CN109715225A - 含有肝素且包含生物吸收性高分子的多孔基材的制造方法、含有肝素且包含生物吸收性高分子的多孔基材和人工血管 - Google Patents

Abstract

本发明的目的在于，提供不使用表面活性剂而简便地制造含有肝素且包含生物吸收性高分子的多孔基材的方法、含有肝素且包含生物吸收性高分子的多孔基材和人工血管。本发明的含有肝素且包含生物吸收性高分子的多孔基材的制造方法包括：溶液调制工序，其使用生物吸收性高分子、肝素、溶剂1、溶剂2和共溶剂3，调制上述肝素均匀分散且溶解有上述生物吸收性高分子的肝素－生物吸收性高分子溶液，其中，溶剂1为对上述生物吸收性高分子的溶解度低的贫溶剂，溶剂2为对上述生物吸收性高分子的溶解度高的良溶剂，且与上述溶剂1不相溶，共溶剂3与上述溶剂1和溶剂2相溶；析出工序，其将上述肝素－生物吸收性高分子溶液冷却而使含有肝素且包含生物吸收性高分子的多孔体析出；和冻结干燥工序，其将上述含有肝素且包含生物吸收性高分子的多孔体冻结干燥而得到含有肝素的多孔基材。

Description

含有肝素且包含生物吸收性高分子的多孔基材的制造方法、 含有肝素且包含生物吸收性高分子的多孔基材和人工血管

技术领域

本发明涉及一种不使用表面活性剂而简便地制造含有肝素且包含生物吸收性高分子的多孔基材的方法、含有肝素且包含生物吸收性高分子的多孔基材和人工血管。

背景技术

随着近年来细胞工程学技术的发展，已能够进行包括人细胞在内的多种动物细胞的培养，另外，使用这些细胞再构建人的组织或器官的所谓的再生医疗的研究正在快速开展。

例如在临床中，作为人工血管，最常使用的是Gore-Tex等的利用非吸收性高分子形成的人工血管，但利用非吸收性高分子形成的人工血管在移植后异物长期残留在体内，因此存在必须继续给药抗凝剂等这样的问题；用于儿童时，随着成长还有需要重新手术这样的问题。对此，正在尝试利用再生医疗的血管组织的再生。

在再生医疗中，关键是细胞能否增殖分化而构建三维的类生物体组织的构造物，例如进行了如下的方法：将基材移植至患者的体内，使来自周围的组织或器官的细胞侵入基材中并增殖分化，使组织或器官再生。

作为再生医疗用的基材，已提案了包含生物吸收性高分子的多孔基材。通过将包含生物吸收性高分子的多孔基材用作再生医疗的基材，细胞侵入其空隙部分并增殖，可以在尽早使组织再生。并且，在经过一定时间后分解而被生物体吸收，因此也不需要通过再次手术来取出。

在利用再生医疗的血管组织的再生中，防止血栓的形成也是重要的。特别是在直径小的血管组织的再生中，经常因形成血栓而阻塞血管，不仅正常的血管无法再生，还可能引起更严重的症状。

作为防止血栓的形成的方法，已尝试了在包含生物吸收性高分子的多孔基材中含有肝素、随着多孔基材的分解而使肝素缓慢释放的方法。

作为这样的含有肝素且包含生物吸收性高分子的多孔基材，例如在非专利文献1中记载了如下的方法：向溶解有生物吸收性高分子的有机溶剂中添加肝素钠水溶液和表面活性剂并使之胶束化，使用所得到的溶液，制造由纳米纤维形成的血管用材料。

然而，非专利文献1所记载的含有肝素且包含生物吸收性高分子的多孔基材含有毒性强的表面活性剂，因此，有阻碍血管组织的再生这样的问题。此外，还研究了制造含有肝素且包含生物吸收性高分子的多孔基材的方法，但存在极其复杂、或者在制造过程中肝素变性而无法获得所期望的防止血栓形成效果这样的问题。

现有技术文献

非专利文献

非专利文献1：Coloids and Surfaces B：Biointerfaces,128(2015),106－114

发明内容

发明所要解决的课题

鉴于上述现状，本发明的目的在于，提供一种不使用表面活性剂而简便地制造含有肝素且包含生物吸收性高分子的多孔基材的方法、含有肝素且包含生物吸收性高分子的多孔基材和人工血管。

用于解决课题的技术方案

本发明的含有肝素且包含生物吸收性高分子的多孔基材的制造方法包括：溶液调制工序，其使用生物吸收性高分子、肝素、溶剂1、溶剂2以及共溶剂3，调制上述肝素均匀分散且溶解有上述生物吸收性高分子的肝素－生物吸收性高分子溶液，其中，溶剂1为对上述生物吸收性高分子的溶解度低的贫溶剂，溶剂2为对上述生物吸收性高分子的溶解度高的良溶剂，且与上述溶剂1不相溶，共溶剂3与上述溶剂1和溶剂2相溶；析出工序，其将上述肝素－生物吸收性高分子溶液冷却而使含有肝素且包含生物吸收性高分子的多孔体析出；和冻结干燥工序，其将上述含有肝素且包含生物吸收性高分子的多孔体冻结干燥而得到含有肝素的多孔基材。

以下，对本发明进行详细叙述。

在包含生物吸收性高分子的多孔基材中，从作为组织再生的基质材料的机械强度或生物体吸收行为、细胞的侵入性、向所侵入的细胞供给营养等的观点考虑，其孔径、容积密度等的控制是极其重要的。作为这样的包含生物吸收性高分子的多孔基材，已知有相分离法，该法中，在将相对于生物吸收性高分子的良溶剂和贫溶剂混合并形成均相后，通过冷却而得到多孔体。在相分离法中，利用良溶剂与贫溶剂的混合比，能够调整所得到的多孔基材的孔径。然而，在相分离法中，若要调整多孔基材的孔径，则所得到的多孔基材的容积密度会发生大的变化。即，若要得到大孔径的多孔基材，则需要使贫溶剂的比例变大，但由于良溶剂的比例相对变小，所得到的多孔基材的容积密度变大了。相反地，若要得到小孔径的多孔基材，则使良溶剂的比例变大，使贫溶剂的比例变小，因此所得到的多孔基材的容积密度变小了。因此，利用相分离法，有制造相同的容积密度且孔径不同的多孔基材极其困难这样的问题。另外，在相分离法中，还要求良溶剂和贫溶剂是相溶的。选择容易处理的水作为贫溶剂时，作为良溶剂，只有1,4－二噁烷、N－甲基吡咯烷酮、二甲基亚砜等有限的选择项。然而，这些溶剂对生物体的毒性高，因此在用于临床应用时也存在需要从多孔基材中完全除去溶剂的工序，极其复杂这样的问题。

作为潜心研究的结果，本发明的发明人发明了在生物吸收性高分子的良溶剂和贫溶剂中进一步组合了与该良溶剂和贫溶剂都能够相溶的共溶剂的多孔基材的制造方法。通过组合共溶剂，由于不要求良溶剂与贫溶剂的相溶性，良溶剂与贫溶剂的组合的选择项大大变多。另外，在该制造方法中，作为良溶剂，除了1,4－二噁烷、N－甲基吡咯烷酮、二甲基亚砜等以外，还可以选择毒性低的有机溶剂。另外，通过组合2种以上的共溶剂并调整该2种以上的共溶剂的配合比，能够容易地调整多孔基材的容积密度和孔径。

并且，本发明的发明人着眼于生物吸收性高分子的贫溶剂能够溶解肝素，发现通过将肝素预先溶解于贫溶剂中，不使用表面活性剂，也能够极其简便地制造含有肝素且包含生物吸收性高分子的多孔基材，完成了本发明。

在本发明的含有肝素且包含生物吸收性高分子的多孔基材的制造方法(以下，也简称为“多孔基材的制造方法”。)中，首先进行溶液调制工序，该工序使用生物吸收性高分子、肝素、溶剂1、溶剂2和共溶剂3，调制肝素均匀分散且溶解有生物吸收性高分子的肝素－生物吸收性高分子溶液。

作为上述生物吸收性高分子，例如可以列举聚乙交酯、聚丙交酯、聚－ε－己内酯、丙交酯－乙醇酸共聚物、乙交酯－ε－己内酯共聚物、丙交酯－ε－己内酯共聚物、聚柠檬酸、聚苹果酸、聚－α－氰基丙烯酸酯、聚－β－羟基酸、聚三亚甲基草酸酯、聚四亚甲基草酸酯、聚原酸酯、聚原碳酸酯、聚碳酸亚乙酯、聚－γ－苄基－L－谷氨酸酯、聚－γ－甲基－L－谷氨酸酯、聚－L－丙氨酸、聚乙二醇癸二酸酯(ポリグリコールセバスチン酸)等合成高分子、淀粉、藻酸、透明质酸、甲壳质、果胶酸及其衍生物等多糖类、明胶、胶原蛋白、白蛋白、纤维蛋白等蛋白质等的天然高分子等。这些生物吸收性材料可以单独使用，也可以并用2种以上。

上述肝素是作为使抗凝血酶活化、通过抗凝血作用能力的激活而抑制凝血系统的抗凝药被公知的药物，可以使用目前公知的肝素。另外，作为抗凝药的华法林、作为抗血小板药的阿斯匹林、双嘧达莫等也可以与肝素同样使用。

上述溶剂1为相对于上述生物吸收性高分子的溶解度低的贫溶剂。其中，贫溶剂是指具有比上述溶剂2更难溶解上述生物吸收性高分子的性质，更具体而言，是指在25℃的室温下100g上述溶剂1所溶解的上述生物吸收性高分子的质量为0.01g以下。

作为上述溶剂1，上述生物吸收性高分子为合成高分子时，例如可以使用水、甲醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇等。其中，由于处理性优异、肝素的溶解性优异，优选水。

上述溶剂2为相对于上述生物吸收性高分子的溶解度高的良溶剂。其中，良溶剂是指具有比上述溶剂1更易溶解上述生物吸收性高分子的性质，更具体而言，是指在25℃的室温下100g上述溶剂2所溶解的上述生物吸收性高分子的质量为0.1g以上。

上述溶剂2与上述溶剂1不相溶。其中，不相溶是指在25℃的室温下即使进行混合、搅拌也发生相分离。

作为上述溶剂2，上述生物吸收性高分子为合成高分子且选择水作为上述溶剂1时，例如可以使用甲乙酮、二乙基酮、甲基丙基酮、甲基异丁基酮、甲基氨基酮、环己酮、氯仿、乙酸乙酯、甲苯等有机溶剂。其中，由于毒性比较低，优选甲乙酮、氯仿等。

上述共溶剂3与上述溶剂1和溶剂2均相溶。通过组合这样的共溶剂3，即使上述溶剂1和溶剂2不相溶，也能够利用相分离法制造多孔基材，并且溶剂1与溶剂2的组合的选择项飞跃性地变多。其中，相溶是指在25℃的室温下即使进行混合、搅拌也不发生相分离。

作为上述共溶剂3，上述生物吸收性高分子为合成高分子、选择水作为上述溶剂1且选择有机溶剂作为上述溶剂2时，例如可以使用丙酮、甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、正丁醇、2－丁醇、异丁醇、四氢呋喃等。

上述溶剂1与溶剂2的配合比没有特别限定，优选溶剂1与溶剂2以重量比计处于1:1～1:100的范围内。处于该范围内时，能够制造均匀的多孔基材。更优选处于1:10～1:50的范围内。

上述溶剂1和溶剂2的合计与上述共溶剂3的配合比没有特别限定，优选溶剂1和溶剂2的合计与共溶剂3以重量比计处于1:0.01～1:0.5的范围内。处于该范围内时，能够制造均匀的多孔基材。更优选处于1:0.02～1:0.3的范围内。

通过调整上述溶剂1与溶剂2的配合比，能够控制所得到的多孔基材的孔径。具体而言，使上述溶剂1的比率变高时，所得到的多孔基材的孔径变大；使上述溶剂2的比率变高时，所得到的多孔基材的孔径变小。然而，在调整溶剂1与溶剂2的配合比的方法中，容积密度也同时发生变化，制造具有任意的孔径和容积密度的多孔基材是困难的。

针对上述问题，在本发明的多孔基材的制造方法中，优选将2种以上的上述共溶剂3组合使用(以下，也将共溶剂3所含的2种以上的溶剂称为“共溶剂3－1”、“共溶剂3－2”、···。)。通过组合2种以上的上述共溶剂3，例如通过调整共溶剂3－1与共溶剂3－2的配合比，能够控制所得到的多孔基材的孔径。即，使上述溶剂1、溶剂2和共溶剂3的配合比一定，通过调整共溶剂3所含的共溶剂3－1与共溶剂3－2的配合比，能够控制所得到的多孔基材的孔径。这意味着能够使所得到的多孔基材的容积密度基本一定，只调整孔径。利用这样的本发明的多孔基材的制造方法，制造具有任意的孔径和容积密度的多孔基材变得容易。

作为上述生物吸收性高分子与各溶剂的组合，没有特别限定，例如可以列举：在上述生物吸收性高分子为丙交酯－ε－己内酯共聚物时，上述溶剂1为水、溶剂2为甲乙酮、共溶剂3－1为丙酮、共溶剂3－2为乙醇的组合；在上述生物吸收性高分子为聚丙交酯时，上述溶剂1为水、溶剂2为氯仿、共溶剂3－1为四氢呋喃、共溶剂3－2为乙醇的组合；在上述生物吸收性高分子为聚丙交酯时，上述溶剂1为水、溶剂2为氯仿、共溶剂3－1为丙酮、共溶剂3－2为乙醇的组合等。

在上述溶液调制工序中，使用生物吸收性高分子、肝素、溶剂1、溶剂2和共溶剂3，调制肝素均匀分散且溶解有生物吸收性高分子的肝素－生物吸收性高分子溶液。

更具体而言，作为调制上述肝素－生物吸收性高分子溶液的方法，例如可以列举：预先将肝素溶解在上述溶剂1中，将生物吸收性高分子与包含溶解有肝素的溶剂1、溶剂2和共溶剂3的混合溶剂(以下，也简称为“混合溶剂”。)混合后，进行加热的方法。另外，作为更容易地调制肝素－生物吸收性高分子溶液的方法，例如还可以列举：对上述混合溶剂进行预加热，再向该加热后的混合溶剂中加入生物吸收性高分子的方法；或者将生物吸收性高分子先溶解于溶剂2后，一边加热一边加入溶解有肝素的溶剂1和共溶剂3的方法等。

上述混合方法没有特别限定，例如可以使用利用搅拌片、搅拌棒等的公知的混合方法。

在所得到的肝素－生物吸收性高分子溶液中，上述生物吸收性高分子均匀地溶解，肝素均匀地分散。考虑是由于在上述肝素－生物吸收性高分子溶液中，肝素自胶束化而形成了稳定的胶束。

作为上述溶液调制工序的加热温度，只要是上述生物吸收性高分子均匀溶解的温度，就没有特别限定，优选为比上述溶剂1、溶剂2和共溶剂3的沸点都低的温度。加热至沸点以上的温度时，各溶剂的配合比改变，有时无法控制所得到的多孔基材的孔径、容积密度。

在本发明的多孔基材的制造方法中，接着进行析出工序，该工序将所得到的肝素－生物吸收性高分子溶液冷却而使含有肝素且包含生物吸收性高分子的多孔体析出。通过冷却，不溶的包含上述生物吸收性高分子的多孔体析出。考虑这是由于，在上述生物吸收性高分子被结晶化而析出之前，在上述生物吸收性高分子结晶化的温度以上，液体状态的生物吸收性高分子和各溶剂首先因热力学不稳定性而发生相分离(液－液相分离)。此时，分散于肝素－生物吸收性高分子溶液中的肝素由于范德瓦尔斯力等均匀地附着于所析出的包含生物吸收性高分子的多孔体的表面。

作为上述析出工序的冷却温度，只要是能够析出包含生物吸收性高分子的多孔体的温度，就没有特别限定，优选为4℃以下，更优选为－24℃以下。

另外，所得到的多孔基材的孔径也受冷却速度影响。具体而言，存在冷却速度快时孔径变小、冷却速度慢时孔径变大的倾向。因此，特别是在得到孔径小的多孔基材时，可以想到设定低的冷却温度而急速地进行冷却。

在本发明的多孔基材的制造方法中，接着进行冻结干燥工序，该工序将所得到的含有肝素且包含生物吸收性高分子的多孔体冻结干燥而得到含有肝素的多孔基材。

作为上述冻结干燥的条件，没有特别限定，可以在目前公知的条件下进行。

上述冻结干燥工序可以在上述冷却工序后直接进行，但出于除去用作溶剂的各种有机溶剂的目的，也可以预先将多孔体浸渍于乙醇等中进行置换，再进行冻结干燥。此时，使用不溶解肝素的溶剂，使得肝素不从多孔基材中溶出。

利用本发明的多孔基材的制造方法，能够不使用毒性高的表面活性剂而极其简便地制造含有肝素且包含生物吸收性高分子的多孔基材。还能够不使用毒性高的溶剂而容易地调整容积密度和孔径，得到多孔基材。

另外，利用本发明的含有肝素的多孔基材的制造方法制造的含有肝素的多孔基材也是本发明之一。

本发明的含有肝素的多孔基材尽管含有肝素，但不含表面活性剂。由此，血管等组织的再生不会因表面活性剂的毒性而受到阻碍。

其中，在本说明书中，不含表面活性剂是指表面活性剂的含量为0.1ppm以下。

本发明的含有肝素且包含生物吸收性高分子的多孔基材例如能够用于血管、神经等的再生，特别能够适用于血管的再生。

其中，利用本发明的多孔基材的制造方法得到的管状的人工血管能够发挥极其优异的性能。

下面，对利用本发明的多孔基材的制造方法的人工血管的制造进行更详细地说明。

上述管状的人工血管的制造方法与本发明的多孔基材的制造方法同样利用溶液调制工序→析出工序→冻结干燥工序进行，但在溶液调制工序之后、析出工序之前进行用于形成管状的工序。

具体而言，在进行将上述溶液调制工序中得到的肝素－生物吸收性高分子溶液涂敷于棒状体的表面的涂敷工序后，进行将棒状体表面的肝素－生物吸收性高分子溶液冷却而在棒状体的周围析出含有肝素且包含生物吸收性高分子的管状的多孔体的析出工序。

上述棒状体是用于使多孔体成型为管状的部件，从所得到的多孔体中抽取时，棒状体的直径与所得到的管状的人工血管的内径大致相当。

其中，本发明的发明人发现，作为上述棒状体，特别是在使用由不锈钢或覆盖树脂的不锈钢等金属形成的棒状体的情况下，对所得到的管状的人工血管进行移植时，不容易引起肥厚化或钙化，可以再生非常正常的血管。

考虑这是由于，在进行将上述棒状体表面的肝素－生物吸收性高分子溶液冷却而在棒状体的周围析出含有肝素且包含生物吸收性高分子的管状的多孔体的析出工序时，与由导热性高的金属形成的棒状体接触的管的内侧部分被急速冷却，因此形成与其周围的部分(以下，也称为“多孔层”。)相比孔径相对小的层(以下，也称为“表皮层”。)。为了再生血管，作为人工血管整体，需要形成细胞能够侵入的充分的孔径的孔。另一方面，在直接与血流接触的内侧部分，防止成为肥厚化或钙化的原因的血小板的附着是重要的。考虑是由于，通过在管状的人工血管的内侧形成上述表皮层，在与血流接触的内侧部分能够防止血小板的附着，并且在其他的部分细胞能够容易地侵入，因此可以再生正常的血管。

进一步而言，通过调整棒状体的种类、冷却方法，也能够制造内侧具有表皮层并且该表皮层周围的多孔层的孔径越向外侧越大的形态的人工血管。另外，相反地，也能够制造外侧具有表皮层并且该表皮层内侧的多孔层的孔径越向内侧越大的形态的人工血管。

作为将上述肝素－生物吸收性高分子溶液涂敷于棒状体的表面的方法，没有特别限定，例如可以列举：将棒状体在肝素－生物吸收性高分子溶液中浸渍1次或多次的方法；或者将棒状体配置在内径大于上述棒状体的直径的筒状体中，在棒状体与筒状体的间隙流入上述肝素－生物吸收性高分子溶液的方法等。

其中，由于所得到的管状的多孔体在析出工序中稍有收缩，棒状体和筒状体的抽取是容易的，但也可以预先对棒状体、筒状体的表面实施涂层等的易滑加工。

另外，由本发明的含有肝素的多孔基材形成的人工血管也是本发明之一。

本发明的人工血管的内径没有特别限定，考虑到一般的血管的内径，因此优选的下限为0.5mm，优选的上限为8.0mm左右。另外，上述人工血管的外径没有特别限定，考虑到一般的血管的外径，因此优选的下限为1.0mm，优选的上限为10.0mm左右。

特别是在内径为2.0～5.0mm左右的末梢血管的再生中也能够利用的人工血管，是利用现有的方法难以制造的，但利用本发明的多孔基材的制造方法，能够容易地制造。

本发明的人工血管优选具有由包含生物吸收性高分子且纤维直径为0.1～10μm的极细纤维形成的极细纤维无纺布层作为最外层。通过在最外层设置这样的极细纤维无纺布层，能够防止血液因血流的压力而漏出，移植后还能够针对来自外部的压迫发挥充分的强度，防止血管因纽结(折叠现象)而闭塞。

作为构成上述极细纤维无纺布层的生物吸收性高分子，没有特别限定，可以使用上述的合成高分子、天然高分子等。

其中，作为构成上述极细纤维无纺布层的生物吸收性高分子，优选将生物吸收性不同的2种以上的生物吸收性高分子组合使用。通过设置上述极细纤维无纺布层，能够提高人工血管的强度；另一方面，细胞的侵入被极细纤维无纺布层阻碍，有时血管再生延迟，或者成为钙化的原因。通过组合生物吸收性不同的2种以上的生物吸收性高分子而构成极细纤维无纺布层，能够显著改善这一点。

例如，将生物吸收性相对高的聚乙交酯和生物吸收性相对低的聚丙交酯组合，构成极细纤维无纺布层。在这种情况下，特别是在要求强度的移植之后的比较早的时期，2种生物吸收性高分子均未分解而存在，因此，能够发挥高的强度提高效果。之后，随着生物吸收性高的聚乙交酯缓慢分解并被吸收，极细纤维无纺布层生成空隙。利用该空隙，细胞的侵入变得容易，能够促进血管再生，并防止钙化。

上述极细纤维无纺布层的厚度的优选的下限为10μm，优选的上限为1000μm。上述极细纤维无纺布层的厚度处于该范围内时，能够发挥充分的强度提高效果。

形成上述极细纤维无纺布层的方法没有特别限定，优选静电纺丝法。静电纺丝法是在喷嘴与集电极之间施加高电压的状态下，将溶解有生物吸收性高分子的溶液从喷嘴向对靶极喷出的方法。从喷嘴发射的溶液沿着电场线形成极细纤维状，附着于对靶极上。

在本发明的人工血管的制造方法中，通过使用由金属形成的导电性的棒状体作为上述棒状体，能够将该棒状体作为集电极。此时，通过使形成有管状的人工血管的棒状体旋转，使喷嘴多次往复并喷出，能够形成上述极细纤维无纺布层作为上述管状的人工血管的最外层。

发明效果

利用本发明，能够提供一种不使用表面活性剂而简便地制造含有肝素且包含生物吸收性高分子的多孔基材的方法、含有肝素且包含生物吸收性高分子的多孔基材和人工血管。

附图说明

图1是实施例1和比较例1中得到的多孔基材的截面的电子显微镜照片。

图2是实施例1和比较例1中得到的多孔基材的甲苯胺蓝染色后的照片。

图3是实施例1和比较例1中得到的多孔基材的IR谱图。

具体实施方式

以下，列举实施例对本发明的方式进行更详细地说明，但本发明并不只限定于这些实施例。

(实施例1)

在25℃的室温下，将L－丙交酯－ε－己内酯共聚物(摩尔比50﹕50)0.25g与含有作为溶剂1的以7200units/mL的浓度溶解有肝素(和光纯药工业公司制造、试剂特级)的水0.3mL、作为溶剂2的甲乙酮2.0mL、作为共溶剂3的丙酮1.0mL的混合溶液混合。得到L－丙交酯－ε－己内酯共聚物没有溶解的不均匀溶液。在不均匀溶液中，肝素不沉淀而形成稳定的胶束。

接着，将所得到的不均匀溶液加入直径3.3mm的玻璃管中，加热至60℃，得到肝素均匀分散且L－丙交酯－ε－己内酯共聚物溶解了的溶液。

接着，将所得到的溶液放入冰柜内，冷却至4℃或－24℃，含有肝素且包含L－丙交酯－ε－己内酯共聚物的多孔体析出。

将所得到的多孔体在50mL的乙醇槽中以4℃或－24℃浸渍12小时，接着，在50mL的水槽中以25℃浸渍12小时，进行清洗。

之后，在－40℃的条件下进行冻结干燥，得到直径3.0mm、高度15mm的圆柱状的多孔基材。

(实施例2)

除了使用丙酮(共溶剂3－1)0.5mL和乙醇(共溶剂3－2)0.5mL的混合溶剂作为共溶剂3以外，与实施例1同样操作，得到多孔基材。

另外，在所得到的不均匀溶液中，肝素不沉淀而形成稳定的胶束。

(实施例3)

在25℃的室温下，将L－丙交酯－ε－己内酯共聚物(摩尔比50﹕50)0.25g与含有作为溶剂1的以7200units/mL的浓度溶解有肝素(和光纯药工业公司制造、试剂特级)的水0.2mL、作为溶剂2的甲乙酮2.5mL、作为共溶剂3的丙酮0.8mL和乙醇0.2mL的混合溶液混合。得到L－丙交酯－ε－己内酯共聚物没有溶解的不均匀溶液。在不均匀溶液中，肝素不沉淀而形成稳定的胶束。

接着，将所得到的不均匀溶液加热至60℃，得到肝素均匀分散且L－丙交酯－ε－己内酯共聚物溶解了的均匀溶液。

将直径0.6mm的实施了氟涂层的由不锈钢形成的棒状体配置于内径1.1mm的玻璃管中，在该棒状体与玻璃管的间隙流入所得到的均匀溶液。在该状态下，放入冰柜内，冷却至－30℃，在棒状体的周围析出含有肝素且包含L－丙交酯－ε－己内酯共聚物的多孔体。将所得到的多孔体在50mL的乙醇槽中以－30℃浸渍12小时，接着，在50mL的水槽中以25℃浸渍12小时，进行清洗。

之后，在－40℃的条件下进行冻结干燥，得到管状的多孔体。

将聚乙交酯和聚丙交酯溶解在六氟异丙醇中，分别调制聚乙交酯浓度为10重量％、聚丙交酯浓度为10重量％的六氟异丙醇溶液。

将形成有管状的多孔体的棒状体作为集电极，使用静电纺丝装置，将该六氟异丙醇溶液喷出至棒状体的表面。此时，使棒状体旋转，将调整后的六氟异丙醇溶液分别填充于二个喷嘴中，使其多次往复并喷出，由此形成极细纤维无纺布层。

其中，静电纺丝的条件为电压－20kV、喷嘴直径23G。

最后，抽去棒状体，得到外径约1090μm、内径约610μm的管状的人工血管。

(比较例1)

除了使用没有溶解肝素的水作为溶剂1以外，与实施例1同样操作，得到多孔基材。

(评价)

对于实施例和比较例中得到的多孔基材，利用以下的方法进行评价。

(1)利用电子显微镜的肝素的鉴定

图1显示了将实施例1和比较例1中得到的圆柱状的多孔基材切断并以倍率10000倍拍摄其截面的中央附近而得到的电子显微镜照片。

根据图1(a)，能够确认在实施例1中得到的多孔基材中，在包含L－丙交酯－ε－己内酯共聚物的多孔体的表面附着了被认为是肝素的颗粒。在图1(b)的比较例1中得到的多孔基材中，没有看到这样的颗粒。

(2)利用甲苯胺蓝染色的肝素的鉴定

图2显示了甲苯胺蓝染色后的实施例1和比较例1中得到的多孔基材的照片。

根据图2，在比较例1中得到的多孔基材(照片左侧)中，完全看不到染色，与之相对，在实施例1中得到的多孔基材(照片右侧)中，全部被染成了浓的蓝紫色，确认了肝素的存在。

(3)利用红外分光法的鉴定

图3显示了实施例1和比较例1中得到的多孔基材的IR谱图。

根据图3，在实施例1中得到的多孔基材的IR谱图中看到了在比较例1所得到的多孔基材的IR谱图中没有的，被认为是来自肝素的1259cm^－1的峰(点划线所围成的峰)。

产业上的可利用性

利用本发明，能够提供一种不使用表面活性剂而简便地制造含有肝素且包含生物吸收性高分子的多孔基材的方法、含有肝素且包含生物吸收性高分子的多孔基材和人工血管。

Claims (6)

1.一种含有肝素的多孔基材的制造方法，该多孔基材包含生物吸收性高分子，该制造方法的特征在于，包括：

溶液调制工序，其使用生物吸收性高分子、肝素、溶剂1、溶剂2和共溶剂3，调制所述肝素均匀分散且溶解有所述生物吸收性高分子的肝素－生物吸收性高分子溶液，其中，

所述溶剂1为对所述生物吸收性高分子的溶解度低的贫溶剂，

所述溶剂2为对所述生物吸收性高分子的溶解度高的良溶剂，且与所述溶剂1不相溶，

所述共溶剂3与所述溶剂1和溶剂2相溶；

析出工序，其将所述肝素－生物吸收性高分子溶液冷却而使含有肝素且包含生物吸收性高分子的多孔体析出；和

冻结干燥工序，其将所述含有肝素且包含生物吸收性高分子的多孔体冻结干燥而得到含有肝素的多孔基材。

2.如权利要求1所述的含有肝素的多孔基材的制造方法，其特征在于：

组合使用2种以上的共溶剂3，通过调整所述2种以上的共溶剂3的配合比，控制所得到的多孔体的孔径。

3.一种含有肝素的多孔基材，其特征在于：

通过权利要求1或2所述的含有肝素的多孔基材的制造方法而制得。

4.一种人工血管，其特征在于：

包含权利要求3所述的含有肝素的多孔基材。

5.如权利要求4所述的人工血管，其特征在于：

最外层具有由包含生物吸收性高分子且纤维直径为0.1～10μm的极细纤维形成的极细纤维无纺布层。

6.如权利要求5所述的人工血管，其特征在于：

极细纤维无纺布层通过将生物吸收性不同的2种以上的生物吸收性高分子组合而形成。