CN109652372A - 一种人胎盘组织源造血干细胞的快速分离、制备方法 - Google Patents
一种人胎盘组织源造血干细胞的快速分离、制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109652372A CN109652372A CN201910019507.4A CN201910019507A CN109652372A CN 109652372 A CN109652372 A CN 109652372A CN 201910019507 A CN201910019507 A CN 201910019507A CN 109652372 A CN109652372 A CN 109652372A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- placenta
- stem cell
- candidate stem
- cell
- preparation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0647—Haematopoietic stem cells; Uncommitted or multipotent progenitors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/02—Preservation of living parts
- A01N1/0205—Chemical aspects
- A01N1/021—Preservation or perfusion media, liquids, solids or gases used in the preservation of cells, tissue, organs or bodily fluids
- A01N1/0215—Disinfecting agents, e.g. antimicrobials for preserving living parts
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/02—Preservation of living parts
- A01N1/0205—Chemical aspects
- A01N1/021—Preservation or perfusion media, liquids, solids or gases used in the preservation of cells, tissue, organs or bodily fluids
- A01N1/0221—Freeze-process protecting agents, i.e. substances protecting cells from effects of the physical process, e.g. cryoprotectants, osmolarity regulators like oncotic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2509/00—Methods for the dissociation of cells, e.g. specific use of enzymes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明属于生物技术领域,具体涉及一种人胎盘组织源造血干细胞的快速分离、制备方法,所述方法是将孕妇分娩后的胎盘经过预处理,然后去除多余组织,再经多种消化酶联合消化、细胞过滤和分离富集得到人胎盘组织源造血干细胞。与现有技术相比,本发明的有益效果是,一方面通过采用多种消化酶联合消化,使得本发明方法得到的细胞数较多,所得细胞中造血干细胞(CD34+细胞)含量较脐血高3‑5倍,对细胞活性损伤较小,而且能够快速的得到造血干细胞;另一方面本发明组织处理过程简单方便,污染率低。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域,具体涉及一种人胎盘组织源造血干细胞的快速分离、制备方法。
背景技术
造血干细胞是指具有自我更新能力并能分化为各种血细胞前体细胞,最终生成各种血细胞成分,包括红细胞、白细胞和血小板等。目前,造血干细胞移植是临床治疗必不可少的一部分,治愈了许多以前无法治愈的血液系统疾病或非血液系统疾病。脐带血作为一种移植用的造血干细胞来源始于20年前,但是脐带血作为造血干细胞来源仍面临一个重要问题,单位脐带血所含的造血干细胞数量对于年纪较小、体重较轻的儿童足够,但是对于成人不足,而胎盘由于其大量的造血干细胞含量可改善及弥补这一缺陷。除了含量上的优势,人胎盘组织还具有淋巴细胞亚群低比例和抑制性T细胞高比例的特点,因而具有有效的免疫抑制性,能够大大提高移植的成功率。
本研究通过多种酶联合消化法,首先将细胞从组织中消化下来,再用滤网分别过滤,最后用淋巴细胞分离液分离、富集获得造血干细胞。
目前,分离胎盘组织造血干细胞的方法主要是酶解法。胎盘组织结构复杂,单纯的酶解所得细胞数量相对较少,而且由于酶作用时间较长,对细胞活性影响很大;其次现有方法步骤繁琐,特别是细胞过滤耗时费力,容易造成污染并且成本较高。
发明内容
针对上述现有技术存在的不足,本发明提供一种人胎盘组织造血干细胞的快速分离、制备方法。
为了实现上述目的,本发明采用了如下技术方案:
一种人胎盘组织源造血干细胞的快速分离、制备方法,将孕妇分娩后的胎盘经过预处理,然后去除多余组织,再经多种消化酶联合消化、细胞过滤和分离富集得到人胎盘组织源造血干细胞,具体包括以下步骤:
步骤一,胎盘的保存,将孕妇分娩后的胎盘,置于含有胎盘保存液的胎盘储存盒中,2~8℃保存;
步骤二,胎盘组织的预处理,将步骤一得到的胎盘从胎盘保存液中取出,置于无菌托盘中,注意检查胎盘完整性,弃用不完整胎盘,止血钳夹闭脐带动静脉,采用生理盐水反复冲洗胎盘,去除血凝块及胎便等污物,随后用含1%双抗的生理盐水再次对胎盘进行冲洗至冲洗液清亮,得到预处理胎盘;
步骤三,胎盘组织的分离,将步骤二得到的预处理胎盘置于无菌托盘中,首先去除脐带及羊膜,再去除绒毛膜、血管后,用无菌剪刀将其剪成小块,置于无菌培养皿,采用含1%双抗的生理盐水反复冲洗至洗涤液无色透明,收集清洗液,将清洗后组织1300rpm离心5~15分钟,得到沉淀组织,用PBS冲洗及1300rpm离心5~15分钟,重复3遍,得到清洗胎盘组织;
步骤四,胎盘组织的消化,将步骤三得到的清洗胎盘组织添加DMEM/F12培养基、多种消化酶和人血白蛋白,得到混悬液,将混悬液置于37℃孵箱震荡消化30~60分钟,得到消化胎盘组织;
步骤五,消化细胞的过滤,将步骤四得到的消化胎盘组织,先加入生理盐水稀释,然后分别经50目、100目及200目滤网过滤,并用PBS清洗2遍后过70μm滤网,收集细胞过滤悬液;
步骤六,造血干细胞的分离富集,将步骤五得到的细胞过滤悬液缓慢加入淋巴细胞分离液进行分离,然后2100rpm离心20~30min,弃上清,加入生理盐水,反复清洗3次,去掉上清,得到人胎盘组织源造血干细胞;
步骤七,细胞的冻存,将步骤六得到的人胎盘组织源造血干细胞加入胎牛血清混悬,并缓慢加入DMSO至终浓度10%,同时迅速混匀(液体要保持在4℃),分装于5mL冻存管中,冻存管装入程序降温盒放置于-80℃冰箱,24小时后转入液氮中长期保存。
优选地,所述步骤一中胎盘保存液采用500mL的注射用生理盐水加入5mL的双抗储存液,再加入2mL注射用硫酸庆大霉素制备而成,所述双抗储存液采用注射用青霉素和硫酸链霉素,经过注射用生理盐水稀释至每毫升1万单位制备而成。
优选地,所述多种消化酶由中性蛋白酶、胶原酶II和透明质酸酶组成。
优选地,所述中性蛋白酶和胶原酶II使用前配置成2%(m/v)的中性蛋白酶/胶原酶II储存液,所述中性蛋白酶/胶原酶II储存液通过分别称取1g的中性蛋白酶与1g的胶原酶II,溶解于50mL生理盐水中并采用0.22μm滤膜过滤,制备而成。
优选地,所述透明质酸酶使用前配置成3.5%(m/v)的透明质酸酶储存液,所述透明质酸酶储存液通过称取1g透明质酸酶,溶解于28.6mL生理盐水中,0.22μm滤膜过滤,制备而成。
优选地,所述步骤二和步骤三中的双抗是指青霉素和链霉素。
优选地,所述步骤四中混悬液包含0.2%中性蛋白酶/胶原酶II、0.35%透明质酸酶、1mg/ml人血白蛋白。
优选地,所述步骤四中将混悬液置于37℃孵箱震荡消化30~60分钟,优选为将混悬液置于37℃孵箱震荡消化50分钟。
与现有技术相比,本发明的有益效果:
一方面通过采用多种消化酶联合消化,使得本发明方法得到的细胞数较多,所得细胞中造血干细胞(CD34+细胞)含量较脐血高3~5倍,对细胞活性损伤较小,而且能够快速的得到造血干细胞;另一方面本发明组织处理过程简单方便,污染率低。
附图说明
图1是本发明的流式检测图。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明进行详细说明,但是本发明可以由权利要求限定和覆盖的多种不同方式实施。
实施例1
一、试剂:
1.胎盘保存液及清洗液
注射用青霉素和硫酸链霉素用注射用生理盐水配置成每毫升1万单位的储存液,即为1%的双抗储存液;
500mL的注射用生理盐水加入5mL的双抗储存液,再加入2mL注射用硫酸庆大霉素,即配置成胎盘保存液或清洗液;
2.中性蛋白酶/胶原酶II储存液
分别称取1g的中性蛋白酶与1g的胶原酶II,溶解于50mL生理盐水中,0.22μm滤膜过滤,即为2%(m/v)的中性蛋白酶/胶原酶II储存液;
3.透明质酸酶储存液
称取1g透明质酸酶,溶解于28.6mL生理盐水中,0.22μm滤膜过滤,即为3.5%(m/v)的透明质酸酶储存液;
4.人血白蛋白,华兰生物,5g/50mL(10%);
5.淋巴细胞分离液,200mL/瓶,天津市灏洋生物制品科技有限责任公司;
6.胎牛血清,Gibco公司;
7.二甲基亚砜(DMSO),德国WAK公司;
8.DMEM培养液;
9.0.4%台盼蓝。
二,造血干细胞的分离、制备
1.胎盘的运输
孕妇分娩后的胎盘,置于含有保存液的胎盘储存盒中,2~8℃及时运送回实验室;样本接收室检查运输温度、胎盘盒是否完整,避免出现污染,并对其进行编号。
2.胎盘组织的预处理
规定时间内将取得的胎盘从胎盘保存液中取出,置于无菌托盘中,注意检查胎盘完整性,弃用不完整胎盘。止血钳夹闭脐带动静脉,采用生理盐水反复冲洗胎盘,去除血凝块及胎便等污物,随后用含1%双抗(青霉素及链霉素)的生理盐水再次对胎盘进行冲洗至冲洗液清亮,得到待处理胎盘,称重留档。
3.胎盘组织的分离
预处理后的胎盘置于无菌托盘中,首先去除脐带及羊膜,剩余组织去除绒毛膜、血管等,用无菌剪刀将其剪成小块(约1~3mm3),置于无菌培养皿,采用含1%双抗的生理盐水反复冲洗至洗涤液无色透明,收集清洗液,清洗后组织1300rpm离心6分钟,得到的沉淀组织用PBS冲洗及离心,重复3遍。
4.胎盘组织的消化
清洗后组织添加DMEM/F12培养基及消化酶,得到含量为0.2%胶原酶、0.35%透明质酸酶、1mg/ml人血白蛋白的混悬液。混悬液置于37℃孵箱震荡消化50分钟;
5.消化细胞的过滤
消化后的混悬液,先加入生理盐水稀释,终止酶活性,然后分别经50目、100目及200目滤网过滤,并用PBS清洗2遍后过70μm滤网,收集细胞过滤悬液;
6.造血干细胞的分离富集
收集的细胞悬液用注射用生理盐水重悬,缓慢加入淋巴细胞分离液中,2100rpm离心20min,升降速度均设为最低。离心后平稳取出离心管,电动移液器移取中间层细胞至洁净离心管,加入生理盐水,反复清洗3次,弃上清。
7.细胞的冻存
所得细胞加入胎牛血清混悬,并缓慢加入DMSO(终浓度10%),并同时迅速混匀(液体要保持在4℃),分装于5ml冻存管中,冻存管装入程序降温盒放置于-80℃冰箱,24小时后转入液氮罐长期保存。
三,流式检测胎盘造血干细胞表面标志物
1.取单细胞悬液,1200rpm离心5min;
2.用PBS重悬细胞沉淀,调节细胞浓度为1.0~1.2×106cell/ml;
3.加抗体CD34,轻轻吹打混匀,4℃避光孵育30min,同时设置同型对照;
4.加1mlPBS于流式检测管中,1200rpm,5min,弃上清;
5.加100ulPBS,轻轻吹打混匀,上机检测,胎盘造血干细胞表面标志物CD34,所得细胞中造血干细胞(CD34+细胞)含量较脐血高3-5倍,结果如图1所示。
由以上实施例可知本研究的方法,与现有的组织源造血干细胞分离方法相比,该方法得到的细胞数较多,对细胞活性损伤小;组织处理过程简单方便,污染率低;所得细胞中造血干细胞(CD34+细胞)含量较脐血高3-5倍。
以上所述仅为发明的优选实施例,并非因此限制本发明的专利范围,凡是利用本发明说明书内容所作的简单修改或变换,或直接或间接运用在其他相关的技术领域,均同理包括在本发明的专利保护范围内。
Claims (9)
1.一种人胎盘组织源造血干细胞的快速分离、制备方法,其特征在于,所述方法是一种将孕妇分娩后的胎盘经过预处理,然后去除多余组织,再经多种消化酶联合消化、细胞过滤和分离富集得到人胎盘组织源造血干细胞的方法。
2.根据权利要求1所述的人胎盘组织源造血干细胞的快速分离、制备方法,其特征在于包括以下步骤:
步骤一,胎盘的保存,将孕妇分娩后的胎盘,置于含有胎盘保存液的胎盘储存盒中,2~8℃保存;
步骤二,胎盘组织的预处理,将步骤一得到的胎盘从胎盘保存液中取出,置于无菌托盘中,注意检查胎盘完整性,弃用不完整胎盘,止血钳夹闭脐带动静脉,采用生理盐水反复冲洗胎盘,去除血凝块及胎便等污物,随后用含1%双抗的生理盐水再次对胎盘进行冲洗至冲洗液清亮,得到预处理胎盘;
步骤三,胎盘组织的分离,将步骤二得到的预处理胎盘置于无菌托盘中,首先去除脐带及羊膜,再去除绒毛膜、血管后,用无菌剪刀将其剪成小块,置于无菌培养皿,采用含1%双抗的生理盐水反复冲洗至洗涤液无色透明,收集清洗液,将清洗后组织1300rpm离心5~15分钟,得到沉淀组织,用PBS冲洗及1300rpm离心5~15分钟,重复3遍,得到清洗胎盘组织;
步骤四,胎盘组织的消化,将步骤三得到的清洗胎盘组织添加DMEM/F12培养基、多种消化酶和人血白蛋白,得到混悬液,将混悬液置于37℃孵箱震荡消化30~60分钟,得到消化胎盘组织;
步骤五,消化细胞的过滤,将步骤四得到的消化胎盘组织,先加入生理盐水稀释,然后分别经50目、100目及200目滤网过滤,并用PBS清洗2遍后过70μm滤网,收集细胞过滤悬液;
步骤六,造血干细胞的分离富集,将步骤五得到的细胞过滤悬液加入到淋巴细胞分离液进行分离,然后2100rpm离心20~30min,弃上清,加入生理盐水,反复清洗3次,去掉上清,得到人胎盘组织源造血干细胞。
步骤七,细胞的冻存,将步骤六得到的人胎盘组织源造血干细胞加入胎牛血清混悬,并缓慢加入DMSO至终浓度10%,同时迅速混匀,分装于5mL冻存管中,程序降温盒置于-80℃冰箱,24小时后转入液氮中长期保存。
3.根据权利要求1或2所述的人胎盘组织源造血干细胞的快速分离、制备方法,其特征正在于,所述步骤一中胎盘保存液采用500mL的注射用生理盐水加入5mL的双抗储存液,再加入2mL注射用硫酸庆大霉素制备而成,所述双抗储存液采用注射用青霉素和硫酸链霉素,经过注射用生理盐水稀释至每毫升1万单位制备而成。
4.根据权利要求1所述的人胎盘组织源造血干细胞的快速分离、制备方法,其特征正在于,所述多种消化酶由中性蛋白酶、胶原酶II和透明质酸酶组成。
5.根据权利要求1或4所述的人胎盘组织源造血干细胞的快速分离、制备方法,其特征正在于,所述中性蛋白酶和胶原酶II使用前配置成2%(m/v)的中性蛋白酶/胶原酶II储存液,所述中性蛋白酶/胶原酶II储存液通过分别称取1g的中性蛋白酶与1g的胶原酶II,溶解于50mL生理盐水中并采用0.22μm滤膜过滤,制备而成。
6.根据权利要求1或4所述的人胎盘组织源造血干细胞的快速分离、制备方法,其特征正在于,所述透明质酸酶使用前配置成3.5%(m/v)的透明质酸酶储存液,所述透明质酸酶储存液通过称取1g透明质酸酶,溶解于28.6mL生理盐水中,0.22μm滤膜过滤,制备而成。
7.根据权利要求1或2所述的人胎盘组织源造血干细胞的快速分离、制备方法,其特征正在于,所述步骤二和步骤三中的双抗是指青霉素和链霉素。
8.根据权利要求1或2所述的人胎盘组织源造血干细胞的快速分离、制备方法,其特征正在于,所述步骤四中混悬液包含0.2%中性蛋白酶/胶原酶II、0.35%透明质酸酶、1mg/ml人血白蛋白。
9.根据权利要求1或2所述的人胎盘组织源造血干细胞的快速分离、制备方法,其特征正在于,所述步骤四中将混悬液置于37℃孵箱震荡消化30-60分钟,优选为将混悬液置于37℃孵箱震荡消化50分钟。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201910019507.4A CN109652372A (zh) | 2019-01-09 | 2019-01-09 | 一种人胎盘组织源造血干细胞的快速分离、制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201910019507.4A CN109652372A (zh) | 2019-01-09 | 2019-01-09 | 一种人胎盘组织源造血干细胞的快速分离、制备方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN109652372A true CN109652372A (zh) | 2019-04-19 |
Family
ID=66119158
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201910019507.4A Pending CN109652372A (zh) | 2019-01-09 | 2019-01-09 | 一种人胎盘组织源造血干细胞的快速分离、制备方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN109652372A (zh) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110734892A (zh) * | 2019-11-26 | 2020-01-31 | 深圳科学之门生物工程有限公司 | 一种从婴儿胎盘中提取造血干细胞的方法 |
CN110878283A (zh) * | 2019-12-30 | 2020-03-13 | 贵州泛特尔细胞生物技术有限公司 | 一种分离胎盘源造血干细胞的方法 |
Citations (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101389754A (zh) * | 2005-12-29 | 2009-03-18 | 人类起源公司 | 胎盘干细胞和第二来源干细胞的联合培养 |
CN101978045A (zh) * | 2007-09-26 | 2011-02-16 | 细胞基因细胞疗法公司 | 来自人胎盘灌洗液的血管生成细胞 |
CN102660499A (zh) * | 2012-05-23 | 2012-09-12 | 郑州赛英科干细胞技术有限公司 | 一种胎盘造血干细胞及其制备方法和胎盘造血干细胞注射剂 |
CN102757935A (zh) * | 2011-04-29 | 2012-10-31 | 北京汉氏联合生物技术有限公司 | 一种从胎盘绒毛膜组织中提取造血干细胞的方法及造血干细胞库的构建方法 |
CN103789262A (zh) * | 2014-02-17 | 2014-05-14 | 宁波普莱森特生物科技有限公司 | 一种临床应用级胎盘造血干细胞的制备方法及保存方法 |
CN104480533A (zh) * | 2014-12-29 | 2015-04-01 | 黑龙江天晴干细胞股份有限公司 | 一种胎盘干细胞库的构建方法及胎盘组织复苏方法 |
CN104711226A (zh) * | 2015-04-09 | 2015-06-17 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 一种胎盘造血干细胞的制备方法 |
CN106754680A (zh) * | 2015-12-31 | 2017-05-31 | 中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所 | 一种胎盘源性干细胞的分离方法及其应用 |
CN106967675A (zh) * | 2017-05-31 | 2017-07-21 | 东莞市保莱生物科技有限公司 | 一种从胎盘中分离提取造血干细胞的方法 |
-
2019
- 2019-01-09 CN CN201910019507.4A patent/CN109652372A/zh active Pending
Patent Citations (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101389754A (zh) * | 2005-12-29 | 2009-03-18 | 人类起源公司 | 胎盘干细胞和第二来源干细胞的联合培养 |
CN101978045A (zh) * | 2007-09-26 | 2011-02-16 | 细胞基因细胞疗法公司 | 来自人胎盘灌洗液的血管生成细胞 |
CN102757935A (zh) * | 2011-04-29 | 2012-10-31 | 北京汉氏联合生物技术有限公司 | 一种从胎盘绒毛膜组织中提取造血干细胞的方法及造血干细胞库的构建方法 |
CN102660499A (zh) * | 2012-05-23 | 2012-09-12 | 郑州赛英科干细胞技术有限公司 | 一种胎盘造血干细胞及其制备方法和胎盘造血干细胞注射剂 |
CN103789262A (zh) * | 2014-02-17 | 2014-05-14 | 宁波普莱森特生物科技有限公司 | 一种临床应用级胎盘造血干细胞的制备方法及保存方法 |
CN104480533A (zh) * | 2014-12-29 | 2015-04-01 | 黑龙江天晴干细胞股份有限公司 | 一种胎盘干细胞库的构建方法及胎盘组织复苏方法 |
CN104711226A (zh) * | 2015-04-09 | 2015-06-17 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 一种胎盘造血干细胞的制备方法 |
CN106754680A (zh) * | 2015-12-31 | 2017-05-31 | 中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所 | 一种胎盘源性干细胞的分离方法及其应用 |
CN106967675A (zh) * | 2017-05-31 | 2017-07-21 | 东莞市保莱生物科技有限公司 | 一种从胎盘中分离提取造血干细胞的方法 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
李猛: "胎盘来源造血干细胞分离提取和体外扩增研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》 * |
莫峥等: "胎盘来源细胞与母血、脐血细胞的嵌合", 《中国组织工程研究》 * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110734892A (zh) * | 2019-11-26 | 2020-01-31 | 深圳科学之门生物工程有限公司 | 一种从婴儿胎盘中提取造血干细胞的方法 |
CN110878283A (zh) * | 2019-12-30 | 2020-03-13 | 贵州泛特尔细胞生物技术有限公司 | 一种分离胎盘源造血干细胞的方法 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20080050814A1 (en) | Procurement, isolation and cryopreservation of fetal placental cells | |
WO2007146105A2 (en) | Procurement, isolation and cryopreservation of fetal placental cells | |
CN105713871A (zh) | 一种人绒毛膜间充质干细胞的分离培养方法 | |
CN107746829B (zh) | 一种分离与原代培养犬胎盘来源的间充质干细胞的方法 | |
ZA200304341B (en) | Method of collecting placental stem cells. | |
CN107022521A (zh) | 壁蜕膜组织冻存、复苏及分离培养间充质干细胞的方法 | |
AU2010332777A1 (en) | Methods for isolating mononuclear cells that include a subpopulation of mesenchymal progenitor cells and vascular cells that include a subpopulation of endothelial progenitor cells from umbilical cord tissue | |
CN105368780A (zh) | 分离胎盘造血干细胞的灌洗液、酶解液及方法 | |
CN101889079A (zh) | 适于临床应用的人胎盘间质细胞库的建立方法 | |
CN104877965B (zh) | 一种制备成熟红细胞的方法 | |
CN109652372A (zh) | 一种人胎盘组织源造血干细胞的快速分离、制备方法 | |
CN109294979A (zh) | 一种高效分离脐带胎盘间充质干细胞的方法及应用 | |
CN107354130A (zh) | 一种人胎盘绒毛膜间充质干细胞分离方法 | |
CN109321517A (zh) | 一种人羊膜间充质干细胞的高效分离、扩增方法 | |
CN108660108A (zh) | 一种可增强脐带间充质干细胞免疫调节能力的方法 | |
CN108148806A (zh) | 一种胎盘造血干细胞的快速分离方法 | |
CN103305453A (zh) | 一种脐带间充质干细胞的微载体培养系统 | |
CN111575229B (zh) | 一种胎盘底蜕膜干细胞的分离方法 | |
CN114807025A (zh) | 一种脐带华通氏胶二次培养收获原代间充质干细胞的方法 | |
CN108949686B (zh) | 一种在低氧环境中从胎盘中获取造血干细胞的方法 | |
CN112852723A (zh) | 一种原代胎盘壁蜕膜间充质干细胞的处理和培养方法 | |
CN106577637A (zh) | 人羊膜间充质干细胞的保存方法 | |
Robin et al. | Preparation of hematopoietic stem and progenitor cells from the human placenta | |
CN109536442B (zh) | 一种胎盘间充质干细胞的分离方法 | |
CN116926003B (zh) | 一种羊膜间充质干细胞的制备方法及其应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20190419 |