CN109692187A - 一种抗癌作用显著的生物制剂及其制备方法 - Google Patents

一种抗癌作用显著的生物制剂及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN109692187A
CN109692187A CN201711003108.6A CN201711003108A CN109692187A CN 109692187 A CN109692187 A CN 109692187A CN 201711003108 A CN201711003108 A CN 201711003108A CN 109692187 A CN109692187 A CN 109692187A
Authority
CN
China
Prior art keywords
ultrafiltration
allantoic fluid
film
under
virus
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201711003108.6A
Other languages
English (en)
Inventor
关茜茹
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Individual
Original Assignee
Individual
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Individual filed Critical Individual
Priority to CN201711003108.6A priority Critical patent/CN109692187A/zh
Publication of CN109692187A publication Critical patent/CN109692187A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/56—Materials from animals other than mammals
    • A61K35/57—Birds; Materials from birds, e.g. eggs, feathers, egg white, egg yolk or endothelium corneum gigeriae galli
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/76—Viruses; Subviral particles; Bacteriophages
    • A61K35/768—Oncolytic viruses not provided for in groups A61K35/761 - A61K35/766
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/18011—Paramyxoviridae
    • C12N2760/18111—Avulavirus, e.g. Newcastle disease virus
    • C12N2760/18151—Methods of production or purification of viral material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/18011—Paramyxoviridae
    • C12N2760/18811—Sendai virus
    • C12N2760/18851—Methods of production or purification of viral material

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

本发明提供了一种抗癌作用显著的生物制剂及其制备方法，该生物制品是由鸡胚接种单链RNA病毒之后，收取的尿囊液经过超滤浓缩后，再进行纯化，得到纯化的单链RNA病毒液；浓缩后超滤膜膜下尿囊液再经过浓缩超滤，得到膜下有效成分；将纯化后单链RNA病毒和膜下有效成分混合、除菌过滤后获得该生物制品；所述生物制品病毒纯度高，而病毒中卵清蛋白等杂蛋白少，大大减小了该制剂对人体的副作用；同时单链RNA病毒和膜下有效成分具有协同抗癌效果，从而大大提高了该生物制品的抗肿瘤作用；所述制备方法有效提高病毒纯度，减少病毒中卵清蛋白等杂蛋白，制备方法简单，大大降低了生产成本，适合规模化工业生产的需要。

Description

一种抗癌作用显著的生物制剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及生物工程技术领域，尤其是一种抗癌作用显著的生物制剂及其制备方法。
背景技术
单链RNA病毒(如鸡新城疫病毒NDV、仙台病毒等)能改变肿瘤细胞的免疫原性，增强免疫细胞识别肿瘤细胞和杀伤肿瘤细胞的能力，提高机体免疫监视功能，促进机体的排斥肿瘤反应，在人类肿瘤性疾病生物防控中具有较高的研究和应用价值。到目前为止，用鸡新城疫病毒治疗的肿瘤包括全身多种恶性肿瘤，其中人类肿瘤有消化道肿瘤(包括胃癌、结、直肠癌等)、恶性黑色素瘤、肾细胞癌、神经纤维瘤、纤维肉瘤、鼻咽癌、前列腺癌、膀胱移行细胞癌、乳腺癌、头颈部肿瘤、肝癌等。鸡新城疫病毒抗肿瘤、抗病毒作用机制的研究较多，主要有如下几个方面：1.鸡新城疫病毒对肿瘤细胞的直接、特异性杀伤作用；2.鸡新城疫病毒的非特异性免疫刺激作用，NDV感染肿瘤细胞后，诱导机体产生的细胞因子、趋化因子和其它基因产物可达12种以上；3.鸡新城疫病毒可诱导肿瘤细胞凋亡。
仙台病毒的抗肿瘤、抗病毒机制有如下三种：1.仙台病毒对肿瘤细胞的直接毒性作用，现已发现很多病毒能直接杀死肿瘤细胞，生物学家正努力寻找特异性杀伤肿瘤细胞而对正常细胞投有′毒性″的病毒，而分裂异常旺盛的肿瘤细胞是仙台病毒的理想宿主；2.免疫性溶解肿瘤细胞的作用，仙台病毒能使细胞表面病毒粒子发芽引起肿瘤细胞膜免疫原性增加，这样机体产生的免疫反应不仅针对病毒而且包括病毒所寄生的肿瘤细胞，这一机制在病毒抗肿瘤、抗病毒中起重要作用；3.干扰作用，人类的许多肿瘤发生与病毒的感染有密切联系，当机体或肿瘤细胞感染仙台病毒时，就会产生IFN(干扰素)，干扰肿瘤病毒，并抑制肿瘤细胞的生长。
因此，通过提高病毒纯度，减少病毒中卵清蛋白等杂蛋白，制备出对人体副作用少而抗癌作用显著的制剂，具有非常重要的应用价值和经济价值。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供一种生物制品。
本发明所要解决的另一技术问题在于提供上述生物制品的制备方法。
为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：
一种生物制品，是由下述方法得到的：鸡胚接种单链RNA病毒之后，收取的尿囊液经过超滤浓缩后，再进行纯化，得到纯化的单链RNA病毒液；浓缩后超滤膜膜下尿囊液再经过浓缩超滤，得到膜下有效成分；将纯化后单链RNA病毒和膜下有效成分混合、除菌过滤后获得该生物制品。
优选的，上述生物制品，是由下述方法得到的：
(1)病毒接种：
画出气室和接种部位，无菌条件下在鸡胚的接种部位打个小孔，取单链RNA病毒液0.2ml注入鸡胚内并用石蜡封口，于37℃培养96～130小时；
(2)收获尿囊液：
无菌条件下对步骤(1)培养后的鸡胚进行消毒后敲碎蛋壳，扒开囊膜后用无菌吸管吸取尿囊液，并将收获完的尿囊液进行收集、测效价；
(3)首次超滤浓缩：
无菌环境下通过超滤系统对步骤(2)的尿囊液超滤浓缩，其中超滤膜包截留分子量为300Kd；
(4)纯化：
无菌条件下取步骤(3)收集超滤后的尿囊液，将膜上的尿囊液打入层析柱中进行纯化，得到单链RNA病毒；
(5)第二次浓缩超滤：
取步骤(3)收集超滤后的尿囊液，其中将膜下的尿囊液再经过超滤浓缩，其中超滤膜包截留分子量为100Kd，得到膜下有效成分；将步骤(4)中纯化尿囊液后所得单链RNA病毒和该膜下有效成分混合、除菌过滤后，获得该生物制品。
其中第二次超滤是对首次超滤浓缩后超滤膜膜下尿囊液再浓缩超滤，第二次超滤的膜包截留分子量为100Kd，得到膜下有效成分。
优选的，上述生物制品，所述步骤(1)中单链RNA病毒是鸡新城疫病毒或仙台病毒。
优选的，上述生物制品，所述步骤(1)中鸡胚是由受精鸡蛋于37℃～40℃孵化9～11天，检出除去死胚和寡蛋后得到的。
优选的，上述生物制品，所述步骤(1)中鸡胚是9日龄鸡胚。
优选的，上述生物制品，所述步骤(4)中层析柱为凝胶层析柱。
一种生物制品的制备方法，所述方法为鸡胚接种单链RNA病毒之后，收取的尿囊液，经过超滤浓缩后，再进行纯化尿囊液所得单链RNA病毒；浓缩后超滤膜膜下尿囊液再经过浓缩超滤，得到膜下有效成分；将纯化后单链RNA病毒和膜下有效成分混合、除菌过滤后得到，具体步骤为：
(1)病毒接种：
画出气室和接种部位，无菌条件下在鸡胚的接种部位打个小孔，取单链RNA病毒液0.2ml注入鸡胚内并用石蜡封口，于37℃培养96～130小时；
(2)收获尿囊液：
无菌条件下对步骤(1)培养后的鸡胚进行消毒后敲碎蛋壳，扒开囊膜后用无菌吸管吸取尿囊液，并将收获完的尿囊液进行收集、测效价；
(3)首次超滤浓缩：
无菌环境下通过超滤系统对步骤(2)的尿囊液超滤浓缩，其中超滤膜包截留分子量为300Kd；
(4)纯化：
无菌条件下取步骤(3)收集超滤后的尿囊液，将膜上的尿囊液打入层析柱中进行纯化，得到单链RNA病毒；
(5)第二次浓缩超滤：
取步骤(3)收集超滤后的尿囊液，其中将膜下的尿囊液再经过超滤浓缩，其中超滤膜包截留分子量为100Kd，得到膜下有效成分；将步骤(4)中纯化尿囊液后所得单链RNA病毒和该膜下有效成分混合、除菌过滤后，即得。
其中第二次超滤是对首次超滤浓缩后超滤膜膜下尿囊液再浓缩超滤，第二次超滤的膜包截留分子量为100Kd，得到膜下有效成分。
优选的，上述生物制品的制备方法，所述步骤(1)中单链RNA病毒是鸡新城疫病毒或仙台病毒。
优选的，上述生物制品的制备方法，所述步骤(1)中鸡胚是由受精鸡蛋于37℃～40℃孵化9～11天左右，检出除去死胚和寡蛋后得到的。
优选的，上述生物制品的制备方法，所述步骤(1)中鸡胚是9日龄鸡胚。
优选的，上述生物制品的制备方法，所述步骤(4)中层析柱为凝胶层析柱。
本发明的有益效果是：
本发明所述生物制品病毒纯度高，而病毒中卵清蛋白等杂蛋白少，大大减小了该制剂对人体的副作用；同时单链RNA病毒和膜下有效成分具有协同抗癌效果，从而大大提高了该生物制品的抗肿瘤、抗病毒作用；所述制备方法有效提高病毒纯度，减少病毒中卵清蛋白等杂蛋白，制备方法简单，大大降低了生产成本，适合规模化工业生产的需要。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明所述技术方案作进一步的说明。
实施例1
一、鸡胚选择：
选择受精鸡蛋于38℃孵化9天，检出除去死胚和寡蛋；
二、病毒接种：
1、仙台病毒接种的前一天画出气室和接种部位；
2、次日在无菌条件下将鸡胚在接种部位打个小孔；
3、用1ml注射器吸取仙台病毒的病毒液0.2ml，注入鸡胚内，用石蜡封口；
4、于37℃培养96小时；
三、收获尿囊液：
1、在无菌条件下对培养四天的鸡胚进行消毒；
2、用无菌的大镊子敲碎蛋壳，用无菌的小镊子扒开囊膜，用无菌吸管吸取尿囊液；
3、收获完的尿囊液收集到一个瓶子里，测效价；
四、超滤浓缩：
在无菌环境下通过超滤系统对1500ml尿囊液超滤浓缩至原来的5倍，其中超滤膜包截留分子量为300Kd，膜包0.1m2；
五、纯化：
将浓缩后超滤膜膜上300ml尿囊液拿进无菌室，在无菌条件下将尿囊液打入层析柱中，层析柱通过凝胶层析对尿囊液过滤纯化，获得纯化后仙台病毒900ml。
六、第二次浓缩超滤：
浓缩后超滤膜膜下尿囊液再经过浓缩超滤至原来的5倍，其中超滤膜包截留分子量为100Kd，得到膜下有效成分240ml。
将纯化后仙台病毒900ml和膜下有效成分240ml混合、除菌过滤后获得生物制品1140ml。
实施例2
一、鸡胚选择：
选择受精鸡蛋放37℃孵化9天，检出除去死胚和寡蛋；
二、病毒接种：
1、鸡新城疫病毒接种的前一天画出气室和接种部位；
2、次日在无菌条件下将鸡胚在接种部位打个小孔；
3、用1ml注射器吸取鸡新城疫病毒的病毒液0.3ml，注入鸡胚内，用石蜡封口；
4、于37℃培养130小时；
三、收获尿囊液：
1、在无菌条件下对培养后的鸡胚进行消毒；
2、用无菌的大镊子敲碎蛋壳，用无菌的小镊子扒开囊膜，用无菌吸管吸取尿囊液；
3、收获完的尿囊液收集到一个瓶子里，测效价；
四、超滤浓缩：
在无菌环境下通过超滤系统对320ml尿囊液超滤浓缩至原来的8倍，其中超滤膜包截留分子量为300Kd，膜包0.1m2；
五、纯化：
将浓缩后超滤膜膜上尿囊液40ml拿进无菌室，在无菌条件下将尿囊液打入层析柱中，层析柱通过凝胶层析对尿囊液过滤纯化，获得纯化后鸡新城疫病毒120ml；
六、第二次浓缩超滤：
浓缩后超滤膜膜下尿囊液再经过浓缩超滤，其中超滤膜包截留分子量为100Kd，得到膜下有效成分240ml；
将纯化后鸡新城疫病毒120ml和膜下有效成分240ml混合、除菌过滤后获得生物制品360ml。
上述参照实施例对该一种抗癌作用显著的生物制剂及其制备方法进行的详细描述，是说明性的而不是限定性的，可按照所限定范围列举出若干个实施例，因此在不脱离本发明总体构思下的变化和修改，应属本发明的保护范围之内。

Claims (2)

1.一种抗癌作用显著的生物制剂及其制备方法，其特征在于：是由下述方法得到的：鸡胚接种单链RNA病毒之后，收取的尿囊液经过超滤浓缩后，再进行纯化，得到纯化的单链RNA病毒液；浓缩后超滤膜膜下尿囊液再经过浓缩超滤，得到膜下有效成分；将纯化后单链RNA病毒和膜下有效成分混合、除菌过滤后获得该生物制品。
2.根据权利要求1所述的生物制品，其特征在于：是由下述方法得到的：
(1)病毒接种：画出气室和接种部位，无菌条件下在鸡胚的接种部位打个小孔，取单链RNA病毒液0.2ml注入鸡胚内并用石蜡封口，于37℃培养96～130小时；
(2)收获尿囊液：无菌条件下对步骤(1)培养后的鸡胚进行消毒后敲碎蛋壳，扒开囊膜后用无菌吸管吸取尿囊液，并将收获完的尿囊液进行收集、测效价；
(3)首次超滤浓缩：无菌环境下通过超滤系统对步骤(2)的尿囊液超滤浓缩，其中超滤膜包截留分子量为300Kd；
(4)纯化：无菌条件下取步骤(3)收集超滤后的尿囊液，将膜上的尿囊液打入层析柱中进行纯化，得到单链RNA病毒；
(5)第二次浓缩超滤：取步骤(3)收集超滤后的尿囊液，其中将膜下的尿囊液再经过超滤浓缩，其中超滤膜包截留分子量为100Kd，得到膜下有效成分；将步骤(4)中纯化尿囊液后所得单链RNA病毒和该膜下有效成分混合、除菌过滤后，获得该生物制品。
CN201711003108.6A 2017-10-24 2017-10-24 一种抗癌作用显著的生物制剂及其制备方法 Pending CN109692187A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711003108.6A CN109692187A (zh) 2017-10-24 2017-10-24 一种抗癌作用显著的生物制剂及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711003108.6A CN109692187A (zh) 2017-10-24 2017-10-24 一种抗癌作用显著的生物制剂及其制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN109692187A true CN109692187A (zh) 2019-04-30

Family

ID=66227904

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201711003108.6A Pending CN109692187A (zh) 2017-10-24 2017-10-24 一种抗癌作用显著的生物制剂及其制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109692187A (zh)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103495166B (zh) 一种猪繁殖与呼吸综合征复合活疫苗的制备方法
CN104814985A (zh) 一种海藻多糖的应用
CN101716341B (zh) 一种人用二倍体细胞狂犬灭活疫苗及其制备方法
CN103585626B (zh) 一种鸡新城疫、法氏囊病二联复合灭活疫苗的制备方法
CN110251671A (zh) 鹅星状病毒卵黄抗体复合物及其制备方法
CN1800374A (zh) 一种重组伪狂犬病－猪繁殖与呼吸综合征基因工程毒株及应用
CN104480175A (zh) 一种酶解卵白蛋白的方法及酶解产物的应用
CN103495167B (zh) 一种鸡传染性法氏囊病复合活疫苗的制备方法
CN108676092B (zh) 一种防治新型鸭呼肠孤病毒的卵黄抗体及其制备方法
CN105349578A (zh) 一种鸡gm-csf蛋白及其制备方法和应用
CN112341539A (zh) 防治具有跨种传播能力的新型鹅星状病毒的卵黄抗体及其制备方法
CN102228685A (zh) 中国大鲵虹彩病毒细胞灭活疫苗的制备及其使用方法
CN109692187A (zh) 一种抗癌作用显著的生物制剂及其制备方法
CN102205118B (zh) 一种生物制品及其制备方法
CN109806281A (zh) 一种调节机体免疫力抗癌生物制剂
CN109793762A (zh) 一种低成本抗肿瘤生物制品的制备方法
CN102617732A (zh) 一种新型卵黄抗体及其制备方法
CN109134641A (zh) 一种鸡干扰素-α的制备方法
CN104560897A (zh) 狂犬病病毒减毒株及其选育方法和应用
CN112080478B (zh) 一种h5亚型禽流感病毒的高效增殖方法及应用
CN108969760A (zh) 一种用lmh细胞系生产禽腺病毒4型疫苗的方法及疫苗
CN102978167A (zh) 用细胞系生产鸡嗜肾型传染性支气管炎病毒与活疫苗
CN103589693B (zh) 一种表达ibdv vp2和法氏囊素三肽嵌合蛋白重组火鸡疱疹病毒
CN106636013A (zh) 安卡拉病毒毒株FAdV‑HB及其灭活疫苗的制备和应用
CN102204933B (zh) 一种抗肿瘤生物制品的制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20190430

WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication