CN109655556A - 诺氟沙星胶囊中诺氟沙星含量的测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种诺氟沙星胶囊中诺氟沙星含量的测定方法，属于药物分析领域，本发明包括分析方法开发和验证，本发明具体测定方法如下：制备供试品溶液时用溶剂为0.025M磷酸溶液：乙腈(87:13)溶解并稀释。本发明与ChP2015药典方法对自制样品及两个批次的参比制剂进行含量检测，结果两批参比制剂和自制样品的含量相比ChP2015的方法检测准确度更高、样品溶解更充分，测定结果均一性好。
Description
技术领域
本发明属于药物分析领域，更具体地说，本发明涉及诺氟沙星胶囊中诺氟沙星含量的测定方法。
背景技术
诺氟沙星(Norfloxacin，又名Nornxin、Fulgram)，别名：力醇罗、氟哌酸、淋克星。其化学名为1-乙基-6-氟-1,4-二氢-4-氧代-7-(1-哌嗪基)-3-喹啉羧酸。本品为第三代喹诺酮类抗菌药，会阻碍消化道内致病细菌的DNA旋转酶(DNA Gyrase)的作用，阻碍细菌DNA复制，对细菌有抑制作用。是治疗肠炎痢疾的常用药。诺氟沙星胶囊，适用于敏感菌所致的尿路感染、淋病、前列腺炎、肠道感染和伤寒及其他沙门菌感染。
诺氟沙星结构如下式一所示：
根据ChP2015推荐，在实际临床中可采用HPLC法对诺氟沙星胶囊中诺氟沙星含量进行检测，但因结构中有羧基和仲胺基，诺氟沙星在冰醋酸或氢氧化钠中易溶，在氯仿中微溶，在水、甲醇中几乎不溶，其在水中的溶解度仅为0.3mg/ml，诺氟沙星在0.1M的盐酸溶液中溶解度为32mg/ml，所以ChP2015中供试品和对照品的溶解方法均采用0.1M HCL溶液，我们经过实际操作意外的发现诺氟沙星胶囊在0.1M HCL溶液中提取不完全，其胶囊壳在0.1MHCL溶液中很容易黏连导致内容物聚集成团，具体操作时样品溶解不充分，从而使测定结果出现偏差，且测定结果均一性不好，导致检测结果不准确。经过研究发现当我们采用0.025M磷酸溶液：乙腈(87：13)的溶剂溶解对照品和供试品，均能保证完全诺氟沙星完全溶解，提高了诺氟沙星含量测定的准确度。
基于上述理由，提出本申请。
发明内容
针对现有技术中存在的缺陷，本发明的目的在于对ChP2015诺氟沙星胶囊含量测定方法对照品和供试品所用溶剂进行优化，使测定结果准确、均一性好，以克服现有技术的不足。
为达到以上目的，本发明采取的技术方案如下：
诺氟沙星胶囊中诺氟沙星含量的测定方法，采用高效液相色谱法测定，其中：制备供试品溶液时采用的溶剂是由体积比为80～90：10～15的磷酸溶液与乙腈组成的混合溶剂。
优选地，上述技术方案，所述磷酸溶液与乙腈的体积比优选为87：13。
优选地，上述技术方案，所述磷酸溶液浓度优选为0.025mol/L。
上述所述诺氟沙星胶囊中诺氟沙星含量的测定方法具体包括如下步骤：
(1)配制对照品溶液：精密称取诺氟沙星，加入由体积比为80～90：10～15的磷酸溶液与乙腈组成的混合溶剂中，配制对照品溶液储备液；将上述对照品溶液储备液逐级稀释成诺氟沙星浓度为10、20、25、50、100μg/ml的溶液，摇匀即得；
(2)配制供试品溶液：精密称取适量样品，加入由体积比为80～90：10～15的磷酸溶液与乙腈组成的混合溶剂中溶解并稀释成适当浓度的溶液，摇匀即得；
(3)确定色谱条件：色谱柱选用Agilent ZORBAX XDB-C18液相色谱柱，流动相选用磷酸三乙胺溶液与乙腈的混合溶液，检测波长为278nm，流速为0.8～1.2ml/min，柱温为20～40℃，进样量为15～25ul；
(4)供试品溶液中诺氟沙星含量的测定：分别精密量取不同浓度的对照品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图，以含量x为横坐标，峰面积y为纵坐标，绘制标准曲线y＝f(x)；然后精密量取同体积供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图中的峰面积，带入标准曲线中得到样品中诺氟沙星的浓度，再通过样品的取样量和稀释步骤计算得到供试样品中诺氟沙星的含量。
进一步，上述技术方案，步骤(3)所述磷酸三乙胺溶液与乙腈的的体积比为87：13。
进一步，上述技术方案，步骤(3)所述磷酸三乙胺溶液采用如下方法配制：先将磷酸溶于去离子水中配制成浓度为0.025mol/L的磷酸溶液，然后向所得磷酸溶液中加入三乙胺，调pH值至3.0，得到所述的磷酸三乙胺溶液。
进一步，上述技术方案，步骤(3)所述流速优选为1.0ml/min，所述柱温优选为30℃，进样量优选为20ul。
与现有技术相比，本发明涉及的诺氟沙星胶囊中诺氟沙星含量的测定方法的优点在于：
(1)本发明方法测定参比制剂与自制诺氟沙星胶囊含量时测定结果准确，均一性好，能在实践中很好地作为ChP2015诺氟沙星胶囊含量测定方法的代替方法。
(2)本发明方法涉及的样品配制方便，操作简单，且本发明方法重复性好，样品平行测试的RSD不超过于0.5％。
(3)本发明回收率高，平均回收率达99.53％，因此本发明测试方法准确度高。
具体实施方式
下面结合具体实施案例对本发明作进一步详细说明。本实施案例在以本发明技术为前提下进行实施，现给出详细的实施方式和具体的操作过程来说明本发明具有创造性，但本发明的保护范围不限于以下的实施案例。
为了更好地理解本发明而不是限制本发明的范围，在本申请中所用的表示用量、百分比的所有数字、以及其他数值，在所有情况下都应理解为以词语“大约”所修饰。因此，除非特别说明，否则在说明书和所附权利要求书中所列出的数字参数都是近似值，其可能会根据试图获得的理想性质的不同而加以改变。各个数字参数至少应被看作是根据所报告的有效数字和通过常规的四舍五入方法而获得的。
本说明书中未作详细描述的内容属于本领域专业技术人员公知的现有技术。
实施例1
本实施例的一种诺氟沙星胶囊中诺氟沙星含量的测定方法，包括如下步骤：
(1)对照品溶液的配制：精密称取诺氟沙星对照品25mg于100ml容量瓶中，用0.025mol/L磷酸溶液：乙腈(87：13)的溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为诺氟沙星对照品溶液储备液；将上述对照品溶液储备液逐级稀释成诺氟沙星浓度为10、20、25、50、100μg/ml的溶液，摇匀即得。
(2)供试品溶液的配制：取20粒诺氟沙星胶囊内容物，研细混匀1min，精密称取适量(约相当于诺氟沙星25mg)，精密称定，置100ml容量瓶中，加0.025mol/L磷酸溶液：乙腈(87:13)的溶剂适量超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
(3)系统适用性溶液：称取诺氟沙星对照品、环丙沙星对照品和依诺沙星对照品各适量，加0.025mol/L磷酸溶液：乙腈(87:13)的溶剂稀释制成每1ml中含诺氟沙星25ug、环丙沙星和依诺沙星各5μg/ml的混合溶液。
(4)色谱条件：
色谱柱：Agilent ZORBAX XDB-C18 4.6*150mm，5um；
流动相：0.025mol/L磷酸溶液(三乙胺调pH＝3.0)：乙腈＝87：13；
波长：278nm；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；进样量：20ul。
精密量取对照品溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，以含量x为横坐标，峰面积y为纵坐标，绘制标准曲线y＝f(x)，各浓度对照品溶液峰面积分别为24.05286、50.02567、62.64554、12958741、250.69878，计算得标准曲线方程如下：y＝-2.10655+2.54259x，R2＝0.9998；精密量取供试品溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图中的峰面积，带入标准曲线中计算得到样品中诺氟沙星的浓度，再通过样品的取样量和稀释步骤计算得到样品中诺氟沙星的含量。
计算公式为：
实施例2
本实施例的一种诺氟沙星胶囊中诺氟沙星含量的测定方法，包括如下步骤：
(1)对照品溶液的配制：精密称取诺氟沙星对照品25mg于100ml容量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液2ml使溶解后，用水稀释至刻度，摇匀；将上述对照品溶液储备液逐级稀释成诺氟沙星浓度为10、20、25、50、100μg/ml的溶液，摇匀即得。
(2)供试品溶液的配制：取20粒诺氟沙星胶囊，取内容物细粉，精密称取适量(约相当于诺氟沙星25mg)，精密称定，置100ml容量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液2ml使溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
(3)系统适用性溶液：称取诺氟沙星对照品、环丙沙星对照品和依诺沙星对照品各适量，加稀释剂稀释制成每1ml中含诺氟沙星25ug、环丙沙星和依诺沙星各5ug的混合溶液。
(4)色谱条件：
色谱柱：Agilent ZORBAX XDB-C18 4.6*150mm，5um；
流动相：0.025mol/L磷酸溶液(三乙胺调pH＝3.0±0.1)：乙腈＝87：13；
波长：278nm；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；进样量：20ul。
精密量取对照品溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，以含量x为横坐标，峰面积y为纵坐标，绘制标准曲线y＝f(x)；精密量取供试品溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图中的峰面积，带入标准曲线中得到样品中诺氟沙星的浓度，再通过样品的取样量和稀释步骤计算得到样品中诺氟沙星的含量。
计算公式为：
实施例1与实施例2中样品均检测同济现代20170801批制剂及两个批次的参比制剂，每个样品配制5个平行供试品溶液。
表1实施例1含量测定结果
表2实施例2含量测定结果
实施例3
称取一批参比制剂9份(约相当于诺氟沙星25mg)，3份一组，分别加入一定量的诺氟沙星对照品溶液，按实施例1中方法制备样品溶液，各水平重复3次取平均值，计算回收率，结果见表3。
回收率％＝(实测诺氟沙星量-样品含诺氟沙星量)/加入诺氟沙星量×100％。
同上，称取一批参比制剂9份，3份一组，分别加入一定量的诺氟沙星对照品溶液，按实施例2中方法制备样品溶液，各水平重复3次取平均值，计算回收率，结果见表4。
由上表3可知由ChP2015诺氟沙星胶囊项下含量测定方法优化后得到的本发明测定结果更准确，均一性更好。
表3实施例3结果-1
表4实施例3结果-2
根据回收率的结果可见，采用0.025mol/L磷酸溶液：乙腈(87:13)的溶剂，诺氟沙星胶囊中诺氟沙星含量准确度有明显提升。
本发明不局限于上述实施方式，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本发明的保护范围之内。应该理解，本发明的范围不局限于所限定的过程、性质或组分，因为这些实施方案以及其他的描述仅仅是为了示意性说明本发明的特定方面。实际上，本领域或相关领域的技术人员明显能够对本发明实施方式作出的各种改变都涵盖在所附权利要求的范围内。
Claims (7)
1.一种诺氟沙星胶囊中诺氟沙星含量的测定方法，其特征在于：采用高效液相色谱法测定，其中：制备供试品溶液时采用的溶剂是由体积比为80～90：10～15的磷酸溶液与乙腈组成的混合溶剂。
2.根据权利要求1所述的诺氟沙星胶囊中诺氟沙星含量的测定方法，其特征在于：所述磷酸溶液与乙腈的体积比优选为87：13。
3.根据权利要求1所述的诺氟沙星胶囊中诺氟沙星含量的测定方法，其特征在于：所述磷酸溶液浓度优选为0.025mol/L。
4.根据权利要求1所述的诺氟沙星胶囊中诺氟沙星含量的测定方法，其特征在于：所述方法具体包括如下步骤：
(1)配制对照品溶液：精密称取诺氟沙星，加入由体积比为80～90：10～15的磷酸溶液与乙腈组成的混合溶剂中，配制对照品溶液储备液；将上述对照品溶液储备液逐级稀释成诺氟沙星浓度为10、20、25、50、100μg/ml的溶液，摇匀即得；
(2)配制供试品溶液：精密称取适量样品，加入由体积比为80～90：10～15的磷酸溶液与乙腈组成的混合溶剂中溶解并稀释成适当浓度的溶液，摇匀即得；
(3)确定色谱条件：色谱柱选用Agilent ZORBAX XDB-C18液相色谱柱，流动相选用磷酸三乙胺溶液与乙腈的混合溶液，检测波长为278nm，流速为0.8～1.2ml/min，柱温为20～40℃，进样量为15～25ul；
(4)供试品溶液中诺氟沙星含量的测定：分别精密量取不同浓度的对照品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图，以含量x为横坐标，峰面积y为纵坐标，绘制标准曲线y＝f(x)；然后精密量取同体积供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图中的峰面积，带入标准曲线中得到样品中诺氟沙星的浓度，再通过样品的取样量和稀释步骤计算得到供试样品中诺氟沙星的含量。
5.根据权利要求4所述的诺氟沙星胶囊中诺氟沙星含量的测定方法，其特征在于：步骤(3)所述磷酸三乙胺溶液与乙腈的的体积比为87：13。
6.根据权利要求4所述的诺氟沙星胶囊中诺氟沙星含量的测定方法，其特征在于：步骤(3)所述磷酸三乙胺溶液采用如下方法配制：先将磷酸溶于去离子水中配制成浓度为0.025mol/L的磷酸溶液，然后向所得磷酸溶液中加入三乙胺，调pH值至3.0，得到所述的磷酸三乙胺溶液。
7.根据权利要求4所述的诺氟沙星胶囊中诺氟沙星含量的测定方法，其特征在于：步骤(3)所述流速优选为1.0ml/min，所述柱温优选为30℃，进样量优选为20ul。
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| CN113960187A (zh) * | 2021-09-06 | 2022-01-21 | 新昌和宝生物科技有限公司 | 一种通过包封率的测定以评价包被恩诺沙星适口性的方法 |
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