CN109744492A - 高生物活性全蛋体发酵物的生产方法及其产品与应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种高生物活性全蛋体发酵物的生产方法，包括：步骤一、将禽蛋清洗杀菌晾干，加入食用有机酸，淹没浸泡；步骤二、搅拌蛋体释放蛋膜及蛋液，多步酶水解，得水解全蛋液；步骤三、将水解全蛋液与益生元混合搅匀后均质，杀菌，冷却，接种酵母、乳酸菌发酵得全蛋体发酵液；步骤四、将全蛋体发酵液与环糊精混匀后均质，包埋，低温冷却静置，离心脱除胆固醇，分离液冷冻干燥，得富含多肽的高钙低胆固醇全蛋体发酵物。本发明还公开了高生物活性全蛋体发酵物及其应用。本发明全蛋体发酵物具有更强的生物活性，能够对人体基础性代谢及免疫系统产生积极的影响，可广泛应用于营养功能性食品、特膳特医食品、保健食品和食品领域的非医药用途方面。

Description

高生物活性全蛋体发酵物的生产方法及其产品与应用

技术领域

本发明涉及食品与生物发酵领域。更具体地说，本发明涉及一种高生物活性全蛋体发酵物的生产方法及其产品与应用。

背景技术

我国是鸡蛋生产大国，鸡蛋产量居世界首位，但是我国蛋制品加工业相对滞后，工厂规模小，数量少，禽蛋消费以鲜蛋为主。鲜蛋保质期短，容易变质，而且蛋壳容易破损不方便运输，直接应用于食品行业不方便。全蛋粉作为鲜蛋的理想替代品，将鲜蛋加工成蛋粉后，具有使用方便、保质期长、无微生物污染等优点，受到了食品加工行业的欢迎。

现有技术中，将鲜蛋制成全蛋粉的工艺主要包括两种，一种是传统醋泡蛋，采用该方法制备的产品对肠胃刺激大，且生物大分子营养素不利于人体吸收，存在疗效不显著、可食用性不强的缺陷，另一种是只对蛋黄、蛋清进行处理，颇具营养价值的蛋壳被丢弃，存在营养物质提取利用率低，营养价值不高的缺陷。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。

本发明还有一个目的是提供一种高生物活性全蛋体发酵物的生产方法及其产品与应用，其发酵物具有更强的生物活性，能够对人体基础代谢及免疫系统产生积极的影响。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种高生物活性全蛋体发酵物的生产方法，包括：

步骤一、将禽蛋或鸡胚蛋清洗杀菌晾干，加入1-3倍禽蛋重量的食用有机酸，淹没并浸泡禽蛋1-6天至蛋壳全部溶解，过滤并收集酸溶液，用水淋洗蛋膜，去除蛋壳不溶物及色素，再次淹没并浸泡在收集的酸溶液中；

步骤二、搅拌蛋体以释放蛋膜及蛋液，在超声波辅助下继续水解1-24个月至全蛋液均匀无结块，加入1/1000-1/100倍蛋体质量的脂肪酶或磷脂酶及1/500-1/50倍蛋体质量的蛋白酶，继续酶水解1-5小时，得水解全蛋液；

步骤三、将水解全蛋液与红糖、菊粉益生元混合搅匀后均质，杀菌，冷却，接种酵母、乳酸菌，菌液接种量为水解全蛋液体积的1-5％，在25-45℃发酵1-15天，得全蛋体发酵液；

步骤四、将全蛋体发酵液过滤，在超声波辅助下加入环糊精，高速分散，混合均质，包埋处理，0-5℃低温冷却静置，离心脱除胆固醇类不溶物，分离液冷冻干燥，得全蛋体发酵物。

优选的是，所述的高生物活性全蛋体发酵物的生产方法，食用有机酸为乳酸、苹果酸、丁酸、醋酸、食用米醋、果醋和/或柠檬酸，食用有机酸的浓度为5-50wt.％。

优选的是，所述的高生物活性全蛋体发酵物的生产方法，脂肪酶来源于米曲霉或米根霉，磷脂酶为磷脂酶A1、A2、C和/或D，蛋白酶为菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶、无花果蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶和/或来源于黑曲霉和芽孢杆菌的酸性蛋白酶或中性蛋白酶或碱性蛋白酶。

优选的是，所述的高生物活性全蛋体发酵物的生产方法，酵母为酿酒酵母，乳酸菌为德式乳杆菌保加利亚亚种、罗伊氏乳杆菌、嗜酸乳杆菌和/或费式丙酸杆菌。

优选的是，所述的高生物活性全蛋体发酵物的生产方法，步骤一中，食用有机酸经过冷冻-解冻预处理具体为：将食用有机酸置于-20℃，加入0.5倍食用有机酸重量的0℃的冰水混合物溶解，搅拌，形成冰晶，再加入0.5倍食用有机酸重量的0℃的冰水混合物溶解，搅拌，形成冰晶，置于-20℃，冷冻1h，捣碎，以1℃/min的速率加热至0℃，加入0℃的冰水混合物，使食用有机酸的浓度达到20wt.％，冷藏1h，即得。

全蛋体发酵物，由所述的生产方法制备，全蛋体发酵物的有机钙的含量不低于2wt.％，多肽蛋白含量不低于20wt.％，多肽蛋白的分子量分布集中在0.5-3k之间，分子量分布集中在1k以下的小分子多肽含量比例不低于60wt.％。

含有全蛋体发酵物的食品，包括全蛋体发酵物及食品配料或添加剂，可为营养功能性食品、特膳特医食品、保健食品和食品领域的非医药用途方面。

全蛋体发酵物在制备预防高血压、高血脂的产品中的应用。

全蛋体发酵物在制备提高骨密度、改善骨质疏松、增强体力、增强免疫力、延寿、抗衰老的产品中的应用。

全蛋体发酵物在制备调经美容、润肠、调节便秘、益智、改善睡眠的产品中的应用。

本发明至少包括以下有益效果：

本发明通过酸水解和双重酶水解和发酵及包埋等方法不仅提高了全蛋(蛋壳、壳膜、蛋清和蛋黄液)营养素的释放，经生物降解和转化后提高了吸收利用率，而且脱除了原蛋液蛋粉的蛋腥味及过高胆固醇，产品富含多种有机钙，磷脂型多肽寡肽及内源活性酶等活性物质，与原蛋液蛋粉及醋蛋液蛋粉等比较具有更高的抗氧化、调节血压血脂与改善动脉硬化，提高骨密度，益智安神，抗疲劳提高免疫力及调经美容等多种生物活性，可广泛应用于营养功能性食品、特膳特医食品、保健食品等，也可进一步分离提纯相关营养功能性物质，应用于生物医药领域和食品领域的非医药用途方面。

本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。

附图说明

图1为ACE抑制率试验的结果图；

图2为ACE抑制率试验的结果图；

图3为多肽分子量分布图；

图4为多肽液相色谱图；

图5为<1kDa多肽液相质谱图；

图6为血压试验的结果图；

图7为血压试验的结果图；

图8为延寿试验的结果图。

具体实施方式

下面结合实例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。

应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不配出一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。

需要说明的是，下述实施方案中所述试验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。

<实例1>

高生物活性全蛋体发酵物的生产方法，包括：

步骤一、将新鲜禽蛋原料经自来水清洗后，再经高浓度电解式臭氧水清洗，清洗水中臭氧浓度为8mg/L，水流量120L/h，杀菌、60％食用酒精消毒蛋壳表面后晾干，加入1倍禽蛋重量的乳酸，乳酸的浓度为5wt.％，淹没并浸泡禽蛋1天至蛋壳全部溶解，过滤并收集酸溶液，用去离子水淋洗蛋膜，去除蛋壳不溶物及色素，再次淹没并浸泡在收集的酸溶液中；

步骤二、搅拌蛋体以释放蛋膜及蛋液，在超声波辅助下继续水解1个月至全蛋液均匀无结块，超声波作用频率为100Hz，超声时间为5min，加入1/1000倍蛋体质量的脂肪酶及1/500倍蛋体质量的蛋白酶，继续酶水解1小时，得水解全蛋液，其中，脂肪酶来源于米曲霉，磷脂酶为磷脂酶A1和D，蛋白酶为菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶；

步骤三、将水解全蛋液与2wt.％红糖、5wt.％菊粉益生元混合搅匀后均质，杀菌，冷却，接种酵母、乳酸菌，菌液接种量分别为水解全蛋液体积的1％，在25℃发酵1天，得全蛋体发酵液，其中，酵母为酿酒酵母，乳酸菌为德式乳杆菌保加利亚亚种、罗伊氏乳杆菌；

步骤四、将全蛋体发酵液过滤，在超声波辅助下加入体积质量比为0.5％的环糊精，超声波作用频率为100Hz，超声时间为5min，高速分散，混合均质，包埋处理，0-5℃低温冷却静置，离心脱除胆固醇类不溶物，分离液冷冻干燥，得全蛋体发酵物。

<实例2>

高生物活性全蛋体发酵物的生产方法，包括：

步骤一、将新鲜鸡胚蛋经自来水清洗后，再经高浓度电解式臭氧水清洗，清洗水中臭氧浓度为30mg/L，水流量500L/h，杀菌、80％食用酒精消毒蛋壳表面后晾干，加入3倍禽蛋重量的苹果酸、丁酸，苹果酸、丁酸的浓度为50wt.％，淹没并浸泡禽蛋6天至蛋壳全部溶解，过滤并收集酸溶液，用去离子水淋洗蛋膜，去除蛋壳不溶物及色素，再次淹没并浸泡在收集的酸溶液中；

步骤二、搅拌蛋体以释放蛋膜及蛋液，在超声波辅助下继续水解24个月至全蛋液均匀无结块，超声波作用频率为500Hz，超声时间为30min，加入1/100倍蛋体质量的磷脂酶及1/50倍蛋体质量的蛋白酶，继续酶水解5小时，得水解全蛋液，其中，脂肪酶来源于米曲霉，磷脂酶为磷脂酶A2，蛋白酶为无花果蛋白酶、胃蛋白酶；

步骤三、将水解全蛋液与5wt.％红糖、15wt.％菊粉益生元混合搅匀后均质，杀菌，冷却，接种酵母、乳酸菌，菌液接种量分别为水解全蛋液体积的5％，在45℃发酵15天，得全蛋体发酵液，其中，酵母为酿酒酵母，乳酸菌为嗜酸乳杆菌和费式丙酸杆菌；

步骤四、将全蛋体发酵液过滤，在超声波辅助下加入体积质量比为15％的环糊精，超声波作用频率为500Hz，超声时间为30min，高速分散，混合均质，包埋处理，0-5℃低温冷却静置，离心脱除胆固醇类不溶物，分离液冷冻干燥，得全蛋体发酵物。

<实例3>

高生物活性全蛋体发酵物的生产方法，包括：

步骤一、将新鲜禽蛋原料经自来水清洗后，再经高浓度电解式臭氧水清洗，清洗水中臭氧浓度为20mg/L，水流量300L/h，杀菌、70％食用酒精消毒蛋壳表面后晾干，加入2倍禽蛋重量的食用米醋，食用米醋的浓度为20wt.％，淹没并浸泡禽蛋3天至蛋壳全部溶解，过滤并收集酸溶液，用去离子水淋洗蛋膜，去除蛋壳不溶物及色素，再次淹没并浸泡在收集的酸溶液中；

步骤二、搅拌蛋体以释放蛋膜及蛋液，在超声波辅助下继续水解12个月至全蛋液均匀无结块，超声波作用频率为300Hz，超声时间为15min，加入1/500倍蛋体质量的脂肪酶及1/300倍蛋体质量的蛋白酶，继续酶水解3小时，得水解全蛋液，其中，脂肪酶来源于米根霉，磷脂酶为磷脂酶C，蛋白酶来源于黑曲霉和芽孢杆菌的酸性蛋白酶；

步骤三、将水解全蛋液与4wt.％红糖、10wt.％菊粉益生元混合搅匀后均质，杀菌，冷却，接种酵母、乳酸菌，菌液接种量分别为水解全蛋液体积的3％，在35℃发酵8天，得全蛋体发酵液，其中，酵母为酿酒酵母，乳酸菌为嗜酸乳杆菌和费式丙酸杆菌；

步骤四、将全蛋体发酵液过滤，在超声波辅助下加入体积质量比为10％的环糊精，超声波作用频率为300Hz，超声时间为15min，高速分散，混合均质，包埋处理，0-5℃低温冷却静置，离心脱除胆固醇类不溶物，分离液冷冻干燥，得全蛋体发酵物。

<实例4>

高生物活性全蛋体发酵物的生产方法，包括：

步骤一、将新鲜鸡胚蛋经自来水清洗后，再经高浓度电解式臭氧水清洗，清洗水中臭氧浓度为20mg/L，水流量300L/h，杀菌、60-80％食用酒精消毒蛋壳表面后晾干，加入2倍禽蛋重量的食用米醋，食用米醋的浓度为20wt.％，淹没并浸泡禽蛋3天至蛋壳全部溶解，过滤并收集酸溶液，用去离子水淋洗蛋膜，去除蛋壳不溶物及色素，再次淹没并浸泡在收集的酸溶液中，其中，食用米醋经过冷冻-解冻预处理具体为：将食用米醋置于-20℃，加入0.5倍食用有机酸重量的0℃的冰水混合物溶解，搅拌，形成冰晶，再加入0.5倍食用米醋重量的0℃的冰水混合物溶解，搅拌，形成冰晶，置于-20℃，冷冻1h，捣碎，以1℃/min的速率加热至0℃，加入0℃的冰水混合物，使食用米醋的浓度达到20wt.％，冷藏1h，即得；

步骤二、搅拌蛋体以释放蛋膜及蛋液，在超声波辅助下继续水解12个月至全蛋液均匀无结块，超声波作用频率为300Hz，超声时间为15min，加入1/500倍蛋体质量的脂肪酶及1/300倍蛋体质量的蛋白酶，继续酶水解3小时，得水解全蛋液，其中，脂肪酶来源于米根霉，磷脂酶为磷脂酶C，蛋白酶来源于黑曲霉和芽孢杆菌的酸性蛋白酶；

步骤三、将水解全蛋液与4wt.％红糖、10wt.％菊粉益生元混合搅匀后均质，杀菌，冷却，接种酵母、乳酸菌，菌液接种量分别为水解全蛋液体积的3％，在35℃发酵8天，得全蛋体发酵液，其中，酵母为酿酒酵母，乳酸菌为嗜酸乳杆菌和费式丙酸杆菌；

步骤四、将全蛋体发酵液过滤，在超声波辅助下加入体积质量比为10％的环糊精，超声波作用频率为300Hz，超声时间为15min，高速分散，混合均质，包埋处理，0-5℃低温冷却静置，离心脱除胆固醇类不溶物，分离液冷冻干燥，得全蛋体发酵物。

<实例5>

将实例3制备的全蛋体发酵物与蛋液、砂糖、蛋糕油、盐、水、低筋面粉、泡打水制备成蛋糕。

<实例6>

将实例3制备的全蛋体发酵物与填料、吸附剂、黏结剂、润滑剂、分散剂、润湿剂、崩解剂、香料、色料制备成代餐粉。

<实例7>

将实例4制备的全蛋体发酵物与稀释剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂制备成泡腾片。

<实例8>

将实例4制备的全蛋体发酵物与分散剂、增塑剂、崩解剂、遮光剂、润滑剂填充于软胶囊体中，经过压丸、定型干燥、洗丸、晾丸、捡丸，制备成胶囊。

<食用有机酸的预处理功效评价试验>

1、食用有机酸的预处理对蛋膜角蛋白的提取的影响

将禽蛋蛋壳晾干，加入2倍禽蛋重量的食用米醋，食用米醋的浓度为20wt.％，淹没并浸泡禽蛋3天至蛋壳全部溶解，过滤并收集酸溶液，用水淋洗蛋膜，去除蛋壳不溶物及色素，去除蛋黄和蛋清，留下蛋膜，清洗，干燥，称重，得蛋膜初始质量，再次淹没并浸泡在收集的酸溶液中。

以蛋膜刚好完全溶解，没有肉眼明显的碎片为终点，计算蛋膜溶解时间，将溶液在室温下下浓缩至100mL，调节pH至等电点使角蛋白沉淀分离，静置30min，离心分离，将不溶物复提1次，将下层角蛋白转入直径25mm、截留分子量8000-14 000D、再生纤维素材质透析袋透析3d，每4h换1次水。透析完成后，将经纯化的角蛋白在真空压力15Pa、温度-45℃条件下真空冷冻干燥，得到角蛋白，称重，得角蛋白质量，计算角蛋白得率＝角蛋白质量/蛋膜初始质量×100％。

<对比例1>

食用米醋为室温下的食用米醋。

<对比例2>

食用米醋为经过冷冻-解冻预处理的食用米醋，具体为：将食用米醋置于-20℃，加入0.5倍食用米醋重量的0℃的冰水混合物溶解，搅拌，形成冰晶，再加入0.5倍食用米醋重量的0℃的冰水混合物溶解，搅拌，形成冰晶，置于-20℃，冷冻1h，捣碎，以1℃/min的速率加热至0℃，加入0℃的冰水混合物，使食用米醋的浓度达到20wt.％，冷藏1h，即得。

表1

试验结果表明，对比例2的蛋膜溶解时间显著少于对比例1，而角蛋白得率显著高于对比例1，这是因为食用米醋为经过冷冻-解冻预处理，能够以较快的速度将蛋膜溶胀，破坏蛋膜表层的氢键和盐式键，将包埋在蛋膜中的角蛋白释放。

2、食用有机酸的预处理对蛋白的氨基酸提取的影响

将禽蛋蛋壳晾干，加入2倍禽蛋重量的食用米醋，食用米醋的浓度为20wt.％，淹没并浸泡禽蛋3天至蛋壳全部溶解，过滤并收集酸溶液，用水淋洗蛋膜，去除蛋壳不溶物及色素，再次淹没并浸泡在收集的酸溶液中；

搅拌蛋体以释放蛋膜及蛋液，在超声波辅助下继续水解12个月至全蛋液均匀无结块，超声波作用频率为300Hz，超声时间为15min，加入1/300倍蛋体质量的蛋白酶，继续酶水解3小时，得水解全蛋液，其中，脂肪酶来源于米根霉，磷脂酶为磷脂酶C，蛋白酶来源于黑曲霉和芽孢杆菌的酸性蛋白酶；

将水解全蛋液与4wt.％红糖、10wt.％菊粉益生元混合搅匀后均质，杀菌，冷却，接种酵母、乳酸菌，接种量为水解全蛋液体积的3％，在35℃发酵8天，得全蛋体发酵液，其中，酵母为酿酒酵母，乳酸菌为嗜酸乳杆菌和费式丙酸杆菌，将全蛋体发酵液过滤、均质。采用GB/T 5009.124-2003法测定氨基酸含量mg/100mL。

<对比例3>

食用米醋为室温下的食用米醋。

<对比例4>

食用米醋为经过冷冻-解冻预处理的食用米醋，具体为：将食用米醋置于-20℃，加入0.5倍食用米醋重量的0℃的冰水混合物溶解，搅拌，形成冰晶，再加入0.5倍食用米醋重量的0℃的冰水混合物溶解，搅拌，形成冰晶，置于-20℃，冷冻1h，捣碎，以1℃/min的速率加热至0℃，加入0℃的冰水混合物，使食用米醋的浓度达到20wt.％，冷藏1h，即得。

表2

试验结果表明，对比例4检测出18种氨基酸，对比例3检测出14种氨基酸，这是因为食用米醋经过冷冻-解冻预处理，能够蛋膜中的角蛋白释放，增强生物活性和生物利用度。

<全蛋体发酵物功效评价试验>

<对比例5>

全蛋粉的生产方法，同现有技术，可参考娄源功发表的《专用鸡全蛋粉工业化生产新工艺研究》，简述为包括：原料鲜蛋→感官检验→清洗→带壳消毒→晾蛋→半自动打蛋(弃壳)→过滤(弃滤渣)→调制→杀菌→喷雾干燥→筛分→检验及包装→成品。

<对比例6>

醋蛋粉的生产方法，同现有技术，可参考王丹波发表的《醋蛋浸泡中蛋白质的变化及醋蛋粉的制备研究》，简述为包括：鸡蛋→洗净、消毒(预处理)→醋浸泡→搅拌均匀→压滤→醋蛋液→消毒→喷雾干燥→醋蛋粉→包装。

1、抗衰老试验

1.1动物试验

选用18-22g的雄性昆明小鼠70只，饲养一周后，随机分成空白对照组、模型组、全蛋粉组、醋蛋粉组、低剂量组、中剂量组、高剂量组，每组10只。

空白对照组每日皮下注射300mg/(kg·d)生理盐水；模型组、全蛋粉组、醋蛋粉组、低剂量组、中剂量组、高剂量组每日皮下注射D-半乳糖300mg/(kg·d)；

空白对照组和模型组灌胃生理盐水的剂量为150mg/(kg·d)，全蛋粉组灌胃对比例5制备的全蛋粉，剂量为150mg/(kg·d)，醋蛋粉组灌胃对比例6制备的醋蛋粉，剂量为150mg/(kg·d)，高剂量组、中剂量组、低剂量组灌胃实例3制备的全蛋体发酵物，剂量分别为300mg/(kg·d)、150mg/(kg·d)、20mg/(kg·d)，各组均每天灌胃1次，连续处理4周。

摘眼球取血，生理盐水灌流后取肝脏。按照试剂盒的使用方法检测小鼠血清和肝脏组织中的总超氧化物歧化酶(T-SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力，及丙二醛(MDA)的含量，结果如表3所示。

表3

试验结果分析：

模型组与空白对照组相比，模型组的小鼠血清、肝脏中的T-SOD、GSH-Px的酶活力均显著下降，MDA含量显著上升，且差异十分显著，说明衰老小鼠模型造模成功。

由表3可知，与模型组相比，高剂量组和中剂量组均能使血清中T-SOD的酶活力显著提高，使MDA含量明显降低；高剂量组、中剂量组、低剂量组均能使血清中GSH-Px酶活力明显提高。

高剂量组在提升小鼠血清中T-SOD方面显著高于低剂量组，GSH-Px酶活力显著高于中剂量组和低剂量组；对于降低MDA水平，高剂量组、中剂量组、低剂量组之间无显著差异。

高剂量组与全蛋粉组、醋蛋粉组相比，高剂量组在提升小鼠血清中T-SOD方面显著高于全蛋粉组和醋蛋粉组，GSH-Px酶活力显著高于全蛋粉组和醋蛋粉组。

由表3可知，与模型组比较，高剂量组、中剂量组、低剂量组均能使肝脏中的T-SOD、GSH-Px的酶活力显著提高，使MDA含量明显降低。高剂量小鼠肝脏中T-SOD、GSH-Px酶活力显著高于低剂量组；MDA含量高剂量组显著低于低剂量组。

高剂量组与全蛋粉组、醋蛋粉组比较，高剂量组的小鼠肝脏中T-SOD、GSH-Px酶活力水平高于全蛋粉组、醋蛋粉组，肝脏中MDA含量低于全蛋粉组、醋蛋粉组，说明全蛋体发酵物的高剂量组在提高体内抗氧化活力方面优于全蛋粉组、醋蛋粉组。

1.2人体试验

选取100人，随机分为给药组和空白对照组，每组50人，给药组男性20人，女性30人，年龄最小46岁，最大64岁，平均54.32岁，空白对照组男性15人，女性35人，年龄最小45岁，最大62岁，平均53.14岁，给药组每天口服实例3制备的全蛋体发酵物7.5g，连续口服4周，空白对照组不服用任何药物，分别测定超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)指标，结果如表4所示。

表4

试验结果分析：

给药组和空白对照组的超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)在第0周均无明显差异。

给药组在第4周，血清SOD的水平由102.31±12.57U/mL增加至112.23±9.46U/mL，显著提升；血清MDA的水平由7.32±0.78nmol/mL降至5.85±0.83nmol/mL，显著降低。试验组血常规、大小便常规、血生化检查结果均无明显异常，亦未见过敏反应。

2、增强体力和免疫力试验

2.1增强体力试验

选用18-22g的雄性昆明小鼠70只，饲养一周后，随机分成空白对照组、全蛋粉组、醋蛋粉组、低剂量组、中剂量组、高剂量组、优选中剂量组，每组10只。

空白对照组每日以150mL/(kg·d)的剂量灌胃蒸馏水，全蛋粉组灌胃对比例5制备的全蛋粉，剂量为150mg/(kg·d)，醋蛋粉组灌胃对比例6制备的醋蛋粉，剂量为150mg/(kg·d)，高剂量组、中剂量组、低剂量组灌胃实例3制备的全蛋体发酵物，剂量分别为300mg/(kg·d)、150mg/(kg·d)、20mg/(kg·d)，优选中剂量组灌胃实例4制备的全蛋体发酵物，剂量为150mg/(kg·d)，每天1次，连续30天。

将上述各组小鼠进行负重游泳试验，检测游泳时间，检测肝糖原，检测淋巴细胞A值，检测血清溶血素抗体均值，检测红细胞免疫功能，检测结果如表6所示；

检测淋巴细胞A值的方法：刀豆蛋白A(ConA)诱导的脾淋巴细胞转化试验，即MTT法。在无菌条件下取脾脏，用完全培养基制备脾细胞悬液，取2mL分别接种于细胞培养板上，加入浓度为100mg/L的ConA溶液50μL，另作不加入ConA为对照，均置于37℃的CO₂培养箱中培养，直至68h后，加入100μLMTT溶液(50mg/L)，继续培养4h后，加入酸性异丙醇终止反应，用E960酶标仪测定A值。

检测血清溶血素抗体均值的方法：

采用摘除眼球法取血，离心分离血清，用生理盐水将血清对倍稀释。分别置于90孔U型血凝板内，进行孵育和观察血球凝集反应结果。

红细胞免疫功能的方法：

小鼠眼底静脉丛采血，用日本CC-180型血球自动计数仪测量白细胞(WBC)的含量。取小鼠眼底静脉丛血1滴于2mL生理盐水中，洗涤离心3次，转速为1000转/5min，并用生理盐水配制成1.25×10¹⁰/L的红细胞悬液，用注射器取红细胞悬液和C₃b致敏酵母菌悬液(1×10¹¹/L)，或未致敏酵母菌悬液(1×10¹¹/L)各5滴，于试管内充分混匀，37℃水浴孵育30min，加10滴生理盐水，稀释混匀，再加0.25％的戍二醛2滴固定。混匀，涂片待干后瑞氏染色，湿片观察，在高倍镜下计数200个红细胞，结合2个以上酵母菌的花环细胞数，算出RBC-C₃b受体花环率，即致敏酵母菌悬液，RBC-IC花环率，即未致敏酵母菌悬液。

表5

试验结果分析：

优选中剂量组、低剂量组、中剂量组、高剂量组与空白对照组比较，小鼠的负重游泳时间均有明显延长。小鼠肝糖原含量的检测结果，优选中剂量组、低剂量组、中剂量组、高剂量组与空白对照组比较差异显著。小鼠脾淋巴细胞增殖反应，结果显示各剂量组无论加与不加ConA的情况，优选中剂量组、低剂量组、中剂量组、高剂量组的淋巴细胞A值均明显高于空白对照组，且高剂量组最为显著；小鼠血清溶血素含量测定结果显示，优选中剂量组、低剂量组、中剂量组、高剂量组的抗体积数均高于空白对照组，差异显著。

糖原是运动时能量的重要来源，提高糖原的储备量有助于增强耐力和运动能力，有利于抵抗疲劳的产生；提高机体免疫水平。

优选中剂量组、中剂量组、高剂量组与空白对照组比较，WBC和RBC-C₃b受体花环率显著提升、RBC-IC花环率显著下降，说明优选中剂量组、中剂量组、高剂量组可以抵抗疲劳的产生和提高小鼠的细胞免疫以及体液免疫功能。

2.2增强免疫力试验

选用18-22g的雄性昆明小鼠80只，饲养一周后，随机分成空白对照组、模型组、全蛋粉组、醋蛋粉组、低剂量组、中剂量组、高剂量组、优选中剂量组，每组10只。

空白对照组每日灌胃150mg/(kg·d)的蒸馏水，模型组、全蛋粉组、醋蛋粉组、低剂量组、中剂量组、高剂量组、优选中剂量组每日皮下注射75mg/(kg·d)环磷酰胺(CY)生理盐水；

全蛋粉组灌胃对比例5制备的全蛋粉，剂量为150mg/(kg·d)，醋蛋粉组灌胃对比例6制备的醋蛋粉，剂量为150mg/(kg·d)，高剂量组、中剂量组、低剂量组灌胃实例3制备的全蛋体发酵物，剂量分别为300mg/(kg·d)、150mg/(kg·d)、20mg/(kg·d)，优选中剂量组灌胃实例4制备的全蛋体发酵物，剂量为150mg/(kg·d)，各组均每天灌胃1次。

2.21对环磷酰胺CY所致免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响

连续处理7天，在第8天每组小鼠腹腔注射5％鸡红细胞生理盐水混悬液，6h后处死小鼠，消毒腹部，注入汉氏液2.5mL，轻揉小鼠腹部，取腹腔液置于玻片上，玻片下铺湿纱布，37℃培养箱中孵育30min，生理盐水冲去浮着的细胞，瑞氏染液染色、冲洗、凉干，显微镜下观察，计算吞噬百分率和吞噬指数，结果见表6。

2.22对环磷酰胺CY所致免疫抑制小鼠溶血素形成的影响

在灌胃的第1天，每组小鼠腹腔注射5％的鸡红细胞生理盐水混悬液0.2mL免疫，第8天眼眶取血，离心分离血清，用生理盐水按体积比1:100稀释后，取1mL，与5％鸡红细胞混悬液0.5mL和10％补体0.5mL混匀，37℃温育30min，冰水中止反应，取上清液于72-1分光光度计540nm处比色，以不加补体的空白管作对照，结果见表6。

2.23对环磷酰胺CY所致免疫抑制小鼠溶血空斑形成的影响

在灌胃的第1天每组小鼠腹腔注射5％的鸡红细胞生理盐水混悬液0.2mL免疫，第8天灌胃后2h，取脾脏，将3个小鼠脾脏放在一起采用匀浆器匀浆，调节脾细胞浓度为5×10⁶个/mL，取脾细胞混悬液0.5mL加0.2％鸡红细胞混悬液和1:10的豚鼠血清各0.5mL，混匀，37℃温育1h，离心，取上清液于72-1分光光度计，比色，以不加补体的空白管调零点，结果见表6。

2.24对环磷酰胺CY所致免疫抑制小鼠外周血中T细胞百分比和淋巴细胞转化的影响

灌胃的第1至3天，每组小鼠肌注PHA10mg/kg，在第8天灌胃2h后，小鼠剪尾取血，推片，自然风干燥后，浸入预热30min的孵育液中孵育3h，水冲去沉渣，滤低吸干水珠，加入1％孔雀绿染色，冲洗凉干，油镜计算T淋巴细胞百分比。小鼠取血涂片，瑞氏染色，油镜计算淋巴细胞转化率，结果见表6。

表6

试验结果分析：

模型组吞噬百分率和吞噬指数均明显降低，低剂量组、中剂量组、高剂量组、优选中剂量组与模型组比较，均显著提高了免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数；

模型组溶血素和溶血空斑形成OD值显著低于空白对照组，高剂量组、优选中剂量组与模型组比较，可以显著促进溶血素和溶血空斑形成；

模型组外周T细胞百分比和淋细胞转化率均显著低于空白对照组，中剂量组、高剂量组、优选中剂量组与模型组比较，均显著提高免疫抑制小鼠外周T细胞百分比和淋细胞转化率；

上述结果表明，全蛋体发酵物对多环节免疫功能有显著的促进作用，可以促进溶血素和溶血空斑形成，及促进淋巴细胞的转化和提高外周T细胞百分比，显著对抗环磷酰胺所致的免疫功能低下。

3、益智试验

3.1避暗试验

选用18-22g的雄性昆明小鼠50只，饲养一周后，随机分成空白对照组、全蛋粉组、醋蛋粉组、全蛋体发酵物组、优选全蛋体发酵物组，每组10只。

空白对照组灌胃150mg/(kg·d)的蒸馏水，全蛋粉组灌胃对比例5制备的全蛋粉，剂量为150mg/(kg·d)，醋蛋粉组灌胃对比例6制备的醋蛋粉，剂量为150mg/(kg·d)，全蛋体发酵物组灌胃实例3制备的全蛋体发酵物，剂量为150mg/(kg·d)，优选全蛋体发酵物组灌胃实例4制备的全蛋体发酵物，剂量为150mg/(kg·d)，每天灌胃1次，连续灌胃30d，第31d开始训练，训练期间继续以相同的剂量灌胃，每天1次，试验时将动物面部背向洞口放入明室，同时启动计时器，动物穿过洞口进入暗室受到电击，计时器自动停止，取出小鼠，记录每只动物从明室进入暗室避电击所需时间，此即潜伏期。24h或48h后重作试验，记录每只动物10min进入暗室次数，即错误次数，结果如表7所示.

表7

试验结果分析：全蛋体发酵物组、优选全蛋体发酵物组与空白对照组比较，进入暗室次数，即小鼠错误次数明显减少；

全蛋体发酵物组、优选全蛋体发酵物组与全蛋粉组和醋蛋粉组比较，小鼠错误次数显著减少。

3.2水迷宫试验

选用18-22g的雄性昆明小鼠50只，饲养一周后，随机分成空白对照组、全蛋粉组、醋蛋粉组、全蛋体发酵物组、优选全蛋体发酵物组，每组10只。

空白对照组灌胃150mg/(kg·d)的蒸馏水，全蛋粉组灌胃对比例5制备的全蛋粉，剂量为150mg/(kg·d)，醋蛋粉组灌胃对比例6制备的醋蛋粉，剂量为150mg/(kg·d)，全蛋体发酵物组灌胃实例3制备的全蛋体发酵物，剂量为150mg/(kg·d)，优选全蛋体发酵物组灌胃实例4制备的全蛋体发酵物，剂量为150mg/(kg·d)，每天灌胃1次，连续灌胃30d，第31d开始训练，训练期间继续以相同的剂量灌胃，每天1次。迷宫泳道水深15cm，水温25℃，时间限定为120s，在120s内未到终点的动物均记为120s。试验时，将动物放于泳道起点处，同时按下启动键，记录动物到达终点时间和到达终点的动物数，结果如表8所示。

表8

试验结果分析：

全蛋体发酵物组、优选全蛋体发酵物组与空白对照组比较，小鼠出迷宫时间明显减少；

全蛋体发酵物组、优选全蛋体发酵物组与全蛋粉组和醋蛋粉组比较，小鼠出迷宫时间显著减少。

4、改善睡眠试验

选用18-22g的雄性昆明小鼠50只，饲养一周后，随机分成空白对照组、全蛋粉组、醋蛋粉组、全蛋体发酵物组、优选全蛋体发酵物组，每组10只。

空白对照组灌胃150mg/(kg·d)的蒸馏水，全蛋粉组灌胃对比例5制备的全蛋粉，剂量为150mg/(kg·d)，醋蛋粉组灌胃对比例6制备的醋蛋粉，剂量为150mg/(kg·d)，全蛋体发酵物组灌胃实例3制备的全蛋体发酵物，剂量为150mg/(kg·d)，优选全蛋体发酵物组灌胃实例4制备的全蛋体发酵物，剂量为150mg/(kg·d)，每天灌胃1次，连续灌胃30d。

4.1、巴比妥钠阈下剂量催眠实验和睡眠潜伏期试验

末次灌胃30min后，按阈下剂量300mg/(kg·BW)腹腔注射巴比妥钠，注射量为0.1mL/(10g·BW)，观察受试物对注射阈下巴比妥钠的小鼠入睡率的影响，末次灌胃30min后，按300mg/(kg·BW)腹腔注射巴比妥钠，注射量为0.1mL/(10g·BW)，观察受试物对巴比妥钠对小鼠睡眠潜伏期的影响。结果如表9所示。

表9

试验结果分析：全蛋体发酵物组、优选全蛋体发酵物组与空白对照组比较、全蛋粉组和醋蛋粉组比较，可显著改善受试小鼠的睡眠状况，增加注射阈下剂量巴比妥钠小鼠的入睡率，显著缩短注射阈下剂量巴比妥钠小鼠睡眠潜伏期。

4.2、戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠时间试验

末次灌胃30min后，腹腔注射300mg/(kg·d)戊巴比妥钠，注射量为0.1mL/(10g·BW)，以翻正反射消失为指标，记录入睡数量和睡眠时间，结果如表10所示。

表10

试验结果分析：全蛋体发酵物组、优选全蛋体发酵物组与空白对照组比较，睡眠时间显著延长，延长率高达152.8％；全蛋体发酵物组、优选全蛋体发酵物组与全蛋粉组和醋蛋粉组比较，小鼠睡眠时间显著延长。

5、调节血压血脂试验

5.1ACE抑制率试验

全蛋体发酵物体外ACE抑制肽的活性研究在底物质量浓度40g/L、酶解pH 9.0、温度55℃、加酶量8％(质量分数)(碱性蛋白酶)和时间175min条件下，酶解全蛋体发酵物，得到的酶解液经超滤划分成3个肽段：<1kDa，1～5kDa和>5kDa，测定3个组分肽段的ACE抑制率。结果如图1-4所示。

试验结果分析：3个组分都具有一定的ACE抑制活性，其中<1kDa组分的ACE抑制活性最高为84.45％，<1kDa的多肽存在具有高ACE抑制活性的肽片段。

选取<1kDa的多肽进一步分离纯化。探究多肽浓度与ACE抑制率的依赖关系。结果如图5所示。

试验结果分析：多肽浓度在0.2-1.0mg/mL时，ACE抑制率随着多肽浓度的增大而升高。多肽浓度愈高，存在的具有ACE抑制活性的片段愈多，对ACE的抑制效果也越强。

5.2血压试验

选用18-22g的雄性昆明小鼠40只，饲养一周后，随机分成空白对照组、全蛋粉组、醋蛋粉组、全蛋体发酵物组，每组10只。

空白对照组灌胃150mg/(kg·d)的蒸馏水，全蛋粉组灌胃对比例5制备的全蛋粉，剂量为150mg/(kg·d)，醋蛋粉组灌胃对比例6制备的醋蛋粉，剂量为150mg/(kg·d)，全蛋体发酵物组灌胃实例3制备的全蛋体发酵物，剂量为150mg/(kg·d)，每天灌胃1次，连续灌胃28d，检测小鼠的舒张压和收缩压，结果如图6和图7所示。

试验结果分析：由图6和图7可知，在长达28d的灌胃过程中，与空白对照组相比，全蛋粉组、醋蛋粉组、全蛋体发酵物组的小鼠的收缩压和舒张压都得到了显著降低。与灌胃相同剂量的全蛋粉和醋蛋粉相比，全蛋体发酵物组小鼠的血压明显降低，说明在长期灌胃全蛋体发酵物的过程中，全蛋体发酵物粉的降压效果明显优于全蛋粉和酵蛋粉。全蛋体发酵物具有辅助降压功能。

5.3血脂试验

选用18-22g的雄性昆明小鼠70只，饲养一周后，随机分成空白对照组、模型组、全蛋粉组、醋蛋粉组、低剂量组、中剂量组、高剂量组，每组10只。

空白对照组每日皮下注射300mg/(kg·d)生理盐水；模型组和给药组每日皮下注射D-半乳糖300mg/(kg·d)；

空白对照组和模型组灌胃蒸馏水的剂量为150mg/(kg·d)，全蛋粉组灌胃对比例5制备的全蛋粉，剂量为150mg/(kg·d)，醋蛋粉组灌胃对比例6制备的醋蛋粉，剂量为150mg/(kg·d)，高剂量组、中剂量组、低剂量组灌胃实例3制备的全蛋体发酵物，剂量分别为300mg/(kg·d)、150mg/(kg·d)、20mg/(kg·d)，优选中剂量组灌胃实例4制备的全蛋体发酵物，剂量为150mg/(kg·d)各组均每天灌胃1次，连续处理30d。

检测血清TC、TG、HDL-C，结果如表11所示。

表11

试验结果分析：与空白对照组比较，模型组在第30d的TC、HDL-C、TG均高于空白对照组，说明造成功；

与空白对照组比较，低剂量组、中剂量组、高剂量组在第30d的TC、HDL-C、TG均低于空白对照组，说明全蛋体发酵物具有降脂的功能。

6、延寿试验

选取1000只果蝇，随机分成空白对照组、全蛋粉组、醋蛋粉组、全蛋体发酵物组、优选全蛋体发酵物组，每周200只，空白对照组饲喂基础培养基，全蛋粉组饲喂添加有对比例5制备的全蛋粉的基础饲料，剂量为50mg/(kg·d)，醋蛋粉组饲喂对比例6制备的醋蛋粉的基础饲料，剂量为50mg/(kg·d)，全蛋体发酵物组饲喂实例3制备的全蛋体发酵物的基础饲料，剂量分别为50mg/(kg·d)，优选全蛋体发酵物组饲喂实例4制备的全蛋体发酵物的基础饲料，剂量为50mg/(kg·d)，于温度为25℃，湿度为65-75％的条件下，每3d更换一次培养基，记录死亡果蝇的数目，直到全部死亡，得出寿命曲线，如图8所示，计算平均寿命、最高寿命、半数死亡时间，结果如表12所示。

表12

试验结果分析：饲喂相同剂量的全蛋粉、醋蛋粉、全蛋体发酵物、优选全蛋体发酵物后，果蝇的平均寿命、半数死亡时间、最高寿命与空白对照组相比都有所延长，平均寿命的延寿率分别为4.1％、5.5％、20.2％、24.9％。饲喂全蛋体发酵物组、优选全蛋体发酵物组的果蝇的平均寿命与空白对照组相比具有极显著性差异。

7、调经功能试验

选取6名具有月经紊乱症状的女性，每天服用7.5g实例3制备的全蛋体发酵物，连续服用6个月，记录月经周期，检测血常规和激素水平，结果如表13和表14所示。

表13

表14

试验结果分析：服用全蛋体发酵物对6名女性的月经周期在6个月后都恢复正常，平均周期为(27.17±1.47)d，而且较为整齐。Hb、RBC、T、E₂、Cr含量在调治后有明显的改善。

8、美容功效试验

选取200名具有黄褐斑的人员，随机分为4组，每组50人，其中3组分别为全蛋粉组、醋蛋粉组、全蛋体发酵物组，全蛋粉组、醋蛋粉组、全蛋体发酵物组分别每人每次服用100g/50kg的全蛋粉、醋蛋粉、全蛋体发酵物，每天两次，服用60d，剩余1组为空白对照组，不服用任何蛋粉类食品，检测60天后，人体静脉血的超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)，结果如表15所示。

评价60天后的疗效，疗效评判标准为：肉眼观察，黄褐斑面积消退90％以上，颜色基本消失，为基本治愈；肉眼观察，黄褐斑面积消退60％以上，颜色明显变淡，为显效；肉眼观察，黄褐斑面积消退30％以上，颜色变淡，为好转；其余为无效，评价结果如表16所示。

表15

表16

试验结果分析：与空白对照组比较，全蛋体发酵物组的SOD的活力显著提升、MOD含量显著下降，说明全蛋体发酵物可以提高SOD的活力，防止体内自由基堆积；

与全蛋粉组和醋蛋粉组，全蛋体发酵物组显著提高了黄褐斑的基本治愈率和有效率。

9、改善骨质疏松、对生长骨骼代谢和骨密度的影响试验

9.1对生长骨骼代谢和骨密度的影响试验

选用出生4周左右的雄性昆明小鼠50只，随机分成空白对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组、钙饲料组，每组10只。空白对照组饲喂基础饲料，高剂量组、中剂量组、低剂量组灌胃实例3制备的全蛋体发酵物，剂量分别为300mg/(kg·d)、150mg/(kg·d)、20mg/(kg·d)，钙饲料组饲喂含500mg/100g饲料的钙饲料，空白对照组不灌胃去离子水，其它组灌胃去离子水，饲养90d。

喂养期间定期称重，喂养90d后处死，剥离出右侧股骨，测量股骨长度，于105℃烘箱中烤至恒重，称量骨干重。用骨密度仪测量股骨中点及股骨远心端骨密度。用原子吸收法测量受试动物的骨钙含量，结果如表17、18、19所示.

表17

表18

表19

试验结果分析：

由表17可知，试验期间各组小鼠的体重均有不同程度的增加，但是同一时期各组小鼠的体重无明显差异，说明全蛋体发酵物不会影响小鼠的正常生长发育。

由表18可知，各组小鼠的股骨长度和股骨重量无明显差异，中剂量组和高剂量组与空白对照组比较，骨钙含量显著增加，说明全蛋体发酵物可以提高小鼠的骨钙含量。

由表19可知，高剂量组、中剂量组、低剂量组与空白对照组比较，股骨中心点密度和骨远心端密度均明显提高，说明全蛋体发酵物可以提高小鼠的骨密度。

9.2改善骨质疏松试验

选取50-60岁、60-70岁、70-80岁各10人，并在服用实例3制备的全蛋体发酵物之前进行痛疼评价，并记录，然后每天服用全蛋体发酵物，每日两次，每次80g，30天后再次进行痛疼评价，并记录，结果如表20所示，其中，评价标准：较好改善：疼痛症状基本消失、骨密度显著增加；一般改善：疼痛症状减轻、骨密度轻微增加；无改善：疼痛症状无改善且骨密度没有增加。

表20

试验结果分析：由表21中可知，各组人群的骨质疏松症状均有不同程度的改善，改善率达60-70％。说明本发明的全蛋体发酵物可以改善关节疼痛，消除关节炎症，补充骨骼营养，增加骨密度，从根本上改善老年性骨质疏松。

10、润肠通便，调节便秘试验

选用18-22g的雄性昆明小鼠60只，饲养一周后，随机分成空白对照组、模型组、全蛋粉组、醋蛋粉组、全蛋体发酵物组、优选全蛋体发酵物组，每组10只。

空白对照组、模型组饲喂普通饲料，全蛋粉组饲喂含有对比例5制备的全蛋粉的普通饲料，剂量为150mg/(kg·d)，醋蛋粉组饲喂含有对比例6制备的醋蛋粉的普通饲料，剂量为150mg/(kg·d)，全蛋体发酵物组饲喂含有实例3制备的全蛋体发酵物的普通饲料，剂量分别为150mg/(kg·d)，优选全蛋体发酵物组饲喂含有实例4制备的全蛋体发酵物的普通饲料，剂量为150mg/(kg·d)，连续饲养15d，观察小鼠的小肠推进试验和排便试验。

10.1小肠推进试验

第15d饲喂结束后，禁食16h，各组取5只小鼠，模型组、全蛋粉组、醋蛋粉组、全蛋体发酵物组、优选全蛋体发酵物组灌胃5mg/(kg·d)复方地酚诺醋溶液20mL/(kg·d)，空白对照组给予等量蒸馏水，30min后，全蛋粉组、醋蛋粉组、全蛋体发酵物组、优选全蛋体发酵物组分别一次给予含相应全蛋粉、醋蛋粉、全蛋体发酵物、优选全蛋体发酵物的墨汁10mL/kg，按质量比1:1混合，空白对照组和模型组给予等量墨汁。25min后颈椎脱臼处死动物，立即打开腹腔分离肠系膜，剪取上端自幽门、下端至回盲部的肠管，不加牵引拉成直线，进行测量。肠管长度为“小肠总长度”，从幽门至墨汁前沿为“墨汁推进长度”。结果如21所示，按下列公式计算墨汁推进率。

墨汁推进率(P)＝墨汁推进长度/肠管总长度×100％

表21

试验结果分析：由表21可知，与空白对照比较，模型组的墨汁推进距离和墨汁推进率均显著低于空白对照组，说明造模成功；

与空白对照比较，全蛋体发酵物组、优选全蛋体发酵物组的小鼠的墨汁推进率均高于空白对照组，说明发具有促进小肠运动的作用。

10.2排便试验

第15d饲喂结束后，禁食16h，各组取5只小鼠，模型组、全蛋粉组、醋蛋粉组、全蛋体发酵物组、优选全蛋体发酵物组灌胃10mg/(kg·d)复方地酚诺醋溶液20mL/kg，空白对照组给予等量蒸馏水，30min后，全蛋粉组、醋蛋粉组、全蛋体发酵物组、优选全蛋体发酵物组分别一次给予含相应全蛋粉、醋蛋粉、全蛋体发酵物、优选全蛋体发酵物的墨汁10mL/kg，按质量比1:1混合，空白对照组和模型组给予等量墨汁，同时开始计时。每只小鼠均单独饲养，并供给饲料和饮水，观察记录每只动物首次排黑便所需时间、6h内排黑便粒数及重量。结果如表22所示。

表22

试验结果分析：由表22可知，与空白对照组比较，模型组小鼠排首粒黑便时间显著长于空白对照组，粪便粒数和粪便重旺显著低于空白对照组，说明便秘模型成功。

全蛋体发酵物组、优选全蛋体发酵物组与模型对照组相比，首粒排黑便时间明显缩短，粪便粒数和重量显著增加，说明具有促排便的作用。

这里说明的设备数量和处理规模是用来简化本发明的说明的。对本发明的应用、修改和变化对本领域的技术人员来说是显而易见的。

尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的实例。

Claims (10)

1.高生物活性全蛋体发酵物的生产方法，其特征在于，包括：

步骤一、将禽蛋或鸡胚蛋清洗杀菌晾干，加入1-3倍禽蛋重量的食用有机酸，淹没并浸泡禽蛋1-6天至蛋壳全部溶解，过滤并收集酸溶液，用水淋洗蛋膜，去除蛋壳不溶物及色素，再次淹没并浸泡在收集的酸溶液中；

步骤二、搅拌蛋体以释放蛋膜及蛋液，在超声波辅助下继续水解1-24个月至全蛋液均匀无结块，加入1/1000-1/100倍蛋体质量的脂肪酶或磷脂酶及1/500-1/50倍蛋体质量的蛋白酶，继续酶水解1-5小时，得水解全蛋液；

步骤三、将水解全蛋液与红糖、菊粉益生元混合搅匀后均质，杀菌，冷却，接种酵母、乳酸菌，菌液接种量为水解全蛋液体积的1-5％，在25-45℃发酵1-15天，得全蛋体发酵液；

步骤四、将全蛋体发酵液过滤，在超声波辅助下加入环糊精，高速分散，混合均质，包埋处理，0-5℃低温冷却静置，离心脱除胆固醇类不溶物，分离液冷冻干燥，得全蛋体发酵物。

2.如权利要求1所述的高生物活性全蛋体发酵物的生产方法，其特征在于，食用有机酸为乳酸、苹果酸、丁酸、醋酸、食用米醋、果醋和/或柠檬酸，食用有机酸的浓度为5-50wt.％。

3.如权利要求1所述的高生物活性全蛋体发酵物的生产方法，其特征在于，脂肪酶来源于米曲霉或米根霉，磷脂酶为磷脂酶A1、A2、C和/或D，蛋白酶为菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶、无花果蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶和/或来源于黑曲霉和芽孢杆菌的酸性蛋白酶或中性蛋白酶或碱性蛋白酶。

4.如权利要求1所述的高生物活性全蛋体发酵物的生产方法，其特征在于，酵母为酿酒酵母，乳酸菌为德式乳杆菌保加利亚亚种、罗伊氏乳杆菌、嗜酸乳杆菌和/或费式丙酸杆菌。

5.如权利要求1所述的高生物活性全蛋体发酵物的生产方法，其特征在于，步骤一中，食用有机酸经过冷冻-解冻预处理具体为：将食用有机酸置于-20℃，加入0.5倍食用有机酸重量的0℃的冰水混合物溶解，搅拌，形成冰晶，再加入0.5倍食用有机酸重量的0℃的冰水混合物溶解，搅拌，形成冰晶，置于-20℃，冷冻1h，捣碎，以1℃/min的速率加热至0℃，加入0℃的冰水混合物，使食用有机酸的浓度达到20wt.％，冷藏1h，即得。

6.全蛋体发酵物，其特征在于，由权利要求1-5任一项所述的生产方法制备，全蛋体发酵物的有机钙的含量不低于2wt.％，多肽蛋白含量不低于20wt.％，多肽蛋白的分子量分布集中在0.5-3k之间，分子量分布集中在1k以下的小分子多肽含量比例不低于60wt.％。

7.含有全蛋体发酵物的食品，其特征在于，包括权利要求6所述的全蛋体发酵物及食品配料或添加剂，可为营养功能性食品、特膳特医食品、保健食品和食品领域的非医药用途方面。

8.如权利要求6所述的全蛋体发酵物在制备预防高血压、高血脂的产品中的应用。

9.如权利要求6所述的全蛋体发酵物在制备提高骨密度、改善骨质疏松、增强体力、增强免疫力、延寿、抗衰老的产品中的应用。

10.如权利要求6所述的全蛋体发酵物在制备调经美容、润肠、调节便秘、益智、改善睡眠的产品中的应用。