CN109641904A - 用于治疗和预防病毒感染的7-取代的磺亚氨酰基嘌呤酮化合物 - Google Patents

用于治疗和预防病毒感染的7-取代的磺亚氨酰基嘌呤酮化合物 Download PDF

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Abstract

本发明涉及式(I)的化合物及其前药或其可药用盐、对映体或非对映体，以及包含该化合物的组合物和使用该化合物作为TLR7激动剂治疗病毒感染的方法，其中R1、R2和R3如文中所定义。

Description

用于治疗和预防病毒感染的7-取代的磺亚氨酰基嘌呤酮化 合物
本发明涉及具有Toll-样受体激动活性的新的磺亚氨酰基嘌呤酮衍生物以及它们的制备、包含它们的药物组合物及其作为药物的潜在用途。
发明领域
本发明涉及式(I)的化合物或其可药用盐、对映体或非对映体，
其中R1至R3如下所述。
Toll样受体(TLR)识别范围广泛的保守的病原相关分子模式(PAMP)。它们在探测入侵病原体和随后启动先天免疫应答中起着重要的作用。人体中存在10种已知的TLR家族成员，它们是I型跨膜蛋白，以富含亮氨酸的胞外结构域和包含保守的Toll/白细胞介素(IL)-1受体(TIR)结构域的胞质尾区为特征。在该家族中，TLR3、TLR7、TLR8和TLR9位于内体内。TLR7可以通过结合特异性小分子配体(即TLR7激动剂)或其天然配体(即单链RNA、ssRNA)被活化。在ssRNA结合TLR7后，认为二聚化形式的该受体发生结构改变，导致随后衔接蛋白质募集在其胞质结构域处，包括髓样分化初级应答基因88(MyD88)。在通过MyD88途径启动受体信号传导级联后，胞质转录因子例如干扰素调节因子7(IRF-7)和核因子κB(NF-κB)被激活。这些转录因子随后转位至核并且启动各种基因的转录，例如IFN-α和其它抗病毒细胞因子基因。TLR7主要在浆细胞样细胞上表达并且还在B-细胞上表达。改变的免疫细胞应答性可能与慢性病毒感染过程中天然免疫应答的下降有关。激动剂诱导的TLR7活化由此可能代表用于治疗慢性病毒感染的新方法(D.J Connolly和L.AJ O’Neill,CurrentOpinion in Pharmacology 2012,12：510-518,P.A.Roethle等人,J.Med.Chem.2013,56,7324-7333)。
目前慢性HBV感染的疗法基于两种不同类型的药物：传统的抗病毒核苷(酸)类似物和更近期的聚乙二醇化IFN-α(PEG-IFN-α)。口服核苷(酸)类似物通过抑制HBV复制起作用。这是终生的治疗过程，在此期间，药物耐受性经常发生。作为另一种选择，聚乙二醇化IFN-α(PEG-IFN-α)已被用于在有限的治疗期间内治疗一些慢性感染的HBV患者。尽管已在至少一小部分的HBV患者中实现了HBeAg的血清转化，但是不良反应使得它难以耐受。值得注意的是，以HBsAg血清转化定义的功能性治愈在目前的这两种疗法中均极为罕见。因此，迫切需求新一代的治疗选择以功能性治愈HBV患者。使用口服TLR7激动剂治疗代表了一种富有前景的解决方案，以提供更高的效能和更好的耐受性。聚乙二醇化IFN-α(PEG-IFN-α)目前用于治疗慢性HBV并且是潜在需要终生使用抗病毒核苷(酸)类似物治疗的可替代选择。在一小组慢性HBV患者中，PEG-IFN-α疗法可以在有限的治疗过程后诱导对病毒的持续性免疫控制。然而，使用干扰素疗法实现血清转化的HBV患者的百分比较低(对于HBeAg-阳性患者最高为27％)，且该治疗通常耐受性差。此外，功能性治愈(定义为HBsAg消失和血清转化)在使用PEG-IFN-α和核苷(酸)治疗时也是极不常见的。由于这些局限性，对于治疗和诱导慢性HBV功能性治愈的改良的治疗选择存在迫切需求。使用口服的小分子TLR7激动剂进行治疗是一种富有前景的方法，其具有提供更高的效能和耐受性的潜能(T.Asselah等人,Clin Liver Dis 2007,11,839-849)。
实际上，几种经鉴定的TLR7激动剂已经被考虑用于治疗目的。迄今为止，咪喹莫德(ALDARATM)是美国FDA批准的用于治疗人乳头瘤病毒导致的皮肤损伤的TLR7激动剂。已经对TLR7/8双重激动剂瑞喹莫德(R-848)和TLR7激动剂852A分别用于治疗人生殖器疱疹和化疗顽固性转移性黑素瘤进行了评估。ANA773是一种口服的前药TLR7激动剂，研发它是为了治疗患有慢性丙型肝炎病毒(HCV)感染和慢性乙型肝炎感染的患者。GS-9620是一种口服有效的TLR7激动剂。Ib期研究证实，使用GS-9620治疗是安全的、良好耐受的并且可在患有慢性乙型肝炎的患者中导致剂量依赖性ISG15mRNA诱导(E.J.Gane等人,Annu Meet Am AssocStudy Liver Dis(11月1-5日,Washington,D.C.)2013,摘要946)。因此，对于研发有效和安全的TLR7激动剂作为新的HBV治疗方法以提供更多的治疗方案或替代现存的部分有效的治疗手段存在非常迫切的临床需求。
发明概述
本发明提供了一系列新的具有Toll-样受体激动活性的6-氨基-2-磺亚氨酰基-9-取代的-7-取代的-嘌呤-8-酮化合物及其前药。本发明还提供了这类化合物通过活化Toll-样受体、例如TLR7受体来诱导SEAP水平增加的生物活性、在人肝细胞的存在下将前药代谢转化成母体化合物，以及这类化合物和包含这些化合物及其前药的药物组合物在治疗或预防感染性疾病如HBV或HCV中的治疗或预防用途。本发明还提供了具有优良活性的化合物。此外，式(I)化合物还表现出良好的溶解度和药物动力学特性。
本发明涉及式(I)的新化合物或其可药用盐、对映体或非对映体，
其中
R1是C1-6烷基；
R2是苄基，所述苄基是未取代的或被一个、两个或三个独立地选自卤素和C1-6烷基的取代基取代；
R3是-NR4R5，其中
R4是C1-6烷基或C1-6烷氧基C1-6烷基；
R5是(C1-6烷基)2NCOOC1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基(苯基)C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基氧基C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6烷基羰基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基或吡咯烷基氨基甲酰氧基C1-6烷基；或者
R4和R5与它们所连接的氮一起形成杂环基；
条件是不包括
6-氨基-9-苄基-2-(丙基磺亚氨酰基)-7-(吡咯烷-1-羰基)嘌呤-8-酮；
6-氨基-9-苄基-7-(哌啶-1-羰基)-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-8-酮；
6-氨基-9-苄基-7-(吗啉-4-羰基)-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-8-酮；
6-氨基-9-苄基-7-(3,3-二甲基吡咯烷-1-羰基)-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-8-酮；
1-[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]吡咯烷-2-甲酸乙酯；
6-氨基-7-(2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羰基)-9-苄基-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-8-酮；
6-氨基-9-苄基-7-(2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷-6-羰基)-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-8-酮；
6-氨基-9-苄基-7-(3,3-二氟吡咯烷-1-羰基)-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-8-酮；
6-氨基-9-苄基-7-(3-氟-3-甲基-吡咯烷-1-羰基)-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-8-酮；
及其对映体或非对映体。
本发明还涉及它们的制备方法、基于本发明化合物的药物及其生产方法和式(I)化合物作为TLR7激动剂的用途。因此，式(I)化合物可用于利用Toll-样受体激动作用来治疗或预防HBV和/或HCV感染。
发明详述
除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语具有本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的含义。此外，列出下列定义以举例说明和定义用于描述本发明的各种术语的含义和范围。
定义
术语“C1-6烷基”表示包含1-6个、特别是1-4个碳原子的饱和直链或支链烷基基团，例如甲基、乙基、正-丙基、异丙基、正-丁基、异丁基、叔丁基等。具体的“C1-6烷基”基团是甲基、乙基和正-丙基。
术语“C1-6烷氧基”表示式C1-6烷基-O-的基团。C1-6烷氧基的例子包括但不限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基和叔丁氧基。具体的“C1-6烷氧基”是甲氧基、乙氧基和异丙氧基。更具体的C1-6烷氧基是乙氧基。
术语“卤素”和“卤代”在本文中互换使用并且表示氟、氯、溴或碘。
术语“杂环基”表示具有3至10个环原子的单价饱和或部分不饱和的单环或双环环系，包含1至5个选自N、O和S的环杂原子，其余环原子为碳。在特定的实施方案中，杂环基是具有4至7个环原子的单价饱和单环环系，包含1、2或3个选自N、O和S的环杂原子，其余环原子为碳。单环饱和杂环基的实例是氮杂环丙基、氧杂环丙基、氮杂环丁基、氧杂环丁基、吡咯烷基、二甲基吡咯烷基、乙氧基羰基吡咯烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、吡唑烷基、咪唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、噻唑烷基、哌啶基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、二氧代硫代吗啉基、氮杂环庚烷基、二氮杂环庚烷基、高哌嗪基或氧氮杂环庚烷基。单环饱和杂环基可以进一步被1-3个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素、C1-6烷基和C1-6烷氧基羰基。取代的单环饱和杂环基的实例是4-甲基哌嗪基、二甲基吡咯烷基、乙氧基羰基吡咯烷基、二氟吡咯烷基、氟代(甲基)吡咯烷基。双环饱和杂环基的实例是氮杂双环[3.2.1]辛基、奎宁环基、氧氮杂双环[3.2.1]辛基、氮杂双环[3.3.1]壬基、氧氮杂双环[3.3.1]壬基、硫氮杂双环[3.3.1]壬基、氮杂螺[3.3]庚基和氧氮杂螺[3.3]庚基。部分不饱和杂环基的实例是二氢呋喃基、咪唑啉基、二氢恶唑基、四氢吡啶基和二氢吡喃基。
单独的或在组合中的术语“羰基”表示基团-C(O)-。
术语“C1-6烷基羰基”是指基团C1-6烷基-C(O)-，其中“C1-6烷基”如以上所定义。具体的“C1-6烷基羰基”基团是乙酰基。
术语“对映体”表示彼此为不能重叠的镜像的化合物的两种立体异构体。
术语“非对映异构体”表示具有两个或多个手性中心且其分子彼此不为镜像的立体异构体。非对映异构体具有不同的物理性质，例如熔点、沸点、光谱特性和反应性。
术语“可药用盐”表示不在生物学或其它方面不合需要的盐。可药用盐包括酸和碱加成盐。
术语“可药用酸加成盐”表示与无机酸和有机酸形成的那些可药用盐，所述无机酸为例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、碳酸、磷酸，所述有机酸选自脂族、脂环族、芳族、芳脂族、杂环、羧酸和有机磺酸，例如甲酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、葡糖酸、乳酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、天冬氨酸、抗坏血酸、谷氨酸、邻氨基苯甲酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、双羟萘酸、苯乙酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸和水杨酸。
术语“可药用碱加成盐”表示与有机碱或无机碱形成的那些可药用盐。可接受的无机碱的实例包括钠、钾、铵、钙、镁、铁、锌、铜、锰和铝盐。衍生自可药用有机无毒碱的盐包括如下的盐：伯、仲和叔胺类；取代的胺类，包括天然存在的取代的胺类、环胺类和碱性离子交换树脂，例如异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、2-二乙基氨基乙醇、三甲胺(trimethamine)、二环己基胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因、哈胺(hydrabamine)、胆碱、甜菜碱、乙二胺、葡糖胺、甲基葡糖胺、可可碱、嘌呤类、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶和聚胺树脂。
包含一个或多个手性中心的通式(I)的化合物及其前药可以以外消旋体、非对映异构体混合物或光学活性的单一异构体的形式存在。可以根据已知方法将外消旋体分离成对映体。具体地讲，通过与光学活性的酸例如D-或L-酒石酸、扁桃酸、苹果酸、乳酸或樟脑磺酸反应从外消旋混合物形成可以通过结晶分离的非对映异构体盐。
术语“前药”表示化合物的一种形式或衍生物，其在施用后在体内例如被个体的生物学液体或酶代谢成化合物的药理学活性形式以便产生期望的药理学作用。前药描述在例如“The Organic Chemistry of Drug Design and Drug Action”,Richard B.Silverman,Academic Press,San Diego,2004,第8章：Prodrugs and Drug Delivery Systems,497-558页中。
“药物活性代谢物”是指通过在体内代谢具体的化合物或其盐产生的药理学活性产物。在进入体内后，大部分药物是可以改变其物理性质和生物作用的化学反应的底物。这些代谢转化通常会影响本发明化合物的极性，改变药物在体内分布和从体内排出的方式。然而，在一些情况中，药物的代谢是产生治疗作用所需的。
术语“治疗有效量”表示本发明化合物或分子在施用于个体时产生如下作用的用量：(i)治疗或预防特定疾病、病症或障碍；(ii)减轻、改善或消除特定疾病、病症或障碍的一种或多种症状；或(iii)预防或延缓本文所述的特定疾病、病症或障碍的一种或多种症状的发作。治疗有效量将根据化合物、所治疗的疾病状态、所治疗的疾病严重性、个体的年龄和相对健康状况、施用途径和形式、主治医师或兽医从业人员的判断和其它因素而改变。
术语“药物组合物”表示准备施用于有此需要的哺乳动物、例如人的包含治疗有效量的活性药物成分与可药用赋形剂的混合物或溶液。
TLR7激动剂和前药
本发明涉及式(I)的化合物或其可药用盐、对映体或非对映体，
其中
R1是C1-6烷基；
R2是苄基，所述苄基是未取代的或被一个、两个或三个独立地选自卤素和C1-6烷基的取代基取代；
R3是-NR4R5，其中
R4是C1-6烷基或C1-6烷氧基C1-6烷基；
R5是(C1-6烷基)2NCOOC1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基(苯基)C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基氧基C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6烷基羰基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基或吡咯烷基氨基甲酰氧基C1-6烷基；或者
R4和R5与它们所连接的氮一起形成杂环基；
条件是不包括
6-氨基-9-苄基-2-(丙基磺亚氨酰基)-7-(吡咯烷-1-羰基)嘌呤-8-酮；
6-氨基-9-苄基-7-(哌啶-1-羰基)-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-8-酮；
6-氨基-9-苄基-7-(吗啉-4-羰基)-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-8-酮；
6-氨基-9-苄基-7-(3,3-二甲基吡咯烷-1-羰基)-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-8-酮；
1-[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]吡咯烷-2-甲酸乙基酯；
6-氨基-7-(2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羰基)-9-苄基-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-8-酮；
6-氨基-9-苄基-7-(2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷-6-羰基)-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-8-酮；
6-氨基-9-苄基-7-(3,3-二氟吡咯烷-1-羰基)-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-8-酮；
6-氨基-9-苄基-7-(3-氟-3-甲基-吡咯烷-1-羰基)-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-8-酮；
及其对映体或非对映体。
本发明的另一个实施方案是(ii)式(I)的化合物或其可药用盐、对映体或非对映体，其中
R1是C1-6烷基；
R2是苄基，所述苄基是未取代的或被卤素或C1-6烷基取代；
R3是氮杂环丁基；
被C1-6烷基取代的哌嗪基；
被哌啶基取代的哌啶基；
吡咯烷基；或
-NR4R5，其中
R4是C1-6烷基或C1-6烷氧基C1-6烷基；
R5是(C1-6烷基)2NCOOC1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基(苯基)C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基氧基C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6烷基羰基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基或吡咯烷基氨基甲酰氧基C1-6烷基。
本发明的另一个实施方案是(iii)式(I)的化合物或其可药用盐、对映体或非对映体，其中
R1是乙基或丙基；
R2是苄基、溴苄基、氯苄基、氟苄基或甲基苄基；
R3是氮杂环丁基；
4-甲基哌嗪基；
哌啶基哌啶基；
吡咯烷基；或
-NR4R5，其中
R4是甲基、乙基、丙基或甲氧基乙基；
R5是乙酰基(甲基)氨基乙基、丁基、丁基(甲基)氨基甲酰氧基乙基、二乙基氨基甲酰氧基乙基、乙氧基羰基(甲基)氨基乙基、乙氧基羰基乙基、乙氧基羰基异丁基、乙氧基羰基异戊基、乙氧基羰基甲基、乙氧基羰基氧基乙基、乙氧基羰基(苯基)乙基、乙基、异丁基、异丙氧基羰基异戊基、异丙氧基羰基(苯基)乙基、异丙基、甲氧基羰基(甲基)氨基乙基、甲氧基乙基、甲氧基丙基、丙基、丙基(甲基)氨基甲酰氧基乙基、吡咯烷基氨基甲酰氧基乙基、叔丁氧基羰基(甲基)氨基乙基、叔丁氧基羰基乙基、叔丁氧基羰基异戊基或叔丁氧基羰基(苯基)乙基。
本发明的另一个实施方案是(iii-1)式(I)的化合物或其可药用盐、对映体或非对映体，其中
R1是乙基或丙基；
R2是苄基、氯苄基、氟苄基或甲基苄基；
R3是氮杂环丁基；
4-甲基哌嗪基；
哌啶基哌啶基；
吡咯烷基；或
-NR4R5，其中
R4是甲基、乙基、丙基或甲氧基乙基；
R5是乙酰基(甲基)氨基乙基、丁基、丁基(甲基)氨基甲酰氧基乙基、二乙基氨基甲酰氧基乙基、乙氧基羰基(甲基)氨基乙基、乙氧基羰基乙基、乙氧基羰基异丁基、乙氧基羰基异戊基、乙氧基羰基甲基、乙氧基羰基氧基乙基、乙氧基羰基(苯基)乙基、乙基、异丁基、异丙氧基羰基异戊基、异丙氧基羰基(苯基)乙基、异丙基、甲氧基羰基(甲基)氨基乙基、甲氧基乙基、甲氧基丙基、丙基、丙基(甲基)氨基甲酰氧基乙基、吡咯烷基氨基甲酰氧基乙基、叔丁氧基羰基(甲基)氨基乙基、叔丁氧基羰基乙基、叔丁氧基羰基异戊基或叔丁氧基羰基(苯基)乙基。
本发明的另一个实施方案是(iv)式(I)的化合物或其可药用盐、对映体或非对映体，其中R3是氮杂环丁基、4-甲基哌嗪基、哌啶基哌啶基、吡咯烷基、乙酰基(甲基)氨基乙基(甲基)氨基、二(甲氧基乙基)氨基、丁基(乙基)氨基、丁基(甲基)氨基、丁基(甲基)氨基甲酰氧基乙基(甲基)氨基、二乙基氨基甲酰氧基乙基(甲基)氨基、乙氧基羰基(甲基)氨基乙基(甲基)氨基、乙氧基羰基乙基(甲基)氨基、乙氧基羰基异丁基(甲基)氨基、乙氧基羰基异戊基(甲基)氨基、乙氧基羰基甲基(甲基)氨基、乙氧基羰基氧基乙基(甲基)氨基、乙氧基羰基(苯基)乙基(甲基)氨基、乙基(甲基)氨基、异丁基(甲基)氨基、异丙氧基羰基异戊基(甲基)氨基、异丙氧基羰基(苯基)乙基(甲基)氨基、异丙基(甲基)氨基、甲氧基羰基(甲基)氨基乙基(甲基)氨基、甲氧基乙基(乙基)氨基、甲氧基乙基(甲基)氨基、甲氧基乙基(丙基)氨基、甲氧基丙基(甲基)氨基、丙基(乙基)氨基、丙基(甲基)氨基、丙基(甲基)氨基甲酰氧基乙基(甲基)氨基、吡咯烷基氨基甲酰氧基乙基(甲基)氨基、叔丁氧基羰基(甲基)氨基乙基(甲基)氨基、叔丁氧基羰基乙基(甲基)氨基、叔丁氧基羰基异戊基(甲基)氨基或叔丁氧基羰基(苯基)乙基(甲基)氨基。
本发明的另一个实施方案是(v)式(I)的化合物，其中R1是乙基。
本发明的另一个实施方案是(vi)式(I)的化合物，其中R2是被卤素或C1-6烷基取代的苄基。
本发明的另一个实施方案是(vii)式(I)的化合物，其中R2是溴苄基、氯苄基、氟苄基或甲基苄基。
本发明的另一个实施方案是(vii-1)式(I)的化合物，其中R2是氯苄基、氟苄基或甲基苄基。
本发明的另一个实施方案是(viii)式(I)的化合物，其中R2是溴苄基、氯苄基或氟苄基。
本发明的另一个实施方案是(viii-1)式(I)的化合物，其中R2是氯苄基或氟苄基。
本发明的另一个实施方案是(ix)式(I)的化合物，其中R3是-NR4R5，其中R4是C1-6烷基，R5是C1-6烷基。
本发明的另一个实施方案是(x)式(I)的化合物，其中R3是丙基(甲基)氨基或乙基(甲基)氨基。
本发明的另一个实施方案是(xi)式(I)的化合物或其可药用盐、对映体或非对映体，其中
R1是C1-6烷基；
R2是苄基，所述苄基being取代的by卤素或C1-6烷基；
R3是-NR4R5，其中R4是C1-6烷基、R5是C1-6烷基。
本发明的另一个实施方案是(xii)式(I)的化合物或其可药用盐、对映体或非对映体，其中
R1是乙基；
R2是甲基苄基、溴苄基、氯苄基或氟苄基；
R3是丙基(甲基)氨基或乙基(甲基)氨基。
本发明的另一个实施方案是(xii-1)式(I)的化合物或其可药用盐、对映体或非对映体，其中
R1是乙基；
R2是甲基苄基、氯苄基或氟苄基；
R3是丙基(甲基)氨基或乙基(甲基)氨基。
本发明的另一个实施方案是(xiii)，式(I)的具体化合物是如下化合物：
6-氨基-9-苄基-N-甲基-8-氧代-N-丙基-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-9-苄基-N-(2-甲氧基乙基)-N-甲基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-9-苄基-N-乙基-8-氧代-N-丙基-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-9-苄基-7-[4-(1-哌啶基)哌啶-1-羰基]-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-8-酮；
6-氨基-9-苄基-N-乙基-N-(2-甲氧基乙基)-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-9-苄基-N-丁基-N-乙基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-9-苄基-N-(2-甲氧基乙基)-8-氧代-N-丙基-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-9-苄基-N,N-二(2-甲氧基乙基)-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-7-(氮杂环丁烷-1-羰基)-9-苄基-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-8-酮；
6-氨基-9-苄基-N-异丙基-N-甲基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-9-苄基-7-(4-甲基哌嗪-1-羰基)-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-8-酮；
6-氨基-9-苄基-N-(3-甲氧基丙基)-N-甲基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-9-苄基-N-异丁基-N-甲基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺；
2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]乙酸乙酯；
3-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]丙酸乙酯；
3-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]丙酸叔丁酯；
(2S)-2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]丙酸乙酯；
(2S)-2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]-4-甲基-戊酸叔丁酯；
(2S)-2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]-4-甲基-戊酸异丙酯；
(2S)-2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]-3-甲基-丁酸乙酯；
(2S)-2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]-4-甲基-戊酸乙酯；
(2S)-2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]-3-苯基-丙酸乙酯；
(2S)-2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]-3-苯基-丙酸异丙酯；
(2S)-2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]-3-苯基-丙酸叔丁酯；
N-[2-[乙酰基(甲基)氨基]乙基]-6-氨基-9-苄基-N-甲基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺；
N-[2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸甲酯；
N-[2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯；
N-[2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸乙酯；
N-丁基-N-甲基-氨基甲酸2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]乙酯；
吡咯烷-1-甲酸2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]乙酯；
N-甲基-N-丙基-氨基甲酸2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]乙酯；
N,N-二乙基氨基甲酸2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]乙酯；
2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]乙基乙基碳酸酯；
6-氨基-N-丁基-9-[(4-氯苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-2-[S(S)-丙基磺亚氨酰基]嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-N-丁基-9-[(4-氯苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-2-[S(S)-丙基磺亚氨酰基]嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-N-乙基-N-甲基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-N-甲基-8-氧代-N-丙基-2[S(S)-丙基磺亚氨酰基]-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-N-甲基-8-氧代-N-丙基-2[S(R)-丙基磺亚氨酰基]-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-2-[S(S)-丙基磺亚氨酰基]-9-(对-甲苯基甲基)-7-(吡咯烷-1-羰基)嘌呤-8-酮；
6-氨基-2-[S(R)-丙基磺亚氨酰基]-9-(对-甲苯基甲基)-7-(吡咯烷-1-羰基)嘌呤-8-酮；
6-氨基-N-(2-甲氧基乙基)-N-甲基-8-氧代-2-[S(S)-丙基磺亚氨酰基]-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-N-(2-甲氧基乙基)-N-甲基-8-氧代-2-[S(R)-丙基磺亚氨酰基]-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-N-乙基-N-甲基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-N-丁基-N-甲基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-2-[S(R)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-2-[S(S)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-N-乙基-2[S(S)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-N-乙基-2-[S(R)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-2-[S(S)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-2-[S(R)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-N-乙基-2[S(S)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-N-乙基-2-[S(R)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-2-[S(S)乙基磺亚氨酰基]-9-[(4-氟苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-2-[S(R)乙基磺亚氨酰基]-9-[(4-氟苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-N-乙基-2-(乙基磺亚氨酰基)-9-[(4-氟苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-N-乙基-2-[S(S)-(乙基磺亚氨酰基)]-9-[(4-氟苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-N-乙基-2-[S(R)-(乙基磺亚氨酰基)]-9-[(4-氟苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-9-[(4-溴苯基)甲基]-2-(乙基磺亚氨酰基)-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-2-[S(R)-乙基磺亚氨酰基]-9-[(4-溴苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-2-[S(S)-乙基磺亚氨酰基]-9-[(4-溴苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-9-[(4-溴苯基)甲基]-N-乙基-2-(乙基磺亚氨酰基)-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-9-[(4-溴苯基)甲基]-N-乙基-2-[S(S)-(乙基磺亚氨酰基)]-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺；和
6-氨基-9-[(4-溴苯基)甲基]-N-乙基-2-[S(R)-(乙基磺亚氨酰基)]-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺；
或其可药用盐、对映体或非对映体。
本发明的另一个实施方案是(xiv)，更具体的式(I)化合物是如下化合物：
6-氨基-9-苄基-N-甲基-8-氧代-N-丙基-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-2-[S(R)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-2-[S(S)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-N-乙基-2[S(S)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-N-乙基-2-[S(R)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-2-[S(S)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-2-[S(R)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-N-乙基-2[S(S)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-N-乙基-2-[S(R)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-2-(乙基磺亚氨酰基)-9-[(4-氟苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-2-[S(S)乙基磺亚氨酰基]-9-[(4-氟苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-2-[S(R)乙基磺亚氨酰基]-9-[(4-氟苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-N-乙基-2-(乙基磺亚氨酰基)-9-[(4-氟苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-N-乙基-2-[S(S)-(乙基磺亚氨酰基)]-9-[(4-氟苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-N-乙基-2-[S(R)-(乙基磺亚氨酰基)]-9-[(4-氟苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-9-[(4-溴苯基)甲基]-2-(乙基磺亚氨酰基)-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-2-[S(R)-乙基磺亚氨酰基]-9-[(4-溴苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-2-[S(S)-乙基磺亚氨酰基]-9-[(4-溴苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-9-[(4-溴苯基)甲基]-N-乙基-2-(乙基磺亚氨酰基)-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-9-[(4-溴苯基)甲基]-N-乙基-2-[S(S)-(乙基磺亚氨酰基)]-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺；和
6-氨基-9-[(4-溴苯基)甲基]-N-乙基-2-[S(R)-(乙基磺亚氨酰基)]-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺；
或其可药用盐、对映体或非对映体。
在一些实施方案中，测试本发明化合物并与下列参考化合物进行比较。作为专注于发现和开发用于治疗肝脏疾病的TLR7激动剂的最成功的生物制药公司，Gilead拥有最先进的TLR7激动剂管道，其中的先导化合物如GS-9620已进入II期研究。在US20100143301的实施例49公开的Gilead化合物GS-9620、JP1999193282中公开的化合物S-2和化合物S-3都被选作本申请中的参考化合物：
合成
本发明的化合物可以通过任何常规手段制备。用于合成这些化合物的合适方法以及它们的起始原料在以下流程和实施例中提供。除非另有指明，所有取代基，特别是R1至R14如上所定义。此外，除非另有明确说明，所有反应、反应条件、缩写和符号具有有机化学领域的普通技术人员熟知的含义。
流程1
通过异氰酸酯VII与对甲苯磺酸氨基丙二腈的环化制备式VI化合物。然后通过式VI化合物与苯甲酰基异硫氰酸酯在无机碱如NaOH或KOH的存在下反应合成二环化合物V。在碱如K2CO3、NaH或Cs2CO3的存在下将二环化合物V用烷基卤化物烷基化得到式IV化合物。通过用氧化剂如间氯过氧苯甲酸、脲-过氧化氢加合物和HIO4氧化式IV化合物制备式III化合物。通过将式III化合物用亚胺化试剂例如叠氮化钠在酸例如伊顿试剂或PPA中亚胺化得到式II化合物。通过将式II化合物与氨基甲酰氯在混合碱如吡啶和三乙胺、吡啶和DIPEA、DMAP和三乙胺或DMAP和DIPEA的存在下反应得到式I化合物。
流程2
式II化合物也可以按照流程2制备。
通过式XI化合物与R2NH2反应制备式X化合物。用还原剂如AcOH中的锌或铁粉还原化合物X，得到式IX化合物。式IX化合物与环化试剂如光气、羰基二咪唑、碳酸二乙酯和三光气的环化反应得到式VIII化合物。通过用PMBNH2处理式VIII化合物制备式IVa化合物。通过用酸如CF3COOH将式IVa化合物脱保护，然后用氧化剂如间氯过氧苯甲酸、脲-过氧化氢加合物和HIO4氧化，制备式III化合物。通过将式III化合物用亚胺化试剂例如叠氮化钠在酸例如伊顿试剂或PPA中亚胺化得到式II化合物。
本发明还涉及制备式(I)化合物的方法，包括如下反应:
将式(II)化合物与氨基甲酰氯在混合碱的存在下反应
其中R1和R2如上所定义。
在上述步骤中，混合碱可以是，例如吡啶和三乙胺、吡啶和DIPEA、DMAP和三乙胺或DMAP和DIPEA。
按照上述方法制备的式(I)化合物也是本发明的目的之一。
药物组合物和给药
另一个实施方案提供含有本发明的化合物和治疗上惰性的载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物或药物，以及使用本发明的化合物来制备这些组合物和药物的方法。在一个实施例中，式(I)的化合物可以通过在环境温度下、在适当pH下并以所需的纯度与生理学可接受的载体(即，在所采用的剂量和浓度下对接受者是无毒的载体)混合而配制成盖仑制剂给药形式。制剂的pH主要取决于化合物的具体用途和浓度，但通常优选约3至约8的范围。在一个实施例中，式(I)化合物在pH 5的乙酸盐缓冲液中配制。在另一个实施方案中，式(I)化合物是无菌的。化合物可以例如作为固体或无定形组合物、作为冻干制剂或作为水溶液储存。
组合物以符合良好医学实践的方式进行配制、定剂量和给药。在此上下文中考虑的因素包括被治疗的具体病症、被治疗的具体哺乳动物、个体患者的临床病症、病症的病因、药剂的递送部位、给药方法、给药时间安排和执业医师已知的其他因素。要给药的化合物的“有效量”将受这些考虑的控制，并且是活化TLR7受体并导致INF-α和其它细胞因子产生所需的最低量，其可用于(但不限于)治疗或预防乙型肝炎和/或丙型肝炎病毒感染的患者。
在一个实施例中，每个剂量胃肠外给药的本发明化合物的药物有效量将在约0.1至50mg/kg，或者约0.1至30mg/kg患者体重/天的范围内，其中所使用的化合物的典型初始范围为0.3至15mg/kg/天。在另一个实施方案中，口服单位剂型如片剂和胶囊优选含有约20至约1000mg的本发明化合物。
本发明的化合物可以通过任何合适的方式给药，包括经口、局部(包括含服和舌下)、直肠、阴道、透皮、胃肠外、皮下、腹膜内、肺内、皮内、鞘内和硬膜外及鼻内给药，以及在期望用于局部治疗时，病变内给药。胃肠外输注包括肌肉内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下给药。
本发明的化合物可以以任何方便的给药形式给药，例如片剂、散剂、胶囊、溶液、分散液、混悬剂、糖浆剂、喷雾剂、栓剂、凝胶、乳液、贴剂等。这些组合物可以含有药物制剂中常见的组分，例如稀释剂、载体、pH调节剂、甜味剂、填充剂和其他活性物质。
典型制剂通过混合本发明的化合物和载体或赋形剂进行制备。合适的载体和赋形剂对于本领域技术人员是熟知的，并且详细记载于例如Ansel,Howard C.等人,Ansel’s Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems.Philadelphia:Lippincott,Williams&Wilkins,2004；Gennaro,Alfonso R.等人,Remington:The Science and Practice of Pharmacy.Philadelphia:Lippincott,Williams&Wilkins,2000；和Rowe,Raymond C.Handbook of Pharmaceutical Excipients.Chicago,PharmaceuticalPress,2005。制剂还可以包含一种或多种缓冲剂、稳定剂、表面活性剂、湿润剂、润滑剂、乳化剂、助悬剂、防腐剂、抗氧化剂、遮光剂、助流剂、加工助剂、着色剂、甜味剂、芳香剂、矫味剂、稀释剂和其它公知的添加剂，以便使药物(即本发明的化合物或其药物组合物)具有优美的外观或有助于药物产品(即药物)的生产。
适合的口服剂型的实例是包含约20至1000mg的本发明的化合物、约30至90mg无水乳糖、约5至40mg交联羧甲基纤维素钠、约5至30mg聚乙烯吡咯烷酮(PVP)K30和约1至10mg硬脂酸镁的片剂。首先将粉状成分混合在一起，然后与PVP的溶液混合。可以将所得组合物干燥、制粒、与硬脂酸镁混合并使用常规设备压制成片剂。气雾剂制剂的一个实例可以通过将例如20至1000mg的本发明化合物溶解在合适的缓冲溶液例如磷酸盐缓冲液中，在需要时添加张力剂例如盐如氯化钠而制备。所述溶液可以过滤，例如使用0.2微米滤器过滤，以除去杂质和污染物。
因此，一个实施方案包括药物组合物，其包含式(I)化合物或其可药用盐或对映体或非对映体。
在另一个实施方案中，包括药物组合物，其包含式(I)化合物或其可药用盐或对映体或非对映体，以及可药用载体或赋形剂。
另一个实施方案包括用于治疗乙型肝炎病毒感染的药物组合物，其包含式(I)化合物或其可药用盐或对映体或非对映体。
适应症和治疗方法
本发明提供了用于在有需要的患者中治疗或预防乙型肝炎病毒感染和/或丙型肝炎病毒感染的方法。
本发明还提供了用于在治疗和/或预防乙型肝炎病毒感染和/或丙型肝炎病毒感染中将治疗有效量的式(I)化合物或本发明的其它化合物引入到患者血流中的方法。
本发明的方法特别适合于人类患者。具体而言，本发明的方法和剂量可用于但不限于HBV和/或HCV感染的患者。本发明的方法和剂量还可用于其他进行抗病毒治疗的患者。本发明的预防方法特别适用于有病毒感染风险的患者。这些患者包括，但不限于医护人员，如医生、护士、临终关怀者；军事人员；教师；保育员；旅行至或生活在国外、特别是第三世界地区的患者，包括社会援助工作者、传教士和外交官。最后，所述的方法和组合物包括对难治性患者或对治疗耐受的患者、例如对逆转录酶抑制剂、蛋白酶抑制剂等耐受的患者的治疗。
另一个实施方案包括一种在需要所述治疗的哺乳动物中治疗或预防乙型肝炎病毒感染和/或丙型肝炎病毒感染的方法，所述方法包括给所述哺乳动物施用治疗有效量的式(I)化合物或其对映体、非对映体、前药或可药用盐。
附图说明
图1显示实施例41-B的单晶X射线衍射。
图2显示实施例42-A的单晶X射线衍射。
图3显示实施例43-B的单晶X射线衍射。
图4显示用载体、实施例43-A以10mg/kg QOD和QW处理42天的AAV-HBV感染小鼠的HBV DNA、HBsAg和抗HBs抗体水平。结果表示为平均值±SEM。LLOQ：定量的下限。
图5显示用载体、实施例41-A以1、3、10mg/kg QOD和10mg/kg QW处理42天的AAV-HBV感染小鼠的HBV DNA、HBsAg和抗HBs抗体水平。结果表示为平均值±SEM。LLOQ：定量的下限。
图6显示用载体、实施例42-A以1、3和10mg/kg QOD处理42天的AAV-HBV感染小鼠的HBV DNA、HBsAg和抗HBs抗体水平。结果表示为平均值±SEM。LLOQ：定量的下限。
图7显示用载体、实施例41-B以1、3和10mg/kg QOD处理42天的AAV-HBV感染小鼠的HBV DNA、HBsAg和抗HBs抗体水平。结果表示为平均值±SEM。LLOQ：定量的下限。
实施例
通过参照以下实施例可以更完整地理解本发明。然而，不应将它们视为限定本发明的范围。
缩写
aq. 含水的
BSA: N,O-双(三甲基硅烷基)乙酰胺
CDI: N,N’-羰基二咪唑
DIEPA: N,N-二乙基丙基胺
DBU: 1,8-二氮杂双环十一碳-7-烯
DPPA: 叠氮磷酸二苯酯
EC50: 产生50％该激动剂最大可能响应值的激动剂的摩尔浓度
EDC: N1-((乙基亚氨基)亚甲基)-N3,N3-二甲基丙烷-1,3-二胺
EtOAc或EA: 乙酸乙酯
HATU: (1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]嘧啶3-氧化物六氟磷酸盐)
hr(s): 小时
HPLC: 高效液相色谱
HOBt: N-羟基苯并三唑
MS(ESI): 质谱(电子喷雾电离)
m-CPBA: 3-氯过氧苯甲酸
MTEB: 甲基叔丁基醚
NMP: N-甲基吡咯烷酮
obsd. 实测值
PE: 石油醚
PMB: 对甲氧基苄基
PPA: 多聚磷酸
QOD 每隔一天
QW 每周一次
RT或rt: 室温
sat. 饱和的
TFA: 三氟乙酸
TEA: 三乙胺
V/V 体积比
通用实验条件
中间体和最终化合物通过快速色谱使用以下仪器之一进行纯化：i)Biotage SP1系统和Quad 12/25Cartridge组件；ii)ISCO组合快速色谱仪。硅胶品牌和孔径：i)KP-SIL粒度：40-60μm；ii)CAS注册号：硅胶：63231-67-4，粒度：47-60微米硅胶；iii)来自青岛海洋化工股份有限公司(Qingdao Haiyang Chemical Co.,Ltd)的ZCX，孔：200-300或300-400。
中间体和最终化合物通过使用X BridgeTM Perp C18(5μm,OBDTM30×100mm)柱或SunFireTM Perp C18(5μm,OBDTM 30×100mm)柱的反相柱制备型HPLC纯化。
LC/MS光谱使用Waters UPLC-SQD Mass获得。标准LC/MS条件如下(运行时间3分钟)：
酸性条件：A：0.1％甲酸和1％乙腈的H2O溶液；B：0.1％甲酸的乙腈溶液；
碱性条件：A：0.05％NH3·H2O的H2O溶液；B：乙腈。
质谱(MS)：通常仅报告指示母核质量的离子，并且除非另有说明，引述的质量离子是正质量离子(M+H)+。
NMR谱图使用Bruker Avance 400MHz获得。
所有涉及空气敏感试剂的反应均在氩气氛下进行。除非另有说明，试剂在从商业供应商处获得后不经进一步纯化直接使用。
制备实施例
中间体的制备
中间体AA
N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯
在0℃下，向N-甲基丙-1-胺(5g,68.4mmol)和碳酸氢钠(11.5g,137mmol)在DCM(70mL)中的混合物中滴加二(三氯甲基)碳酸酯(8.11g,27.3mmol)的DCM(30mL)溶液。将混合物室温搅拌2小时然后过滤。将滤液真空浓缩。得到的N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯(7.2g,中间体AA)不经进一步纯化直接用于下一步骤。
中间体AB
N-(2-甲氧基乙基)-N-甲基-氨基甲酰氯
中间体AB按照与中间体AA类似的方法，通过用2-甲氧基-N-甲基-乙胺代替N-甲基丙-1-胺进行制备。得到的N-(2-甲氧基乙基)-N-甲基-氨基甲酰氯(8g,中间体AB)不经进一步纯化直接用于下一步骤。
中间体AC
N-乙基-N-丙基-氨基甲酰氯
中间体AC按照与中间体AA类似的方法，通过用N-乙基丙-1-胺代替N-甲基丙-1-胺进行制备。得到黄色油状的N-乙基-N-丙基-氨基甲酰氯(12.6g,中间体AC)，其不经进一步纯化直接用于下一步骤。
中间体AD
N-乙基-N-(2-甲氧基乙基)氨基甲酰氯
中间体AD按照与中间体AA类似的方法，通过用N-乙基-2-甲氧基乙胺代替N-甲基丙-1-胺进行制备。得到淡黄色油状的粗品N-乙基-N-(2-甲氧基乙基)氨基甲酰氯(2.5g,中间体AD)，其不经进一步纯化直接用于下一步骤。
中间体AE
N-丁基-N-乙基-氨基甲酰氯
中间体AE按照与中间体AA类似的方法，通过用N-乙基丁-1-胺(5g)代替N-甲基丙-1-胺进行制备。得到淡黄色油状的粗品N-丁基-N-乙基-氨基甲酰氯(6.3g,中间体AE)，其不经进一步纯化直接用于下一步骤。
中间体AF
N-(2-甲氧基乙基)-N-丙基-氨基甲酰氯
中间体AF按照与中间体AA类似的方法，通过用N-(2-甲氧基乙基)丙-1-胺(2g,17.1mmol)代替N-甲基丙-1-胺进行制备。得到淡黄色油状的粗品N-(2-甲氧基乙基)-N-丙基-氨基甲酰氯(2.5g,中间体AF)，其不经进一步纯化直接用于下一步骤。
中间体AG
N,N-二(2-甲氧基乙基)氨基甲酰氯
中间体AG按照与中间体AA类似的方法，通过用二(2-甲氧基乙基)胺(2g,15mmol)代替N-甲基丙-1-胺进行制备。得到淡黄色油状的粗产物N,N-二(2-甲氧基乙基)氨基甲酰氯(2.6g,中间体AG)，其不经进一步纯化直接用于下一步骤。
中间体AH
氮杂环丁烷-1-羰基氯
中间体AH按照与中间体AA类似的方法，通过用氮杂环丁烷盐酸盐(10.7g,107mmol)和碳酸氢钠(3当量)代替N-甲基丙-1-胺和碳酸氢钠(2当量)进行制备。得到淡黄色油状的粗品氮杂环丁烷-1-羰基氯(1.5g,中间体AH)，其不经进一步纯化直接用于下一步骤。
中间体AI
N-异丙基-N-甲基-氨基甲酰氯
中间体AI按照与中间体AA类似的方法，通过用N-甲基丙-2-胺(5g,19.4mmol)代替N-甲基丙-1-胺进行制备。得到黄色油状的粗品N-异丙基-N-甲基-氨基甲酰氯(8.6g,中间体AI)，其不经进一步纯化直接用于下一步骤。
中间体AL
N-异丁基-N-甲基-氨基甲酰氯
中间体AL按照与中间体AA类似的方法，通过用N-2-二甲基丙-1-胺(4.8g)代替N-甲基丙-1-胺进行制备。得到淡黄色油状的粗品N-异丁基-N-甲基-氨基甲酰氯(8.1g,中间体AL)，其不经进一步纯化直接用于下一步骤。
中间体AP
2-[氯羰基(甲基)氨基]乙酸乙酯
在0℃下，向三光气(728mg,2.45mmol)的DCM(5mL)溶液中滴加2-(甲基氨基)乙酸乙酯盐酸盐(1.3g,8.46mmol)和吡啶(1mL)的DCM(5mL)溶液。反应混合物变为橙色并出现黄色的沉淀，然后将其升温至室温。搅拌1小时后，向反应混合物中加入HCl水溶液(0.1N,25mL)，分出有机层，用0.1N HCl(10mL)洗涤两次，用盐水(10mL)洗涤，用Na2SO4干燥并真空浓缩得到淡黄色油状2-[氯羰基(甲基)氨基]乙酸乙酯粗品(2.0g,中间体AP)，其不经进一步纯化直接用于下一步骤。
中间体AR
3-[氯羰基(甲基)氨基]丙酸叔丁酯
步骤1：3-(甲基氨基)丙酸叔丁酯(化合物AR-1)的制备
向丙烯酸叔丁酯(3g)的DMF(40mL)溶液中在-45℃下加入甲胺盐酸盐(4.74g,70mmol)和DBU(21.4g,140mmol)。然后将反应温度升至-10℃。将反应混合物在相同的温度下搅拌2.5小时。加入Et2O(200mL)并将形成的混合物用盐水(50mL)洗涤四次。将分离的有机层用Na2SO4干燥并真空浓缩得到淡黄色油状3-(甲基氨基)丙酸叔丁酯(3.5g,化合物AR-1)。
步骤2：3-[氯羰基(甲基)氨基]丙酸叔丁酯(中间体AR)的制备
中间体AR按照与中间体AP类似的方法，通过用3-(甲基氨基)丙酸叔丁酯(3.4g,化合物AR-1)代替2-(甲基氨基)乙酸乙酯盐酸盐进行制备。得到的粗品3-[氯羰基(甲基)氨基]丙酸叔丁酯(3.5g,中间体AR)不经进一步纯化直接用于下一步骤。
中间体AS
(2S)-2-[氯羰基(甲基)氨基]丙酸乙酯
步骤1：(2S)-2-(甲基氨基)丙酸乙酯盐酸盐(化合物AS-1)的制备
在0℃下，向(2S)-2-(甲基氨基)丙酸(1g,9.70mmol)的EtOH(10mL)溶液中在0.5小时内滴加SOCl2(1.50g,12.61mmol)。将反应混合物于25℃搅拌15.5小时，然后用EA(20mL)稀释，用H2O(5mL)和盐水(5mL)洗涤。将有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。得到黄色油状的(2S)-2-(甲基氨基)丙酸乙酯盐酸盐(1.8g,化合物AS-1)，其不经进一步纯化直接用于下一步骤。
步骤2：(2S)-2-(甲基氨基)丙酸乙酯(化合物AS-2)的制备
将(2S)-2-(甲基氨基)丙酸乙酯盐酸盐(1.8g,化合物AS-1)的EA(10mL)溶液用10wt.％NaHCO3水溶液调至pH＝8。将反应混合物于室温下搅拌0.5小时。将有机层用盐水(5mL)洗涤，用硫酸钠干燥并真空浓缩。得到黄色油状的(2S)-2-(甲基氨基)丙酸乙酯(620mg,化合物AS-2)，其不经进一步纯化直接用于下一步骤。
步骤3：(2S)-2-[氯羰基(甲基)氨基]丙酸乙酯(中间体AS)的制备
中间体AS按照与中间体AP类似的方法，通过用(2S)-2-(甲基氨基)丙酸乙酯(260mg,化合物AS-2)代替2-(甲基氨基)乙酸乙酯盐酸盐进行制备。得到黄色油状的粗品(2S)-2-[氯羰基(甲基)氨基]丙酸乙酯(200mg,中间体AS)，其不经进一步纯化直接用于下一步骤。
中间体AT
(2S)-2-[氯羰基(甲基)氨基]-4-甲基-戊酸叔丁酯
步骤1：(2S)-4-甲基-2-(甲基氨基)戊酸叔丁酯(化合物AT-1)的制备
在-78℃下，向DCM(50mL)中鼓入2-甲基丙烯(25g,446mmol)气泡。然后在0℃下向(S)-4-甲基-2-(甲基氨基)戊酸盐酸盐(500mg,2.75mmol)和H2SO4(3.68g,2mL,37.5mmol)的二恶烷(20mL)溶液中加入2-甲基丙烯溶液。将反应混合物在密封管中于室温下搅拌18小时。将反应溶液倒入冰冷的KOH水溶液(8.4g的水(30mL)溶液)中并将形成的混合物用DCM(50mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤两次，用硫酸钠干燥并真空浓缩得到淡黄色油状的(2S)-4-甲基-2-(甲基氨基)戊酸叔丁酯(化合物AT-1)粗产物。
步骤2：(2S)-2-[氯羰基(甲基)氨基]-4-甲基-戊酸叔丁酯(中间体AT)的制备
中间体AT按照与中间体AP类似的方法，通过用(2S)-4-甲基-2-(甲基氨基)戊酸叔丁酯(300mg,化合物AT-1)代替2-(甲基氨基)乙酸乙酯盐酸盐进行制备。得到淡黄色油状的粗品(2S)-2-[氯羰基(甲基)氨基]-4-甲基-戊酸叔丁酯(350mg,中间体AT)，其不经进一步纯化直接用于下一步骤。
中间体AU
(2S)-2-[氯羰基(甲基)氨基]-4-甲基-戊酸异丙酯
步骤1：(2S)-4-甲基-2-(甲基氨基)戊酸异丙酯盐酸盐(化合物AU-1)的制备
向(S)-4-甲基-2-(甲基氨基)戊酸盐酸盐(0.5g)的i-PrOH(7.8g,10mL)溶液中在室温下滴加亚硫酰氯(655mg,402μL)。将形成的混合物搅拌并回流16小时然后真空浓缩。将残余物用饱和NaHCO3水溶液(30mL)碱化并用DCM(50mL)萃取。将有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物用HCl/EtOAc(10mL,1mmol/mL)成盐并浓缩得到白色固体状(2S)-4-甲基-2-(甲基氨基)戊酸异丙酯盐酸盐(510mg,化合物AU-1)。
步骤2：(2S)-2-[氯羰基(甲基)氨基]-4-甲基-戊酸异丙酯(中间体AU)的制备
中间体AU按照与中间体AP类似的方法，通过用(2S)-4-甲基-2-(甲基氨基)戊酸异丙酯盐酸盐(500mg,化合物AU-1)代替2-(甲基氨基)乙酸乙酯盐酸盐进行制备。得到淡黄色油状的粗品(2S)-2-[氯羰基(甲基)氨基]-4-甲基-戊酸异丙酯(650mg,中间体AU)，其不经进一步纯化直接用于下一步骤。
中间体AV
(2S)-2-[氯羰基(甲基)氨基]-3-甲基-丁酸乙酯
步骤1：(2S)-3-甲基-2-(甲基氨基)丁酸乙酯盐酸盐(化合物AV-1)的制备
向(2S)-3-甲基-2-(甲基氨基)丁酸(1.0g,7.6mmol)的EtOH(10mL)溶液中在室温下滴加亚硫酰氯(2.45g,21mmol)。将形成的混合物搅拌并回流16小时然后真空浓缩。将残余物用饱和NaHCO3水溶液(30mL)碱化并用DCM(50mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物溶于HCl/EtOAc(10mL,1M)并浓缩得到白色固体状(2S)-3-甲基-2-(甲基氨基)丁酸乙酯盐酸盐(1.9g,化合物AV-1)。
步骤2：(2S)-2-[氯羰基(甲基)氨基]-3-甲基-丁酸乙酯(中间体AV)的制备
中间体AV按照与中间体AP类似的方法，通过用(2S)-3-甲基-2-(甲基氨基)丁酸乙酯盐酸盐(500mg,化合物AV-1)代替2-(甲基氨基)乙酸乙酯盐酸盐进行制备。得到淡黄色油状的粗品(2S)-2-[氯羰基(甲基)氨基]-3-甲基-丁酸乙酯(600mg,中间体AV)，其不经进一步纯化直接用于下一步骤。
中间体AW
(2S)-2-[氯羰基(甲基)氨基]-4-甲基-戊酸乙酯
步骤1：(2S)-4-甲基-2-(甲基氨基)戊酸乙酯盐酸盐(化合物AW-1)的制备
向(2S)-4-甲基-2-(甲基氨基)戊酸(1g,6.9mmol)的EtOH(10mL)溶液中在室温下滴加亚硫酰氯(1.07g,8.3mmol)。将形成的混合物搅拌并回流16小时然后真空浓缩。将残余物用饱和NaHCO3水溶液(30mL)碱化并用DCM(50mL)萃取。将有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物用HCl/EtOAc(10mL,1mmol/mL)成盐并浓缩得到白色固体状(2S)-4-甲基-2-(甲基氨基)戊酸乙酯盐酸盐(1.8g,化合物AW-1)。
步骤2：(2S)-2-[氯羰基(甲基)氨基]-4-甲基-戊酸乙酯(中间体AW)的制备
中间体AW按照与中间体AP类似的方法，通过用(2S)-4-甲基-2-(甲基氨基)戊酸乙酯盐酸盐(610mg,AW-1)代替2-(甲基氨基)乙酸乙酯盐酸盐进行制备。得到淡黄色油状的粗品(2S)-2-[氯羰基(甲基)氨基]-4-甲基-戊酸乙酯(280mg,中间体AW)，其不经进一步纯化直接用于下一步骤。
中间体AX
(2S)-2-[氯羰基(甲基)氨基]-3-苯基-丙酸乙酯
中间体AX按照与中间体AP类似的方法，通过用(S)-乙基-2-(甲基氨基)-3-苯基丙酸酯代替2-(甲基氨基)乙酸乙酯盐酸盐进行制备。得到淡黄色油状的粗品(2S)-2-[氯羰基(甲基)氨基]-3-苯基-丙酸乙酯(200mg,中间体AX)，其不经进一步纯化直接用于下一步骤。
中间体AY
(2S)-2-[氯羰基(甲基)氨基]-3-苯基-丙酸异丙酯
中间体AY按照与中间体AP类似的方法，通过用(2S)-2-(甲基氨基)-3-苯基-丙酸异丙酯(190mg)代替2-(甲基氨基)乙酸乙酯盐酸盐进行制备。得到淡棕色油状的粗品(2S)-2-[氯羰基(甲基)氨基]-3-苯基-丙酸异丙酯(220mg,中间体AY)，其不经进一步纯化直接用于下一步骤。
中间体AZ
(S)-2-((氯羰基)(甲基)氨基)-3-苯基丙酸叔丁酯
步骤1：(2S)-2-(甲基氨基)-3-苯基-丙酸叔丁酯(化合物AZ-1)的制备
在-78℃下向DCM(50mL)中鼓入2-甲基丙烯(25g,446mmol)气泡。然后在0℃下将2-甲基丙烯溶液加入到(S)-2-(甲基氨基)-3-苯基丙酸(500mg)和H2SO4(3.68g,2mL)的二恶烷(20mL)溶液中。将反应混合物在密封管中于室温下搅拌18小时。将反应混合物倒入冰冷的KOH水溶液(8.4g的水(30mL)溶液)中并将形成的混合物用DCM(50mL)萃取两次。将有机层用盐水(30mL)洗涤两次，用硫酸钠干燥并真空浓缩得到淡黄色油状(2S)-2-(甲基氨基)-3-苯基-丙酸叔丁酯(710mg,化合物AZ-1)。
步骤2：(S)-2-((氯羰基)(甲基)氨基)-3-苯基丙酸叔丁酯(中间体AZ)的制备
中间体AZ按照与中间体AP类似的方法，通过用(2S)-2-(甲基氨基)-3-苯基-丙酸叔丁酯(化合物AZ-1)代替2-(甲基氨基)乙酸乙酯盐酸盐进行制备。得到淡黄色油状的粗品(2S)-2-[氯羰基(甲基)氨基]-3-苯基-丙酸叔丁酯(360mg,中间体AZ)，其不经进一步纯化直接用于下一步骤。
中间体BA
N-[2-[乙酰基(甲基)氨基]乙基]-N-甲基-氨基甲酰氯
步骤1：N-[2-[乙酰基(甲基)氨基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(化合物BA-1)的制备
0℃下，向甲基(2-(甲基氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.13g,6mmol)的吡啶(10mL)溶液滴加乙酸酐(3.06g,30mmol)。然后将溶液在室温下搅拌0.5小时。真空除去溶剂并将残余物在EtOAc(50mL)和饱和NaHCO3水溶液(25mL)之间进行分配。将有机层分离，用盐水(20mL)洗涤，用硫酸钠干燥并真空浓缩得到黄色油状N-[2-[乙酰基(甲基)氨基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(1.28g,化合物BA-1)。
步骤2：N-甲基-N-(2-(甲基氨基)乙基)乙酰胺盐酸盐(化合物BA-2)的制备
将N-[2-[乙酰基(甲基)氨基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(1.1g,化合物BA-1)在HCl/EtOAc(10mL,1N HCl的EtOAc溶液)中的混合物在室温下搅拌2小时，然后将混合物过滤。将收集的固体用EtOAc(5mL)洗涤3次然后真空干燥得到白色固体状N-甲基-N-(2-(甲基氨基)乙基)乙酰胺盐酸盐粗品(460mg,化合物BA-2)。
步骤3：N-[2-[乙酰基(甲基)氨基]乙基]-N-甲基-氨基甲酰氯(中间体BA)的制备
中间体BA按照与中间体AP类似的方法，通过用N-甲基-N-(2-(甲基氨基)乙基)乙酰胺盐酸盐(200mg,化合物BA-2)代替2-(甲基氨基)乙酸乙酯盐酸盐进行制备。得到的粗品N-[2-[乙酰基(甲基)氨基]乙基]-N-甲基-氨基甲酰氯(300mg,中间体BA)不经进一步纯化直接用于下一步骤。
中间体BB
N-[2-[氯羰基(甲基)氨基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸甲酯
步骤1：N-甲基-N-[2-(甲基氨基)乙基]氨基甲酸甲酯(化合物BB-1)的制备
-70℃下，向N,N'-二甲基乙烷-1,2-二胺(10g)的THF(40mL)溶液中在1小时内滴加氯甲酸甲酯(1.92g)。将混合物于25℃搅拌15小时，然后过滤并用水和盐水洗涤。将有机层干燥并浓缩得到黄色残余物，将其通过柱色谱纯化得到无色油状的N-甲基-N-[2-(甲基氨基)乙基]氨基甲酸甲酯(2g,化合物BB-1)。
步骤2：N-[2-[氯羰基(甲基)氨基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸甲酯(中间体BB)的制备
中间体BB按照与中间体AP类似的方法，通过用N-甲基-N-[2-(甲基氨基)乙基]氨基甲酸甲酯(2.0g,化合物BB-1)代替2-(甲基氨基)乙酸乙酯盐酸盐进行制备。得到的粗品N-[2-[氯羰基(甲基)氨基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸甲酯(2.2g,中间体BB)不经进一步纯化直接用于下一步骤。
中间体BC
N-[2-[氯羰基(甲基)氨基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯
步骤1：N-甲基-N-[2-(甲基氨基)乙基]氨基甲酸叔丁酯(化合物BC-1)的制备
0℃下，向N,N’-二甲基乙烷-1,2-二胺(40.4g)的DCM(300mL)溶液中在1小时内滴加Boc2O(10g,10.6mL,45.8mmol)的DCM(100mL)溶液。将反应混合物于室温下搅拌18小时。将有机层用饱和NaHCO3水溶液(50mL)、盐水(50mL)洗涤，用硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过柱色谱纯化得到黄色油状N-甲基-N-[2-(甲基氨基)乙基]氨基甲酸叔丁酯(6.8g,化合物BC-1)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:3.34(br.s.,2H),2.89(s,3H),2.74(t,J＝6.7Hz,2H),2.46(s,3H),1.47(s,9H)。
步骤2：N-[2-[氯羰基(甲基)氨基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(中间体BC)的制备
中间体BC按照与中间体AP类似的方法，通过用N-甲基-N-[2-(甲基氨基)乙基]氨基甲酸叔丁酯(1.15g,化合物BC-1)代替2-(甲基氨基)乙酸乙酯盐酸盐进行制备。得到的粗品N-[2-[氯羰基(甲基)氨基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(1.3g,中间体BC)，其不经进一步纯化直接用于下一步骤。
中间体BD
N-[2-[氯羰基(甲基)氨基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸乙酯
步骤1：N-甲基-N-[2-(甲基氨基)乙基]氨基甲酸乙酯(化合物BD-1)的制备
-70℃下，向N,N'-二甲基乙烷-1,2-二胺(10g)的DCM(40mL)溶液中于1小时内滴加氯甲酸乙酯(2.58g)。将反应混合物于25℃搅拌15小时然后过滤并用水和盐水洗涤。将有机层干燥并真空浓缩。将黄色残余物通过柱色谱纯化得到无色油状的N-甲基-N-[2-(甲基氨基)乙基]氨基甲酸乙酯(2g,化合物BD-1)。
步骤2：N-[2-[氯羰基(甲基)氨基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸乙酯(中间体BD)的制备
中间体BD按照与中间体AA类似的方法，通过用N-甲基-N-[2-(甲基氨基)乙基]氨基甲酸乙酯(化合物BD-1)代替2-(甲基氨基)乙酸乙酯盐酸盐进行制备。得到粗品N-[2-[氯羰基(甲基)氨基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸乙酯(2.2g,中间体BD)，其不经进一步纯化直接用于下一步骤。
中间体BE
N-丁基-N-甲基-氨基甲酸2-[氯羰基(甲基)氨基]乙酯
步骤1：N-(2-羟基乙基)-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(化合物BE-1)的制备
向2-(甲基氨基)乙醇(10g,133.14mmol)的DCM(10mL)溶液中在25℃下加入Boc2O(34.87g,159.77mmol)。将混合物于25℃搅拌16小时然后浓缩。将残余物通过柱色谱纯化得到无色油状的N-(2-羟基乙基)-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(20g,化合物BE-1)。
步骤2：N-丁基-N-甲基-氨基甲酸2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]乙酯(化合物BE-2)的制备
-10℃下，向N-(2-羟基乙基)-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(880mg,化合物BE-1)和Et3N(1g,10.08mmol)的DCM(10mL)溶液中在1小时内滴加N-丁基-N-甲基-氨基甲酰氯(903mg,7.04mmol)。将反应混合物于25℃搅拌15小时然后过滤并用水和盐水洗涤。将有机层干燥并浓缩得到无色油状的N-丁基-N-甲基-氨基甲酸2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]乙酯(2g,化合物BE-2)。
步骤3：N-丁基-N-甲基-氨基甲酸2-(甲基氨基)乙酯盐酸盐(化合物BE-3)的制备
向N-丁基-N-甲基-氨基甲酸2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]乙酯(1g,化合物BE-2)的溶液中加入HCl/EA(40mL,1M)。将反应混合物于0℃搅拌0.5小时，然后升温至25℃并继续搅拌15.5小时。将反应混合物浓缩得到无色油状的N-丁基-N-甲基-氨基甲酸2-(甲基氨基)乙酯盐酸盐(400mg,化合物BE-3)。
步骤4：N-丁基-N-甲基-氨基甲酸2-[氯羰基(甲基)氨基]乙酯(中间体BE)的制备
中间体BE按照与中间体AP类似的方法，通过用N-丁基-N-甲基-氨基甲酸2-(甲基氨基)乙酯盐酸盐(374mg,化合物BE-3)代替2-(甲基氨基)乙酸乙酯盐酸盐进行制备。得到的粗品N-丁基-N-甲基-氨基甲酸2-[氯羰基(甲基)氨基]乙酯(330mg,中间体BE)不经进一步纯化直接用于下一步骤。
中间体BF
吡咯烷-1-甲酸2-[氯羰基(甲基)氨基]乙酯
步骤1：N-(2-羟基乙基)-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(化合物BF-1)的制备
向2-(甲基氨基)乙醇(10g,133.14mmol)的DCM(10mL)溶液中在25℃下加入Boc2O(34.87g,159.77mmol)。将混合物于25℃搅拌16小时。将反应混合物浓缩得到残余物，将其通过柱色谱纯化得到无色油状的N-(2-羟基乙基)-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(20g,化合物BF-1)。
步骤2：吡咯烷-1-甲酸2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]乙酯(化合物BF-2)的制备
0℃下，向N-(2-羟基乙基)-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(300mg,1.71mmol,化合物BF-1)和Et3N(578mg,5.71mmol)的DCM(5mL)溶液中滴加吡咯烷-1-羰基氯(458mg,3.4mmol)0.5小时，然后于25℃搅拌15.5小时。过滤后，将滤液用水和盐水洗涤。将有机层干燥并浓缩得到无色油状的吡咯烷-1-甲酸2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]乙酯(335mg,化合物BF-2)。
步骤3：吡咯烷-1-甲酸2-(甲基氨基)乙酯盐酸盐(化合物BF-3)的制备
将吡咯烷-1-甲酸2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]乙酯(335mg,化合物BF-2)加入到HCl的EA溶液(12.3mL,1M)中并将混合物于0℃搅拌0.5小时，然后于25℃继续搅拌15.5小时。将反应混合物浓缩得到无色油状的吡咯烷-1-甲酸2-(甲基氨基)乙酯盐酸盐(300mg,化合物BF-3)。
步骤4：吡咯烷-1-甲酸2-[氯羰基(甲基)氨基]乙酯(中间体BF)的制备
中间体BF按照与中间体AP类似的方法，通过用吡咯烷-1-甲酸2-(甲基氨基)乙酯盐酸盐(299mg,化合物BF-3)代替2-(甲基氨基)乙酸乙酯盐酸盐进行制备。得到的粗品吡咯烷-1-甲酸2-[氯羰基(甲基)氨基]乙酯(230mg,中间体BF)不经进一步纯化直接用于下一步骤。
中间体BG
N-甲基-N-丙基-氨基甲酸2-[氯羰基(甲基)氨基]乙酯
步骤1：N-(2-羟基乙基)-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(化合物BG-1)的制备
向2-(甲基氨基)乙醇(10g,133.14mmol)的DCM(10mL)溶液中在25℃下加入Boc2O(34.87g,159.77mmol)。将反应混合物于25℃搅拌16小时然后浓缩得到残余物，将其通过柱色谱纯化得到无色油状的N-(2-羟基乙基)-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(20g,化合物BG-1)。
步骤2：N-甲基-N-[2-[甲基(丙基)氨基甲酰基]氧基乙基]氨基甲酸叔丁酯(化合物BG-2)的制备
在0℃下，向N-(2-羟基乙基)-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(265mg,化合物BG-1)和Et3N(1mL,5.71mmol)的DCM(5mL)溶液中滴加N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯(410mg,1.83mmol)0.5小时。将反应混合物于25℃搅拌15.5小时，然后过滤并将滤液用水和盐水洗涤。将有机层干燥并浓缩得到无色油状的N-甲基-N-[2-[甲基(丙基)氨基甲酰基]氧基乙基]氨基甲酸叔丁酯(380mg,化合物BG-2)。
步骤3：N-甲基-N-丙基-氨基甲酸2-(甲基氨基)乙酯盐酸盐(化合物BG-3)的制备
将N-甲基-N-[2-[甲基(丙基)氨基甲酰基]氧基乙基]氨基甲酸叔丁酯(380mg,化合物BG-2)加入到HCl的EA溶液(13.7mL,1M)中。将混合物于0℃搅拌0.5小时。然后将混合物于25℃继续搅拌15.5小时并浓缩得到无色油状的N-甲基-N-丙基-氨基甲酸2-(甲基氨基)乙酯盐酸盐(300mg,化合物BG-3)。
步骤4：N-甲基-N-丙基-氨基甲酸2-[氯羰基(甲基)氨基]乙酯(中间体BG)的制备
中间体BG按照与中间体AP类似的方法，通过用N-甲基-N-丙基-氨基甲酸2-(甲基氨基)乙酯盐酸盐(330mg,化合物BG-3)代替2-(甲基氨基)乙酸乙酯盐酸盐进行制备。得到的N-甲基-N-丙基-氨基甲酸2-[氯羰基(甲基)氨基]乙酯(300mg,中间体BG)不经进一步纯化直接用于下一步骤。
中间体BH
N,N-二乙基氨基甲酸2-[氯羰基(甲基)氨基]乙酯
步骤1：N-(2-羟基乙基)-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(化合物BH-1)的制备
向2-(甲基氨基)乙醇(10g,133.14mmol)的DCM(10mL)溶液中在25℃下加入Boc2O(34.87g,159.77mmol)。将混合物于25℃搅拌16小时然后浓缩，将残余物通过柱色谱纯化得到无色油状的N-(2-羟基乙基)-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(20g,化合物BH-1)。
步骤2：N,N-二乙基氨基甲酸2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]乙酯(化合物BH-2)的制备
在0℃下，向N-(2-羟基乙基)-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(200mg,1.14mmol,化合物BH-1)和Et3N(578mg,5.71mmol)的DCM(5mL)溶液中滴加N,N-二乙基氨基甲酰氯(248mg,1.83mmol)0.5小时然后于25℃搅拌15.5小时。过滤后，将滤液用水和盐水洗涤。将有机层干燥并浓缩得到无色油状的N,N-二乙基氨基甲酸2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]乙酯(313mg,化合物BH-2)。
步骤3：N,N-二乙基氨基甲酸2-(甲基氨基)乙酯盐酸盐(化合物BH-3)的制备
将N,N-二乙基氨基甲酸2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]乙酯(436mg,1.77mmol,化合物BH-2)加入到HCl的EA溶液(17mL,1M)中。将混合物于0℃搅拌0.5小时。然后将混合物于25℃继续搅拌15.5小时并浓缩得到无色油状的N,N-二乙基氨基甲酸2-(甲基氨基)乙酯盐酸盐(230mg,化合物BH-3)。
步骤4：N,N-二乙基氨基甲酸2-[氯羰基(甲基)氨基]乙酯(中间体BH)的制备
中间体BH按照与中间体AP类似的方法，通过用N,N-二乙基氨基甲酸2-(甲基氨基)乙酯盐酸盐(274mg,化合物BH-3)代替2-(甲基氨基)乙酸乙酯盐酸盐进行制备。得到的粗品N,N-二乙基氨基甲酸2-[氯羰基(甲基)氨基]乙酯(250mg,中间体BH)不经进一步纯化直接用于下一步骤。
中间体BI
2-[氯羰基(甲基)氨基]乙基乙基碳酸酯
步骤1：N-(2-羟基乙基)-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(化合物BI-1)的制备
25℃下，向2-(甲基氨基)乙醇(1g,13.31mmol)的DCM(10mL)溶液中加入Boc2O(3.49g,15.98mmol)。将反应混合物于25℃搅拌16小时，然后浓缩得到粗产物，将其通过柱色谱纯化得到无色油状的N-(2-羟基乙基)-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(1.6g,化合物BI-1)。
步骤2：2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]乙基甲基碳酸酯(化合物BI-2)的制备
-10℃下，向N-(2-羟基乙基)-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(1g,化合物BI-1)、DMAP(0.1g)和吡啶(1.15g,11.41mmol)的EA(20mL)溶液中滴加氯甲酸甲酯(1.21g,11.15mmol)。将混合物于-10℃搅拌1小时。将反应混合物过滤并将滤液用5％柠檬酸和盐水洗涤。将有机层干燥并浓缩得到无色油状的2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]乙基甲基碳酸酯(1.22g,化合物BI-2)。
步骤3：乙基2-(甲基氨基)乙基碳酸酯盐酸盐(化合物BI-3)的制备
将2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]乙基甲基碳酸酯(1.22g,4.94mmol,化合物BI-2)加入到HCl的EA溶液(10mL,40mmol)中并将混合物于0℃搅拌0.5小时，然后于25℃继续搅拌15.5小时。将反应混合物浓缩得到乙基2-(甲基氨基)乙基碳酸酯盐酸盐(1.06g,化合物BI-3)。
步骤4：2-[氯羰基(甲基)氨基]乙基乙基碳酸酯(中间体BI)的制备
中间体BI按照与中间体AP类似的方法，通过用乙基2-(甲基氨基)乙基碳酸酯盐酸盐(150mg,中间体BI-3)代替2-(甲基氨基)乙酸乙酯盐酸盐进行制备。得到的粗品2-[氯羰基(甲基)氨基]乙基乙基碳酸酯(145mg,中间体BI)不经进一步纯化直接用于下一步骤。
制备实施例
实施例1
6-氨基-9-苄基-N-甲基-8-氧代-N-丙基-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺
方法A:
步骤1：4-氨基-3-苄基-2-氧代-1H-咪唑-5-甲腈(化合物1a)的制备
向对甲苯磺酸氨基丙二腈(25g,98.5mmol,TCI,目录号:A1119-25G)的无水THF(100mL)溶液中在室温下加入苄基异氰酸酯(13.2g,98.5mmol)和TEA(10.2g,79.0mmol)。在室温下搅拌24小时后，将反应液真空浓缩并将残余物在EtOAc(500mL)和水(250mL)之间进行分配。将分离的有机层用盐水(50mL)洗涤两次，然后用氢氧化钠溶液(50mL,1N)萃取两次。将合并的氢氧化钠层用10wt.％硫酸氢钠溶液中和并用EtOAc萃取。将分离的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。
将残余物在2-异丙氧基丙烷中研磨然后将悬浮液过滤得到黄色固体状4-氨基-3-苄基-2-氧代-1H-咪唑-5-甲腈(15g,化合物1a)。该产物不经进一步纯化直接用于下一步骤。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:215。
步骤2：6-氨基-9-苄基-2-巯基-7H-嘌呤-8-酮(化合物1b)的制备
向4-氨基-3-苄基-2-氧代-1H-咪唑-5-甲腈(15.0g,70.0mmol,化合物1a)的THF(700mL)溶液中滴加苯甲酰基异硫氰酸酯(28.6g,175.1mmol,TCI,目录号:A11596-100G)。于室温下搅拌12小时后，将反应混合物真空浓缩。将残余物在乙醚(100mL)中研磨并过滤收集形成的沉淀。
向得到的沉淀的THF(700mL)溶液中加入氢氧化钠(70mL,2N)。将混合物回流50小时，然后用10wt.％硫酸氢钠水溶液酸化至pH＝3。过滤收集形成的沉淀得到黄色固体状粗品6-氨基-9-苄基-2-巯基-7H-嘌呤-8-酮(8.1g,化合物1b)。该产物不经进一步纯化直接用于下一步骤。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:274。
步骤3：6-氨基-9-苄基-2-(2-丙硫基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物1c)的制备
向6-氨基-9-苄基-2-巯基-7H-嘌呤-8-酮(5.46g,20.0mmol,化合物1b)的DMF溶液中加入碳酸钾(2.76g,20.0mmol)。然后向上述溶液中缓慢加入1-溴丙烷(2.44g,20.0mmol,TCI,目录号:B0638-500G)的DMF(5.0mL)溶液。于室温下搅拌12小时后，将反应混合物倒入水(200mL)中，然后用10wt.％硫酸氢钠水溶液酸化并用EtOAc(100mL)萃取两次。将有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并真空浓缩得到粗产物，将其通过快速硅胶色谱纯化得到白色固体状6-氨基-9-苄基-2-(2-丙硫基)-7H-嘌呤-8-酮(4.8g,化合物1c)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:316。
步骤4：6-氨基-9-苄基-2-丙基亚磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(化合物1d)的制备
向化合物6-氨基-9-苄基-2-(2-丙硫基)-7H-嘌呤-8-酮(2.7g,8.7mmol,化合物1c)在DCM/MeOH(500mL,V/V＝1:1)中的悬浮液中加入3-氯过氧苯甲酸(2.15g,8.7mmol,70％纯度,Aldrich,目录号:273031-100G)。将反应混合物搅拌2小时后，将反应混合物的体积真空浓缩至约50mL。过滤收集形成的沉淀，用甲醇洗涤并干燥得到白色固体状6-氨基-9-苄基-2-丙基亚磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(1.0g,化合物1d)。该产物不经进一步纯化直接用于下一步骤。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:332。
步骤5：6-氨基-9-苄基-2-(丙基磺亚氨酰基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物1e)的制备
向6-氨基-9-苄基-2-丙基亚磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(1.52g,4.6mmol,化合物1d)在伊顿试剂(40mL,7.5wt.％五氧化磷的甲磺酸溶液,Aldrich,目录号:380814-100ML)中的溶液中在50℃下加入叠氮化钠(360mg,5.5mmol)。在该温度下搅拌30分钟后，将反应混合物冷却至室温并倒入饱和碳酸氢钠水溶液中。将反应混合物用n-BuOH(100mL)萃取两次，将有机相真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC进行纯化得到白色固体状6-氨基-9-苄基-2-(丙基磺亚氨酰基)-7H-嘌呤-8-酮(1.2g,化合物1e)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:10.65(br.s.,1H),7.26-7.37(m,5H),6.98(br.s.,2H),4.97(s,2H),4.02(s,1H),3.33(t,J＝7.53Hz,2H),1.55-1.74(m,2H),0.92(t,J＝7.53Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:347。
将化合物1e通过手性HPLC分离得到白色固体状的化合物1e-A(较慢洗脱,500mg)和化合物1e-B(较快洗脱,490mg)。(分离条件:甲醇5％-40％(0.05％DEA)/CO2，ChiralPakAS-3柱)。
化合物1e-A:1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δppm:10.56(s,1H),7.21-7.46(m,5H),7.03(s,2H),4.96(s,2H),4.04(s,1H),3.25-3.33(m,2H),1.59-1.67(m,2H),0.92(t,J＝7.4Hz,3H)。
化合物1e-B:1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δppm:10.57(s,1H),7.23-7.39(m,5H),6.97(s,2H),4.96(s,2H),4.05(s,1H),3.31-3.30(m,2H),1.49-1.74(m,2H),0.91(t,J＝7.4Hz,3H)。
步骤6：6-氨基-9-苄基-N-甲基-8-氧代-N-丙基-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺(实施例1)的制备
向6-氨基-9-苄基-2-(丙基磺亚氨酰基)-7H-嘌呤-8-酮(300mg,化合物1e)、吡啶(329mg,4.2mmol)和DIPEA(538mg,4.2mmol)的NMP(5mL)溶液中在室温下加入N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯(564mg,4.2mmol,中间体AA)。将混合物于室温下搅拌10小时。将反应混合物浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到白色固体状6-氨基-9-苄基-N-甲基-8-氧代-N-丙基-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺(108mg,实施例1)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.45-7.24(m,5H),6.89(s,2H),5.01(s,2H),4.17(s,1H),3.44-3.34(m,2H),3.36-3.34(m,2H),3.10-3.00(m,3H),1.74-1.52(m,4H),1.01-0.72(m,6H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:446。
将实施例1的化合物通过手性HPLC用异丙醇5％-40％(0.05％DEA)/CO2在ChiralPak AD-3柱上分离得到白色固体状的实施例1-A(较慢洗脱,50mg)和实施例1-B(较快洗脱,40mg)。
实施例1-A:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.44-7.24(m,5H),6.89(s,2H),5.01(s,2H),4.17(s,1H),3.44-3.37(m,2H),3.37-3.35(m,2H),3.10-3.00(m,3H),1.74-1.52(m,4H),1.00-0.72(m,6H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:446。
实施例1-B:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.45-7.26(m,5H),6.88(s,2H),5.01(s,2H),4.15(s,1H),3.44-3.36(m,2H),3.34(s,2H),3.10-3.01(m,3H),1.77-1.52(m,4H),1.02-0.67(m,6H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:446。
方法B:制备6-氨基-9-苄基-2-(丙基磺亚氨酰基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物1e)的另一种方法
步骤1：N-苄基-6-氯-5-硝基-2-丙硫基-嘧啶-4-胺(化合物1f)的制备
在-78℃下，向4,6-二氯-5-硝基-2-丙硫基嘧啶(150.0g,559.5mmol)和DIPEA(108.5g,839.2mmol)的THF(1.5L)溶液中缓慢加入苯甲胺(60.0g,559.5mmol)的THF(200mL)溶液。加完后，将混合物升温至25℃并在该温度下搅拌16小时。将形成的混合物用EA(1L)稀释，用水(400mL)洗涤三次然后用盐水(500mL)洗涤。将分离的有机相用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩得到黄色固体状N-苄基-6-氯-5-硝基-2-丙硫基-嘧啶-4-胺(180.0g,化合物1f)，其不经进一步纯化直接用于下一步骤。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:339.1。
步骤2：N4-苄基-6-氯-2-丙硫基-嘧啶-4,5-二胺(化合物1g)的制备
向N-苄基-6-氯-5-硝基-2-丙硫基-嘧啶-4-胺(180g,化合物1f)和HOAc(319g,5.31mol)的THF(3.0L)溶液中于25℃下缓慢加入Zn(174g,2.66mol)。加完后，将混合物于25℃搅拌16小时。将反应液过滤并将滤液用饱和NaHCO3水溶液(800mL)碱化，用EA(400mL)萃取3次，用硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过硅胶色谱纯化得到棕色固体状N4-苄基-6-氯-2-丙硫基-嘧啶-4,5-二胺(125g,化合物1g)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:309.1。
步骤3：9-苄基-6-氯-2-丙硫基-7H-嘌呤-8-酮(化合物1h)的制备
将N-苄基-6-氯-2-(丙硫基)嘧啶-4,5-二胺(72.0g,233.1mmol,化合物1g)和CDI(75.2g,233.1mmol)的THF(800mL)溶液于80℃搅拌16小时。将形成的混合物用EA(400mL)稀释，用水(200mL)洗涤两次然后用盐水(200mL)洗涤。将分离的有机层用Na2SO4干燥，真空浓缩。将残余物用MTBE(200mL)洗涤得到白色固体状9-苄基-6-氯-2-丙硫基-7H-嘌呤-8-酮(58.0g,化合物1h)，其不经进一步纯化直接用于下一步反应。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:335.1。
步骤4：9-苄基-6-[(4-甲氧基苯基)甲基氨基]-2-丙硫基-7H-嘌呤-8-酮(化合物1i)的制备
将9-苄基-6-氯-2-丙硫基-7H-嘌呤-8-酮(58.0g,化合物1h)和PMBNH2(54.7g,398.42mmol)的n-BuOH(600mL)溶液于120℃搅拌20小时。将反应液浓缩并将残余物用MTBE(400mL)洗涤得到白色固体状9-苄基-6-[(4-甲氧基苯基)甲基氨基]-2-丙硫基-7H-嘌呤-8-酮(75g,化合物1i)，其不经进一步纯化直接用于下一步反应。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:436.2。
步骤5：6-氨基-9-苄基-2-丙硫基-7H-嘌呤-8-酮(化合物1c)的制备
将9-苄基-6-[(4-甲氧基苯基)甲基氨基]-2-丙硫基-7H-嘌呤-8-酮(87.0g,化合物1i)的TFA(200mL)溶液于80℃搅拌16小时。将形成的反应混合物浓缩，用饱和NaHCO3水溶液(600mL)碱化。过滤收集形成的沉淀并用(PE/DCM＝2:1,400mL)洗涤得到白色固体状6-氨基-9-苄基-2-丙硫基-7H-嘌呤-8-酮(38.0g,化合物1c)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:316.1。
步骤6：6-氨基-9-苄基-2-丙基亚磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(化合物1d)的制备
向m-CPBA(22.98g,113.2mmol)的THF(50mL)溶液中在0℃下滴加6-氨基-9-苄基-2-丙硫基-7H-嘌呤-8-酮(35.0g,化合物1c)的THF(200mL)悬浮液。加完后，将反应混合物于25℃搅拌0.5小时。将混合物过滤并用MeCN(400mL)、MTBE(500mL)洗涤得到白色固体状6-氨基-9-苄基-2-丙基亚磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(35.1g,化合物1d)，其不经进一步纯化直接用于下一步反应。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:332.1。
步骤7：6-氨基-9-苄基-2-(丙基磺亚氨酰基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物1e)的制备
向6-氨基-9-苄基-2-丙基亚磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(34.0g,化合物1d)在伊顿试剂(170.0mL,7.5wt.％的甲磺酸溶液)中的溶液中于60℃下缓慢加入NaN3(15.34g,253.97mmol)。然后将混合物于60℃搅拌30分钟。将形成的混合物冷却至25℃，倒入冰冷的NH3.H2O(500mL,1mol/L)中，用n-BuOH(100mL)萃取四次并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到6-氨基-9-苄基-2-(丙基磺亚氨酰基)-7H-嘌呤-8-酮(10g,化合物1e)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:10.65(br.s.,1H),7.26-7.37(m,5H),6.98(br.s.,2H),4.97(s,2H),4.02(s,1H),3.33(t,J＝7.53Hz,2H),1.55-1.74(m,2H),0.92(t,J＝7.53Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:347。
实施例2
6-氨基-9-苄基-N-(2-甲氧基乙基)-N-甲基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺
标题化合物按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用N-(2-甲氧基乙基)-N-甲基-氨基甲酰氯(中间体AB)代替N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯(中间体AA)进行制备。得到白色固体状6-氨基-9-苄基-N-(2-甲氧基乙基)-N-甲基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺(120mg,实施例2)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.27-7.39(m,5H),6.89(br.s.,1H),6.78(br.s.,1H),5.00(s,2H),4.16(br.d,J＝4Hz,1H),3.62(br.dd,J＝4,12Hz,2H),3.28-3.42(m,6H),3.12(d,J＝12Hz,3H),3.05(s,1H),1.58-1.72(m,2H),0.93(t,J＝8Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:462。
将实施例2的化合物通过手性HPLC用甲醇5％-40％(0.05％DEA)/CO2在ChiralPakOJ-3柱上分离得到白色固体状的实施例2-A(较快洗脱,33mg)和实施例2-B(较慢洗脱,46mg)。
实施例2-A:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.27-7.39(m,5H),6.89(br.s.,1H),6.78(br.s.,1H),5.00(s,2H),4.16(br.d,J＝4Hz,1H),3.62(br.dd,J＝4,12Hz,2H),3.28-3.42(m,6H),3.12(d,J＝12Hz,3H),3.05(s,1H),1.58-1.72(m,2H),0.93(t,J＝8Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:462。
实施例2-B:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.27-7.39(m,5H),6.89(br.s.,1H),6.78(br.s.,1H),5.00(s,2H),4.16(br.d,J＝4Hz,1H),3.62(br.dd,J＝4,12Hz,2H),3.28-3.42(m,6H),3.12(d,J＝12Hz,3H),3.05(s,1H),1.58-1.72(m,2H),0.93(t,J＝8Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:462。
实施例3
6-氨基-9-苄基-N-乙基-8-氧代-N-丙基-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺
标题化合物按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用N-乙基-N-丙基-氨基甲酰氯(中间体AC)代替N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯(中间体AA)进行制备。得到白色固体状6-氨基-9-苄基-N-乙基-8-氧代-N-丙基-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺(51mg,实施例3)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.27-7.39(m,5H),6.85(br.s.,2H),4.99(s,2H),4.20(br.d,J＝8.0Hz,1H),3.13-3.54(m,4H),1.46-1.72(m,4H),1.30-1.39(m,1H),1.00-1.26(m,6H),0.81-0.95(m,5H),0.73(t,J＝8Hz,1H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:474。
实施例4
6-氨基-9-苄基-7-[4-(1-哌啶基)哌啶-1-羰基]-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-8-酮
标题化合物按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用(1,4'-联哌啶)-1'-羰基氯代替N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯(中间体AA)进行制备。得到白色粉末状6-氨基-9-苄基-7-[4-(1-哌啶基)哌啶-1-羰基]-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-8-酮(55mg,实施例4)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.39-7.27(m,5H),6.97(br.s.,2H),4.99(s,2H),4.20(br.s.,2H),3.85(d,J＝12.5Hz,1H),3.43-3.15(m,3H),2.96(t,J＝12.3Hz,2H),2.56(m,4H),1.83(m,1H),1.79-1.54(m,4H),1.50(br.s.,4H),1.45-1.33(m,3H),0.93(t,J＝7.4Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:541.2。
实施例5
6-氨基-9-苄基-N-乙基-N-(2-甲氧基乙基)-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺
标题化合物按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用N-乙基-N-(2-甲氧基乙基)氨基甲酰氯(中间体AD)代替N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯(中间体AA)进行制备。得到白色粉末状6-氨基-9-苄基-N-乙基-N-(2-甲氧基乙基)-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺(34mg,实施例5)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.39-7.28(m,5H),6.89(br.s.,1H),6.74(br.s.,1H),4.99(s,2H),4.17(d,J＝8.1Hz,1H),3.67(br.s.,2H),3.63-3.51(m,2H),3.50-3.34(m,4H),3.29(s,1H),3.11(s,2H),1.73-1.59(m,2H),1.23-1.07(m,3H),0.93(t,J＝7.5Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:476.3。
实施例6
6-氨基-9-苄基-N-丁基-N-乙基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺
标题化合物按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用N-丁基-N-乙基-氨基甲酰氯(中间体AE)代替N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯(中间体AA)进行制备。得到白色固体状6-氨基-9-苄基-N-丁基-N-乙基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺(51mg,实施例6)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.27-7.39(m,5H),6.85(br.s.,2H),4.99(s,2H),4.20(br.d,J＝8.0Hz,1H),3.13-3.54(m,4H),1.46-1.72(m,4H),1.30-1.39(m,1H),1.00-1.26(m,6H),0.81-0.95(m,5H),0.73(t,J＝8Hz,1H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:474。
实施例7
6-氨基-9-苄基-N-(2-甲氧基乙基)-8-氧代-N-丙基-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺
标题化合物按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用N-乙基-N-(2-甲氧基乙基)氨基甲酰氯(中间体AF)代替N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯(中间体AA)进行制备。得到白色粉末状6-氨基-9-苄基-N-(2-甲氧基乙基)-8-氧代-N-丙基-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺(35mg,实施例7)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.40-7.28(m,5H),6.89(br.s.,1H),6.75(br.s.,1H),5.00(d,J＝5.5Hz,2H),4.24-4.16(m,1H),3.77(br.s.,1H),3.67(br.s.,1H),3.62-3.53(m,1H),3.42-3.27(m,5H),3.23-3.02(m,3H),1.66-1.38(m,4H),0.96-0.70(m,6H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:490.5。
实施例8
6-氨基-9-苄基-N,N-二(2-甲氧基乙基)-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺
标题化合物按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用二(2-甲氧基乙基)氨基甲酰氯(中间体AG)代替N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯(中间体AA)进行制备。得到白色粉末状6-氨基-9-苄基-N,N-二(2-甲氧基乙基)-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺(35mg,实施例8)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.40-7.28(m,5H),6.83(br.s.,2H),4.99(s,2H),3.71(br.s.,3H),3.52-3.27(m,11H),3.09(s,3H),1.73-1.59(m,2H),0.93(t,J＝7.5Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:506。
实施例9
6-氨基-7-(氮杂环丁烷-1-羰基)-9-苄基-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-8-酮
标题化合物按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用氮杂环丁烷-1-羰基氯(中间体AH)代替N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯(中间体AA)进行制备。得到白色粉末状6-氨基-7-(氮杂环丁烷-1-羰基)-9-苄基-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-8-酮(120mg,实施例9)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.02-7.43(m,7H),4.99(s,2H),4.31(t,J＝7.65Hz,2H),4.08-4.23(m,3H),3.34-3.41(m,2H),2.28(m,2H),1.56-1.73(m,2H),0.93(t,J＝7.40Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:430。
实施例10
6-氨基-9-苄基-N-异丙基-N-甲基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺
标题化合物按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用N-异丙基-N-甲基-氨基甲酰氯(中间体AI)代替N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯(中间体AA)进行制备。得到白色固体状6-氨基-9-苄基-N-异丙基-N-甲基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺(97mg,实施例10)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.27-7.39(m,5H),6.87(br.s.,2H),4.99(s,2H),4.38-4.45(m,1H),4.09-4.21(m,1H),3.29-3.43(m,2H),2.89-2.95(m,3H),1.58-1.73(m,2H),1.21(br d,J＝8Hz,6H),0.93(t,J＝8Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:446。
实施例11
6-氨基-9-苄基-7-(4-甲基哌嗪-1-羰基)-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-8-酮
标题化合物按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用4-甲基哌嗪-1-羰基氯代替N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯(中间体AA)进行制备。得到黄色固体状的6-氨基-9-苄基-7-(4-甲基哌嗪-1-羰基)-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-8-酮(59.5mg,实施例11)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.39-7.31(m,5H),6.99(s,2H),4.98(s,2H),4.18(s,1H),3.58-3.49(m,6H),2.42(m,4H),2.22(s,3H),1.66-1.61(m,2H),0.95-0.91(t,J＝7.2Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:473。
实施例12
6-氨基-9-苄基-N-(3-甲氧基丙基)-N-甲基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺
标题化合物按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用N-(3-甲氧基丙基)-N-甲基-氨基甲酰氯代替N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯(中间体AA)进行制备。得到白色固体状的6-氨基-9-苄基-N-(3-甲氧基丙基)-N-甲基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺(92.2mg,实施例12)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.23-7.45(m,5H),6.94(s,2H),4.93-5.08(m,2H),4.19(s,1H),3.30-3.62(m,6H),3.25(s,3H),3.02-3.10(m,3H),1.74-1.90(m,2H),1.55-1.77(m,2H),0.98-0.82(m,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:476.3。
实施例13
6-氨基-9-苄基-N-异丁基-N-甲基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺
标题化合物按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用N-异丁基-N-甲基-氨基甲酰氯(中间体AL)代替N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯(中间体AA)进行制备。得到白色固体状的6-氨基-9-苄基-N-异丁基-N-甲基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺(64mg,实施例13)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.27-7.40(m,5H),6.89(br.s.,2H),5.00(s,2H),4.16(br.s.,1H),3.25-3.44(m,4H),3.07(s,2H),3.03(s,1H),1.87-2.09(m,1H),1.57-1.74(m,2H),0.75-0.99(m,9H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:460。
实施例14
2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]乙酸乙酯
标题化合物按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用2-((氯羰基)(甲基)氨基)乙酸乙酯(中间体AP)代替N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯(中间体AA)进行制备。得到淡黄色粉末状的2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]乙酸乙酯(38mg,实施例14)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.41-7.27(m,5H),6.82(br.s.,1H),5.04-4.95(m,2H),4.35(br.s.,1H),4.28(br.s.,1H),4.23-4.16(m,2H),4.08(q,J＝7.2Hz,1H),3.43-3.28(m,3H),3.15(s,2H),3.08(s,1H),1.71-1.58(m,2H),1.24(t,J＝7.0Hz,2H),1.12(t,J＝7.0Hz,1H),0.93(t,J＝7.4Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:490。
实施例15
3-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]丙酸乙酯
标题化合物按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用3-((氯羰基)(甲基)氨基)丙酸乙酯代替N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯(中间体AA)进行制备。得到白色粉末状的3-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]丙酸乙酯(35mg,实施例15)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.43-7.26(m,5H),6.93(br.s.,2H),4.99(s,2H),4.16(s,1H),4.08(q,J＝7.1Hz,1H),3.99(d,J＝7.0Hz,1H),3.67(br.s.,2H),3.40-3.29(m,2H),3.08(s,2H),2.99(s,1H),2.71(t,J＝6.4Hz,2H),1.74-1.56(m,2H),1.27-1.05(m,3H),0.93(t,J＝7.5Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:504。
实施例16
3-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]丙酸叔丁酯
标题化合物按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用3-[氯羰基(甲基)氨基]丙酸叔丁酯(中间体AR)代替N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯(中间体AA)进行制备。得到白色粉末状的3-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]丙酸叔丁酯(60mg,实施例16)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.41-7.27(m,5H),6.93(br.s.,2H),4.99(s,2H),4.15(s,1H),3.64(br.s.,2H),3.51-3.33(m,2H),3.08(s,2H),2.98(s,1H),2.62(t,J＝6.9Hz,2H),1.71-1.57(m,2H),1.41(s,6H),1.34(s,3H),0.93(t,J＝7.4Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:532。
实施例17
(2S)-2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]丙酸乙酯
标题化合物按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用(2S)-2-[氯羰基(甲基)氨基]丙酸乙酯(中间体AS)代替N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯(中间体AA)进行制备。得到黄色固体状的(2S)-2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]丙酸乙酯(34.1mg,实施例17)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm:7.22-7.49(m,5H),6.78(br.s.,2H),4.93-5.08(m,2H),4.75(br.s.,1H),3.96-4.29(m,3H),3.30-3.46(m,2H),3.09(s,2H),2.93(br.s.,1H),1.55-1.77(m,2H),1.48(d,J＝7.16Hz,3H),1.09-1.29(m,3H),0.94(t,J＝7.44Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:504.2。
实施例18
(2S)-2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]-4-甲基-戊酸叔丁酯
标题化合物按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用(2S)-2-[氯羰基(甲基)氨基]-4-甲基-戊酸叔丁酯(中间体AT)代替N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯(中间体AA)进行制备。得到白色固体状的(2S)-2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]-4-甲基-戊酸叔丁酯(22mg,实施例18)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.42-7.27(m,5H),6.78(br.s.,2H),5.05-4.96(m,2H),4.78(br.s.,1H),4.33(br.s.,1H),3.51-3.37(m,2H),3.01(s,3H),1.75-1.54(m,4H),1.44(s,8H),1.33-1.11(m,2H),0.99-0.82(m,9H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:574.3。
实施例19
(2S)-2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]-4-甲基-戊酸异丙酯
标题化合物按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用(2S)-2-[氯羰基(甲基)氨基]-4-甲基-戊酸异丙酯(中间体AU)代替N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯(中间体AA)进行制备。得到白色粉末状的(2S)-2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]-4-甲基-戊酸异丙酯(43mg,实施例19)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.43-7.27(m,5H),6.75(br.s.,2H),5.05-4.94(m,3H),4.88(br.s.,1H),4.19(br.s.,1H),3.43-3.34(m,2H),3.01(s,3H),1.91(br.s.,1H),1.77-1.56(m,4H),1.25-1.16(m,6H),0.99-0.83(m,9H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:560.3。
实施例20
(2S)-2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]-3-甲基-丁酸乙酯
标题化合物按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用(2S)-2-[氯羰基(甲基)氨基]-3-甲基-丁酸乙酯(中间体AV)代替N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯(中间体AA)进行制备。得到白色粉末状的(2S)-2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]-3-甲基-丁酸乙酯(51.5mg,实施例20)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.23-7.51(m,5H),6.76(br.s.,2H),5.01(br.s.,2H),4.42(br.s.,1H),3.97-4.26(m,3H),3.34-3.45(m,2H),3.12(br.s.,3H),2.24(br.s.,1H),1.65(br.s.,2H),1.13-1.29(m,3H),0.88-1.10(m,9H)。MS实测值(ESI+)[M+H+]:532.2。
实施例21
(2S)-2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]-4-甲基-戊酸乙酯
标题化合物按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用(2S)-2-[氯羰基(甲基)氨基]-4-甲基-戊酸乙酯(中间体AW)代替N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯(中间体AA)进行制备。得到白色粉末状的(2S)-2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]-4-甲基-戊酸乙酯(17.3mg,实施例21)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.26-7.45(m,5H),6.73(br.s.,2H),4.91-5.09(m,3H),4.06-4.25(m,3H),3.34-3.45(m,2H),3.04(br.s.,3H),1.93(br.s.,1H),1.54-1.78(m,4H),1.22(t,J＝7.09Hz,3H),0.77-1.01(m,9H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:546.3。
实施例22
(2S)-2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]-3-苯基-丙酸乙酯
标题化合物按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用(2S)-2-[氯羰基(甲基)氨基]-3-苯基-丙酸乙酯(中间体AX)代替N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯(中间体AA)进行制备。得到白色粉末状的(2S)-2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]-3-苯基-丙酸乙酯(30mg,实施例22)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.42-7.16(m,10H),4.97(s,3H),4.19(q,J＝7.1Hz,2H),3.35-3.15(m,6H),3.10-2.90(m,3H),1.71-1.46(m,2H),1.28-1.18(m,4H),0.97-0.85(m,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:580。
实施例23
(2S)-2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]-3-苯基-丙酸异丙酯
标题化合物按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用异丙基(2S)-2-[氯羰基(甲基)氨基]-3-苯基-丙酸酯(中间体AY)代替N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯(中间体AA)进行制备。得到白色粉末状的(2S)-2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]-3-苯基-丙酸异丙酯(22mg,实施例23)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.35-7.01(m,10H),5.02-4.89(m,3H),3.37-3.17(m,3H),3.02-3.09(m,3H),3.10-2.90(m,3H),1.66-1.62(m,2H),1.22-1.11(m,8H),0.92(t,J＝7.4Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:594。
实施例24
(2S)-2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]-3-苯基-丙酸叔丁酯
标题化合物按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用(2S)-2-[氯羰基(甲基)氨基]-3-苯基-丙酸叔丁酯(中间体AZ)代替N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯(中间体AA)进行制备。得到白色粉末状的(2S)-2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]-3-苯基-丙酸叔丁酯(34mg,实施例24)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.42-7.16(m,10H),5.03-4.90(m,3H),3.68-3.24(m,5H),3.24-3.09(m,2H),3.01(s,3H),1.68-1.57(m,2H),1.43(s,9H),0.99-0.85(m,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:608.3。
实施例25
N-[2-[乙酰基(甲基)氨基]乙基]-6-氨基-9-苄基-N-甲基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺
标题化合物按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用N-[2-[乙酰基(甲基)氨基]乙基]-N-甲基-氨基甲酰氯(中间体BA)代替N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯(中间体AA)进行制备。得到白色粉末状的N-[2-[乙酰基(甲基)氨基]乙基]-6-氨基-9-苄基-N-甲基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺(26.1mg,实施例25)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.43-7.27(m,5H),7.02(br,2H),5.04-4.97(m,2H),4.19-4.13(m,1H),3.57(d,J＝5.5Hz,2H),3.49-3.34(m,2H),3.14(s,1H),3.12-3.02(m,4H),2.86(d,J＝7.5Hz,2H),2.69-2.64(m,1H),2.05(s,1H),1.99(s,1H),1.91-1.83(m,1H),1.70-1.59(m,2H),0.97-0.90(m,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:503.2。
实施例26
N-[2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸甲酯
标题化合物按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用N-[2-[氯羰基(甲基)氨基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸甲酯(中间体BB)代替N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯(中间体AA)进行制备。得到黄色固体状的N-[2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸甲酯(65mg,实施例26)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:7.29-7.49(m,5H),5.63-5.92(m,2H),5.03-5.17(m,2H),3.43-3.69(m,8H),3.13-3.27(m,3H),2.96-3.05(m,2H),2.72(br.s.,1H),1.05(t,J＝7.40Hz,3H),1.87(dd,J＝14.12,6.96Hz,2H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:519.2。
实施例27
N-[2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯
标题化合物按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用N-[2-[氯羰基(甲基)氨基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(中间体BC)代替N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯(中间体AA)进行制备。得到白色粉末状的N-[2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(32mg,实施例27)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.43-7.26(m,5H),6.89(br.s.,2H),4.99(d,J＝5.0Hz,2H),4.16(s,1H),3.55(br.s.,2H),3.48-3.34(m,2H),3.10(s,2H),3.07(s,1H),2.86(d,J＝12.8Hz,2H),2.74(d,J＝9.5Hz,1H),2.70-2.60(m,1H),1.72-1.54(m,2H),1.39(s,6H),1.23(s,2H),1.13(s,2H),0.93(t,J＝7.4Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:562。
实施例28
N-[2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸乙酯
标题化合物按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用N-[2-[氯羰基(甲基)氨基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸乙酯(中间体BD)代替N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯(中间体AA)进行制备。得到黄色固体状的N-[2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸乙酯(87mg,实施例28)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:7.29-7.53(m,5H),5.65-5.90(m,2H),5.02-5.14(m,2H),3.38-4.21(m,9H),3.14-3.26(m,3H),3.00(br.s.,2H),2.73(s,1H),1.76-1.99(m,2H),1.22-1.31(m,3H),1.05(s,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:533.2。
实施例29
N-丁基-N-甲基-氨基甲酸2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]乙酯
标题化合物按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用N-丁基-N-甲基-氨基甲酸2-[氯羰基(甲基)氨基]乙酯(中间体BE)代替N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯(中间体AA)进行制备。得到黄色固体状的N-丁基-N-甲基-氨基甲酸2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]乙酯(19mg,化合物29)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.25-7.48(m,5H),6.96(br.s.,2H),4.99(s,2H),4.06-4.36(m,3H),3.59-3.83(m,1H),3.33-3.49(m,3H),3.07-3.21(m,4H),2.79(s,2H),1.65(br.s.,2H),1.05-1.47(m,6H),0.93(t,J＝7.40Hz,3H),0.70-0.87(m,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:561.2。
实施例30
吡咯烷-1-甲酸2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]乙酯
标题化合物按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用吡咯烷-1-甲酸2-[氯羰基(甲基)氨基]乙酯(中间体BF)代替N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯(中间体AA)进行制备。得到黄色固体状的吡咯烷-1-甲酸2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]乙酯(10.0mg,实施例30)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.26-7.41(m,5H),6.96(br.s.,2H),4.99(s,2H),4.01-4.35(m,4H),3.29-3.47(m,3H),3.23(br.s.,3H),3.03-3.17(m,4H),1.52-1.84(m,6H),0.90–0.96(m,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:545.2。
实施例31
N-甲基-N-丙基-氨基甲酸2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]乙酯
标题化合物按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用N-甲基-N-丙基-氨基甲酸2-[氯羰基(甲基)氨基]乙酯(中间体BG)代替N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯(中间体AA)进行制备。得到黄色固体状的N-甲基-N-丙基-氨基甲酸2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]乙酯(3.7mg,实施例31)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:7.22-7.48(m,5H),5.09-5.22(m,4H),4.55(s,2H),3.38-3.57(m,4H),3.13(s,3H),1.61-1.85(m,4H),1.22-1.41(m,3H),0.88-1.13(m,6H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:547.2。
实施例32
N,N-二乙基氨基甲酸2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]乙酯
标题化合物按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用N,N-二乙基氨基甲酸2-[氯羰基(甲基)氨基]乙酯(中间体BH)代替N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯(中间体AA)进行制备。得到黄色固体状的N,N-二乙基氨基甲酸2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]乙酯(21.7mg,实施例32)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.25-7.41(m,5H),6.96(br.s.,2H),4.99(s,2H),4.08-4.36(m,3H),3.70(br,1H),3.33-3.46(m,3H),3.01-3.24(m,7H),1.55-1.74(m,2H),0.86-1.05(m,9H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:547.2。
实施例33
2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]乙基乙基碳酸酯
标题化合物按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用2-[氯羰基(甲基)氨基]乙基乙基碳酸酯(中间体BI)代替N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯(中间体AA)进行制备。得到黄色固体状的2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]乙基乙基碳酸酯(46mg,实施例33)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:0.82-0.99(m,3H),1.02-1.28(m,3H),1.56-1.76(m,2H),3.05-3.18(m,3H),3.35-3.48(m,3H),3.73(t,J＝5.08Hz,2H),4.08-4.27(m,3H),4.37(br.s.,1H),5.00(s,2H),6.76-7.11(m,2H),7.22-7.45(m,5H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:520。
实施例34-A和实施例34-B
6-氨基-N-丁基-9-[(4-氯苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-2-[S(S)-丙基磺亚氨酰基]嘌呤-7-甲酰胺和6-氨基-N-丁基-9-[(4-氯苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-2-[S(S)-丙基磺亚氨酰基]嘌呤-7-甲酰胺
步骤1：4-氨基-3-[(4-氯苯基)甲基]-2-氧代-1H-咪唑-5-甲腈(化合物34a)的制备
化合物34a按照与实施例1，方法A，步骤1类似的方法，通过用4-氯苄基异氰酸酯代替苄基异氰酸酯进行制备。得到黄色固体状的4-氨基-3-[(4-氯苯基)甲基]-2-氧代-1H-咪唑-5-甲腈(8.0g,化合物34a)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:249。
步骤2：6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-2-巯基-7H-嘌呤-8-酮(化合物34b)的制备
化合物34b按照与实施例1，方法A，步骤2类似的方法，通过用4-氨基-3-[(4-氯苯基)甲基]-2-氧代-1H-咪唑-5-甲腈(化合物34a)代替4-氨基-3-苯基甲基-2-氧代-1H-咪唑-5-甲腈(化合物1a)进行制备。得到黄色固体状的6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-2-巯基-7H-嘌呤-8-酮(6.4g,化合物34b)并且不经进一步纯化直接用于下一步骤。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:308。
步骤3：6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-2-丙硫基-7H-嘌呤-8-酮(化合物34c)的制备
化合物34c按照与实施例1，方法A，步骤3类似的方法，通过用6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-2-巯基-7H-嘌呤-8-酮(化合物34b)代替6-氨基-9-苯基甲基-2-巯基-7H-嘌呤-8-酮(化合物1b)进行制备。得到白色固体状的6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-2-丙硫基-7H-嘌呤-8-酮(800mg,化合物34c)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:350。
步骤4：6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-2-丙基亚磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(化合物34d)的制备
化合物34d按照与实施例1，方法A，步骤4类似的方法，通过用6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-2-丙硫基-7H-嘌呤-8-酮(化合物34c)代替6-氨基-9-苄基-2-丙硫基-7H-嘌呤-8-酮(化合物1c)进行制备。得到白色固体状的6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-2-丙基亚磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(150mg,化合物34d)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:366。
步骤5：6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-2-(丙基磺亚氨酰基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物34e)、6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-2-[S(S)-丙基磺亚氨酰基)-7H-嘌呤-8-酮和6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-2-[S(S)-丙基磺亚氨酰基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物34e-A和化合物34e-B)的制备
化合物34e按照与实施例1，方法A，步骤5类似的方法，通过用6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-2-丙基亚磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(化合物34d)代替6-氨基-9-苄基-2-(2-丙基亚磺酰基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物1d)进行制备。得到白色固体状的6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-2-(丙基磺亚氨酰基)-7H-嘌呤-8-酮(250mg,化合物34e)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:10.60(br.s,1H),7.32-7.42(m,4H),6.98(br.s,2H),4.96(s,2H),4.03(s,1H),3.25-3.41(m,2H),1.56-1.68(m,2H),0.91(t,J＝8Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:381。
将化合物34e通过手性HPLC用甲醇5％-40％(0.05％DEA)/CO2在ChiralPak OJ-3柱上分离得到白色固体状的化合物34e-A(较快洗脱,110mg)和化合物34e-B(较慢洗脱,100mg)。
化合物34e-A:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:10.63(br.s,1H),7.33-7.42(m,4H),6.99(br.s,2H),4.96(s,2H),4.05(br.s,1H),3.26-3.39(m,2H),1.53-1.69(m,2H),0.91(t,J＝7.4Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:381。
化合物34e-B:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:10.63(br.s,1H),7.33-7.42(m,4H),6.99(br.s,2H),4.96(s,2H),4.05(br.s,1H),3.26-3.40(m,2H),1.54-1.69(m,2H),0.91(t,J＝7.5Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:381。
步骤6:6-氨基-N-丁基-9-[(4-氯苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-2-[S(S)-丙基磺亚氨酰基]嘌呤-7-甲酰胺和6-氨基-N-丁基-9-[(4-氯苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-2-[S(S)-丙基磺亚氨酰基]嘌呤-7-甲酰胺(实施例34-A和实施例34-B)
实施例34-A按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用化合物34e-A和N-丁基-N-甲基-氨基甲酰氯代替6-氨基-9-苄基-2-(丙基磺亚氨酰基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物1e)和N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯(中间体AA)进行制备。
实施例34-A(160mg):1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.37-7.45(m,4H),6.91(br.s.,2H),4.99(s,2H),4.17(s,1H),3.28-3.40(m,4H),3.05(s,2H),3.02(s,1H),1.49-1.70(m,4H),1.15-1.37(m,2H),0.89-0.94(m,5H),0.76(t,J＝8Hz,1H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:494。
实施例34-B(167mg)按照与实施例34-A类似的方法，通过用化合物34e-B代替化合物34e-A进行制备。
实施例34-B:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.36-7.45(m,4H),6.91(br.s.,2H),4.99(s,2H),4.17(s,1H),3.28-3.41(m,4H),3.05(s,2H),3.02(s,1H),1.50-1.71(m,4H),1.15-1.37(m,2H),0.89-0.94(m,5H),0.76(t,J＝7.4Hz,1H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:494。
实施例35
6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-N-乙基-N-甲基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺
标题化合物按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-2-(丙基磺亚氨酰基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物34e)和N-乙基-N-甲基-氨基甲酰氯代替6-氨基-9-苄基-2-(丙基磺亚氨酰基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物1e)和N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯(中间体AA)进行制备。得到白色固体状的6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-N-乙基-N-甲基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺(60mg,实施例35)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.40(s,4H),6.91(br s,2H),4.99(s,2H),4.16(s,1H),3.34-3.44(m,4H),3.05(s,2H),3.01(s,1H),1.58-1.67(m,2H),1.18(t,J＝8.0Hz,3H),0.92(t,J＝8.0Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:466。
实施例36-A和实施例36-B
6-氨基-N-甲基-8-氧代-N-丙基-2[S(S)-丙基磺亚氨酰基]-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺和6-氨基-N-甲基-8-氧代-N-丙基-2[S(R)-丙基磺亚氨酰基]-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺
步骤1：6-氯-5-硝基-2-丙硫基-N-(对-甲苯基甲基)嘧啶-4-胺(化合物36a)的制备
化合物36a按照与实施例1，方法B，步骤1类似的方法，通过用对-甲苯基甲基胺代替苯甲胺进行制备。得到白色固体状的6-氯-5-硝基-2-丙硫基-N-(对-甲苯基甲基)嘧啶-4-胺(3.9g,化合物36a)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:353。
步骤2：6-氯-2-丙硫基-N4-(对-甲苯基甲基)嘧啶-4,5-二胺(化合物36b)的制备
化合物36b按照与实施例1，方法B，步骤2类似的方法，通过用6-氯-5-硝基-2-丙硫基-N-(对-甲苯基甲基)嘧啶-4-胺(化合物36a)代替N-苄基-6-氯-5-硝基-2-丙硫基-嘧啶-4-胺(化合物1f)进行制备。得到白色固体状的6-氯-2-丙硫基-N4-(对-甲苯基甲基)嘧啶-4,5-二胺(2.2g,化合物36b)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:323。
步骤3：6-氯-2-丙硫基-9-(对-甲苯基甲基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物36c)的制备
化合物36c按照与实施例1，方法B，步骤3类似的方法，通过用6-氯-2-丙硫基-N4-(对-甲苯基甲基)嘧啶-4,5-二胺(化合物36b)代替N-苄基-6-氯-2-(丙硫基)嘧啶-4,5-二胺(化合物1g)进行制备。得到白色固体状的6-氯-2-丙硫基-9-(对-甲苯基甲基)-7H-嘌呤-8-酮(2.2g,化合物36c)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:349。
步骤4：6-[(4-甲氧基苯基)甲基氨基]-2-丙硫基-9-(对-甲苯基甲基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物36d)的制备
化合物36d按照与实施例1，方法B，步骤4类似的方法，通过用6-氯-2-丙硫基-9-(对-甲苯基甲基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物36c)代替9-苄基-6-氯-2-丙硫基-7H-嘌呤-8-酮(化合物1h)进行制备。得到白色固体状的6-[(4-甲氧基苯基)甲基氨基]-2-丙硫基-9-(对-甲苯基甲基)-7H-嘌呤-8-酮(2.0g,化合物36d)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:450。
步骤5：6-氨基-2-丙硫基-9-(对-甲苯基甲基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物36e)的制备
化合物36e按照与实施例1，方法B，步骤5类似的方法，通过用6-[(4-甲氧基苯基)甲基氨基]-2-丙硫基-9-(对-甲苯基甲基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物36d)代替6-氨基-9-苄基-2-丙硫基-7H-嘌呤-8-酮(化合物1i)进行制备。得到白色固体状的6-氨基-2-丙硫基-9-(对-甲苯基甲基)-7H-嘌呤-8-酮(1.0g,化合物36e)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:330。
步骤6：6-氨基-2-丙基亚磺酰基-9-(对-甲苯基甲基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物36f)的制备
化合物36f按照与实施例1，方法B，步骤6类似的方法，通过用6-氨基-2-丙硫基-9-(对-甲苯基甲基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物36e)代替6-氨基-9-苄基-2-(2-丙硫基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物1c)进行制备。得到白色固体状的6-氨基-2-丙基亚磺酰基-9-(对-甲苯基甲基)-7H-嘌呤-8-酮(220mg,化合物36f)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:345。
步骤7：6-氨基-2-(丙基磺亚氨酰基)-9-(对-甲苯基甲基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物36g)的制备
化合物36g按照与实施例1，方法B，步骤7类似的方法，通过用6-氨基-2-丙基亚磺酰基-9-(对-甲苯基甲基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物36f)代替6-氨基-9-苄基-2-丙基亚磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(化合物1d)进行制备。得到白色固体状的6-氨基-2-(丙基磺亚氨酰基)-9-(对-甲苯基甲基)-7H-嘌呤-8-酮(127mg,化合物36g)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:10.67(br.s.,1H),7.23(d,J＝8.0Hz,2H),7.13(d,J＝8.0Hz,2H),6.98(br.s.,2H),4.91(s,2H),4.05(s,1H),3.34-3.27(m,2H),2.26(s,3H),1.67-1.62(m,2H),0.92(t,J＝8.0Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:361。
将化合物36g通过手性HPLC用30％异丙醇(0.05％DEA)/CO2在ChiralPak AD-3柱上分离得到白色固体状的化合物36g-A(较快洗脱,50mg)和化合物36g-B(较慢洗脱,49mg)。
化合物36g-A:1H NMR:(400MHz,DMSO-d6)δppm:10.51(s,1H),7.22(d,J＝8.0Hz,2H),7.12(d,J＝8.0Hz,2H),7.00(s,2H),4.91(s,2H),4.03(s,1H),3.35-3.31(m,2H),2.26(s,3H),1.70-1.58(m,2H),0.93(t,J＝7.40Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:361。
化合物36g-B:1H NMR:(400MHz,DMSO-d6)δppm:10.54(s,1H),7.23(d,J＝8.0Hz,2H),7.13(d,J＝8.0Hz,2H),6.97(s,2H),4.91(s,2H),4.04(s,1H),3.34-3.30(m,2H),2.26(s,3H),1.72-1.57(m,2H),0.93(t,J＝7.40Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:361。
步骤8：6-氨基-N-甲基-8-氧代-N-丙基-2[S(S)-丙基磺亚氨酰基]-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺和6-氨基-N-甲基-8-氧代-N-丙基-2[S(R)-丙基磺亚氨酰基]-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺(实施例36-A和实施例36-B)的制备
实施例36-A按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用化合物36g-A代替6-氨基-9-苄基-2-(丙基磺亚氨酰基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物1e)进行制备。得到白色固体状的实施例36-A(108mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.27(d,J＝8Hz,2H),7.14(d,J＝8Hz,2H),6.87(br.s.,2H),4.95(s,2H),4.15(s,1H),3.33-3.57(m,4H),3.05(s,2H),3.02(s,1H),2.26(s,3H),1.52-1.73(m,4H),0.75-0.97(m,6H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:460。
实施例36-B按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用化合物36g-B代替6-氨基-9-苄基-2-(丙基磺亚氨酰基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物1e)进行制备。实施例36-B(125mg):1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.27(d,J＝8Hz,2H),7.14(d,J＝8Hz,2H),6.87(br.s.,2H),4.95(s,2H),4.15(s,1H),3.33-3.57(m,4H),3.05(s,2H),3.02(s,1H),2.26(s,3H),1.52-1.73(m,4H),0.75-0.97(m,5H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:460。
实施例37-A和实施例37-B
6-氨基-2-[S(S)-丙基磺亚氨酰基]-9-(对-甲苯基甲基)-7-(吡咯烷-1-羰基)嘌呤-8-酮和6-氨基-2-[S(R)-丙基磺亚氨酰基]-9-(对-甲苯基甲基)-7-(吡咯烷-1-羰基)嘌呤-8-酮
实施例37-A按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用化合物36g-A和吡咯烷-1-羰基氯代替6-氨基-9-苄基-2-(丙基磺亚氨酰基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物1e)和N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯(中间体AA)进行制备。
得到白色固体状的实施例37-A(390mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.31-7.11(m,4H),7.04(s,2H),4.95(s,2H),4.15(s,1H),3.65-3.47(m,4H),3.37(m,2H),2.27(s,3H),1.97-1.81(m,4H),1.71-1.59(m,2H),0.94(t,J＝7.4Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:458.2。
实施例37-B(125mg)按照与实施例37-A类似的方法，通过用化合物36g-B代替化合物36g-A进行制备。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.28-7.14(m,4H),7.04(s,2H),4.95(s,2H),4.15(s,1H),3.65-3.47(m,4H),3.37(m,2H),2.27(s,3H),1.93-1.84(m,4H),1.65-1.60(m,2H),0.95(t,J＝7.4Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:458.3。
实施例38-A和实施例38-B
6-氨基-N-(2-甲氧基乙基)-N-甲基-8-氧代-2-[S(S)-丙基磺亚氨酰基]-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺和6-氨基-N-(2-甲氧基乙基)-N-甲基-8-氧代-2-[S(R)-丙基磺亚氨酰基]-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺
实施例38-A按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用化合物36g-A和N-(2-甲氧基乙基)-N-甲基-氨基甲酰氯(中间体AB)代替6-氨基-9-苄基-2-(丙基磺亚氨酰基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物1e)和N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯(中间体AA)进行制备。
得到白色固体状的实施例38-A(57.8mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.26(d,J＝7.6Hz,2H),7.14(d,J＝7.6Hz,2H),6.89-6.78(m,2H),4.95(s,2H),4.18(s,1H),3.62-3.58(m,2H),3.43-3.37(m,2H),3.30-3.10(m,3H),3.09-3.08(m,3H),3.08-3.05(m,2H),2.27(s,3H),1.77-1.54(m,2H),0.95(t,J＝7.4Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:476.3。
实施例38-B(46.6mg)按照与实施例38-A类似的方法，通过用化合物36g-B代替化合物36g-A进行制备。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.26(d,J＝7.6Hz,2H),7.14(d,J＝7.6Hz,2H),6.89-6.78(m,2H),4.95(s,2H),4.18(s,1H),3.62-3.58(m,2H),3.43-3.37(m,2H),3.30-3.10(m,3H),3.09-3.08(m,3H),3.08-3.05(m,2H),2.27(s,3H),1.77-1.54(m,2H),0.95(t,J＝7.4Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:476.3。
实施例39
6-氨基-N-乙基-N-甲基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺
标题化合物按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用N-乙基-N-甲基-氨基甲酰氯和6-氨基-2-(丙基磺亚氨酰基)-9-(对-甲苯基甲基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物36g)代替N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯(中间体AA)和6-氨基-9-苄基-2-(丙基磺亚氨酰基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物1e)进行制备。得到淡黄色固体状的6-氨基-N-乙基-N-甲基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺(141.8mg,实施例39)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.26(d,J＝7.9Hz,2H),7.15(d,J＝7.9Hz,2H),6.89(s,2H),4.95(s,2H),4.24-4.07(m,1H),3.52-3.35(m,4H),3.10-2.95(m,3H),2.26(s,3H),1.77-1.55(m,2H),1.24-1.10(m,3H),0.95(t,J＝7.4Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:446.1。
实施例40
6-氨基-N-丁基-N-甲基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺
标题化合物按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用6-氨基-2-(丙基磺亚氨酰基)-9-(对-甲苯基甲基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物36g)和N-丁基-N-甲基-氨基甲酰氯代替6-氨基-9-苄基-2-(丙基磺亚氨酰基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物1e)和N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯(中间体AA)进行制备。得到白色固体状的6-氨基-N-丁基-N-甲基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺(32mg,实施例40)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.28-7.14(m,4H),6.88(s,2H),4.95(s,2H),4.16(s,1H),3.41-3.36(m,2H),3.10-2.99(m,3H),2.53-2.51(m,2H),2.27(s,3H),1.71-1.63(m,2H),1.62-1.51(m,2H),1.42-1.26(m,2H),0.97-0.74(m,6H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:474.3。
实施例41-A和实施例41-B
6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-2-[S(R)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺(实施例41-A)和6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-2-[S(S)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺(实施例41-B)
步骤1：6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-2-乙硫基-7H-嘌呤-8-酮(化合物41a)的制备
化合物41a按照与实施例1，方法A，步骤3类似的方法，通过用碘乙烷和6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-2-巯基-7H-嘌呤-8-酮(化合物34b)代替溴丙烷和6-氨基-9-苯基甲基-2-巯基-7H-嘌呤-8-酮(化合物1b)进行制备。得到白色固体状的6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-2-乙硫基-7H-嘌呤-8-酮(2.5g,化合物41a)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:336。
步骤2：6-氨基-9-(4-氯苄基)-2-乙基亚磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(化合物41b)的制备
化合物41b按照与实施例1，方法A，步骤4类似的方法，通过用6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-2-乙硫基-7H-嘌呤-8-酮(化合物41a)代替6-氨基-9-苄基-2-丙硫基-7H-嘌呤-8-酮(化合物1c)进行制备。得到白色固体状的6-氨基-9-(4-氯苄基)-2-乙基亚磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(1.94g,化合物41b)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:352。
步骤3：6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-2-(乙基磺亚氨酰基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物41c)的制备
化合物41c按照与实施例1，方法A，步骤5类似的方法，通过用6-氨基-9-(4-氯苄基)-2-乙基亚磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(化合物41b)代替6-氨基-9-苄基-2-(2-甲基亚磺酰基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物1d)进行制备。得到白色固体状的6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-2-(乙基磺亚氨酰基)-7H-嘌呤-8-酮(217mg,实施例41c)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:10.61(s,1H),7.42-7.35(m,4H),6.98(s,2H),4.96(s,2H),4.05(s,1H),3.42-3.37(m,2H),1.16(t,J＝7.4Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:367.0。
将化合物41c通过手性HPLC用甲醇5％-40％(0.05％DEA)/CO2在ChiralPak IC-3柱上分离得到白色固体状的化合物41c-A(较快洗脱,31.8mg)和化合物41c-B(较慢洗脱,10mg)。
化合物41c-A:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:10.76(s,1H),7.45-7.33(m,4H),7.01(s,2H),4.96(s,2H),4.03(s,1H),3.40-3.34(m,2H),1.17(t,J＝7.4Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:367.0。
化合物41c-B:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:10.70(s,1H),7.46-7.28(m,4H),7.01(s,2H),4.96(s,2H),4.03(s,1H),3.44-3.36(m,2H),1.17(t,J＝7.4Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:367.0。
步骤4:6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-2-[S(R)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺(实施例41-A)和6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-2-[S(S)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺(实施例41-B)
实施例41-A按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用化合物41c-B代替6-氨基-9-苄基-2-(丙基磺亚氨酰基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物1e)进行制备。得到白色固体状的6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-2-[S(R)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺(实施例41-A,78mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.43-7.41(m,4H),6.90(s,2H),5.00(s,2H),4.19(s,1H),3.46-3.39(m,2H),3.39-3.38(m,2H),3.09-2.99(m,3H),1.69-1.52(m,2H),1.19(t,J＝7.28Hz,3H),0.95-0.66(m,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:466.1。
实施例41-B(125mg)按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用化合物41c-A代替6-氨基-9-苄基-2-(丙基磺亚氨酰基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物1e)进行制备。得到白色固体状的6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-2-[S(S)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺(实施例41-B,38mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.43-7.41(m,4H),6.90(s,2H),5.00(s,2H),4.20(s,1H),3.46-3.41(m,2H),3.40-3.39(m,2H),3.10-3.00(m,3H),1.69-1.50(m,2H),1.24-1.12(m,3H),0.93-0.73(m,3H).(MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:466.2。
实施例41-B的立体化学通过单晶X射线衍射进行测定并如图1所示。
实施例42-A和实施例42-B
6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-N-乙基-2[S(S)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺(实施例42-A)和6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-N-乙基-2-[S(R)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺(实施例42-B)
实施例42-A按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用化合物41c-A和N-乙基-N-甲基-氨基甲酰氯代替6-氨基-9-苄基-2-(丙基磺亚氨酰基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物1e)和N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯(中间体AA)进行制备。得到白色固体状的6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-N-乙基-2[S(S)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺(实施例42-A,40mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.43-7.41(m,4H),6.90(s,2H),4.99(s,2H),4.18(s,1H),3.48-3.40(m,2H),3.39(s,2H),3.05–3.01(m,3H),1.20-1.14(m,6H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:452.2。
实施例42-B按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用化合物41c-B和N-乙基-N-甲基-氨基甲酰氯代替6-氨基-9-苄基-2-(丙基磺亚氨酰基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物1e)和N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯(中间体AA)进行制备。得到白色固体状的6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-N-乙基-2-[S(R)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺(实施例42-B,38mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.43-7.41(m,4H),6.91(s,2H),4.98(s,2H),4.19(s,1H),3.48-3.40(m,2H),3.39(s,2H),3.09-2.97(m,3H),1.23-1.11(m,6H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:452.2。
实施例42-A的立体化学通过单晶X射线衍射进行测定并如图2所示。
实施例43-A和实施例43-B
6-氨基-2-[S(R)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺(实施例43-A)和6-氨基-2-[S(S)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺(实施例43-B)
步骤1：4-氨基-2-氧代-3-(对-甲苯基甲基)-1H-咪唑-5-甲腈(化合物43a)的制备
化合物43a按照与实施例1，方法A，步骤1类似的方法，通过用4-甲基苄基异氰酸酯代替苄基异氰酸酯进行制备。得到灰色固体状的4-氨基-2-氧代-3-(对-甲苯基甲基)-1H-咪唑-5-甲腈(26.6g,化合物43a)并且不经进一步纯化直接用于下一步骤。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:229.2。
步骤2：6-氨基-9-(对-甲苯基甲基)-2-巯基-7H-嘌呤-8-酮(化合物43b)的制备
化合物43b按照与实施例1，方法A，步骤2类似的方法，通过用4-氨基-2-氧代-3-(对-甲苯基甲基)-1H-咪唑-5-甲腈(化合物43a)代替4-氨基-3-苄基-2-氧代-1H-咪唑-5-甲腈(化合物1a)进行制备。得到黄色固体状的6-氨基-9-(对-甲苯基甲基)-2-巯基-7H-嘌呤-8-酮(20.0g,化合物43b)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:288。
步骤3：6-氨基-2-乙硫基-9-(对-甲苯基甲基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物43c)的制备
化合物43c按照与实施例1，方法A，步骤3类似的方法，通过用6-氨基-9-(对-甲苯基甲基)-2-巯基-7H-嘌呤-8-酮(化合物43b)和碘乙烷代替6-氨基-9-苄基-2-巯基-7H-嘌呤-8-酮(化合物1b)和溴丙烷进行制备。得到黄色固体状的6-氨基-2-乙硫基-9-(对-甲苯基甲基)-7H-嘌呤-8-酮(13g,化合物43c)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:316。
步骤4：6-氨基-2-乙基亚磺酰基-9-(对-甲苯基甲基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物43d)的制备
化合物43d按照与实施例1，方法A，步骤4类似的方法，通过用6-氨基-2-乙硫基-9-(对-甲苯基甲基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物43c)代替6-氨基-9-苄基-2-甲硫基-7H-嘌呤-8-酮(化合物1c)进行制备。得到黄色固体状的6-氨基-2-乙基亚磺酰基-9-(对-甲苯基甲基)-7H-嘌呤-8-酮(3.5g,化合物43d)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:332。
步骤5：6-氨基-2-(乙基磺亚氨酰基)-9-(对-甲苯基甲基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物43e)的制备
化合物43e按照与实施例1，方法A，步骤5类似的方法，通过用6-氨基-2-乙基亚磺酰基-9-(对-甲苯基甲基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物43d)代替6-氨基-9-苄基-2-甲基亚磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(化合物1d)进行制备。得到黄色固体状的6-氨基-2-(乙基磺亚氨酰基)-9-(对-甲苯基甲基)-7H-嘌呤-8-酮(530mg,化合物43e)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:10.53(s,1H),7.24(d,J＝8.03Hz,2H),7.13(d,J＝8.03Hz,2H),6.94(br.s.,2H),4.91(s,2H),4.03(s,1H),3.36-3.41(m,2H),2.26(s,3H),1.18(t,J＝7.28Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:347。
将化合物43e通过手性HPLC用甲醇5％-40％(0.05％DEA)/CO2在ChiralPak AD-3柱上分离得到白色固体状的化合物43e-A(较快洗脱,56.8mg)和化合物43e-B(较慢洗脱,56.7mg)。
化合物43e-A:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:10.52(br.s.,1H),7.23(d,J＝8.0Hz,2H),7.13(d,J＝7.9Hz,2H),6.94(br.s.,2H),4.90(s,2H),4.03(s,1H),3.42-3.33(m,2H),2.25(s,3H),1.17(t,J＝7.3Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:347。
化合物43e-B:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:10.56(br.s.,1H),7.23(d,J＝8.0Hz,2H),7.13(d,J＝8.0Hz,2H),6.95(br.s.,2H),4.90(s,2H)4.03(s,1H),3.44-3.29(m,2H),2.25(s,3H),1.17(t,J＝7.3Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:347。
步骤6：6-氨基-2-[S(R)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺(实施例43-A)和6-氨基-2-[S(S)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺(实施例43-B)的制备
实施例43-A按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用化合物43e-A代替6-氨基-9-苄基-2-(丙基磺亚氨酰基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物1e)进行制备。得到白色固体状的6-氨基-2-[S(R)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺(实施例43-A,58.1mg,较快洗脱,用异丙醇5％至40％(0.05％DEA)/CO2在ChiralPak AD-3柱上分离)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.28(d,J＝7.8Hz,2H),7.15(d,J＝7.8Hz,2H),6.88(br.s.,2H),5.03-4.87(m,2H),4.19(s,1H),3.61-3.36(m,4H),3.11–2.96(m,3H),2.26(s,3H),1.72-1.45(m,2H),1.20(t,J＝7.2Hz,3H),0.97-0.65(m,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:446。
实施例43-B按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用化合物43e-B代替6-氨基-9-苄基-2-(丙基磺亚氨酰基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物1e)进行制备。得到白色固体状的6-氨基-2-[S(S)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺(实施例43-B,40.1mg,较慢洗脱,用异丙醇5％至40％(0.05％DEA)/CO2在ChiralPak AD-3柱上洗脱):1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.28(d,J＝7.5Hz,2H),7.15(d,J＝7.5Hz,2H),6.89(br.s.,2H),5.03-4.86(m,2H),4.19(s,1H),3.49-3.37(m,4H),3.08-3.00(m,3H),2.27(s,3H),1.70-1.48(m,2H),1.20(t,J＝7.2Hz,3H),0.95-0.71(m,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:446.3。
实施例43-B的立体化学通过单晶X射线衍射进行测定并如图3所示。
实施例44-A和实施例44-B
6-氨基-N-乙基-2[S(S)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺(实施例44-A)和6-氨基-N-乙基-2-[S(R)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺(实施例44-B)
实施例44-A按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用化合物43e-B和N-乙基-N-甲基-氨基甲酰氯代替6-氨基-9-苄基-2-(丙基磺亚氨酰基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物1e)和N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯(中间体AA)进行制备。得到白色固体状的6-氨基-N-乙基-2[S(S)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺(实施例44-A,73.1mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.28(d,J＝7.8Hz,2H),7.15(d,J＝7.8Hz,2H),6.90(br.s.,2H),4.95(s,2H),4.19(br.s.,1H),3.48-3.39(m,4H),3.06-3.00(m,3H),2.27(s,3H),1.29-1.04(m,6H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:432。
实施例44-B按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用化合物43e-A和N-乙基-N-甲基-氨基甲酰氯代替6-氨基-9-苄基-2-(丙基磺亚氨酰基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物1e)和N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯(中间体AA)进行制备。得到白色固体状的6-氨基-N-乙基-2-[S(R)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺(实施例44-B,46.7mg):1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.28(d,J＝7.9Hz,2H),7.15(d,J＝7.9Hz,2H),6.90(br.s.,2H),4.95(s,2H),4.19(br.s.,1H),3.50-3.39(m,4H),3.10–2.96(m,3H),2.27(s,3H),1.27-1.10(m,6H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:432。
实施例45-A和实施例45-B
6-氨基-2-[S(R)乙基磺亚氨酰基]-9-[(4-氟苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺和6-氨基-2-[S(S)乙基磺亚氨酰基]-9-[(4-氟苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺
步骤1：4-氨基-3-[(4-氟苯基)甲基]-2-氧代-1H-咪唑-5-甲腈(化合物45a)的制备
化合物45a按照与实施例1，方法A，步骤1类似的方法，通过用4-氟苄基异氰酸酯代替苄基异氰酸酯进行制备。得到淡黄色固体状的4-氨基-3-[(4-氟苯基)甲基]-2-氧代-1H-咪唑-5-甲腈(48g,化合物45a)并且不经进一步纯化直接用于下一步骤。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:233。
步骤2：6-氨基-9-[(4-氟苯基)甲基]-2-巯基-7H-嘌呤-8-酮(化合物45b)的制备
化合物45b按照与实施例1，方法A，步骤2类似的方法，通过用4-氨基-3-[(4-氟苯基)甲基]-2-氧代-1H-咪唑-5-甲腈(化合物45a)代替4-氨基-3-苯基甲基-2-氧代-1H-咪唑-5-甲腈(化合物1a)进行制备。得到黄色固体状的6-氨基-9-[(4-氟苯基)甲基]-2-巯基-7H-嘌呤-8-酮(32.0g,化合物45b)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:292。
步骤3：6-氨基-2-乙硫基-9-[(4-氟苯基)甲基]-7H-嘌呤-8-酮(化合物45c)的制备
化合物45c按照与实施例1，方法A，步骤3类似的方法，通过用6-氨基-9-[(4-氟苯基)甲基]-2-巯基-7H-嘌呤-8-酮(化合物45b)和碘乙烷代替6-氨基-9-苄基-2-巯基-7H-嘌呤-8-酮(化合物1b)和溴丙烷进行制备。得到黄色固体状的6-氨基-2-乙硫基-9-[(4-氟苯基)甲基]-7H-嘌呤-8-酮(5.6g,化合物45c)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:320。
步骤5：6-氨基-2-乙基亚磺酰基-9-[(4-氟苯基)甲基]-7H-嘌呤-8-酮(化合物45d)的制备
化合物45d按照与实施例1，方法A，步骤4类似的方法，通过用6-氨基-2-乙硫基-9-[(4-氟苯基)甲基]-7H-嘌呤-8-酮(化合物45c)代替6-氨基-9-苄基-2-丙硫基-7H-嘌呤-8-酮(化合物1c)进行制备。得到黄色固体状的6-氨基-2-乙基亚磺酰基-9-[(4-氟苯基)甲基]-7H-嘌呤-8-酮(4.8g,化合物45d)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:332。
步骤6：6-氨基-2-(乙基磺亚氨酰基)-9-[(4-氟苯基)甲基]-7H-嘌呤-8-酮(化合物45e)的制备
化合物45e按照与实施例1，方法A，步骤5类似的方法，通过用6-氨基-2-乙基亚磺酰基-9-[(4-氟苯基)甲基]-7H-嘌呤-8-酮(化合物45d)代替6-氨基-9-苄基-2-丙基亚磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(化合物1d)进行制备。得到黄色固体状的6-氨基-2-(乙基磺亚氨酰基)-9-[(4-氟苯基)甲基]-7H-嘌呤-8-酮(2.9g,化合物45e)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:10.57(br.s.,1H),7.40(dd,J＝8.5,5.5Hz,2H),7.16(t,J＝8.9Hz,2H),6.97(br.s.,2H),4.94(s,2H),4.07(s,1H),3.43-3.36(m,2H),1.17(t,J＝7.4Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:351。
将化合物45e通过手性HPLC用甲醇5％-40％(0.05％DEA)/CO2在ChiralPak AD-3柱上分离得到白色固体状的化合物45e-A(较快洗脱,85.4mg)和化合物45e-B(较慢洗脱,36.4mg)。
化合物45e-A:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:10.53(br.s.,1H),7.41(dd,J＝8.5,5.5Hz,2H),7.17(t,J＝8.9Hz,2H),6.98(br.s.,2H),4.95(s,2H),4.07(s,1H),3.45-3.36(m,2H),1.17(t,J＝7.3Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:351。
化合物45e-B:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:10.53(br.s.,1H),7.41(dd,J＝8.5,5.5Hz,2H),7.17(t,J＝8.9Hz,2H),6.98(br.s.,2H),4.95(s,2H),4.07(s,1H),3.44-3.37(m,2H)1.17(t,J＝7.3Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:351。
步骤7：6-氨基-2-(乙基磺亚氨酰基)-9-[(4-氟苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺(实施例45)、6-氨基-2-[S(R)乙基磺亚氨酰基]-9-[(4-氟苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺和6-氨基-2-[S(S)乙基磺亚氨酰基]-9-[(4-氟苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺(实施例45-A和实施例45-B)的制备
实施例45按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用6-氨基-2-(乙基磺亚氨酰基)-9-[(4-氟苯基)甲基]-7H-嘌呤-8-酮(化合物45e)代替6-氨基-9-苄基-2-(丙基磺亚氨酰基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物1e)进行制备。得到白色固体状的6-氨基-2-(乙基磺亚氨酰基)-9-[(4-氟苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺(162.4mg,实施例45)。
将实施例45的化合物通过手性HPLC用甲醇5％-40％(0.05％DEA)/CO2在ChiralPak AD-3柱上分离得到白色固体状的实施例45-A(较快洗脱,85.3mg)和实施例45-B(较慢洗脱,52mg)。
实施例45-A:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.53-7.38(m,2H),7.18(t,J＝8.9Hz,2H),6.90(br.s.,2H),4.99(s,2H),4.21(s,1H),3.48-3.37(m,4H),3.10-3.01(m,3H),1.69-1.49(m,2H),1.25-1.14(m,3H),0.94-0.72(m,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:450。
实施例45-B:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.54-7.38(m,2H),7.18(t,J＝8.9Hz,2H),7.01-6.72(m,2H),4.99(s,2H),4.21(s,1H),3.46-3.38(m,4H),3.10-3.01(m,3H),1.76-1.50(m,2H),1.25-1.16(m,3H),0.99-0.69(m,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:450。
实施例46-A和实施例46-B
6-氨基-N-乙基-2-(乙基磺亚氨酰基)-9-[(4-氟苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺(实施例46)、6-氨基-N-乙基-2-[S(S)-(乙基磺亚氨酰基)]-9-[(4-氟苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺和6-氨基-N-乙基-2-[S(R)-(乙基磺亚氨酰基)]-9-[(4-氟苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺(实施例46-A和实施例46-B)
实施例46按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用6-氨基-2-(乙基磺亚氨酰基)-9-[(4-氟苯基)甲基]-7H-嘌呤-8-酮(化合物45e)和N-乙基-N-甲基氨基甲酰氯代替6-氨基-9-苄基-2-(丙基磺亚氨酰基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物1e)和N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯(中间体AA)进行制备。得到白色固体状的6-氨基-N-乙基-2-(乙基磺亚氨酰基)-9-[(4-氟苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺(51mg,实施例46)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.46-7.43(m,2H),7.20-7.15(m,2H),6.90(br.s.,2H),4.98(s,2H),4.18(s,1H),3.47-3.32(m,4H),3.05-3.01(m,3H),1.21-1.14(m,6H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:436。
将实施例46的化合物通过手性HPLC用甲醇5％-40％(0.05％DEA)/CO2在ChiralPak AD-3柱上分离得到白色固体状的实施例46-A(较快洗脱,72mg)和实施例46-B(较慢洗脱,45mg)。
实施例46-A:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.46-7.43(m,2H),7.20-7.16(m,2H),6.90(br.s.,2H),4.98(s,2H),4.18(s,1H),3.47-3.32(m,4H),3.05-3.01(m,3H),1.21-1.14(m,6H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:436。
实施例46-B:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.46-7.43(m,2H),7.20-7.14(m,2H),6.92(br.s.,2H),4.98(s,2H),4.20(br.s.,1H),3.47-3.32(m,4H),3.05-3.01(m,3H),1.23-1.19(m,6H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:436。
实施例47-A和实施例47-B
6-氨基-9-[(4-溴苯基)甲基]-2-(乙基磺亚氨酰基)-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺(实施例47)、6-氨基-2-[S(R)-乙基磺亚氨酰基]-9-[(4-溴苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺和6-氨基-2-[S(S)-乙基磺亚氨酰基]-9-[(4-溴苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺
步骤1：4-氨基-3-[(4-溴苯基)甲基]-2-氧代-1H-咪唑-5-甲腈(化合物47a)的制备
化合物47a按照与实施例1，方法A，步骤1类似的方法，通过用4-溴苄基异氰酸酯代替苄基异氰酸酯进行制备。得到淡黄色固体状的4-氨基-3-[(4-溴苯基)甲基]-2-氧代-1H-咪唑-5-甲腈(500mg,化合物47a)并且不经进一步纯化直接用于下一步骤。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.94(S,1H),7.55-7.53(d,J＝8.0Hz,2H),7.20-7.18(d,J＝8.0Hz,2H),6.52(br.s.,2H),4.74(s,2H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:293。
步骤2：6-氨基-9-[(4-溴苯基)甲基]-2-巯基-7H-嘌呤-8-酮(化合物47b)的制备
化合物47b按照与实施例1，方法A，步骤2类似的方法，通过用4-氨基-3-[(4-溴苯基)甲基]-2-氧代-1H-咪唑-5-甲腈(化合物47a)代替4-氨基-3-苯基甲基-2-氧代-1H-咪唑-5-甲腈(化合物1a)进行制备。得到黄色固体状的6-氨基-9-[(4-溴苯基)甲基]-2-巯基-7H-嘌呤-8-酮(300mg,化合物47b)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:352。
步骤3：6-氨基-2-乙硫基-9-[(4-溴苯基)甲基]-7H-嘌呤-8-酮(化合物47c)的制备
化合物47c按照与实施例1，方法A，步骤3类似的方法，通过用6-氨基-9-[(4-溴苯基)甲基]-2-巯基-7H-嘌呤-8-酮(化合物45b)和碘乙烷代替6-氨基-9-苄基-2-巯基-7H-嘌呤-8-酮(化合物1b)和溴丙烷进行制备。得到黄色固体状的6-氨基-2-乙硫基-9-[(4-溴苯基)甲基]-7H-嘌呤-8-酮(5.6g,化合物47c)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:380。
步骤4：6-氨基-9-[(4-溴苯基)甲基]-2-乙基亚磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(化合物47d)的制备
化合物47d按照与实施例1，方法B，步骤6类似的方法，通过用6-氨基-9-[(4-溴苯基)甲基]-2-乙硫基-7H-嘌呤-8-酮(化合物47c)代替6-氨基-9-苄基-2-(2-丙硫基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物1c)进行制备。得到白色固体状的6-氨基-9-[(4-溴苯基)甲基]-2-乙基亚磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(3.2g,化合物47d)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:396。
步骤5：6-氨基-9-[(4-溴苯基)甲基]-2-(乙基磺亚氨酰基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物47e)的制备
化合物47e按照与实施例1，方法B，步骤7类似的方法，通过用6-氨基-9-[(4-溴苯基)甲基]-2-乙基亚磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(化合物47d)代替6-氨基-9-苄基-2-丙基亚磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(化合物1d)进行制备。得到白色固体状的6-氨基-9-[(4-溴苯基)甲基]-2-(乙基磺亚氨酰基)-7H-嘌呤-8-酮(4.0g,化合物47e)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:411。
将化合物47e通过手性HPLC用甲醇5％-40％(0.05％DEA)/CO2在ChiralPak AD-3柱上分离得到白色固体状的化合物47e-A(较快洗脱,112mg)和化合物47e-B(较慢洗脱,99mg)。
化合物47e-A:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:10.58(br.s.,1H),7.52-7.54(d,J＝8.0,2H),7.31-7.29(t,J＝8.0Hz,2H),6.54(br.s.,2H),4.93(s,2H),4.05(s,1H),3.42-3.31(m,2H),1.15(t,J＝7.3Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:411。
化合物47e-B:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:10.58(br.s.,1H),7.54-7.52(d,J＝8.0,2H),7.31-7.29(t,J＝8.0Hz,2H),6.98(br.s.,2H),4.93(s,2H),4.06(s,1H),3.40-3.37(m,2H),1.15(t,J＝7.3Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:411。
步骤6：6-氨基-9-[(4-溴苯基)甲基]-2-(乙基磺亚氨酰基)-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺(实施例47)、6-氨基-9-[(4-溴苯基)甲基]-2-[S(R)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺和6-氨基-9-[(4-溴苯基)甲基]-2-[S(S)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺(实施例47-A和实施例47-B)的制备
实施例47按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用6-氨基-9-[(4-溴苯基)甲基]-2-(乙基磺亚氨酰基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物47e)代替6-氨基-9-苄基-2-(丙基磺亚氨酰基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物1e)进行制备。得到白色固体状的6-氨基-9-[(4-溴苯基)甲基]-2-(乙基磺亚氨酰基)-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺(570mg,实施例47)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.56-7.53(m,2H),7.36-7.34(m,2H),6.92(br.s.,2H),4.97(s,2H),4.18(s,1H),3.45-3.38(m,4H),3.05-3.02(m,3H),1.65-1.56(m,2H),1.19(t,J＝8.0Hz,3H),0.93-0.75(m,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:510。
将实施例47的化合物通过手性HPLC用甲醇5％-40％(0.05％DEA)/CO2在ChiralPak AD-3柱上分离得到白色固体状的实施例47-A(较快洗脱,260mg)和实施例47-B(较慢洗脱,266mg)。
实施例47-A:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.56-7.54(d,J＝8.0Hz,2H),7.36-7.33(d,J＝8,0Hz,2H),6.90(br.s.,2H),4.97(s,2H),4.21(s,1H),3.46-3.41(m,4H),3.05-3.02(m,3H),1.65-1.54(m,2H),1.24-1.16(m,3H),0.93-0.75(m,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:510。
实施例47-B:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.54-7.53(d,J＝8.0Hz,2H),7.36-7.33(d,J＝8,0Hz,2H),6.90(br.s.,2H),4.97(s,2H),4.21(s,1H),3.46-3.41(m,4H),3.06-3.02(m,3H),1.65-1.54(m,2H),1.20-1.16(m,3H),0.93-0.75(m,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:510。
实施例48-A和实施例48-B
6-氨基-9-[(4-溴苯基)甲基]-N-乙基-2-(乙基磺亚氨酰基)-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺(实施例48)、6-氨基-9-[(4-溴苯基)甲基]-N-乙基-2-[S(S)-(乙基磺亚氨酰基)]-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺和6-氨基-9-[(4-溴苯基)甲基]-N-乙基-2-[S(R)-(乙基磺亚氨酰基)]-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺(实施例48-A和实施例48-B)
实施例48按照与实施例1，方法A，步骤6类似的方法，通过用6-氨基-9-[(4-溴苯基)甲基]-2-(乙基磺亚氨酰基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物47e)和N-乙基-N-甲基-氨基甲酰氯代替6-氨基-9-苄基-2-(丙基磺亚氨酰基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物1e)和N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯(中间体AA)进行制备。得到白色固体状的6-氨基-9-[(4-溴苯基)甲基]-2-(乙基磺亚氨酰基)-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺(469mg,实施例48)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.56-7.54(d,J＝8.0Hz,2H),7.36-7.34(d,J＝8,0Hz,2H),6.98(br.s.,2H),4.97(s,2H),3.53-3.46(m,4H),3.05-3.01(m,3H),1.22-1.16(m,6H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:496。
将实施例48的化合物通过手性HPLC用甲醇5％-40％(0.05％DEA)/CO2在ChiralPak AD-3柱上分离得到白色固体状的实施例48-A(较快洗脱,198mg)和实施例48-B(较慢洗脱,202mg)。
实施例48-A:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.56-7.54(d,J＝8.0Hz,2H),7.36-7.34(d,J＝8,0Hz,2H),6.92(br.s.,2H),4.97(s,2H),4.19-4.18(m,1H),3.46-3.41(m,4H),3.05-3.01(m,3H),1.20-1.14(m,6H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:496。
实施例48-B:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.56-7.54(d,J＝8.0Hz,2H),7.36-7.34(d,J＝8,0Hz,2H),6.92(br.s.,2H),4.97(s,2H),4.24(br.s.,1H),3.58-3.41(m,4H),3.05-3.01(m,3H),1.26-1.01(m,6H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:496。
实施例49
化合物和实施例在HEK293-hTLR-7试验中的活性
HEK293-Blue-hTLR-7细胞试验：
稳定的HEK293-Blue-hTLR-7细胞系购自InvivoGen(目录号：hkb-htlr7,SanDiego,California,USA)。这些细胞被设计用于通过监测NF-κB活化来研究人TLR7的刺激。将SEAP(分泌型胚胎碱性磷酸酶)报道基因置于与5个NF-κB和AP-1-结合位点融合的IFN-β最小启动子控制下。通过经用TLR7配体刺激HEK-Blue hTLR7细胞活化NF-κB和AP-1来诱导SEAP。因此，在刺激人TLR720小时时，NF-κB启动子将调节报道基因表达。用QUANTI-BlueTM试剂盒(目录号：rep-qb1,Invivogen,San Diego,Ca,USA)在640nm波长处测定细胞培养物上清液的SEAP报道基因活性，这是一种在碱性磷酸酶的存在下变为紫色或蓝色的检测培养液。
将HEK293-Blue-hTLR7细胞以250,000～450,000细胞/mL的密度在96-孔板中的Dulbecco改良的Eagle培养液(DMEM)中以180μL的体积温育24小时，所述Dulbecco改良的Eagle培养液(DMEM)包含4.5g/L葡萄糖、50U/mL青霉素、50mg/mL链霉素、100mg/mLNormocin、2mM L-谷氨酰胺、10％(v/v)热灭活胎牛血清。然后将HEK293-Blue-hTLR-7细胞与添加的20μL系列稀释的测试化合物一起在最终浓度为1％的DMSO的存在下温育，并且在37℃下、在CO2温育箱中温育20小时。然后将来自每个孔的20μL上清液与180μL Quanti-blue底物溶液一起在37℃下温育2小时，然后在620～655nm下用分光光度计读取吸光度。TLR7活化导致下游NF-κB活化的信号传导途径已被广为接受，因此类似的报道基因试验也被广泛地应用于评价TLR7激动剂(Tsuneyasu Kaisho和Takashi Tanaka,Trends inImmunology,第29卷，第7期，2008年7月，329页起；Hiroaki Hemmi等人,Nature Immunology3,196-200(2002))。
按照本文中的描述在HEK293-hTLR-7试验中测试本发明的化合物和实施例的TLR7激动活性，结果列于表1中。发现作为前药的实施例具有约2.1μM至约1000μM的EC50，发现作为活性形式的化合物具有小于0.2μM的EC50。计算的EC50(前药)/EC50(活性形式)在32至约7600的范围内。
表1：本发明的实施例和化合物在HEK293-hTLR-7试验中的活性
实施例50
前药式(I)化合物的代谢
进行研究以评价前药式(I)化合物向其相应的活性形式的代谢转化。如果作为前药给药，式(I)的化合物在体内可以被代谢成活性化合物或本发明的其它化合物。通常用人肝微粒体来评价前药在动物或人体内的代谢转化程度。
材料
包含β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)、异柠檬酸和异柠檬酸脱氢酶的NADPH辅因子系统购自Sigma-Aldrich Co.(St.Louis,MO,USA)。人肝微粒体(目录号452117，批号38290)获自Corning(Woburn,MA,USA)。从Xenotech获得小鼠肝微粒体(目录号M1000，批号1310028)。化合物的工作溶液和其他乳液
将化合物溶于DMSO制成10mM储备溶液。将10μL储备溶液用乙腈(990μL)稀释得到100μM工作溶液。
孵育
将微粒体与测试化合物在37℃下在pH 7.4的100mM磷酸钾缓冲液中预孵育10分钟。通过添加NADPH再生系统引发反应，使最终孵育体积为200μL，并在37℃的水浴中摇动。孵育混合物由肝微粒体(0.5mg微粒体蛋白/mL)、底物(1.0μM)和NADP(1mM)、异柠檬酸脱氢酶(1单位/mL)、异柠檬酸(6mM)组成。
分析样品的制备
在30分钟时，通过添加600μL冷乙腈(包含100ng/mL甲苯磺丁脲和100ng/mL拉贝洛尔作为内标)来淬灭反应。将样品以4000rpm离心20分钟，并将所得上清液进行LC-MS/MS分析。
校准曲线的样品按如下制备。将100μL/孔肝微粒体和98μL/孔NADPH再生系统溶液分配到96孔板中。首先加入600μL猝灭溶液，然后加入2μL标准曲线和QC工作溶液。
生物分析
在ESI-正MRM模式下，在API4000LC-MC/MC仪器上定量化合物。
进行研究以评估前药(1μM)实施例1、实施例1-A、实施例1-B、实施例2、实施例2-A、实施例2-B、实施例3、实施例4、实施例5、实施例6、实施例7、实施例8、实施例9、实施例10、实施例11、实施例12、实施例13、实施例14、实施例15、实施例16、实施例17、实施例21、实施例22、实施例23、实施例25、实施例26、实施例27、实施例28、实施例29、实施例30、实施例31、实施例32、实施例33、实施例34-A、实施例34-B、实施例36-A、实施例36-B、实施例37-A、实施例37-B、实施例38-A、实施例38-B、实施例39、实施例40、实施例41、实施例41-A、实施例41-B、实施例42、实施例42-A、实施例42-B、实施例43、实施例43-A、实施例43-B、实施例44、实施例44-A、实施例44-B和实施例45-A、实施例46-A、实施例46-B、实施例47-A、实施例47-B、实施例48-A、实施例48-B在人肝微粒体存在下向相应的活性形式化合物1e、化合物1e-A、化合物1e-B、化合物34e-A、化合物34e-B、化合物36g-A、化合物36g-B、化合物36g、化合物41c、化合物41c-B、化合物41c-A、化合物43e、化合物43e-A、化合物43e-B、化合物45e-A、化合物45e-B、化合物47e-A和化合物47e-B的代谢转化。结果总结并显示在表2中。
表2.前药在人肝微粒体中的代谢转化
实施例51
实施例43-A在AAV-HBV小鼠模型中的体内抗病毒功效
动物模型
4-6周龄的雄性C57BL/6小鼠(无特定病原体)购自中国科学院上海实验动物中心(SLAC)，并依照机构动物护理指南(Institutional Animal Care guidelines)饲养于动物护理设施中的受控温度和光照条件下的单独通风笼中。AAV-HBV病毒购自北京五加和分子医学研究所(中国北京)。重组病毒携带1.3拷贝的包装到AAV血清型8(AAV8)衣壳中的HBV基因组。通过尾静脉给C57BL/6小鼠注射200μL稀释在盐水缓冲液中的重组病毒。在第14天，将小鼠放血以测量血清中的HBV表面抗原(HBsAg)和HBV基因组DNA，然后根据这些HBV生物标志物将动物随机分组。
HBV生物标志物的测量
使用CLIA试剂盒(Autobio Diagnostics Co.,Ltd.,中国郑州)根据制造商的说明测量血清HBsAg和HBeAg。HBsAg的检测下限为0.05IU/mL。使用500倍的血清稀释度来获得标准曲线的线性范围内的值。
按照制造商的说明，使用MagNA Pure 96DNA和Viral NA Small Volume Kit(Roche)提取血清HBV DNA。使用用于特异性扩增和检测从核苷酸2969至3096的128bp HBV基因组区域的HBV特异性引物和探针组通过实时定量PCR(qPCR)分析DNA样品。引物和探针的序列为：
正向引物：AAGAAAAACCCCGCCTGTAA；
反向引物：CCTGTTCTGACTACTGCCTCTCC；
HBV-探针：5'TAMRA-CCTGATGTGATGTTCTCCATGTTCAGC-BHQ2-3'。
使用抗-HBs CLIA试剂盒(Autobio Diagnostics Co.,Ltd.,中国郑州)和来自Mabtech B Elispot试剂盒的与生物素缀合的小鼠抗-IgG(0.5mg/mL)测试血清中的抗-HBs。将抗IgG生物素在PBS中稀释，终浓度为1μg/mL。将25μL小鼠抗-IgG与抗-HBs CLIA试剂盒中的平板孔中的血清样品混合并孵育1小时。然后洗涤平板，加入链霉抗生物素蛋白-HRP并在室温下孵育1小时。在重复洗涤步骤后，将来自CLIA试剂盒的底物A和B混合，并在每个孔中加入50μL混合物。在室温下孵育5分钟后，在Envision Plate Reader(PerkinElmer)上读板以测量发光。
研究设计和结果
通过用携带可复制HBV基因组(AAV-HBV)的重组腺相关病毒(AAV)注射C57BL/6小鼠，产生具有HBV DNA和HBsAg高水平表达的小鼠模型。利用具有持久的HBV病毒血症和完全胜任的免疫系统的AAV-HBV小鼠模型按照表3中所示的研究设计来评估TLR7激动剂的抗病毒功效。
表3.实施例43-A在AAV-HBV小鼠模型中的体内功效测试
具体地讲，第2和第3组分别以10mg/kg每隔一天(QOD)和每周一次(QW)口服给药实施例43-A，对照组1仅接受载体。在10mL/kg的给药体积下，将实施例43-A(1mg/mL)用2％Klucel LF、0.5％TPGS、0.09％对羟基苯甲酸甲酯、0.01％对羟基苯甲酸丙酯在水中配制成包合复合物。将动物治疗总共42天，并且在整个研究期间每周两次下颌下放血以收集血清。对血清样品进行HBV生物标志物的分析。
如图4所示，用实施例43-A以10mg/kg QOD处理导致HBV DNA(>3log)和HBsAg(>2.8log)显著降低。在42天治疗结束时，这些病毒标志物的水平变得不可检测且低于定量下限(LLOQ)。即使采用频率较低的QW给药，实施例43-A也显著降低了HBV DNA(>2log)和HBsAg(>2.8log)。此外，无论以QOD还是QW给药，用实施例43-A以10mg/kg处理均诱导了相当水平的抗-HBsAg抗体。总之，实施例43-A通过降低HBV病毒标志物和促进HBV特异性抗体的产生显示出良好的体内抗HBV活性。
实施例52
实施例41-A在AAV-HBV小鼠模型中的体内抗病毒功效
按照表4中的研究设计，用与实施例51中所述相同的测量HBV生物标志物的方法，在相同的AAV-HBV模型中评价实施例41-A的抗病毒功效。
表4.实施例41-A在AAV-HBV小鼠模型中的体内功效测试
具体地讲，第2、3和4组分别以1、3和10mg/kg QOD口服给药实施例41-A。第5组用10mg/kg QW治疗，而第1组仅用载体治疗。在10mL/kg的给药体积下，将实施例41-A(0.1、0.3和1mg/mL)用2％Klucel LF、0.5％TPGS、0.09％对羟基苯甲酸甲酯、0.01％对羟基苯甲酸丙酯在水中配制成包合复合物。将动物治疗总共42天，并且在整个研究期间每周两次下颌下放血以收集血清。对血清样品进行HBV生物标志物的分析。
如图5所示，用实施例41-A以1、3、10mg/kg QOD处理剂量依赖性地降低了HBV DNA和HBsAg。在42天治疗结束时，所有三种剂量都将这些病毒标志物降低至低于或接近LLOQ。即使采用频率较低的QW给药，10mg/kg的实施例41-A也在治疗结束时将HBV DNA和HBsAg降低至不可检测的水平。此外，实施例41-A诱导了显著高于载体处理的抗-HbsAg抗体水平。总之，实施例41-A通过降低HBV病毒标志物和促进HBV特异性抗体的产生显示出良好的体内抗HBV活性。
实施例53
实施例42-A在AAV-HBV小鼠模型中的体内抗病毒功效
按照表5中的研究设计，用与实施例51中所述相同的测量HBV生物标志物的方法，在相同的AAV-HBV模型中评价实施例42-A的抗病毒功效。
表5.实施例42-A在AAV-HBV小鼠模型中的体内功效测试
具体地讲，第2、3和4组分别以1、3和10mg/kg QOD口服给药实施例42-A，而第1组仅用载体治疗。在10mL/kg的给药体积下，将实施例42-A(0.1、0.3和1mg/mL)用2％Klucel LF、0.5％TPGS、0.09％对羟基苯甲酸甲酯、0.01％对羟基苯甲酸丙酯在水中配制成包合复合物。将动物治疗总共42天，并且在整个研究期间每周两次下颌下放血以收集血清。对血清样品进行HBV生物标志物的分析。
如图6所示，用实施例42-A以1、3、10mg/kg QOD处理均有效降低了HBV DNA和HBsAg。虽然较高的剂量导致HBV DNA和HBsAg的更快清除，但在42天治疗结束时，所有三种剂量都将这些病毒标志物降低至低于或接近LLOQ。用实施例42-A处理的所有组均显示出显著更高水平的抗-HBsAg抗体。总之，实施例42-A通过降低HBV病毒标志物和促进HBV特异性抗体的产生显示出良好的体内抗HBV活性。
实施例54
实施例41-B在AAV-HBV小鼠模型中的体内抗病毒功效
按照表6中的研究设计，用与实施例51中所述相同的测量HBV生物标志物的方法，在相同的AAV-HBV模型中评价实施例41-B的抗病毒功效。
表6.实施例41-B在AAV-HBV小鼠模型中的体内功效测试
具体地讲，第2、3和4组分别以1、3和10mg/kg QOD口服给药实施例41-B，而第1组仅用载体治疗。在10mL/kg的给药体积下，将实施例41-B(0.1、0.3和1mg/mL)用2％Klucel LF、0.5％TPGS、0.09％对羟基苯甲酸甲酯、0.01％对羟基苯甲酸丙酯在水中配制成包合复合物。将动物治疗总共42天，并且在整个研究期间每周两次下颌下放血以收集血清。对血清样品进行HBV生物标志物的分析。
如图7所示，用实施例41-B以1、3、10mg/kg QOD处理均有效降低了HBV DNA和HBsAg。在42天治疗结束时，所有三种剂量都将这些病毒标志物降低至LLOQ以下。用实施例41-B处理的所有组还产生了高于载体组的抗-HBsAg抗体水平。总之，实施例41-B通过降低HBV病毒标志物和促进HBV特异性抗体的产生显示出良好的体内抗HBV活性。
实施例55
在雄性Wister-Han大鼠中的单剂量PK研究
在雄性Wister-Han大鼠中进行单剂量PK以评估测试化合物的药代动力学性质。通过管饲(POE)相应的化合物对两组动物进行给药。在给药后15分钟、30分钟、1小时、2小时、4小时、7小时和24小时，通过颈静脉或替代部位收集血样(约20μL)。将血液样品置于含有EDTA-K2抗凝剂的管中，并在4℃下以5000rpm离心6分钟以从样品中分离血浆。离心后，将得到的血浆转移到干净的试管中，用于在LC/MS/MS上对前药和活性形式进行生物分析。在给药前药的组中，血浆样品中前药的浓度低于检测限。表8中的“测试化合物”用作测试“给药化合物”的体内代谢物(活性形式)的内标。使用Professional 6.2的非隔室模块计算药代动力学参数。直接从实验观察结果记录峰值浓度(Cmax)。使用线性梯形法则计算直至最后可检测浓度的血浆浓度-时间曲线下面积(AUC0-t)。
Cmax和AUC0-最后是与测试化合物的体内功效相关的两个关键PK参数。具有更高Cmax和AUC0-最后的化合物将导致更好的体内功效。口服给药活性形式和竞争性化合物后PK参数的结果在表7中给出。前药的PK参数列于表8中。
口服给药前药后，在血浆中观察到活性形式，并因此进行了测试。与参考化合物(GS9620、S-2和S-3)和本发明中提到的化合物(化合物41c-A、41c-B和43e-A，这些化合物都是活性形式的)相比，本发明的示例性前药(实施例41-B、42-A、42-B、43-A、45-A和45-B)令人惊讶地显示出大大改善的Cmax(增加5至175倍)和AUC0-最后(增加2.5至56倍)。结果清楚地证明了前药与活性形式相比在PK参数上的出人意料的优越性，这导致更好的体内功效。
表7. 5mg/kg口服给药后活性形式的平均血浆浓度和PK参数
*化合物41c-A、化合物41c-B和化合物43e-A为7小时
表8. 5mg/kg口服给药后前药的PK参数
实施例56
LYSA溶解度研究
用LYSA研究来测定测试化合物的水溶性。从10mM DMSO储备溶液一式两份地制备样品。用离心真空蒸发器蒸发DMSO后，将化合物溶于0.05M磷酸盐缓冲液(pH 6.5)中，搅拌1小时并摇动2小时。一夜后，使用微量滴定过滤板过滤溶液。然后通过HPLC-UV分析滤液及其1/10稀释液。另外，从10mM储备溶液制备四点校准曲线并用于化合物的溶解度测定。结果以μg/mL表示。如果蒸发后测量的溶液中的样品除以计算的样品量最大值的百分比大于80％，则报告溶解度大于该值。
LYSA的结果显示在表9中。显然，当转化为各种前药时，活性形式的溶解度令人惊讶地提高了10至200倍以上。
表9.具体化合物的溶解度数据
实施例57
门静脉研究
本研究的目的是了解前药在通过肠道吸收进入门静脉循环时是否保持不变并证实转化的主要部位。
门静脉插管(PVC)和颈动脉插管(CAC)的外科手术
手术在戊巴比妥/异氟烷麻醉下进行。简而言之，在用聚维酮碘和70％异丙醇对腹部区域消毒后，进行小的腹部中线切口。拉出盲肠，找到肠系膜静脉并分离约5mm血管。在近端放置松散的结扎线并结扎静脉的远端。在分离的静脉上做一个小切口(刚好足以插入导管)并将PU导管朝向肝脏插入适当的长度。通过将松散的结扎线环绕插管系紧，将导管固定在位。将盲肠放入腹腔内。在右腹壁上打一个孔，使导管末端自由通过。通过缝合将导管固定在腹壁上。用缝合线闭合腹部肌肉切口。在肩胛区域形成小的切口作为导管的出口。将导管从皮下通过并经由肩胛切口穿出。将固定缝合线置于肩胛区域。检查导管的开放性，然后从皮下空间穿出至背颈部区域。轻轻擦拭该区域后，缝合腹腔。然后通过插入PE50导管进行左颈动脉插管。将两个外置导管牢固地系在背颈区域并固定。然后使动物在其笼中恢复并在手术至少3天后用于研究。所有导管每天用肝素化盐水冲洗一次以保持通畅。
PVC/CAC双插管大鼠的口服PK研究
将动物禁食过夜(n＝3)并通过口服管饲进行给药(10mg/kg，10mL/kg)。在0.083、0.25、0.5、1、2、4、7、24小时，同时从门静脉和颈动脉导管收集血样(60μL)。将所有血液样品转移到含有2μL K2EDTA(0.5M)作为抗凝剂的微量离心管中并置于湿冰上。然后在收集半小时内通过在约4℃，3000g下离心处理血液样品以获得血浆。将血浆样品储存在聚丙烯管中，在干冰上快速冷冻并保持在-70±10℃直至LC/MS/MS分析。
检测并分析口服给药前药(10mg/kg)后，门静脉插管大鼠的门静脉和颈动脉样品中前药和活性形式的药代动力学参数(平均值±SD，n＝3)。实施例1-B、41-A、41-B、42-A和43-A的测试结果总结如下。
表10.在口服给药实施例41-A(10mg/kg)后，门静脉插管大鼠的门静脉和颈动脉样品中的实施例41-A及其相应的活性形式化合物41c-B的药代动力学参数
表11.在口服给药实施例43-A(10mg/kg)后，门静脉插管大鼠的门静脉和颈动脉样品中的实施例43-A及其相应的活性形式化合物43e-A的药代动力学参数
表12.在口服给药实施例1-B(10mg/kg)后，门静脉插管大鼠的门静脉和全身样品中的实施例1-B及其相应的活性形式化合物1e-A的药代动力学参数
表13.在口服给药实施例42-A(10mg/kg)后，门静脉插管大鼠的门静脉和颈动脉样品中的实施例42-A及其相应的活性形式化合物41c-A的药代动力学参数
表14.在口服给药实施例41-B(10mg/kg)后，门静脉插管大鼠的门静脉和颈动脉样品中的实施例41-B及其相应的活性形式化合物41c-A的药代动力学参数
基于上述结果可以得出结论，前药转化的主要部位是肝脏而不是肠，因为颈动脉样品的AUC活性/AUC全部高于门静脉样品的AUC活性/AUC全部。

Claims (25)

1.式(I)的化合物或其可药用盐、对映体或非对映体，
其中
R1是C1-6烷基；
R2是苄基，所述苄基是未取代的或被一个、两个或三个独立地选自卤素和C1-6烷基的取代基取代；
R3是-NR4R5，其中
R4是C1-6烷基或C1-6烷氧基C1-6烷基；
R5是(C1-6烷基)2NCOOC1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基(苯基)C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基氧基C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6烷基羰基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基或吡咯烷基氨基甲酰氧基C1-6烷基；或者
R4和R5与它们所连接的氮一起形成杂环基；
条件是不包括
6-氨基-9-苄基-2-(丙基磺亚氨酰基)-7-(吡咯烷-1-羰基)嘌呤-8-酮；
6-氨基-9-苄基-7-(哌啶-1-羰基)-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-8-酮；
6-氨基-9-苄基-7-(吗啉-4-羰基)-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-8-酮；
6-氨基-9-苄基-7-(3,3-二甲基吡咯烷-1-羰基)-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-8-酮；
1-[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]吡咯烷-2-甲酸乙酯；
6-氨基-7-(2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羰基)-9-苄基-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-8-酮；
6-氨基-9-苄基-7-(2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷-6-羰基)-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-8-酮；
6-氨基-9-苄基-7-(3,3-二氟吡咯烷-1-羰基)-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-8-酮；
6-氨基-9-苄基-7-(3-氟-3-甲基-吡咯烷-1-羰基)-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-8-酮；
及其对映体或非对映体。
2.根据权利要求1的化合物，其中
R1是C1-6烷基；
R2是苄基，所述苄基是未取代的或被卤素或C1-6烷基取代；
R3是氮杂环丁基；
被C1-6烷基取代的哌嗪基；
被哌啶基取代的哌啶基；
吡咯烷基；或
-NR4R5，其中
R4是C1-6烷基或C1-6烷氧基C1-6烷基；
R5是(C1-6烷基)2NCOOC1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基(苯基)C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基氧基C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6烷基羰基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基或吡咯烷基氨基甲酰氧基C1-6烷基。
3.根据权利要求1或2的化合物，其中
R1是乙基或丙基；
R2是苄基、溴苄基、氯苄基、氟苄基或甲基苄基；
R3是氮杂环丁基；
4-甲基哌嗪基；
哌啶基哌啶基；
吡咯烷基；或
-NR4R5，其中
R4是甲基、乙基、丙基或甲氧基乙基；
R5是乙酰基(甲基)氨基乙基、丁基、丁基(甲基)氨基甲酰氧基乙基、二乙基氨基甲酰氧基乙基、乙氧基羰基(甲基)氨基乙基、乙氧基羰基乙基、乙氧基羰基异丁基、乙氧基羰基异戊基、乙氧基羰基甲基、乙氧基羰基氧基乙基、乙氧基羰基(苯基)乙基、乙基、异丁基、异丙氧基羰基异戊基、异丙氧基羰基(苯基)乙基、异丙基、甲氧基羰基(甲基)氨基乙基、甲氧基乙基、甲氧基丙基、丙基、丙基(甲基)氨基甲酰氧基乙基、吡咯烷基氨基甲酰氧基乙基、叔丁氧基羰基(甲基)氨基乙基、叔丁氧基羰基乙基、叔丁氧基羰基异戊基或叔丁氧基羰基(苯基)乙基。
4.根据权利要求3的化合物，其中R3是氮杂环丁基、4-甲基哌嗪基、哌啶基哌啶基、吡咯烷基、乙酰基(甲基)氨基乙基(甲基)氨基、二(甲氧基乙基)氨基、丁基(乙基)氨基、丁基(甲基)氨基、丁基(甲基)氨基甲酰氧基乙基(甲基)氨基、二乙基氨基甲酰氧基乙基(甲基)氨基、乙氧基羰基(甲基)氨基乙基(甲基)氨基、乙氧基羰基乙基(甲基)氨基、乙氧基羰基异丁基(甲基)氨基、乙氧基羰基异戊基(甲基)氨基、乙氧基羰基甲基(甲基)氨基、乙氧基羰基氧基乙基(甲基)氨基、乙氧基羰基(苯基)乙基(甲基)氨基、乙基(甲基)氨基、异丁基(甲基)氨基、异丙氧基羰基异戊基(甲基)氨基、异丙氧基羰基(苯基)乙基(甲基)氨基、异丙基(甲基)氨基、甲氧基羰基(甲基)氨基乙基(甲基)氨基、甲氧基乙基(乙基)氨基、甲氧基乙基(甲基)氨基、甲氧基乙基(丙基)氨基、甲氧基丙基(甲基)氨基、丙基(乙基)氨基、丙基(甲基)氨基、丙基(甲基)氨基甲酰氧基乙基(甲基)氨基、吡咯烷基氨基甲酰氧基乙基(甲基)氨基、叔丁氧基羰基(甲基)氨基乙基(甲基)氨基、叔丁氧基羰基乙基(甲基)氨基、叔丁氧基羰基异戊基(甲基)氨基或叔丁氧基羰基(苯基)乙基(甲基)氨基。
5.根据权利要求1至4任意一项的化合物，其中R1是乙基。
6.根据权利要求1或2的化合物，其中R2是被卤素或C1-6烷基取代的苄基。
7.根据权利要求2至6任意一项的化合物，其中R2是溴苄基、氯苄基、氟苄基或甲基苄基。
8.根据权利要求7的化合物，其中R2是溴苄基、氯苄基或氟苄基。
9.根据权利要求1或2的化合物，其中R3是-NR4R5，其中R4是C1-6烷基，R5是C1-6烷基。
10.根据权利要求9的化合物，其中R3是丙基(甲基)氨基或乙基(甲基)氨基。
11.根据权利要求1、2、6和9任意一项的化合物，其中
R1是C1-6烷基；
R2是苄基，所述苄基被卤素或C1-6烷基取代；
R3是-NR4R5，其中R4是C1-6烷基，R5是C1-6烷基。
12.根据权利要求11的化合物，其中
R1是乙基；
R2是甲基苄基、溴苄基、氯苄基或氟苄基；
R3是丙基(甲基)氨基或乙基(甲基)氨基。
13.选自下列的化合物:
6-氨基-9-苄基-N-甲基-8-氧代-N-丙基-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-9-苄基-N-(2-甲氧基乙基)-N-甲基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-9-苄基-N-乙基-8-氧代-N-丙基-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-9-苄基-7-[4-(1-哌啶基)哌啶-1-羰基]-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-8-酮；
6-氨基-9-苄基-N-乙基-N-(2-甲氧基乙基)-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-9-苄基-N-丁基-N-乙基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-9-苄基-N-(2-甲氧基乙基)-8-氧代-N-丙基-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-9-苄基-N,N-二(2-甲氧基乙基)-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-7-(氮杂环丁烷-1-羰基)-9-苄基-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-8-酮；
6-氨基-9-苄基-N-异丙基-N-甲基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-9-苄基-7-(4-甲基哌嗪-1-羰基)-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-8-酮；
6-氨基-9-苄基-N-(3-甲氧基丙基)-N-甲基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-9-苄基-N-异丁基-N-甲基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺；
2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]乙酸乙酯；
3-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]丙酸乙酯；
3-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]丙酸叔丁酯；
(2S)-2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]丙酸乙酯；
(2S)-2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]-4-甲基-戊酸叔丁酯；
(2S)-2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]-4-甲基-戊酸异丙酯；
(2S)-2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]-3-甲基-丁酸乙酯；
(2S)-2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]-4-甲基-戊酸乙酯；
(2S)-2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]-3-苯基-丙酸乙酯；
(2S)-2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]-3-苯基-丙酸异丙酯；
(2S)-2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]-3-苯基-丙酸叔丁酯；
N-[2-[乙酰基(甲基)氨基]乙基]-6-氨基-9-苄基-N-甲基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺；
N-[2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸甲酯；
N-[2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯；
N-[2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]乙基]-N-甲基-氨基甲酸乙酯；
N-丁基-N-甲基-氨基甲酸2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]乙酯；
吡咯烷-1-甲酸2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]乙酯；
N-甲基-N-丙基-氨基甲酸2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]乙酯；
N,N-二乙基氨基甲酸2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]乙酯；
2-[[6-氨基-9-苄基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-羰基]-甲基-氨基]乙基乙基碳酸酯；
6-氨基-N-丁基-9-[(4-氯苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-2-[S(S)-丙基磺亚氨酰基]嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-N-丁基-9-[(4-氯苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-2-[S(S)-丙基磺亚氨酰基]嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-N-乙基-N-甲基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-N-甲基-8-氧代-N-丙基-2[S(S)-丙基磺亚氨酰基]-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-N-甲基-8-氧代-N-丙基-2[S(R)-丙基磺亚氨酰基]-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-2-[S(S)-丙基磺亚氨酰基]-9-(对-甲苯基甲基)-7-(吡咯烷-1-羰基)嘌呤-8-酮；
6-氨基-2-[S(R)-丙基磺亚氨酰基]-9-(对-甲苯基甲基)-7-(吡咯烷-1-羰基)嘌呤-8-酮；
6-氨基-N-(2-甲氧基乙基)-N-甲基-8-氧代-2-[S(S)-丙基磺亚氨酰基]-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-N-(2-甲氧基乙基)-N-甲基-8-氧代-2-[S(R)-丙基磺亚氨酰基]-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-N-乙基-N-甲基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-N-丁基-N-甲基-8-氧代-2-(丙基磺亚氨酰基)-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-2-[S(R)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-2-[S(S)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-N-乙基-2[S(S)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-N-乙基-2-[S(R)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-2-[S(S)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-2-[S(R)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-N-乙基-2[S(S)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-N-乙基-2-[S(R)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-2-[S(S)乙基磺亚氨酰基]-9-[(4-氟苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-2-[S(R)乙基磺亚氨酰基]-9-[(4-氟苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-N-乙基-2-(乙基磺亚氨酰基)-9-[(4-氟苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-N-乙基-2-[S(S)-(乙基磺亚氨酰基)]-9-[(4-氟苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-N-乙基-2-[S(R)-(乙基磺亚氨酰基)]-9-[(4-氟苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-9-[(4-溴苯基)甲基]-2-(乙基磺亚氨酰基)-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-2-[S(R)-乙基磺亚氨酰基]-9-[(4-溴苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-2-[S(S)-乙基磺亚氨酰基]-9-[(4-溴苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-9-[(4-溴苯基)甲基]-N-乙基-2-(乙基磺亚氨酰基)-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-9-[(4-溴苯基)甲基]-N-乙基-2-[S(S)-(乙基磺亚氨酰基)]-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺；和
6-氨基-9-[(4-溴苯基)甲基]-N-乙基-2-[S(R)-(乙基磺亚氨酰基)]-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺；
或其可药用盐、对映体或非对映体。
14.根据权利要求13的化合物，选自：
6-氨基-9-苄基-N-甲基-8-氧代-N-丙基-2-(丙基磺亚氨酰基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-2-[S(R)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-2-[S(S)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-N-乙基-2[S(S)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-N-乙基-2-[S(R)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-2-[S(S)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-2-[S(R)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-N-乙基-2[S(S)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-N-乙基-2-[S(R)-乙基磺亚氨酰基]-N-甲基-8-氧代-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-2-(乙基磺亚氨酰基)-9-[(4-氟苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺；
6-氨基-2-[S(S)乙基磺亚氨酰基]-9-[(4-氟苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺；和
6-氨基-2-[S(R)乙基磺亚氨酰基]-9-[(4-氟苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺；
或其可药用盐、对映体或非对映体。
15.根据权利要求1至14任意一项的化合物的制备方法，包括如下步骤：
将式(II)的化合物与氨基甲酰氯在混合碱的存在下反应
其中的混合碱是吡啶和三乙胺、吡啶和DIPEA、DMAP和三乙胺或DMAP和DIPEA；R1和R2如权利要求1至14任意一项所定义。
16.用作治疗活性物质的根据权利要求1至14任意一项的化合物或可药用盐、对映体或非对映体。
17.包含根据权利要求1至14任意一项的化合物和治疗惰性载体的药物组合物。
18.根据权利要求1至14任意一项的化合物用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的用途。
19.根据权利要求1至14任意一项的化合物在制备用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的药物中的用途。
20.根据权利要求1至14任意一项的化合物作为TLR7激动剂的用途。
21.根据权利要求1至14任意一项的化合物用于诱导干扰素-α产生的用途。
22.用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的根据权利要求1至14任意一项的化合物或可药用盐、对映体或非对映体。
23.根据权利要求15的方法制备的根据权利要求1至14任意一项的化合物或可药用盐、对映体或非对映体。
24.用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的方法，该方法包括施用治疗有效量的权利要求1至14任意一项所定义的化合物。
25.如上文所述的本发明。
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