1126(以PI3K为靶标)、VX-680(以极光激酶(Aurorakinase)为靶标)、Azd1152(以极光激酶为靶标)、Arry-142886/AZD-6244(以MAP/MEK为靶标)、SCIO-469(以MAP/MEK为靶标)、GW681323(以MAP/MEK为靶标)、CC-401(以JNK为靶标)、CEP-1347(以JNK为靶标)和PD 332991(以CDK为靶标)。
示例性的酪氨酸激酶抑制剂包括但不限于埃罗替尼(特罗凯)；吉非替尼(易瑞沙)；伊马替尼(格列卫)；索拉非尼(多吉美)；舒尼替尼(索坦)；曲妥单抗(赫赛汀)；贝伐单抗(阿瓦斯丁)；利妥昔单抗(美罗华)；拉帕替尼(Tykerb)；西妥昔单抗(爱必妥)；帕尼单抗(维克替比)；依维莫司(Afinitor)；阿仑单抗(Campath)；吉妥珠单抗(吉妥单抗)；西罗莫司脂化物(驮瑞塞尔)；帕唑帕尼(Votrient)；达沙替尼(Sprycel)；尼罗替尼(Tasigna)；瓦他拉尼(Ptk787；ZK222584)；CEP-701；SU5614；MLN518；XL999；VX-322；Azd0530；BMS-354825；SKI-606CP-690；AG-490；WHI-P154；WHI-P131；AC-220；或AMG888。
本发明提供了联合治疗的方法，其中将包含式(IIa)的化合物或其药学上可接受的盐的组合物以及一种或多种其它治疗试剂向需要治疗疾病或癌症的主体施用。联合治疗还可以被向癌细胞施用以抑制增殖或诱导细胞死亡。一个方面，式(IIa)的化合物或其药学上可接受的盐的施用先于本发明中含有式(IIa)化合物或其药学上可接受的盐的组合物以及一种或多种其它治疗试剂的施用。在一个方面，式(IIa)化合物或其药学上可接受的盐的施用先于一种或多种治疗试剂的施用，以使得其它治疗试剂在单一组合物中或两个或多个组合物中施用，例如同时、顺序或交替施用。
在一个实施方式中，本发明的组合物包括式(IIa)的化合物或其药学上可接受的盐以及一种或多种抗癌试剂，例如CHOP(环磷酰胺、羟基道诺霉素、长春碱和泼尼松或泼尼松龙)或R-CHOP(利妥昔单抗、环磷酰胺、羟基道诺霉素、长春碱和泼尼松或泼尼松龙)。在一个实施方式中，本发明的组合物包括式(IIa)化合物或其药学上可接受的盐以及泼尼松或泼尼松龙。本发明的方法包括施用式(IIa)的化合物或其药学上可接受的盐以及抗癌试剂联合治疗，其中抗癌试剂是CHOP、R-CHOP、泼尼松或泼尼松龙。
在某些实施方式中，“联合治疗”意在包括这些治疗试剂顺序方式的施用，其中，每种治疗试剂在不同时刻施用，以及这些治疗试剂或者至少两种治疗试剂同时或以实质上同时的方式施用。可以通过例如向主体施用每种治疗试剂具有固定比例的单个胶囊，或者多个胶囊(其中每种治疗试剂在单个胶囊中)来实现同时施用。每种治疗试剂的顺序或实质上同时施用可以通过任何合适的途径实现，包括但不限于口服途径、静脉途径、肌内途径，以及通过黏膜组织的直接吸收。治疗试剂可以通过相同途径或不同途径施用。例如，所选用的组合的第一种治疗试剂可以通过静脉内注射施用，而该组合的其他治疗试剂可以为口服施用。可选地，例如所有治疗试剂可以通过口服施用或所有治疗试剂可以通过静脉内注射施用。治疗试剂也可以交替施用。
在本发明的某些方面，本发明所描述的联合治疗可以在治疗疾病或癌症中导致协同作用。“协同作用”被定义为治疗试剂的联用的效果强于任意所给试剂单独施用的效果的总和。协同作用也可以是任意化合物或其它治疗试剂作为单独试剂施用时所不能达到的效果。协同作用可以包括但不限于通过减小肿瘤尺寸、抑制肿瘤增长或增加主体存活率的治疗癌症的效果。协同作用还可以包括降低癌细胞的生存力、诱发癌细胞死亡以及抑制或延迟癌细胞生长。
在本发明的某些方面中，“联合治疗”还包括前文所描述的治疗试剂的施用与其它生物活性组分和非药物疗法进一步联用(例如，手术或放射治疗)。当联合治疗进一步包含非药物治疗时，该非药物治疗可以在任意合适的时间进行，只要从治疗试剂和非药物治疗的结合的共同作用中能够得到有益效果。例如，在合适的情况下，当非药物治疗临时从治疗药剂的施用中移除时(可能是数天或者甚至数周)，仍能够得到有益的效果。
在另一个方面，本发明的组合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢产物、类似物或其衍生物可以与放射治疗联合施用。放射治疗也可以作为多试剂治疗的一部分与本发明的组合物以及本文中描述的另一种化疗试剂联合施用。
本发明还提供药学上可接受的组合物，其包含式(IIa)的化合物或其药学上可接受的盐以及一种或多种本文描述的其它治疗试剂，以治疗或预防本文描述的疾病或病症的剂量与药学上合适的载体或赋形剂混合。在一个方面，本发明还提供含有任意表I中的化合物或其药学上可接受的盐以及一种或多种治疗试剂的药物组合物以治疗或预防本文描述的疾病或病症的剂量与药学上合适的载体或赋形剂混合的药物组合物。在另一个方面，本发明还提供含有化合物44
或其药学上可接受的盐，以及一种或多种治疗试剂的药物组合物，以治疗或预防本文描述的疾病或病症的剂量与药学上合适的载体或赋形剂混合的药物组合物。本发明的药物组合物也可以与其它治疗试剂或治疗方法同时地、顺序地或交替地联用施用。
本发明的组合物的混合物也可以以简单的混合物或按合适配方制作的药物组合物向病人施用。例如，本发明的一个方面涉及涉及药物组合物，其含有药学有效剂量的式(IIa)的EZH2抑制剂，或其药学上可接受的盐、水合物、对映异构体或立体异构体；一种或多种其它治疗试剂，以及药学上可接受的稀释剂或载体。
“药物组合物”是一种配方，其含有适于向主体施用的形式的本发明的化合物的制剂。在一个实施方式中，药物组合物呈大块或单位剂量形式。单位剂量形式是多种形式中的任意，包括例如胶囊、IV包、片剂、气溶胶吸入器或药瓶上的单个泵。单位剂量的组合物中活性组分的量(例如所公开化合物或其盐、水合物、溶剂化物或异构体的配方)为有效剂量，并且根据所涉及的具体治疗而改变。本领域技术人员将理解，有时需要根据病人的年龄和病症对剂量作出常规的改变。剂量还取决于施用途径。多途径被考虑在内，包括口服、肺部、直肠、非肠道、经皮、皮下、静脉内、肌内、腹腔、吸入、口腔、舌下、胸腔、鞘内、鼻内等。本发明的化合物局部或经皮施用的剂型包括粉末剂、喷雾剂、膏剂、贴剂、乳剂、洗液、凝胶、溶液、片剂和吸入剂。在一个实施方式中，活性化合物在无菌条件下与药学上可接受的载体以及任意所需的保存剂、缓冲剂或推进剂混合。
本文中所使用的术语“药学上可接受”指的是化合物、阴离子、阳离子、材料、组合物、载体和/或剂型，其在合理的医疗判断范围内，适合用于与人类和动物的组织接触，而无过量的毒性、刺激性、过敏反应或者其它问题或并发症，相应于合理的收益/风险比率。
“药学上可接受的赋形剂”是指在制备药物组合物中有用的赋形剂，其通常安全、无毒并且无生物学或其它方面不良性，并且包括可被接受用于在兽医学应用以及人类药学应用中的赋形剂。本说明书和权利要求书所使用的“药学上可接受的赋形剂”都包括一种或多于一种这种赋形剂。
本发明的药物组合物被配制成与预期的施用途径兼容。施用途径的示例包括非肠道的，例如，静脉内、皮内、皮下、口服(例如，吸入)、经皮(局部)和经黏膜施用。用于非肠道、皮内或皮下应用的溶液或悬浮液可以包括以下组分：用以注射的无菌稀释剂诸如水、盐溶液、固定油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶剂；抗菌试剂诸如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂诸如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂诸如乙二胺四乙酸；缓冲剂诸如醋酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐以及用于紧张性的调节的试剂诸如氯化钠或葡萄糖。pH可以通过酸或碱调节，例如氢氯酸或氢氧化钠。非肠道制剂可以被装在安瓿、一次性注射器或者玻璃或塑料制的多剂量瓶中。
本发明的组合物可以以多种广为人知的现用于化疗治疗中的方法向主体施用。例如，为了治疗癌症，本发明的化合物可以直接注射入肿瘤、注射入血流或体腔或口服或用片剂经皮肤施用。选用的剂量应该足以构成有效治疗而不过高以致导致不可接受的副作用。治疗后，在一段合理的时期内和期间应优选地对病人的疾病病症(例如，癌症、癌前等)和健康的状况严密监控。
本文所使用的术语“治疗有效剂量”或“治疗上有效的剂量”指的是治疗、改善或预防识别出的疾病或病症或者展现可检测到的治疗或抑制效果的药物制剂的量。该作用可以本领域内任意已知的实验方法检测。对于主体的准确有效的量将取决于主体的体重、体型和健康；病症的性质和程度；以及选用于施用的治疗或治疗的联合。给定情形下的治疗有效剂量可以在临床医师的技术和判断内通过常规实验检测。在一个优选的方面，将治疗的疾病或病症是癌症。在另一个方面，将治疗的疾病或病症是细胞增殖异常。
在某些的实施方式中，联合使用的每种治疗试剂的治疗有效剂量在联合使用时相比单独使用每个试剂的单一疗法低。这种较低的治疗有效剂量可以提供较低毒性的治疗方案。
对于任意化合物，治疗有效剂量可以在细胞培养试验中初步评估，例如，瘤性细胞，或在动物模型中，通常为大鼠、小鼠、兔子、狗或猪。动物模型还可以被用以确定合适的浓度范围和施用途径。这些信息可以在随后被用以确定向人体施用的有效剂量和施用途径。治疗/预防效果和毒性可以通过在细胞培养物或实验动物中的标准药学程序确定，例如，ED50(在种群中50％治疗有效的剂量)和LD50(对种群中50％的致死的剂量)。毒性作用和治疗作用之间的剂量比是治疗指数，并且其可以被表示为比率LD50/ED50。展现出高的治疗指数的药物组合物为优选。根据所用的剂型、病人的敏感性以及施用途径，剂量可以在此范围内变动。
剂量和施用被调节以提供足够水平的活性试剂或者保持所需的效果。应被考虑的因素包括疾病状态的严重程度、主体的总体健康状况、年龄、体重和主体的性别、饮食、施用的时间和频率、药物组合、反应敏感性以及对治疗的耐受性/反应。长效的药物组合物可以取决于具体制剂的半衰期和清除率，每3至4天、每周或每两周施用。
本发明的包含活性化合物的药物组合物可以通过广为人知的方法制备，例如通过常规的混合、溶解、粒化、包衣、磨细、乳化、封装、捕获或冻干工艺。药物组合物可以通过常规的方式制剂，使用一种或多种药学上可接受的载体，其包含药学可用的、促进活性化合物加工成制剂的赋形剂和/或佐药。当然，合适的制剂取决于所选的施用途径。
适于注射使用的药物组合物包括用于无菌可注射溶液或分散剂的临时制备的无菌水溶液(水溶性的)或分散剂和无菌粉末。对于静脉施用，适用的载体包括生理盐水、抑菌水、聚氧乙烯蓖麻油(Cremophor ELTM)(BASF,Parsippany,N.J.)或磷酸盐缓冲液(PBS)。在所有情况下，组合物必须是无菌的，并且应该是达到能易于注射的程度的流体。其必须在制造和储藏的条件下稳定，并且必须防止微生物诸如细菌和真菌的污染作用来保存。载体可以是溶剂或分散介质，其包含例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)和其合适的混合物。适宜的流动性可以例如通过使用涂层(诸如卵磷脂)、在分散的情况下通过所需颗粒尺寸的维持以及通过使用表面活性剂来维持。预防微生物作用可以通过多种抗菌和抗真菌试剂实现，例如对羟苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫汞撒等。在多种情况下，组合物中优选包括等渗剂，例如糖、多元醇(诸如甘露醇和山梨醇)和氯化钠。可注射组合物的延时吸收可以通过向组合物中包括延迟吸收的试剂例如单硬脂酸铝和明胶发生。
无菌可注射溶液可以通过以所需量在合适的溶剂中，与所需的一种上列举的成分或以上列举的成分的组合一起并入活性化合物，随后过滤除菌。通常，分散剂是通过将活性化合物并入包含基础分散介质和前文所枚举的其它所需成分的无菌载体制备的。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，制备方法是产出活性成分的粉末加上来自其先前无菌除菌过的溶液的任意额外的所需成分的真空干燥和冻干。
口服组合物通常包括惰性稀释剂或者可食用药学上可接受的载体。其可以被装在明胶胶囊内或压缩进片剂。出于口服治疗施用的目的，活性化合物可以加入赋形剂，并且以片剂、锭剂或胶囊的形式使用。口服组合物还可以通过用作漱口水的流体载体制备，其中流体载体中的化合物口服使用，并漱口、吐出或吞咽。药学上可兼容的粘合剂和/或佐药材料可以作为组合物的一部分被包括在内。片剂、丸剂、胶囊、锭剂等可以包含任意以下组分或者具有相似性质的化合物：连接物，诸如微晶纤维素、黄蓍胶或明胶；赋形剂诸如淀粉或乳糖，崩解剂诸如海藻酸、羧甲基淀粉(Primogel)、或玉米淀粉；润滑剂诸如硬脂酸镁或Sterotes；助流剂诸如胶态二氧化硅；甜味剂诸如蔗糖或糖精；或增味剂诸如薄荷、水杨酸甲酯或桔子香精。
对于通过吸入的施用，化合物以气雾喷雾的形式从包含合适推进剂(例如，如二氧化碳的气体或喷雾剂)的压力容器或分配器传递。
系统施用还可以通过经黏膜或经皮的方式进行。对于经黏膜或经皮施用，适于将渗入的屏障的渗透液被用在制剂中。该渗透剂是在本领域众所周知的，并且包括例如为了经黏膜施用的清洁剂、胆汁盐和梭链孢酸衍生物。经黏膜施用可以通过鼻用喷剂或栓剂实现。对于经皮施用，活性化合物被制成本领域所公知的油膏剂、涂膏剂、凝胶或乳剂。
活性化合物可以与将保护化合物防止从人体的快速排出的药学上可接受的载体一起制备，所述载体诸如受控释放制剂，包括移植物和微囊输送系统。可以使用生物可降解、生物可兼容的聚合物，诸如乙烯酯酸乙烯酯、聚酐类、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。制备这些制剂的方法对于本领域技术人员是显而易见的。材料还可以从Alza公司和Nova Pharmaceuticals公司从市场上购买得到。脂质体悬浮液(包括具有对病毒抗原的单克隆抗体的以被感染细胞为靶标的脂质体)也可以被用作药学上可接受的载体。这些可以根据本领域技术人员已知的方法制备，例如如美国专利4,522,811中所描述的。
以单位剂量形式配制口服或非肠道组合物对于施用的方便和剂量的均一性特别有利。本文所使用的单位剂量形式指的是适用于待治疗主体的单位剂量的物理离散的单元；每个含有被计算以产生所需治疗效果的预定量的活性化合物的单元与所需的药学载体结合。本发明的单位剂量形式的规格取决并直接基于活性化合物的独特性质以及所要实现的具体治疗效果。
在治疗应用中，本文所描述的EZH2抑制剂化合物的剂量、本文所描述的其它治疗试剂、含有式(IIa)化合物和一种或多种其它治疗试剂的组合物，或依照本发明使用的药物组合物将根据试剂、受药病人的年龄、体重和临床病症以及实施疗法的临床医生或从业者的经验和判断以及其它影响所选剂量的因素而改变。通常，该剂量应该能够足以致使肿瘤增长减缓，并且优选使其退化，并且也优选导致癌症的完全退化。剂量的范围可以是从大约0.01mg/kg每天至大约5000mg/kg每天。在优选的方面中，剂量的范围可以是从大约1mg/kg每天至大约1000mg/kg每天。在一个方面，剂量将以单一、分离或连续的剂量(该剂量可以对于病人的以kg计的体重、以m2计的体表面积和以年计的年龄而调整)在大约0.1mg/天至大约50g/天的范围内；大约0.1mg/天至大约25g/天；大约0.1mg/天至大约10g/天；大约0.1mg至大约3g/天；或大约0.1mg至大约1g/天。药物试剂的有效量是指提供如被临床医生或其它合格观测者所注意的可客观识别的改良的量。例如，病人中的肿瘤的退化可以参考肿瘤的直径来测量。肿瘤直径的减小表示退化。退化还可以由治疗停止后肿瘤不再复发表示。本文中所使用的术语“剂量有效形式”指的是在主体或细胞内产生所需的生物作用的活性化合物的量。
药物组合物可以与施用的说明书一起包括在容器、包装或分配体内。
本发明的组合物能够进一步形成盐。本发明的组合物每分子能够形成多于一个盐(例如单-、二-、三-)。所有这些形式也同样考虑在请求保护的发明的范围内。
本文中使用的“药学上可接受的盐”指的是本发明的化合物的衍生物，其中母体化合物通过制成其酸或碱盐改性。药学上可接受的盐的示例包括但不限于，碱性残余物诸如胺类的矿物或有机酸盐，酸性残余物诸如羧酸等的碱或有机盐。药学上可接受的盐包括常见的无毒盐或形成自，例如无毒的无机或有机酸的，母体化合物的季铵盐。例如，这种常见的无毒盐包括但不限于那些衍生自无机和有机酸的，其选自2-乙酰氧基苯甲酸、2-羟基乙烷磺酸、乙酸、抗坏血酸、苯磺酸、苯甲酸、碳酸氢、碳酸、柠檬酸、依地酸、乙烷二磺酸、1,2-乙烷磺酸、反丁烯二酸、葡庚糖酸、谷氨酸、乙醇酸、乙醇酰氨基苯砷酸(glycollyarsanilic)、己基间苯二酚酸、海巴明(hydrabamic)、氢溴酸、盐酸、氢碘酸、羟基马来酸、羟基萘甲酸、羟乙磺酸、乳酸、乳糖酸、月桂基磺酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、萘磺酸、硝酸、草酸、双羟萘酸、泛酸、苯乙酸、磷酸、聚半乳糖醛酸、丙酸、水杨酸、硬脂酸、亚乙酸(subacetic)、琥珀酸、氨基磺酸、磺胺酸、硫酸、鞣酸、酒石酸、甲苯磺酸和常出现的氨基酸，例如甘氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、精氨酸等。
药学上可接受的盐的其它示例包括己酸、环戊烷丙酸、丙酮酸、丙二酸、3-(4-羟基苯甲酰)苯甲酸、肉桂酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟脑磺酸、4-甲基二环-[2.2.2]-辛-2-烯-1-羧酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、己二烯二酸等。本发明还包含当出现在母体化合物中的酸性质子被金属离子例如，碱金属离子、碱土金属离子或铝离子替换时；或与有机碱诸如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨丁三醇、N-甲基葡糖胺等配合时形成的盐。
应该理解，如本文所限定，所有涉及的药学上可接受的盐均包括相同盐的添加溶剂的形态(溶剂化物)或晶体形态(多晶型物)。
本发明的化合物还可以作为酯制备，例如，药学上可接受的酯。例如，化合物中的羧酸官能团可以被转化为其相应的酯，例如，甲基、乙基或其它酯。同样，化合物中的醇基团可以被转化为其相应的酯，例如，乙酸酯、丙酸酯或其它酯。
本发明的组合物还可以作为前药制备，例如，药学上可接受的前药。术语“前-药”和“前药”在本文中交替使用，并且指的是在体内释放活性母药的任意化合物。由于已知前药能增强药物的很多理想的性质(例如，溶解性、生物利用度、可制造性等)，本发明的化合物可以以前药的形式传输。因此，本发明意在覆盖先前要求保护的化合物、其传输方法以及包含所述化合物的组合物的前药。“前药”意在包括任意共价键合的载体，当该前药被施用主体时，所述载体在体内释放本发明的活性母药。本发明中的前药通过改变出现在化合物中的官能团制备，所述改变在常规操控中或在体内被切分成母化合物。前药包括本发明的化合物，其中羟基、氨基、巯基、羧基或羰基基团键合至任意可能在体内被切分的基团以分别形成游离羟基、游离氨基、游离巯基、游离羧基或游离羰基基团。
前药的例子包括但不限于本发明的化合物中的酯(例如，乙酸酯、二烷基氨基乙酸酯、甲酸酯、磷酸酯、硫酸酯和苯甲酸酯衍生物)和羟基官能团的氨基甲酸酯(例如，N,N-二乙基氨基羰基)，羧酸官能团的酯(例如，乙基酯、吗啉基乙醇酯)，氨基官能团的N-酰基衍生物(例如，N-乙酰基)，N-曼尼希碱，西佛碱和烯胺酮，肟，乙缩醛，缩酮和酮和醛官能团的烯醇酯等。参见Bundegaard,H.,Design of Prodrugs,p1-92,Elesevier,New York-Oxford(1985)。
组合物或其药学上可接受的盐、酯或前药经口服、经鼻、经皮、经肺、吸入、口腔、舌下、腹腔、皮下、肌肉、静脉、直肠、胸膜内、鞘内和非肠道施用。在一个实施方式中，化合物是口服施用的。本领域技术人员将识别特定施用途径的优点。
使用化合物的剂量规则是根据各种因素选择的，其包括病人的类型、种族、年龄、体重、性别和医疗状况；待治疗病变的严重程度；施用途径；病人的肝肾功能；以及所使用的具体化合物或其盐。一般的医师或兽医可以容易地确定并开出用以预防、抵御或组织病变进程的有效剂量的药。
本发明中所公开化合物的配制和施用的技术可以在Remington:the Science andPractice of Pharmacy,19th edition,Mack Publishing Co.,Easton,PA(1995)中找到。在一个实施方式中，本文中描述的化合物及其药学上可接受的盐与药学上可接受的载体或稀释剂一同用在药物制剂中。合适的药学上可接受的载体包括惰性固体填充剂或稀释剂和无菌水或有机溶液。化合物将会以足以提供在本文所描述的范围内的所需剂量的量出现在这种药物组合物中。
本文所使用的所有百分比和比率，除非另有指明，是按重量计的。在不同的实施例中，本发明的其它特点和优点显而易见。所提供的实施例阐明对于实践本发明有用的组分和方法。实施例不限制所请求保护的发明。基于本说明书，本领域技术人员可以识别并应用其它对于实践本发明有用的组分和方法。
本发明提供治疗病症和疾病的组合物和方法，其过程可以通过调节组蛋白或其它蛋白质的甲基化状态影响，其中所述甲基化状态至少部分是由EZH2的活性介导的。对组蛋白甲基化状态的调节可以转而影响由甲基化激活的靶标基因的表达水平，和/或由甲基化抑制的靶标基因。所述方法包括向需要这种治疗的主体施用，向需要这种治疗的主体施用治疗有效量的本发明的组合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物、变体或溶剂化物。
至少基于已发现异常的组蛋白甲基化与某些癌症和癌前状态相关的事实，使用突变EZH2在主体体内治疗癌症或癌前状态的方法包含向需要治疗的主体施用治疗有效量的抑制甲基化的化合物。在一个实施方式中，用于治疗主体癌症或癌前状态的方法包括向需要治疗的主体施用治疗有效量的化合物，其抑制未甲基化的H3-K27向单甲基化的H3-K27(H3-K27me1)的转化。在一个实施方式中，用于治疗主体癌症或癌前状态的方法包括向需要治疗的主体施用治疗有效量的化合物，其抑制单甲基化的H3-K27(H3-K27me1)向二甲基化的H3-K27(H3-K27me2)的转化。在一个实施方式中，用于治疗主体癌症或癌前状态的方法包括向需要治疗的主体施用治疗有效量的化合物，其抑制H3-K27me2向三甲基化的H3-K27(H3-K27me3)的转化。在一个实施方式中，用于治疗主体癌症或癌前状态的方法包括向需要治疗的主体施用治疗有效量的化合物，其抑制H3-K27me1向H3-K27me2的转化以及H3-K27me2向H3-K27me3的转化。注意当不存在细胞内组蛋白或蛋白甲基化的全局增长时，在关键基因位点内，疾病特异性的甲基化增加可能出现在染色体处是重要的。例如，关键的疾病相关基因处，异常的高甲基化对应全局组蛋白或蛋白的高甲基化背景的出现时重要的。
通常，甲基化的调节剂可以用于调控细胞增殖。例如，在一些情况下，过度的增殖可能通过减少甲基化的试剂降低，与之相反，不充分的增殖可能被增加甲基化的试剂促进。因此，可能被治疗的疾病包括高增殖疾病，诸如良性细胞增长和恶性细胞增长(癌症)。
EZH2介导的甲基化起部分作用的失调可以是癌症、细胞增殖失调或癌前状态。本发明进一步提供本发明的组合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物、变体或溶剂化物对于需要这种治疗的主体，对于制备用于治疗癌症的药物的用途。示例性的可能被治疗的癌症包括淋巴瘤，其包括非霍奇金淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤(FL)和弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)；黑色素瘤；以及白血病，其包括CML。示例性的癌前状态包括骨髓增生异常综合征(MDS；早先被认为是白血病的前期)。
一般来说，通常是甲基化调节剂的化合物可以用于调节细胞增殖。例如，在一些情况下，过度的增殖可能通过减少甲基化的试剂降低，与之相反，不充分的增殖可能被增加甲基化的试剂促进。因此，可能被治疗的疾病包括高增殖疾病，诸如良性细胞增长和恶性细胞增长。
本文所使用的“需要其的主体”是患有其中EZH2介导的蛋白质甲基化起部分作用的失调主体，或相对于普通人群，发展成此失调的风险增加的主体。需要治疗的主体可以患有癌前状态。优选地，需要治疗的主体患有癌症。“主体”包括哺乳动物，所述不如动物可以是，例如，任意哺乳动物，如，人类、灵长类、鸟类、小鼠、大鼠、家禽、狗、猫、牛、马、山羊、骆驼、绵阳或猪。优选地，所述哺乳动物是人类。
本发明的主体包括任何被诊断有症状或有风险发展为癌症或癌前状态的人类主体。本发明适用的主体包括任意表达突变EZH2的人类主体。例如，包含一种或多种突变的EZH2，其中该突变是置换突变、点突变、无义突变、错义突变、缺失或插入或任意其它本文所描述的EZH2突变。
需要其的主体可能患有顽固性或耐药性的癌症。“顽固性或耐药性的癌症”指的是不对治疗起反应的癌症。癌症可能在治疗开始时耐药或者其可能在治疗中变得耐药。在一些实施方式中，需要治疗的主体接受了所有已知对于癌症治疗有效的疗法并失败。在一些实施方式中，需要治疗的主体接受了至少一种在先疗法。在特定实施方式中，该在先疗法是单一疗法。在特定实施方式中，该在先疗法是联合治疗。
在一些实施方式中，作为先前治疗的结果，需要治疗的主体可能患有继发癌症。“继发癌症”指的是由于或源于先前的致癌疗法，诸如化疗引起的癌症。
主体还可以展现对EZH2组蛋白甲基转移酶抑制剂或其它治疗试剂的抗药性。
本发明还描述了为患有癌症的主体选择联合治疗的方法的特点。该方法包括以下步骤：在来自主体的样品中检测出一种或多种本文所描述的EZH2突变；并且以出现的一种或多种EZH2突变为基础选择用于治疗癌症的联合治疗。在一个实施方式中，该疗法包括向主体施用本发明的组合物。在一个实施方式中，该疗法进一步包括向主体施用治疗有效量的本发明的组合物。EZH2突变可以使用任意本领域已知的方法检测。美国专利公开US20130040906中描述了更多方法，本文通过引用并入其全文。
本文描述的方法和用途包括在来自需要治疗的主体的样品中检测一种或多种本文描述的EZH2突变的步骤，其先于和/或后于向主体施用本发明的组合物(例如，包含式(IIa)化合物的组合物或其药学上可接受的盐以及一种或多种治疗试剂)。受测样品中本文所描述的一种或多种EZH2突变的出现表示主体对本发明的联合治疗有反应。
本发明通过在主体体内基因扫描一种或多种本文所描述的EZH2突变为需要治疗的主体提供个人化的药物、治疗和/或癌症疗法。例如，本发明通过检测主体对联合治疗的反应以及当主体对所述联合治疗有反应是向主体施用本发明的组合物，提供治疗或减轻需要治疗的主体的癌症或癌前状态症状的方法。所述反应是通过从主体采集样品并且检测一种或多种本文所描述的EZH2突变测定的，并且这一种或多种本文所描述的EZH2突变表示主体对本发明的组合物有反应。当主体的反应被测定时，可以给与治疗有效剂量的组合物，例如，含有式(IIa)化合物或其药学上可接受的盐的组合物以及一种或多种治疗合计。治疗有效量的组合物可以由本领域的一般技术人员测定。
本文所使用的术语“反应(responsiveness)”可以与术语“反应性(responsive)”、“敏感(sensitive)”和“敏感性(sensitivity)”，并且其意思是当被施用本发明的组合物时主体显示治疗反应，例如，主体的肿瘤细胞或肿瘤组织经历凋亡和/或坏死，和/或显示生长、分裂、增殖的减少。该术语的意思还有当被施用本发明的组合物时主体将会具有或具有相对于广大人群较高的可能性显示治疗反应，例如，主体的肿瘤细胞或肿瘤组织经历凋亡和/或坏死，和/或显示生长、分裂、增殖的减少。
“样品”指的是任意来自主体的生物样品，包括但不限于，细胞、组织样品、体液(包括但不限于粘液、血液、血浆、血清、尿液、唾液和精液)、肿瘤细胞和肿瘤组织。优选地，该样品选自骨髓、外周血细胞、血液、血浆和血清。可以在治疗或测试过程中由主体提供样品。可选地，样品可以由临床医师在本领域的常规实践中获得。
本文中所使用的术语“细胞增殖失调”指的是病变，其中细胞的无调节和/或异常增长会导致不希望的病变或疾病的发展，其可能是癌性的或不是癌性的。示例性的细胞增殖失调包括但不限于，赘生物、良性肿瘤、恶性肿瘤、癌前状态、原位肿瘤、实体肿瘤、免疫学肿瘤、血液肿瘤、癌症、癌、白血病、淋巴瘤、肉瘤和快速分裂的细胞。本文使用的术语“快速分裂的细胞”定义为任意细胞，其以超出或大于预期的或观测自同一组织的相邻或并列的细胞的速率分裂。细胞增殖失调包括癌症。优选地，本文提供的方法用以治疗或减轻癌症的症状。术语“癌症”包括实体瘤以及血液肿瘤和/或恶性肿瘤。“癌前细胞”或“癌前的细胞”是显示癌前或癌前的病变细胞增殖失调的细胞。“癌细胞”或“癌的细胞”是显示癌症的细胞增殖失调的细胞。任意可重现的测定方法可以被用于鉴定癌症或癌前细胞。组织样品(例如，活检样品)的癌细胞或癌前细胞可以通过组织学分类或分级鉴定。癌细胞或癌前细胞可以通过使用合适的分子标记鉴定。
示例性的非癌性病变或失调包括但不限于，类风湿性关节炎；炎症；自身免疫病；淋巴增殖病变；肢端肥大症；类风湿性脊椎炎；骨关节炎；痛风，其它关节炎病变；败血症；感染性休克；内毒素性休克；革兰阴性细菌败血症；中毒性休克综合征；哮喘；成人呼吸窘迫综合征；慢性阻塞性肺病；慢性肺部炎症；炎症性肠病；克罗恩氏病；牛皮癣；湿疹；溃疡性结肠炎；胰囊性纤维化；肝纤维化；急性和慢性肾脏病；过敏性大肠综合征；局部麻痹(pyresis)；再狭窄；脑型疟疾；中风和缺血性损伤；神经创伤；阿兹海默病；亨丁顿舞蹈症；帕金森病；急慢性疼痛；过敏性鼻炎；过敏性结膜炎；慢性心力衰竭；急性冠脉综合征；恶疾；疟疾；麻风；利什曼病；莱姆病；莱特尔氏病；急性滑膜炎；肌肉变性，滑液囊炎；肌腱炎；腱鞘炎；患疝气、破裂或椎间盘突出症；骨硬化病；血栓症；再狭窄；硅肺病；肺动脉瓣狭窄；骨吸收疾病诸如骨质疏松症；移植物抗宿主反应；多发性硬化；狼疮；纤维肌痛；艾滋病和其它病毒性疾病诸如带状疱疹、单纯疱疹I或II、流感病毒和巨细胞病毒；以及糖尿病。
示例性的癌症包括但不限于，肾上腺皮质癌、艾滋病相关的癌症、艾滋病相关的淋巴瘤、肛门癌、直肠癌、肛管癌、阑尾癌、儿童小脑星形细胞瘤、儿童脑星形细胞瘤、基底细胞癌、皮肤癌(非黑色素瘤)、胆道癌、肝外胆管癌、肝内胆管癌、膀胱癌、尿路膀胱癌、骨关节癌、骨肉瘤和恶性纤维组织细胞瘤、脑癌、脑瘤、脑干胶质瘤、小脑星形细胞瘤、脑星形细胞瘤/恶性胶质瘤、室管膜瘤、成神经管细胞瘤、幕上原始神经外胚层肿瘤、视通路和下丘脑胶质瘤、乳腺癌、支气管腺瘤/良性瘤、类癌瘤、胃肠道癌、神经系统癌、神经系统淋巴瘤、中枢神经系统癌症、中枢神经系统淋巴瘤、子宫颈癌、儿童癌症、慢性淋巴性白血病、慢性骨髓性白血病、慢性骨髓增生异常、结肠癌、皮肤T细胞淋巴瘤、淋巴瘤、蕈样肉芽肿、塞扎里综合征、子宫内膜癌、食管癌、颅外生殖细胞肿瘤、性腺外生殖细胞肿瘤、肝外胆管癌、眼癌、眼内黑色素瘤、成视网膜细胞瘤、胆癌、胃部(胃)癌、胃肠道类癌肿瘤、胃肠道间质瘤(GIST)、生殖细胞瘤、卵巢生殖细胞肿瘤、妊娠性滋养层细胞瘤、头部和颈部癌症、肝细胞(肝)癌、霍奇金淋巴瘤、下咽癌、眼内黑色素瘤、眼癌(ocular cancer)、胰岛细胞瘤(内分泌胰腺)、卡波西肉瘤、肾癌(kidney cancer)、肾癌(renal cancer)、肾癌(kidneycancer)、喉癌、急性淋巴细胞白血病、急性髓细胞样白血病、慢性淋巴性白血病、慢性髓细胞性白血病、毛细胞白血病、唇和口腔癌、肝癌、肺癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、艾滋病相关淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血、成神经管细胞瘤、黑色素瘤、眼内(眼)黑色素瘤、Merkel细胞癌、恶性间皮癌、间皮瘤、颈部转移性鳞状上皮癌、口腔癌、舌癌、多发性内分泌肿瘤综合征、蕈状真菌病、骨髓增生异常综合征、骨髓增生异常/骨髓增生性疾病、慢性髓细胞性白血病、急性髓性白血病、多发性骨髓瘤、慢性骨髓增殖性疾病、鼻咽癌、成神经细胞瘤、口腔癌、口腔癌(oral cavity cancer)、口咽癌、卵巢癌、卵巢上皮癌、卵巢低潜在恶性肿瘤、胰腺癌、胰岛细胞胰腺癌、鼻腔和鼻窦癌、甲状旁腺癌、阴茎癌、鼻咽癌、嗜铬细胞瘤、松果体母细胞瘤和小脑幕上原始神经外胚层肿瘤、垂体瘤、浆细胞肿瘤/多发性骨髓瘤、胸膜肺母细胞瘤、前列腺癌、直肠癌、肾盂输尿管、移行细胞癌、成视网膜细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾腺癌、尤文氏肉瘤家族肿瘤、卡波西肉瘤、软组织肉瘤、子宫癌、子宫肉瘤、皮肤癌(非黑色素瘤)、皮肤癌(黑色素瘤)、Merkel细胞癌、小肠癌、软组织肉瘤、鳞状细胞癌、胃(胃部)癌、幕上原始神经外胚层肿瘤、睾丸癌、喉癌、胸腺瘤、胸腺瘤和胸腺癌、甲状腺癌、肾盂输尿管和其它泌尿器官的移行细胞癌、妊娠滋养细胞肿瘤、尿道癌、子宫内膜癌、子宫肉瘤、子宫体癌、阴道癌、外阴癌和威尔姆瘤。
“血液系统细胞增殖失调”是涉及血液系统细胞的细胞增殖失调。血液系统细胞增殖失调可以包括淋巴瘤、白血病、髓样肿瘤、肥大细胞肿瘤、脊髓发育不良、良性单克隆丙球蛋白病、淋巴瘤样肉芽肿病、淋巴瘤样丘疹病、真性红细胞增多、慢性粒细胞白血病、特发性髓样化生和特发性血小板增多症。血液系统细胞增殖失调可以包括血液系统细胞的增生、发育异常和化生。优选地，本发明的化合物可以被用于治疗选自本发明的血液癌或选自本发明的血液细胞增殖失调的癌症。本发明的血液癌可以包括多发性骨髓瘤、淋巴瘤(包括霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、儿童淋巴瘤以及淋巴细胞和皮肤起源的淋巴瘤)，白血病(包括儿童白血病、毛细胞白血病、急性淋巴性白血病、急性髓细胞白血病、慢性淋巴性白血病、慢性粒细胞白血病、慢性髓细胞暴雪并和肥大细胞白血病)、髓样肿瘤和肥大细胞肿瘤。
“肺部细胞增殖失调”是涉及肺细胞的细胞增殖失调。肺部细胞增殖失调可以包括影响肺细胞的所有形式的细胞增殖失调。肺部细胞增殖失调可以包括肺癌、肺部癌前状态、肺部良性赘生物或病变、以及肺部恶性赘生物和病变、以及体内除肺外其它组织和器官能的转移的病变。优选地，本发明的组合物可以被用于治疗肺癌或肺部细胞增殖失调。肺癌可以包括肺部各种形式的癌症。肺癌可以包括恶性肺部肿瘤、原位癌、典型类癌肿瘤、和非典型类癌肿瘤。肺癌可以包括小细胞肺癌(“SCLC”)、非小细胞肺癌(“NSCLC”)、鳞状细胞癌、小细胞癌、大细胞癌、腺细胞癌和间皮瘤。肺癌可以包括“瘢痕癌”、细支气管肺泡癌、巨细胞癌、梭细胞癌和大细胞神经内分泌癌。肺癌可以包括具有组织学和超微结构特异性(例如，混合细胞类型)的肺部肿瘤。
肺部细胞增殖失调可以包括所有影响肺部细胞的细胞增殖失调。肺部细胞增殖失调可以包括肺癌、肺部的癌前状态。肺部细胞增殖失调可以包括复层扁平上皮对柱状上皮组织的替代和胃黏膜异型增生。暴露在吸入有害环境试剂，诸如香烟盒石棉，中的个体，其发展肺部细胞增殖失调的风险可能增高。可能使个体发展肺部细胞增殖失调的先前肺部疾病包括慢性间质性肺病、坏死性肺病、硬皮病、类风湿病、肉状瘤病、间质性肺炎、肺结核、反复肺炎、特发性肺纤维化、肉芽肿、石棉沉滞症、纤维化、齿槽炎和霍奇金氏病。
“结肠细胞增殖失调”是涉及结肠细胞的细胞增殖失调。优选地，结肠细胞增殖失调是结肠癌。优选地，本发明的组合物可以被用于治疗结肠癌或结肠细胞增殖失调。结肠癌可以包括所有结肠的癌症。结肠癌可以包括散发性和遗传性结肠癌。结肠癌可以包括恶性结肠赘生物、原位癌、典型类癌肿瘤和非典型类癌肿瘤。结肠癌可以包括腺癌、鳞状细胞癌和腺鳞状细胞癌。结肠癌可以与遗传性综合征相联系，所述遗传性综合征选自遗传性非息肉病性结直肠癌、家族性腺瘤性息肉病、加德纳氏综合征、波伊茨-耶格综合征、透克氏症和幼年性息肉病。
结肠细胞增殖失调可以包括影响结肠细胞的所有形式的细胞增殖失调。结肠细胞增殖失调可以包括结肠癌、结肠癌前状态、结肠的腺瘤性息肉和结肠异时性病变。结肠细胞增殖失调可以包括腺瘤。结肠细胞增殖失调可以以结肠的增生、化生和发育异常为特征。使个体倾向于发展结肠增殖失调的先前的结肠疾病可以包括先前的结肠癌。使个体倾向于发展结肠增殖失调的当前的结肠疾病可以包括克罗恩氏病和溃疡性结肠炎。结肠细胞增殖失调可以与基因内的突变相关，所述基因选自p53、ras、FAP和DCC。由于p53、ras、FAP和DCC基因的突变，个体发展结肠细胞增殖失调的风险可能增加。
“胰腺细胞增殖失调”是涉及胰腺细胞的细胞增殖失调。胰腺细胞增殖失调可以包括影响胰腺细胞的所有形式的细胞增殖失调。胰腺细胞增殖失调可以包括胰腺癌、胰腺癌前状态、胰腺增生和胰腺发育异常、胰腺良性赘生物或病变、以及胰腺恶性赘生物和病变、以及体内除胰腺外其它组织和器官能的转移的病变。胰腺癌包括各种形式的胰腺癌症。胰腺癌可以包括导管腺癌、腺鳞癌、多形性巨细胞癌、粘液性腺癌、破骨细胞样巨细胞癌、粘液囊肿腺癌、腺泡癌、未分类的大细胞癌、小细胞癌、胰母细胞瘤、乳头状瘤、粘液性囊腺瘤、乳突水泡肿瘤和浆液囊腺瘤。胰腺癌还可以包括具有组织学和超微结构特异性(例如，混合细胞类型)的胰腺肿瘤。
“前列腺细胞增殖失调”是涉及前列腺细胞的细胞增殖失调。前例腺细胞增殖失调可以包括影响前列腺细胞的所有形式的细胞增殖失调。前列腺细胞增殖失调可以包括前列腺癌、前列腺癌前状态、前列腺增生和胰腺发育异常、前列腺良性赘生物或病变、以及前列腺恶性赘生物和病变、以及体内除前列腺外其它组织和器官能的转移的病变。前列腺细胞增殖失调可以包括前列腺的增生、化生和发育异常。
“皮肤细胞增殖失调”是涉及皮肤细胞的细胞增殖失调。皮肤细胞增殖失调可以包括影响皮肤细胞的所有形式的细胞增殖失调。皮肤细胞增殖失调可以包括皮肤癌、皮肤癌前状态、皮肤良性赘生物或病变、黑色素瘤、恶性黑色素瘤以及其它皮肤恶性赘生物和病变、以及体内除皮肤外其它组织和器官能的转移的病变。皮肤细胞增殖失调可以包括皮肤的增生、化生和发育异常。
“卵巢细胞增殖失调”是涉及卵巢细胞的细胞增殖失调。卵巢细胞增殖失调可以包括影响卵巢细胞的所有形式的细胞增殖失调。卵巢细胞增殖失调可以包括卵巢癌、卵巢癌前状态、卵巢良性赘生物或病变、卵巢癌、卵巢恶性赘生物和病变、以及体内除卵巢外其它组织和器官能的转移的病变。卵巢细胞增殖失调可以包括卵巢的增生、化生和发育异常。
“卵巢细胞增殖失调”是涉及卵巢细胞的细胞增殖失调。卵巢细胞增殖失调可以包括影响卵巢细胞的所有形式的细胞增殖失调。卵巢细胞增殖失调可以包括卵巢癌、卵巢癌前状态、卵巢良性赘生物或病变、卵巢癌、卵巢恶性赘生物和病变、以及体内除卵巢外其它组织和器官能的转移的病变。卵巢细胞增殖失调可以包括卵巢的增生、化生和发育异常。
“乳腺细胞增殖失调”是涉及乳腺细胞的细胞增殖失调。乳腺细胞增殖失调可以包括影响乳腺细胞的所有形式的细胞增殖失调。乳腺细胞增殖失调可以包括乳腺癌、乳腺癌前状态、乳腺良性赘生物或病变、以及乳腺恶性赘生物和病变、以及体内除乳腺外其它组织和器官能的转移的病变。乳腺细胞增殖失调可以包括乳腺的增生、化生和发育异常。
乳腺细胞增殖失调可以是乳腺的癌前状态。本发明的组合物可以被用于治疗乳腺的癌前状态。乳腺的癌前状态可以包括乳腺的非典型性增生，原位导管癌(DCIS)、导管内癌、原位小叶癌(LCIS)、小叶瘤、第0阶段或第0等级的乳腺增生或病变(例如，第0阶段或第0等级乳腺癌或原位癌)。乳腺癌前状态的阶段可以根据美国癌症联合会(AJCC)接受的TNM分类表确定，其中原发性肿瘤(T)被指定为T0或Tis阶段；并且其中局部淋巴结(N)被指定为N0阶段；并且远转移(M)被指定为M0阶段。
乳腺细胞增殖失调可以是乳腺癌。优选地，本发明的组合物可以用于治疗乳腺癌。乳腺癌包括所有形式的乳腺癌症。乳腺癌可以包括原发的上皮乳腺癌。乳腺癌可以包括乳腺受其它肿瘤诸如淋巴瘤、肉瘤或黑色素瘤影响的癌症。乳腺癌可以包括乳腺的癌症、乳腺导管癌、乳腺小叶癌、乳腺未分化性癌、乳腺叶状囊肉瘤、乳腺血管肉瘤、以及原发性乳腺淋巴瘤。乳腺癌可以包括阶段I、II、IIIA、IIIB、IIIC和IV阶段的乳腺癌。乳腺导管癌可以包括浸润性癌、导管内成分占主导的原位浸润性癌、炎性乳腺癌和导管乳腺癌，其中导管乳腺癌的组织类型选自粉刺的、黏液的(胶质)、髓质的、淋巴细胞性浸润的髓质的、乳突的、硬癌的和管状的。乳腺小叶癌可以包括原位组分主导的浸润性小叶癌、浸润性(invasive)小叶乳腺癌、以及浸润性(infiltrating)小叶乳腺癌。乳腺癌可以包括佩吉特氏病、具有导管内癌的佩吉特氏病以及具有浸润性导管癌的佩吉特氏病。乳腺癌可以包括具有组织学和超微结构特异性(例如，混合细胞类型)的乳腺肿瘤。
优选地，本发明的组合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢产物、变体或溶剂化物可以被用于治疗乳腺癌。需要治疗的乳腺癌可以包括家族性乳腺癌。需要治疗的乳腺癌可以包括分散性乳腺癌。需要治疗的乳腺癌可以在男性主体上发生。需要治疗的乳腺癌可以在女性主体上发生。需要治疗的乳腺癌可以在绝经期前的女性主体或绝经期后的女性主体上发生。需要治疗的乳腺癌可以在年龄大于等于30岁或年龄小于30岁的主体上发生。需要治疗的乳腺癌在年龄大于等于50岁或年龄小于50岁的主体上发生。需要治疗的乳腺癌可以在年龄大于等于70岁或年龄小于70岁的主体上发生。
需要治疗的乳腺癌可以被分类以识别家族或自发的BRCA1、BRCA2、或p53变异。需要治疗的乳腺癌可以被分类为具有HER2/neu基因扩增的，HER2/neu过度表达的或具有低、中、高水平HER2/neu表达的。需要治疗的乳腺癌可以通过标记分类，所述标记选自雌激素受体(ER)、孕酮受体(PR)、人表皮生长因子受体-2、Ki-67、CA15-3、CA 27-29、和c-Met。需要治疗的乳腺癌可以被分类为ER-未知、ER-富足或ER-缺少。需要治疗的乳腺癌可以被分类为ER-阴性或ER-阳性。ER-分类乳腺癌可以使用任意可重现的方法进行。ER-分类乳腺癌可以使用Onkologie 27:175-179(2004)提出的内容进行。需要治疗的乳腺癌可以被分类为PR-未知、PR-富足或PR-缺少。需要治疗的乳腺癌可以被分类为PR-阴性或PR-阳性。需要治疗的乳腺癌可以被分类为受体阳性或受体阴性。需要治疗的乳腺癌可以被分类为与CA 15-3和/或CA 27-29的血浓度升高相关联的。
需要治疗的乳腺癌可以包括乳腺的局部肿瘤。需要治疗的乳腺癌可以包括与阴性前哨淋巴结(SLN)切片相关联的肿瘤。需要治疗的乳腺癌可以包括与阳性前哨淋巴结(SLN)切片相关联的肿瘤。需要治疗的乳腺癌可以包括与一个或多个阳性腋淋巴结相关联的乳腺肿瘤，其中腋淋巴结使用任意可用方法确定阶段。需要治疗的乳腺癌可以包括中路，其被分类为具有结阴性状态(例如，结-阴性)或结阳性状态(例如，结阳性)。需要治疗的乳腺癌可以包括扩散到身体其它部位的乳腺肿瘤。需要治疗的乳腺癌可以通过已扩散的部位分级，所述部位选自骨、肺、肝或脑。需要治疗的乳腺癌可以根据特性分级，所述特性选自转移性的、局部的、区域性的、局部-区域性的、局部晚期的、远离的、多中心的、两侧的、同侧的、对侧的、初诊的、复发的以及无法手术的。
本发明的组合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢产物、变体或溶剂化物可以被用于以相对于广大人群具有较大风险发展乳腺癌为对象治疗或预防乳腺细胞增殖失调，或治疗或预防乳腺癌。相对于广大人群具有较大风险发展乳腺癌的对象是具有乳腺癌的家族病史或个人病史的女性主体。相对于广大人群具有较大风险发展乳腺癌的对象是具有胚系或自发的BRCA1和/或BRCA2突变的女性主体。相对于广大人群具有较大风险发展乳腺癌的对象是具有乳腺癌的家族病史和胚系或自发性BRCA1和/或BRCA2突变的女性主体。相对于广大人群具有较大风险发展乳腺癌的对象是年龄大于30岁，大于40岁，大于50岁，大于60岁，大于70岁，大于80岁或大于90岁的女性。相对于广大人群具有较大风险发展乳腺癌的对象是具有非典型性乳腺增生、原位导管癌(DCIS)、导管内癌、原位小叶癌(LCIS)、小叶瘤、或0阶段乳腺赘生物或病变(例如，0阶段0级别乳腺癌或原位癌)的主体。
需要治疗的乳腺癌可以根据Scarff-Bloom-Richardson系统从组织结构上分级，其中乳腺肿瘤被指定为有丝分裂计数1、2或3；核多态性计数1、2或3；管形成计数1、2或3；以及总Scarff-Bloom-Richardson分数3至9之间。需要治疗的乳腺癌可以根据乳腺癌治疗国际共识小组指定肿瘤分级，该分级选自1级、1-2级、2级、2-3级或3级。
需要治疗的癌症可以根据美国癌症联合会(AJCC)TNM分级系统确定阶段，其中肿瘤(T)被指定为TX、T1、T1mic、T1a、T1b、T1c、T2、T3、T4、T4a、T4b、T4c或T4d阶段；并且其中区域淋巴结被指定为NX、N0、N1、N2、N2a、N2b、N3、N3a、N3b、N3c阶段；并且其中远转移(M)可以被指定为MX、M0或M1阶段。需要治疗的癌症可以根据美国癌症联合会(AJCC)分级指定阶段为I阶段、IIA阶段、IIB阶段、IIIA阶段、IIIB阶段、IIIC阶段或IV阶段。需要治疗的癌症可以根据AJCC分级指定级别为GX级(例如，级别无法评估)，1级、2级、3级或4级。需要治疗的癌症可以根据AJCC病理学分级(pN)确定阶段为pNX、pN0、PN0(I-)、PN0(I+)、PN0(mol-)、PN0(mol+)、PN1、PN1(mi)、PN1a、PN1b、PN1c、pN2、pN2a、pN2b、pN3、pN3a、pN3b、或pN3c。
需要治疗的癌症可以包括肿瘤，其直径被确定小于或等于2厘米。需要治疗的癌症可以包括肿瘤，其直径被确定在大约2至大约5厘米之间。需要治疗的癌症可以包括肿瘤，其直径被确定大于或等于大约3厘米。需要治疗的癌症可以包括肿瘤，其直径被确定大于5厘米。需要治疗的癌症可以通过显微外观分类为良好分化、一般分化、不良分化或未分化的。需要治疗的癌症可以通过显微外观，关于有丝分裂计数(例如，细胞分裂量)或核多态性(例如，细胞中的变化)分类。需要治疗的癌症可以通过显微外观分类为与坏死区域相关的(例如，死亡或退化中的细胞)。需要治疗的癌症可以分类为具有非正常染色体组型、具有非正常染色体数目或具有一个或多个外观非正常的染色体的。需要治疗的癌症可以被分类为非整数倍体的、三倍体的、四倍体的或具有可变倍体的。需要治疗的癌症可以被分类为具有染色体异位或者整条染色体删除或复制或者染色体区域删除、复制或扩增的。需要治疗的癌症可以通过DNA细胞计、流式细胞计或图像细胞计评价。需要治疗的癌症可以被分组为在细胞分裂的合成阶段(例如，细胞分裂的S相中)具有10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％的细胞的。需要治疗的癌症可以被分类为具有低S-相比率或高S-相比率的。
本文所使用的“正常细胞”是不能被分类为“细胞增殖失调”的一部分的细胞。正常细胞哦缺乏未调节和/或非正常的增长，其可能导致发展为不希望的病变或疾病。优选地，正常细胞具有细胞周期检查点控制机制。
本文中所使用的“接触细胞”指的是条件，其中物质的化合物或其它组合物与细胞直接接触或足够近以能够在细胞内介导所需的生物作用。
本文中所使用的“备选化合物”指的是本发明的化合物或药学上可接受的盐、酯、前药、代谢物、变体或溶剂化物，其已经或将要在一个或多个体内或体外的生物试验测试，以确定该化合物是否可能在细胞、组织、系统、动物或人类中引出研究者或临床医师寻求的所需要的生物或医学反应。备选化合物是本发明的化合物或其药学上可接受的盐、酯、前药、代谢物、变体或溶剂化物。生物或医学反应可以是癌症的治疗。生物或医学反应可以是细胞增殖失调的治疗或预防。体内或体外的生物试验包括但不限于酶活性试验、电泳迁移位移试验、报告基因试验、体外细胞活性试验以及本文所描述的试验。
本文所使用的“治疗(treating)”或“治(treat)”描述对病人的处理和护理，其目的在于对抗疾病、病变或失调，并且包括施用本发明的化合物或其药学上可接受的盐、酯、前药、代谢物、变体或溶剂化物，以减轻疾病、病变或失调的症状或并发症或治愈疾病、病变或失调。
本发明的组合物或其药学上可接受的盐、酯、前药、代谢物、变体或溶剂化物还可以被用以预防疾病、病变或失调。本文所使用的“预防(preventing)”或“预防(prevent)”描述减轻或消除疾病、病变或失调的症状或并发症的发作。
本文所使用的术语“减轻”，意在描述一种过程，通过该过程，失调的信号或症状的严重性被降低。重要的是，信号或症状可以被减轻而未被消除。在一个优选的实施方式中，本发明的药物组合物的施用带来了信号或症状的消除，然而，消除是非必须的。有效剂量被预期以降低信号或症状的严重性。例如，当多个部位中的至少一个中的癌症的严重性被降低，则可能发生在多个部位的失调，诸如癌症，的信号或症状被减轻。可选地，或额地，严重性意在描述
本文所使用的术语“严重性”，意在描述由癌症前期转化为癌症的，或良性状态转化为恶性状态的可能性。可选地，或额地，严重性意在描述癌症阶段，例如，根据TNM系统(国际抗癌联盟(UICC)和美国癌症联合委员会(AJCC)接受的)或通过其它领域内认可的方法(见国立癌症研究所，www.cancer.gov)。肿瘤级别是用以通过在显微镜下其外观的不正常程度以及该肿瘤生长和扩散的可能速度分级癌细胞的系统。当确定肿瘤级别时，考虑许多因素，包括细胞结构和生长的模式。用以确定肿瘤级别的具体因素根据癌症的每种类型而改变。严重性同样描述组织学分级，也被称作分化度，其指的是相同组织类型中肿瘤细胞与正常细胞的相似程度(见国立癌症研究所，www.cancer.gov)。除此之外，严重性描述核级别，其指的是肿瘤细胞中核的尺寸和形状以及分裂中的肿瘤细胞的百分比(见国立癌症研究所，www.cancer.gov)。
在本发明的另一个方面，严重性描述肿瘤分泌生长因子、降解细胞外基质、血管化、失去对并列组织的粘附、或转移的程度。此外，严重性描述原发性肿瘤转移到的部位的数目。最后，严重性包括治疗各种类型和部位的肿瘤的难度。例如，不能手术的肿瘤、更为靠近身体系统的癌症(血液和免疫学肿瘤)，以及对于常规治疗耐受性最强的被认为是最严重的。在这些情况下，延长主体的预期寿命和/或减少痛苦，减少癌细胞的比例或将癌细胞限制在一个系统内，以及改善癌症阶段/肿瘤级别/组织学级别/核级别被认为是减轻癌症的信号或症状。
本文所使用的术语“症状”被定义为疾病、病、伤或体内某些不正常情况的迹象。症状通过体验该症状的个体被感知和注意，但是可能不能被其他人轻易地注意到。其他人被定义为非医疗专业人士。
本文所使用的术语“信号”也被定义为体内某些不正常情况的迹象。但是信号被定义为可以被医生、护士或其它医疗专业人士能够看见的事物。
癌症是一组疾病，其可能导致几乎任意的信号或症状。信号和症状将取决于癌症的部位、癌症的尺寸、以及其对附近器官和结构的影响程度。若癌症扩散(转移)，则症状可以出现在身体的不同部分，
EZH2介导的蛋白甲基化起一部分作用的失调可以是神经疾病。本发明的化合物因此可以被用于治疗精神疾病，诸如癫痫、精神分裂症、双相障碍或其它心理学和/或精神病学的失调、神经病、骨骼肌萎缩和神经退行性疾病，例如神经退行性疾病。示例性的神经退行性疾病包括：阿兹海默症、肌肉萎缩性侧索硬化症(ALS)和帕金森症。另一种类的神经退行性疾病包括至少部分由于多聚谷氨酰胺的聚集导致的疾病。这种疾病包括：亨廷顿氏症、脊髓性肌肉萎缩症(SBMA或肯尼迪氏症)、齿状核红核苍白球丘脑下核萎缩(DRPLA)、脊髓小脑性共济失调1(SCA1)、脊髓小脑性共济失调2(SCA2)、Machado-Joseph病(MJD；SCA3)、脊髓小脑性共济失调6(SCA6)、脊髓小脑性共济失调7(SCA7)和脊髓小脑性共济失调12(SCA12)。
任意其它由EZH2介导的，表观甲基化起作用的疾病，可能是使用本文所描述的组合物和方法可治疗或可预防的。
治疗癌症可以带来肿瘤尺寸的减小。肿瘤尺寸的减小也可以被称为“肿瘤退化”。优选地，治疗后，肿瘤的尺寸相对于其治疗前的尺寸缩小5％或更多；更优选地，肿瘤尺寸缩小10％或更多；更优选地，肿瘤尺寸缩小20％或更多；更优选地，肿瘤尺寸缩小30％或更多；更优选地，肿瘤尺寸缩小40％或更多；又更优选地，肿瘤尺寸缩小50％或更多；并且最优选地，缩小75％或更多。肿瘤的尺寸可以使用任意可重现的测量方法测定。肿瘤的尺寸可以以肿瘤直径测定。
治疗癌症带来肿瘤数量的减少。优选地，在治疗后，肿瘤数量相对于其治疗前的数量减少5％或更多；更优选地，肿瘤数量减少10％或更多；更优选地，肿瘤数量减少20％或更多；更优选地，肿瘤数量减少30％或更多；更优选地，肿瘤数量减少40％或更多；又更优选地，肿瘤数量减少50％或更多；并且最优选地，减小75％或更多。肿瘤的数量可以使用任意可重现的测量方法测定。肿瘤的树龄可以通过计量肉眼可见的或在具体放大倍数条件下的肿瘤测定。优选地，具体放大倍数为2x、3x、4x、5x、10x、或50x。
治疗癌症可以带来其它与原发肿瘤处远离的组织或器官转移病灶数量的减小。优选地，治疗后，转移病灶数量相对于其治疗前的数目减小5％或更多；更优选地，转移病灶数量减少10％或更多；更优选地，转移病灶数量减少20％或更多；更优选地，转移病灶数量减少30％或更多；更优选地，转移病灶数量减少40％或更多；又更优选地，转移病灶数量减少50％或更多；并且最优选地，减小75％或更多。转移病灶的数量可以使用任意可重现的测量方法测定。转移病灶的树龄可以通过计量肉眼可见的或在具体放大倍数条件下的转移病灶测定。优选地，具体放大倍数为2x、3x、4x、5x、10x、或50x。
治疗癌症可以带来被治疗主体的人群平均存活时间相对于仅接受载体的主体人群的延长。优选地，平均存活时间延长多于30天；更优选地，多于60天；更优选地，多于90天；并且最优选地，多于120天。人群平均存活时间的延长可以通过任意可重现的方法测定。人群平均存活时间的延长可以通过例如，计算人群在起始使用活性化合物治疗之后的存活长度来测定。人群平均存活时间的延长还可以通过例如，计算人群在完成使用活性化合物完成首轮治疗后的存活长度来测定。
治疗癌症可以带来被治疗主体的人群平均存活时间相对于未治疗主体的人群的延长。优选地，平均存活时间延长多于30天；更优选地，多于60天；更优选地，多于90天；并且最优选地，多于120天。人群平均存活时间的延长可以通过任意可重现的方法测定。人群平均存活时间的延长可以通过例如，计算人群在起始使用活性化合物治疗之后的存活长度来测定。人群平均存活时间的延长还可以通过例如，计算人群在完成使用活性化合物完成首轮治疗后的存活长度来测定。
治疗癌症可以带来被治疗主体的人群平均存活时间相对于使用单一疗法，采用非本发明化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物、类似物或衍生物的药的主体人群的延长。优选地，平均存活时间延长多于30天；更优选地，多于60天；更优选地，多于90天；并且最优选地，多于120天。人群平均存活时间的延长可以通过任意可重现的方法测定。人群平均存活时间的延长可以通过例如，计算人群在起始使用活性化合物治疗之后的存活长度来测定。人群平均存活时间的延长还可以通过例如，计算人群在完成使用活性化合物完成首轮治疗后的存活长度来测定。
治疗癌症可以带来被治疗主体的人群的死亡率相对于仅接受载体的主体人群的降低。治疗癌症可以带来被治疗主体的人群的死亡率相对于未治疗的主体人群的降低。治疗癌症可以带来被治疗主体的人群的死亡率相对于使用单一疗法，采用非本发明化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物、类似物或衍生物的药的主体人群的降低。优选地，死亡率降低多于2％；更优选地，多于5％；更优选地，多于10％；并且最优选地，多于25％。受治疗主体人群的死亡率的降低可以使用任意可重现的方法测定。人群死亡率降低可以通过例如，计算初始使用活性药物治疗后，每单位时间人群中疾病相关的死亡测定。人群死亡率降低还可以通过例如计算初始使用活性药物完成首轮治疗后，每单位时间人群中疾病相关的死亡测定。
治疗癌症可以带来肿瘤生长率的降低。优选地，治疗后肿瘤的生长率相对于治疗前的数字降低至少5％；更优选地，肿瘤生长率降低至少10％；更优选地，降低至少20％；更优选地，降低至少30％；更优选地，降低至少40％；更优选地，降低至少50％；再更优选地，降低至少50％；并且最优选地，降低至少75％。肿瘤生长率可以使用任意可重现的方法测定。肿瘤生长率可以通过每单位时间内肿瘤直径的变化测定。
治疗癌症可以带来肿瘤再生长率的降低。优选地，治疗后肿瘤再生长率小于5％；更优选地，肿瘤再生长率小于10％；更优选地，少于20％；更优选地，少于30％；更优选地，少于40％；更优选地，少于50％；再更优选地，少于50％；并且最优选地，少于75％。肿瘤再生长率可以使用任意可重现的方法测定。肿瘤再生长率是通过例如，测定早先治疗后缩小的肿瘤在直径上的增加来测定的。肿瘤再生长率是通过治疗停止后肿瘤复发失败显示的。
治疗或预防细胞增殖失调可以带来细胞增殖率的降低。优选地，治疗后细胞增殖率降低至少5％；更优选地，至少10％；更优选地，至少20％；更优选地，至少30％；更优选地，至少40％；更优选地，至少40％；再更优选地，至少50％；并且最优选地，至少75％。细胞增殖率可以使用任意可重现的方法测定。细胞增殖率是通过例如，测定组织样品中每单位时间内分裂中细细胞的数量测定的。
治疗或预防细胞增殖失调可以带来增殖细胞比率的降低。优选地，治疗后，增殖细胞比率降低至少5％；更优选地，至少10％；更优选地，至少20％；更优选地，至少30％；更优选地，至少40％；更优选地，至少50％；再更优选地，至少50％；并且最优选地，至少75％。增殖细胞比率可以使用任意可重现的方法测定。优选地，增殖细胞比率是通过例如，量化组织样品中分裂中的细胞的数目对比不分裂细胞的数目测定的。增殖细胞的比率可以等价于有丝分裂指数。
治疗或预防细胞增殖失调可以带来细胞增殖区域或区间的尺寸缩小。优选地，治疗后，细胞增殖的区域或区间的尺寸相对于治疗前的尺寸缩小至少5％；更优选地，缩小至少10％；更优选地，缩小至少20％；更优选地，缩小至少30％；更优选地，缩小至少40％；更优选地，缩小至少50％；再更优选地，缩小至少50％；以及优选地，缩小至少75％；细胞增殖区域或区间的尺寸可以通过任意可重现的方法测定。细胞增殖区域或区间的尺寸可以通过细胞增殖区域或区间的直径或宽度测定。
治疗或预防细胞增殖失调可以带来具有非正常外观或形态的细胞数量或比率的减少。优选地，治疗后，具有非正常外观或形态的细胞相对于其治疗前减少至少5％；更优选地，减少至少10％；更优选地，减少至少20％；更优选地，减少至少30％；更优选地，减少至少40％；更优选地，减少至少50％；再更优选地，减少至少50％；以及最优选地，减少至少75％。非正常的细胞外观或形态可以通过任意可重现的方法测定。非正常的细胞形态可以通过显微镜，例如，使用倒置组织培养显微镜测定。非正常的细胞形态可以是核多态性的形式。
本文所使用的术语“选择性”的意思是倾向于在一个人群中比在另一人群中发生的频率更高。优选地，本发明的化合物，或其药学上可接受的盐、前药、代谢物、变体或溶剂化物，在癌细胞或癌前细胞上而非正常细胞上表现出选择性。优选地，本发明的化合物，或其药学上可接受的盐、前药、代谢物、变体或溶剂化物显示选择性以调节一个分子靶标(例如，目标蛋白质甲基转移酶)而不明显地调节另一分子靶标(例如，非目标的蛋白质甲基转转移酶)。本发明还提供了用于选择性抑制酶活性，诸如蛋白质甲基转移酶，的方法。优选地，当事件在人群A中发生的频率相比人群B大两倍时，该事件相对于人群B，选择性地发生人群A中。当事件在人群A中发生的频率大于5倍时，该事件选择性地发生。当事件在人群A中发生的频率大于10倍时，该事件选择性地发生；更优选地，大于50倍；再更优选地，大于100倍；以及最优选地，在人群A中的频率相对于人群B大于1000倍。例如，如细胞死亡在癌细胞中发生的频率相对于正常细胞大于两倍，则称其选择性地发生在癌细胞中。
本发明的化合物，例如，含有任意式(IIa)化合物或其药学上可接受的盐以及一种或多种其它治疗试剂诸如泼尼松的组合物，可以调节分子靶标(例如，目标蛋白质甲基转移酶)的活性。调节指的是促进或抑制分子靶标的活性。优选地，当本发明的化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物、变体或溶剂化物促进或抑制分子靶标的活性相对于在相同条件下仅无该化合物出现的分子靶标至少2倍时，其调节分子靶标的活性。更优选地，当本发明的化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物、变体或溶剂化物促进或抑制分子靶标的活性相对于在相同条件下仅无该化合物出现的分子靶标至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍时，其调节分子靶标的活性。分子靶标的活性可以通过任意可重现的方法测定。分子靶标的活性可以在体内或体外测定。例如，分子靶标的活性可以在体外通过酶活性试验或DNA结合试验测定，或者分子靶标的活性可以在体内通过报告基因的表达试验测定。
若加入化合物未促进或抑制分子靶标的活性相对于在相同条件下仅无该化合物出现的的分子靶标多于10％，本发明的组合物不明显地调节分子靶标的活性。
本文中所使用的术语“同工酶选择性”的意思是相对于酶的第二异形体，优选地抑制或促进酶的第一异形体(例如，相对于蛋白质甲基转移酶异形体β，优选地抑制或促进蛋白质甲基转移酶的异形体α)。优选地，本发明的化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物、变体或溶剂化物，在达到生物效果所需的剂量上显示最小四倍差异、优选十倍差异、更优选五十倍差异。优选地，本发明的化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物、变体或溶剂化物在抑制的范围内显示这种差异，并且该差异对于感兴趣的分子靶标通过IC50例证，例如，50％抑制。
向细胞或有需求的主体施用本发明的组合物可以带来对感兴趣的蛋白质甲基转移酶的调节(即，促进或抑制)。
向细胞或有需求的主体施用本发明的化合物，例如，含有任意式(IIa)化合物或其药学上可接受的盐以及一种或多种其它治疗试剂诸如泼尼松的组合物，带来对细胞内靶点(例如，底物)的调节。若干细胞内靶点可以使用本发明的化合物调节，包括但不限于蛋白质甲基转移酶。
激活指的是将物质(例如，蛋白质或核酸)的组合物置于适于实现所需生物功能的状态。能够被激活的物质的组合物也具有非激活态。物质激活的组合物可能具有抑制的或促进的生物功能，或两者都具有。
升高指的是物质(例如，蛋白质或核酸)所需生物活性的增加。升高可能通过物质组合物浓度的增高而发生。
本文所使用的“细胞周期检查点通路”指的是涉及细胞周期检查点的调节的生物通路。细胞周期检查点通路可能在一个或多个含有细胞周期检查点的功能上具有促进或抑制的效果，或两者都有。细胞周期检查点通路由事物的至少两种组合物构成，以蛋白质为优选，其两者均有助于细胞周期检查点的调节。细胞周期检查点通路可以通过细胞周期检查点通路的一个或多个成员的激活而被激活。
本文所使用的“细胞周期检查点调节物”指的是事物的组合物，其可以对调节细胞周期检查点的调节起到至少部分作用。细胞周期检查点调节物可能在一个或多个含有细胞周期检查点的功能上具有促进或抑制的效果。细胞周期检查点调节物可以是蛋白质或不是蛋白质。
治疗癌症或细胞增殖失调可以带来细胞死亡，并且优选地，细胞死亡带来人群中的细胞数量减少至少10％。更优选地，细胞死亡意味着减少20％；更优选地，减少30％；更优选地，减少40％；更优选地，减少50％；最优选地，减少75％。人群中的细胞数量可以通过任意可重现的方法测定。人群中的细胞数量可以通过荧光激活细胞分选术(FACS)、免疫荧光显微术和光学显微镜术测定。测定细胞死亡的方法如Li et al.,Proc Natl Acad Sci U SA.100(5):2674-8,2003所示。在一个方面，细胞死亡通过细胞凋亡发生。
优选地，有效量的本发明的组合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物、变体或溶剂化物，对正常细胞无明显细胞毒性。若以治疗有效量施用化合物不会引起正常细胞的多于10％的死亡，则治疗有效剂量的化合物对正常细胞无明显毒性。若以治疗有效量施用化合物不会引起正常细胞的多于10％的死亡，则治疗有效剂量的化合物不明显影响正常细胞的生活力。在一个方面细胞死亡通过细胞凋亡发生。
使用本发明的组合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物、变体或溶剂化物接触细胞可以选择性地引起或激活癌细胞内的细胞死亡。向有需求的主体施用本发明的组合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物、变体或溶剂化物接触细胞可以选择性地引起或激活癌细胞内的细胞死亡。使用本发明的组合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物、变体或溶剂化物接触细胞可以选择性地引起或激活一个或多个受细胞增殖失调影响的细胞内的细胞死亡。优选地，向有需求的主体施用本发明的组合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物、变体或溶剂化物接触细胞可以选择性地引起或激活个或多个受细胞增殖失调影响的细胞内的细胞死亡。
本发明涉及通过向有需求的主体施用本发明的组合物或其药学上可接受的的盐、前药、代谢物、变体或溶剂化物，治疗或预防癌症的方法，其中，施用本发明的组合物或其药学上可接受的的盐、前药、代谢物、变体或溶剂化物带来以下一种或多种效果：通过在一个或多个细胞周期相内(例如G1、G1/S、G2/M)累积，或引导细胞衰老，或存进肿瘤细胞分化，来预防癌细胞增殖；通过细胞毒性、细胞坏死和细胞凋亡促进癌细胞的细胞死亡，而正常细胞内无明显量的细胞死亡，动物体内的抗肿瘤活性具有至少为2的治疗指数。本文所使用的“治疗指数”是最大耐受剂量除以有效剂量。
本领域技术人员可能参考一般参考文献以寻求本文所讨论的已知技术或等同技术。这些文献包括Ausubel et al.,Current Protocols in Molecular Biology,JohnWiley and Sons,Inc.(2005)；Sambrook et al.,Molecular Cloning,A LaboratoryManual(3rd edition),Cold Spring Harbor Press,Cold Spring Harbor,New York(2000)；Coligan et al.,Current Protocols in Immunology,John Wiley&Sons,N.Y.；Enna et al.,Current Protocols in Pharmacology,John Wiley&Sons,N.Y.；Fingl etal.,The Pharmacological Basis of Therapeutics(1975),Remington'sPharmaceuticalSciences,Mack Publishing Co.,Easton,PA,18th edition(1990)。这些文献当然也可以在制定或使用本发明的一方面时被参考。
实施例1:N-((4,6-二甲基-2-氧-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-5-(乙基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-4-甲基-4'-(吗啉基甲基)-[1,1'-联苯基]-3-甲酰胺的合成
步骤1：5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸的合成
室温下，向搅拌中的2-甲基-3-硝基苯甲酸(100g，552mmol)溶解内分批地加入浓H2SO4(400mL)，1,3-二溴-5,5-二甲基-2,4-咪唑烷二酮(88g,308mmol)，反应混合物随后在室温下搅拌5h。反应混合物倾入冰水，沉淀的固体被滤出，用水洗涤并真空干燥，以得到固体的目标化合物(140g,98％)。分离出的化合物直接用于下一步。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ8.31(s,1H),8.17(s,1H),2.43(s,3H)。
步骤2：5-溴-2-甲基-3-苯甲酸甲酯的合成
室温下，向搅拌中的5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸(285g,1105mmol)的DMF(2.8L)溶液内加入碳酸钠(468g,4415mmol)，随后加入碘代烷(626.6g,4415mmol)。得到的反应混合物在60℃加热8h。反应完成后(使用TLC检测)，滤出反应混合物(移除碳酸钠)并用乙酸乙酯(1L X 3)洗涤。合并后的滤液使用水(3L X 5)洗，水相使用乙酸乙酯(1L X 3)反萃。合并后的有机层使用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩得到固体目标产物(290g,产率97％)。分离后的化合物直接用于下一步。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.17(s,1H),7.91(s,1H),3.96(s,3H),2.59(s,3H).
步骤3：3-氨基-5-溴-2-甲基苯甲酸酯的合成
向搅拌中的5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸酯(290g,1058mmol)乙醇(1.5L)溶液中加入氯化铵水溶液(283g,5290mmol溶于1.5L水)。得到的混合物在80℃下搅拌，向其中分批加入铁粉(472g,8451mmol)。得到的反应混合物在80℃下加热12h。TLC确定反应完成后，反应混合物使用热过滤，使用甲醇(5L)洗涤硅藻土床，然后使用含30％MeOH的DCM(5L)洗涤。合并的滤液在真空中浓缩，得到的残渣使用碳酸氢钠溶液(2L)稀释，并使用乙酸乙酯(5L X 3)萃取。合并的有机层使用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压弄苏得到固体的目标化合物(220g,85％)。该化合物直接用于下一步。1HNMR(CDCl3,400MHz)δ7.37(s,1H),6.92(s,1H),3.94(s,3H),3.80(bs,2H),2.31(s,3H)。
步骤4：5-溴-2-甲基-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯甲酸甲酯的合成
向搅拌中的3-氨基-5-溴-2-甲基苯甲酸酯(15g,61.5mmol)和二氢-2H-吡喃-4(3)-酮(9.2g,92mmol)的二氯甲烷(300mL)溶液中加入乙酸(22g,369mmol)，反应混合物在室温下搅拌15分钟，然后将反应溶液冷却至0℃并加入三乙酰氧基硼氢化钠(39g,184mmol)。反应混合物在室温下搅拌过夜。TLC确定反应完成后，向反应混合物内加入碳酸氢钠溶液直至其pH达到7-8。分离有机相并用乙酸乙酯萃取水相。合并后的有机层使用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。粗品化合物使用柱层析色谱纯化(100-200目硅胶)，使用乙酸乙酯：正己烷洗脱，以得到固体的目标化合物(14g,69％)。1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ7.01(s,1H),6.98(s,1H),5.00(d,1H,J＝7.6Hz),3.84-3.87(m,2H),3.79(s,3H),3.54-3.56(m,1H),3.43(t,2H,J＝12Hz),2.14(s,3H),1.81-1.84(m,2H),1.47-1.55(m,2H).
步骤5：5-溴-3-(乙基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯的合成
向搅拌中的5-溴-2-甲基-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯甲酸甲酯(14g,42.7mmol)的二氯甲烷(150mL)溶液中加入乙醛(3.75g,85.2mmol)和乙酸(15.3g,256mmol)。得到的反应混合物在室温下搅拌15分钟。将混合物冷却至0℃并加入三乙酰氧基硼氢化钠(27g,128mmol)。反应混合物在室温下搅拌3小时。TLC确定反应完成后，向反应混合物中加入碳酸氢钠溶液直至其pH达到7-8，分离有机相并用乙酸乙酯萃取水相。合并后的有机层使用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。粗品化合物使用柱层析色谱纯化(100-200目硅胶)，使用乙酸乙酯：正己烷洗脱，以得到液体的目标化合物(14g,93％)。1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ7.62(s,1H),7.52(s,1H),3.80(bs,5H),3.31(t,2H),2.97-3.05(m,2H),2.87-2.96(m,1H),2.38(s,3H),1.52-1.61(m,2H),1.37-1.50(m,2H),0.87(t,3H,J＝6.8Hz)。
步骤6：5-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(乙基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺的合成
向搅拌中的5-溴-3-(乙基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯(14g,39.4mmol)乙醇(100mL)溶液中加入NaOH水溶液(2.36g,59.2mmol溶于25mL水)，得到的混合物在60℃下搅拌1h。TLC确定反应完成后，减压去除溶剂，得到的残余物使用1N HCl酸化至pH达到7，随后加入柠檬酸水溶液直至pH达到5-6。使用含10％MeOH的DCM(200mL X 3)萃取，合并后的有机层使用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩以得到单独的酸(14g,100％)。
上述酸(14g,40.9mmol)随后溶于DMSO(70mL)，并向其加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮(12.4g,81.9mmol)。反应混合物在室温下搅拌15分钟，随后加入PYBOP(31.9g,61.4mmol)并在室温下继续搅拌过夜。TLC确定反应完成后，反应混合物倾入冰水(700mL)，搅拌30分钟，过滤并收集沉淀物，使用水(500mL)洗涤，空气干燥。得到的固体与乙腈(75mL X 2)一起搅拌，过滤，空气干燥。得到的固体再与含5％MeOH的DCM(100mL)一起搅拌，过滤并在真空下完全干燥以得到固体的目标化合物(14g,74％)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.47(s,1H),8.23(t,1H),7.30(s,1H),7.08(s,1H),5.85(s,1H),4.23(d,2H,J＝4.4Hz),3.81(d,2H,J＝10.4Hz),3.20-3.26(m,2H),3.00-3.07(m,1H),2.91-2.96(m,2H),2.18(s,3H),2.14(s,3H),2.10(s,3H),1.58-1.60(m,2H),1.45-1.50(m,2H),0.78(t,3H,J＝6.8Hz)。
步骤7：N-((4,6-二甲基-2-氧-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-5-(乙基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-4-甲基-4'-(吗啉基甲基)-[1,1’-联苯基]-3-甲酰胺。
向搅拌中的5-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(乙基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺(14g,29.5mmol)的二氧六环/水(70mL/14mL)混合物溶液中加入4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-而氧杂borolan-2-基)苄基)吗啉(13.4g,44.2mmol)，随后加入Na2CO3(11.2g,106.1mmol)。使用氩气净化溶液15分钟，随后加入Pd(PPh3)4(3.40g,2.94mmol)并再用氩气净化溶液10分钟。反应混合物在100℃加热4h。反应完成后(使用TLC监测)，反应混合物使用水稀释并使用10％MeOH/DCM萃取。合并后的有机层使用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。粗品化合物使用柱层析色谱纯化(100-200目硅胶)，使用甲醇：DCM洗脱，以得到固体的目标化合物(12g,71％)。分析数据：LCMS:573.35(M+1)+；HPLC:99.5％(@254nm)(Rt；3.999；方法:色谱柱:YMC ODS-A 150mm x 4.6mmx 5μ；流动相:A；含0.05％TFA的水/B；含0.05％TFA的乙腈；注射体积:10μL,柱温:30℃；流速:1.4mL/min.；梯度:5％B至95％B于8min内,保持1.5min,9.51-12min 5％B)；1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.46(s,1H),8.19(t,1H),7.57(d,2H,J＝7.2Hz),7.36-7.39(m,3H),7.21(s,1H),5.85(s,1H),4.28(d,2H,J＝2.8Hz),3.82(d,2H,J＝9.6Hz),3.57(bs,4H),3.48(s,2H),3.24(t,2H,J＝10.8Hz),3.07-3.09(m,2H),3.01(m,1H),2.36(m,4H),2.24(s,3H),2.20(s,3H),2.10(s,3H),1.64-1.67(m,2H),1.51-1.53(m,2H),0.83(t,3H,J＝6.4Hz).
步骤8：N-((4,6-二甲基-2-氧-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-5-(乙基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-4-甲基-4'-(吗啉基甲基)-[1,1'-联苯基]-3-甲酰胺三盐酸化物的合成
将N-((4,6-二甲基-2-氧-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-5-(乙基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-4-甲基-4'-(吗啉基甲基)-[1,1’-联苯基]-3-甲酰胺(12g,21.0mmol)溶于氯化氢甲醇溶液(200mL)中，并在室温下搅拌3h。三小时搅拌后，减压浓缩反应混合物。得到的固体与乙醚(100mL X 2)一起搅拌以得到固体的目标盐。三盐酸盐的分析数据：LCMS:573.40(M+1)+；HPLC:99.1％(@254nm)(Rt；3.961；方法:色谱柱:YMC ODS-A 150mm x4.6mm x 5μ；流动相:A；含0.05％TFA的水/B；含0.05％TFA的乙腈；注射体积:10μL,柱温.:30℃；流速:1.4mL/min.；流速:5％B至95％B于8min内，保持1.5min,9.51-12min 5％B)；1HNMR(D2O400MHz)δ7.92(bs,1H,)7.80(s,1H),7.77(d,2H,J＝8Hz),7.63(s,1H),7.61(s,1H),6.30(s,1H),4.48(s,2H),4.42(s,2H),4.09-4.11(m,4H),3.95-3.97(m,2H),3.77(t,3H,J＝10.4Hz),3.44-3.47(m,3H),3.24-3.32(m,3H),2.42(s,3H),2.35(s,3H),2.26(s,3H),2.01(m,2H),1.76(m,2H),1.04(t,3H,J＝6.8Hz).
实施例2:化合物44和CHOP组分的联合治疗。
从指定来源获得人类淋巴瘤细胞系WSU-DLCL2(DSMZ；ACC 575)、OCI-Ly19(DSMZ；ACC 528)、RL(ATCC；CRL-2261)，并保持在添加了10％胎牛血清和2mM谷氨酰胺的RPMI-1640培养基中。在湿润孵化器中的组织培养瓶中于37℃、5％CO2和95％空气氛围中培养细胞。
化合物44与单个CHOP组分(环磷酰胺,长春新碱,多柔比星,和泼尼松龙)联合治疗的对于癌细胞生活力的效果在体外检测。施用日程在图1A中示出。WSU-DLCL2人淋巴瘤细胞使用增加浓度的化合物44治疗。4天后，向细胞施用增加浓度的化合物44与CHOP的每个组分的结合。4天后，使用微孔Guava ViaCount试剂和流式细胞仪分析测定细胞生活力。每个样品中的活细胞百分比以DMSO处理的样品在每个化合物44浓度组中的活细胞百分比为标准。
使用化合物44和CHOP组分处理的细胞单独显示细胞生活率的下降。使用化合物44与Mafofsamide(环磷酰胺代谢物)(图2A)和多柔比星(图2B)处理的细胞在Mafofsamide或多柔比星浓度增加的情况下不展示降低的细胞生活力。化合物44与长春新碱(图2C)的联用治疗在最高浓度化合物44时显示降低的细胞生活力。重要地，使用化合物44和泼尼松龙(泼尼松代谢物)(图2D)的联合治疗，在2个最高剂量的化合物44和所有剂量的泼尼松龙的条件下显示出增效的细胞生活力降低。
实施例3：化合物44和泼尼松龙联合治疗的协同效果取决于施用日程。
为了探寻化合物44和泼尼松龙的施用时间对于细胞生活率的作用，WSU-DLCL2被使用不同施用日程处理，如图1所示。通过使用微孔Guava ViaCount试剂着色继而使用流式细胞计分析测定细胞生活度。
化合物44的施用先于化合物44和泼尼松龙的共同施用带来细胞生活率的降低(图3A)。细胞如图1A所示处理。细胞生活力以DMSO/DMSO样品为标准，由此揭示单独使用化合物44治疗的效果。增加化合物44的浓度带来细胞生长的减少。重要地，泼尼松龙与化合物44结合浓度的增加带来相对于使用化合物44或泼尼松龙作为单一试剂独立处理细胞时细胞生长的额外减少。因此，化合物44和泼尼松龙的联合治疗，其中化合物44首先施用，带来减少癌细胞生活力的协同作用。
化合物44的施用先于泼尼松龙的施用带来细胞生活率的降低(图3B)。细胞如图1B所示处理。细胞生活力以每个浓度组的化合物44的DMSO/DMSO样品为标准。使用增加浓度的泼尼松龙作为单一试剂的处理先于化合物44的施用也带来相对于单独使用泼尼松龙处理的细胞的细胞生活力的降低，由此阐明化合物44和泼尼松龙联合治疗的协同作用。、
波尼松的施用先于化合物44和泼尼松龙的共同施用不降低细胞生活力(图3C)。细胞如图1C所示处理。细胞生活力以每个浓度组的化合物44的DMSO/DMSO样品为标准。这些结果阐明了泼尼松龙施用先于使用含有化合物44和泼尼松龙的组合物的处理，不带来对细胞生活力的协同作用。
这些数据清楚地显示化合物44和泼尼松龙的联合治疗降低癌细胞的生活力或引起癌细胞死亡。具体地，使用化合物44处理细胞先于使用泼尼松龙或泼尼松龙和化合物44的结合的联合治疗带来对细胞生活力的协同作用，其中细胞生活力的降低高于使用泼尼松龙或化合物44作为单独试剂处理引起的。
实施例4:化合物44和泼尼松龙的协同作用取决于EZH2突变。
不同的人类淋巴瘤细胞系内具有不同的EZH2突变，由于其对化合物44和泼尼松龙的反应而被分析。使用如图1A所示的施用日程处理细胞，其中细胞首先使用化合物44处理，继而在四天后使用化合物44和泼尼松龙的结合处理。4天后使用微孔Guava ViaCount试剂和流式细胞计确定细胞生活力。细胞生活力百分比以DMSO处理的样品为标准。
表达野生型(WT)EZH2、OCI-LY19细胞系的淋巴瘤细胞对EZH2抑制剂的处理耐受。因此，使用增加浓度的化合物44的处理不影响细胞生活力。增加浓度的泼尼松龙不对细胞生活力产生额外作用或协同作用。(图4A)
具有Y641F突变的WSU-DLCL2细胞对使用EZH2抑制剂的处理敏感，其证据是当增加浓度的化合物44作为单一试剂施用时，细胞生活力的降低。此外，当与泼尼松龙结合处理时，细胞展现出降低的细胞生活力。(图4B)
具有Y641F突变的RL细胞对使用EZH2抑制剂的处理耐受。使用增加浓度的化合物44单独施用不带来细胞生活力的降低。然而，使用化合物44与泼尼松龙的共同施用带来协同作用，其中细胞生活力的降低比当化合物44和泼尼松龙被作为单一试剂施用时所观测到的更高。(图4C)
综上，这些结果表明化合物44和泼尼松龙的联合治疗可以带来表达对在EZH2突变的细胞中减少癌细胞生活力以及增加癌细胞死亡的协同作用。此外，当以单独试剂施用时耐受化合物44或泼尼松龙的细胞，对于联合治疗变得敏感，并且细胞生活力被降低。
实施例5：化合物44和CHOP组分共同施用的体内药代动力学分析。
进行化合物44与每个CHOP组分(环磷酰胺,、长春新碱、多柔比星和泼尼松龙)的药代动力学分析以确定化合物44额体内吸收或分布。年龄8-12周、重量20-40克的雄性BALB/c来自印度班加罗尔。CHOP组合呢中的一种作为单一试剂，或与化合物44联用向动物施用。环磷酰胺通过腹腔内注射以30mg/kg。长春新碱通过静脉射注以0.375mg/kg施用。多柔比星通过静脉注射以2.475mg/kg施用。泼尼松龙经口腔以0.15mg/kg施用。化合物44经口腔以225mg/kg施用。血浆样品在施用结束24后在一段时期内在不同的时间点获取。
血将研究样品或加标血浆校准标准的萃取程序是等同的：向预先标记的个体微型离心机管内加入25μL的研究样品或加标校准标准。在ACN中制备的体积为100μL的IS(格列吡嗪，500ng/mL)随后加入微型离心机管除非空白样品，其中乙腈被加入并旋转5分钟。样品以5000rpm(20600g)在4℃离心10分钟。离心后，从每个离心管中取100μL上清液样品并转移至插入瓶中。这些瓶被载入自动进样器以进行LC/MS/MS分析。校准用标准通过向190μL空白鼠血浆内加入10μL分析物(化合物44、环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和泼尼松龙)制备。
使用(Version 5.2)的非代谢区分析模块以评价药代动力学参数。浓度时间曲线(AUC)下的面积使用线性梯形法则计算。化合物44与CHOP的每个组分联合治疗(AUC联合)相对于每个CHOP单独组分(AUC单一)的AUC比例(AUC联合/AUC单一)，当CHOP组分单独或与化合物44一起施用时，指示出相似的生物活性。
实施例6：化合物44与CHOP联合治疗在小鼠异种移植模型中的分析。
小鼠
雌性Fox Chase小鼠(CB17/Icr-Prkdcscid/IcrIcoCrl,Charles RiverLaboratories)或无胸腺的裸鼠(Crl:NU(Ncr)-Foxn1nu,Charles River Laboratories)的年龄是8周，在研究的第一天体重(BW)在16.0–21.1g的范围内。该动物使用自由饮水(反渗透1ppm Cl)喂养，和饮食NIH 31 Modified and Irradiated Lab(NIH第31号改良及辐射过的实验室食谱)，其由18％粗蛋白、5.0％粗脂肪和5.0％粗纤维组成。小鼠住在静态分隔间中辐射过的Enrich-o’cobsTM垫料上，以12小时的光照循环，于20-22℃(68–72°F)和40–60％的湿度下。所有程序与《对实验动物护理和使用指南》的推荐相符合，其涉及约束、管理、手术操作、饲料和流体调节以及医疗照顾。
肿瘤细胞培养
人淋巴瘤细胞系由不同来源(ATCC,DSMZ)获得，并在Piedmont，在RPMI-1640培养基中作为悬浮培养来维持，该培养基包含100单位/mL青霉素G钠盐、100g/mL链霉素以及25g/mL庆大霉素。该培养基添加10％胎牛血清和2mM谷氨酰胺。在调湿培养箱的组织培养瓶中，在37℃下、5％CO2和95％空气的氛围中培养该细胞。
体内肿瘤移植
人淋巴瘤细胞系在对数中期生长期间收集，并且在含有50％基质胶TM (BDBiosciences)的PBS中再悬浮。每只小鼠在右侧经皮下接受1x 107个细胞(0.2mL细胞悬浮液)。当平均体积接近所需的80–120mm3范围时，在两个维度上测量肿瘤以控制生长。肿瘤尺寸(以mm3计)由下式计算：
其中，w＝肿瘤的宽度，l＝肿瘤的长度(以mm计)。肿瘤的重量可以通过假定1mg等价于1mm3肿瘤体积估算。10-30天后(取决于所用的细胞系)，具有108–126mm3肿瘤的小鼠被分类至治疗组，平均肿瘤体积为117–119mm3。
检测对象
式(IIa)的化合物在室温下并且避光保存。在每个处理日，通过在0.5％羧甲基纤维素钠(NaCMC)和0.1％80去离子水溶液中悬浮来制备新鲜的化合物制剂。化合物44载体，0.5％NaCMC和0.1％80去离子水溶液，用来在相同日程处理对照组。施用之前，将制剂于4℃避光储存。
若干化学疗法平行于Epizyme化合物使用。使用无菌盐水重建环磷酰胺(Baxter,Lot#016591)至20mg/mL，并于4℃储存。通过使用盐水稀释制备用于每个剂量的新鲜剂量溶液。多柔比星(DoxorubicinMeiji Pharmaceutical Co.Ltd.,1mg/mL)于4℃储存，并在每个处理日中使用盐水稀释。长春新碱(Hospira,Inc.,1mg/mL)在每个处理日中使用盐水稀释。泼尼松(Boehringer Ingelheim GmbH,1mg/mL)在每个5天剂量周期的开始使用PBS稀释。
处理计划
使用剂量范围为75–600mg/kg的化合物，以TID(每8小时一次，一日三次)、BID(每12小时一次，一日两次)或QD(一日一次)的日程在不同天数中通过灌胃或通过静脉内、腹腔内或皮下途径注射处理小鼠。每剂量以体积0.2mL/20g小鼠(10mL/kg)输送，并根据最后记录的单个动物的体重调节。最大处理时长为28天。
肿瘤体积中位数(MTV)和肿瘤生长抑制(TGI)分析
处理效果在最后处理日测定。确定每一组的MTV(n)，若干个，n，在最后日可估测的动物的平均肿瘤体积。百分比肿瘤生长抑制(％TGI)可以通过若干方法定义。首先，指定对照组的MTV(n)和药物处理组的MTV(n)的区别以对照组MTV(n)的百分比表达：
计算％TGI的另一种方法是考虑从第一天至第n天的肿瘤尺寸的变化，其中n是最后治疗日。
ΔMTV对照＝MTV(n)对照-MTV(1)对照
ΔMTV处理＝MTV(n)处理-MTV(1)处理
肿瘤生长延迟分析
可选地，在最后治疗日后，小鼠留活以用于肿瘤生长延迟分析。肿瘤每周两次使用卡尺测量，并且每只动物当其肿瘤达到2000mm3的端点体积时或在预定的最后研究日，被执行安乐死，以先者为准。每只小鼠的到达端点时间(TTE)使用以下方程计算：
其中b是直线的截距并且m是其斜度，所述直线通过对数变换的肿瘤生长数据集线性回归得到。数据集由超过研究端点体积的首次观察和紧将要达到端点体积的三次连续观察组成。未达到体积端点的动物被指定等同于研究最后日(预定的)的TTE值。任意归类为治疗相关(TR)死亡的动物被指定等同于死亡日的TTE值。任意归类为非治疗相关(NTR)死亡的动物被排除在TTE计算以及所有深入分析之外。
治疗效果通过肿瘤生长延迟(TGD)确定，其被定义为处理组相对于对照组平均TTE的增长：
TGD＝T-C
以天数，或以对照组平均TTE的百分比表示：
其中：
T＝处理组的平均TTE
C＝对照组的平均TTE
毒性:
第1-5日动物每天称重，然后每周两次直至研究完成。频繁地检查小鼠有无任意有文件记录的有害的外显信号、处理相关的副作用。最大耐受剂量(MTD)的可接受毒性被定义为在测试中组平均BW减少少于20％并且源于TR的死亡率不多于10％。若果死亡是由于经临床信号和/或尸检佐证的处理的副作用或由于施用时期的未知原因导致的，则其将被分类为TR。如果有证据表明死亡与处理的副作用无关，则其将被分类为NTR。施用间隔中的NTR死亡通常被分类为NTRa(由事故或人为差错导致)或NTRm(由尸检确认的通过入侵和/或转移的肿瘤扩散导致)。口服处理的动物在施用期间死于未知原因的，当组表现不支持TR分类和尸检，无法排除施用差错时可以被分类为NTRu。
取样
在研究中的若干天，以预定方法对小鼠取样。取样包括从下颚静脉无麻醉非终端取血(0.25mL)以及通过CO2麻醉下的终端心脏穿刺收集全体积血。使用K2-EDTA作为阻凝剂处理血样品得到血浆。血浆样品在化合物水平的生物分析之前，于–80℃冷冻并储存。
从特定小鼠中在无RNA酶条件下收集肿瘤并均分。取自每个肿瘤的一半中的2mm厚的薄片使用福尔马林固定24小时并转移至70％乙醇。固定的肿瘤组织用石蜡包埋。来自每只动物的剩余肿瘤组织在液氮中速冻并使用研钵及研杵磨碎。
特定小鼠用于包括脾、皮肤、骨髓和须的替代组织的取样。每个组织被分离并固定和/速冻。
统计和图像分析
所有统计和图像分析均使用适用于Windows的Prism 3.03(GraphPad)进行。若干分析方法被采用。中间的D29肿瘤体积与Kruskal-Wallis测试和事后邓恩多重比较试验对比。这些测试进行三次。
双尾统计分析在P＝0.05处进行。棱镜以在P>0.05处非显著(ns)、在0.01<P<0.05处显著(以“*”表示)、在0.001<P<0.01非常显著(“**”)以及在P>0.001处极其显著(“***”)报道结果。
为了测试对照组合处理组在整个处理历程中的统计显著性，使用重复测量的方差分析测试和随后的邓恩多重比较试验或者2因素方差分析。
对于图解表示法，“盒须”图表被构建以表示每一组中单个肿瘤体积的分配。盒表示观测物的第25至第75百分数，水平线对应中值，并且“须”指示最大和最小值。中或平均(±SEM)肿瘤体积作为时间的函数绘制于半对数或线形图上。组平均BW在研究过程中的改变以从D1的百分比改变绘制，±SEM。
散点图被构建以通过组显示TTE值。TTE图包括NTR死亡，其被排除在其它所有图表分析之外。动物因为肿瘤尺寸得到研究的关注时，该动物被记录的最终肿瘤体积被包括入用以计算后续时间点中的平均体积的数据中。每组中留在研究中的动物的百分比对时间，出现在Kaplan-Meier生存图中。
组蛋白萃取
为了萃取组蛋白，60-90mg肿瘤组织在1.5ml核萃取缓冲液中匀化(10mM Tris-HCl,10mM MgCl2,25mM KCl,1％Triton X-100,8.6％Sucrose加上Roche蛋白酶抑制剂片1836145)，并且在冰上培养5分钟。通过在600g于4℃离心5分钟收集核，并且使用PBS洗涤一次。去除上清液，使用0.4N冷硫酸以涡流每15分钟萃取组蛋白，持续1小时。萃取物通过在10000g于4℃离心10分钟澄清，并转移至新的，包含10x体积的冰冷丙酮的微量离心管中。组蛋白在-20℃沉淀2小时-过夜，通过在10000g离心10分钟形成小球，并在水中再悬浮。
酶联免疫吸附测定(ELISA)
从前文描述的肿瘤样品中萃取组蛋白。组蛋白以当量浓度在包被缓冲液(PBS+0.05％BSA)中制备，产出样品0.5ng/ul，两份100ul样品或标准品添加至96孔ELISA板(Thermo Labsystems,Immulon 4HBX#3885)中。密封盖板并在4℃培养过夜。次日，使用300ul/孔PBST(PBS+0.05％Tween 20；10X PBST,KPL#51-14-02)在Bio Tek洗板器上洗板3x。使用300ul/孔稀释剂(PBS+2％BSA+0.05％Tween 20)封闭板，室温下培养2小时，并使用PBST洗涤3x。使用稀释剂稀释所用抗体。向每个板中加入100ul/孔的抗-H3K27me3(CST#9733,50％甘油1:1,000)或抗总H3(Abcam ab1791,50％glycerol 1:10,000)。在室温下培养该板90分钟并使用PBST洗涤3x。向H3K27Me3板加入100ul/孔的抗Rb-IgG-HRP(CellSignaling Technology,7074)，1:6,000相对于H3板，并在室温下培养90分钟。使用PBST洗板4x。添加100ul/孔的TMB底物(BioFx Laboratories,#TMBS)，在室温下避光培养该板5分钟。使用100ul/孔的1N H2SO4停止反应。在SpectaMax M5 Microplate读取器上读取450nm的吸光度。
SUDHL6移植瘤模型的效果研究
使用化合物44以及和CHOP联用对于体内肿瘤生长抑制的效果，在SUDHL6移植瘤模型中确定。建立肿瘤生长和存活率的对比，化合物44和CHOP的施用抑制或延迟肿瘤生长，增加荷瘤小鼠的存活率。无胸腺裸鼠皮下注射1x107SUDHL6人淋巴瘤细胞。化合物44每天一次(QD)、每天两次(BID)或每天三次(TID)以指定浓度(75mg/kg、150mg/kg或225mg/kg)施用。小鼠在第1天和第8天接受CHOP。每周两次测定肿瘤体积直至60天的端点或当肿瘤体积达到2000mm3，取其在先者。
与单独使用CHOP或化合物44处理的小鼠对比，化合物44和CHOP的联用在治疗历程中(28天)对肿瘤生长显示抑制性(图6A)。明显地，接受化合物44和CHOP联合治疗的小鼠显示出肿瘤尺寸的持续退化；在第60天，25mg/kg BID、CHOP联用组中，12只中的7只小鼠证实完全反应(图6A)。确定Kaplan-Meier曲线以显示研究中小鼠的存活率。注射后60天，接受化合物44和CHOP联合治疗的小鼠中，有57％存活。化合物44的单一试剂效果在28天的处理中未被观测，然而，组内的高生活力可能掩盖了化合物44作为单一试剂的治疗效果。
WSU-DLCL2移植瘤模型的效果研究
使用化合物44以及和CHOP联用对于体内肿瘤生长抑制的效果，在WSU-DLCL2移植瘤模型中确定。建立肿瘤生长和存活率的对比，化合物44和CHOP的施用抑制或延迟肿瘤生长，增加荷瘤小鼠的存活率。SCID小鼠皮下注射1x107WSU-DLCL2人淋巴瘤细胞。化合物44每天一次(QD)、每天两次(BID)或每天三次(TID)以指定浓度(150mg/kg、225mg/kg、300mg/kg或600mg/kg)施用。小鼠在第1天和第22天接受CHOP(第1天和第8天，CHOP在SCID小鼠内不耐受)。每周两次测定肿瘤体积直至28天的端点。
化合物44单独使用或与CHOP联用治疗带来肿瘤生长的抑制(图7)。化合物44作为单独试剂以150mg/kg每天三次(TID)以及225mg/kg每天两次(BID)的施用带来与对照载体处理的小鼠相对比，明显更小体积的肿瘤(p<0.05)。此外，化合物44和CHOP的联用治疗显示与对照载体处理的小鼠相对比的，对肿瘤生长的统计学显著的抑制(p<0.001)。使用重复测量变异数继以Dunnett后测试分析计算统计分析。肿瘤生长抑制也被计算，其揭示出使用化合物44处理肿瘤在所有剂量(表2)带来肿瘤生长抑制。重要地，化合物44与CHOP联用治疗带来最大肿瘤生长抑制。
表2.WSU-DLCL2移植瘤模型的肿瘤生长抑制(TGI)
组 来自第一天的％TGI 来自第七天的％TGI
150mg/kg TID 73 86
225mg/kg BID 71 80
300mg/kg BID 57 67
600mg/k gQD 58 70
CHOP combo 93 100
CHOP 45 51
为了检查施用的试剂的吸收和分布，进行药代动力学分析以确定荷瘤小鼠血浆中化合物44的浓度(ng/mL)(图7B)。在第28天，先于最后施用5分钟(“谷”)以及最后施用后3小时(“峰”)获取血浆样品。使用LC-MS/MS分析血浆样品以确定化合物44的浓度(ng/mL)。每日两次(BID)以225mg/kg接受作为单一试剂的化合物44的与接受225mg/kg的化合物44(BID)与CHOP的小鼠，在谷时间点上，其化合物44的浓度没有显著的不同。然而，最后施用3小时后，化合物44的与接受单一试剂的化合物44的小鼠相比，化合物44的浓度在每日两次(BID)接受225mg/kg的化合物44与CHOP的小鼠显著增加。
药代动力学分析的进行也是用以确定肿瘤组织中化合物44的浓度(ng/g)，其收集自第28天最后施用治疗3小时后的的小鼠(图7C)。
体内靶标抑制的作用通过分析处理28天后的肿瘤中组蛋白的甲基化状态确定。蛋白质印迹法分析(图8A)证明WSU-DLCL2肿瘤中的H3K27的甲基化被任意剂量和施用日程的化合物44抑制。组蛋白如前文所描述萃取。使用BCA试验(Pierce)确定酸萃取后的组蛋白的蛋白质浓度。每个溶菌产物的400-800ng在10-20％Tris-甘氨酸胶(Biorad)上分解，使用iBlot转移(在项目3上使用硝化纤维传输堆栈7分钟)，并使用以下抗体在Odyssey封闭缓冲液中探测：兔抗-H3K27me3 CST 9733；1:20000稀释)以及鼠抗总H3(CST 3638；1:20000dilution)。继以主要Ab培养，使用IRDye 800CW驴-抗-鼠-总H3(CST 3638；1:20000dilution)和Alexa Fluor 680羊-抗-兔IgG(Invitrogen#A-21076)次级Ab探测薄片，并使用LiCOR Odyssey系统显影。；来自总的组蛋白H3的信号被用作对照。
使用对WSU-DLCL2肿瘤中组蛋白甲基化的分析确认，组蛋白的甲基化被任意剂量以及施用日程的化合物44抑制(图8B)。来自接受载体或CHOP小鼠的肿瘤不展现H3K27处的甲基化。组蛋白在治疗后28天从肿瘤中萃取出，并通过ELISA按前文的描述分析。
SUDHL10转移瘤模型的效果研究
使用化合物44以及与COP(环磷酰胺、长春新碱(Oncovin)[长春新碱]和泼尼松)联用对于体内肿瘤生长的抑制效果，在在SUDHL10移植瘤模型中确定。建立肿瘤生长和存活率的对比，化合物44和COP的施用抑制或延迟肿瘤生长。SCID小鼠皮下注射1x107SUDHL10人淋巴瘤细胞。化合物44每天两次(BID)或每天三次(TID)以指定浓度(125mg/kg、250mg/kg或500mg/kg)施用。小鼠在第1天和第22天接受CHOP(第1天和第8天，CHOP在SCID小鼠内不耐受)。每周两次测定肿瘤体积直至28天的端点。鼠群的一半在28天治疗后安乐死，而另一半则被分析直至用于分析肿瘤生长延迟的60天端点。
图9A显示化合物44作为单一试剂，当每日两次(BID)以250mg/kg和500mg/kg单独输送时，当与载体处理的对照小鼠(p<0.001)对比时，显示出统计学显著的肿瘤生长抑制。此外，每日两次(BID)以250mg/kg的化合物44与COP的联合治疗，与载体处理的对照小鼠(p<0.001)相比，显示出统计学显著的肿瘤生长抑制。使用重复测量变异数继以Dunnett后测试分析计算统计分析。500mg/kg BID组中的一只小鼠，由于不良的身体条件，在第15天安乐死。接受化合物44和COP联合治疗的小鼠在第25天展现8％的体重减轻，此时施用暂停，但在第27天继续。第29天250mg/kg和500mg/kg组的1/16和2/15小鼠无肿瘤。引人注目地，接受化合物44和COP联用治疗的10/14小鼠在第29天无肿瘤。
肿瘤生长抑制也被计算，其揭示出以所有剂量使用化合物44，与或不与COP联用处理SUDHL10移植瘤模型，带来有效的肿瘤生长抑制(表3)。
表3.SUDHL10移植瘤模型的肿瘤生长抑制(TGI)
组 来自第一天的％TGI 来自第七天的％TGI
125mg/kg BID 54 57
250mg/kg BID 101 113
500mg/kg BID 104 115
COP 42 43
COP combo 107 108
第28天小鼠安乐死后，称重肿瘤(图9B)。取自以125mg/kg接受化合物44或COP单一施用的小鼠的肿瘤，与对照小鼠(载体)对比明显较小。取自接受化合物44和COP联合治疗的小鼠的肿瘤，比取自以250mg/kg和500mg/kg的剂量接受化合物44作为单一试剂的小鼠的肿瘤显著较小。
鼠群的一半在维持至第60天，以通过测定肿瘤生长延迟确定有效治疗(图9C)。以250mg/kg和500mg/kg剂量化合物44作为单一试剂处理的小鼠中的肿瘤生长，在第28天展现出小肿瘤，而对照和使用COP处理的小鼠则展现出大肿瘤，其在第28天后继续生长。引人注目地，接受联合治疗的的小鼠与所有其它治疗组相比，不仅具有较小的肿瘤，还展现出显著并持久的肿瘤生长延迟。
图9D显示Kaplan-Meier曲线，其描绘使用化合物44单独处理的或与COP联用处理的小鼠的存活率。以125mg/kg、250mg/kg和500mg/kg的化合物44作为单一试剂施用相对于对照小鼠或禁用COP处理的小鼠，增加了小鼠的存活率。显著地，化合物44与COP联用施用改相对于单一试剂施用，改善了小鼠的生存率。
药代动力学和药效学研究在SUDHL10移植瘤模型中进行。图10A显示化合物44在血浆水平的浓度(ng/mL)的药代动力学分析。在第28天，先于最后施用5分钟(“谷”)以及最后施用后3小时(“峰”)从荷瘤小鼠获取血浆样品。化合物44的浓度通过LC-MS确定。通过ELISA进行药效学分析，确定三甲基化的H3K27在肿瘤样品中的比例。药效学分析同样在其它组织中进行，特别是荷瘤小鼠的脾和骨髓中，以显示代替小鼠正常组织中的化合物44的组蛋白甲基化抑制效果(图10B和10C)。
实施例7:化合物44和抗癌试剂联合治疗的协同作用
方法
人淋巴瘤细胞系WSU-DLCL2(DSMZ；ACC 575)、SU-DHL-10(DSMZ；ACC 576)、和Toledo(ATCC；CRL-2631)从指定来源获取并保存在添加了10％-20％热灭活的胎牛血清和2mM谷氨酰胺的RPMI-1640培养基中。在调湿培养箱的细胞培养瓶中，在37℃下，5％CO2和95％空气的氛围中培养该细胞。WSU-DLCL2和SU-DHL-10包含Y641 EZH2突变，并且Toledo细胞系包含WT EZH2。
检测化合物44与以下药物：阿糖胞苷、顺铂、地西他滨、地塞米松、依维莫司、泼尼松龙和多柔比星联用的体外抗增殖作用。WSU-DLCL2、SU-DHL-10或Toledo人淋巴瘤细胞被分解至起始播种浓度并装入96孔细胞培养板，其中每种浓度的化合物44在板中的一行。6天后，Toledo细胞被分解至起始播种浓度并装入96孔细胞培养板，其中每种浓度的化合物44在板中的一行。随后向板内加入增加剂量的药物。每列一个剂量，形成化合物44和药物浓度的基质。额外3天的培养后，WSU-DLCL2或SU-DHL-10的细胞生活力使用Promega细胞Titer-Glo试剂，继以化学发光检定法测定。5天后，Toledo细胞的生活率使用Promega细胞Titer-Glo试剂继以化学发光检定法测定。
数据分析
使用Biosoft软件包Calcusyn来测定协同作用，所述软件包基于Chou-Talalay药物联合的方法，其使用中位数作用方程(Chou 2006)。首先，原始发光值被转化为百分抑制率或分数影响(fraction affected，Fa)，其使用对照作为最大抑制并使用DMSO处理的细胞作为位于每个板上的最小抑制对照。将化合物联用的每个恒定的比率的百分比抑制率输入Calcusyn，以确定联合指数值。联合指数值小于1表明协同作用。
对于不能抑制50％细胞生活力的测试化合物，不能使用Calcusyn确定协同作用。取而代之地，数据以化合物44的IC50的倍数IC50转移报道。可选地，如果化合物44对Toledo细胞不具有作用，则报道药物的倍数IC50转移而非化合物44的。
对于不以50％抑制细胞活性的测试化合物来说，不能使用Calcusyn来确定协同作用。数据改为作为化合物44的IC50的IC50变化倍数来报道。或者，如果化合物44并不具有效果，如同Toledo细胞，那么对于药物IC50变化倍数而非化合物44被报道。
结论
对WSU-DLCL2和SU-DHL-10细胞使用化合物44和阿糖胞苷、顺铂、多柔比星、地西他滨或依维莫司处理证实了细胞生活力的协同性降低。WSU-DLCL2和SU-DHL-10细胞内与化合物44和地西他滨联用的联用指数值小于0.1，根据Chou-Talalay表征(Chou 2006)，其表示为非常强的协同作用。WSU-DLCL2细胞内与化合物44和依维莫司联用的联用指数值小于0.1，SU-DHL-10内在0.1-0.3之间，其分别表示为非常强的协同作用和强协同作用。WSU-DLCL2和SU-DHL-10细胞内与化合物44和阿糖胞苷、顺铂或多柔比星联用的联用指数值在0.3-0.7之间，其表示为协同作用(Chou 2006)。化合物44与泼尼松龙的结合，在最高剂量泼尼松龙下，提高化合物44的效能，对于WSU-DLCL2是7倍，对于SU-DHL-10细胞是3倍。此外，化合物44与地塞米松的结合在最高剂量地塞米松下，提高化合物44的效能，对于WSU-DLCL2细胞是17倍，对于SU-DHL-10是3倍。
Toledo细胞系对化合物44不显示敏感性，并且当化合物44与阿糖胞苷、顺铂、多柔比星、地西他滨、依维莫司、泼尼松龙或地塞米松联用时，观测不到联用的优点。因此，这些试验中看到的联用优点看上去取决于EZH2突变。
表4化合物和细胞系清单
通过引用的合并
本文引用的所有公开物和专利文献均通过引用并入本文，如同这些公开或文件被具体地单独指明被通过引用并入本文。公开物和专利文献的引用并非意在承认任何内容与现有技术相关，或者构成任何对其内容或日期的承认。本发明在此通过书面说明来说明，本领域技术人员将认识到本发明可以以多种实施方式来实施，并且前文的描述和随后的实施例的目的在于阐释，而并非对所附的权利要求书进行限定。
等同
本发明可以以其它具体形式实施而不违背其精神或实质特征。因此，前文中的实施方式将在各方面被认为对于本文所描述的发明是解释性的而非限制性的。因此，本发明的范围通过所附的权利要求书指出而非通过前文的描述，并且在权利要求的等同的含义和范围内的所有变化被认为包括在本发明内。
序列表
<110> Epizyme股份有限公司
<120> 用于治疗癌症的联合治疗
<130> EPIZ-009001WO
<140> PCT/US13/36452
<141> 2013-04-12
<150> 61/785,169
<151> 2013-03-14
<150> 61/624,194
<151> 2012-04-13
<160> 12
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
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<212> PRT
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Ile Leu Glu Arg Thr Glu Ile Leu Asn Gln Glu Trp Lys Gln Arg Arg
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Pro Glu Glu Arg Glu Glu Lys Gln Lys Asp Leu Glu Asp His Arg Asp
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Thr Tyr Lys Arg Lys Asn Thr Glu Thr Ala Leu Asp Asn Lys Pro Cys
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Pro Ala Glu Asp Val Asp Thr Pro Pro Arg Lys Lys Lys Arg Lys His
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gaagcgtgta aaatcagagt acatgcgact gagacagctc aagaggttca gacgagctga 300
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tcctcctgaa tgtaccccca acatagatgg accaaatgct aaatctgttc agagagagca 1020
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gcaaagctta cactcctttc atacgctttt ctgtaggcga tgttttaaat atgactgctt 960
cctacatcct tttcatgcaa cacccaacac ttataagcgg aagaacacag aaacagctct 1020
agacaacaaa ccttgtggac cacagtgtta ccagcatttg gagggagcaa aggagtttgc 1080
tgctgctctc accgctgagc ggataaagac cccaccaaaa cgtccaggag gccgcagaag 1140
aggacggctt cccaataaca gtagcaggcc cagcaccccc accattaatg tgctggaatc 1200
aaaggataca gacagtgata gggaagcagg gactgaaacg gggggagaga acaatgataa 1260
agaagaagaa gagaagaaag atgaaacttc gagctcctct gaagcaaatt ctcggtgtca 1320
aacaccaata aagatgaagc caaatattga acctcctgag aatgtggagt ggagtggtgc 1380
tgaagcctca atgtttagag tcctcattgg cacttactat gacaatttct gtgccattgc 1440
taggttaatt gggaccaaaa catgtagaca ggtgtatgag tttagagtca aagaatctag 1500
catcatagct ccagctcccg ctgaggatgt ggatactcct ccaaggaaaa agaagaggaa 1560
acaccggttg tgggctgcac actgcagaaa gatacagctg aaaaaggacg gctcctctaa 1620
ccatgtttac aactatcaac cctgtgatca tccacggcag ccttgtgaca gttcgtgccc 1680
ttgtgtgata gcacaaaatt tttgtgaaaa gttttgtcaa tgtagttcag agtgtcaaaa 1740
ccgctttccg ggatgccgct gcaaagcaca gtgcaacacc aagcagtgcc cgtgctacct 1800
ggctgtccga gagtgtgacc ctgacctctg tcttacttgt ggagccgctg accattggga 1860
cagtaaaaat gtgtcctgca agaactgcag tattcagcgg ggctccaaaa agcatctatt 1920
gctggcacca tctgacgtgg caggctgggg gatttttatc aaagatcctg tgcagaaaaa 1980
tgaattcatc tcagaatact gtggagagat tatttctcaa gatgaagctg acagaagagg 2040
gaaagtgtat gataaataca tgtgcagctt tctgttcaac ttgaacaatg attttgtggt 2100
ggatgcaacc cgcaagggta acaaaattcg ttttgcaaat cattcggtaa atccaaactg 2160
ctatgcaaaa gttatgatgg ttaacggtga tcacaggata ggtatttttg ccaagagagc 2220
catccagact ggcgaagagc tgttttttga ttacagatac agccaggctg atgccctgaa 2280
gtatgtcggc atcgaaagag aaatggaaat cccttgacat ctgctacctc ctcccccctc 2340
ctctgaaaca gctgccttag cttcaggaac ctcgagtact gtgggcaatt tagaaaaaga 2400
acatgcagtt tgaaattctg aatttgcaaa gtactgtaag aataatttat agtaatgagt 2460
ttaaaaatca actttttatt gccttctcac cagctgcaaa gtgttttgta ccagtgaatt 2520
tttgcaataa tgcagtatgg tacatttttc aactttgaat aaagaatact tgaacttgtc 2580
cttgttgaat c 2591
<210> 5
<211> 707
<212> PRT
<213> EZH2的全部氨基酸，异形体b(人)
<400> 5
Met Gly Gln Thr Gly Lys Lys Ser Glu Lys Gly Pro Val Cys Trp Arg
1 5 10 15
Lys Arg Val Lys Ser Glu Tyr Met Arg Leu Arg Gln Leu Lys Arg Phe
20 25 30
Arg Arg Ala Asp Glu Val Lys Ser Met Phe Ser Ser Asn Arg Gln Lys
35 40 45
Ile Leu Glu Arg Thr Glu Ile Leu Asn Gln Glu Trp Lys Gln Arg Arg
50 55 60
Ile Gln Pro Val His Ile Leu Thr Ser Val Ser Ser Leu Arg Gly Thr
65 70 75 80
Arg Glu Val Glu Asp Glu Thr Val Leu His Asn Ile Pro Tyr Met Gly
85 90 95
Asp Glu Val Leu Asp Gln Asp Gly Thr Phe Ile Glu Glu Leu Ile Lys
100 105 110
Asn Tyr Asp Gly Lys Val His Gly Asp Arg Glu Cys Gly Phe Ile Asn
115 120 125
Asp Glu Ile Phe Val Glu Leu Val Asn Ala Leu Gly Gln Tyr Asn Asp
130 135 140
Asp Asp Asp Asp Asp Asp Gly Asp Asp Pro Glu Glu Arg Glu Glu Lys
145 150 155 160
Gln Lys Asp Leu Glu Asp His Arg Asp Asp Lys Glu Ser Arg Pro Pro
165 170 175
Arg Lys Phe Pro Ser Asp Lys Ile Phe Glu Ala Ile Ser Ser Met Phe
180 185 190
Pro Asp Lys Gly Thr Ala Glu Glu Leu Lys Glu Lys Tyr Lys Glu Leu
195 200 205
Thr Glu Gln Gln Leu Pro Gly Ala Leu Pro Pro Glu Cys Thr Pro Asn
210 215 220
Ile Asp Gly Pro Asn Ala Lys Ser Val Gln Arg Glu Gln Ser Leu His
225 230 235 240
Ser Phe His Thr Leu Phe Cys Arg Arg Cys Phe Lys Tyr Asp Cys Phe
245 250 255
Leu His Pro Phe His Ala Thr Pro Asn Thr Tyr Lys Arg Lys Asn Thr
260 265 270
Glu Thr Ala Leu Asp Asn Lys Pro Cys Gly Pro Gln Cys Tyr Gln His
275 280 285
Leu Glu Gly Ala Lys Glu Phe Ala Ala Ala Leu Thr Ala Glu Arg Ile
290 295 300
Lys Thr Pro Pro Lys Arg Pro Gly Gly Arg Arg Arg Gly Arg Leu Pro
305 310 315 320
Asn Asn Ser Ser Arg Pro Ser Thr Pro Thr Ile Asn Val Leu Glu Ser
325 330 335
Lys Asp Thr Asp Ser Asp Arg Glu Ala Gly Thr Glu Thr Gly Gly Glu
340 345 350
Asn Asn Asp Lys Glu Glu Glu Glu Lys Lys Asp Glu Thr Ser Ser Ser
355 360 365
Ser Glu Ala Asn Ser Arg Cys Gln Thr Pro Ile Lys Met Lys Pro Asn
370 375 380
Ile Glu Pro Pro Glu Asn Val Glu Trp Ser Gly Ala Glu Ala Ser Met
385 390 395 400
Phe Arg Val Leu Ile Gly Thr Tyr Tyr Asp Asn Phe Cys Ala Ile Ala
405 410 415
Arg Leu Ile Gly Thr Lys Thr Cys Arg Gln Val Tyr Glu Phe Arg Val
420 425 430
Lys Glu Ser Ser Ile Ile Ala Pro Ala Pro Ala Glu Asp Val Asp Thr
435 440 445
Pro Pro Arg Lys Lys Lys Arg Lys His Arg Leu Trp Ala Ala His Cys
450 455 460
Arg Lys Ile Gln Leu Lys Lys Asp Gly Ser Ser Asn His Val Tyr Asn
465 470 475 480
Tyr Gln Pro Cys Asp His Pro Arg Gln Pro Cys Asp Ser Ser Cys Pro
485 490 495
Cys Val Ile Ala Gln Asn Phe Cys Glu Lys Phe Cys Gln Cys Ser Ser
500 505 510
Glu Cys Gln Asn Arg Phe Pro Gly Cys Arg Cys Lys Ala Gln Cys Asn
515 520 525
Thr Lys Gln Cys Pro Cys Tyr Leu Ala Val Arg Glu Cys Asp Pro Asp
530 535 540
Leu Cys Leu Thr Cys Gly Ala Ala Asp His Trp Asp Ser Lys Asn Val
545 550 555 560
Ser Cys Lys Asn Cys Ser Ile Gln Arg Gly Ser Lys Lys His Leu Leu
565 570 575
Leu Ala Pro Ser Asp Val Ala Gly Trp Gly Ile Phe Ile Lys Asp Pro
580 585 590
Val Gln Lys Asn Glu Phe Ile Ser Glu Tyr Cys Gly Glu Ile Ile Ser
595 600 605
Gln Asp Glu Ala Asp Arg Arg Gly Lys Val Tyr Asp Lys Tyr Met Cys
610 615 620
Ser Phe Leu Phe Asn Leu Asn Asn Asp Phe Val Val Asp Ala Thr Arg
625 630 635 640
Lys Gly Asn Lys Ile Arg Phe Ala Asn His Ser Val Asn Pro Asn Cys
645 650 655
Tyr Ala Lys Val Met Met Val Asn Gly Asp His Arg Ile Gly Ile Phe
660 665 670
Ala Lys Arg Ala Ile Gln Thr Gly Glu Glu Leu Phe Phe Asp Tyr Arg
675 680 685
Tyr Ser Gln Ala Asp Ala Leu Lys Tyr Val Gly Ile Glu Arg Glu Met
690 695 700
Glu Ile Pro
705
<210> 6
<211> 200
<212> PRT
<213> EZH2氨基酸序列的氨基酸残基533-732(人)
<400> 6
Ser Cys Pro Cys Val Ile Ala Gln Asn Phe Cys Glu Lys Phe Cys Gln
1 5 10 15
Cys Ser Ser Glu Cys Gln Asn Arg Phe Pro Gly Cys Arg Cys Lys Ala
20 25 30
Gln Cys Asn Thr Lys Gln Cys Pro Cys Tyr Leu Ala Val Arg Glu Cys
35 40 45
Asp Pro Asp Leu Cys Leu Thr Cys Gly Ala Ala Asp His Trp Asp Ser
50 55 60
Lys Asn Val Ser Cys Lys Asn Cys Ser Ile Gln Arg Gly Ser Lys Lys
65 70 75 80
His Leu Leu Leu Ala Pro Ser Asp Val Ala Gly Trp Gly Ile Phe Ile
85 90 95
Lys Asp Pro Val Gln Lys Asn Glu Phe Ile Ser Glu Tyr Cys Gly Glu
100 105 110
Ile Ile Ser Gln Asp Glu Ala Asp Arg Arg Gly Lys Val Tyr Asp Lys
115 120 125
Tyr Met Cys Ser Phe Leu Phe Asn Leu Asn Asn Asp Phe Val Val Asp
130 135 140
Ala Thr Arg Lys Gly Asn Lys Ile Arg Phe Ala Asn His Ser Val Asn
145 150 155 160
Pro Asn Cys Tyr Ala Lys Val Met Met Val Asn Gly Asp His Arg Ile
165 170 175
Gly Ile Phe Ala Lys Arg Ala Ile Gln Thr Gly Glu Glu Leu Phe Phe
180 185 190
Asp Tyr Arg Tyr Ser Gln Ala Asp
195 200
<210> 7
<211> 114
<212> PRT
<213> EZH2氨基酸序列的部分序列跨越氨基酸残基613-726(人)
<400> 7
His Leu Leu Leu Ala Pro Ser Asp Val Ala Gly Trp Gly Ile Phe Ile
1 5 10 15
Lys Asp Pro Val Gln Lys Asn Glu Phe Ile Ser Glu Tyr Cys Gly Glu
20 25 30
Ile Ile Ser Gln Asp Glu Ala Asp Arg Arg Gly Lys Val Tyr Asp Lys
35 40 45
Tyr Met Cys Ser Phe Leu Phe Asn Leu Asn Asn Asp Phe Val Val Asp
50 55 60
Ala Thr Arg Lys Gly Asn Lys Ile Arg Phe Ala Asn His Ser Val Asn
65 70 75 80
Pro Asn Cys Tyr Ala Lys Val Met Met Val Asn Gly Asp His Arg Ile
85 90 95
Gly Ile Phe Ala Lys Arg Ala Ile Gln Thr Gly Glu Glu Leu Phe Phe
100 105 110
Asp Tyr
<210> 8
<211> 342
<212> DNA
<213> 编码GenBank登录号NP_004447的SET域的核苷酸序列(人)
<400> 8
catctattgc tggcaccatc tgacgtggca ggctggggga tttttatcaa agatcctgtg 60
cagaaaaatg aattcatctc agaatactgt ggagagatta tttctcaaga tgaagctgac 120
agaagaggga aagtgtatga taaatacatg tgcagctttc tgttcaactt gaacaatgat 180
tttgtggtgg atgcaacccg caagggtaac aaaattcgtt ttgcaaatca ttcggtaaat 240
ccaaactgct atgcaaaagt tatgatggtt aacggtgatc acaggatagg tatttttgcc 300
aagagagcca tccagactgg cgaagagctg ttttttgatt ac 342
<210> 9
<211> 746
<212> PRT
<213> Y641突变体EZH2的完整氨基酸序列(人)
<400> 9
Met Gly Gln Thr Gly Lys Lys Ser Glu Lys Gly Pro Val Cys Trp Arg
1 5 10 15
Lys Arg Val Lys Ser Glu Tyr Met Arg Leu Arg Gln Leu Lys Arg Phe
20 25 30
Arg Arg Ala Asp Glu Val Lys Ser Met Phe Ser Ser Asn Arg Gln Lys
35 40 45
Ile Leu Glu Arg Thr Glu Ile Leu Asn Gln Glu Trp Lys Gln Arg Arg
50 55 60
Ile Gln Pro Val His Ile Leu Thr Ser Val Ser Ser Leu Arg Gly Thr
65 70 75 80
Arg Glu Cys Ser Val Thr Ser Asp Leu Asp Phe Pro Thr Gln Val Ile
85 90 95
Pro Leu Lys Thr Leu Asn Ala Val Ala Ser Val Pro Ile Met Tyr Ser
100 105 110
Trp Ser Pro Leu Gln Gln Asn Phe Met Val Glu Asp Glu Thr Val Leu
115 120 125
His Asn Ile Pro Tyr Met Gly Asp Glu Val Leu Asp Gln Asp Gly Thr
130 135 140
Phe Ile Glu Glu Leu Ile Lys Asn Tyr Asp Gly Lys Val His Gly Asp
145 150 155 160
Arg Glu Cys Gly Phe Ile Asn Asp Glu Ile Phe Val Glu Leu Val Asn
165 170 175
Ala Leu Gly Gln Tyr Asn Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Gly Asp Asp
180 185 190
Pro Glu Glu Arg Glu Glu Lys Gln Lys Asp Leu Glu Asp His Arg Asp
195 200 205
Asp Lys Glu Ser Arg Pro Pro Arg Lys Phe Pro Ser Asp Lys Ile Phe
210 215 220
Glu Ala Ile Ser Ser Met Phe Pro Asp Lys Gly Thr Ala Glu Glu Leu
225 230 235 240
Lys Glu Lys Tyr Lys Glu Leu Thr Glu Gln Gln Leu Pro Gly Ala Leu
245 250 255
Pro Pro Glu Cys Thr Pro Asn Ile Asp Gly Pro Asn Ala Lys Ser Val
260 265 270
Gln Arg Glu Gln Ser Leu His Ser Phe His Thr Leu Phe Cys Arg Arg
275 280 285
Cys Phe Lys Tyr Asp Cys Phe Leu His Pro Phe His Ala Thr Pro Asn
290 295 300
Thr Tyr Lys Arg Lys Asn Thr Glu Thr Ala Leu Asp Asn Lys Pro Cys
305 310 315 320
Gly Pro Gln Cys Tyr Gln His Leu Glu Gly Ala Lys Glu Phe Ala Ala
325 330 335
Ala Leu Thr Ala Glu Arg Ile Lys Thr Pro Pro Lys Arg Pro Gly Gly
340 345 350
Arg Arg Arg Gly Arg Leu Pro Asn Asn Ser Ser Arg Pro Ser Thr Pro
355 360 365
Thr Ile Asn Val Leu Glu Ser Lys Asp Thr Asp Ser Asp Arg Glu Ala
370 375 380
Gly Thr Glu Thr Gly Gly Glu Asn Asn Asp Lys Glu Glu Glu Glu Lys
385 390 395 400
Lys Asp Glu Thr Ser Ser Ser Ser Glu Ala Asn Ser Arg Cys Gln Thr
405 410 415
Pro Ile Lys Met Lys Pro Asn Ile Glu Pro Pro Glu Asn Val Glu Trp
420 425 430
Ser Gly Ala Glu Ala Ser Met Phe Arg Val Leu Ile Gly Thr Tyr Tyr
435 440 445
Asp Asn Phe Cys Ala Ile Ala Arg Leu Ile Gly Thr Lys Thr Cys Arg
450 455 460
Gln Val Tyr Glu Phe Arg Val Lys Glu Ser Ser Ile Ile Ala Pro Ala
465 470 475 480
Pro Ala Glu Asp Val Asp Thr Pro Pro Arg Lys Lys Lys Arg Lys His
485 490 495
Arg Leu Trp Ala Ala His Cys Arg Lys Ile Gln Leu Lys Lys Asp Gly
500 505 510
Ser Ser Asn His Val Tyr Asn Tyr Gln Pro Cys Asp His Pro Arg Gln
515 520 525
Pro Cys Asp Ser Ser Cys Pro Cys Val Ile Ala Gln Asn Phe Cys Glu
530 535 540
Lys Phe Cys Gln Cys Ser Ser Glu Cys Gln Asn Arg Phe Pro Gly Cys
545 550 555 560
Arg Cys Lys Ala Gln Cys Asn Thr Lys Gln Cys Pro Cys Tyr Leu Ala
565 570 575
Val Arg Glu Cys Asp Pro Asp Leu Cys Leu Thr Cys Gly Ala Ala Asp
580 585 590
His Trp Asp Ser Lys Asn Val Ser Cys Lys Asn Cys Ser Ile Gln Arg
595 600 605
Gly Ser Lys Lys His Leu Leu Leu Ala Pro Ser Asp Val Ala Gly Trp
610 615 620
Gly Ile Phe Ile Lys Asp Pro Val Gln Lys Asn Glu Phe Ile Ser Glu
625 630 635 640
Xaa Cys Gly Glu Ile Ile Ser Gln Asp Glu Ala Asp Arg Arg Gly Lys
645 650 655
Val Tyr Asp Lys Tyr Met Cys Ser Phe Leu Phe Asn Leu Asn Asn Asp
660 665 670
Phe Val Val Asp Ala Thr Arg Lys Gly Asn Lys Ile Arg Phe Ala Asn
675 680 685
His Ser Val Asn Pro Asn Cys Tyr Ala Lys Val Met Met Val Asn Gly
690 695 700
Asp His Arg Ile Gly Ile Phe Ala Lys Arg Ala Ile Gln Thr Gly Glu
705 710 715 720
Glu Leu Phe Phe Asp Tyr Arg Tyr Ser Gln Ala Asp Ala Leu Lys Tyr
725 730 735
Val Gly Ile Glu Arg Glu Met Glu Ile Pro
740 745
<210> 10
<211> 695
<212> PRT
<213> 氨基酸序列(人)
<400> 10
Met Gly Gln Thr Gly Lys Lys Ser Glu Lys Gly Pro Val Cys Trp Arg
1 5 10 15
Lys Arg Val Lys Ser Glu Tyr Met Arg Leu Arg Gln Leu Lys Arg Phe
20 25 30
Arg Arg Ala Asp Glu Val Lys Ser Met Phe Ser Ser Asn Arg Gln Lys
35 40 45
Ile Leu Glu Arg Thr Glu Ile Leu Asn Gln Glu Trp Lys Gln Arg Arg
50 55 60
Ile Gln Pro Val His Ile Leu Thr Ser Cys Ser Val Thr Ser Asp Leu
65 70 75 80
Asp Phe Pro Thr Gln Val Ile Pro Leu Lys Thr Leu Asn Ala Val Ala
85 90 95
Ser Val Pro Ile Met Tyr Ser Trp Ser Pro Leu Gln Gln Asn Phe Met
100 105 110
Val Glu Asp Glu Thr Val Leu His Asn Ile Pro Tyr Met Gly Asp Glu
115 120 125
Val Leu Asp Gln Asp Gly Thr Phe Ile Glu Glu Leu Ile Lys Asn Tyr
130 135 140
Asp Gly Lys Val His Gly Asp Arg Glu Cys Gly Phe Ile Asn Asp Glu
145 150 155 160
Ile Phe Val Glu Leu Val Asn Ala Leu Gly Gln Tyr Asn Asp Asp Asp
165 170 175
Asp Asp Asp Asp Gly Asp Asp Pro Glu Glu Arg Glu Glu Lys Gln Lys
180 185 190
Asp Leu Glu Asp His Arg Asp Asp Lys Glu Ser Arg Pro Pro Arg Lys
195 200 205
Phe Pro Ser Asp Lys Ile Phe Glu Ala Ile Ser Ser Met Phe Pro Asp
210 215 220
Lys Gly Thr Ala Glu Glu Leu Lys Glu Lys Tyr Lys Glu Leu Thr Glu
225 230 235 240
Gln Gln Leu Pro Gly Ala Leu Pro Pro Glu Cys Thr Pro Asn Ile Asp
245 250 255
Gly Pro Asn Ala Lys Ser Val Gln Arg Glu Gln Ser Leu His Ser Phe
260 265 270
His Thr Leu Phe Cys Arg Arg Cys Phe Lys Tyr Asp Cys Phe Leu His
275 280 285
Pro Phe His Ala Thr Pro Asn Thr Tyr Lys Arg Lys Asn Thr Glu Thr
290 295 300
Ala Leu Asp Asn Lys Pro Cys Gly Pro Gln Cys Tyr Gln His Leu Glu
305 310 315 320
Gly Ala Lys Glu Phe Ala Ala Ala Leu Thr Ala Glu Arg Ile Lys Thr
325 330 335
Pro Pro Lys Arg Pro Gly Gly Arg Arg Arg Gly Arg Leu Pro Asn Asn
340 345 350
Ser Ser Arg Pro Ser Thr Pro Thr Ile Asn Val Leu Glu Ser Lys Asp
355 360 365
Thr Asp Ser Asp Arg Glu Ala Gly Thr Glu Thr Gly Gly Glu Asn Asn
370 375 380
Asp Lys Glu Glu Glu Glu Lys Lys Asp Glu Thr Ser Ser Ser Ser Glu
385 390 395 400
Ala Asn Ser Arg Cys Gln Thr Pro Ile Lys Met Lys Pro Asn Ile Glu
405 410 415
Pro Pro Glu Asn Val Glu Trp Ser Gly Ala Glu Ala Ser Met Phe Arg
420 425 430
Val Leu Ile Gly Thr Tyr Tyr Asp Asn Phe Cys Ala Ile Ala Arg Leu
435 440 445
Ile Gly Thr Lys Thr Cys Arg Gln Val Tyr Glu Phe Arg Val Lys Glu
450 455 460
Ser Ser Ile Ile Ala Pro Ala Pro Ala Glu Asp Val Asp Thr Pro Pro
465 470 475 480
Arg Lys Lys Lys Arg Lys His Arg Leu Trp Ala Ala His Cys Arg Lys
485 490 495
Ile Gln Leu Lys Lys Gly Gln Asn Arg Phe Pro Gly Cys Arg Cys Lys
500 505 510
Ala Gln Cys Asn Thr Lys Gln Cys Pro Cys Tyr Leu Ala Val Arg Glu
515 520 525
Cys Asp Pro Asp Leu Cys Leu Thr Cys Gly Ala Ala Asp His Trp Asp
530 535 540
Ser Lys Asn Val Ser Cys Lys Asn Cys Ser Ile Gln Arg Gly Ser Lys
545 550 555 560
Lys His Leu Leu Leu Ala Pro Ser Asp Val Ala Gly Trp Gly Ile Phe
565 570 575
Ile Lys Asp Pro Val Gln Lys Asn Glu Phe Ile Ser Glu Tyr Cys Gly
580 585 590
Glu Ile Ile Ser Gln Asp Glu Ala Asp Arg Arg Gly Lys Val Tyr Asp
595 600 605
Lys Tyr Met Cys Ser Phe Leu Phe Asn Leu Asn Asn Asp Phe Val Val
610 615 620
Asp Ala Thr Arg Lys Gly Asn Lys Ile Arg Phe Ala Asn His Ser Val
625 630 635 640
Asn Pro Asn Cys Tyr Ala Lys Val Met Met Val Asn Gly Asp His Arg
645 650 655
Ile Gly Ile Phe Ala Lys Arg Ala Ile Gln Thr Gly Glu Glu Leu Phe
660 665 670
Phe Asp Tyr Arg Tyr Ser Gln Ala Asp Ala Leu Lys Tyr Val Gly Ile
675 680 685
Glu Arg Glu Met Glu Ile Pro
690 695
<210> 11
<211> 24
<212> PRT
<213> 氨基酸序列(人)
<400> 11
Leu Ala Thr Lys Ala Ala Arg Lys Ser Ala Pro Ala Thr Gly Gly Val
1 5 10 15
Lys Lys Pro His Arg Tyr Arg Pro
20
<210> 12
<211> 2682
<212> DNA
<213> 氨基酸序列(人)
<400> 12
gacgacgttc gcggcgggga actcggagta gcttcgcctc tgacgtttcc ccacgacgca 60
ccccgaaatc cccctgagct ccggcggtcg cgggctgccc tcgccgcctg gtctggcttt 120
atgctaagtt tgagggaaga gtcgagctgc tctgctctct attgattgtg tttctggagg 180
gcgtcctgtt gaattcccac ttcattgtgt acatcccctt ccgttccccc caaaaatctg 240
tgccacaggg ttactttttg aaagcgggag gaatcgagaa gcacgatctt ttggaaaact 300
tggtgaacgc ctaaataatc atgggccaga ctgggaagaa atctgagaag ggaccagttt 360
gttggcggaa gcgtgtaaaa tcagagtaca tgcgactgag acagctcaag aggttcagac 420
gagctgatga agtaaagagt atgtttagtt ccaatcgtca gaaaattttg gaaagaacgg 480
aaatcttaaa ccaagaatgg aaacagcgaa ggatacagcc tgtgcacatc ctgacttctt 540
gttcggtgac cagtgacttg gattttccaa cacaagtcat cccattaaag actctgaatg 600
cagttgcttc agtacccata atgtattctt ggtctcccct acagcagaat tttatggtgg 660
aagatgaaac tgttttacat aacattcctt atatgggaga tgaagtttta gatcaggatg 720
gtactttcat tgaagaacta ataaaaaatt atgatgggaa agtacacggg gatagagaat 780
gtgggtttat aaatgatgaa atttttgtgg agttggtgaa tgcccttggt caatataatg 840
atgatgacga tgatgatgat ggagacgatc ctgaagaaag agaagaaaag cagaaagatc 900
tggaggatca ccgagatgat aaagaaagcc gcccacctcg gaaatttcct tctgataaaa 960
tttttgaagc catttcctca atgtttccag ataagggcac agcagaagaa ctaaaggaaa 1020
aatataaaga actcaccgaa cagcagctcc caggcgcact tcctcctgaa tgtaccccca 1080
acatagatgg accaaatgct aaatctgttc agagagagca aagcttacac tcctttcata 1140
cgcttttctg taggcgatgt tttaaatatg actgcttcct acatcctttt catgcaacac 1200
ccaacactta taagcggaag aacacagaaa cagctctaga caacaaacct tgtggaccac 1260
agtgttacca gcatttggag ggagcaaagg agtttgctgc tgctctcacc gctgagcgga 1320
taaagacccc accaaaacgt ccaggaggcc gcagaagagg acggcttccc aataacagta 1380
gcaggcccag cacccccacc attaatgtgc tggaatcaaa ggatacagac agtgataggg 1440
aagcagggac tgaaacgggg ggagagaaca atgataaaga agaagaagag aagaaagatg 1500
aaacttcgag ctcctctgaa gcaaattctc ggtgtcaaac accaataaag atgaagccaa 1560
atattgaacc tcctgagaat gtggagtgga gtggtgctga agcctcaatg tttagagtcc 1620
tcattggcac ttactatgac aatttctgtg ccattgctag gttaattggg accaaaacat 1680
gtagacaggt gtatgagttt agagtcaaag aatctagcat catagctcca gctcccgctg 1740
aggatgtgga tactcctcca aggaaaaaga agaggaaaca ccggttgtgg gctgcacact 1800
gcagaaagat acagctgaaa aagggtcaaa accgctttcc gggatgccgc tgcaaagcac 1860
agtgcaacac caagcagtgc ccgtgctacc tggctgtccg agagtgtgac cctgacctct 1920
gtcttacttg tggagccgct gaccattggg acagtaaaaa tgtgtcctgc aagaactgca 1980
gtattcagcg gggctccaaa aagcatctat tgctggcacc atctgacgtg gcaggctggg 2040
ggatttttat caaagatcct gtgcagaaaa atgaattcat ctcagaatac tgtggagaga 2100
ttatttctca agatgaagct gacagaagag ggaaagtgta tgataaatac atgtgcagct 2160
ttctgttcaa cttgaacaat gattttgtgg tggatgcaac ccgcaagggt aacaaaattc 2220
gttttgcaaa tcattcggta aatccaaact gctatgcaaa agttatgatg gttaacggtg 2280
atcacaggat aggtattttt gccaagagag ccatccagac tggcgaagag ctgttttttg 2340
attacagata cagccaggct gatgccctga agtatgtcgg catcgaaaga gaaatggaaa 2400
tcccttgaca tctgctacct cctcccccct cctctgaaac agctgcctta gcttcaggaa 2460
cctcgagtac tgtgggcaat ttagaaaaag aacatgcagt ttgaaattct gaatttgcaa 2520
agtactgtaa gaataattta tagtaatgag tttaaaaatc aactttttat tgccttctca 2580
ccagctgcaa agtgttttgt accagtgaat ttttgcaata atgcagtatg gtacattttt 2640
caactttgaa taaagaatac ttgaacttgt ccttgttgaa tc 2682

Claims (10)

1.一种包含式(IIa)的化合物的组合物：
或其药学上可接受的盐，以及一种或多种其它治疗试剂，其中，
Ra和Rb中的每一个都独立地是H或C1-C6烷基，其任选地被一个或多个-Q3-T3取代，其中Q3是键或者未取代或取代的C1-C3烷基连接物，并且T3是H、卤素、4至7元杂环烷基、C1-C3烷基、ORd、COORd、-S(O)2Rd或–NRdRe，其中Rd和Re中的每一个都独立地是H或C1-C6烷基，或者–Q3T3是羰基；
R7是异丙基或C1-C6烷基、C3-C8环烷基、哌啶基、四氢吡喃、四氢-2H-噻喃基、环戊基或环己基、或4至12元杂环烷基，其每个都任选地被一个或多个-Q5-T5取代，其中Q5是键、C(O)、C(O)NRk、NRkC(O)、S(O)2或C1-C3烷基连接物，Rk为H或C1-C6烷基，并且T5是H、卤素、C1-C6烷基、羟基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4至12元杂环烷基、5元或6元杂芳基或S(O)qRq，其中q是0、1或2，并且Rq是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4至12元杂环烷基，或者5元或6元杂芳基，并且T5任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基选自由卤素、C1-C6烷基、羟基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4至12元杂环烷基、5元或6元杂芳基所组成的群组，除了当T5是H、卤素、羟基或氰基时；或者-Q5-T5是羰基；并且
R8是H、甲基或乙基。
2.一种组合物，其包括表1所列的任意一种化合物或其药学上可接受的盐，以及一种或多种其它治疗试剂。
3.一种组合物，其包括化合物44或其药学上可接受的盐，以及一种或多种治疗试剂。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的组合物，其中，所述其它治疗试剂是抗癌试剂或糖皮质激素。
5.根据权利要求1-3中任一项所述的组合物，其中，所述其它治疗试剂选自于泼尼松、泼尼松龙、环磷酰胺、长春新碱、多柔比星、马磷酰胺、顺铂、阿糖胞苷、依维莫司、地西他滨、地塞米松及其类似物、衍生物或组合。
6.根据权利要求1-3中任一项所述的组合物，其中，所述其它治疗试剂是泼尼松或其类似物或衍生物。
7.药物组合物，其包括治疗有效剂量的根据权利要求1-6中任一项以及药学上可接受的载体。
8.一种治疗或预防疾病的方法，所述方法包括向需求其的主体施用治疗有效剂量的根据权利要求1所述的组合物。
9.根据权利要求8所述的方法，其中，可以通过调节组蛋白或其它蛋白的甲基化状态来影响所述疾病。
10.根据权利要求8所述的方法，其中，所述疾病是癌症或癌前状态。
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