CN109673809A - 活血调经化淤祛斑的花优素复合多肽产品及其制备方法 - Google Patents

活血调经化淤祛斑的花优素复合多肽产品及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种活血调经化淤祛斑的花优素复合多肽产品，包括三七花，桃仁、重瓣玫瑰花、丹凤牡丹花、洛神花、当归、山楂、发酵全蛋粉、黑生姜，人参发酵粉、营养酵母粉等，还公开了其制备方法，包括先将三七花、重瓣玫瑰花、丹凤牡丹花、洛神花加入果汁，浸泡，打浆，电子束照射，加入果胶酶酶解，加入乙醇，浸提，过滤，浓缩得到花膏；再将桃仁、肉桂、当归、山楂、阿胶、黑生姜分别粉碎，加入大豆多肽、低聚果糖、植物稀释汁，超声处理，冷冻，解冻，加入发酵，浸提，过滤，浓缩得发酵膏；最后将上述各物质混合制得。还公开了一种活血调经化淤祛斑的花优素复合多肽产品的制备方法与应用。本发明产品具有活血调经及化瘀祛斑的有益功效。

Description

活血调经化淤祛斑的花优素复合多肽产品及其制备方法
技术领域
本发明涉及营养功能性食品与生物发酵领域。更具体地说，本发明涉及一种活血调经化淤祛斑的花优素复合多肽产品及其制备方法。
背景技术
由于生活和工作压力，以及自身生理条件的限制，女性疾病在现代社会中变得多发，且有低龄化的趋势，女性群体容易出现月经不调，血液不畅，往往不以为然，久而久之，引起许多并发症，容易引起色素沉积，导致皮肤暗沉有黄斑，因此急需研发一款产品，可以达到活血调经，化淤祛斑的效果。
发明内容
本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。
本发明还有一个目的是提供一种活血调经化淤祛斑的花优素复合多肽产品，具有调经活血的功效，还提供了一种活血调经化淤祛斑的花优素复合多肽产品的制备方法，可以提高花优素复合多肽产品的调节便秘的功能。
为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种活血调经化淤祛斑的花优素复合多肽产品，包括以下重量份组分：三七花2.5份，桃仁1.5份、肉桂1.2份、大豆多肽0.3份、重瓣玫瑰花0.2份、丹凤牡丹花0.5份、洛神花0.3份、当归0.2份、山楂0.1份、发酵全蛋粉4份、阿胶0.1份、维生素C 0.04份、维生素E 0.01份、低聚果糖0.2份、黑生姜0.1份、人参发酵粉0.1份、营养酵母粉0.8份。
还提供了一种活血调经化淤祛斑的花优素复合多肽产品的制备方法，包括以下步骤：
步骤A、将三七花、重瓣玫瑰花、丹凤牡丹花、洛神花加入果汁，于60℃下浸泡30min，然后一起打浆，制成花浆，将花浆置于强度为15kGy的电子束照射30min，加入果胶酶，于45℃酶解2h，加入乙醇，于45℃浸提1h，过滤得滤液Ⅰ，并浓缩得到花膏；
其中，三七花、果汁、果胶酶、乙醇的质量比为2.5:20:2:5；
果汁的制备方法为：将葡萄皮、柚子果肉、水按质量比为1.5:0.8:10粉碎，过滤得滤液Ⅱ，即得果汁；
步骤B、将桃仁、肉桂、当归、山楂、阿胶、黑生姜分别粉碎至颗粒粒径小75μm，混合后，加入大豆多肽、低聚果糖、植物稀释汁，于超声频率为80KHz下超声处理40min，再于-10℃条件下冷冻1h，解冻后，加入人参发酵粉、营养酵母粉，搅拌均匀，接种酵母，酵母接种量为植物稀释汁质量的3％，置于温度为28℃，湿度为75％的条件下发酵24h，杀菌，得发酵物，向发酵物中加入乙醇一起粉碎，再于65℃下浸提2h，过滤得滤液Ⅲ，去除乙醇并浓缩得发酵膏；
其中，桃仁、植物稀释汁、乙醇的质量比为1.5:1.8:10；
植物稀释汁的制备方法为：将黄瓜皮、冬瓜籽、水按质量比为1:0.5:10粉碎，过滤得滤液Ⅳ，即得植物稀释汁；
步骤C、将花膏、发酵膏、发酵全蛋粉、维生素C、维生素E、去离子水于温度为10℃，搅拌速度为300rpm下搅拌5h，即得花优素复合多肽产品。
优选的是，步骤A中的花膏和步骤B中的发酵膏的含水量均小于30％。
优选的是，人参发酵粉的制备方法为：取鲜人参，水温20-30℃清洗，使用打浆机制成浆状，得人参浆；向人参浆中加水，加水量为人参浆40倍体积，过胶体磨，得人参液；将人参液加热至40℃，加入发酵菌，发酵菌量为人参液0.05倍质量，发酵菌为保加利亚乳酸杆菌与嗜热链球菌1:1质量比，发酵10h，分解多糖类物质，析出人参皂苷，得人参发酵原液；冷冻干燥得人参发酵粉。
优选的是，发酵全蛋粉的制备方法为：
步骤一、将新鲜禽蛋原料经自来水清洗后，再经高浓度电解式臭氧水清洗，清洗水中臭氧浓度为20mg/L，水流量300L/h，杀菌、70％食用酒精消毒蛋壳表面后晾干，加入2倍禽蛋重量的食用米醋，食用米醋的浓度为20wt.％，淹没并浸泡禽蛋3天至蛋壳全部溶解，过滤并收集酸溶液，用去离子水淋洗蛋膜，去除蛋壳不溶物及色素，再次淹没并浸泡在收集的酸溶液中；
步骤二、搅拌蛋体以释放蛋膜及蛋液，在超声波辅助下继续水解12个月至全蛋液均匀无结块，超声波作用频率为300Hz，超声时间为15min，加入1/500倍蛋体质量的脂肪酶及1/300倍蛋体质量的蛋白酶，继续酶水解3小时，得水解全蛋液，其中，脂肪酶来源于米根霉，磷脂酶为磷脂酶C，蛋白酶来源于黑曲霉和芽孢杆菌的酸性蛋白酶；
步骤三、将水解全蛋液与4wt.％红糖、10wt.％菊粉益生元混合搅匀后均质，杀菌，冷却，接种酵母、乳酸菌，菌液接种量分别为水解全蛋液体积的3％，在35℃发酵8天，得全蛋体发酵液，其中，酵母为酿酒酵母，乳酸菌为嗜酸乳杆菌和费式丙酸杆菌；
步骤四、将全蛋体发酵液过滤，在超声波辅助下加入体积质量比为10％的环糊精，超声波作用频率为300Hz，超声时间为15min，高速分散，混合均质，包埋处理，0-5℃低温冷却静置，离心脱除胆固醇类不溶物，分离液冷冻干燥，得发酵全蛋粉。
优选的是，步骤一中，食用米醋经过冷冻-解冻预处理具体为：将食用米醋置于-20℃，加入0.5倍食用米醋重量的0℃的冰水混合物溶解，搅拌，形成冰晶，再加入0.5倍食用米醋重量的0℃的冰水混合物溶解，搅拌，形成冰晶，置于-20℃，冷冻1h，捣碎，以1℃/min的速率加热至0℃，加入0℃的冰水混合物，使食用米醋的浓度达到20wt.％，冷藏1h，即得。
活血调经化淤祛斑的花优素复合多肽产品在制备活血调经的产品中的应用。
活血调经化淤祛斑的花优素复合多肽产品在制备调节便秘的产品中的应用。
活血调经化淤祛斑的花优素复合多肽产品在制备增强体力和免疫力的产品中的应用。
活血调经化淤祛斑的花优素复合多肽产品在制备美白祛斑的产品中的应用
本发明至少包括以下有益效果：
第一、将三七花、重瓣玫瑰花、丹凤牡丹花、洛神花加入果汁，于60℃下浸泡30min，然后一起打浆，制成花浆，将花浆置于强度为15kGy的电子束照射30min，加入果胶酶，于45℃酶解2h，加入乙醇，于45℃浸提1h，过滤得滤液Ⅰ，并浓缩得到的花膏，可以提高β－谷甾醇、24－亚甲基环木菠萝烷醇、苦杏仁苷的含量。
第二、将桃仁、肉桂、当归、山楂、阿胶、黑生姜分别粉碎至颗粒粒径小75μm，混合后，加入大豆多肽、低聚果糖、植物稀释汁，于超声频率为80KHz下超声处理40min，再于-10℃条件下冷冻1h，解冻后，加入人参发酵粉、营养酵母粉，搅拌均匀，接种酵母，酵母接种量为植物稀释汁质量的3％，置于温度为28℃，湿度为75％的条件下发酵24h，杀菌，得发酵物，向发酵物中加入乙醇一起粉碎，再于65℃下浸提2h，过滤得滤液Ⅲ，去除乙醇并浓缩得发酵膏，小鼠的首粒排黑便时间明显缩短，粪便粒数和重量显著增加，发酵膏的制备方法具有促排便的作用。
本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
需要说明的是，下述实施方案中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
<实施例1>
活血调经化淤祛斑的花优素复合多肽产品，包括以下重量份组分：三七花2.5份，桃仁1.5份、肉桂1.2份、大豆多肽0.3份、重瓣玫瑰花0.2份、丹凤牡丹花0.5份、洛神花0.3份、当归0.2份、山楂0.1份、发酵全蛋粉4份、阿胶0.1份、维生素C 0.04份、维生素E 0.01份、低聚果糖0.2份、黑生姜0.1份、人参发酵粉0.1份、营养酵母粉0.8份。
活血调经化淤祛斑的花优素复合多肽产品的制备方法，包括以下步骤：
步骤A、将三七花、重瓣玫瑰花、丹凤牡丹花、洛神花加入果汁，于60℃下浸泡30min，然后一起打浆，制成花浆，将花浆置于强度为15kGy的电子束照射30min，加入果胶酶，于45℃酶解2h，加入乙醇，于45℃浸提1h，过滤得滤液Ⅰ，并浓缩得到花膏；
其中，三七花、果汁、果胶酶、乙醇的质量比为2.5:20:2:5；
果汁的制备方法为：将葡萄皮、柚子果肉、水按质量比为1.5:0.8:10粉碎，过滤得滤液Ⅱ，即得果汁；
步骤B、将桃仁、肉桂、当归、山楂、阿胶、黑生姜分别粉碎至颗粒粒径小75μm，混合后，加入大豆多肽、低聚果糖、植物稀释汁，于超声频率为80KHz下超声处理40min，再于-10℃条件下冷冻1h，解冻后，加入人参发酵粉、营养酵母粉，搅拌均匀，接种酵母，酵母接种量为植物稀释汁质量的3％，置于温度为28℃，湿度为75％的条件下发酵24h，杀菌，得发酵物，向发酵物中加入乙醇一起粉碎，再于65℃下浸提2h，过滤得滤液Ⅲ，去除乙醇并浓缩得发酵膏；
其中，桃仁、植物稀释汁、乙醇的质量比为1.5:1.8:10；
植物稀释汁的制备方法为：将黄瓜皮、冬瓜籽、水按质量比为1:0.5:10粉碎，过滤得滤液Ⅳ，即得植物稀释汁；
步骤C、将花膏、发酵膏、发酵全蛋粉、维生素C、维生素E、去离子水于温度为10℃，搅拌速度为300rpm下搅拌5h，即得花优素复合多肽产品。
步骤A中的花膏和步骤B中的发酵膏的含水量均小于30％。
人参发酵粉的制备方法为：取鲜人参，水温20-30℃清洗，使用打浆机制成浆状，得人参浆；向人参浆中加水，加水量为人参浆40倍体积，过胶体磨，得人参液；将人参液加热至40℃，加入发酵菌，发酵菌量为人参液0.05倍质量，发酵菌为保加利亚乳酸杆菌与嗜热链球菌1:1质量比，发酵10h，分解多糖类物质，析出人参皂苷，得人参发酵原液；冷冻干燥得人参发酵粉。
<实施例2>
花优素复合多肽产品的制备方法同实施例1，其中，发酵全蛋粉的制备方法不同，具体为：
步骤一、将新鲜禽蛋原料经自来水清洗后，再经高浓度电解式臭氧水清洗，清洗水中臭氧浓度为20mg/L，水流量300L/h，杀菌、70％食用酒精消毒蛋壳表面后晾干，加入2倍禽蛋重量的食用米醋，食用米醋的浓度为20wt.％，淹没并浸泡禽蛋3天至蛋壳全部溶解，过滤并收集酸溶液，用去离子水淋洗蛋膜，去除蛋壳不溶物及色素，再次淹没并浸泡在收集的酸溶液中；
步骤二、搅拌蛋体以释放蛋膜及蛋液，在超声波辅助下继续水解12个月至全蛋液均匀无结块，超声波作用频率为300Hz，超声时间为15min，加入1/500倍蛋体质量的脂肪酶及1/300倍蛋体质量的蛋白酶，继续酶水解3小时，得水解全蛋液，其中，脂肪酶来源于米根霉，磷脂酶为磷脂酶C，蛋白酶来源于黑曲霉和芽孢杆菌的酸性蛋白酶；
步骤三、将水解全蛋液与4wt.％红糖、10wt.％菊粉益生元混合搅匀后均质，杀菌，冷却，接种酵母、乳酸菌，菌液接种量分别为水解全蛋液体积的3％，在35℃发酵8天，得全蛋体发酵液，其中，酵母为酿酒酵母，乳酸菌为嗜酸乳杆菌和费式丙酸杆菌；
步骤四、将全蛋体发酵液过滤，在超声波辅助下加入体积质量比为10％的环糊精，超声波作用频率为300Hz，超声时间为15min，高速分散，混合均质，包埋处理，0-5℃低温冷却静置，离心脱除胆固醇类不溶物，分离液冷冻干燥，得发酵全蛋粉。
<实施例3>
花优素复合多肽产品的制备方法同实施例2，其中，步骤一中，食用米醋经过冷冻-解冻预处理具体为：将食用米醋置于-20℃，加入0.5倍食用米醋重量的0℃的冰水混合物溶解，搅拌，形成冰晶，再加入0.5倍食用米醋重量的0℃的冰水混合物溶解，搅拌，形成冰晶，置于-20℃，冷冻1h，捣碎，以1℃/min的速率加热至0℃，加入0℃的冰水混合物，使食用米醋的浓度达到20wt.％，冷藏1h，即得。
<对比例1>
花优素复合多肽产品的制备方法同实施例1，其中，花膏的制备方法不同，具体为：将三七花、重瓣玫瑰花、丹凤牡丹花、洛神花加入水，于60℃下浸泡30min，然后一起打浆，制成花浆，加入由乙醇，于45℃浸提1h，过滤得滤液，并浓缩得到花膏；
其中，三七花、水、乙醇的质量比为2.5:20:5。
<对比例2>
花优素复合多肽产品的制备方法同实施例1，其中，发酵膏的制备方法不同，具体为：将桃仁、肉桂、当归、山楂、阿胶、黑生姜分别粉碎至颗粒粒径小75μm，混合后，加入大豆多肽、低聚果糖、水、人参发酵粉、营养酵母粉，搅拌均匀，接种酵母，酵母接种量为植物稀释汁质量的3％，置于温度为28℃，湿度为75％的条件下发酵24h，杀菌，加入植物稀释汁，混合得发酵物，向发酵物中加入乙醇一起粉碎，再于65℃下浸提2h，过滤得滤液，去除乙醇并浓缩得发酵膏；
其中，桃仁、水、乙醇、植物稀释汁的质量比为1.5:1.8:10:1.8。
<花优素复合多肽产品功效评价实验>
1、调经活血功效实验
选取20名具有月经紊乱症状的女性，随机分为实施例1组和对比例1组，实施例1组每天服用5.5g实施例1制备的优素复合多肽产品，对比例1组每天服用5.5g对比例1制备的花优素复合多肽产品，连续服用6个月，记录月经周期，检测血常规和激素水平，结果如表1、2所示。
表1
表2
实验结果分析：服用实施例1制备的优素复合多肽产品对女性的月经周期在6个月后都恢复正常。Hb、RBC、T、E2、Cr含量在调治后有明显的改善，具有调经活血的作用。
与对比例1组比较，实施例1组对Hb、RBC、T、E2、Cr改善更为显著。
2、润肠通便，调节便秘实验
选用18-22g的雄性昆明小鼠50只，饲养一周后，随机分成空白对照组、模型组、实施例1组、实施例2组、对比例2组，每组10只。
空白对照组、模型组饲喂普通饲料，实施例1组饲喂含有实施例1制备的花优素复合多肽产品的普通饲料，剂量为100mg/(kg·d)，实施例2组饲喂含有实施例2制备的花优素复合多肽产品的普通饲料，剂量为100mg/(kg·d)，对比例2组饲喂含有对比例2制备的花优素复合多肽产品的普通饲料，剂量分别为100mg/(kg·d)，连续饲养15d，观察小鼠的小肠推进试验和排便试验。
2.1、小肠推进试验
第15d饲喂结束后，禁食16h，各组取5只小鼠，模型组、实施例1组、实施例2组、对比例2组灌胃5mg/(kg·d)复方地酚诺醋溶液20mL/(kg·d)，空白对照组给予等量蒸馏水，30min后，实施例1组、实施例2组、对比例2组分别一次给予含相应花优素复合多肽产品的墨汁10mL/kg，按质量比1:1混合，空白对照组和模型组给予等量墨汁。25min后颈椎脱臼处死动物，立即打开腹腔分离肠系膜，剪取上端自幽门、下端至回盲部的肠管，不加牵引拉成直线，进行测量。肠管长度为“小肠总长度”，从幽门至墨汁前沿为“墨汁推进长度”。结果如3所示，按下列公式计算墨汁推进率。
墨汁推进率(P)＝墨汁推进长度/肠管总长度×100％
表3
实验结果分析：与空白对照比较，模型组的墨汁推进距离和墨汁推进率均显著低于空白对照组，说明造模成功；
与空白对照比较，实施例1组、实施例2组的小鼠的墨汁推进率均高于空白对照组，说明发具有促进小肠运动的作用；
与对比例2组比较，实施例1组的小鼠的墨汁推进率显著增大，说明发酵膏的制备方法，具有提升小肠运动的作用。
2.2、排便试验
第15d饲喂结束后，禁食16h，各组取5只小鼠，模型组、实施例1组、实施例2组、对比例2组灌胃10mg/(kg·d)复方地酚诺醋溶液20mL/kg，空白对照组给予等量蒸馏水，30min后，实施例1组、实施例2组、对比例2组分别一次给予含相应花优素复合多肽产品的墨汁10mL/kg，按质量比1:1混合，空白对照组和模型组给予等量墨汁，同时开始计时。每只小鼠均单独饲养，并供给饲料和饮水，观察记录每只动物首次排黑便所需时间、6h内排黑便粒数及重量。结果如表4所示。
表4
实验结果分析：与空白对照组比较，模型对照组小鼠排首粒黑便时间显著长于空白对照组，粪便粒数和粪便重旺显著低于空白对照组，说明便秘模型成功。
实施例1组、实施例2组与模型对照组相比，首粒排黑便时间明显缩短，粪便粒数和重量显著增加，说明具有促排便的作用。
与对比例2组相比，实施例1组的首粒排黑便时间明显缩短，粪便粒数和重量显著增加，说明发酵膏的制备方法具有促排便的作用。
3、增强体力和免疫力实验
3.1小鼠实验
选用18-22g的雄性昆明小鼠30只，饲养一周后，随机分成空白对照组、实施例1组、实施例2组，每组10只。
空白对照组每日以100mg/(kg·d)的剂量灌胃蒸馏水，实施例1组灌胃实施例1制备的花优素复合多肽产品，剂量为100mg/(kg·d)，实施例2组灌胃实施例2制备的花优素复合多肽产品，剂量为100mg/(kg·d)，每天1次，连续30天。
将上述各组小鼠进行负重游泳实验，检测游泳时间，检测肝糖原，检测淋巴细胞A值，检测血清溶血素抗体均值，检测红细胞免疫功能，检测结果如表5所示；
检测淋巴细胞A值的方法：刀豆蛋白A(ConA)诱导的脾淋巴细胞转化实验，即MTT法。在无菌条件下取脾脏，用完全培养基制备脾细胞悬液，取2mL分别接种于细胞培养板上，加入浓度为100mg/L的ConA溶液50μL，另作不加入ConA为对照，均置于37℃的CO2培养箱中培养，直至68h后，加入100μLMTT溶液(50mg/L)，继续培养4h后，加入酸性异丙醇终止反应，用E960酶标仪测定A值。
检测血清溶血素抗体均值的方法：
采用摘除眼球法取血，离心分离血清，用生理盐水将血清对倍稀释。分别置于90孔U型血凝板内，进行孵育和观察血球凝集反应结果。
红细胞免疫功能的方法：
小鼠眼底静脉丛采血，用日本CC-180型血球自动计数仪测量白细胞(WBC)的含量。取小鼠眼底静脉丛血1滴于2mL生理盐水中，洗涤离心3次，转速为1000转/5min，并用生理盐水配制成1.25×1010/L的红细胞悬液，用注射器取红细胞悬液和C3b致敏酵母菌悬液(1×1011/L)，或未致敏酵母菌悬液(1×1011/L)各5滴，于试管内充分混匀，37℃水浴孵育30min，加10滴生理盐水，稀释混匀，再加0.25％的戍二醛2滴固定。混匀，涂片待干后瑞氏染色，湿片观察，在高倍镜下计数200个红细胞，结合2个以上酵母菌的花环细胞数，算出RBC-C3b受体花环率，即致敏酵母菌悬液，RBC-IC花环率，即未致敏酵母菌悬液。
表5
实验结果分析：
实施例1组、实施例2组与空白对照组比较，小鼠的负重游泳时间均有明显延长。小鼠肝糖原含量的检测结果，实施例1组、实施例2组与空白对照组比较差异显著。小鼠脾淋巴细胞增殖反应，结果显示各剂量组无论加与不加ConA的情况，实施例1组、实施例2组的淋巴细胞A值均明显高于空白对照组；小鼠血清溶血素含量测定结果显示，实施例1组、实施例2组的抗体积数均高于空白对照组，差异显著。
糖原是运动时能量的重要来源，提高糖原的储备量有助于增强耐力和运动能力，有利于抵抗疲劳的产生；提高机体免疫水平。
实施例1组、实施例2组与空白对照组比较，WBC和RBC-C3b受体花环率显著提升、RBC-IC花环率显著下降，说明实施例1组、实施例2组可以抵抗疲劳的产生和提高小鼠的细胞免疫以及体液免疫功能。
3.2、小鼠实验
选用18-22g的雄性昆明小鼠40只，饲养一周后，随机分成空白对照组、模型组、实施例1组、实施例2组，每组10只。
空白对照组每日灌胃100mg/kg的蒸馏水，模型组、实施例1组、实施例2组每日皮下注射75mg/(kg·d)环磷酰胺(CY)生理盐水；
实施例1组灌胃实施例1制备的花优素复合多肽产品，剂量为100mg/(kg·d)，实施例2组灌胃实施例2制备的花优素复合多肽产品，剂量为100mg/(kg·d)，各组均每天灌胃1次。
3.21、对环磷酰胺(CY)所致免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响
连续处理7天，在第8天每组小鼠腹腔注射5％鸡红细胞生理盐水混悬液，6h后处死小鼠，消毒腹部，注入汉氏液2.5mL，轻揉小鼠腹部，取腹腔液置于玻片上，玻片下铺湿纱布，37℃培养箱中孵育30min，生理盐水冲去浮着的细胞，瑞氏染液染色、冲洗、凉干，显微镜下观察，计算吞噬百分率和吞噬指数，结果见表6。
3.22、对环磷酰胺CY所致免疫抑制小鼠溶血素形成的影响
在灌胃的第1天，每组小鼠腹腔注射5％的鸡红细胞生理盐水混悬液0.2mL免疫，第8天眼眶取血，离心分离血清，用生理盐水按体积比1:100稀释后，取1mL，与5％鸡红细胞混悬液0.5mL和10％补体0.5mL混匀，37℃温育30min，冰水中止反应，取上清液于72-1分光光度计540nm处比色，以不加补体的空白管作对照，结果见表6。
3.23、对环磷酰胺CY所致免疫抑制小鼠溶血空斑形成的影响
在灌胃的第1天每组小鼠腹腔注射5％的鸡红细胞生理盐水混悬液0.2mL免疫，第8天灌胃后2h，取脾脏，将3个小鼠脾脏放在一起采用匀浆器匀浆，调节脾细胞浓度为5×106个/mL，取脾细胞混悬液0.5mL加0.2％鸡红细胞混悬液和1:10的豚鼠血清各0.5mL，混匀，37℃温育1h，离心，取上清液于72-1分光光度计，比色，以不加补体的空白管调零点，结果见表6。
3.24、对环磷酰胺CY所致免疫抑制小鼠外周血中T细胞百分比和淋巴细胞转化的影响
灌胃的第1至3天，每组小鼠肌注PHA10mg/kg，在第8天灌胃2h后，小鼠剪尾取血，推片，自然风干燥后，浸入预热30min的孵育液中孵育3h，水冲去沉渣，滤低吸干水珠，加入1％孔雀绿染色，冲洗凉干，油镜计算T淋巴细胞百分比。小鼠取血涂片，瑞氏染色，油镜计算淋巴细胞转化率，结果见表6。
表6
实验结果分析：
模型组吞噬百分率和吞噬指数均明显降低，实施例1组、实施例2组与模型组比较，均显著提高了免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数；
模型组溶血素和溶血空斑形成OD值显著低于空白对照组，实施例1组、实施例2组与模型组比较，可以显著促进溶血素和溶血空斑形成；
模型组外周T细胞百分比和淋细胞转化率均显著低于空白对照组，实施例1组、实施例2组与模型组比较，均显著提高免疫抑制小鼠外周T细胞百分比和淋细胞转化率；
上述结果表明，实施例1和实施例2制备的花优素复合多肽产品对多环节免疫功能有显著的促进作用，可以促进溶血素和溶血空斑形成，及促进淋巴细胞的转化和提高外周T细胞百分比，显著对抗环磷酰胺所致的免疫功能低下。
4、美白祛斑功效实验
选取100名具有黄褐斑的人员，随机分为4组，每组25人，其中3组分别为实施例1组、实施例2组、对比例2组，实施例1组、实施例2组、对比例2组分别每人每次服用100g/50kg的实施例1、实施例2、对比例2制备的花优素复合多肽产品，每天两次，服用60d，剩余1组为空白对照组，不服用任何蛋粉类食品，检测60天后，人体静脉血的超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)，结果如表7所示。
评价60天后的疗效，疗效评判标准为：肉眼观察，黄褐斑面积消退90％以上，颜色基本消失，为基本治愈；肉眼观察，黄褐斑面积消退60％以上，颜色明显变淡，为显效；肉眼观察，黄褐斑面积消退30％以上，颜色变淡，为好转；其余为无效，评价结果如表8所示。
表7
表8
实验结果分析：与空白对照组比较，实施例1组和实施例2组的SOD的活力显著提升、MOD含量显著下降，说明实施例1和实施例2制备的花优素复合多肽产品可以提高SOD的活力，防止体内自由基堆积；
与对比例2组比较，实施例1组和实施例2组显著提高了黄褐斑的基本治愈率和有效率。
<食用有机酸的预处理功效评价试验>
1、食用有机酸的预处理对蛋膜角蛋白的提取的影响
将禽蛋蛋壳晾干，加入2倍禽蛋重量的食用米醋，食用米醋的浓度为20wt.％，淹没并浸泡禽蛋3天至蛋壳全部溶解，过滤并收集酸溶液，用水淋洗蛋膜，去除蛋壳不溶物及色素，去除蛋黄和蛋清，留下蛋膜，清洗，干燥，称重，得蛋膜初始质量，再次淹没并浸泡在收集的酸溶液中。
以蛋膜刚好完全溶解，没有肉眼明显的碎片为终点，计算蛋膜溶解时间，将溶液在室温下下浓缩至100mL，调节pH至等电点使角蛋白沉淀分离，静置30min，离心分离，将不溶物复提1次，将下层角蛋白转入直径25mm、截留分子量8000-14 000D、再生纤维素材质透析袋透析3d，每4h换1次水。透析完成后，将经纯化的角蛋白在真空压力15Pa、温度-45℃条件下真空冷冻干燥，得到角蛋白，称重，得角蛋白质量，计算角蛋白得率＝角蛋白质量/蛋膜初始质量×100％。
<对比例3>
食用米醋为室温下的食用米醋。
<对比例4>
食用米醋为经过冷冻-解冻预处理的食用米醋，具体为：将食用米醋置于-20℃，加入0.5倍食用米醋重量的0℃的冰水混合物溶解，搅拌，形成冰晶，再加入0.5倍食用米醋重量的0℃的冰水混合物溶解，搅拌，形成冰晶，置于-20℃，冷冻1h，捣碎，以1℃/min的速率加热至0℃，加入0℃的冰水混合物，使食用米醋的浓度达到20wt.％，冷藏1h，即得。
表9
试验结果表明，对比例4的蛋膜溶解时间显著少于对比例3，而角蛋白得率显著高于对比例3，这是因为食用米醋为经过冷冻-解冻预处理，能够以较快的速度将蛋膜溶胀，破坏蛋膜表层的氢键和盐式键，将包埋在蛋膜中的角蛋白释放。
2、食用有机酸的预处理对蛋白的氨基酸提取的影响
将禽蛋蛋壳晾干，加入2倍禽蛋重量的食用米醋，食用米醋的浓度为20wt.％，淹没并浸泡禽蛋3天至蛋壳全部溶解，过滤并收集酸溶液，用水淋洗蛋膜，去除蛋壳不溶物及色素，再次淹没并浸泡在收集的酸溶液中；
搅拌蛋体以释放蛋膜及蛋液，在超声波辅助下继续水解12个月至全蛋液均匀无结块，超声波作用频率为300Hz，超声时间为15min，加入1/300倍蛋体质量的蛋白酶，继续酶水解3小时，得水解全蛋液，其中，脂肪酶来源于米根霉，磷脂酶为磷脂酶C，蛋白酶来源于黑曲霉和芽孢杆菌的酸性蛋白酶；
将水解全蛋液与4wt.％红糖、10wt.％菊粉益生元混合搅匀后均质，杀菌，冷却，接种酵母、乳酸菌，接种量分别为水解全蛋液体积的3％，在35℃发酵8天，得全蛋体发酵液，其中，酵母为酿酒酵母，乳酸菌为嗜酸乳杆菌和费式丙酸杆菌，将全蛋体发酵液过滤、均质。采用GB/T 5009.124-2003法测定氨基酸含量mg/100mL。
<对比例5>
食用米醋为室温下的食用米醋。
<对比例6>
食用米醋为经过冷冻-解冻预处理的食用米醋，具体为：将食用米醋置于-20℃，加入0.5倍食用米醋重量的0℃的冰水混合物溶解，搅拌，形成冰晶，再加入0.5倍食用米醋重量的0℃的冰水混合物溶解，搅拌，形成冰晶，置于-20℃，冷冻1h，捣碎，以1℃/min的速率加热至0℃，加入0℃的冰水混合物，使食用米醋的浓度达到20wt.％，冷藏1h，即得。
表10
试验结果表明，对比例6检测出18种氨基酸，对比例5检测出14种氨基酸，这是因为食用米醋经过冷冻-解冻预处理，能够蛋膜中的角蛋白释放，增强生物活性和生物利用度。
<制备方法评价试验>
1、检测实施例1和对比例1的方法中制备的发酵膏中的β－谷甾醇、24－亚甲基环木菠萝烷醇、苦杏仁苷的含量，如表11所示：
表11
由上表可知，采用实施例1的方法制备发酵膏，可以显著提高β－谷甾醇、24－亚甲基环木菠萝烷醇、苦杏仁苷的含量，说明采用实施例1的制备方法有助于提高发酵膏中β－谷甾醇、24－亚甲基环木菠萝烷醇、苦杏仁苷的含量。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的实施例。

Claims (10)

1.活血调经化淤祛斑的花优素复合多肽产品，其特征在于，包括以下重量份组分：三七花2.5份，桃仁1.5份、肉桂1.2份、大豆多肽0.3份、重瓣玫瑰花0.2份、丹凤牡丹花0.5份、洛神花0.3份、当归0.2份、山楂0.1份、发酵全蛋粉4份、阿胶0.1份、维生素C 0.04份、维生素E0.01份、低聚果糖0.2份、黑生姜0.1份、人参发酵粉0.1份、营养酵母粉0.8份。
2.如权利要求1所述的活血调经化淤祛斑的花优素复合多肽产品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤A、将三七花、重瓣玫瑰花、丹凤牡丹花、洛神花加入果汁，于60℃下浸泡30min，然后一起打浆，制成花浆，将花浆置于强度为15kGy的电子束照射30min，加入果胶酶，于45℃酶解2h，加入乙醇，于45℃浸提1h，过滤得滤液Ⅰ，并浓缩得到花膏；
其中，三七花、果汁、果胶酶、乙醇的质量比为2.5:20:2:5；
果汁的制备方法为：将葡萄皮、柚子果肉、水按质量比为1.5:0.8:10粉碎，过滤得滤液Ⅱ，即得果汁；
步骤B、将桃仁、肉桂、当归、山楂、阿胶、黑生姜分别粉碎至颗粒粒径小75μm，混合后，加入大豆多肽、低聚果糖、植物稀释汁，于超声频率为80KHz下超声处理40min，再于-10℃条件下冷冻1h，解冻后，加入人参发酵粉、营养酵母粉，搅拌均匀，接种酵母，酵母接种量为植物稀释汁质量的3％，置于温度为28℃，湿度为75％的条件下发酵24h，杀菌，得发酵物，向发酵物中加入乙醇一起粉碎，再于65℃下浸提2h，过滤得滤液Ⅲ，去除乙醇并浓缩得发酵膏；
其中，桃仁、植物稀释汁、乙醇的质量比为1.5:1.8:10；
植物稀释汁的制备方法为：将黄瓜皮、冬瓜籽、水按质量比为1:0.5:10粉碎，过滤得滤液Ⅳ，即得植物稀释汁；
步骤C、将花膏、发酵膏、发酵全蛋粉、维生素C、维生素E、去离子水于温度为10℃，搅拌速度为300rpm下搅拌5h，即得花优素复合多肽产品。
3.如权利要求2所述的活血调经化淤祛斑的花优素复合多肽产品的制备方法，其特征在于，步骤A中的花膏和步骤B中的发酵膏的含水量均小于30％。
4.如权利要求2所述的活血调经化淤祛斑的花优素复合多肽产品的制备方法，其特征在于，人参发酵粉的制备方法为：取鲜人参，水温20-30℃清洗，使用打浆机制成浆状，得人参浆；向人参浆中加水，加水量为人参浆40倍体积，过胶体磨，得人参液；将人参液加热至40℃，加入发酵菌，发酵菌量为人参液0.05倍质量，发酵菌为保加利亚乳酸杆菌与嗜热链球菌1:1质量比，发酵10h，分解多糖类物质，析出人参皂苷，得人参发酵原液；冷冻干燥得人参发酵粉。
5.如权利要求1所述的活血调经化淤祛斑的花优素复合多肽产品的制备方法，其特征在于，发酵全蛋粉的制备方法为：
步骤一、将新鲜禽蛋原料经自来水清洗后，再经高浓度电解式臭氧水清洗，清洗水中臭氧浓度为20mg/L，水流量300L/h，杀菌、70％食用酒精消毒蛋壳表面后晾干，加入2倍禽蛋重量的食用米醋，食用米醋的浓度为20wt.％，淹没并浸泡禽蛋3天至蛋壳全部溶解，过滤并收集酸溶液，用去离子水淋洗蛋膜，去除蛋壳不溶物及色素，再次淹没并浸泡在收集的酸溶液中；
步骤二、搅拌蛋体以释放蛋膜及蛋液，在超声波辅助下继续水解12个月至全蛋液均匀无结块，超声波作用频率为300Hz，超声时间为15min，加入1/500倍蛋体质量的脂肪酶及1/300倍蛋体质量的蛋白酶，继续酶水解3小时，得水解全蛋液，其中，脂肪酶来源于米根霉，磷脂酶为磷脂酶C，蛋白酶来源于黑曲霉和芽孢杆菌的酸性蛋白酶；
步骤三、将水解全蛋液与4wt.％红糖、10wt.％菊粉益生元混合搅匀后均质，杀菌，冷却，接种酵母、乳酸菌，菌液接种量分别为水解全蛋液体积的3％，在35℃发酵8天，得全蛋体发酵液，其中，酵母为酿酒酵母，乳酸菌为嗜酸乳杆菌和费式丙酸杆菌；
步骤四、将全蛋体发酵液过滤，在超声波辅助下加入体积质量比为10％的环糊精，超声波作用频率为300Hz，超声时间为15min，高速分散，混合均质，包埋处理，0-5℃低温冷却静置，离心脱除胆固醇类不溶物，分离液冷冻干燥，得发酵全蛋粉。
6.如权利要求5所述的活血调经化淤祛斑的花优素复合多肽产品的制备方法，其特征在于，步骤一中，食用米醋经过冷冻-解冻预处理具体为：将食用米醋置于-20℃，加入0.5倍食用米醋重量的0℃的冰水混合物溶解，搅拌，形成冰晶，再加入0.5倍食用米醋重量的0℃的冰水混合物溶解，搅拌，形成冰晶，置于-20℃，冷冻1h，捣碎，以1℃/min的速率加热至0℃，加入0℃的冰水混合物，使食用米醋的浓度达到20wt.％，冷藏1h，即得。
7.如权利要求2-6任一项所述的活血调经化淤祛斑的花优素复合多肽产品在制备活血调经的产品中的应用。
8.如权利要求2-6任一项所述的活血调经化淤祛斑的花优素复合多肽产品在制备调节便秘的产品中的应用。
9.如权利要求2-6任一项所述的活血调经化淤祛斑的花优素复合多肽产品在制备增强体力和免疫力的产品中的应用。
10.如权利要求2-6任一项所述的活血调经化淤祛斑的花优素复合多肽产品在制备美白祛斑的产品中的应用。
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