CN109662983A - 中亚苦蒿提取物在制备抗肝癌药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明为中亚苦蒿提取物在制备抗肝癌药物中的应用。本发明所述的中亚苦蒿提取物在制备抗肝癌药物中的应用，中亚苦蒿醇提物及石油醚、乙酸乙酯萃取物通过活性氧产生诱导内质网应激及线粒体依赖性途径导致肝癌细胞的凋亡，抑制肝癌细胞生长；对体内的肿瘤生长抑制率中亚苦蒿醇提物达到60％以上，石油醚及乙酸乙酯萃取物对肿瘤生长的抑制率达到80％以上。

Description

中亚苦蒿提取物在制备抗肝癌药物中的应用

技术领域

本发明属于中亚苦蒿的应用，具体涉及中亚苦蒿提取物在制备抗肝癌药物中的应用。

背景技术

2018年全球癌症统计数据显示，肝癌为全球第六大常见癌症，也是全球第四大癌症死亡原因，肝癌的死亡率占癌症总死亡人数的8.2％。在中国，肝癌是第三大癌症相关死亡因素，据统计，中国的新增肝癌病例占到全世界肝癌新增病例的50％。超过90％的肝癌患者为肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)，目前肝切除是治疗肝细胞癌的主要方式，但只有不到30％的患者满足肝切除治疗标准，这是由于被确诊的肝癌患者基本都是晚期患者，总体5年生存率在35-50％。目前针对晚期肝癌的治疗方法有限，索拉菲尼(Sorafenib)为美国FDA批准用于治疗晚期肝癌的一线药物，但是索拉菲尼仅能延长病人3个月的生存期，而且反应率不足4％。近期FDA批准的癌症免疫疗法Keytruda(Pembrolizumab)用于治疗已经接受过索拉菲尼治疗的晚期肝细胞癌患者，但患者的客观缓解了也不足20％。因此，迫切需要开发新的药物来延长肝癌病人的无进展生存期和总生存期。

中草药用来治疗包括癌症在内的各种疾病已经有数千年的历史了，具有抗肿瘤活性的中草药可以为开发抗癌药物提供潜在的候选药物。中亚苦蒿是新疆特色药材，具有多种生物活性包括保肝、抗氧化、抗疟疾、细胞保护、抗炎症、抗肿瘤和保护神经等，已报道的其活性成分有挥发油类、内脂类化合物、二萜类物质、木脂素类化合物等。

本发明以分布在新疆的中亚苦蒿为实验材料，制备中亚苦蒿醇提物(AAEE)、石油醚萃取物(AAEE-Pe)及乙酸乙酯萃取物(AAEE-Ea)，通过体外人源(BEL-7404)及鼠源(H22)肝癌细胞模型检测AAEE、AAEE-Pe及AAEE-Ea对肝癌细胞生长的抑制作用，通过H22小鼠肿瘤模型检测AAEE、AAEE-Pe及AAEE-Ea在体内对肿瘤生长的抑制作用，为新型抗肝癌药物的研发奠定基础。

发明内容

本发明的目的在于提供中亚苦蒿提取物的新用途，即在制备抗肝癌药物的应用，中亚苦蒿提取物可以在体外能够抑制人源及鼠源肝癌细胞的生长，体内能够抑制肝癌动物模型肿瘤的生长。

为了实现上述目的，所采用的技术方案为：

中亚苦蒿提取物在制备抗肝癌药物中的应用。

进一步的，所述的中亚苦蒿提取物的活性成分为黄酮提取物和萜类提取物。

进一步的，所述的中亚苦蒿提取物为醇提物、石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物。

再进一步的，所述的中亚苦蒿醇提物中黄酮含量不低于16wt％，萜类含量不低于22wt％；

所述的中亚苦蒿石油醚萃取物中黄酮含量不低于10wt％，萜类含量不低于31wt％，

所述的中亚苦蒿乙酸乙酯萃取物中黄酮含量不低于24wt％，萜类含量不低于29wt％。

再进一步的，所述的中亚苦蒿醇提物中黄酮含量为16.8wt％，萜类含量为22.57wt％；

所述的中亚苦蒿石油醚萃取物中黄酮含量为10.26wt％，萜类含量为31.59wt％，

所述的中亚苦蒿乙酸乙酯萃取物中黄酮含量为24.97wt％，萜类含量为29.89wt％。

进一步的，所述的中亚苦蒿提取物在体外抑制肝癌细胞生长的应用。

进一步的，所述的中亚苦蒿提取物在体内抑制肝癌动物模型肿瘤生长的应用。

再进一步的，所述的中亚苦蒿醇提物的制备方法包括以下步骤：

(1)取中亚苦蒿地上部分，粉碎，与水按照1g：10ml的质量体积比混合，在4℃过夜浸提，离心，取沉淀物；

(2)将步骤(1)得到的沉淀物，与水按照1g：10ml的质量体积比混合，在60℃水浴回流提取2h，离心，取沉淀物；

(3)将步骤(2)得到的沉淀物，用85％乙醇回流提取3次；用乙醇回流提取的步骤为：将步骤(2)得到的沉淀物，与85％乙醇按照1g：10ml的质量体积比混合，在60℃水浴回流提取2h；

(4)将步骤(3)第3次回流提取后的溶液抽滤，取上清液，过滤，旋蒸浓缩至无乙醇味，得到浸膏；再将浸膏真空冷冻干燥，得中亚苦蒿醇提物。

再进一步的，所述的中亚苦蒿石油醚萃取物的制备方法包括以下步骤：

将上述制备的浸膏完全溶解于水中，得浸膏水溶液；

将浸膏水溶液和石油醚按照1：1的体积比混合进行萃取，萃取8次，每次取上层溶液；

合并上层溶液，旋蒸浓缩后真空冷冻干燥，得中亚苦蒿石油醚萃取物。

再进一步的，所述的中亚苦蒿乙酸乙酯萃取物的制备方法包括以下步骤：

将上述萃取8次后的下层溶液，与乙酸乙酯照1：1的体积比混合进行萃取，萃取8次，每次取上层清液；

合并上层清液，旋蒸浓缩后真空冷冻干燥，得中亚苦蒿乙酸乙酯萃取物。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

本发明所述的中亚苦蒿提取物在制备抗肝癌药物中的应用，中亚苦蒿醇提物及石油醚、乙酸乙酯萃取物抑制肝癌细胞生长、抑制肝癌小鼠模型肿瘤生长的应用。中亚苦蒿醇提物及石油醚、乙酸乙酯萃取物体外通过诱导肝癌细胞凋亡及细胞周期阻滞抑制肝癌细胞生长，对体内的肿瘤生长抑制率中亚苦蒿醇提物达到60％以上，石油醚及乙酸乙酯萃取物对肿瘤生长的抑制率达到80％以上；体内注射给H22肝癌小鼠抑制了肿瘤生长，证实中亚苦蒿提取物可作为理想的抗肝癌候选药物。

附图说明

图1为AAEE体外对BEL-7404和H22细胞生长的抑制作用；

图2为AAEE、AAEE-Pe、AAEE-Ea诱导BEL7404和H22细胞凋亡结果；

图3为AAEE、AAEE-Pe、AAEE-Ea诱导BEL7404和H22细胞染色体凝聚和细胞周期阻滞结果；

图4为AAEE、AAEE-Pe、AAEE-Ea诱导BEL7404和H22细胞线粒体膜电位(ΔψM)降低和凋亡信号通路激活的结果；

图5为AAEE、AAEE-Pe、AAEE-Ea诱导活性氧(ROS)产生和内质网应激的结果；

图6为AAEE、AAEE-Pe、AAEE-Ea对体内肿瘤生长的抑制作用。通过皮下注射H22细胞诱导昆明白小鼠肿瘤模型。

具体实施方式

为了进一步阐述本发明中亚苦蒿提取物在制备抗肝癌药物中的应用，达到预期发明目的，以下结合较佳实施例，对依据本发明提出的中亚苦蒿提取物在制备抗肝癌药物中的应用，其具体实施方式、结构、特征及其功效，详细说明如后。在下述说明中，不同的“一实施例”或“实施例”指的不一定是同一实施例。此外，一或多个实施例中的特定特征、结构或特点可由任何合适形式组合。

在详细阐述本发明中亚苦蒿提取物在制备抗肝癌药物中的应用之前，有必要对本发明中提及的原料和方法等做进一步说明，以达到更好的效果。

实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件进行。实施例中所用原料或设备未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

本发明的中亚苦蒿提取物，在制备成药物制剂时可加入药物可接受的载体，可接受的载体选自以下载体的一种或几种：防腐剂、表面活性剂、填充剂、润湿剂、分散剂、矫味剂等，常用的载体如：水、甘露糖醇、右旋糖苷、山梨醇、甘露醇、木糖醇、氯化钠、纤维素及纤维素衍生物、亚硫酸钠、藻酸盐、明胶、甘油、吐温80、琼脂、碳酸钙、碳酸氢钙、聚乙二醇、β-环糊精、淀粉、薄荷香精、尼泊金乙酯、苯甲酸钠、山梨酸等。

本发明的中亚苦蒿提取物的药物制剂，是通过将中亚苦蒿原料经过提取或其他方式加工，制成药物活性物质，随后，以该活性物质为原料，需要时加入药物可接受的载体，按照制剂学的常规技术制成药物制剂。

本发明实施例中说明书附图的详细说明为：

图1为AAEE体外对BEL-7404和H22细胞生长的抑制作用，其中A为AAEE处理24h后的BEL-7404和H22细胞的形态学变化，上图和下图放大倍数分别为100倍和200倍；B为AAEE对BEL-7404和H22细胞活性的影响，AAEE处理24、48和72h后，MTT法检测细胞活性，数据采用单因素方差分析，**P<0.01,***P<0.001，处理组与对照组比较得出。

图2为AAEE、AAEE-Pe、AAEE-Ea诱导BEL7404和H22细胞凋亡结果，其中，不同浓度AAEE、AAEE-Pe、AAEE-Ea处理24h后，用流式细胞仪分析BEL7404(A)和H22(B)细胞的凋亡和坏死，免疫印迹法检测Bax和Bcl-2蛋白表达(C)，数据采用单因素方差分析，**P<0.01,***P<0.001，处理组与对照组比较得出。

图3为AAEE、AAEE-Pe、AAEE-Ea诱导BEL7404和H22细胞周期阻滞结果。AAEE、AAEE-Pe、AAEE-Ea处理24小时后，A为处理后细胞用PI染色，流式细胞仪分析细胞周期；B为提取处理后BEL7404和H22细胞的蛋白，用免疫印迹法检测CyclinB1的水平。数据采用单因素方差分析，**P<0.01,***P<0.001，处理组与对照组比较得出。

图4为AAEE、AAEE-Pe、AAEE-Ea诱导BEL7404和H22细胞线粒体膜电位(ΔψM)降低和凋亡信号通路激活的结果，其中，A为AAEE、AAEE-Pe、AAEE-Ea处理24h后，样品用JC-1染色，流式细胞仪进行分析检测ΔψM，图中显示处理组绿色荧光强度与未处理组绿色荧光强度的比值，数据采用单因素方差分析，*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001，处理组与对照组比较得出；B为AAEE、AAEE-Pe、AAEE-Ea处理24小时后，提取BEL7404和H22细胞的蛋白，用免疫印迹法检测细胞色素c、caspase-3、剪切caspase-3(C-caspase-3)、caspase-9、C-caspase-9、PARP及剪切PARP(C-PARP)的水平。

图5为AAEE、AAEE-Pe、AAEE-Ea诱导活性氧(ROS)产生和内质网应激的结果。A为AAEE、AAEE-Pe、AAEE-Ea处理BEL7404细胞不同时间，通过荧光探针DCFH-DA检测ROS的产生，样品用流式细胞仪进行分析；B为AAEE、AAEE-Pe、AAEE-Ea处理24h后，H22细胞ROS水平；C为AAEE、AAEE-Pe、AAEE-Ea处理24小时后，提取BEL7404和H22细胞蛋白质，免疫印迹法检测CHOP的水平。数据采用单因素方差分析，*P<0.05,**P<0.01,***P

<0.001，处理组与对照组比较得出。

图6为AAEE、AAEE-Pe、AAEE-Ea对体内肿瘤生长的抑制作用。通过皮下注射H22细胞诱导昆明白小鼠肿瘤模型。3天后，肿瘤小鼠(每组8只)进行分组并腹腔注射0.5％DMSO、DDP(5mg/kg)、AAEE(200mg/kg)、AAEE-Pe(50mg/kg)、AAEE-Pe(100mg/kg)、AAEE-Ea(100mg/kg)、AAEE-Ea(200mg/kg)进行治疗，并对肿瘤大小及小鼠体重进行了监测。数据采用单因素方差分析，*P<0.05,***P<0.001，治疗组与对照组比较得出。

在了解了上述原料和方法等之后，下面将结合具体实施例对本发明中亚苦蒿提取物在制备抗肝癌药物中的应用做进一步的详细介绍：

实施例1.

A制备中亚苦蒿醇提物的操作步骤如下：

(1)中亚苦蒿购自爱丽康维吾尔医药科技有限公司佳秘康大药店，取中亚苦蒿地上部分，粉碎，将中亚苦蒿:蒸馏水按照1g:10ml的质量体积比混合，在4℃过夜浸提，8000rpm离心20min，取沉淀；

(2)将步骤(1)得到的沉淀物，与水按照1g：10ml的质量体积比混合，在60℃水浴回流提取2h，8000rpm离心20min，取沉淀；

(3)将步骤(2)得到的沉淀物，用85％乙醇回流提取3次；用乙醇回流提取的步骤为：将沉淀物，与85％乙醇按照1g：10ml的质量体积比混合，在60℃水浴回流提取2h；

(4)将步骤(3)第3次回流提取后的溶液抽滤，取上清液，过滤，旋蒸浓缩至无乙醇味，得到浸膏；再将浸膏真空冷冻干燥，得中亚苦蒿醇提物(AAEE)。

B制备中亚苦蒿石油醚萃取物的操作步骤如下：

将A中制备的浸膏用蒸馏水溶解，得浸膏水溶液，然后采用石油醚进行萃取；

将浸膏水溶液和石油醚按照1：1的体积比混合进行萃取，萃取8次，每次取上层溶液；

合并上层溶液，旋蒸浓缩后真空冷冻干燥，得中亚苦蒿石油醚萃取物(AAEE-Pe)。

C制备中亚苦蒿乙酸乙酯萃取物的操作步骤如下：

将B中萃取8次后的下层采用乙酸乙酯萃取；

下层溶液与乙酸乙酯照1：1的体积比混合进行萃取，萃取8次，每次取上层清液；

合并上层清液，旋蒸浓缩后真空冷冻干燥，得中亚苦蒿乙酸乙酯萃取物(AAEE-Ea)。

将AAEE、AAEE-Pe及AAEE-Ea用二甲基亚砜(DMSO)溶解，采用碱性法测定黄酮含量，其黄酮含量分别为16.89％、10.26％、24.97％，采用香草醛-冰乙酸比色法测定萜类含量，其萜类含量分别为22.57％、31.59％、29.89％。

优选地，中亚苦蒿醇提物黄酮含量不低于16％，萜类含量不低于22％。石油醚萃取物黄酮含量不低于10％，萜类含量不低于31％，乙酸乙酯萃取物黄酮含量不低于24％，萜类含量不低于29％。

最优选地，所述中亚苦蒿醇提物含16.89％的黄酮、22.57％的萜类，石油醚萃取物含10.26％黄酮、31.59％萜类，乙酸乙酯萃取物含24.97％黄酮、29.89％萜类。

实施例2.

制备抗肝癌药物：

称取上述制备的中亚苦蒿醇提物100mg，加入1000ml的水中，加热溶解后，装入瓶中密封，消毒，制成0.1mg/ml的抗肝癌药物。

称取上述制备的中亚苦蒿石油醚萃取物200mg，加入1000ml的水中，加热溶解后，装入瓶中密封，消毒，制成0.2mg/ml的抗肝癌药物。

称取上述制备的中亚苦蒿乙酸乙酯萃取物300mg，加入1000ml的水中，加热溶解后，装入瓶中密封，消毒，制成0.3mg/ml的抗肝癌药物。

实施例3.

制备的中亚苦蒿醇提物及石油醚、乙酸乙酯萃取物体外抑制肝癌细胞生长的筛选：

筛选方法：以不同剂量(25、75和150μg/mL)AAEE、AAEW-Pe、AAEE-Ea处理BEL-7404和H22细胞，24、48、72h后观察细胞形态变化(如图1A所示)。与未处理的细胞相比，AAEE、AAEE-Pe、AAEW-Ea处理后，细胞变圆、收缩并且细胞数减少。

通过MTT法检测了AAEW、AAEW-Pe、AAEW-Ea分别处理BEL7404和H22细胞24h、48h和72h后细胞的活性，发现AAEE、AAEE-Pe、AAEE-Ea剂量依赖性和时间依赖性降低了BEL7404和H22细胞的活性(如图1B所示)。计算AAEE、AAEE-Pe、AAEE-Ea在24h、48h及72h对BEL7404和H22细胞的半数抑制浓度(IC50)，如表1所示，三种提取物均具有较强的抗肿瘤活性，对H22细胞的抗肿瘤活性大小：AAEE-Pe>AAEE>AAEE-Ea，对BEL7404细胞的抗肿瘤活性大小：AAEE>AAEE-Pe>AAEE-Ea。

表1 AAEE、AAEE-Pe、AAEE-Ea处理BEL7404和H22细胞不同时间的半数抑制浓度(IC50)

为了检测AAEE、AAEE-Pe、AAEE-Ea抑制BEL7404和H22细胞生长的机理，进一步检测了三种提取物对肝癌细胞凋亡、坏死、细胞周期等的影响。采用不同浓度(25、150μg/ml)的三种提取物处理BEL7404和H22细胞，24小时后，用PI和AnnexinV对BEL7404和H22细胞染色并采用流式细胞仪对样品进行分析。结果表明AAEE、AAEE-Pe、AAEE-Ea剂量依赖性地诱导BEL7404和H22细胞的坏死和凋亡，但主要是引起了细胞的凋亡(图2A&B)。

进一步用免疫印迹法检测了抗凋亡蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白Bax的表达，发现Bax/Bcl-2的比值呈剂量依赖性地增加(图2C)。这些结果表明，AAEE、AAEE-Pe、AAEE-Ea诱导BEL7404和H22细胞凋亡。同时，不同浓度(25、150μg/ml)的AAEE、AAEE-Pe、AAEE-Ea处理BEL7404和H22细胞24小时后，采用PI染色，流式细胞仪分析细胞周期。AAEE、AAEE-Pe、AAEE-Ea显著增加了G2/M期细胞的比例，显著减少了S期细胞的比例(图3A)。免疫印迹法检测了G2/M相关蛋白CyclinB1的水平，AAEE、AAEE-Pe、AAEE-Ea显著抑制了CyclinB1蛋白的表达(图3B)。结果表明AAEE、AAEE-Pe、AAEE-Ea诱导BEL7404和H22细胞G2/M期阻滞。

线粒体依赖性途径是诱导细胞凋亡的内源性途径，线粒体膜电位(ΔψM)的降低能够诱导细胞凋亡。当Δψm降低，JC-1多聚体(红色荧光)会分解成单体(绿色荧光)。因此，用JC-1染色检测了AAEE、AAEE-Pe、AAEE-Ea处理24小时后的ΔψM。结果显示，AAEE、AAEE-Pe、AAEE-Ea剂量依赖性地增加了绿色荧光强度(图4A)，表明AAEE、AAEE-Pe、AAEE-Ea处理降低了ΔψM，该结果与Bax水平升高和Bcl-2水平下降相一致。进一步发现，AAEE、AAEE-Pe、AAEE-Ea处理增加了细胞色素c(Cytc)的释放及caspase3、caspase9、PARP的剪切(图4B)。结果表明，AAEE、AAEE-Pe、AAEE-Ea通过线粒体途径诱导BEL7404和H22细胞凋亡。

活性氧(ROS)产生在诱导细胞凋亡中起着重要的作用。进一步通过荧光探针DCFH-DA检测ROS的产生。发现，AAEE、AAEE-Pe、AAEE-Ea剂量依赖性地增加ROS的产生(图5A&B)。线粒体功能障碍导致ROS释放到胞质内影响细胞质中的氧化还原反应，氧化还原紊乱会导致内质网的应激反应从而导致细胞凋亡。内质网应激通过激活caspase-9增加细胞色素c的释放来加剧线粒体功能障碍。CHOP，称为DNA损伤诱导基因153(GADD153)，是由内质网应激激活的主要促细胞凋亡因子，在细胞凋亡过程中起关键作用。因此，进一步通过蛋白印记检测了AAEE、AAEE-Pe、AAEE-Ea处理BEL7404和H22细胞24h后CHOP的水平，结果显示AAEE、AAEE-Pe、AAEE-Ea处理均显著增加CHOP的水平(图5C)。结果表明AAEE、AAEE-Pe、AAEE-Ea通过内质网应激及线粒体依赖性途径诱导肝癌细胞凋亡，抑制肝癌细胞生长。

实施例4.

制备的中亚苦蒿醇提物及石油醚、乙酸乙酯萃取物体内抑制肝癌细胞生长的筛选：

为了评估AAEE、AAEE-Pe、AAEE-Ea在体内抗肿瘤作用，皮下注射H22细胞到昆明白雄性小鼠右后侧背部，3天之后，肿瘤小鼠随机分组，分别注射DMSO(二甲基亚砜)作为溶剂阴性对照、5mg/kg(小鼠体重)DDP(顺铂)作为阳性对照、200mg/kgAAEE、50mg/kg或100mg/kgAAEE-Pe、100mg/kg或200mg/kgAAEE-Ea，注射方式为腹腔注射，DDP每4天注射1次，共计5次，DMSO、AAEE、AAEE-Pe、AAEE-Ea每2天注射1次，共计11次，不同时间点监测小鼠体重和肿瘤大小。与对照组相比，DDP显著降低小鼠体重，而不同浓度的AAEE、AAEE-pe、AAEE-Ea均未影响小鼠体重。DDP、200mg/kgAAEE、100mg/kgAAEE-Pe、100mg/kg及200mg/kgAAEE-Ea治疗组均显著抑制了小鼠肿瘤生长(图6)。小鼠肿瘤模型实验表明，AAEE、AAEE-pe、AAEE-Ea在所选择浓度下对小鼠无明显副作用，但能抑制肿瘤生长。

以上采用不同的方法检测了AAEE、AAEE-Pe、AAEE-Ea对肝癌细胞BEL7404和H22的抑制作用，通过体外实验进行了详细验证，并阐明了其作用机理。发现中亚苦蒿醇提物及石油醚、乙酸乙酯萃取物具有良好的抗肝癌效果。

以上所述，仅是本发明实施例的较佳实施例而已，并非对本发明实施例作任何形式上的限制，依据本发明实施例的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明实施例技术方案的范围内。

Claims (10)

1.中亚苦蒿提取物在制备抗肝癌药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的中亚苦蒿提取物的活性成分为黄酮提取物和萜类提取物。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的中亚苦蒿提取物为醇提物、石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，

所述的中亚苦蒿醇提物中黄酮含量不低于16wt％，萜类含量不低于22wt％；

所述的中亚苦蒿石油醚萃取物中黄酮含量不低于10wt％，萜类含量不低于31wt％，

所述的中亚苦蒿乙酸乙酯萃取物中黄酮含量不低于24wt％，萜类含量不低于29wt％。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，

所述的中亚苦蒿醇提物中黄酮含量为16.8wt％，萜类含量为22.57wt％；

所述的中亚苦蒿石油醚萃取物中黄酮含量为10.26wt％，萜类含量为31.59wt％，

所述的中亚苦蒿乙酸乙酯萃取物中黄酮含量为24.97wt％，萜类含量为29.89wt％。

6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的中亚苦蒿提取物在体外抑制肝癌细胞生长的应用。

7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的中亚苦蒿提取物在体内抑制肝癌动物模型肿瘤生长的应用。

8.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的中亚苦蒿醇提物的制备方法包括以下步骤：

(1)取中亚苦蒿地上部分，粉碎，与水按照1g：10ml的质量体积比混合，在4℃过夜浸提，离心，取沉淀物；

(2)将步骤(1)得到的沉淀物，与水按照1g：10ml的质量体积比混合，在60℃水浴回流提取2h，离心，取沉淀物；

(3)将步骤(2)得到的沉淀物，用85％乙醇回流提取3次；用乙醇回流提取的步骤为：将步骤(2)得到的沉淀物，与85％乙醇按照1g：10ml的质量体积比混合，在60℃水浴回流提取2h；

(4)将步骤(3)第3次回流提取后的溶液抽滤，取上清液，过滤，旋蒸浓缩至无乙醇味，得到浸膏；再将浸膏真空冷冻干燥，得中亚苦蒿醇提物。

9.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的中亚苦蒿石油醚萃取物的制备方法包括以下步骤：

将权利要求8制备的浸膏完全溶解于水中，得浸膏水溶液；

将浸膏水溶液和石油醚按照1：1的体积比混合进行萃取，萃取8次，每次取上层溶液；

合并上层溶液，旋蒸浓缩后真空冷冻干燥，得中亚苦蒿石油醚萃取物。

10.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的中亚苦蒿乙酸乙酯萃取物的制备方法包括以下步骤：

将权利要求9中萃取8次后的下层溶液，与乙酸乙酯照1：1的体积比混合进行萃取，萃取8次，每次取上层清液；

合并上层清液，旋蒸浓缩后真空冷冻干燥，得中亚苦蒿乙酸乙酯萃取物。