CN109694877B - 培育具有不同木质素含量的转基因植物的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了提供培育具有不同木质素含量的转基因植物的方法。本发明提供方法甲包括如下步骤：在出发植物中导入特异DNA分子Ⅰ，得到木质素含量低于所述出发植物的转基因植物；所述特异DNA分子Ⅰ编码序列表的序列1所示的miRNA。方法甲得到的转基因植株，木质素含量降低，茎秆穿刺强度降低，可作为生物能源的原材料。本发明提供的方法乙包括如下步骤：在出发植物中导入特异DNA分子Ⅱ，得到木质素含量高于所述出发植物的转基因植物；所述特异DNA分子Ⅱ为抑制序列表的序列1所示的miRNA表达的DNA分子。方法乙得到的转基因植株，木质素含量增高，茎秆穿刺强度增高，抗倒伏性能增强。本发明在玉米分子育种中具有重要意义。

Description

培育具有不同木质素含量的转基因植物的方法

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及培育具有不同木质素含量的转基因植物的方法。

背景技术

玉米是世界上最重要的食粮之一,现今全世界约有三分之一人口以玉米作为主要食粮。玉米的蛋白质含量高于大米,脂肪含量高于面粉、大米和小米,含热量高于面粉、大米及高粱。在城市及较发达地区,玉米是调剂口味不可缺少的食品。随着玉米加工工业的发展,玉米的食用品质不断改善,新的玉米食品如玉米片、玉米面、玉米渣、特制玉米粉、速食玉米等随之产生,并可进一步制成面条、面包、饼干等。玉米还可加工成为玉米蛋白、玉米油、味精、酱油、白酒等,这些产品在国内外市场上很受欢迎。玉米是饲料之王。据报道,100千克玉米的饲用价值相当于135千克燕麦,120千克高粱或150千克籼米。玉米的副产品秸秆也可制成青贮饲料。世界上大约65-70％的玉米都用作饲料,发达国家高达80％,是畜牧业赖以发展的重要基矗。

木质素是三种苯丙烷单元通过醚键和碳碳键相互连接形成的具有三维网状结构的生物高分子，存在于木质组织中，主要作用是通过形成交织网来硬化细胞壁，为次生壁主要成分。木质素主要位于纤维素纤维之间，起抗压作用。一方面，降低木质素含量后的玉米秸秆更容易转化为生物能源。另一方面，增加木质素含量后的玉米植株，抗倒伏性更强。

microRNAs(简称miRNA)是一类内源的长约20～24个核苷酸的非编码RNA分子，它们通过对靶基因mRNA的切割或抑制靶基因的翻译，特异地对靶基因进行转录后调控。

发明内容

本发明的目的是提供培育具有不同木质素含量的转基因植物的方法。

本发明提供了一种培育木质素含量降低的转基因植物的方法(方法甲)，包括如下步骤：在出发植物中导入特异DNA分子Ⅰ，得到木质素含量低于所述出发植物的转基因植物；所述特异DNA分子Ⅰ为DNA分子甲或DNA分子乙；所述DNA分子甲编码序列表的序列1所示的miRNA；所述DNA分子乙编码序列表的序列1所示的miRNA的前体RNA。

所述“序列表的序列1所示的miRNA的前体RNA”为序列表的序列2所示的RNA。

所述特异DNA分子Ⅰ具体可为序列表的序列4所示的DNA分子。

所述特异DNA分子Ⅰ具体可通过重组质粒Ⅰ导入出发植物。所述重组质粒Ⅰ具体可为在pCUB载体的BamHI酶切位点插入所述特异DNA分子Ⅰ得到的重组质粒。

所述方法甲得到的转基因植株，木质素含量降低，茎秆穿刺强度降低，可作为生物能源的原材料。

本发明还保护一种培育木质素含量增加的转基因植物的方法(方法乙)，包括如下步骤：在出发植物中导入特异DNA分子Ⅱ，得到木质素含量高于所述出发植物的转基因植物；所述特异DNA分子Ⅱ为抑制序列表的序列1所示的miRNA表达的DNA分子。

所述特异DNA分子Ⅱ具体可为序列表的序列5所示的DNA分子。

所述特异DNA分子Ⅱ具体可通过重组质粒Ⅱ导入出发植物。所述重组质粒Ⅱ具体可为在pCUB载体的BamHI酶切位点插入所述特异DNA分子Ⅱ得到的重组质粒。

所述方法乙得到的转基因植株，木质素含量增高，茎秆穿刺强度增高，抗倒伏性能增强。

以上任一所述出发植物可为单子叶植物。所述单子叶植物可为禾本科植物，具体可为玉米，例如玉米品种综31。

本发明还保护序列表的序列1所示的miRNA。

本发明还保护序列表的序列1所示的miRNA的前体RNA。所述前体RNA具体可为序列表的序列2所示的RNA。

本发明还保护编码序列表的序列1所示的miRNA的基因。

本发明还保护编码序列表的序列2所示的RNA的基因。

所述基因具体可为序列表的序列4所示的DNA分子。

含有所述基因的重组载体也属于本发明的保护范围。所述重组载体具体可为将所述基因插入pCUB载体的BamHI酶切位点得到的重组质粒。

本发明还保护序列表的序列1所示的miRNA、序列表的序列2所示的RNA或所述基因在培育木质素含量降低的植物中的应用。

本发明还保护用于抑制序列表的序列1所示的miRNA的物质或抑制序列表的序列2所示的RNA表达的物质在培育木质素含量增高的植物中的应用。所述抑制序列表的序列1所示的miRNA的物质或所述抑制序列表的序列2所示的RNA表达的物质具体可为干扰载体。所述干扰载体为具有序列表的序列5所示的DNA分子的重组质粒。所述干扰载体具体可为将序列表的序列5所示的DNA分子插入pCUB载体的BamHI酶切位点得到的重组质粒。

本发明还保护一种重组质粒(干扰载体)，为具有序列表的序列5所示的DNA分子的重组质粒。所述干扰载体具体可为将序列表的序列5所示的DNA分子插入pCUB载体的BamHI酶切位点得到的重组质粒。

以上任一所述植物可为单子叶植物。所述单子叶植物可为禾本科植物，具体可为玉米，例如玉米品种综31。

本发明在玉米分子育种中具有重要意义。

附图说明

图1为miRNA表达量的鉴定的结果。

图2为组织化学染色中根部的照片。

图3为组织化学染色中第一节间的照片。

图4为木质素含量测定的结果。

图5为茎杆穿刺强度测定测定的结果。

图6为盆栽实验中抽雄期植株的照片。

图7为Northern Blot试验的结果。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。

提及“玉米品种综31”的参考文献：玉米优良自交系综3、综31的转化研究；杨会，王国英，戴景瑞；《农业生物技术学报》，2001年04期。

提及“玉米B73”的参考文献：玉米自交系B73丙酮酸磷酸双激酶基因的克隆及低氮对PPDK表达的影响；龚付全，李平华；《热带生物学报》，2014年4期。

从玉米中发现一个miRNA，如序列表的序列1所示，其前体RNA如序列表的序列2所示。

实施例1、构建重组质粒

pCUB载体为序列表的序列3所示的环形质粒。

1、将序列表的序列4所示的双链DNA分子插入pCUB载体的BamHI酶切位点，得到重组质粒pCUB-MIR。重组质粒pCUB-MIR为过表达序列表的序列1所示miRNA的质粒。序列表的序列4所示的双链DNA分子表达序列表的序列2所示的RNA分子。序列表的序列2所示RNA分子为序列表的序列1所示miRNA的前体RNA。

2、将序列表的序列5所示的双链DNA分子插入pCUB载体的BamHI酶切位点，得到重组质粒pCUB-MIM。序列表的序列5中，第218-241位核苷酸中“CTA”以外的部分与序列表的序列1所示RNA相应的DNA反向互补。重组质粒pCUB-MIM为抑制序列表的序列1所示miRNA表达的质粒。

实施例2、转基因植物的制备以及表型鉴定

一、制备转基因植物

以玉米品种综31为出发植物。玉米品种综31又称野生型植株，在图中用WT表示。

在出发植物中导入重组质粒pCUB-MIR，得到T₀代转基因植株，将T₀代转基因植株自交获得T₁代植株，T₁代植株自交获得T₂代植株。在T₂代获得纯合的转基因株系，命名为过表达株系。随机取一个过表达株系(OE)进行后续试验。

在出发植物中导入重组质粒pCUB-MIM，得到T₀代转基因植株，将T₀代转基因植株自交获得T₁代植株，T₁代植株自交获得T₂代植株。在T₂代获得纯合的转基因株系，命名为抑制表达株系。随机取两个抑制表达株系(TM-3和TM-7)进行后续试验。

在出发植物中导入pCUB载体，得到T₀代转基因植株，将T₀代转基因植株自交获得T₁代植株，T₁代植株自交获得T₂代植株。在T₂代获得纯合的转基因株系，命名为转空载体株系。

二、miRNA表达量的鉴定

试验植株为：OE株系的T₂代植株、TM-3株系的T₂代植株、TM-7株系的T₂代植株、出发植物。每个株系5株，结果取平均值。

取试验植株的叶片，提取总RNA，采用RT引物进行反转录，然后采用F1和R1组成的引物对进行实时定量PCR，检测序列表的序列1所示miRNA的相对表达水平。采用Ubi基因为内参基因(用于鉴定内参基因的引物对由F2和R2组成)。

RT：GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACCTCCTC。

F1：5’-GTGGAAGGGGCATGCA-3’；

R1：5’-GTGCAGGGTCCGAGGT-3’。

F2：5’-GCTGCCGATGTGCCTGCGTCG-3’；

R2：5’-CTGAAAGACAGAACATAATGAGCACAG-3’。

结果见图1。与野生型植株相比，OE株系植株中序列表的序列1所示miRNA的表达量明显增加，TM-3株系植株和TM-7株系植株中序列表的序列1所示miRNA的表达量显著降低。

三、组织化学染色

试验植株为：OE株系的T₂代植株、TM-3株系的T₂代植株、TM-7株系的T₂代植株、转空载体株系的T₂代植株、出发植物。

取水培条件下生长30天(从催芽开始计天数)的试验植株的第一节间以及根部成熟区，切片(切片厚度为50μm)，用5％间苯三酚染色2min，然后滴加1滴盐酸，在显微镜下进行观察。

根部的照片见图2(刻度标尺代表75μm)。

第一节间的照片见图3(刻度标尺代表200μm)。

不论在地上部还是根部，与野生型植株相比，OE株系植株中染色变浅(即木质素含量降低)，TM-3株系植株和TM-7株系植株中染色变深(即木质素含量增加)。不论在地上部还是根部，与野生型植株相比，转空载体株系植株的染色强度一致。

四、木质素含量测定

试验植株为：OE株系的T₂代植株、TM-3株系的T₂代植株、TM-7株系的T₂代植株、转空载体株系的T₂代植株、出发植物。每个株系3株，结果取平均值。

取成熟期授粉后第7天的试验植株的第三节间，80℃烘干至恒重，然后粉碎并过40目筛，收集粉末。称取约5mg粉末于10ml玻璃试管中，采用苏州科铭木质素含量试剂盒(乙酰溴法，具体步骤见说明书)检测木质素含量。

木质素含量(单位为mg/g，mg为木质素的质量单位，g为粉末干重的质量单位)＝0.0735*(△A-0.0068)/W*T。A：280nm处吸光值；△A＝A测定管-A空白管；W：样本质量，单位为g；T：稀释倍数。

结果见图4。与野生型植株相比，OE株系植株的茎杆木质素含量降低了22.93％，TM-3株系植株的茎杆木质素含量升高了42.15％，TM-7株系植株的茎杆木质素含量升高了28.96％。与野生型植株相比，转空载体株系植株的茎杆木质素含量无显著变化。

五、茎杆穿刺强度测定

茎杆穿刺强度与玉米抗倒伏具有显著相关性，能综合反映茎杆强度和抗倒伏性。

试验植株为：OE株系的T₂代植株、TM-3株系的T₂代植株、TM-7株系的T₂代植株、转空载体株系的T₂代植株、出发植物。每个株系20株，结果取平均值。

成熟期授粉后第7天的试验植株进行穿刺强度测定，具体步骤为：使用AWOS-SL04型茎秆强度测定仪，将横截面积为1.0mm²的测头以茎秆的短轴方向垂直刺入地上部第三节间中部，读取并记录试验数据。

结果见图5。与野生型植株相比，OE株系植株的茎杆的穿刺强度降低了22.15％，TM-3株系植株的茎杆的穿刺强度升高了18.97％，TM-7株系植株的茎杆的穿刺强度升高了21.45％。与野生型植株相比，转空载体株系植株的茎杆的穿刺强度无显著变化。

六、盆栽实验

试验种子为：OE株系的T₃代种子、TM-3株系的T₃代种子、TM-7株系的T₃代种子、转空载体株系的T₃代种子、出发植物。

取塑料花盆(32.5厘米直径*26厘米高)，每盆装土14.0kg，然后施用基肥，将催芽后的试验种子种植于花盆中，在露天条件下进行培养。

抽雄期植株的照片见图6。风吹之后，OE株系植株出现茎杆弯曲(说明茎杆机械强度变小)，TM-3株系植株、TM-7株系植株、野生型植株和转空载体株系植株仍保持直立(说明茎杆机械强度较硬)。

实施例3、靶基因的确认

一、5’RACE试验

初步预测序列表的序列1所示miRNA的候选靶基因有8个(GRMZM2G367668、GRMZM2G169033、GRMZM2G148937、GRMZM2G178741、GRMZM2G039381、GRMZM2G062069、GRMZM2G043300、GRMZM2G004106)，依次对各个候选靶基因进行验证。

提取玉米B73的总RNA，采用GeneRacer^TM Kit分别对各个候选靶基因进行5’RACE试验(包括靶基因mRNA产物连接5’RACE接头，反转录成cDNA、巢式PCR和特异片段的克隆及测序四个步骤，具体见说明书)。

结果表明，GRMZM2G367668转录本和GRMZM2G169033转录本上存在所述miRNA的切割位点。GRMZM2G367668转录本对应的DNA如序列表的序列6所示，所述miRNA的剪切位点位于GRMZM2G367668转录本的第222-242位核苷酸之间。GRMZM2G169033转录本对应的DNA如序列表的序列7所示，所述miRNA剪切位点位于GRMZM2G169033转录本的第302-322位核苷酸之间。

二、Northern Blot试验

试验植株为：实施例2中制备的OE株系的T₂代植株、TM-3株系的T₂代植株、TM-7株系的T₂代植株、转空载体株系的T₂代植株、出发植物。

取幼苗期的试验植株的根，提取总RNA，进行Northern Blot试验(针对GRMZM2G169033转录本的探针如序列表的序列8所示，针对GRMZM2G367668转录本的探针如序列表的序列9所示。

结果见图7。OE株系植株中，GRMZM2G169033转录本和GRMZM2G367668转录本水平明显下降，TM-3株系植株和TM-7株系植株中，GRMZM2G169033转录本和GRMZM2G367668转录本水平明显升高。结果表明，GRMZM2G169033转录本和GRMZM2G367668转录本为所述miRNA的靶基因。

SEQUENCE LISTING

<110> 中国农业科学院作物科学研究所

<120> 培育具有不同木质素含量的转基因植物的方法

<130> GNCYX171790

<160> 9

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 21

<212> RNA

<213> Zea mays

<400> 1

uggaaggggc augcagagga g 21

<210> 2

<211> 78

<212> RNA

<213> Zea mays

<400> 2

guggaagggg caugcagagg agcacgaacg aggugugguu ggccccucgu uagcucuccu 60

gugccugccu cuuccauu 78

<210> 3

<211> 12103

<212> DNA

<213> Artificial sequence

<400> 3

ctcattaggc accccaggct ttacacttta tgcttccggc tcgtatgttg tgtggaattg 60

tgagcggata acaatttcac acaggaaaca gctatgacat gattacgaat tcccgatcta 120

gtaacataga tgacaccgcg cgcgataatt tatcctagtt tgcgcgctat attttgtttt 180

ctatcgcgta ttaaatgtat aattgcggga ctctaatcat aaaaacccat ctcataaata 240

acgtcatgca ttacatgtta attattacat gcttaacgta attcaacaga aattatatga 300

taatcatcgc aagaccggca acaggattca atcttaagaa actttattgc caaatgtttg 360

aacgatcggg gaaattcgag ctcggtaccc ggggatcctc tagagtcgac ctgcagaagt 420

aacaccaaac aacagggtga gcatcgacaa aagaaacagt accaagcaaa taaatagcgt 480

atgaaggcag ggctaaaaaa atccacatat agctgctgca tatgccatca tccaagtata 540

tcaagatcaa aataattata aaacatactt gtttattata atagataggt actcaaggtt 600

agagcatatg aatagatgct gcatatgcca tcatgtatat gcatcagtaa aacccacatc 660

aacatgtata cctatcctag atcgatattt ccatccatct taaactcgta actatgaaga 720

tgtatgacac acacatacag ttccaaaatt aataaataca ccaggtagtt tgaaacagta 780

ttctactccg atctagaacg aatgaacgac cgcccaacca caccacatca tcacaaccaa 840

gcgaacaaaa agcatctctg tatatgcatc agtaaaaccc gcatcaacat gtatacctat 900

cctagatcga tatttccatc catcatcttc aattcgtaac tatgaatatg tatggcacac 960

acatacagat ccaaaattaa taaatccacc aggtagtttg aaacagaatt aattctactc 1020

cgatctagaa cgaccgccca accagaccac atcatcacaa ccaagacaaa aaaaagcatg 1080

aaaagatgac ccgacaaaca agtgcacggc atatattgaa ataaaggaaa agggcaaacc 1140

aaaccctatg caacgaaaca aaaaaaatca tgaaatcgat cccgtctgcg gaacggctag 1200

agccatccca ggattcccca aagagaaaca ctggcaagtt agcaatcaga acgtgtctga 1260

cgtacaggtc gcatccgtgt acgaacgcta gcagcacgga tctaacacaa acacggatct 1320

aacacaaaca tgaacagaag tagaactacc gggccctaac catggaccgg aacgccgatc 1380

tagagaaggt agagaggggg ggggggggag gacgagcggc gtaccttgaa gcggaggtgc 1440

cgacgggtgg atttggggga gatctggttg tgtgtgtgtg cgctccgaac aacacgaggt 1500

tggggaaaga gggtgtggag ggggtgtcta tttattacgg cgggcgagga agggaaagcg 1560

aaggagcggt gggaaaggaa tcccccgtag ctgccggtgc cgtgagagga ggaggaggcc 1620

gcctgccgtg ccggctcacg tctgccgctc cgccacgcaa tttctggatg ccgacagcgg 1680

agcaagtcca acggtggagc ggaactctcg agaggggtcc agaggcagcg acagagatgc 1740

cgtgccgtct gcttcgcttg gcccgacgcg acgctgctgg ttcgctggtt ggtgtccgtt 1800

agactcgtcg acggcgttta acaggctggc attatctact cgaaacaaga aaaatgtttc 1860

cttagttttt ttaatttctt aaagggtatt tgtttaattt ttagtcactt tattttattc 1920

tattttatat ctaaattatt aaataaaaaa actaaaatag agttttagtt ttcttaattt 1980

agaggctaaa atagaataaa atagatgtac taaaaaaatt agtctataaa aaccattaac 2040

cctaaaccct aaatggatgt actaataaaa tggatgaagt attatatagg tgaagctatt 2100

tgcaaaaaaa aaggagaaca catgcacact aaaaagataa aactgtagag tcctgttgtc 2160

aaaatactca attgtccttt agaccatgtc taactgttca tttatatgat tctctaaaac 2220

actgatatta ttgtagtact atagattata ttattcgtag agtaaagttt aaatatatgt 2280

ataaagatag ataaactgca cttcaaacaa gtgtgacaaa aaaaatatgt ggtaattttt 2340

tataacttag acatgcaatg ctcattatct ctagagaggg cacgaccggg tcacgctgca 2400

ctgcaggcat gcaagcttgg cactggccgt cgttttacaa cgtcgtgact gggaaaaccc 2460

tggcgttacc caacttaatc gccttgcagc acatccccct ttcgccagct ggcgtaatag 2520

cgaagaggcc cgcaccgatc gcccttccca acagttgcgc agcctgaatg gcgaatgcta 2580

gagcagcttg agcttggatc agattgtcgt ttcccgcctt cagtttaaac tatcagtgtt 2640

tgacaggata tattggcggg taaacctaag agaaaagagc gtttattaga ataatcggat 2700

atttaaaagg gcgtgaaaag gtttatccgt tcgtccattt gtatgtgcat gccaaccaca 2760

gggttcccct cgggatcaaa gtactttgat ccaacccctc cgctgctata gtgcagtcgg 2820

cttctgacgt tcagtgcagc cgtcttctga aaacgacatg tcgcacaagt cctaagttac 2880

gcgacaggct gccgccctgc ccttttcctg gcgttttctt gtcgcgtgtt ttagtcgcat 2940

aaagtagaat acttgcgact agaaccggag acattacgcc atgaacaaga gcgccgccgc 3000

tggcctggtg ggctatgccc gcgtcagcac cgacgaccag gacttgacca accaacgggc 3060

cgaactgcac gcggcctatg aggtaaagag aaaatgagca aaagccaaac acgctaagtg 3120

ccggccgtcc gagcgcacgc agcagcaagg ctgcaacgtt ggccagcctg gcagacacgc 3180

cagccatgaa gcgggtcaac tttcagttgc cggagctggc caggatgctt gaccacctac 3240

gccctggcga cgttgtgaca gtgaccaggc tagaccgcct ggcccgcagc acccgcgacc 3300

tactggacat tgccgagcgc atccaggagg ccggcgcggg cctgcgtagc ctggcagagc 3360

cgtgggccga caccaccacg ccggccggcc gcatggtgtt gaccgtgttc gccggcattg 3420

ccgagttcga gcgttcccta atcatcgacc gcacccggag cgggcgcgag gccgccaagg 3480

cccgaggcgt gaagtttggc ccccgcccta ccctcacccc ggcacagatc gcgcacgccc 3540

gcgagctgat cgaccaggaa ggccgcaccg tgaaagaggc ggctgcactg cttggcgtgc 3600

atcgctcgac cctgtaccgc gcacttgagc gcagcgagga agtgacgccc accgaggcca 3660

ggcggcgcgg tgccttccgt gaggacgcat tgaccgaggc cgacgccctg gcggccgccg 3720

agaatgaacg ccaagaggaa caagcatgaa accgcaccag gacggccagg acgaaccgtt 3780

tttcattacc gaagagatcg aggcggagat gatcgcggcc gggtacgtgt tcgagccgcc 3840

cgcgcacgtc tcaaccgtgc ggctgcatga aatcctggcc ggtttgtctg atgccaagct 3900

ggcggcctgg ccggccagct tggccgctga agaaaccgag cgccgccgtc taaaaaggtg 3960

atgtgtattt gagtaaaaca gcttgcgtca tgcggtcgct gcgtatatga tgcgatgagt 4020

aaataaacaa atacgcaagg ggaacgcatg aaggttatcg ctgtacttaa ccagaaaggc 4080

gggtcaggca agacgaccat cgcaacccat ctagcccgcg ccctgcaact cgccggggcc 4140

gatgttctgt tagtcgattc cgatccccag ggcagtgccc gcgattgggc ggccgtgcgg 4200

gaagatcaac cgctaaccgt tgtcggcatc gaccgcccga cgattgaccg cgacgtgaag 4260

gccatcggcc ggcgcgactt cgtagtgatc gacggagcgc cccaggcggc ggacttggct 4320

gtgtccgcga tcaaggcagc cgacttcgtg ctgattccgg tgcagccaag cccttacgac 4380

atatgggcca ccgccgacct ggtggagctg gttaagcagc gcattgaggt cacggatgga 4440

aggctacaag cggcctttgt cgtgtcgcgg gcgatcaaag gcacgcgcat cggcggtgag 4500

gttgccgagg cgctggccgg gtacgagctg cccattcttg agtcccgtat cacgcagcgc 4560

gtgagctacc caggcactgc cgccgccggc acaaccgttc ttgaatcaga acccgagggc 4620

gacgctgccc gcgaggtcca ggcgctggcc gctgaaatta aatcaaaact catttgagtt 4680

aatgaggtaa agagaaaatg agcaaaagca caaacacgct aagtgccggc cgtccgagcg 4740

cacgcagcag caaggctgca acgttggcca gcctggcaga cacgccagcc atgaagcggg 4800

tcaactttca gttgccggcg gaggatcaca ccaagctgaa gatgtacgcg gtacgccaag 4860

gcaagaccat taccgagctg ctatctgaat acatcgcgca gctaccagag taaatgagca 4920

aatgaataaa tgagtagatg aattttagcg gctaaaggag gcggcatgga aaatcaagaa 4980

caaccaggca ccgacgccgt ggaatgcccc atgtgtggag gaacgggcgg ttggccaggc 5040

gtaagcggct gggttgcctg ccggccctgc aatggcactg gaacccccaa gcccgaggaa 5100

tcggcgtgag cggtcgcaaa ccatccggcc cggtacaaat cggcgcggcg ctgggtgatg 5160

acctggtgga gaagttgaag gccgcgcagg ccgcccagcg gcaacgcatc gaggcagaag 5220

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ttttcgttcc gatgctctat gacgtgggca cccgcgatag tcgcagcatc atggacgtgg 5400

ccgttttccg tctgtcgaag cgtgaccgac gagctggcga ggtgatccgc tacgagcttc 5460

cagacgggca cgtagaggtt tccgcagggc cggccggcat ggccagtgtg tgggattacg 5520

acctggtact gatggcggtt tcccatctaa ccgaatccat gaaccgatac cgggaaggga 5580

agggagacaa gcccggccgc gtgttccgtc cacacgttgc ggacgtactc aagttctgcc 5640

ggcgagccga tggcggaaag cagaaagacg acctggtaga aacctgcatt cggttaaaca 5700

ccacgcacgt tgccatgcag cgtacgaaga aggccaagaa cggccgcctg gtgacggtat 5760

ccgagggtga agccttgatt agccgctaca agatcgtaaa gagcgaaacc gggcggccgg 5820

agtacatcga gatcgagcta gctgattgga tgtaccgcga gatcacagaa ggcaagaacc 5880

cggacgtgct gacggttcac cccgattact ttttgatcga tcccggcatc ggccgttttc 5940

tctaccgcct ggcacgccgc gccgcaggca aggcagaagc cagatggttg ttcaagacga 6000

tctacgaacg cagtggcagc gccggagagt tcaagaagtt ctgtttcacc gtgcgcaagc 6060

tgatcgggtc aaatgacctg ccggagtacg atttgaagga ggaggcgggg caggctggcc 6120

cgatcctagt catgcgctac cgcaacctga tcgagggcga agcatccgcc ggttcctaat 6180

gtacggagca gatgctaggg caaattgccc tagcagggga aaaaggtcga aaaggtctct 6240

ttcctgtgga tagcacgtac attgggaacc caaagccgta cattgggaac cggaacccgt 6300

acattgggaa cccaaagccg tacattggga accggtcaca catgtaagtg actgatataa 6360

aagagaaaaa aggcgatttt tccgcctaaa actctttaaa acttattaaa actcttaaaa 6420

cccgcctggc ctgtgcataa ctgtctggcc agcgcacagc cgaagagctg caaaaagcgc 6480

ctacccttcg gtcgctgcgc tccctacgcc ccgccgcttc gcgtcggcct atcgcggccg 6540

ctggccgctc aaaaatggct ggcctacggc caggcaatct accagggcgc ggacaagccg 6600

cgccgtcgcc actcgaccgc cggcgcccac atcaaggcac cctgcctcgc gcgtttcggt 6660

gatgacggtg aaaacctctg acacatgcag ctcccggaga cggtcacagc ttgtctgtaa 6720

gcggatgccg ggagcagaca agcccgtcag ggcgcgtcag cgggtgttgg cgggtgtcgg 6780

ggcgcagcca tgacccagtc acgtagcgat agcggagtgt atactggctt aactatgcgg 6840

catcagagca gattgtactg agagtgcacc atatgcggtg tgaaataccg cacagatgcg 6900

taaggagaaa ataccgcatc aggcgctctt ccgcttcctc gctcactgac tcgctgcgct 6960

cggtcgttcg gctgcggcga gcggtatcag ctcactcaaa ggcggtaata cggttatcca 7020

cagaatcagg ggataacgca ggaaagaaca tgtgagcaaa aggccagcaa aaggccagga 7080

accgtaaaaa ggccgcgttg ctggcgtttt tccataggct ccgcccccct gacgagcatc 7140

acaaaaatcg acgctcaagt cagaggtggc gaaacccgac aggactataa agataccagg 7200

cgtttccccc tggaagctcc ctcgtgcgct ctcctgttcc gaccctgccg cttaccggat 7260

acctgtccgc ctttctccct tcgggaagcg tggcgctttc tcatagctca cgctgtaggt 7320

atctcagttc ggtgtaggtc gttcgctcca agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc 7380

agcccgaccg ctgcgcctta tccggtaact atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg 7440

acttatcgcc actggcagca gccactggta acaggattag cagagcgagg tatgtaggcg 7500

gtgctacaga gttcttgaag tggtggccta actacggcta cactagaagg acagtatttg 7560

gtatctgcgc tctgctgaag ccagttacct tcggaaaaag agttggtagc tcttgatccg 7620

gcaaacaaac caccgctggt agcggtggtt tttttgtttg caagcagcag attacgcgca 7680

gaaaaaaagg atctcaagaa gatcctttga tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga 7740

acgaaaactc acgttaaggg ctgatgaatc ccctaatgat tttggtaaaa atcattaagt 7800

taaggtggat acacatcttg tcatatgatc aaatggtttc gcgaaaaatc aataatcaga 7860

caacaagatg tgcgaactcg atattttaca cgactctctt taccaattct gccccgaatt 7920

acacttaaaa cgactcaaca gcttaacgtt ggcttgccac gcattacttg actgtaaaac 7980

tctcactctt accgaacttg gccgtaacct gccaaccaaa gcgagaacaa aacataacat 8040

caaacgaatc gaccgattgt taggtaatcg tcacctccac aaagagcgac tcgctgtata 8100

ccgttggcat gctagcttta tctgttcggg caatacgatg cccattgtac ttgttgactg 8160

gtctgatatt cgtgagcaaa aacgacttat ggtattgcga gcttcagtcg cactacacgg 8220

tcgttctgtt actctttatg agaaagcgtt cccgctttca gagcaatgtt caaagaaagc 8280

tcatgaccaa tttctagccg accttgcgag cattctaccg agtaacacca caccgctcat 8340

tgtcagtgat gctggcttta aagtgccatg gtataaatcc gttgagaagc tgggttggta 8400

ctggttaagt cgagtaagag gaaaagtaca atatgcagac ctaggagcgg aaaactggaa 8460

acctatcagc aacttacatg atatgtcatc tagtcactca aagactttag gctataagag 8520

gctgactaaa agcaatccaa tctcatgcca aattctattg tataaatctc gctctaaagg 8580

ccgaaaaaat cagcgctcga cacggactca ttgtcaccac ccgtcaccta aaatctactc 8640

agcgtcggca aaggagccat gggttctagc aactaactta cctgttgaaa ttcgaacacc 8700

caaacaactt gttaatatct attcgaagcg aatgcagatt gaagaaacct tccgagactt 8760

gaaaagtcct gcctacggac taggcctacg ccatagccga acgagcagct cagagcgttt 8820

tgatatcatg ctgctaatcg ccctgatgct tcaactaaca tgttggcttg cgggcgttca 8880

tgctcagaaa caaggttggg acaagcactt ccaggctaac acagtcagaa atcgaaacgt 8940

actctcaaca gttcgcttag gcatggaagt tttgcggcat tctggctaca caataacaag 9000

ggaagactta ctcgtggctg caaccctact agctcaaaat ttattcacac atggttacgc 9060

tttggggaaa ttatgagggg atctctcagc gttaagggat tttggtcatg cattctaggt 9120

actaaaacaa ttcatccagt aaaatataat attttatttt ctcccaatca ggcttgatcc 9180

ccagtaagtc aaaaaatagc tcgacatact gttcttcccc gatatcctcc ctgatcgacc 9240

ggacgcagaa ggcaatgtca taccacttgt ccgccctgcc gcttctccca agatcaataa 9300

agccacttac tttgccatct ttcacaaaga tgttgctgtc tcccaggtcg ccgtgggaaa 9360

agacaagttc ctcttcgggc ttttccgtct ttaaaaaatc atacagctcg cgcggatctt 9420

taaatggagt gtcttcttcc cagttttcgc aatccacatc ggccagatcg ttattcagta 9480

agtaatccaa ttcggctaag cggctgtcta agctattcgt atagggacaa tccgatatgt 9540

cgatggagtg aaagagcctg atgcactccg catacagctc gataatcttt tcagggcttt 9600

gttcatcttc atactcttcc gagcaaagga cgccatcggc ctcactcatg agcagattgc 9660

tccagccatc atgccgttca aagtgcagga cctttggaac aggcagcttt ccttccagcc 9720

atagcatcat gtccttttcc cgttccacat cataggtggt ccctttatac cggctgtccg 9780

tcatttttaa atataggttt tcattttctc ccaccagctt atatacctta gcaggagaca 9840

ttccttccgt atcttttacg cagcggtatt tttcgatcag ttttttcaat tccggtgata 9900

ttctcatttt agccatttat tatttccttc ctcttttcta cagtatttaa agatacccca 9960

agaagctaat tataacaaga cgaactccaa ttcactgttc cttgcattct aaaaccttaa 10020

ataccagaaa acagcttttt caaagttgtt ttcaaagttg gcgtataaca tagtatcgac 10080

ggagccgatt ttgaaaccgc ggtgatcaca ggcagcaacg ctctgtcatc gttacaatca 10140

acatgctacc ctccgcgaga tcatccgtgt ttcaaacccg gcagcttagt tgccgttctt 10200

ccgaatagca tcggtaacat gagcaaagtc tgccgcctta caacggctct cccgctgacg 10260

ccgtcccgga ctgatgggct gcctgtatcg agtggtgatt ttgtgccgag ctgccggtcg 10320

gggagctgtt ggctggctgg tggcaggata tattgtggtg taaacaaatt gacgcttaga 10380

caacttaata acacattgcg gacgttttta atgtactgaa ttaacgccga attaattcgg 10440

gggatctgga ttttagtact ggattttggt tttaggaatt agaaatttta ttgatagaag 10500

tattttacaa atacaaatac atactaaggg tttcttatat gctcaacaca tgagcgaaac 10560

cctataggaa ccctaattcc cttatctggg aactactcac acattattat ggagaaactc 10620

gagtcaaatc tcggtgacgg gcaggaccgg acggggcggt accggcaggc tgaagtccag 10680

ctgccagaaa cccacgtcat gccagttccc gtgcttgaag ccggccgccc gcagcatgcc 10740

gcggggggca tatccgagcg cctcgtgcat gcgcacgctc gggtcgttgg gcagcccgat 10800

gacagcgacc acgctcttga agccctgtgc ctccagggac ttcagcaggt gggtgtagag 10860

cgtggagccc agtcccgtcc gctggtggcg gggggagacg tacacggtcg actcggccgt 10920

ccagtcgtag gcgttgcgtg ccttccaggg gcccgcgtag gcgatgccgg cgacctcgcc 10980

gtccacctcg gcgacgagcc agggatagcg ctcccgcaga cggacgaggt cgtccgtcca 11040

ctcctgcggt tcctgcggct cggtacggaa gttgaccgtg cttgtctcga tgtagtggtt 11100

gacgatggtg cagaccgccg gcatgtccgc ctcggtggca cggcggatgt cggccgggcg 11160

tcgttctggg ctcatggtag actcgagaga gatagatttg tagagagaga ctggtgattt 11220

cagcgtgtcc tctccaaatg aaatgaactt ccttatatag aggaagggtc ttgcgaagga 11280

tagtgggatt gtgcgtcatc ccttacgtca gtggagatat cacatcaatc cacttgcttt 11340

gaagacgtgg ttggaacgtc ttctttttcc acgatgctcc tcgtgggtgg gggtccatct 11400

ttgggaccac tgtcggcaga ggcatcttga acgatagcct ttcctttatc gcaatgatgg 11460

catttgtagg tgccaccttc cttttctact gtccttttga tgaagtgaca gatagctggg 11520

caatggaatc cgaggaggtt tcccgatatt accctttgtt gaaaagtctc aatagccctt 11580

tggtcttctg agactgtatc tttgatattc ttggagtaga cgagagtgtc gtgctccacc 11640

atgttcacat caatccactt gctttgaaga cgtggttgga acgtcttctt tttccacgat 11700

gctcctcgtg ggtgggggtc catctttggg accactgtcg gcagaggcat cttgaacgat 11760

agcctttcct ttatcgcaat gatggcattt gtaggtgcca ccttcctttt ctactgtcct 11820

tttgatgaag tgacagatag ctgggcaatg gaatccgagg aggtttcccg atattaccct 11880

ttgttgaaaa gtctcaatag ccctttggtc ttctgagact gtatctttga tattcttgga 11940

gtagacgaga gtgtcgtgct ccaccatgtt ggcaagctgc tctagccaat acgcaaaccg 12000

cctctccccg cgcgttggcc gattcattaa tgcagctggc acgacaggtt tcccgactgg 12060

aaagcgggca gtgagcgcaa cgcaattaat gtgagttagc tca 12103

<210> 4

<211> 78

<212> DNA

<213> Artificial sequence

<400> 4

gtggaagggg catgcagagg agcacgaacg aggtgtggtt ggcccctcgt tagctctcct 60

gtgcctgcct cttccatt 78

<210> 5

<211> 524

<212> DNA

<213> Artificial sequence

<400> 5

aagaaaaatg gccatcccct agctaggtga agaagaatga aaacctctaa tttatctaga 60

ggttattcat cttttagggg atggcctaaa tacaaaatga aaactctcta attaagtggt 120

tttgtgttca tgtaaggaaa gcgttttaag atatggagca atgaagactg cagaaggctg 180

attcagactg cgagttttgt ttatctccct ctagaaactc ctctgcatct agccccttcc 240

aagcttcggt tcccctcgga atcagcagat tatgtatctt taattttgta atactctctc 300

tcttctctat gctttgtttt tcttcattat gtttgggttg tacccactcc cgcgcgttgt 360

gtgttctttg tgtgaggaat aaaaaaatat tcggatttga gaactaaaac tagagtagtt 420

ttattgatat tcttgttttt catttagtat ctaataagtt tggagaatag tcagaccagt 480

gcatgtaaat ttgcttccga ttctctttat agtgaattcc tctt 524

<210> 6

<211> 2249

<212> DNA

<213> Zea mays

<400> 6

caccaactag gccaaccacc accgtgctgt gaccccctac catgcaggcc acgaacccgg 60

cggccatcat ggcgcctata tagaacccag cactcattcc atagcaaagt gcaccacttc 120

acttgcttca aagcgcaaac acacaagaag ggcggagctg ttgtcatcct gacaatgggc 180

gcgcgtcgtg gtctccggcg aggccaagcc gccgccgccg ccttctccgc atgtcccttc 240

ctcgccctcg ccgtcgtcct cctcgccttg ccggagctcg cagccggcga cacccactac 300

tacacgttca acgtgcaaat gaccaacgtg acacggctgt gcgtgactaa gagcatcccg 360

acggtgaacg gggagttccc ggggccgaag ctggtcgtgc gggaaggcga ccgcctcgtg 420

gtcaaggttc acaaccacat caactacaat gtctcgttcc actggcacgg cgtccggcag 480

ctgcgcaacg ggtgggcgga cgggccgtcg tacatcacgc agtgcccgat ccagggcggg 540

cagagctacg tgtacgactt caccgtcacg gggcagcgcg gcacgctgtg gtggcacgcg 600

cacttctcct ggctgcgcgt gcacctctac ggcccgctcg tcatcctccc caagcgcggc 660

gagggctacc cgttcccgcg cccctacaag gaggtgccca tcctcttcgg cgaatggttc 720

aacgcggaca cggaggccgt catcaaccag gccctgcaaa caggcgccgg cccaaacgtc 780

tccgatgcct acaccttcaa tgggcttcca ggcccgacat ataactgctc gtctaaagac 840

acgtacaagc tgaaggtgaa gcccgggagg acgtacatgc tccggctcat caactccgcc 900

ctcaacgacg agctcttctt cggcatcgcc aaccacacgc tcaccgtcgt cgaggcggac 960

gccagctacg tcaagccatt caccgtcagc acgctcgtca tttcaccggg gcagaccatg 1020

aacgtgctcc tcacgacggc ccccagcccc gcctccccgg cctacgccat ggcgatcgcg 1080

ccctacacca acacgcaggg cacgttcgac aacaccaccg ccgcggccgt cctcgagtac 1140

gccccgacga cgaccaggaa caacaccctg cctcccctac cggccctgcc gctgtacaac 1200

gacaccggcg cggtgtccaa cttctcgcgc aatttccgca gcctgaacag cgcgcgctac 1260

ccggcgcgcg tgccggtggc ggtggaccgg cacctgctgt tcaccgtggg gctcggcacg 1320

gacccgtgcc cgtacaccaa ccagacgtgc cagggcccca acggcaccaa gttcgcggcg 1380

tccgtcaaca acaactcctt cttccgcccc cggaccgcgc tcctcgaggc gcactaccgg 1440

cgccgctacg ccggcgtgct cctggccgac ttccccacgg ccccgccgca cccgttcaac 1500

tacacgggca ccccgcccaa caacacgttc gtgcagcacg gcacgcgggt ggtgccgctc 1560

cgcttcaacg cctccgtgga gctggtgctg cagggcacca gcatccaggg cgccgagagc 1620

cacccgctgc acctgcacgg ctacaacttc ttcgtggtcg gccaagggtt cggcaacttc 1680

gacccggtga acgacccgcc cgggtacaac ctcgccgacc ccgtagagcg caacaccatc 1740

agcgtgccca ccgccggctg ggtcgccgtc cggttcctcg ccgacaaccc gggcgtgtgg 1800

ctgatgcatt gccacttcga cgtgcacttg agctggggcc tgtccatggc gtggcttgtc 1860

aacgacggcc cgctgccgaa cgagaagatg ttgcccccgc catccgacct cccaaaatgc 1920

tgatgacgac tggtcgttta tcacccgatc gaggggtaga tgggcattta ggaaggttct 1980

cctgcttcct gcacgtctgc ctacttcctt tccttacgat gtttggaact atttggtttg 2040

gactatttaa ttaccgtgtg ccgatttttg gcgagtgctt ggatttcgcg atcctcgctg 2100

aatccccttt tgaaacatgt taatctgtat ctatgtaacg acaacgtttg ttctgcggtt 2160

acttgttctt tttttacccc ctttctgaac attcagcacg cattggtgta ttcacatggt 2220

caaatacaat gtaacaatga tgtctgtat 2249

<210> 7

<211> 2420

<212> DNA

<213> Zea mays

<400> 7

accgactggt ggcggcatga cgaacgaaac atgcatatgc attcgtcccc tcgtcgtcgt 60

tggcagctct cgctcctcta taaataccag cgccatccgc ttcagatgag catcgatccc 120

agcaacgcac ggagcgtacg tacattgcag tagctagcta tagctggccg gccatcccct 180

ctcgctcgct gctaaacacg ttccagcttg tttgctcaga gaaacagcgc gcgcgcacac 240

acacacacat catcatcatc gattcatcgt acacaggatc agagagctta attagttcta 300

gctctgctgc atgccccttc gacaacgtcc gacgatgggc ggcggcggcg gcggtgtagc 360

taagatgccg gcaggccagc tctggttatt actgctaggc gtgttgttgt tagcatttgg 420

agtcccagcc caggcctcca ggaatactca ctacgacttc gttataactg agacgaaggt 480

cacccgacta tgccatgaga agaccatcct ggccgtgaac gggcagttcc cggggccgac 540

catctacgcg cgcaaggacg acgtggtcat cgtcaacgtg tacaaccagg gctacaagaa 600

catcaccctc cactggcacg gcgtggacca gccgcggaac ccgtggtccg atggcccgga 660

gtacatcacg cagtgcccca tccagcccgg cgccaacttc acctacaaga tcatcttcac 720

cgaggaggaa ggcacgctgt ggtggcacgc gcacagcgaa ttcgaccgcg ccaccgtgca 780

cggcgccatc gtcatccacc ccaagcgcgg caccgtctac ccctacccca agccgcacaa 840

ggagatgccc atcatcctcg gcgagtggtg gaacgcggac gtggagcaga tcctcctcga 900

gtcccagcgg accggcggcg acgtcaacat ttcggacgcc aacaccatca acggccagcc 960

cggcgacttc gccccgtgct ccaaggagga caccttcaag atgtccgtgg agcacggcaa 1020

gacgtacctg ctccgggtca tcaacgcggg gctcaccaac gagatgttct tcgccgtcgc 1080

cgggcaccgc ctcacggtgg tcggcaccga cggccgctac ctcaggccgt tcaccgtcga 1140

ctacatcctc atctcccccg gacagaccat gaacatgctc ctcgaggcca actgcgccac 1200

cgacggctca gccaacagcc gctactacat ggctgcgagg ccgttcttca ccaacacggc 1260

agtcaatgtc gacgacaaaa acaccacggc cattctggag tacacggacg cgccaccctc 1320

cgcggggcca ccggactccc ccgacctgcc ggccatggac gacatcgccg cggcgacggc 1380

gtacacggcg cagctccggt ccctggtcac caaggagcat ccgatcgacg tgccgatgga 1440

ggtggacgag cacatgctcg tgacgatctc cgtcaacacg atcccctgcg agcccaacaa 1500

gacgtgcgcc ggccccggaa acaaccgcct cgccgcgagc ctgaacaacg tcagcttcat 1560

gaacccgacc atcgacatcc tcgacgccta ctacgactcc atcagcggcg tgtacgagcc 1620

ggacttcccc aacaagccgc ccttcttctt caacttcacc gctcccaacc cgccacagga 1680

cctctggttc acgaagcggg gcaccaaggt gaaggtggtg gagtacggca ccgtcctgga 1740

ggtggtgttc caggacacgg ccatcctcgg cgccgagagc caccccatgc acctgcacgg 1800

cttcagcttc tacgtggtgg gccgaggctt cggtaacttc gacaaggaca aggaccccgc 1860

cacgtacaac ctggtcgacc cgccgtacca gaacaccgtc tccgtgccca cgggcggttg 1920

ggctgcaatg cgcttccgag cggcaaatcc tggtgtgtgg tttatgcatt gccactttga 1980

tcgtcacacg gtgtggggca tggacactgt gttcattgtg aaaaatggca agggcccgga 2040

cgctcagatg atgccacgtc cccctaacat gcccaagtgc tgagaaaaca agggcacgag 2100

ctacgactgc tcgggttgca tgcaaggcgc tcgatcaaac cagctaatct tagttgattg 2160

gttgatttaa ttatttgtgg tacatatttt aagtagaacg gttcttcaaa taaaacggcc 2220

agttgagatg taattagtgt catttgtgtt cttttctctt tttattcatt tgattgtaag 2280

agaaaaacaa attcattata tttattattt gtgtcggtct actgctagtt caatctccaa 2340

gtgtaattaa acaatgtatg tcaaatcatg tatctagtga aaattcaata taaatgcgtg 2400

cttcatatgt gtatttattt 2420

<210> 8

<211> 205

<212> DNA

<213> Zea mays

<400> 8

cgctcgatca aaccagctaa tcttagttga ttggttgatt taattatttg tggtacatat 60

tttaagtaga acggttcttc aaataaaacg gccagttgag atgtaattag tgtcatttgt 120

gttcttttct ctttttattc atttgattgt aagagaaaaa caaattcatt atatttatta 180

tttgtgtcgg tctactgcta gttca 205

<210> 9

<211> 171

<212> DNA

<213> Zea mays

<400> 9

tttatcaccc gatcgagggg tagatgggca tttaggaagg ttctcctgct tcctgcacgt 60

ctgcctactt cctttcctta cgatgtttgg aactatttgg tttggactat ttaattaccg 120

tgtgccgatt tttggcgagt gcttggattt cgcgatcctc gctgaatccc c 171

Claims (6)

1.一种培育木质素含量降低的转基因植物的方法，包括如下步骤：在出发植物中导入特异DNA分子Ⅰ，得到木质素含量低于所述出发植物的转基因植物；所述特异DNA分子Ⅰ为DNA分子甲或DNA分子乙；所述DNA分子甲编码序列表的序列1所示的miRNA；所述DNA分子乙编码序列表的序列1所示的miRNA的前体RNA。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述“序列表的序列1所示的miRNA的前体RNA”为序列表的序列2所示的RNA。

3.一种培育木质素含量增加的转基因植物的方法，包括如下步骤：在出发植物中导入特异DNA分子Ⅱ，得到木质素含量高于所述出发植物的转基因植物；所述特异DNA分子Ⅱ为序列表的序列5所示的DNA分子。

4.序列表的序列1所示的miRNA、序列表的序列2所示的RNA或编码序列表的序列1所示的miRNA的基因在培育木质素含量降低的植物中的应用。

5.干扰载体在培育木质素含量增高的植物中的应用；所述干扰载体为具有序列表的序列5所示的DNA分子的重组质粒。

6.一种重组质粒，具有序列表的序列5所示的DNA分子。

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