CN109694394A - 一种沙棘中鞣质提取物的制备方法及其用途 - Google Patents

一种沙棘中鞣质提取物的制备方法及其用途 Download PDF

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Abstract

本发明公开一种沙棘中鞣质提取物的制备方法及其用途。该提取物将沙棘叶用甲醇浸泡提取浸膏；再将备用浸膏用水分散后,用机溶剂萃取,减压回收溶剂待用；取经过上述步骤的浸膏,用20％甲醇溶解后,进行Sephadex LH‑20柱色谱分离,以甲醇‑水(20:80→100:0)溶剂系统梯度洗脱,得到4个部分Fr.1‑4,Fr.4(20g)经过硅胶、MCI CHP‑20柱色谱和半制备高效液相色谱分离纯化，得到化合物。本发明的鞣质提取物具有抗炎抗肥胖活性，能够用于炎症及肥胖的预防和治疗，本发明通过生物活性测试实验表明，所述沙棘鞣质提取物具有强抗炎抗肥胖作用。

Description

一种沙棘中鞣质提取物的制备方法及其用途
技术领域
本发明属于中药提取物领域，涉及一种来源于沙棘的具有抗炎和抗肥胖辅助性治疗提取物，特别是指一种沙棘中鞣质提取物的制备方法及其用途。
背景技术
肥胖外因以饮食过多而活动过少为主。热量摄入多于热量消耗，使脂肪合成增加是肥胖的物质基础。内因为脂肪代谢紊乱而致肥胖。肥胖患者当使用药物减轻体重后，也需要持续用药保持。但临床上如何更好地应用这类药物仍有待探讨。用药可能产生药物副作用及耐药性，因而选择药物治疗的适应证必须十分慎重，根据患者的个体情况衡量可能得到的益处和潜在的危险作出决定。
因此，传统抗肥胖药物的地位有所降低，目前只是作为短期治疗措施来应用。尽管如此，该类药物在治疗严重肥胖患者时仍然是一种不可或缺的基本药物。因此，寻找毒副作用小的抗肥胖药物对于肥胖的治疗和预防仍然具有重要意义。
我国植被丰富，亟待开发与应用。沙棘(Hippophae rhamnoides L.)为胡颓子科沙棘属的落叶灌木或小乔木，主要分布在丝绸之路沿线国家。我国是世界上沙棘种质资源和蕴藏量最丰富的国家，共有7种7亚种，广泛分布于我国西北、华北、东北、西南等地，其蕴藏量约占世界沙棘资源的90％。
发明内容
本发明的目的在于提出一种沙棘中鞣质提取物的制备方法及其用途。
为实现上述目的，本发明通过下述技术方案来实现：所述一种沙棘中鞣质提取物在抗肥胖辅助性治疗药物中的用途。
所述沙棘中鞣质提取物具有如式1、式2、式3所示结构的组分：
其中R1、R2、R3、R4、R5中的H为氢或没食子酰基。
所述沙棘中鞣质提取物按以下方法制备得到：
(1)将沙棘叶6kg用80％含水醇溶液浸泡提取,滤过合并提取液,减压浓缩得浸膏1.4kg，备用；
(2)将备用浸膏用水分散后,用有机溶剂萃取,减压回收溶剂待用；
(3)取经过上述步骤的浸膏,用20％甲醇溶解后,进行Sephadex LH-20柱色谱分离,以甲醇-水(20:80→100:0)溶剂系统梯度洗脱,得到4个部分 Fr.1-4,Fr.4(20g)经过硅胶、MCI CHP-20柱色谱和半制备高效液相色谱分离纯化，得到化合物。
所述含水醇溶液为甲醇，甲醇浸泡反复提取3-4次,提取温度20-70℃。
所述机溶剂为氯仿、乙酸乙酯、正丁醇。
所述机溶剂萃取步骤为用氯仿、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取3-4次，萃取温度为18-35℃。
本发明所述一种沙棘中鞣质提取物的制备方法及其用途，有益效果在于：中鞣质提取物能够用于肥胖的预防和治疗，本发明通过生物活性测试实验表明，所述沙棘鞣质提取物具有强抗肥胖作用。
说明书附图
图1为槲皮素、多数鞣质类化合物对脂肪细胞TG蓄积和分化的抑制率。
具体实施方式
实施例1
1、材料：
实验用沙棘叶采于内蒙古，为沙棘Hippophae rhamnoides L.的干燥叶。
2、提取与分离：
沙棘叶6kg用80％甲醇浸泡提取，反复3次，滤过合并提取液，减压浓缩得浸膏1.4kg。浸膏用水分散后，用氯仿、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取3次，减压回收溶剂,得相应的提取物，其中乙酸乙酯层和水层分别是60g和933g。取乙酸乙酯部位57g浸膏，20％甲醇溶解后，进行Sephadex LH-20柱色谱分离，以甲醇-水(20:80→100:0)溶剂系统梯度洗脱，得到4个部分Fr.1-4，Fr.4 (20g)经过硅胶、MCI CHP-20柱色谱和半制备高效液相色谱分离纯化，得到化合物。
3、结构鉴定：
化合物1：浅褐色粉末，FAB-MS(m/z):787[M-H]-,HR-FAB-MS(m/z):found.787.0993[M-H]-(calcd.787.0992for C34H27O22)；1H-NMR(Acetone-d6,600MHz) δ:6.01(1H,d,J＝8.3Hz,glu,H-1),4.09(1H,t,J＝8.6Hz,H-2),5.70 (1H,t,J＝9.6Hz,H-3),5.51(1H,t,J＝9.6Hz,H-4),4.41(1H,m, H-5),4.58(1H,dd,J＝12.4,1.7Hz,H-6α),4.49(1H,dd,J＝12.4, 5.2Hz,H-6β),7.21,7.15,7.10,7.07(各2H,s,galloyl)；13C-NMR (Acetone-d6,150MHz)δ:94.8(glu,C-1),71.2(C-2),75.1(C-3),68.9 (C-4),73.0(C-5),62.6(C-6),120.2,121.1,119.4,119.4(C-1,galloyl), 109.6,109.4,109.4(C-2,6),109.3,145.5,145.4,145.4,145.3(C-3, 5),139.2,139.0,138.5,138.5(C-4),166.21,166.2,165.7,165.3(C＝O)。
化合物2：浅褐色粉末，FAB-MS(m/z):787[M-H]-,HR-FAB-MS(m/z):found.787.0993[M-H]-(calcd.787.0992for C34H27O22)；1H-NMR(Acetone-d6,600MHz) δ:6.19(1H,d,J＝8.6Hz,glu,H-1),5.48(1H,t,J＝8.6Hz,H-2), 5.69(1H,t,J＝8.9Hz,H-3),4.11(1H,m,H-4),4.16(1H,m,H-5),4.62 (1H,dd,J＝12.1,1.8Hz,H-6α),4.58(1H,dd,J＝12.1,4.7Hz,H-6 β),7.19,7.10,7.09,7.01(各2H,s,galloyl)；13C-NMR(Acetone-d6,150 MHz)δ:93.5(glu,C-1),71.8(C-2),75.9(C-3),68.4(C-4),76.1(C-5), 63.7(C-6),121.6,121.4,120.8,120.1(C-1,galloyl),110.3,110.2,110.1, 110.0(C-2,6),146.1,146.1,145.9,145.9(C-3,5),139.7,139.2,139.0, 138.9(C-4),166.6,166.2,165.8,165.0(C＝O)。
化合物3：浅褐色粉末FAB-MS(m/z):939[M-H]-,HR-FAB-MS(m/z):found.939.1103[M-H]-(calcd.939.1102for C41H31O26)；1H-NMR(Acetone-d6,600 MHz)δ:6.34(1H,d,J＝8.5Hz,glu,H-1),5.62(1H,t,J＝8.4Hz,H-2), 6.02(1H,t,J＝9.5Hz,H-3),5.67(1H,t,J＝9.5Hz,H-4),4.58(1H, m,H-5),4.55(1H,dd,J＝12.4,1.9Hz,H-6α),4.42(1H,dd,J＝12.4, 4.4Hz,H-6β),7.19,7.12,7.06,7.02,6.98(各2H,s,galloyl)；13C-NMR(Acetone-d6,150MHz)δ:93.3(glu,C-1),71.8(C-2),73.3(C-3),69.3 (C-4),74.0(C-5),62.8(C-6),121.4,120.7,120.6,120.6,119.9(C-1, galloyl),110.4,110.3,110.2,110.1,110.1(C-2,6),146.1,146.03, 145.98,145.94,145.86(C-3,5),139.8,139.4,139.3,139.2,139.0(C-4), 166.4,165.9,165.7,165.6,165.0(C＝O)。
4、抗肥胖活性评价：
4.1抑制3T3L-1脂肪细胞甘油三酯(TG)蓄积的抗肥胖活性评价：
用含10％新生小牛血清的高糖DMEM培养基，在37℃、5％CO2条件下培养 3T3-L1脂肪细胞，待细胞生长至完全融合后两天(第0天)时，更换成诱导分化培养基(含10％胎牛血清、10μg/mL胰岛素、1.0μM地塞米松、500μM 1-甲基-3-异丁基黄嘌呤)并添加不同浓度的样品培养3天，换用促进分化培养基(含 10％胎牛血清、5μg/mL胰岛素)并添加不同浓度的样品培养3天，换用同样培养基并添加不同浓度的样品培养至第8天。以未加样品的细胞培养液为阴性对照,显微镜下观察，可见该阴性对照细胞体内脂肪滴明显；以槲皮素为阳性对照。 3T3-L1脂肪细胞用PBS(-)清洗后，用含1mM EDTA的25mM Tris-HCl缓冲液收集细胞，超声匀浆，用LabAssayTM Triglyceride试剂盒(WAKO Pure Chemical Industries Ltd.)测定细胞中蓄积的甘油三酯(TG)含量，同时用甘油磷酸脱氢酶(GPDH)试剂盒(TaKaRa BioInc.)测定GPDH活性，分别定量分析脂肪蓄积和分化程度,评价供试品的抗肥胖活性。
实验结果如图1显示，在10μM浓度时，阳性对照槲皮素对脂肪细胞TG蓄积和分化的抑制率约为25％，同浓度下的多数鞣质类化合物的抑制率约为 30-40％，普遍较槲皮素抑制作用强。

Claims (8)

1.一种沙棘中鞣质提取物在抗肥胖辅助性治疗药物中的用途。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述沙棘中鞣质提取物具有如式1、式2、式3所示结构的组分：
其中R1、R2、R3、R4、R5中的H为氢或没食子酰基。
3.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述抗肥胖辅助性治疗药物包括沙棘中鞣质提取物及其盐和水合物。
4.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述沙棘中鞣质提取物按以下方法制备得到：
(1)将沙棘叶6kg用80％甲醇浸泡提取,滤过合并提取液,减压浓缩得浸膏1.4kg，备用；
(2)将备用浸膏用水分散后,用机溶剂萃取,减压回收溶剂待用；
(3)取经过上述步骤的浸膏,用20％甲醇溶解后,进行Sephadex LH-20柱色谱分离,以甲醇-水(20:80→100:0)溶剂系统梯度洗脱,得到4个部分Fr.1-4,Fr.4(20g)经过硅胶、MCICHP-20柱色谱和半制备高效液相色谱分离纯化，得到化合物。
5.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述含水醇溶液为甲醇，甲醇浸泡反复提取3-4次,提取温度20-70℃。
6.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述机溶剂为氯仿、乙酸乙酯、正丁醇。
7.如权利要求6所述的用途，其特征在于：所述机溶剂萃取步骤为用氯仿、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取3-4次，萃取温度为18-35℃。
8.如权利要求1所述的一种沙棘中鞣质提取物在抗肥胖辅助性治疗药物，其特征在于：所述药物的剂型为丸剂、片剂、滴剂中的一种。
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