KR20190039829A - 바이러스 감염의 치료 및 예방을 위한 7-치환된 설폰이미도일푸린온 화합물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 하기 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체, 상기 화합물을 포함하는 조성물, 및 바이러스 감염의 치료를 위한 TLR7 작용제로서 상기 화합물의 사용 방법에 관한 것이다:
[화학식 I]

상기 식에서,
R¹, R² 및 R³은 본원에 기재된 바와 같다.

Description

바이러스 감염의 치료 및 예방을 위한 7-치환된 설폰이미도일푸린온 화합물

본 발명은 생체내 톨(Toll)-유사 수용체 작용 활성을 갖는 새로운 설폰이미도일푸린온 유도체, 이의 제조, 이를 함유하는 약학 조성물, 및 약제로서 이의 잠재적 용도에 관한 것이다.

본 발명은 하기 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체에 관한 것이다:

[화학식 I]

상기 식에서,

R¹ 내지 R³은 하기에 기재되는 바와 같다.

톨-유사 수용체(TLR)는 광범위한 보존 병원체-연관 분자 패턴(PAMP)을 검출한다. TLR은 병원체 침입 및 후속적인 내재성 면역 반응 개시를 인지하는 중요한 역할을 한다. 인체에는 TRL 패밀리 중 10개의 공지된 구성원이 존재하고, 이는 세포외 류신-풍부 도메인 및 보존 톨/인터루킨(IL)-1 수용체(TIR) 도메인을 함유하는 세포질 꼬리(tail)를 특징으로 하는 유형 I 막통과 단백질이다. 상기 패밀리 중에서, TLR3, TLR7, TLR8 및 TLR9는 엔도솜 내에 위치한다. TLR7은 특이성 작은 분자 리간드(즉, TLR7 작용제) 또는 이의 네이티브 리간드(native ligand)(즉, 단일-가닥 RNA, ssRNA)에 결합함으로써 활성화될 수 있다. ssRNA의 TLR7에 대한 결합 후, 이의 이량체화된 형태의 수용체는, 일차 골수성 분화 반응 유전자 88(MyD88)을 비롯하여 상기 수용체의 세포질 도메인에서 접속기 단백질(adapter protein)의 후속 동원(recruitment)을 초래하는 구조 변화를 겪는 것으로 여겨진다. MyD88 경로를 통한 수용체 신호전달 연쇄반응(cascade)의 개시 후, 세포질 전사 인자, 예컨대 인터페론 조절 인자 7(IRF-7) 및 핵 인자 카파 B(NF-κB)가 활성화된다. 이어서, 이러한 전사 인자는 핵으로 자리옮김하고, 다양한 유전자, 예컨대 IFN-α 및 기타 항바이러스 시토카인 유전자의 전사를 개시한다. TLR7은 형질세포형 세포(혈장cytoid cell) 상에서, 및 또한 B-세포 상에서 우세하게 발현된다. 면역 세포의 변화된 반응성은 만성 바이러스 감염 동안 감소된 내재성 면역 반응의 원인이 될 수 있다. 따라서, TLR7의 작용제-유도된 활성화는 만성 바이러스 감염의 치료에 대한 새로운 접근법을 제시할 수 있다(문헌[D. J Connolly and L. AJ O'Neill, Current Opinion in Pharmacology 2012, 12:510-518], [P. A. Roethle et al, J. Med. Chem. 2013, 56, 7324-7333]).

만성 HBV 감염의 현재 치료법은 2개의 상이한 유형의 약물에 기초한다: 종래의 항바이러스 뉴클레오시드/뉴클레오티드 유사체 및 보다 최신의 페길화된 IFN-α(PEG-IFN-α). 경구용 뉴클레오시드/뉴클레오티드 유사체는 HBV 복제를 억제함으로써 작용한다. 이는 그 기간 동안 약물 내성이 흔히 발생하는 장기간 치료다. 대안적 옵션으로서, 페길화된 IFN-α(PEG-IFN-α)가 한정된 치료 기간 내에 일부 만성 감염된 HBV 환자를 치료하는 데 사용되었다. 적어도 작은 백분율의 HBV 환자에서 HBeAg의 혈청변환이 달성되었지만, 역효과가 이를 용인하기 힘들게 만든다. 특히, HBsAg 혈청변환으로서 정의된 기능적 치유는 현재 치료법 둘 모두에서 매우 드물다. 따라서, 기능적 치유를 위해 HBV 환자를 치료하는 치료적 옵션의 새로운 세대가 절실히 필요하다. 경구용 TLR7 작용제를 사용하는 치료는 보다 나은 관용성으로 보다 큰 효능을 제공하는 유망한 해법을 제시한다. 페길화된 IFN-α(PEG-IFN-α)는 현재 만성 HBV 치료에 사용되고 있으며, 잠재적으로 항바이러스 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 유사체를 사용하는 평생 치료에 대한 대안이다. 만성 HBV 환자의 하위집합에서, PEG-IFN-α 요법은 한정된 기간의 요법 이후에 바이러스에 대한 지속적인 면역학적 제어를 유도할 수 있다. 그러나, 인터페론 요법을 사용한 혈청전환을 성취하는 HBV 환자의 백분율은 낮고(HBeAg-양성 환자에 대하여 27% 이하임), 치료는 전형적으로 불량하게 관용된다. 추가적으로, 기능적 치유(HBsAg 감손 및 혈청전환으로서 정의됨)는 또한 PEG-IFN-α 및 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 치료 모두에서 매우 드물다. 이러한 제한이 주어지기 때문에, 만성 HBV에 대한 기능적 치유를 다루고 유도하도록 향상된 요법 선택이 절실히 필요하다. 경구용의 작은 분자 TLR7 작용제를 사용한 치료는 보다 큰 효능 및 관용성을 제공하는 잠재성을 갖는 유망한 접근법이다(문헌[T. Asselah et al, Clin Liver Dis 2007, 11, 839-849] 참고).

실제로, 여러 확인된 TLR7 작용제가 치료적 목적을 위해 고려되었다. 지금까지, 이미퀴모드(Imiquimod)(알다라(ALDARA, 등록상표))가 인유두종 바이러스에 의한 피부 병소를 치료하는 국소 사용을 위한 미국 FDA 승인된 작용제 약물이다. TLR7/8 이중 작용제 레지퀴모드(resiquimod)(R-848) 및 TLR7 작용제 852A는 각각 인간 생식기 헤르페스 및 화학요법-난치성 전이성 흑색종의 치료를 위한 것으로 평가되었다. ANA773은 만성 C형 간염 바이러스(HCV) 감염 및 만성 B형 간염 감염 환자의 치료를 위해 개발된 경구용 전구약물 TLR7 작용제이다. GS-9620은 경구적으로 이용가능한 TLR7 작용제이다. 제Ib상 연구는 GS-9620을 사용한 치료가 만성 B형 간염 환자에서 안전하고 내성 좋고 투여랑-의존적 ISG15 mRNA 유도를 야기하였음을 입증하였다(문헌[E. J. Gane et al, Annu Meet Am Assoc Study Liver Dis (November 1-5, Washington, D.C.) 2013, Abst 946]). 따라서, 보다 많은 치료적 해결책을 제공하거나 기존의 부분적으로 효과적인 치료법을 대체하기 위해 새로운 HBV 치료제로서 강력하고 안전한 TLR7 작용제개발에 대한 충족되지 못한 임상적 필요성이 높다.

본 발명은 톨-유사 수용체 작용(agonism) 활성을 갖는 새로운 6-아미노-2-설폰이미도일-9-치환된-7-치환된-푸린-8-온 화합물의 시리즈 및 이의 전구약물을 제공한다. 또한, 본 발명은 톨-유사 수용체, 예컨대 TLR7 수용체의 활성화에 의해 SEAP 수준 증가를 유도하는 상기 화합물의 생물학적 활성, 인간 간세포의 존재 하에 모 화합물로의 전구약물의 대사적 전환, 및 감염성 질병, 예컨대 HBV 또는 HCV를 치료하거나 예방하기 위한 상기 화합물, 및 상기 화합물을 포함하는 약학 조성물 및 이의 전구 약물의 치료적 또는 예방적 용도를 제공한다. 또한, 본 발명은 우수한 활성을 갖는 화합물을 제공한다. 또한, 화학식 I의 화합물은 또한 양호한 용해도 및 PK 프로필을 나타낸다.

본 발명은, 6-아미노-9-벤질-2-(프로필설폰이미도일)-7-(피롤리딘-1-카본일)푸린-8-온;

6-아미노-9-벤질-7-(피페리딘-1-카본일)-2-(프로필설폰이미도일)푸린-8-온;

6-아미노-9-벤질-7-(모폴린-4-카본일)-2-(프로필설폰이미도일)푸린-8-온;

6-아미노-9-벤질-7-(3,3-다이메틸피롤리딘-1-카본일)-2-(프로필설폰이미도일)푸린-8-온;

에틸 1-[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]피롤리딘-2-카복시레이트;

6-아미노-7-(2-아자스피로[3.3]헵탄-2-카본일)-9-벤질-2-(프로필설폰이미도일)푸린-8-온;

6-아미노-9-벤질-7-(2-옥사-6-아자스피로[3.3]헵탄-6-카본일)-2-(프로필설폰이미도일)푸린-8-온;

6-아미노-9-벤질-7-(3,3-다이플루오로피롤리딘-1-카본일)-2-(프로필설폰이미도일)푸린-8-온;

6-아미노-9-벤질-7-(3-플루오로-3-메틸-피롤리딘-1-카본일)-2-(프로필설폰이미도일)푸린-8-온; 및

이들의 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체는 배제되는, 새로운 하기 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체를 제공한다:

[화학식 I]

상기 식에서,

R¹은 C_{1- 6}알킬이고;

R²는 치환되지 않거나 할로겐 및 C_{1- 6}알킬로부터 독립적으로 선택된 1, 2 또는 3개의 치환기로 치환된 벤질이고;

R³은 -NR⁴R⁵이되,

R⁴는 C_{1- 6}알킬 또는 C_{1- 6}알콕시C_{1 - 6}알킬이고,

R⁵는 (C_{1- 6}알킬)₂NCOOC_{1 - 6}알킬, C_{1- 6}알콕시C_{1 - 6}알킬, C_{1- 6}알콕시카본일(C_1-6알킬)아미노C_{1 -6}알킬, C_{1- 6}알콕시카본일(페닐)C_{1 - 6}알킬, C_{1- 6}알콕시카본일C_{1 - 6}알킬, C_{1- 6}알콕시카본일옥시C_1-6알킬, C_{1- 6}알킬, C_{1- 6}알킬카본일(C_1-6알킬)아미노C_{1 - 6}알킬 또는 피롤리딘일카바모일옥시C_{1 -6}알킬이거나,

R⁴ 및 R⁵는 이들이 부착된 질소와 함께 헤테로사이클릴을 형성한다.

또한, 본 발명은 이들의 제조, 본 발명에 따른 화합물을 기초로 한 약제, 및 이들의 생산, 및 TLR7 작용제로서 화학식 I의 화합물의 용도에 관한 것이다. 따라서, 화학식 I의 화합물은 톨-유사 수용체 작용에 의해 HBV 및/또는 HCV 감염의 치료 또는 예방에 유용하다.

달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 분야의 통상적 숙련가에 의해 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 또한, 하기 정의는 본 발명을 설명하는 데 사용된 다양한 용어의 의미 및 범위를 예시하고 정의하기 위해 제시된다.

용어

용어 "C_{1- 6}알킬"은 1 내지 6개, 특히 1 내지 4개의 탄소 원자를 함유하는 포화 선형쇄 또는 분지쇄 알킬 기, 예를 들어 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, tert-부틸 등을 의미한다. 특정 "C_{1- 6}알킬" 기는 메틸, 에틸 및 n-프로필이다.

용어 "C_{1- 6}알콕시"는 식 C_{1- 6}알킬-O-의 기를 의미한다. C_{1 - 6}알콕시 기의 예는 비제한적으로 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, 이소프로폭시, n-부톡시, 이소부톡시 및 tert-부톡시를 포함한다. 특정 "C_{1- 6}알콕시" 기는 메톡시, 에톡시 및 이소프로폭시이다. 보다 특정한 C_1-6알콕시 기는 에톡시이다.

용어 "할로겐" 및 "할로"는 본원에서 상호교환적으로 사용되고 플루오로, 클로로, 브로모 또는 요오도를 의미한다.

용어 "헤테로사이클릴"은, N, O 및 S로부터 선택된 1 내지 5개의 고리 헤테로 원자를 포함하고 나머지 고리 원자는 탄소인, 3 내지 10개의 고리 원자의 일가 포화 또는 부분적 불포화 일환형 또는 이환형 고리 시스템을 의미한다. 특정 실시양태에서, 헤테로사이클릴은 N, O 및 S로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 고리 헤테로 원자를 포함하고 나머지 고리 원자는 탄소인, 4 내지 7개의 고리 원자의 일가 포화 일환형 고리 시스템이다. 일환형 포화 헤테로사이클릴의 예는 아지리딘일, 옥시란일, 아제티딘일, 옥세탄일, 피롤리딘일, 다이메틸피롤리딘일, 에톡시카본일피롤리딘일, 테트라하이드로퓨란일, 테트라하이드로-티엔일, 피라졸리딘일, 이미다졸리딘일, 옥사졸리딘일, 이소옥사졸리딘일, 티아졸리딘일, 피페리딘일, 테트라하이드로피란일, 테트라하이드로티오피란일, 피페라진일, 모폴린일, 티오모폴린일, 다이옥소티오모폴린일, 아제판일, 다이아제판일, 호모피페라진일 또는 옥사제판일이다. 일환형 포화 헤테로사이클릴은 할로겐, C_{1- 6}알킬 및 C_{1- 6}알콕시카본일로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 추가로 치환될 수 있다. 치환된 일환형 포화 헤테로사이클릴의 예는 4-메틸피페라진일, 다이메틸피롤리딘일, 에톡시카본일피롤리딘일, 다이플루오로피롤리딘일, 플루오로(메틸)피롤리딘일이다. 이환형 포화 헤테로사이클릴의 예는 아자바이사이클로[3.2.1]옥틸, 퀴누클리딘일, 옥사아자바이사이클로[3.2.1]옥틸, 아자바이사이클로[3.3.1]노닐, 옥사아자바이사이클로[3.3.1]노닐, 티아아자바이사이클로[3.3.1]노닐, 아자스피로[3.3]헵탄일 및 옥사아자스피로[3.3]헵탄일이다. 부분적 불포화 헤테로사이클릴의 예는 다이하이드로퓨릴, 이미다졸린일, 다이하이드로옥사졸릴, 테트라하이드로피리딘일 및 다이하이드로피란일이다.

단독 또는 조합된 용어 "카본일"은 기 -C(O)-를 의미한다.

용어 "C_{1- 6}알킬카본일"은 기 C_{1- 6}알킬-C(O)-(여기서, "C_{1- 6}알킬"은 상기에 정의된 바와 같음)를 의미한다. 특정 "C_1-6알킬카본일" 기는 아세틸이다.

용어 "거울상 이성질체"는 서로 겹쳐지지 않는 거울상 이미지인 화합물의 2개의 입체 이성질체를 의미한다.

용어 "부분입체 이성질체"는, 2개 이상의 키랄 중심을 갖고 이의 분자가 서로 거울상 이미지가 아닌 입체 이성질체를 의미한다. 부분입체 이성질체는 상이한 물리적 특성, 예를 들어 융점, 비점, 스펙트럼 특성 및 반응성을 갖는다.

용어 "약학적으로 허용되는 염"은 생물학적으로 또는 달리 바람직한 염을 의미한다. 약학적으로 허용되는 염은 산부가 염 및 염기부가 염 둘 다를 포함한다.

용어 "약학적으로 허용되는 산부가 염"은 무기산(예컨대 염화수소산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 탄산, 인산) 및 유기산(지방족, 지환족, 방향족, 방향지방족, 헤테로사이클릭, 카복시산 및 설폰산 부류의 유기산으로부터 선택되는 유기산, 예컨대 폼산, 아세트산, 프로피온산, 글리콜산, 글루콘산, 락트산, 피루브산, 옥살산, 말산, 말레산, 말론산, 석신산, 퓨마르산, 타르타르산, 시트르산, 아스파르트산, 아스코르브산, 글루탐산, 안트라닐산, 벤조산, 신남산, 만델산, 엠본산, 페닐아세트산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, p-톨루엔설폰산 및 살리실산)에 의해 형성된 약학적으로 허용되는 염을 의미한다.

용어 "약학적으로 허용되는 염기부가 염"은 유기염기 또는 무기염기에 의해 형성된 약학적으로 허용되는 염을 의미한다. 허용되는 무기염기의 예는 나트륨, 칼륨, 암모늄, 칼슘, 마그네슘, 철, 아연, 구리, 망간 및 알루미늄 염을 포함한다. 약학적으로 허용되는 비독성 유기염기로부터 유도된 염은 일차, 이차 및 삼차아민, 치환된 아민(자연적으로 발생한 치환된 아민을 포함함), 환형 아민 및 염기성 이온교환수지, 예컨대 이소프로필아민, 트라이메틸아민, 다이에틸아민, 트라이에틸아민, 트라이프로필아민, 에탄올아민, 2-다이에틸아미노에탄올, 트라이메타민, 다이사이클로헥실아민, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 카페인, 프로카인, 하이드라바민, 콜린, 베타인, 에틸렌다이아민, 글루코사민, 메틸글루카민, 테오브로민, 푸린, 피페라진, 피페리딘, N-에틸피페리딘 및 폴리아민 수지의 염을 포함한다.

하나 이상의 키랄 중심을 함유하는 화학식 I의 화합물 및 이의 전구약물은 라세미체, 부분입체 이성질체 혼합물 또는 광학적으로 활성인 단일 이성질체로서 존재할 수 있다. 라세미체는 공지된 방법에 따라 거울상 이성질체로 분리될 수 있다. 특히, 결정화에 의해 분리될 수 있는 부분입체 이성질체 염은 광학적으로 활성인 산, 예컨대 D- 또는 L-타르타르산, 만델산, 락트산 또는 캄포설폰산과의 반응에 의해 라세미 혼합물로부터 형성된다.

용어 "전구약물"은 목적하는 약물학적 효과를 생성하기 위해 투여 후에 개체에 의해 예를 들어 생물학적 유체 또는 효소에 의해 화합물의 약물학적 활성 형태로 생체내 대사되는 화합물의 형태 또는 유도체를 의미한다. 전구약물은 예를 들어 문헌["The Organic Chemistry of Drug Design and Drug Action", by Richard B. Silverman, Academic Press, San Diego, 2004, Chapter 8 Prodrugs and Drug Delivery Systems, pp. 497-558]에 기재되어 있다.

"약학적 활성 대사물"은 명시된 화합물 또는 이의 염의 체내 대사를 통해 생성된 약물학적 활성 생성물을 의미한다. 체내에 진입한 후에, 대부분의 약물은 이의 물리학적 특성 및 생물학적 효과를 변화시킬 수 있는 화학 반응에 대한 기질이다. 본 발명의 화합물의 극성에 일반적으로 영향을 미치는 이러한 대사 전환은 약물이 체내에 분포되고 체내로부터 배설되는 방법을 변경한다. 그러나, 일부 경우에, 약물의 대사물은 치료적 효과에 필요하다.

용어 "치료적 유효량"은, 개체에게 투여시 (i) 특정 질병, 질환 또는 장애를 치료하거나 예방하거나, (ii) 특정 질병, 질환 또는 장애의 하나 이상의 증상을 약화시키거나 개선하거나 제거하거나, (iii) 특정 질병, 질환 또는 장애의 하나 이상의 증상의 개시를 예방하거나 지연시키는 본 발명의 화합물의 양을 의미한다. 치료적 유효량은 화합물, 치료할 질병 상태, 치료할 질병의 심각도, 개체의 연령 및 관련 건강, 투여 경로 및 형태, 담당의 또는 수의사의 판단 및 다른 요인에 따라 변할 수 있다.

용어 "약학 조성물"은 포유동물, 예를 들어 인간에게 투여될 치료적 유효량의 약학적 활성 성분을 약학적으로 허용되는 부형제와 함께 포함하는 혼합물 또는 용액을 의미한다.

TLR7 작용제 및 전구약물

본 발명은, 6-아미노-9-벤질-2-(프로필설폰이미도일)-7-(피롤리딘-1-카본일)푸린-8-온;

6-아미노-9-벤질-7-(피페리딘-1-카본일)-2-(프로필설폰이미도일)푸린-8-온;

6-아미노-9-벤질-7-(모폴린-4-카본일)-2-(프로필설폰이미도일)푸린-8-온;

6-아미노-9-벤질-7-(3,3-다이메틸피롤리딘-1-카본일)-2-(프로필설폰이미도일)푸린-8-온;

에틸 1-[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]피롤리딘-2-카복시레이트;

6-아미노-7-(2-아자스피로[3.3]헵탄-2-카본일)-9-벤질-2-(프로필설폰이미도일)푸린-8-온;

6-아미노-9-벤질-7-(2-옥사-6-아자스피로[3.3]헵탄-6-카본일)-2-(프로필설폰이미도일)푸린-8-온;

6-아미노-9-벤질-7-(3,3-다이플루오로피롤리딘-1-카본일)-2-(프로필설폰이미도일)푸린-8-온;

6-아미노-9-벤질-7-(3-플루오로-3-메틸-피롤리딘-1-카본일)-2-(프로필설폰이미도일)푸린-8-온;

및 이들의 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체는 배제되는, 하기 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체:

[화학식 I]

상기 식에서,

R¹은 C_{1- 6}알킬이고;

R²는 치환되지 않거나 할로겐 및 C_{1- 6}알킬로부터 독립적으로 선택된 1, 2 또는 3개의 치환기로 치환된 벤질이고;

R³은 -NR⁴R⁵이되,

R⁴는 C_{1- 6}알킬 또는 C_{1- 6}알콕시C_{1 - 6}알킬이고,

R⁵는 (C_{1- 6}알킬)₂NCOOC_{1 - 6}알킬, C_{1- 6}알콕시C_{1 - 6}알킬, C_{1- 6}알콕시카본일(C_1-6알킬)아미노C_1-6알킬, C_{1- 6}알콕시카본일(페닐)C_{1 - 6}알킬, C_{1- 6}알콕시카본일C_{1 - 6}알킬, C_{1- 6}알콕시카본일옥시C_{1 -6}알킬, C_{1- 6}알킬, C_{1- 6}알킬카본일(C_1-6알킬)아미노C_{1 - 6}알킬 또는 피롤리딘일카바모일옥시C_{1 -6}알킬이거나,

R⁴ 및 R⁵는 이들이 부착된 질소와 함께 헤테로사이클릴을 형성한다.

본 발명의 추가적 실시양태는, (ii) R¹이 C_{1- 6}알킬이고;

R²가 치환되지 않거나 할로겐 또는 C_{1- 6}알킬로 치환된 벤질이고;

R³이 아제티딘일, C_{1- 6}알킬로 치환된 피페라진일, 피페리딘일로 치환된 피페리딘일, 피롤리딘일 또는 -NR⁴R⁵이되,

R⁴가 C_{1- 6}알킬 또는 C_{1- 6}알콕시C_{1 - 6}알킬이고,

R⁵가 (C_{1- 6}알킬)₂NCOOC_{1 - 6}알킬, C_{1- 6}알콕시C_{1 - 6}알킬, C_{1- 6}알콕시카본일(C_1-6알킬)아미노C_{1 -6}알킬, C_{1- 6}알콕시카본일(페닐)C_{1 - 6}알킬, C_{1- 6}알콕시카본일C_{1 - 6}알킬, C_{1- 6}알콕시카본일옥시C_1-6알킬, C_{1- 6}알킬, C_{1- 6}알킬카본일(C_1-6알킬)아미노C_{1 - 6}알킬 또는 피롤리딘일카바모일옥시C_{1 -6}알킬인, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체이다.

본 발명의 추가적 실시양태는 (iii) R¹이 에틸 또는 프로필이고;

R²가 벤질, 브로모벤질, 클로로벤질, 플루오로벤질 또는 메틸벤질이고;

R³이 아제티딘일, 4-메틸피페라진일, 피페리딘일피페리딘일, 피롤리딘일 또는 -NR⁴R⁵이되,

R⁴가 메틸, 에틸, 프로필 또는 메톡시에틸이고,

R⁵가 아세틸(메틸)아미노에틸, 부틸, 부틸(메틸)카바모일옥시에틸, 다이에틸카바모일옥시에틸, 에톡시카본일(메틸)아미노에틸, 에톡시카본일에틸, 에톡시카본일이소부틸, 에톡시카본일이소펜틸, 에톡시카본일메틸, 에톡시카본일옥시에틸, 에톡시카본일(페닐)에틸, 에틸, 이소부틸, 이소프로폭시카본일이소펜틸, 이소프로폭시카본일(페닐)에틸, 이소프로필, 메톡시카본일(메틸)아미노에틸, 메톡시에틸, 메톡시프로필, 프로필, 프로필(메틸)카바모일옥시에틸, 피롤리딘일카바모일옥시에틸, tert-부톡시카본일(메틸)아미노에틸, tert-부톡시카본일에틸, tert-부톡시카본일이소펜틸 또는 tert-부톡시카본일(페닐)에틸인, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체이다.

본 발명의 추가적 실시양태는 (iii-1) R¹이 에틸 또는 프로필이고;

R²가 벤질, 클로로벤질, 플루오로벤질 또는 메틸벤질이고;

R³이 아제티딘일, 4-메틸피페라진일, 피페리딘일피페리딘일, 피롤리딘일 또는 -NR⁴R⁵이되,

R⁴가 메틸, 에틸, 프로필 또는 메톡시에틸이고,

R⁵가 아세틸(메틸)아미노에틸, 부틸, 부틸(메틸)카바모일옥시에틸, 다이에틸카바모일옥시에틸, 에톡시카본일(메틸)아미노에틸, 에톡시카본일에틸, 에톡시카본일이소부틸, 에톡시카본일이소펜틸, 에톡시카본일메틸, 에톡시카본일옥시에틸, 에톡시카본일(페닐)에틸, 에틸, 이소부틸, 이소프로폭시카본일이소펜틸, 이소프로폭시카본일(페닐)에틸, 이소프로필, 메톡시카본일(메틸)아미노에틸, 메톡시에틸, 메톡시프로필, 프로필, 프로필(메틸)카바모일옥시에틸, 피롤리딘일카바모일옥시에틸, tert-부톡시카본일(메틸)아미노에틸, tert-부톡시카본일에틸, tert-부톡시카본일이소펜틸 또는 tert-부톡시카본일(페닐)에틸인, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체이다.

본 발명의 추가적 실시양태는 (iv) R³이 아제티딘일, 4-메틸피페라진일, 피페리딘일피페리딘일, 피롤리딘일, 아세틸(메틸)아미노에틸(메틸)아미노, 비스(메톡시에틸)아미노, 부틸(에틸)아미노, 부틸(메틸)아미노, 부틸(메틸)카바모일옥시에틸(메틸)아미노, 다이에틸카바모일옥시에틸(메틸)아미노, 에톡시카본일(메틸)아미노에틸(메틸)아미노, 에톡시카본일에틸(메틸)아미노, 에톡시카본일이소부틸(메틸)아미노, 에톡시카본일이소펜틸(메틸)아미노, 에톡시카본일메틸(메틸)아미노, 에톡시카본일옥시에틸(메틸)아미노, 에톡시카본일(페닐)에틸(메틸)아미노, 에틸(메틸)아미노, 이소부틸(메틸)아미노, 이소프로폭시카본일이소펜틸(메틸)아미노, 이소프로폭시카본일(페닐)에틸(메틸)아미노, 이소프로필(메틸)아미노, 메톡시카본일(메틸)아미노에틸(메틸)아미노, 메톡시에틸(에틸)아미노, 메톡시에틸(메틸)아미노, 메톡시에틸(프로필)아미노, 메톡시프로필(메틸)아미노, 프로필(에틸)아미노, 프로필(메틸)아미노, 프로필(메틸)카바모일옥시에틸(메틸)아미노, 피롤리딘일카바모일옥시에틸(메틸)아미노, tert-부톡시카본일(메틸)아미노에틸(메틸)아미노, tert-부톡시카본일에틸(메틸)아미노, tert-부톡시카본일이소펜틸(메틸)아미노 또는 tert-부톡시카본일(페닐)에틸(메틸)아미노인, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체이다.

본 발명의 추가적 실시양태는 (v) R¹이 에틸인, 화학식 I의 화합물이다.

본 발명의 추가적 실시양태는 (vi) R²가 할로겐 또는 C_{1- 6}알킬로 치환된 벤질인, 화학식 I의 화합물이다.

본 발명의 추가적 실시양태는 (vii) R²가 브로모벤질, 클로로벤질, 플루오로벤질 또는 메틸벤질인, 화학식 I의 화합물이다.

본 발명의 추가적 실시양태는 (vii-1) R²가 클로로벤질, 플루오로벤질 또는 메틸벤질인, 화학식 I의 화합물이다.

본 발명의 추가적 실시양태는 (viii) R²가 브로모벤질, 클로로벤질 또는 플루오로벤질인, 화학식 I의 화합물이다.

본 발명의 추가적 실시양태는 (viii-1) R²가 클로로벤질 또는 플루오로벤질인, 화학식 I의 화합물이다.

본 발명의 추가적 실시양태는 (ix) R³이 -NR⁴R⁵이되, R⁴가 C_{1- 6}알킬이고, R⁵가 C_1-6알킬인, 화학식 I의 화합물이다.

본 발명의 추가적 실시양태는 (x) R³이 프로필(메틸)아미노 또는 에틸(메틸)아미노인, 화학식 I의 화합물이다.

본 발명의 추가적 실시양태는 (xi) R¹이 C_{1- 6}알킬이고;

R²가 할로겐 또는 C_{1- 6}알킬로 치환된 벤질이고;

R³이 -NR⁴R⁵이되, R⁴가 C_{1- 6}알킬이고, R⁵가 C_{1- 6}알킬인, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체이다.

본 발명의 추가적 실시양태는 (xii) R¹이 에틸이고;

R²가 메틸벤질, 브로모벤질, 클로로벤질 또는 플루오로벤질이고;

R³이 프로필(메틸)아미노 또는 에틸(메틸)아미노인, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체이다.

본 발명의 추가적 실시양태는 (xii-1) R¹이 에틸이고;

R²가 메틸벤질, 클로로벤질 또는 플루오로벤질이고;

R³이 프로필(메틸)아미노 또는 에틸(메틸)아미노인, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체이다.

본 발명의 또 다른 실시양태는 (xiii) 하기와 같은 특정 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체이다:

6-아미노-9-벤질-N-메틸-8-옥소-N-프로필-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-9-벤질-N-(2-메톡시에틸)-N-메틸-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-9-벤질-N-에틸-8-옥소-N-프로필-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-9-벤질-7-[4-(1-피페리딜)피페리딘-1-카본일]-2-(프로필설폰이미도일)푸린-8-온;

6-아미노-9-벤질-N-에틸-N-(2-메톡시에틸)-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-9-벤질-N-부틸-N-에틸-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-9-벤질-N-(2-메톡시에틸)-8-옥소-N-프로필-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-9-벤질-N,N-비스(2-메톡시에틸)-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-7-(아제티딘-1-카본일)-9-벤질-2-(프로필설폰이미도일)푸린-8-온;

6-아미노-9-벤질-N-이소프로필-N-메틸-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-9-벤질-7-(4-메틸피페라진-1-카본일)-2-(프로필설폰이미도일)푸린-8-온;

6-아미노-9-벤질-N-(3-메톡시프로필)-N-메틸-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-9-벤질-N-이소부틸-N-메틸-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카복스아미드;

에틸 2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]아세테이트;

에틸 3-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]프로파노에이트;

tert-부틸 3-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]프로파노에이트;

에틸 (2S)-2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]프로파노에이트;

tert-부틸 (2S)-2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]-4-메틸-펜타노에이트;

이소프로필 (2S)-2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]-4-메틸-펜타노에이트;

에틸 (2S)-2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]-3-메틸-부타노에이트;

에틸 (2S)-2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]-4-메틸-펜타노에이트;

에틸 (2S)-2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]-3-페닐-프로파노에이트;

이소프로필 (2S)-2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]-3-페닐-프로파노에이트;

tert-부틸 (2S)-2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]-3-페닐-프로파노에이트;

N-[2-[아세틸(메틸)아미노]에틸]-6-아미노-9-벤질-N-메틸-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카복스아미드;

메틸 N-[2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]에틸]-N-메틸-카바메이트;

tert-부틸 N-[2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]에틸]-N-메틸-카바메이트;

에틸 N-[2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]에틸]-N-메틸-카바메이트;

2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]에틸 N-부틸-N-메틸-카바메이트;

2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]에틸 피롤리딘-1-카복시레이트;

2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]에틸 N-메틸-N-프로필-카바메이트;

2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]에틸 N,N-다이에틸카바메이트;

2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]에틸 에틸 카보네이트;

6-아미노-N-부틸-9-[(4-클로로페닐)메틸]-N-메틸-8-옥소-2-[S(S)-프로필설폰이미도일]푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-N-부틸-9-[(4-클로로페닐)메틸]-N-메틸-8-옥소-2-[S(S)-프로필설폰이미도일]푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-9-[(4-클로로페닐)메틸]-N-에틸-N-메틸-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-N-메틸-8-옥소-N-프로필-2[S(S)-프로필설폰이미도일]-9-(p-톨릴메틸)푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-N-메틸-8-옥소-N-프로필-2[S(R)-프로필설폰이미도일]-9-(p-톨릴메틸)푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-2-[S(S)-프로필설폰이미도일]-9-(p-톨릴메틸)-7-(피롤리딘-1-카본일)푸린-8-온;

6-아미노-2-[S(R)-프로필설폰이미도일]-9-(p-톨릴메틸)-7-(피롤리딘-1-카본일)푸린-8-온;

6-아미노-N-(2-메톡시에틸)-N-메틸-8-옥소-2-[S(S)-프로필설폰이미도일]-9-(p-톨릴메틸)푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-N-(2-메톡시에틸)-N-메틸-8-옥소-2-[S(R)-프로필설폰이미도일]-9-(p-톨릴메틸)푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-N-에틸-N-메틸-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)-9-(p-톨릴메틸)푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-N-부틸-N-메틸-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)-9-(p-톨릴메틸)푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-9-[(4-클로로페닐)메틸]-2-[S(R)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-9-[(4-클로로페닐)메틸]-2-[S(S)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-9-[(4-클로로페닐)메틸]-N-에틸-2[S(S)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-9-[(4-클로로페닐)메틸]-N-에틸-2-[S(R)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-2-[S(S)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-9-(p-톨릴메틸)푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-2-[S(R)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-9-(p-톨릴메틸)푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-N-에틸-2[S(S)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-9-(p-톨릴메틸)푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-N-에틸-2-[S(R)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-9-(p-톨릴메틸)푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-2-[S(S)에틸설폰이미도일]-9-[(4-플루오로페닐)메틸]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-2-[S(R)에틸설폰이미도일]-9-[(4-플루오로페닐)메틸]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-N-에틸-2-(에틸설폰이미도일)-9-[(4-플루오로페닐)메틸]-N-메틸-8-옥소-푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-N-에틸-2-[S(S)-(에틸설폰이미도일)]-9-[(4-플루오로페닐)메틸]-N-메틸-8-옥소-푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-N-에틸-2-[S(R)-(에틸설폰이미도일)]-9-[(4-플루오로페닐)메틸]-N-메틸-8-옥소-푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-9-[(4-브로모페닐)메틸]-2-(에틸설폰이미도일)-N-메틸-8-옥소-N-프로필-푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-2-[S(R)-에틸설폰이미도일]-9-[(4-브로모페닐)메틸]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-2-[S(S)-에틸설폰이미도일]-9-[(4-브로모페닐)메틸]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-9-[(4-브로모페닐)메틸]-N-에틸-2-(에틸설폰이미도일)-N-메틸-8-옥소-푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-9-[(4-브로모페닐)메틸]-N-에틸-2-[S(S)-(에틸설폰이미도일)]-N-메틸-8-옥소-푸린-7-카복스아미드; 및

6-아미노-9-[(4-브로모페닐)메틸]-N-에틸-2-[S(R)-(에틸설폰이미도일)]-N-메틸-8-옥소-푸린-7-카복스아미드.

본 발명의 또 다른 실시양태는 (xiv) 하기와 같은 보다 특정한 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체이다:

6-아미노-9-벤질-N-메틸-8-옥소-N-프로필-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-9-[(4-클로로페닐)메틸]-2-[S(R)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-9-[(4-클로로페닐)메틸]-2-[S(S)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-9-[(4-클로로페닐)메틸]-N-에틸-2[S(S)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-9-[(4-클로로페닐)메틸]-N-에틸-2-[S(R)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-2-[S(S)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-9-(p-톨릴메틸)푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-2-[S(R)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-9-(p-톨릴메틸)푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-N-에틸-2[S(S)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-9-(p-톨릴메틸)푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-N-에틸-2-[S(R)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-9-(p-톨릴메틸)푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-2-(에틸설폰이미도일)-9-[(4-플루오로페닐)메틸]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-2-[S(S)에틸설폰이미도일]-9-[(4-플루오로페닐)메틸]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-2-[S(R)에틸설폰이미도일]-9-[(4-플루오로페닐)메틸]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-N-에틸-2-(에틸설폰이미도일)-9-[(4-플루오로페닐)메틸]-N-메틸-8-옥소-푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-N-에틸-2-[S(S)-(에틸설폰이미도일)]-9-[(4-플루오로페닐)메틸]-N-메틸-8-옥소-푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-N-에틸-2-[S(R)-(에틸설폰이미도일)]-9-[(4-플루오로페닐)메틸]-N-메틸-8-옥소-푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-9-[(4-브로모페닐)메틸]-2-(에틸설폰이미도일)-N-메틸-8-옥소-N-프로필-푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-2-[S(R)-에틸설폰이미도일]-9-[(4-브로모페닐)메틸]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-2-[S(S)-에틸설폰이미도일]-9-[(4-브로모페닐)메틸]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-9-[(4-브로모페닐)메틸]-N-에틸-2-(에틸설폰이미도일)-N-메틸-8-옥소-푸린-7-카복스아미드;

6-아미노-9-[(4-브로모페닐)메틸]-N-에틸-2-[S(S)-(에틸설폰이미도일)]-N-메틸-8-옥소-푸린-7-카복스아미드; 및

6-아미노-9-[(4-브로모페닐)메틸]-N-에틸-2-[S(R)-(에틸설폰이미도일)]-N-메틸-8-옥소-푸린-7-카복스아미드.

일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 시험되고 하기 기준 화합물에 대해 비교되었다. 간 질환을 치료하기 위한 TLR7 작용제의 발견 및 개발에 초점을 맞추는 가장 성공한 생물 약제학 회사로서, 길리드(Gilead)는 제2상 연구에 진입한 선두적인 화합물, 예컨대 GS-9620을 사용하는 가장 진보한 TLR7 작용제를 소유한다. US 2010/0143301에 실시예 49로서 개시된 길리드 화합물 GS-9620 및 JP 1999193282에 개시된 화합물 S-2 및 화합물 S-3은 본원에서 기준 화합물로서 모두 선택되었다:

합성

본 발명의 화합물은 임의의 종래의 방법에 의해 제조될 수 있다. 이들 화합물 및 이의 출발 물질을 합성하는 데 적합한 공정은 하기 도식 및 실시예에 제공된다. 모든 치환기, 특히 R¹ 내지 R¹⁴는 달리 지시되지 않는 한 상기에 정의된 바와 같다. 또한, 달리 명확히 언급되지 않는 한, 모든 반응, 반응 조건, 약어 및 기호는 유기 화학의 통상의 숙련가에게 주지된 의미를 갖는다.

[도식 1]

화학식 VI의 화합물은 화학식 VII의 이소시아네이트를 아미노말로노니트릴 p-톨루엔설포네이트에 의해 고리화함으로서 제조된다. 이어서, 화학식 V의 바이사이클은 무기염기(예컨대 NaOH 또는 KOH)의 존재 하에 화학식 VI의 화합물과 벤조일 이소티오시아네이트의 반응에 의해 합성된다. 염기(예컨대 K₂CO₃, NaH 또는 Cs₂CO₃)의 존재 하에 화학식 V의 바이사이클을 알킬 할라이드에 의해 알킬화하여 화학식 IV의 화합물을 제공한다. 화학식 III의 화합물은 산화제(예컨대 메타-클로로퍼옥시벤조산, 우레아-수소 퍼옥사이드 부가물 및 HIO₄)에 의한 화학식 IV의 화합물의 산화에 의해 제조된다. 화학식 II의 화합물은 이민화 시약(예컨대 산 중의 나트륨 아지드, 여기서, 상기 산은 예를 들어 이튼(Eaton) 시약 또는 PPA임)에 의한 화학식 III의 화합물의 이민화에 의해 수득된다. 화학식 I의 화합물은 혼합된 염기(예컨대 피리딘 및 트라이에틸아민; 피리딘 및 DIPEA; DMAP 및 트라이에틸아민; 또는 DMAP 및 DIPEA)의 존재 하에 화학식 II의 화합물과 카바모일 클로라이드의 반응에 의해 수득된다.

[도식 2]

화학식 II의 화합물은 또한 도식 2와 같이 제조될 수 있다.

화학식 X의 화합물은 화학식 XI의 화합물과 R²NH₂의 반응에 의해 제조된다. 환원 시약(예컨대 AcOH 중의 아연 또는 철 분말)에 의한 화학식 X의 화합물의 환원으로 화학식 IX의 화합물을 수득한다. 고리화 시약(예컨대 포스겐, 카본일 다이이미다졸, 다이에틸 카보네이트 및 트라이포스겐)에 의한 화학식 IX의 화합물의 고리화로 화학식 VIII의 화합물을 수득한다. 화학식 IVa의 화합물은 화학식 VIII의 화합물을 PMBNH₂로 처리함으로써 제조된다. 화학식 III의 화합물은 화학식 IVa의 화합물을 산(예컨대 CF₃COOH)에 의해 탈보호시킨 후에, 산화제(예컨대 메타-클로로퍼옥시벤조산, 우레아-수소 퍼옥사이드 부가물 및 HIO₄)에 의해 산화시켜 제조된다. 화학식 II의 화합물은 이민화 시약(예컨대 산 중의 나트륨 아지드, 여기서 상기 산은 예를 들어 이튼 시약 또는 PPA임)에 의한 화학식 III의 화합물의 이민화에 의해 수득된다.

또한, 본 발명은, 혼합된 염기의 존재 하에 하기 화학식 II의 화합물을 카바모일 클로라이드와 반응시키는 단계를 포함하는, 화학식 I의 화합물의 제조 방법에 관한 것이다:

[화학식 II]

상기 식에서,

R¹ 및 R²는 상기에 정의된 바와 같다.

상기 단계에서, 혼합된 염기는 예를 들어피리딘 및 트라이에틸아민; 피리딘 및 DIPEA; DMAP 및 트라이에틸아민; 또는 DMAP 및 DIPEA일 수 있다.

또한, 화학식 I의 화합물은 상기 방법에 따라 제조될 때 본 발명의 목적이다.

약학 조성물 및 투여

또 다른 실시양태는 본 발명의 화합물 및 치료적 불활성 담체, 희석제 또는 부형제를 함유하는 약학 조성물 또는 약제, 및 상기 조성물 및 약제의 제조에서 본 발명의 화합물의 사용 방법을 제공한다. 한 예에서, 화학식 I의 화합물은 주위 온도에서 적절한 pH에서 목적하는 정도의 순도에서 생리학적으로 허용되는 담체(즉, 생약 투여 형태로 사용되는 투여량 및 농도에서 수용자에게 비독성인 담체)와 혼합함으로써 제형화될 수 있다. 제형의 pH는 주로 특정 용도 및 화합물의 농도에 좌우되나, 바람직하게는 약 3 내지 약 8 범위이다. 한 예에서, 화학식 I의 화합물은 pH 5에서 아세테이트 완충제 중에 제형화된다. 또 다른 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 멸균된다. 화합물은 예를 들어 고체 또는 비정질 조성물로서, 동결건조된 제형으로서 또는 수용액으로서 저장될 수 있다.

조성물은 적절한 의료 행위에 부합하는 방식으로 제형화되고 투여되고 투약된다. 본원에 있어서 고려 인자는 치료할 특정 장애, 치료받을 특정 포유동물, 개별적 환자의 임상적 상태, 장애의 원인, 제제의 전달 부위, 투여 방법, 투여 일정 및 개업의에게 공지된 다른 인자를 포함한다. 투여될 화합물의 "유효량"은 이러한 고려 인자에 좌우될 것이고, TLR7 수용체를 활성화시키고 INF-α 및 다른 시토카인의 생성을 야기하는 데 필요한 최소량이고, 이는 B형 간염 및/또는 C형 바이러스 감염된 환자의 치료 또는 예방을 위해 사용될 수 있다.

한 예에서, 투여량 당 비경구로 투여되는 본 발명의 화합물의 유효량은 약 0.1 내지 50 mg/kg, 대안적으로 약 0.1 내지 30 mg/kg 환자 체중/일 범위일 것이되, 사용되는 화합물의 전형적인 초기 범위는 0.3 내지 15 mg/kg/일이다. 또 다른 실시양태에서, 경구 단위 투여량 형태, 예컨대 정제 및 캡슐은 바람직하게는 약 20 내지 약 1000 mg의 본 발명의 화합물을 함유한다.

본 발명의 화합물은 경구, 국소(볼 및 설하를 포함함), 직장, 질, 경피, 비경구, 피하, 복강내, 폐내, 피내, 척추강내, 경막외 및 비강내, 및 국부 치료가 목적되는 경우 병소내 투여를 포함하는 임의의 적합한 방법에 의해 투여될 수 있다. 비경구 주입은 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내 또는 피하 투여를 포함한다.

본 발명의 화합물은 임의의 편리한 투여 형태, 예를 들어 정제, 분말, 캡슐, 용액, 분산액, 현탁액, 시럽, 분무, 좌제, 젤, 유화액, 패취 등으로 투여될 수 있다. 이러한 조성물은 약학 제제에 통상적인 성분, 예를 들어 희석제, 담체, pH 조절제, 감미제, 벌크제 및 추가적 활성제를 함유할 수 있다.

전형적인 제형은 본 발명의 화합물 및 담체 또는 부형제를 혼합함으로서 제조된다. 적합한 담체 및 부형제는 당업자에게 주지되어 있고 예를 들어 문헌[Ansel, Howard C., et al., Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems. Philadelphia: Lippincott, Williams & Wilkins, 2004]; [Gennaro, Alfonso R., et al. Remington: The Science and Practice of Pharmacy. Philadelphia: Lippincott, Williams & Wilkins, 2000]; 및 [Rowe, Raymond C. Handbook of Pharmaceutical Excipients. Chicago, Pharmaceutical Press, 2005]에 상세히 기재되어 있다. 또한, 제형은 하나 이상의 완충제, 안정화제, 계면활성제, 습윤제, 활택제, 유화제, 현탁제, 보존제, 산화방지제, 불투명화제, 활주제, 가공 보조제, 착색제, 감미제, 항료, 향미제, 희석제, 및 약물(즉, 본 발명의 화합물 또는 이의 약학 조성물)의 엘레강트 제시를 제공하는 다른 공지된 첨가제 또는 약학 제품(즉, 약제) 제조의 보조제를 포함할 수 있다.

적합한 경구 투여량 형태의 예는 약 30 내지 90 mg의 무수 락토스, 약 5 내지 40 mg의 나트륨 크로스카르멜로스, 약 5 내지 30 mg의 폴리비닐피롤리돈(PVP) K30 및 약 1 내지 10 mg의 스테아르산 마그네슘과 혼합된 약 20 내지 1000 mg의 본 발명의 화합물을 함유하는 정제이다. 분말화된 성분을 먼저 함께 혼합한 후에, PVP의 용액과 혼합한다. 생성된 조성물은 건조되고 과립화되고 스테아르산 마그네슘과 혼합되고 통상적인 기기를 사용하여 정제 형태로 압착될 수 있다. 에어로졸 제형의 예는 본 발명의 화합물(예를 들어 20 내지 1000 mg)을 적합한 완충제 용액(예를 들어 포스페이트 완충제)에 용해시키고 필요한 경우 긴장제(예를 들어 나트륨 클로라이드의 염)를 첨가함으로써 제조될 수 있다. 용액은 예를 들어 0.2 μm 필터를 사용하여 여과되어 불순물 및 오염물을 제거할 수 있다.

따라서, 실시양태는 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체를 포함하는 약학 조성물을 포함한다.

추가적 실시양태는, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체를 약학적으로 허용되는 담체 또는 부형제와 함께 포함하는 약학 조성물을 포함한다.

또 다른 실시양태는 B형 간염 바이러스 감염의 치료에서 사용하기 위한 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체를 포함하는 약학 조성물을 포함한다.

적응증 및 치료 방법

본 발명은 B형 간염 바이러스 감염 및/또는 C형 간염 바이러스 감염의 치료 또는 예방이 필요한 환자에서 B형 간염 바이러스 감염 및/또는 C형 간염 바이러스 감염을 치료하거나 예방하는 방법을 제공한다.

본 발명은 B형 간염 및/또는 C형 바이러스 감염의 치료 및/또는 예방을 위해 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 본 발명의 다른 화합물을 환자의 혈류 내로 도입하는 방법을 추가로 제공한다.

본 발명의 방법은 특히 인간 환자에게 적합하다. 특히, 본 발명의 방법 및 투여량은 비제한적으로 HBV 및/또는 HCV 감염된 환자에게 유용할 수 있다. 또한, 본 발명의 방법 및 투여량은 다른 항바이러스 치료 중인 환자에게 유용하다. 본 발명의 예방 방법은 바이러스 감염 위험에 있는 환자에게 특히 유용하다. 이들 환자는 비제한적으로 보건 종사자, 예를 들어 의사, 간호사, 호스피스 케어 제공자; 군 인력; 교사; 보육 종사자; 및 사회 원조 복지사, 선교사 및 외국 외교관을 포함하는, 해외 지역, 특히 제3 세계 지역을 여행하거나 거기에 사는 환자를 포함한다. 마지막으로, 상기 방법 및 조성물은 난치 환자 또는 치료에 내성을 갖는, 예컨대 역전사 효소 억제제, 프로테아제 억제제 등에 내성을 갖는 환자의 치료를 포함한다.

또 다른 실시양태는 B형 간염 바이러스 감염 및/또는 C형 간염 바이러스 감염의 치료가 필요한 포유동물에서 B형 간염 바이러스 감염 및/또는 C형 간염 바이러스 감염을 치료하거나 예방하는 방법을 포함하되, 상기 방법은 상기 포유동물에게 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물, 또는 이의 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 전구약물 또는 약학적으로 허용되는 염을 투여하는 단계를 포함한다.

도 1은 실시예 41-B의 단결정 X-선 회절을 도시한다.
도 2는 실시예 42-A의 단결정 X-선 회절을 도시한다.
도 3은 실시예 43-B의 단결정 X-선 회절을 도시한다.
도 4는 비히클; 또는 10 mg/kg QOD 또는 QW의 실시예 43-A로 42일 동안 처리된 AAV-HBV 감염된 마우스의 HBV DNA, HBsAg 및 항-HBs 항체 수준을 보여준다. 결과는 평균 ± SEM으로서 제시된다. LLOQ: 정량화 하한.
도 5는 비히클; 또는 1, 3 또는 10 mg/kg QOD 또는 10 mg/kg QW의 실시예 41-A로 42일 동안 처리된 AAV-HBV 감염된 마우스의 HBV DNA, HBsAg 및 항-HBs 항체 수준을 보여준다. 결과는 평균 ± SEM으로서 제시된다. LLOQ: 정량화 하한.
도 6은 비히클; 또는 1, 3 또는 10 mg/kg QOD의 실시예 42-A로 42일 동안 처리된 AAV-HBV 감염된 마우스의 HBV DNA, HBsAg 및 항-HBs 항체 수준을 보여준다. 결과는 평균 ± SEM으로서 제시된다. LLOQ: 정량화 하한.
도 7은 비히클; 또는 1, 3 또는 10 mg/kg QOD의 실시예 41-B로 42일 동안 처리된 AAV-HBV 감염된 마우스의 HBV DNA, HBsAg 및 항-HBs 항체 수준을 보여준다. 결과는 평균 ± SEM으로서 제시된다. LLOQ: 정량화 하한.

실시예

본 발명은 하기 실시예를 참고로 하여 더욱 완전하게 이해될 것이다. 그러나, 이는 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.

약어

aq.: 수성

BSA: N,O-비스(트라이메틸실릴)아세트아미드

CDI: N,N'-카본일 다이이미다졸

DIEPA: N,N-다이에틸프로필아민

DBU: 1,8-다이아자바이사이클로운데크-7-엔

DPPA: 다이페닐포스포릴 아지드

EC₅₀: 작용제에 대한 최대로 가능한 반응의 50%를 생성하는, 작용제의 몰 농도

EDC: N1-((에틸이미노)메틸렌)-N3,N3-다이메틸프로판-1,3-다이아민

EtOAc 또는 EA: 에틸 아세테이트

HATU: (1-[비스(다이메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트라이아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥사이드 헥사플루오로포스페이트)

hr: 시간

HPLC: 고성능 액체 크로마토그래피

HOBt: N-하이드록시벤조트라이아졸

MS (ESI): 질량 분광학(전자 분무 이온화)

m-CPBA: 3-클로로퍼벤조산

MTEB: 메틸 tert-부틸 에터

NMP: N-메틸피롤리돈

obsd.: 관찰값

PE: 페트롤륨 에터

PMB: p-메톡시벤질

PPA: 폴리인산

QOD: 격일로

QW: 1주일에 1회

RT 또는 rt: 실온

sat.: 포화

TFA: 트라이플루오로아세트산

TEA: 트라이에틸아민

V/V: 부피비

일반적 실험 조건

중간체 및 최종 화합물을 하기 기기 중 하나를 사용하는 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하였다: i) Biotage SP1 시스템 및 Quad 12/25 카트리지 모듈; ii) ISCO 콤비(combi)-플래쉬 크로마토그래피 기기. 실리카겔 브랜드 및 공극 크기: i) KP-SIL 60 Å, 입자 크기: 40 내지 60 μm; ii) CAS 등록 번호: 실리카겔: 63231-67-4, 입자 크기: 47 내지 60 μm 실리카겔; iii) 칭다오 하이양 케미컬 컴패니 리미티드(Qingdao Haiyang Chemical Co., Ltd.)의 ZCX, 공극: 200 내지 300 또는 300 내지 400.

중간체 및 최종 화합물을 엑스 브릿지(X Bridge, 등록상표) Perp C18(5 μm, OBD(등록상표) 30 × 100 mm) 컬럼 또는 선파이어(SunFire, 등록상표) Perp C18(5 μm, OBDTM 30 × 100 mm) 컬럼을 사용하는 역상 컬럼 분취 HPLC에 의해 정제하였다.

LC/MS 스펙트럼을 워터스(Waters) UPLC-SQD Mass를 사용하여 수득하였다. 표준 LC/MS 조건은 하기와 같았다(3분의 운용 시간):

산성 조건: A: H₂O 중의 0.1% 폼산 및 1% 아세토니트릴; B: 아세토니트릴 중의 0.1% 폼산;

염기성 조건: A: H₂O 중의 0.05% NH₃·H₂O; B: 아세토니트릴.

질량 스펙트럼(MS): 일반적으로 모 질량을 나타내는 이온만 보고되며, 달리 언급되지 않는 한, 인용된 질량 이온은 양성 질량 이온 (M+H)⁺이다.

NMR 스펙트럼을, 브루커 어밴스(Bruker Avance) 400MHz를 사용하여 수득하였다.

공기-민감성 시약을 수반하는 모든 반응을 아르곤 대기 하에 수행하였다. 시약을 달리 언급되지 않는 한 추가적 정제 없이 상업적 공급사로부터 입수한 대로 사용하였다.

제조 실시예

중간체의 제조

중간체 AA

N- 메틸 -N-프로필- 카바모일 클로라이드

0℃에서 DCM(70 mL) 중의 N-메틸프로판-1-아민(5 g, 68.4 mmol) 및 탄산 수소 나트륨(11.5 g, 137 mmol)의 혼합물에 DCM(30 mL) 중의 비스(트라이클로로메틸) 카보네이트(8.11 g, 27.3 mmol)를 적가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고 여과하였다. 여과액을 진공에서 농축하였다. 수득된 N-메틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(7.2 g, 중간체 AA)를 후속 단계에 추가적 정제 없이 사용하였다.

중간체 AB

N-(2- 메톡시에틸 )-N- 메틸 - 카바모일 클로라이드

2-메톡시-N-메틸-에탄아민을 N-메틸프로판-1-아민 대신에 사용하여 중간체 AB를 중간체 AA와 유사하게 제조하였다. N-(2-메톡시에틸)-N-메틸-카바모일 클로라이드(8 g, 중간체 AB)를 수득하고 후속 단계에 추가적 정제 없이 사용하였다.

중간체 AC

N-에틸-N-프로필- 카바모일 클로라이드

N-에틸프로판-1-아민을 N-메틸프로판-1-아민 대신에 사용하여 중간체 AC를 중간체 AA와 유사하게 제조하였다. N-에틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(12.6 g, 중간체 AC)를 황색 오일로 수득하고 후속 단계에 추가적 정제 없이 사용하였다.

중간체 AD

N-에틸-N-(2- 메톡시에틸 ) 카바모일 클로라이드

N-에틸-2-메톡시에탄아민을 N-메틸프로판-1-아민 대신에 사용하여 중간체 AD를 중간체 AA와 유사하게 제조하였다. 미가공 N-에틸-N-(2-메톡시에틸)카바모일 클로라이드(2.5 g, 중간체 AD)를 연황색 오일로 수득하고 후속 단계에 추가적 정제 없이 사용하였다.

중간체 AE

N-부틸-N-에틸- 카바모일 클로라이드

N-에틸부탄-1-아민(5 g)을 N-메틸프로판-1-아민 대신에 사용하여 중간체 AE를 중간체 AA와 유사하게 제조하였다. 미가공 N-부틸-N-에틸-카바모일 클로라이드(6.3 g, 중간체 AE)를 연황색 오일로 수득하고 후속 단계에 추가적 정제 없이 사용하였다.

중간체 AF

N-(2- 메톡시에틸 )-N-프로필- 카바모일 클로라이드

N-(2-메톡시에틸)프로판-1-아민(2 g, 17.1 mmol)을 N-메틸프로판-1-아민 대신에 사용하여 중간체 AF를 중간체 AA와 유사하게 제조하였다. 미가공 N-(2-메톡시에틸)-N-프로필-카바모일 클로라이드(2.5 g, 중간체 AF)를 연황색 오일로 수득하고 후속 단계에 추가적 정제 없이 사용하였다.

중간체 AG

N,N - 비스(2-메톡시에틸)카바모일 클로라이드

비스(2-메톡시에틸)아민(2 g, 15 mmol)을 N-메틸프로판-1-아민 대신에 사용하여 중간체 AG를 중간체 AA와 유사하게 제조하였다. 미가공 생성물 N,N-비스(2-메톡시에틸)카바모일 클로라이드(2.6 g, 중간체 AG)를 연황색 오일로 수득하고 후속 단계에 추가적 정제 없이 사용하였다.

중간체 AH

아제티딘 -1-카본일 클로라이드

아제티딘 하이드로클로라이드(10.7 g, 107 mmol) 및 중탄산 나트륨(3 당량)을 N-메틸프로판-1-아민 및 중탄산 나트륨(2 당량) 대신에 사용하여 중간체 AH를 중간체 AA와 유사하게 제조하였다. 미가공 아제티딘-1-카본일 클로라이드(1.5 g, 중간체 AH)를 연황색 오일로 수득하고 후속 단계에 추가적 정제 없이 사용하였다.

중간체 AI

N-이소프로필-N- 메틸 - 카바모일 클로라이드

N-메틸프로판-2-아민(5 g, 19.4 mmol)을 N-메틸프로판-1-아민 대신에 사용하여 중간체 AI를 중간체 AA와 유사하게 제조하였다. 미가공 N-이소프로필-N-메틸-카바모일 클로라이드(8.6 g, 중간체 AI)를 황색 오일로 수득하고 후속 단계에 추가적 정제 없이 사용하였다.

중간체 AL

N-이소부틸-N- 메틸 - 카바모일 클로라이드

N-2-다이메틸프로판-1-아민(4.8 g)을 N-메틸프로판-1-아민 대신에 사용하여 중간체 AL을 중간체 AA와 유사하게 제조하였다. 미가공 N-이소부틸-N-메틸-카바모일 클로라이드(8.1 g, 중간체 AL)를 연황색 오일로 수득하고 후속 단계에 추가적 정제 없이 사용하였다.

중간체 AP

에틸 2-[ 클로로카본일(메틸)아미노 ]아세테이트

DCM(5 mL) 중의 트라이포스겐(728 mg, 2.45 mmol)의 용액에 0℃에서 DCM(5 mL) 중의 에틸 2-(메틸아미노)아세테이트 하이드로클로라이드(1.3 g, 8.46 mmol) 및 피리딘(1 mL)의 용액을 적가하였다. 반응 혼합물이 주황색이 되었고, 황색 침전물이 나타난 후에, 이를 실온으로 가온하였다. 1시간 동안 교반한 후에, 수성 HCl(0.1 N, 25 mL)을 반응 혼합물에 첨가하고, 유기층을 분리하고 0.1 N HCl(10 mL)로 2회 세척하고 염수(10 mL)로 세척하고 Na₂SO₄로 건조하고 진공에서 농축하여 미가공 에틸 2-[클로로카본일(메틸)아미노]아세테이트(2.0 g, 중간체 AP)를 연황색 오일로 수득하고 후속 단계에 추가적 정제 없이 사용하였다.

중간체 AR

tert -부틸 3-[ 클로로카본일(메틸)아미노 ] 프로파노에이트

단계 1: tert-부틸 3-(메틸아미노)프로파노에이트(화합물 AR-1)의 제조

DMF(40 mL) 중의 tert-부틸 아크릴레이트(3 g)의 용액에 -45℃에서 메틸아민 하이드로클로라이드(4.74 g, 70 mmol) 및 DBU(21.4 g, 140 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 반응 온도를 -10℃로 가온하였다. 반응 혼합물을 동일한 온도에서 2.5시간 동안 교반하였다. Et₂O(200 mL)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 염수(50 mL)로 4회 세척하였다. 분리된 유기층을 Na₂SO₄로 건조하고 진공에서 농축하여 tert-부틸 3-(메틸아미노)프로파노에이트(3.5 g, 화합물 AR-1)를 연황색 오일로 수득하였다.

단계 2: tert-부틸 3-[클로로카본일(메틸)아미노]프로파노에이트(중간체 AR)의 제조

tert-부틸 3-(메틸아미노)프로파노에이트(3.4 g, 화합물 AR-1)를 에틸 2-(메틸아미노)아세테이트 하이드로클로라이드 대신에 사용하여 중간체 AR을 중간체 AP와 유사하게 제조하였다. 미가공 tert-부틸 3-[클로로카본일(메틸)아미노]프로파노에이트(3.5 g, 중간체 AR)를 수득하고 후속 단계에 추가적 정제 없이 사용하였다.

중간체 AS

에틸 (2S)-2-[ 클로로카본일(메틸)아미노 ] 프로파노에이트

단계 1: 에틸 (2S)-2-(메틸아미노)프로파노에이트 하이드로클로라이드(화합물 AS-1)의 제조

EtOH(10 mL) 중의 (2S)-2-(메틸아미노)프로판산(1 g, 9.70 mmol)의 용액에 0℃에서 0.5 시간 이내에 SOCl₂(1.50 g, 12.61 mmol)를 적가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 15.5시간 동안 교반한 후에, EA(20 mL)로 희석하고 H₂O(5 mL) 및 염수(5 mL)로 세척하였다. 유기층을 Na₂SO₄로 건조하고 진공에서 농축하였다. 에틸 (2S)-2-(메틸아미노)프로파노에이트 하이드로클로라이드(1.8 g, 화합물 AS-1)를 황색 오일로 수득하고 후속 단계에 추가적 정제 없이 사용하였다.

단계 2: 에틸 (2S)-2-(메틸아미노)프로파노에이트(화합물 AS-2)의 제조

EA(10 mL) 중의 에틸 (2S)-2-(메틸아미노)프로파노에이트 하이드로클로라이드(1.8 g, 화합물 AS-1)의 용액을 10 중량%의 수성 NaHCO₃에 의해 pH 8로 조정하였다. 반응 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 교반하였다. 유기층을 염수(5 mL)로 세척하고 Na₂SO₄로 건조하고 진공에서 농축하였다. 에틸 (2S)-2-(메틸아미노)프로파노에이트(620 mg, 화합물 AS-2)를 황색 오일로 수득하고 추가적 정제 없이 후속 단계에 사용하였다.

단계 3: 에틸 (2S)-2-[클로로카본일(메틸)아미노]프로파노에이트(중간체 AS)의 제조

에틸 (2S)-2-(메틸아미노)프로파노에이트(260 mg, 화합물 AS-2)를 에틸 2-(메틸아미노)아세테이트 하이드로클로라이드 대신에 사용하여 중간체 AS를 중간체 AP와 유사하게 제조하였다. 미가공 에틸 (2S)-2-[클로로카본일(메틸)아미노]프로파노에이트(200 mg, 중간체 AS)를 황색 오일로 수득하고 추가적 정제 없이 후속 단계에 사용하였다.

중간체 AT

tert -부틸 (2S)-2-[ 클로로카본일(메틸)아미노 ]-4- 메틸 - 펜타노에이트

단계 1: tert-부틸 (2S)-4-메틸-2-(메틸아미노)펜타노에이트(화합물 AT-1)의 제조

2-메틸프로펜(25 g, 446 mmol)을 -78℃에서 DCM(50 mL) 내로 버블링하였다. 이어서, 2-메틸프로펜 용액을 0℃에서 다이옥산(20 mL) 중의 (S)-4-메틸-2-(메틸아미노)펜탄산 하이드로클로라이드(500 mg, 2.75 mmol) 및 H₂SO₄(3.68 g, 2 mL, 37.5 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 밀폐된 튜브에서 교반하였다. 반응 용액을 매우 찬 KOH 수용액(물(30 mL) 중의 8.4 g)에 붓고, 생성된 혼합물을 DCM(50 mL)으로 2회 추출하였다. 합한 유기층을 염수(30 mL) 2회 세척하고 Na₂SO₄로 건조하고 진공에서 농축하여 미가공 생성물 tert-부틸 (2S)-4-메틸-2-(메틸아미노)펜타노에이트(화합물 AT-1)를 연황색 오일로 수득하였다.

단계 2: tert-부틸 (2S)-2-[클로로카본일(메틸)아미노]-4-메틸-펜타노에이트(중간체 AT)의 제조

tert-부틸 (2S)-4-메틸-2-(메틸아미노)펜타노에이트(300 mg, 화합물 AT-1)를 에틸 2-(메틸아미노)아세테이트 하이드로클로라이드 대신에 사용하여 중간체 AT를 중간체 AP와 유사하게 제조하였다. 미가공 tert-부틸 (2S)-2-[클로로카본일(메틸)아미노]-4-메틸-펜타노에이트(350 mg, 중간체 AT)를 연황색 오일로 수득하고 추가적 정제 없이 후속 단계에 사용하였다.

중간체 AU

이소프로필 (2S)-2-[ 클로로카본일(메틸)아미노 ]-4- 메틸 - 펜타노에이트

단계 1: 이소프로필 (2S)-4-메틸-2-(메틸아미노)펜타노에이트 하이드로클로라이드(화합물 AU-1)의 제조

i-PrOH(7.8 g, 10 mL) 중의 (S)-4-메틸-2-(메틸아미노)펜탄산 하이드로클로라이드(0.5 g)의 용액에 실온에서 티온일 클로라이드(655 mg, 402 μL)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 16시간 동안 교반하고 환류한 후에, 진공에서 농축하였다. 잔사를 포화 수성 NaHCO₃(30 mL)에 의해 염기성화시키고 DCM(50 mL)으로 추출하였다. 유기층을 염수로 세척하고 Na₂SO₄로 건조하고 진공에서 농축하였다. 잔사를 HCl/EtOAc(10 mL, 1 mmol/mL)로 염화시키고(salifying) 농축하여 이소프로필 (2S)-4-메틸-2-(메틸아미노)펜타노에이트 하이드로클로라이드(510 mg, 화합물 AU-1)를 백색 고체로 수득하였다.

단계 2: 이소프로필 (2S)-2-[클로로카본일(메틸)아미노]-4-메틸-펜타노에이트(중간체 AU)의 제조

이소프로필 (2S)-4-메틸-2-(메틸아미노)펜타노에이트 하이드로클로라이드(500 mg, 화합물 AU-1)를 에틸 2-(메틸아미노)아세테이트 하이드로클로라이드 대신에 사용하여 중간체 AU를 중간체 AP와 유사하게 제조하였다. 미가공 이소프로필 (2S)-2-[클로로카본일(메틸)아미노]-4-메틸-펜타노에이트(650 mg, 중간체 AU)를 연황색 오일로 수득하고 추가적 정제 없이 후속 단계에 사용하였다.

중간체 AV

에틸 (2S)-2-[ 클로로카본일(메틸)아미노 ]-3- 메틸 - 부타노에이트

단계 1: 에틸 (2S)-3-메틸-2-(메틸아미노)부타노에이트 하이드로클로라이드(화합물 AV-1)의 제조

EtOH(10 mL) 중의 (2S)-3-메틸-2-(메틸아미노)부탄산(1.0 g, 7.6 mmol)의 용액에 실온에서 티온일 클로라이드(2.45 g, 21 mmol)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 16시간 동안 교반하고 환류한 후에, 진공에서 농축하였다. 잔사를 포화 수성 NaHCO₃(30 mL)로 염기성화시키고 DCM(50 mL)으로 2회 추출하였다. 합한 유기층을 염수로 세척하고 Na₂SO₄로 건조하고 진공에서 농축하였다. 잔사를 HCl/EtOAc(10 mL, 1 M)에 용해시키고 농축하여 에틸 (2S)-3-메틸-2-(메틸아미노)부타노에이트 하이드로클로라이드(1.9 g, 화합물 AV-1)를 백색 고체로 수득하였다.

단계 2: 에틸 (2S)-2-[클로로카본일(메틸)아미노]-3-메틸-부타노에이트(중간체 AV)의 제조

에틸 (2S)-3-메틸-2-(메틸아미노)부타노에이트 하이드로클로라이드(500 mg, 화합물 AV-1)를 에틸 2-(메틸아미노)아세테이트 하이드로클로라이드 대신에 사용하여 중간체 AV를 중간체 AP와 유사하게 제조하였다. 미가공 에틸 (2S)-2-[클로로카본일(메틸)아미노]-3-메틸-부타노에이트(600 mg, 중간체 AV)를 연황색 오일로 수득하고 추가적 정제 없이 후속 단계에 사용하였다.

중간체 AW

에틸 (2S)-2-[ 클로로카본일(메틸)아미노 ]-4- 메틸 - 펜타노에이트

단계 1: 에틸 (2S)-4-메틸-2-(메틸아미노)펜타노에이트 하이드로클로라이드(화합물 AW-1)의 제조

EtOH(10 mL) 중의 (2S)-4-메틸-2-(메틸아미노)펜탄산(1 g, 6.9 mmol)의 용액에 실온에서 티온일 클로라이드(1.07 g, 8.3 mmol)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 환류 온도에서 16시간 동안 교반한 후에, 진공에서 농축하였다. 잔사를 포화 수성 NaHCO₃(30 mL)로 염기성화시키고 DCM(50 mL)으로 추출하였다. 유기층을 염수로 세척하고 Na₂SO₄로 건조하고 진공에서 농축하였다. 잔사를 HCl/EtOAc(10 mL, 1 mmol/mL)로 염화시키고 농축하여 에틸 (2S)-4-메틸-2-(메틸아미노)펜타노에이트 하이드로클로라이드(1.8 g, 화합물 AW-1)를 백색 고체로 수득하였다.

단계 2: 에틸 (2S)-2-[클로로카본일(메틸)아미노]-4-메틸-펜타노에이트(중간체 AW)의 제조

에틸 (2S)-4-메틸-2-(메틸아미노)펜타노에이트 하이드로클로라이드(610 mg, AW-1)를 에틸 2-(메틸아미노)아세테이트 하이드로클로라이드 대신에 사용하여 중간체 AW를 중간체 AP와 유사하게 제조하였다. 미가공 에틸 (2S)-2-[클로로카본일(메틸)아미노]-4-메틸-펜타노에이트(280 mg, 중간체 AW)를 연황색 오일로 수득하고 추가적 정제 없이 후속 단계에 사용하였다.

중간체 AX

에틸 (2S)-2-[ 클로로카본일(메틸)아미노 ]-3-페닐- 프로파노에이트

(S)-에틸-2-(메틸아미노)-3-페닐프로파노에이트를 에틸 2-(메틸아미노)아세테이트 하이드로클로라이드 대신에 사용하여 중간체 AX를 중간체 AP와 유사하게 제조하였다. 미가공 에틸 (2S)-2-[클로로카본일(메틸)아미노]-3-페닐-프로파노에이트(200 mg, 중간체 AX)를 연황색 오일로 수득하고 후속 단계에 추가적 정제 없이 사용하였다.

중간체 AY

이소프로필 (2S)-2-[ 클로로카본일(메틸)아미노 ]-3-페닐- 프로파노에이트

이소프로필 (2S)-2-(메틸아미노)-3-페닐-프로파노에이트(190 mg)를 에틸 2-(메틸아미노)아세테이트 하이드로클로라이드 대신에 사용하여 중간체 AY를 중간체 AP와 유사하게 제조하였다. 미가공 이소프로필 (2S)-2-[클로로카본일(메틸)아미노]-3-페닐-프로파노에이트(220 mg, 중간체 AY)를 연갈색 오일로 수득하고 추가적 정제 없이 후속 단계에 사용하였다.

중간체 AZ

(S)- tert -부틸 2-(( 클로로카본일 )( 메틸 )아미노)-3- 페닐프로파노에이트

단계 1: tert-부틸 (2S)-2-(메틸아미노)-3-페닐-프로파노에이트(화합물 AZ-1)의 제조

2-메틸프로펜(25 g, 446 mmol)을 -78℃에서 DCM(50 mL) 내로 버블링하였다. 이어서, 2-메틸프로펜 용액을 0℃에서 다이옥산(20 mL) 중의 (S)-2-(메틸아미노)-3-페닐프로판산(500 mg) 및 H₂SO₄(3.68 g, 2 mL)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 밀폐된 튜브에서 교반하였다. 반응 혼합물을 매우 찬 KOH 수용액(물(30 mL) 중의 8.4 g)에 붓고, 생성된 혼합물을 DCM(50 mL)으로 2회 추출하였다. 유기층을 염수(30 mL)로 2회 세척하고 Na₂SO₄로 건조하고 진공에서 농축하여 tert-부틸 (2S)-2-(메틸아미노)-3-페닐-프로파노에이트(710 mg, 화합물 AZ-1)를 연황색 오일로 수득하였다.

단계 2: (S)-tert-부틸 2-((클로로카본일)(메틸)아미노)-3-페닐프로파노에이트(중간체 AZ)의 제조

tert-부틸 (2S)-2-(메틸아미노)-3-페닐-프로파노에이트(화합물 AZ-1)를 에틸 2-(메틸아미노)아세테이트 하이드로클로라이드 대신에 사용하여 중간체 AZ를 중간체 AP와 유사하게 제조하였다. 미가공 tert-부틸 (2S)-2-[클로로카본일(메틸)아미노]-3-페닐-프로파노에이트(360 mg, 중간체 AZ)를 연황색 오일로 수득하고 후속 단계에 추가적 정제 없이 사용하였다.

중간체 BA

N-[2-[ 아세틸(메틸)아미노 ]에틸]-N- 메틸 - 카바모일 클로라이드

단계 1: tert-부틸 N-[2-[아세틸(메틸)아미노]에틸]-N-메틸-카바메이트(화합물 BA-1)의 제조

피리딘(10 mL) 중의 tert-부틸 메틸(2-(메틸아미노)에틸)카바메이트(1.13 g, 6 mmol)의 용액에 0℃에서 아세트산 무수물(3.06 g, 30 mmol)을 적가하였다. 이어서, 용액을 실온에서 0.5시간 동안 교반하였다. 용매를 진공에서 제거하고, 잔사를 EtOAc(50 mL)와 포화 수성 NaHCO₃(25 mL) 사이에 분배하였다. 유기층을 분리하고 염수(20 mL)로 세척하고 Na₂SO₄로 건조하고 진공에서 농축하여 tert-부틸 N-[2-[아세틸(메틸)아미노]에틸]-N-메틸-카바메이트(1.28 g, 화합물 BA-1)를 황색 오일로 수득하였다.

단계 2: N-메틸-N-(2-(메틸아미노)에틸)아세트아미드 하이드로클로라이드(화합물 BA-2)의 제조

HCl/EtOAc(10 mL, EtOAc 중의 1 N HCl) 중의 tert-부틸 N-[2-[아세틸(메틸)아미노]에틸]-N-메틸-카바메이트(1.1 g, 화합물 BA-1)의 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 후에, 혼합물을 여과하였다. 수집된 고체를 EtOAc(5 mL)로 3회 세척하고 진공에서 건조하여 미가공 N-메틸-N-(2-(메틸아미노)에틸)아세트아미드 하이드로클로라이드(460 mg, 화합물 BA-2)를 백색 고체로 수득하였다.

단계 3: N-[2-[아세틸(메틸)아미노]에틸]-N-메틸-카바모일 클로라이드(중간체 BA)의 제조

N-메틸-N-(2-(메틸아미노)에틸)아세트아미드 하이드로클로라이드(200 mg, 화합물 BA-2)를 에틸 2-(메틸아미노)아세테이트 하이드로클로라이드 대신에 사용하여 중간체 BA를 중간체 AP와 유사하게 제조하였다. 미가공 N-[2-[아세틸(메틸)아미노]에틸]-N-메틸-카바모일 클로라이드(300 mg, 중간체 BA)를 수득하고 후속 단계에 추가적 정제 없이 사용하였다.

중간체 BB

메틸 N-[2-[ 클로로카본일(메틸)아미노 ]에틸]-N- 메틸 - 카바메이트

단계 1: 메틸 N-메틸-N-[2-(메틸아미노)에틸]카바메이트(화합물 BB-1)의 제조

THF(40 mL) 중의 N,N'-다이메틸에탄-1,2-다이아민(10 g)의 용액에 -70℃에서 1시간 이내에 메틸 클로로포메이트(1.92 g)를 적가하였다. 혼합물을 25℃에서 15시간 동안 교반한 후에, 여과하고 물 및 염수로 세척하였다. 유기층을 건조하고 농축하여 황색 잔사를 수득하고, 이를 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 메틸 N-메틸-N-[2-(메틸아미노)에틸]카바메이트(2 g, 화합물 BB-1)를 무색 오일로 수득하였다.

단계 2: 메틸 N-[2-[클로로카본일(메틸)아미노]에틸]-N-메틸-카바메이트(중간체 BB)의 제조

메틸 N-메틸-N-[2-(메틸아미노)에틸]카바메이트(2.0 g, 화합물 BB-1)를 에틸 2-(메틸아미노)아세테이트 하이드로클로라이드 대신에 사용하여 중간체 BB를 중간체 AP와 유사하게 제조하였다. 미가공 메틸 N-[2-[클로로카본일(메틸)아미노]에틸]-N-메틸-카바메이트(2.2 g, 중간체 BB)를 수득하고 후속 단계에 추가적 정제 없이 사용하였다.

중간체 BC

tert -부틸 N-[2-[ 클로로카본일(메틸)아미노 ]에틸]-N- 메틸 - 카바메이트

단계 1: tert-부틸 N-메틸-N-[2-(메틸아미노)에틸]카바메이트(화합물 BC-1)의 제조

DCM(300 mL) 중의 N,N'-다이메틸에탄-1,2-다이아민(40.4 g)의 용액에 0℃에서 1시간 동안 DCM(100 mL) 중의 Boc₂O(10 g, 10.6 mL, 45.8 mmol)의 용액을 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 유기층을 포화 수성 NaHCO₃(50 mL) 및 염수(50 mL)로 세척하고 Na₂SO₄로 건조하고 진공에서 농축하였다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 N-메틸-N-[2-(메틸아미노)에틸]카바메이트(6.8 g, 화합물 BC-1)를 황색 오일로 수득하였다. ¹H NMR (400MHz, CDCl₃) δ ppm: 3.34 (br. s., 2H), 2.89 (s, 3H), 2.74 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 2.46 (s, 3H), 1.47 (s, 9H).

단계 2: tert-부틸 N-[2-[클로로카본일(메틸)아미노]에틸]-N-메틸-카바메이트(중간체 BC)의 제조

tert-부틸 N-메틸-N-[2-(메틸아미노)에틸]카바메이트(1.15 g, 화합물 BC-1)를 에틸 2-(메틸아미노)아세테이트 하이드로클로라이드 대신에 사용하여 중간체 BC를 중간체 AP와 유사하게 제조하였다. 미가공 tert-부틸 N-[2-[클로로카본일(메틸)아미노]에틸]-N-메틸-카바메이트(1.3 g, 중간체 BC)를 수득하고 추가적 정제 없이 후속 단계에 사용하였다.

중간체 BD

에틸 N-[2-[ 클로로카본일(메틸)아미노 ]에틸]-N- 메틸 - 카바메이트

단계 1: 에틸 N-메틸-N-[2-(메틸아미노)에틸]카바메이트(화합물 BD-1)의 제조

DCM(40 mL) 중의 N,N'-다이메틸에탄-1,2-다이아민(10 g)의 용액에 -70℃에서 1시간 이내에 에틸 클로로포메이트(2.58 g)를 적가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 15시간 동안 교반한 후에, 여과하고 물 및 염수로 세척하였다. 유기층을 건조하고 진공에서 농축하였다. 황색 잔사를 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 에틸 N-메틸-N-[2-(메틸아미노)에틸]카바메이트(2 g, 화합물 BD-1)를 무색 오일로 수득하였다.

단계 2: 에틸 N-[2-[클로로카본일(메틸)아미노]에틸]-N-메틸-카바메이트(중간체 BD)

에틸 N-메틸-N-[2-(메틸아미노)에틸]카바메이트(화합물 BD-1)를 에틸 2-(메틸아미노)아세테이트 하이드로클로라이드 대신에 사용하여 중간체 BD를 중간체 AA와 유사하게 제조하였다. 미가공 에틸 N-[2-[클로로카본일(메틸)아미노]에틸]-N-메틸-카바메이트(2.2 g, 중간체 BD)를 수득하고 추가적 정제 없이 후속 단계에 사용하였다.

중간체 BE

2-[ 클로로카본일(메틸)아미노 ]에틸 N-부틸-N- 메틸 - 카바메이트

단계 1: tert-부틸 N-(2-하이드록시에틸)-N-메틸-카바메이트(화합물 BE-1)의 제조

DCM(10 mL) 중의 2-(메틸아미노)에탄올(10 g, 133.14 mmol)의 용액에 25℃에서 Boc₂O(34.87 g, 159.77 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 16시간 동안 교반한 후에 농축하였다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 N-(2-하이드록시에틸)-N-메틸-카바메이트(20 g, 화합물 BE-1)를 무색 오일로 수득하였다.

단계 2: 2-[tert-부톡시카본일(메틸)아미노]에틸 N-부틸-N-메틸-카바메이트(화합물 BE-2)의 제조

DCM(10 mL) 중의 tert-부틸 N-(2-하이드록시에틸)-N-메틸-카바메이트(880 mg, 화합물 BE-1) 및 Et₃N(1 g, 10.08 mmol)의 용액에 -10℃에서 1시간 이내에 N-부틸-N-메틸-카바모일 클로라이드(903 mg, 7.04 mmol)를 적가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 15시간 동안 교반한 후에 여과하고 물 및 염수로 세척하였다. 유기층을 건조하고 농축하여 2-[tert-부톡시카본일(메틸)아미노]에틸 N-부틸-N-메틸-카바메이트(2 g, 화합물 BE-2)를 무색 오일로 수득하였다.

단계 3: 2-(메틸아미노)에틸 N-부틸-N-메틸-카바메이트 하이드로클로라이드(화합물 BE-3)의 제조

2-[tert-부톡시카본일(메틸)아미노]에틸 N-부틸-N-메틸-카바메이트(1 g, 화합물 BE-2)의 용액에 HCl/EA(40 mL, 1 M)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반하고 25℃로 가온하고 추가적 15.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축하여 2-(메틸아미노)에틸-N-부틸-N-메틸-카바메이트 하이드로클로라이드(400 mg, 화합물 BE-3)를 무색 오일로 수득하였다.

단계 4: 2-[클로로카본일(메틸)아미노]에틸 N-부틸-N-메틸-카바메이트(중간체 BE)의 제조

2-(메틸아미노)에틸 N-부틸-N-메틸-카바메이트 하이드로클로라이드(374 mg, 화합물 BE-3)를 에틸 2-(메틸아미노)아세테이트 하이드로클로라이드 대신에 사용하여 중간체 BE를 중간체 AP와 유사하게 제조하였다. 미가공 2-[클로로카본일(메틸)아미노]에틸 N-부틸-N-메틸-카바메이트(330 mg, 중간체 BE)를 수득하고 후속 단계에 추가적 정제 없이 사용하였다.

중간체 BF

2-[ 클로로카본일(메틸)아미노 ]에틸 피롤리딘 -1- 카복시레이트

단계 1: tert-부틸 N-(2-하이드록시에틸)-N-메틸-카바메이트(화합물 BF-1)의 제조

DCM(10 mL) 중의 2-(메틸아미노)에탄올(10 g, 133.14 mmol)의 용액에 25℃에서 Boc₂O(34.87 g, 159.77 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축하여 잔사를 수득하고, 이를 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 N-(2-하이드록시에틸)-N-메틸-카바메이트(20 g, 화합물 BF-1)를 무색 오일로 수득하였다.

단계 2: 2-[tert-부톡시카본일(메틸)아미노]에틸 피롤리딘-1-카복시레이트(화합물 BF-2)의 제조

DCM(5 mL) 중의 tert-부틸 N-(2-하이드록시에틸)-N-메틸-카바메이트(300 mg, 1.71 mmol, 화합물 BF-1) 및 Et₃N(578 mg, 5.71 mmol)의 용액에 0℃에서 0.5시간 동안 피롤리딘-1-카본일 클로라이드(458 mg, 3.4 mmol)를 적가한 후에, 25℃에서 15.5시간 동안 교반하였다. 여과한 후에, 여과액을 물 및 염수로 세척하였다. 유기층을 건조하고 농축하여 2-[tert-부톡시카본일(메틸)아미노]에틸 피롤리딘-1-카복시레이트(335 mg, 화합물 BF-2)를 무색 오일로 수득하였다.

단계 3: 2-(메틸아미노)에틸 피롤리딘-1-카복시레이트 하이드로클로라이드(화합물 BF-3)의 제조

2-[tert-부톡시카본일(메틸)아미노]에틸 피롤리딘-1-카복시레이트(335 mg, 화합물 BF-2)를 EA 중의 HCl(12.3 mL, 1 M)에 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반한 후에, 25℃에서 추가적 15.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축하여 2-(메틸아미노)에틸 피롤리딘-1-카복시레이트 하이드로클로라이드(300 mg, 화합물 BF-3)를 무색 오일로 수득하였다.

단계 4: 2-[클로로카본일(메틸)아미노]에틸 피롤리딘-1-카복시레이트(중간체 BF)의 제조

2-(메틸아미노)에틸 피롤리딘-1-카복시레이트 하이드로클로라이드(299 mg, 화합물 BF-3)를 에틸 2-(메틸아미노)아세테이트 하이드로클로라이드 대신에 사용하여 중간체 BF를 중간체 AP와 유사하게 제조하였다. 미가공 2-[클로로카본일(메틸)아미노]에틸 피롤리딘-1-카복시레이트(230 mg, 중간체 BF)를 수득하고 후속 단계에 추가적 정제 없이 사용하였다.

중간체 BG

2-[ 클로로카본일(메틸)아미노 ]에틸 N- 메틸 -N-프로필- 카바메이트

단계 1: tert-부틸 N-(2-하이드록시에틸)-N-메틸-카바메이트(화합물 BG-1)의 제조

DCM(10 mL) 중의 2-(메틸아미노)에탄올(10 g, 133.14 mmol)의 용액에 25℃에서 Boc₂O(34.87 g, 159.77 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 16시간 동안 교반한 후에, 농축하여 잔사를 수득하고, 이를 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 N-(2-하이드록시에틸)-N-메틸-카바메이트(20 g, 화합물 BG-1)를 무색 오일로 수득하였다.

단계 2: tert-부틸-N-메틸-N-[2-[메틸(프로필)카바모일]옥시에틸] 카바메이트(화합물 BG-2)의 제조

DCM(5 mL) 중의 tert-부틸 N-(2-하이드록시에틸)-N-메틸-카바메이트(265 mg, 화합물 BG-1) 및 Et₃N(1 mL, 5.71 mmol)의 용액에 0℃에서 0.5시간 동안 N-메틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(410 mg, 1.83 mmol)를 적가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 15.5시간 동안 교반한 후에, 여과하고, 여과액을 물 및 염수로 세척하였다. 유기층을 건조하고 농축하여 tert-부틸 N-메틸-N-[2-[메틸(프로필)카바모일]옥시에틸]카바메이트(380 mg, 화합물 BG-2)를 무색 오일로 수득하였다.

단계 3: 2-(메틸아미노)에틸 N-메틸-N-프로필-카바메이트 하이드로클로라이드(화합물 BG-3)의 제조

tert-부틸 N-메틸-N-[2-[메틸(프로필)카바모일]옥시에틸]카바메이트(380 mg, 화합물 BG-2)를 EA 중의 HCl(13.7 mL, 1 M)에 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 25℃에서 추가적 15.5시간 동안 교반하고 농축하여 2-(메틸아미노)에틸 N-메틸-N-프로필-카바메이트 하이드로클로라이드(300 mg, 화합물 BG-3)를 무색 오일로 수득하였다.

단계 4: 2-[클로로카본일(메틸)아미노]에틸 N-메틸-N-프로필-카바메이트(중간체 BG)의 제조

2-(메틸아미노)에틸 N-메틸-N-프로필-카바메이트 하이드로클로라이드(330 mg, 화합물 BG-3)를 에틸 2-(메틸아미노)아세테이트 하이드로클로라이드 대신에 사용하여 중간체 BG를 중간체 AP와 유사하게 제조하였다. 2-[클로로카본일(메틸)아미노]에틸-N-메틸-N-프로필-카바메이트(300 mg, 중간체 BG)를 수득하고 후속 단계에 추가적 정제 없이 사용하였다.

중간체 BH

2-[ 클로로카본일(메틸)아미노 ]에틸 N,N - 다이에틸카바메이트

단계 1: tert-부틸 N-(2-하이드록시에틸)-N-메틸-카바메이트(화합물 BH-1)의 제조

DCM(10 mL) 중의 2-(메틸아미노)에탄올(10 g, 133.14 mmol)의 용액에 25℃에서 Boc₂O(34.87 g, 159.77 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 16시간 동안 교반한 후에, 농축하고, 잔사를 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 N-(2-하이드록시에틸)-N-메틸-카바메이트(20 g, 화합물 BH-1)를 무색 오일로 수득하였다.

단계 2: 2-[tert-부톡시카본일(메틸)아미노]에틸-N,N-다이에틸카바메이트(화합물 BH-2)의 제조

DCM(5 mL) 중의 tert-부틸 N-(2-하이드록시에틸)-N-메틸-카바메이트(200 mg, 1.14 mmol, 화합물 BH-1) 및 Et₃N(578 mg, 5.71 mmol)의 용액에 0℃에서 0.5시간 동안 N,N-다이에틸카바모일 클로라이드(248 mg, 1.83 mmol)를 적가하고 25℃에서 15.5시간 동안 교반하였다. 여과한 후에, 여과액을 물 및 염수로 세척하였다. 유기층을 건조하고 농축하여 2-[tert-부톡시카본일(메틸)아미노]에틸 N,N-다이에틸카바메이트(313 mg, 화합물 BH-2)를 무색 오일로 수득하였다.

단계 3: 2-(메틸아미노)에틸 N,N-다이에틸카바메이트 하이드로클로라이드(화합물 BH-3)의 제조

2-[tert-부톡시카본일(메틸)아미노]에틸 N,N-다이에틸카바메이트(436 mg, 1.77 mmol, 화합물 BH-2)를 EA 중의 HCl(17 mL, 1 M)에 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 25℃에서 추가적 15.5시간 동안 교반하고 농축하여 2-(메틸아미노)에틸 N,N-다이에틸카바메이트 하이드로클로라이드(230 mg, 화합물 BH-3)를 무색 오일로 수득하였다.

단계 4: 2-[클로로카본일(메틸)아미노]에틸 N,N-다이에틸카바메이트(중간체 BH)의 제조

2-(메틸아미노)에틸 N,N-다이에틸카바메이트 하이드로클로라이드(274 mg, 화합물 BH-3)를 에틸 2-(메틸아미노)아세테이트 하이드로클로라이드 대신에 사용하여 중간체 BH를 중간체 AP와 유사하게 제조하였다. 미가공 2-[클로로카본일(메틸)아미노]에틸 N,N-다이에틸카바메이트(250 mg, 중간체 BH)를 수득하고 후속 단계에 추가적 정제 없이 사용하였다.

중간체 BI

2-[ 클로로카본일(메틸)아미노 ] 에틸 에틸 카보네이트

단계 1: tert-부틸 N-(2-하이드록시에틸)-N-메틸-카바메이트(화합물 BI-1)의 제조

DCM(10 mL) 중의 2-(메틸아미노)에탄올(1 g, 13.31 mmol)의 용액에 25℃에서 Boc₂O(3.49 g, 15.98 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 16시간 동안 교반한 후에, 농축하여 미가공 생성물을 수득하고, 이를 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 N-(2-하이드록시에틸)-N-메틸-카바메이트(1.6 g, 화합물 BI-1)를 무색 오일로 수득하였다.

단계 2: 2-[tert-부톡시카본일(메틸)아미노]에틸 메틸 카보네이트(화합물 BI-2)의 제조

EA(20 mL) 중의 tert-부틸 N-(2-하이드록시에틸)-N-메틸-카바메이트(1 g, 화합물 BI-1), DMAP(0.1 g) 및 피리딘(1.15 g, 11.41 mmol)의 용액에 -10℃에서 메틸 클로로포메이트(1.21 g, 11.15 mmol)를 적가하였다. 혼합물을 -10℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과액을 5% 시트르산 및 염수로 세척하였다. 유기층을 건조하고 농축하여 2-[tert-부톡시카본일(메틸)아미노]에틸 메틸 카보네이트(1.22 g, 화합물 BI-2)를 무색 오일로 수득하였다.

단계 3: 에틸 2-(메틸아미노)에틸 카보네이트 하이드로클로라이드(화합물 BI-3)의 제조

2-[tert-부톡시카본일(메틸)아미노]에틸 메틸 카보네이트(1.22 g, 4.94 mmol, 화합물 BI-2)를 EA 중의 HCl(10 mL, 40 mmol)에 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반하고 25℃에서 추가적 15.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축하여 에틸 2-(메틸아미노)에틸 카보네이트 하이드로클로라이드(1.06 g, 화합물 BI-3)를 수득하였다.

단계 4: 2-[클로로카본일(메틸)아미노]에틸 에틸 카보네이트(중간체 BI)의 제조

에틸 2-(메틸아미노)에틸 카보네이트 하이드로클로라이드(150 mg, 중간체 BI-3)를 에틸 2-(메틸아미노)아세테이트 하이드로클로라이드 대신에 사용하여 중간체 BI를 중간체 AP와 유사하게 제조하였다. 미가공 2-[클로로카본일(메틸)아미노]에틸 에틸 카보네이트(145 mg, 중간체 BI)를 수득하고 후속 단계에 추가적 정제 없이 사용하였다.

제조 실시예

실시예 1

6-아미노-9- 벤질 -N- 메틸 -8-옥소-N-프로필-2-( 프로필설폰이미도일 ) 푸린 -7- 카복스아미드

방법 A

단계 1: 4-아미노-3-벤질-2-옥소-1H-이미다졸-5-카보니트릴(화합물 1a)의 제조

건조 THF(100 mL) 중의 아미노말로노니트릴 p-톨루엔설포네이트(25 g, 98.5 mmol, TCI, 카탈로그 번호: A1119-25G)의 용액에 실온에서 벤질 이소시아네이트(13.2 g, 98.5 mmol) 및 TEA(10.2 g, 79.0 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 24시간 동안 교반한 후에, 반응 생성물을 진공에서 농축하고, 잔사를 EtOAc(500 mL)와 물(250 mL) 사이에 분배하였다. 분리된 유기층을 염수(50 mL)로 2회 세척하고 수산화 나트륨 용액(50 mL, 1 N)으로 2회 추출하였다. 합한 수산화 나트륨 용액 층을 10 중량% 황산 수소 나트륨 용액으로 중화시키고 EtOAc로 추출하였다. 분리된 유기층을 염수로 세척하고 Na₂SO₄로 건조하고 여과하고 진공에서 농축하였다. 잔사를 2-이소프로폭시프로판에서 마쇄한 후에, 현탁액을 여과하여 4-아미노-3-벤질-2-옥소-1H-이미다졸-5-카보니트릴(15 g, 화합물 1a)을 황색 고체로 수득하였다. 생성물을 추가적 정제 없이 후속 단계에 사용하였다. MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 215.

단계 2: 6-아미노-9-벤질-2-설판일-7H-푸린-8-온(화합물 1b)의 제조

THF(700 mL) 중의 4-아미노-3-벤질-2-옥소-1H-이미다졸-5-카보니트릴(15.0 g, 70.0 mmol, 화합물 1a)의 용액에 벤조일이소티오시아네이트(28.6 g, 175.1 mmol, TCI, 카탈로그 번호: A11596-100G)를 적가하였다. 실온에서 12시간 동안 교반한 후에, 반응 혼합물을 진공에서 농축하였다. 잔사를 다이에틸 에터(100 mL)에서 마쇄하고, 생성된 침전물을 여과에 의해 수집하였다.

THF 중의 수득된 침전물의 용액(700 mL)에 수산화 나트륨(70 mL, 2 N)을 첨가하였다. 혼합물을 50시간 동안 환류한 후에, 10 중량% 수성 황산 수소 나트륨 용액으로 pH 3으로 산성화시켰다. 생성된 침전물을 여과에 의해 수집하여 미가공 6-아미노-9-벤질-2-설판일-7H-푸린-8-온(8.1 g, 화합물 1b)을 황색 고체로 수득하였다. 생성물을 추가적 정제 없이 후속 단계에 사용하였다. MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 274.

단계 3: 6-아미노-9-벤질-2-(2-프로필설판일)-7H-푸린-8-온(화합물 1c)의 제조

DMF 중의 6-아미노-9-벤질-2-설판일-7H-푸린-8-온(5.46 g, 20.0 mmol, 화합물 1b)의 용액에 탄산 칼륨(2.76 g, 20.0 mmol)을 첨가하였다. 이어서, DMF(5.0 mL) 중의 1-브로모프로판(2.44 g, 20.0 mmol, TCI, 카탈로그 번호: B0638-500G)을 서서히 상기 용액에 첨가하였다. 실온에서 12시간 동안, 반응 혼합물을 물(200 mL)에 부은 후에, 10 중량% 수성 황산 수소 나트륨 용액으로 산성화시키고 EtOAc(100 mL)로 2회 추출하였다. 유기층을 염수로 세척하고 Na₂SO₄로 건조하고 진공에서 농축하여 미가공 생성물을 수득하고, 이를 실리카겔 플래쉬 크로마토그래피로 정제하여 6-아미노-9-벤질-2-(2-프로필설판일)-7H-푸린-8-온(4.8 g, 화합물 1c)을 백색 고체로 수득하였다. MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 316.

단계 4: 6-아미노-9-벤질-2-프로필설핀일-7H-푸린-8-온(화합물 1d)의 제조

DCM/MeOH (500 mL, V/V = 1:1) 중의 화합물 6-아미노-9-벤질-2-(2-프로필설판일)-7H-푸린-8-온(2.7 g, 8.7 mmol, 화합물 1c)의 현탁액에 3-클로로퍼벤조산(2.15 g, 8.7 mmol, 70% 순도, 알드리치(Aldrich), 카탈로그 번호: 273031-100G)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 교반한 후에, 반응 혼합물의 부피를 진공에서 약 50 mL로 감소시켰다. 생성된 침전물을 여과에 의해 수집하고 메탄올로 세척하고 건조하여 6-아미노-9-벤질-2-프로필설핀일-7H-푸린-8-온(1.0 g, 화합물 1d)을 백색 고체로 수득하였다. 생성물을 추가적 정제 없이 후속 단계에 사용하였다. MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 332.

단계 5: 6-아미노-9-벤질-2-(프로필설폰이미도일)-7H-푸린-8-온(화합물 1e)의 제조

이튼 시약(40 mL, 인 펜톡사이드, 메탄설폰산 중 7.5 중량%, 알드리치, 카탈로그 번호: 380814-100ML) 중의 6-아미노-9-벤질-2-프로필설핀일-7H-푸린-8-온(1.52 g, 4.6 mmol, 화합물 1d)의 용액에 50℃에서 나트륨 아지드(360 mg, 5.5 mmol)를 첨가하였다. 이 온도에서 30분 동안 교반한 후에, 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고 포화 수성 중탄산 나트륨 용액에 부었다. 반응 혼합물을 n-BuOH(100 mL)로 2회 추출하고, 유기상을 진공에서 농축하였다. 잔사를 prep-HPLC로 정제하여 6-아미노-9-벤질-2-(프로필설폰이미도일)-7H-푸린-8-온(1.2 g, 화합물 1e)을 백색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 10.65 (br. s., 1H), 7.26-7.37 (m, 5H), 6.98 (br. s., 2H), 4.97 (s, 2H), 4.02 (s, 1H), 3.33 (t, J = 7.53 Hz, 2H), 1.55-1.74 (m, 2H), 0.92 (t, J =7.53 Hz, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 347.

키랄 HPLC로 화합물 1e를 분리하여 화합물 1e-A(보다 느리게 용리, 500 mg) 및 화합물 1e-B(보다 빠르게 용리, 490 mg)를 백색 고체로 수득하였다. (분리 조건: 키랄팩(ChiralPak) AS-3 컬럼 상에서 메탄올 5%-40% (0.05%DEA)/CO₂)

화합물 1e-A: ¹H NMR (DMSO-d ₆, 400 MHz) δ ppm: 10.56 (s, 1H), 7.21 - 7.46 (m, 5H), 7.03 (s, 2H), 4.96 (s, 2H), 4.04 (s, 1H), 3.25 - 3.33 (m, 2H), 1.59 - 1.67 (m, 2H), 0.92 (t, J = 7.4 Hz, 3H).

화합물 1e-B: ¹H NMR (DMSO-d ₆, 400 MHz) δ ppm: 10.57 (s, 1H), 7.23 - 7.39 (m, 5H), 6.97 (s, 2H), 4.96 (s, 2H), 4.05 (s, 1H), 3.31 - 3.30 (m, 2H), 1.49 - 1.74 (m, 2H), 0.91 (t, J = 7.4 Hz, 3H).

단계 6: 6-아미노-9-벤질-N-메틸-8-옥소-N-프로필-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카복스아미드(실시예 1)의 제조

NMP(5 mL) 중의 6-아미노-9-벤질-2-(프로필설폰이미도일)-7H-푸린-8-온(300 mg, 화합물 1e), 피리딘(329 mg, 4.2 mmol) 및 DIPEA(538 mg, 4.2 mmol)의 용액에 실온에서 N-메틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(564 mg, 4.2 mmol, 중간체 AA)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 10시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축하고, 잔사를 prep-HPLC로 정제하여 6-아미노-9-벤질-N-메틸-8-옥소-N-프로필-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카복스아미드(108 mg, 실시예 1)를 백색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.45 - 7.24 (m, 5H), 6.89 (s, 2H), 5.01 (s, 2H), 4.17 (s, 1H), 3.44 - 3.34 (m, 2H), 3.36 - 3.34 (m, 2H), 3.10 - 3.00 (m, 3H), 1.74 - 1.52 (m, 4H), 1.01 - 0.72 (m, 6H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 446.

키랄팩 AD-3 컬럼 상에서 이소프로판올 5%-40% (0.05%DEA)/CO₂를 사용하여 실시예 1의 화합물을 키랄 HPLC로 분리하여 실시예 1-A(보다 느리게 용리, 50 mg) 및 실시예 1-B(보다 빠르게 용리, 40 mg)를 백색 고체로 수득하였다.

실시예 1-A: ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.44-7.24 (m, 5H), 6.89 (s, 2H), 5.01 (s, 2H), 4.17 (s, 1H), 3.44-3.37 (m, 2H), 3.37-3.35 (m, 2H), 3.10-3.00 (m, 3H), 1.74-1.52 (m, 4H), 1.00-0.72 (m, 6H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 446.

실시예 1-B: ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.45-7.26 (m, 5H), 6.88 (s, 2H), 5.01 (s, 2H), 4.15 (s, 1H), 3.44-3.36 (m, 2H), 3.34 (s, 2H), 3.10-3.01 (m, 3H), 1.77-1.52 (m, 4H), 1.02-0.67 (m, 6H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 446.

방법 B: 6-아미노-9- 벤질 -2-( 프로필설폰이미도일 )-7H- 푸린 -8- 온(화합물 1e) 을 제조하는 대안적 방법

단계 1: N-벤질-6-클로로-5-니트로-2-프로필설판일-피리미딘-4-아민(화합물 1f)의 제조

THF(1.5 L) 중의 4,6-다이클로로-5-니트로-2-프로필설판일피리미딘(150.0 g, 559.5 mmol) 및 DIPEA(108.5 g, 839.2 mmol)의 용액에 -78℃에서 THF(200 mL) 중의 페닐메탄아민(60.0 g, 559.5 mmol)을 서서히 첨가하였다. 첨가 후에, 혼합물을 25℃로 가온하고 이 온도에서 16시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 EA(1 L)로 희석하고 물(400 mL)로 3회 및 염수(500 mL)로 세척하였다. 분리된 유기상을 Na₂SO₄로 건조하고 여과하고 진공에서 농축하여 N-벤질-6-클로로-5-니트로-2-프로필설판일-피리미딘-4-아민(180.0 g, 화합물 1f)을 황색 고체로 수득하고 후속 단계에 추가적 정제 없이 사용하였다. MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 339.1.

단계 2: N4-벤질-6-클로로-2-프로필설판일-피리미딘-4,5-다이아민(화합물 1g)의 제조

THF(3.0 L) 중의 N-벤질-6-클로로-5-니트로-2-프로필설판일-피리미딘-4-아민(180 g, 화합물 1f) 및 HOAc(319 g, 5.31 mol)의 용액에 서서히 25℃에서 Zn(174 g, 2.66 mol)을 첨가하였다. 첨가 후에, 혼합물을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 생성물을 여과하고, 여과액을 포화 수성 NaHCO₃(800 mL)로 염기성화시키고 EA(400 mL)로 3회 추출하고 Na₂SO₄로 건조하고 진공에서 농축하였다. 잔사를 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 N4-벤질-6-클로로-2-프로필설판일-피리미딘-4,5-다이아민(125 g, 화합물 1g)을 갈색 고체로 수득하였다. MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 309.1.

단계 3: 9-벤질-6-클로로-2-프로필설판일-7H-푸린-8-온(화합물 1h)의 제조

THF(800 mL) 중의 N-벤질-6-클로로-2-(프로필설판일)피리미딘-4,5-다이아민(72.0 g, 233.1 mmol, 화합물 1g) 및 CDI(75.2 g, 233.1 mmol)의 용액을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 EA(400 mL)로 희석하고 물(200 mL)로 2회 및 염수(200 mL)로 세척하였다. 분리된 유기층을 Na₂SO₄로 건조하고 진공에서 농축하였다. 잔사를 MTBE(200 mL)로 세척하여 9-벤질-6-클로로-2-프로필설판일-7H-푸린-8-온(58.0 g, 화합물 1h)을 백색 고체로 수득하고 후속 단계에 추가적 정제 없이 사용하였다. MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 335.1.

단계 4: 9-벤질-6-[(4-메톡시페닐)메틸아미노]-2-프로필설판일-7H-푸린-8-온(화합물 1i)의 제조

n-BuOH(600 mL) 중의 9-벤질-6-클로로-2-프로필설판일-7H-푸린-8-온(58.0 g, 화합물 1h) 및 PMBNH₂(54.7 g, 398.42 mmol)의 용액을 120℃에서 20시간 동안 교반하였다. 반응 생성물을 농축하고, 잔사를 MTBE(400 mL)로 세척하여 9-벤질-6-[(4-메톡시페닐)메틸아미노]-2-프로필설판일-7H-푸린-8-온(75 g, 화합물 1i)을 백색 고체로 수득하고 후속 단계에 추가적 정제 없이 사용하였다. MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 436.2.

단계 5: 6-아미노-9-벤질-2-프로필설판일-7H-푸린-8-온(화합물 1c)의 제조

TFA(200 mL) 중의 9-벤질-6-[(4-메톡시페닐)메틸아미노]-2-프로필설판일-7H-푸린-8-온(87.0 g, 화합물 1i)을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 생성된 반응 혼합물을 농축하고 포화 수성 NaHCO₃(600 mL)로 염기성화시켰다. 생성된 침전물을 여과에 의해 수집하고 PE/DCM(2:1, 400 mL)으로 세척하여 6-아미노-9-벤질-2-프로필설판일-7H-푸린-8-온(38.0 g, 화합물 1c)을 백색 고체로 수득하였다. MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 316.1.

단계 6: 6-아미노-9-벤질-2-프로필설핀일-7H-푸린-8-온(화합물 1d)의 제조

THF(50 mL) 중의 m-CPBA(22.98 g, 113.2 mmol)의 용액에 0℃에서 THF(200 mL) 중의 6-아미노-9-벤질-2-프로필설판일-7H-푸린-8-온(35.0 g, 화합물 1c)의 현탁액을 적가하였다. 첨가 후에, 반응 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고 MeCN(400 mL) 및 MTBE(500 mL)로 세척하여 6-아미노-9-벤질-2-프로필설핀일-7H-푸린-8-온(35.1 g, 화합물 1d)을 백색 고체로 수득하고, 이를 추가적 정제 없이 후속 단계에 사용하였다. MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 332.1.

단계 7: 6-아미노-9-벤질-2-(프로필설폰이미도일)-7H-푸린-8-온(화합물 1e)의 제조

이튼 시약(170.0 mL, 메탄설폰산 중 7.5 중량%) 중의 6-아미노-9-벤질-2-프로필설핀일-7H-푸린-8-온(34.0 g, 화합물 1d)의 용액에 60℃에서 서서히 NaN₃(15.34 g, 253.97 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 60℃에서 30분 동안 교반하였다. 생성된 반응 혼합물을 25℃로 냉각하고 매우 찬 NH₃.H₂O(500 mL, 1 mol/L)에 붓고 n-BuOH(100 mL)로 4회 추출하고 진공에서 농축하였다. 잔사를 prep-HPLC로 정제하여 6-아미노-9-벤질-2-(프로필설폰이미도일)-7H-푸린-8-온(10 g, 화합물 1e)을 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 10.65 (br. s., 1H), 7.26-7.37 (m, 5H), 6.98 (br. s., 2H), 4.97 (s, 2H), 4.02 (s, 1H), 3.33 (t, J = 7.53 Hz, 2H), 1.55-1.74 (m, 2H), 0.92 (t, J =7.53 Hz, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 347.

실시예 2

6-아미노-9- 벤질 -N-(2- 메톡시에틸 )-N- 메틸 -8-옥소-2-( 프로필설폰이미도일 )푸린-7-카복스아미드

N-(2-메톡시에틸)-N-메틸-카바모일 클로라이드(중간체 AB)를 N-메틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(중간체 AA) 대신에 사용하여 표제 화합물을 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. 6-아미노-9-벤질-N-(2-메톡시에틸)-N-메틸-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카복스아미드(120 mg, 실시예 2)를 백색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.27-7.39 (m, 5H), 6.89 (br. s., 1H), 6.78 (br. s., 1H), 5.00 (s, 2H), 4.16 (br. d, J = 4 Hz, 1H), 3.62 (br. dd, J = 4, 12 Hz, 2H), 3.28-3.42 (m, 6H), 3.12 (d, J = 12 Hz, 3H), 3.05 (s, 1H), 1.58-1.72 (m, 2H), 0.93 (t, J = 8 Hz, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 462.

키랄팩 OJ-3 컬럼 상에서 메탄올 5%-40% (0.05%DEA)/CO₂를 사용하여 실시예 2의 화합물을 키랄 HPLC로 분리하여 실시예 2-A(보다 빠르게 용리, 33 mg) 및 실시예 2-B(보다 느리게 용리, 46 mg)를 백색 고체로 수득하였다.

실시예 2-A: ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.27-7.39 (m, 5H), 6.89 (br. s., 1H), 6.78 (br. s., 1H), 5.00 (s, 2H), 4.16 (br. d, J = 4 Hz, 1H), 3.62 (br. dd, J = 4, 12 Hz, 2H), 3.28-3.42 (m, 6H), 3.12 (d, J = 12 Hz, 3H), 3.05 (s, 1H), 1.58-1.72 (m, 2H), 0.93 (t, J = 8Hz, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 462.

실시예 2-B: ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.27-7.39 (m, 5H), 6.89 (br. s., 1H), 6.78 (br. s., 1H), 5.00 (s, 2H), 4.16 (br. d, J = 4 Hz, 1H), 3.62 (br. dd, J = 4, 12 Hz, 2H), 3.28-3.42 (m, 6H), 3.12 (d, J = 12 Hz, 3H), 3.05 (s, 1H), 1.58-1.72 (m, 2H), 0.93 (t, J = 8Hz, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 462.

실시예 3

6-아미노-9- 벤질 -N-에틸-8-옥소-N-프로필-2-( 프로필설폰이미도일 ) 푸린 -7- 카복스아미드

N-에틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(중간체 AC)를 N-메틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(중간체 AA) 대신에 사용하여 표제 화합물을 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. 6-아미노-9-벤질-N-에틸-8-옥소-N-프로필-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카복스아미드(51 mg, 실시예 3)를 백색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.27-7.39 (m, 5H), 6.85 (br. s., 2H), 4.99 (s, 2H), 4.20 (br. d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.13-3.54 (m, 4H), 1.46-1.72 (m, 4H), 1.30-1.39 (m, 1H), 1.00-1.26 (m, 6H), 0.81-0.95 (m, 5H), 0.73 (t, J = 8 Hz, 1H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 474.

실시예 4

6-아미노-9- 벤질 -7-[4-(1- 피페리딜 )피페리딘-1-카본일]-2-( 프로필설폰이미도일 )푸린-8-온

(1,4'-바이피페리딘)-1'-카본일 클로라이드를 N-메틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(중간체 AA) 대신에 사용하여 표제 화합물을 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. 6-아미노-9-벤질-7-[4-(1-피페리딜)피페리딘-1-카본일]-2-(프로필설폰이미도일)푸린-8-온(55 mg, 실시예 4)을 백색 분말로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.39 - 7.27 (m, 5H), 6.97 (br. s., 2H), 4.99 (s, 2H), 4.20 (br. s., 2H), 3.85 (d, J = 12.5 Hz, 1H), 3.43 - 3.15 (m, 3H), 2.96 (t, J = 12.3 Hz, 2H), 2.56 (m, 4H), 1.83 (m, 1H), 1.79 - 1.54 (m, 4H), 1.50 (br. s., 4H), 1.45 - 1.33 (m, 3H), 0.93 (t, J = 7.4 Hz, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 541.2.

실시예 5

6-아미노-9- 벤질 -N-에틸-N-(2- 메톡시에틸 )-8-옥소-2-( 프로필설폰이미도일 )푸린-7-카복스아미드

N-에틸-N-(2-메톡시에틸)카바모일 클로라이드(중간체 AD)를 N-메틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(중간체 AA) 대신에 사용하여 표제 화합물을 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. 6-아미노-9-벤질-N-에틸-N-(2-메톡시에틸)-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카복스아미드(34 mg, 실시예 5)를 백색 분말로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.39 - 7.28 (m, 5H), 6.89 (br. s., 1H), 6.74 (br. s., 1H), 4.99 (s, 2H), 4.17 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 3.67 (br. s., 2H), 3.63 - 3.51 (m, 2H), 3.50 - 3.34 (m, 4H), 3.29 (s, 1H), 3.11 (s, 2H), 1.73 - 1.59 (m, 2H), 1.23 - 1.07 (m, 3H), 0.93 (t, J = 7.5 Hz, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 476.3.

실시예 6

6-아미노-9- 벤질 -N-부틸-N-에틸-8-옥소-2-( 프로필설폰이미도일 ) 푸린 -7- 카복스아미드

N-부틸-N-에틸-카바모일 클로라이드(중간체 AE)를 N-메틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(중간체 AA) 대신에 사용하여 표제 화합물을 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. 6-아미노-9-벤질-N-부틸-N-에틸-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카복스아미드(51 mg, 실시예 6)를 백색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.27-7.39 (m, 5H), 6.85 (br. s., 2H), 4.99 (s, 2H), 4.20 (br. d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.13-3.54 (m, 4H), 1.46-1.72 (m, 4H), 1.30-1.39 (m, 1H), 1.00-1.26 (m, 6H), 0.81-0.95 (m, 5H), 0.73 (t, J = 8 Hz, 1H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 474.

실시예 7

6-아미노-9- 벤질 -N-(2- 메톡시에틸 )-8-옥소-N-프로필-2-( 프로필설폰이미도일 )푸린-7-카복스아미드

N-에틸-N-(2-메톡시에틸)카바모일 클로라이드(중간체 AF)를 N-메틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(중간체 AA) 대신에 사용하여 표제 화합물을 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. 6-아미노-9-벤질-N-(2-메톡시에틸)-8-옥소-N-프로필-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카복스아미드(35 mg, 실시예 7)를 백색 분말로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.40 - 7.28 (m, 5H), 6.89 (br. s., 1H), 6.75 (br. s., 1H), 5.00 (d, J = 5.5 Hz, 2H), 4.24 - 4.16 (m, 1H), 3.77 (br. s., 1H), 3.67 (br. s., 1H), 3.62 - 3.53 (m, 1H), 3.42 - 3.27 (m, 5H), 3.23 - 3.02 (m, 3H), 1.66-1.38 (m, 4H), 0.96 - 0.70 (m, 6H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 490.5.

실시예 8

6-아미노-9- 벤질 - N,N - 비스 (2- 메톡시에틸 )-8-옥소-2-( 프로필설폰이미도일 ) 푸린 -7-카복스아미드

비스(2-메톡시에틸)카밤산 클로라이드(중간체 AG)를 N-메틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(중간체 AA) 대신에 사용하여 표제 화합물을 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. 6-아미노-9-벤질-N,N-비스(2-메톡시에틸)-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카복스아미드(35 mg, 실시예 8)를 백색 분말로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.40 - 7.28 (m, 5H), 6.83 (br. s., 2H), 4.99 (s, 2H), 3.71 (br. s., 3H), 3.52 - 3.27 (m, 11H), 3.09 (s, 3H), 1.73 - 1.59 (m, 2H), 0.93 (t, J = 7.5 Hz, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 506.

실시예 9

6-아미노-7-( 아제티딘 -1-카본일)-9- 벤질 -2-( 프로필설폰이미도일 ) 푸린 -8-온

아제티딘-1-카본일 클로라이드(중간체 AH)를 N-메틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(중간체 AA) 대신에 사용하여 표제 화합물을 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. 6-아미노-7-(아제티딘-1-카본일)-9-벤질-2-(프로필설폰이미도일)푸린-8-온(120 mg, 실시예 9)을 백색 분말로 수득하였다. ¹HNMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.02 - 7.43 (m, 7H), 4.99 (s, 2H), 4.31 (t, J = 7.65 Hz, 2H), 4.08 - 4.23 (m, 3H), 3.34 - 3.41 (m, 2H), 2.28 (m, 2H), 1.56 - 1.73 (m, 2H), 0.93 (t, J = 7.40 Hz, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 430.

실시예 10

6-아미노-9- 벤질 -N-이소프로필-N- 메틸 -8-옥소-2-( 프로필설폰이미도일 ) 푸린 -7-카복스아미드

N-이소프로필-N-메틸-카바모일 클로라이드(중간체 AI)를 N-메틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(중간체 AA) 대신에 사용하여 표제 화합물을 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. 6-아미노-9-벤질-N-이소프로필-N-메틸-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카복스아미드(97 mg, 실시예 10)를 백색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.27-7.39 (m, 5H), 6.87 (br. s., 2H), 4.99 (s, 2H), 4.38-4.45 (m, 1H), 4.09-4.21 (m, 1H), 3.29-3.43 (m, 2H), 2.89-2.95 (m, 3H), 1.58-1.73 (m, 2H), 1.21 (br d, J = 8 Hz, 6H), 0.93 (t, J = 8 Hz, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 446.

실시예 11

6-아미노-9- 벤질 -7-(4- 메틸피페라진 -1-카본일)-2-( 프로필설폰이미도일 ) 푸린 -8-온

4-메틸피페라진-1-카본일 클로라이드를 N-메틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(중간체 AA) 대신에 사용하여 표제 화합물을 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. 6-아미노-9-벤질-7-(4-메틸피페라진-1-카본일)-2-(프로필설폰이미도일)푸린-8-온(59.5 mg, 실시예 11)을 황색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.39 - 7.31 (m, 5H), 6.99 (s, 2H), 4.98 (s, 2H), 4.18 (s, 1H), 3.58 - 3.49 (m, 6H), 2.42 (m, 4H), 2.22 (s, 3H), 1.66 - 1.61 (m, 2H), 0.95 - 0.91 (t, J = 7.2 Hz, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 473.

실시예 12

6-아미노-9- 벤질 -N-(3- 메톡시프로필 )-N- 메틸 -8-옥소-2-( 프로필설폰이미도일 )푸린-7-카복스아미드

N-(3-메톡시프로필)-N-메틸-카바모일 클로라이드를 N-메틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(중간체 AA) 대신에 사용하여 표제 화합물을 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. 6-아미노-9-벤질-N-(3-메톡시프로필)-N-메틸-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카복스아미드(92.2 mg, 실시예 12)를 백색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.23 - 7.45 (m, 5H), 6.94 (s., 2H), 4.93-5.08 (m, 2H), 4.19 (s, 1H), 3.30 - 3.62 (m, 6H), 3.25 (s, 3H), 3.02 - 3.10 (m, 3H), 1.74 - 1.90 (m, 2H), 1.55 - 1.77 (m, 2H), 0.98 - 0.82 (m, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 476.3.

실시예 13

6-아미노-9- 벤질 -N-이소부틸-N- 메틸 -8-옥소-2-( 프로필설폰이미도일 ) 푸린 -7-카복스아미드

N-이소부틸-N-메틸-카바모일 클로라이드(중간체 AL)를 N-메틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(중간체 AA) 대신에 사용하여 표제 화합물을 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. 6-아미노-9-벤질-N-이소부틸-N-메틸-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카복스아미드(64 mg, 실시예 13)를 백색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.27-7.40 (m, 5H), 6.89 (br. s., 2H), 5.00 (s, 2H), 4.16 (br. s., 1H), 3.25-3.44 (m, 4H), 3.07 (s, 2H), 3.03 (s, 1H), 1.87-2.09 (m, 1H), 1.57-1.74 (m, 2H), 0.75-0.99 (m, 9H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 460.

실시예 14

에틸 2-[[6-아미노-9- 벤질 -8-옥소-2-( 프로필설폰이미도일 ) 푸린 -7-카본일]-메틸-아미노]아세테이트

에틸 2-((클로로카본일)(메틸)아미노)아세테이트(중간체 AP)를 N-메틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(중간체 AA) 대신에 사용하여 표제 화합물을 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. 에틸 2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]아세테이트(38 mg, 실시예 14)를 연황색 분말로 수득하였다. ¹H NMR (400MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.41 - 7.27 (m, 5H), 6.82 (br. s., 1H), 5.04 - 4.95 (m, 2H), 4.35 (br. s., 1H), 4.28 (br. s., 1H), 4.23 - 4.16 (m, 2H), 4.08 (q, J = 7.2 Hz, 1H), 3.43 - 3.28 (m, 3H), 3.15 (s, 2H), 3.08 (s, 1H), 1.71 - 1.58 (m, 2H), 1.24 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 1.12 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 0.93 (t, J = 7.4 Hz, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 490.

실시예 15

에틸 3-[[6-아미노-9- 벤질 -8-옥소-2-( 프로필설폰이미도일 ) 푸린 -7-카본일]-메틸-아미노]프로파노에이트

에틸 3-((클로로카본일)(메틸)아미노)프로파노에이트를 N-메틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(중간체 AA) 대신에 사용하여 표제 화합물을 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. 에틸 3-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]프로파노에이트(35 mg, 실시예 15)를 백색 분말로 수득하였다. ¹H NMR (400MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.43 - 7.26 (m, 5H), 6.93 (br. s., 2H), 4.99 (s, 2H), 4.16 (s, 1H), 4.08 (q, J = 7.1 Hz, 1H), 3.99 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 3.67 (br. s., 2H), 3.40 - 3.29 (m, 2H), 3.08 (s, 2H), 2.99 (s, 1H), 2.71 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 1.74 - 1.56 (m, 2H), 1.27 - 1.05 (m, 3H), 0.93 (t, J = 7.5 Hz, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 504.

실시예 16

tert -부틸 3-[[6-아미노-9- 벤질 -8-옥소-2-( 프로필설폰이미도일 ) 푸린 -7-카본일]-메틸-아미노]프로파노에이트

tert-부틸 3-[클로로카본일(메틸)아미노]프로파노에이트(중간체 AR)를 N-메틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(중간체 AA) 대신에 사용하여 표제 화합물을 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. tert-부틸 3-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]프로파노에이트(60 mg, 실시예 16)를 백색 분말로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.41 - 7.27 (m, 5H), 6.93 (br. s., 2H), 4.99 (s, 2H), 4.15 (s, 1H), 3.64 (br. s., 2H), 3.51 - 3.33 (m, 2H), 3.08 (s, 2H), 2.98 (s, 1H), 2.62 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 1.71 - 1.57 (m, 2H), 1.41 (s, 6H), 1.34 (s, 3H), 0.93 (t, J = 7.4 Hz, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 532.

실시예 17

에틸 (2S)-2-[[6-아미노-9- 벤질 -8-옥소-2-( 프로필설폰이미도일 ) 푸린 -7-카본일]-메틸-아미노]프로파노에이트

에틸 (2S)-2-[클로로카본일(메틸)아미노]프로파노에이트(중간체 AS)를 N-메틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(중간체 AA) 대신에 사용하여 표제 화합물을 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. 에틸 (2S)-2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]프로파노에이트(34.1 mg, 실시예 17)를 황색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.22 - 7.49 (m, 5 H), 6.78 (br. s., 2H), 4.93 - 5.08 (m, 2H), 4.75 (br. s., 1H), 3.96 - 4.29 (m, 3H), 3.30 - 3.46 (m, 2H), 3.09 (s, 2H), 2.93 (br. s., 1H), 1.55 - 1.77 (m, 2H), 1.48 (d, J = 7.16 Hz, 3H), 1.09 - 1.29 (m, 3H), 0.94 (t, J = 7.44 Hz, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 504.2.

실시예 18

tert -부틸 (2S)-2-[[6-아미노-9- 벤질 -8-옥소-2-( 프로필설폰이미도일 ) 푸린 -7-카본일]-메틸-아미노]-4-메틸-펜타노에이트

tert-부틸 (2S)-2-[클로로카본일(메틸)아미노]-4-메틸-펜타노에이트(중간체 AT)를 N-메틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(중간체 AA) 대신에 사용하여 표제 화합물을 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. tert-부틸 (2S)-2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]-4-메틸-펜타노에이트(22 mg, 실시예 18)를 백색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.42 - 7.27 (m, 5H), 6.78 (br. s., 2H), 5.05 - 4.96 (m, 2H), 4.78 (br. s., 1H), 4.33 (br. s., 1H), 3.51 - 3.37 (m, 2H), 3.01 (s, 3H), 1.75 - 1.54 (m, 4H), 1.44 (s, 8H), 1.33 - 1.11 (m, 2H), 0.99 - 0.82 (m, 9H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 574.3.

실시예 19

이소프로필 (2S)-2-[[6-아미노-9- 벤질 -8-옥소-2-( 프로필설폰이미도일 ) 푸린 -7-카본일]-메틸-아미노]-4-메틸-펜타노에이트

이소프로필 (2S)-2-[클로로카본일(메틸)아미노]-4-메틸-펜타노에이트(중간체 AU)를 N-메틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(중간체 AA) 대신에 사용하여 표제 화합물을 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. 이소프로필 (2S)-2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]-4-메틸-펜타노에이트(43 mg, 실시예 19)를 백색 분말로 수득하였다. ¹H NMR (400MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.43 - 7.27 (m, 5H), 6.75 (br. s., 2H), 5.05 - 4.94 (m, 3H), 4.88 (br. s., 1H), 4.19 (br. s., 1H), 3.43 - 3.34 (m, 2H), 3.01 (s, 3H), 1.91 (br. s., 1H), 1.77 - 1.56 (m, 4H), 1.25 - 1.16 (m, 6H), 0.99 - 0.83 (m, 9H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 560.3.

실시예 20

에틸 (2S)-2-[[6-아미노-9- 벤질 -8-옥소-2-( 프로필설폰이미도일 ) 푸린 -7-카본일]-메틸-아미노]-3-메틸-부타노에이트

에틸 (2S)-2-[클로로카본일(메틸)아미노]-3-메틸-부타노에이트(중간체 AV)를 N-메틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(중간체 AA) 대신에 사용하여 표제 화합물을 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. 에틸 (2S)-2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]-3-메틸-부타노에이트(51.5 mg, 실시예 20)를 백색 분말로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.23 - 7.51 (m, 5H), 6.76 (br. s., 2H), 5.01 (br. s., 2H), 4.42 (br. s., 1H), 3.97 - 4.26 (m, 3H), 3.34 - 3.45 (m, 2H), 3.12 (br. s., 3H), 2.24 (br. s., 1H), 1.65 (br. s., 2H), 1.13 - 1.29 (m, 3H), 0.88 - 1.10 (m, 9H). MS obsd. (ESI⁺) [M+H⁺]: 532.2.

실시예 21

에틸 (2S)-2-[[6-아미노-9- 벤질 -8-옥소-2-( 프로필설폰이미도일 ) 푸린 -7-카본일]-메틸-아미노]-4-메틸-펜타노에이트

에틸 (2S)-2-[클로로카본일(메틸)아미노]-4-메틸-펜타노에이트(중간체 AW)를 N-메틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(중간체 AA) 대신에 사용하여 표제 화합물을 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. 에틸 (2S)-2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]-4-메틸-펜타노에이트(17.3 mg, 실시예 21)를 백색 분말로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.26 - 7.45 (m, 5H), 6.73 (br. s., 2H), 4.91 - 5.09 (m, 3H), 4.06 - 4.25 (m, 3H), 3.34 - 3.45 (m, 2H), 3.04 (br. s., 3H), 1.93 (br. s., 1H), 1.54 - 1.78 (m, 4H), 1.22 (t, J = 7.09 Hz, 3H), 0.77 - 1.01 (m, 9H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 546.3.

실시예 22

에틸 (2S)-2-[[6-아미노-9- 벤질 -8-옥소-2-( 프로필설폰이미도일 ) 푸린 -7-카본일]-메틸-아미노]-3-페닐-프로파노에이트

에틸 (2S)-2-[클로로카본일(메틸)아미노]-3-페닐-프로파노에이트(중간체 AX)를 N-메틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(중간체 AA) 대신에 사용하여 표제 화합물을 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. 에틸 (2S)-2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]-3-페닐-프로파노에이트(30 mg, 실시예 22)를 백색 분말로 수득하였다. ¹H NMR (400MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.42 - 7.16 (m, 10H), 4.97 (s, 3H), 4.19 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.35 - 3.15 (m, 6H), 3.10 - 2.90 (m, 3H), 1.71 - 1.46 (m, 2H), 1.28 - 1.18 (m, 4H), 0.97 - 0.85 (m, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 580.

실시예 23

이소프로필 (2S)-2-[[6-아미노-9- 벤질 -8-옥소-2-( 프로필설폰이미도일 ) 푸린 -7-카본일]-메틸-아미노]-3-페닐-프로파노에이트

이소프로필 (2S)-2-[클로로카본일(메틸)아미노]-3-페닐-프로파노에이트(중간체 AY)를 N-메틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(중간체 AA) 대신에 사용하여 표제 화합물을 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. 이소프로필 (2S)-2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]-3-페닐-프로파노에이트(22 mg, 실시예 23)를 백색 분말로 수득하였다. ¹H NMR (400MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.35 - 7.01 (m, 10H), 5.02-4.89 (m, 3H), 3.37-3.17 (m, 3H), 3.02 - 3.09 (m, 3H), 3.10 - 2.90 (m, 3H), 1.66 - 1.62 (m, 2H), 1.22 - 1.11 (m, 8H), 0.92 (t, J = 7.4 Hz, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 594.

실시예 24

tert -부틸 (2S)-2-[[6-아미노-9- 벤질 -8-옥소-2-( 프로필설폰이미도일 ) 푸린 -7-카본일]-메틸-아미노]-3-페닐-프로파노에이트

tert-부틸 (2S)-2-[클로로카본일(메틸)아미노]-3-페닐-프로파노에이트(중간체 AZ)를 N-메틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(중간체 AA) 대신에 사용하여 표제 화합물을 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. tert-부틸 (2S)-2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]-3-페닐-프로파노에이트(34 mg, 실시예 24)를 백색 분말로 수득하였다. ¹H NMR (400MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.42 - 7.16 (m, 10H), 5.03 - 4.90 (m, 3H), 3.68 - 3.24 (m, 5H), 3.24 - 3.09 (m, 2H), 3.01 (s, 3H), 1.68 - 1.57 (m, 2H), 1.43 (s, 9H), 0.99 - 0.85 (m, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 608.3.

실시예 25

N-[2-[ 아세틸(메틸)아미노 ]에틸]-6-아미노-9- 벤질 -N- 메틸 -8-옥소-2-( 프로필설폰이미도일 )푸린-7-카복스아미드

N-[2-[아세틸(메틸)아미노]에틸]-N-메틸-카바모일 클로라이드(중간체 BA)를 N-메틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(중간체 AA) 대신에 사용하여 표제 화합물을 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. N-[2-[아세틸(메틸)아미노]에틸]-6-아미노-9-벤질-N-메틸-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카복스아미드(26.1 mg, 실시예 25)를 백색 분말로 수득하였다. ¹H NMR (400MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.43 - 7.27 (m, 5H), 7.02 (br, 2H), 5.04 - 4.97 (m, 2H), 4.19 - 4.13 (m, 1H), 3.57 (d, J = 5.5 Hz, 2H), 3.49 - 3.34 (m, 2H), 3.14 (s, 1H), 3.12 - 3.02 (m, 4H), 2.86 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 2.69 - 2.64 (m, 1H), 2.05 (s, 1H), 1.99 (s, 1H), 1.91 - 1.83 (m, 1H), 1.70 - 1.59 (m, 2H), 0.97 - 0.90 (m, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 503.2.

실시예 26

메틸 N-[2-[[6-아미노-9- 벤질 -8-옥소-2-( 프로필설폰이미도일 ) 푸린 -7-카본일]-메틸-아미노]에틸]-N-메틸-카바메이트

메틸 N-[2-[클로로카본일(메틸)아미노]에틸]-N-메틸-카바메이트(중간체 BB)를 N-메틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(중간체 AA) 대신에 사용하여 표제 화합물을 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. 메틸 N-[2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]에틸]-N-메틸-카바메이트(65 mg, 실시예 26)를 황색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ ppm: 7.29 - 7.49 (m, 5H), 5.63 - 5.92 (m, 2H), 5.03 - 5.17 (m, 2H), 3.43 - 3.69 (m, 8H), 3.13 - 3.27 (m, 3H), 2.96 - 3.05 (m, 2H), 2.72 (br. s., 1H), 1.05 (t, J = 7.40 Hz, 3H), 1.87 (dd, J = 14.12, 6.96 Hz, 2H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 519.2.

실시예 27

tert -부틸 N-[2-[[6-아미노-9- 벤질 -8-옥소-2-( 프로필설폰이미도일 ) 푸린 -7-카본일]-메틸-아미노]에틸]-N-메틸-카바메이트

tert-부틸 N-[2-[클로로카본일(메틸)아미노]에틸]-N-메틸-카바메이트(중간체 BC)를 N-메틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(중간체 AA) 대신에 사용하여 표제 화합물을 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. tert-부틸 N-[2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]에틸]-N-메틸-카바메이트(32 mg, 실시예 27)를 백색 분말로 수득하였다. ¹H NMR (400MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.43 - 7.26 (m, 5H), 6.89 (br. s., 2H), 4.99 (d, J = 5.0 Hz, 2H), 4.16 (s, 1H), 3.55 (br. s., 2H), 3.48 - 3.34 (m, 2H), 3.10 (s, 2H), 3.07 (s, 1H), 2.86 (d, J = 12.8 Hz, 2H), 2.74 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 2.70 - 2.60 (m, 1H), 1.72 - 1.54 (m, 2H), 1.39 (s, 6H), 1.23 (s, 2H), 1.13 (s, 2H), 0.93 (t, J = 7.4 Hz, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 562.

실시예 28

에틸 N-[2-[[6-아미노-9- 벤질 -8-옥소-2-( 프로필설폰이미도일 ) 푸린 -7-카본일]-메틸-아미노]에틸]-N-메틸-카바메이트

에틸 N-[2-[클로로카본일(메틸)아미노]에틸]-N-메틸-카바메이트(중간체 BD)를 N-메틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(중간체 AA) 대신에 사용하여 표제 화합물을 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. 에틸 N-[2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]에틸]-N-메틸-카바메이트(87 mg, 실시예 28)를 황색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ ppm: 7.29 - 7.53 (m, 5H), 5.65 - 5.90 (m, 2H), 5.02 - 5.14 (m, 2H), 3.38 - 4.21 (m, 9H), 3.14 - 3.26 (m, 3H), 3.00 (br. s., 2H), 2.73 (s, 1H), 1.76 - 1.99 (m, 2H), 1.22 - 1.31 (m, 3H), 1.05 (s, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 533.2.

실시예 29

2-[[6-아미노-9- 벤질 -8-옥소-2-( 프로필설폰이미도일 ) 푸린 -7-카본일]- 메틸 -아미노]에틸 N-부틸-N-메틸-카바메이트

2-[클로로카본일(메틸)아미노]에틸 N-부틸-N-메틸-카바메이트(중간체 BE)를 N-메틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(중간체 AA) 대신에 사용하여 표제 화합물을 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. 2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]에틸 N-부틸-N-메틸-카바메이트(19 mg, 화합물 29)를 황색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.25 - 7.48 (m, 5H), 6.96 (br. s., 2H), 4.99 (s, 2H), 4.06 - 4.36 (m, 3H), 3.59 - 3.83 (m, 1H), 3.33 - 3.49 (m, 3H), 3.07 - 3.21 (m, 4H), 2.79 (s, 2H), 1.65 (br. s., 2H), 1.05 - 1.47 (m, 6H), 0.93 (t, J = 7.40 Hz, 3H), 0.70 - 0.87 (m, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 561.2.

실시예 30

2-[[6-아미노-9- 벤질 -8-옥소-2-( 프로필설폰이미도일 ) 푸린 -7-카본일]- 메틸 -아미노]에틸 피롤리딘-1-카복시레이트

2-[클로로카본일(메틸)아미노]에틸 피롤리딘-1-카복시레이트(중간체 BF)를 N-메틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(중간체 AA) 대신에 사용하여 표제 화합물을 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. 2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]에틸 피롤리딘-1-카복시레이트(10.0 mg, 실시예 30)를 황색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.26 - 7.41 (m, 5H), 6.96 (br.s., 2H), 4.99 (s, 2H), 4.01 - 4.35 (m, 4H), 3.29 - 3.47 (m, 3H), 3.23 (br. s., 3H), 3.03 - 3.17 (m, 4H), 1.52 - 1.84 (m, 6H), 0.90 - 0.96 (m, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 545.2.

실시예 31

2-[[6-아미노-9- 벤질 -8-옥소-2-( 프로필설폰이미도일 ) 푸린 -7-카본일]- 메틸 -아미노]에틸 N-메틸-N-프로필-카바메이트

2-[클로로카본일(메틸)아미노]에틸 N-메틸-N-프로필-카바메이트(중간체 BG)를 N-메틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(중간체 AA) 대신에 사용하여 표제 화합물을 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. 2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]에틸 N-메틸-N-프로필-카바메이트(3.7 mg, 실시예 31)를 황색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 7.22 - 7.48 (m, 5H), 5.09 - 5.22 (m, 4H), 4.55 (s, 2H), 3.38 - 3.57 (m, 4H), 3.13 (s, 3H), 1.61 - 1.85 (m, 4H), 1.22 - 1.41 (m, 3H), 0.88 - 1.13 (m, 6H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 547.2.

실시예 32

2-[[6-아미노-9- 벤질 -8-옥소-2-( 프로필설폰이미도일 ) 푸린 -7-카본일]- 메틸 -아미노]에틸 N,N-다이에틸카바메이트

2-[클로로카본일(메틸)아미노]에틸 N,N-다이에틸카바메이트(중간체 BH)를 N-메틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(중간체 AA) 대신에 사용하여 표제 화합물을 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. 2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]에틸 N,N-다이에틸카바메이트(21.7 mg, 실시예 32)를 황색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.25 - 7.41 (m, 5H), 6.96 (br. s., 2H), 4.99 (s, 2H), 4.08 - 4.36 (m, 3H), 3.70 (br, 1H), 3.33 - 3.46 (m, 3H), 3.01 - 3.24 (m, 7H), 1.55 - 1.74 (m, 2H), 0.86 - 1.05 (m, 9H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 547.2.

실시예 33

2-[[6-아미노-9- 벤질 -8-옥소-2-( 프로필설폰이미도일 ) 푸린 -7-카본일]- 메틸 -아미노]에틸 에틸 카보네이트

2-[클로로카본일(메틸)아미노]에틸 에틸 카보네이트(중간체 BI)를 N-메틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(중간체 AA) 대신에 사용하여 표제 화합물을 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. 2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]에틸 에틸 카보네이트(46 mg, 실시예 33)를 황색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 0.82 - 0.99 (m, 3H), 1.02 - 1.28 (m, 3H), 1.56 - 1.76 (m, 2H), 3.05 - 3.18 (m, 3H), 3.35 - 3.48 (m, 3H), 3.73 (t, J = 5.08 Hz, 2H), 4.08 - 4.27 (m, 3H), 4.37 (br. s., 1H), 5.00 (s, 2H), 6.76 - 7.11 (m, 2H), 7.22 - 7.45 (m, 5H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 520.

실시예 34-A 및 실시예 34-B

6-아미노-N-부틸-9-[(4- 클로로페닐 ) 메틸 ]-N- 메틸 -8-옥소-2-[S(S)- 프로필설 폰이미도일]푸린-7-카복스아미드 및 6-아미노-N-부틸-9-[(4- 클로로페닐 ) 메틸 ]-N- 메틸 -8-옥소-2-[S(S)-프로필설폰이미도일]푸린-7-카복스아미드

단계 1: 4-아미노-3-[(4-클로로페닐)메틸]-2-옥소-1H-이미다졸-5-카보니트릴(화합물 34a)의 제조

4-클로로벤질 이소시아네이트를 벤질 이소시아네이트 대신에 사용하여 화합물 34a를 실시예 1, 방법 A, 단계 1과 유사하게 제조하였다. 4-아미노-3-[(4-클로로페닐)메틸]-2-옥소-1H-이미다졸-5-카보니트릴(8.0 g, 화합물 34a)을 황색 고체로 수득하였다. MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 249.

단계 2: 6-아미노-9-[(4-클로로페닐)메틸]-2-설판일-7H-푸린-8-온(화합물 34b)의 제조

4-아미노-3-[(4-클로로페닐)메틸]-2-옥소-1H-이미다졸-5-카보니트릴(화합물 34a)을 4-아미노-3-페닐메틸-2-옥소-1H-이미다졸-5-카보니트릴(화합물 1a) 대신에 사용하여 화합물 34b를 실시예 1, 방법 A, 단계 2와 유사하게 제조하였다. 6-아미노-9-[(4-클로로페닐)메틸]-2-설판일-7H-푸린-8-온(6.4 g, 화합물 34b)을 황색 고체로 수득하고 추가적 정제 없이 후속 단계에 사용하였다. MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 308.

단계 3: 6-아미노-9-[(4-클로로페닐)메틸]-2-프로필설판일-7H-푸린-8-온(화합물 34c)의 제조

6-아미노-9-[(4-클로로페닐)메틸]-2-설판일-7H-푸린-8-온(화합물 34b)을 6-아미노-9-페닐메틸-2-설판일-7H-푸린-8-온(화합물 1b) 대신에 사용하여 화합물 34c를 실시예 1, 방법 A, 단계 3과 유사하게 제조하였다. 6-아미노-9-[(4-클로로페닐)메틸]-2-프로필설판일-7H-푸린-8-온(800 mg, 화합물 34c)을 백색 고체로 수득하였다. MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 350.

단계 4: 6-아미노-9-[(4-클로로페닐)메틸]-2-프로필설핀일-7H-푸린-8-온(화합물 34d)의 제조

6-아미노-9-[(4-클로로페닐)메틸]-2-프로필설판일-7H-푸린-8-온(화합물 34c)을 6-아미노-9-벤질-2-프로필설판일-7H-푸린-8-온(화합물 1c) 대신에 사용하여 화합물 34d를 실시예 1, 방법 A, 단계 4와 유사하게 제조하였다. 6-아미노-9-[(4-클로로페닐)메틸]-2-프로필설핀일-7H-푸린-8-온(150 mg, 화합물 34d)을 백색 고체로 수득하였다. MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 366.

단계 5: 6-아미노-9-[(4-클로로페닐)메틸]-2-(프로필설폰이미도일)-7H-푸린-8-온(화합물 34e), 6-아미노-9-[(4-클로로페닐)메틸]-2-[S(S)-프로필설폰이미도일)-7H-푸린-8-온 및 6-아미노-9-[(4-클로로페닐)메틸]-2-[S(S)-프로필설폰이미도일)-7H-푸린-8-온(화합물 34e-A 및 화합물 34e-B)의 제조

6-아미노-9-[(4-클로로페닐)메틸]-2-프로필설핀일-7H-푸린-8-온(화합물 34d)을 6-아미노-9-벤질-2-(2-프로필설핀일)-7H-푸린-8-온(화합물 1d) 대신에 사용하여 화합물 34e를 실시예 1, 방법 A, 단계 5와 유사하게 제조하였다. 6-아미노-9-[(4-클로로페닐)메틸]-2-(프로필설폰이미도일)-7H-푸린-8-온(250 mg, 화합물 34e)을 백색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 10.60 (br. s, 1H), 7.32-7.42 (m, 4H), 6.98 (br. s, 2H), 4.96 (s, 2H), 4.03 (s, 1H), 3.25-3.41 (m, 2H), 1.56-1.68 (m, 2H), 0.91 (t, J = 8 Hz, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 381.

키랄팩 OJ-3 컬럼 상에서 메탄올 5%-40% (0.05%DEA)/CO₂를 사용하여 키랄 HPLC에 의해 화합물 34e를 분리하여 화합물 34e-A(보다 빠르게 용리, 110 mg) 및 화합물 34e-B(보다 느리게 용리, 100 mg)를 백색 고체로 수득하였다.

화합물 34e-A: ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 10.63 (br. s, 1H), 7.33-7.42 (m, 4H), 6.99 (br. s, 2H), 4.96 (s, 2H), 4.05 (br. s, 1H), 3.26-3.39 (m, 2H), 1.53-1.69 (m, 2H), 0.91 (t, J = 7.4 Hz, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 381.

화합물 34e-B: ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 10.63 (br. s, 1H), 7.33-7.42 (m, 4H), 6.99 (br. s, 2H), 4.96 (s, 2H), 4.05 (br. s, 1H), 3.26-3.40 (m, 2H), 1.54-1.69 (m, 2H), 0.91 (t, J = 7.5 Hz, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 381.

단계 6: 6-아미노-N-부틸-9-[(4-클로로페닐)메틸]-N-메틸-8-옥소-2-[S(S)-프로필설폰이미도일]푸린-7-카복스아미드 및 6-아미노-N-부틸-9-[(4-클로로페닐)메틸]-N-메틸-8-옥소-2-[S(S)-프로필설폰이미도일]푸린-7-카복스아미드(실시예 34-A 및 실시예 34-B)

화합물 34e-A 및 N-부틸-N-메틸-카바모일 클로라이드를 6-아미노-9-벤질-2-(프로필설폰이미도일)-7H-푸린-8-온(화합물 1e) 및 N-메틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(중간체 AA) 대신에 사용하여 실시예 34-A를 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다.

실시예 34-A (160 mg): ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.37-7.45 (m, 4H), 6.91 (br. s., 2H), 4.99 (s, 2H), 4.17 (s, 1H), 3.28-3.40 (m, 4H), 3.05 (s, 2H), 3.02 (s, 1H), 1.49-1.70 (m, 4H), 1.15-1.37 (m, 2H), 0.89-0.94 (m, 5H), 0.76 (t, J = 8 Hz, 1H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 494.

화합물 34e-B를 화합물 34e-A 대신에 사용하여 실시예 34-B(167 mg)를 실시예 34-A와 유사하게 제조하였다.

실시예 34-B: ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.36-7.45 (m, 4H), 6.91 (br. s., 2H), 4.99 (s, 2H), 4.17 (s, 1H), 3.28-3.41 (m, 4H), 3.05 (s, 2H), 3.02 (s, 1H), 1.50-1.71 (m, 4H), 1.15-1.37 (m, 2H), 0.89-0.94 (m, 5H), 0.76 (t, J = 7.4 Hz, 1H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 494.

실시예 35

6-아미노-9-[(4- 클로로페닐 ) 메틸 ]-N-에틸-N- 메틸 -8-옥소-2-( 프로필설폰이미도일 )푸린-7-카복스아미드

6-아미노-9-[(4-클로로페닐)메틸]-2-(프로필설폰이미도일)-7H-푸린-8-온(화합물 34e) 및 N-에틸-N-메틸-카바모일 클로라이드를 6-아미노-9-벤질-2-(프로필설폰이미도일)-7H-푸린-8-온(화합물 1e) 및 N-메틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(중간체 AA) 대신에 사용하여 표제 화합물을 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. 6-아미노-9-[(4-클로로페닐)메틸]-N-에틸-N-메틸-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카복스아미드(60 mg, 실시예 35)를 백색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.40 (s, 4H), 6.91 (br s, 2H), 4.99 (s, 2H), 4.16 (s, 1H), 3.34-3.44 (m, 4H), 3.05 (s, 2H), 3.01 (s, 1H), 1.58-1.67 (m, 2H), 1.18 (t, J = 8.0 Hz, 3H), 0.92 (t, J = 8.0 Hz, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 466.

실시예 36-A 및 실시예 36-B

6-아미노-N- 메틸 -8-옥소-N-프로필-2[S(S)- 프로필설폰이미도일 ]-9-(p- 톨릴메 틸)푸린-7-카복스아미드 및 6-아미노-N- 메틸 -8-옥소-N-프로필-2[S(R)- 프로필설폰이미도일 ]-9-(p-톨릴메틸)푸린-7-카복스아미드

단계 1: 6-클로로-5-니트로-2-프로필설판일-N-(p-톨릴메틸)피리미딘-4-아민(화합물 36a)의 제조

p-톨릴메틸아민을 페닐메탄아민 대신에 사용하여 화합물 36a를 실시예 1, 방법 B, 단계 1과 유사하게 제조하였다. 6-클로로-5-니트로-2-프로필설판일-N-(p-톨릴메틸)피리미딘-4-아민(3.9 g, 화합물 36a)을 백색 고체로 수득하였다. MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 353.

단계 2: 6-클로로-2-프로필설판일-N4-(p-톨릴메틸)피리미딘-4,5-다이아민(화합물 36b)의 제조

6-클로로-5-니트로-2-프로필설판일-N-(p-톨릴메틸)피리미딘-4-아민(화합물 36a)을 N-벤질-6-클로로-5-니트로-2-프로필설판일-피리미딘-4-아민(화합물 1f) 대신에 사용하여 화합물 36b를 실시예 1, 방법 B, 단계 2와 유사하게 제조하였다. 6-클로로-2-프로필설판일-N4-(p-톨릴메틸)피리미딘-4,5-다이아민(2.2 g, 화합물 36b)을 백색 고체로 수득하였다. MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 323.

단계 3: 6-클로로-2-프로필설판일-9-(p-톨릴메틸)-7H-푸린-8-온(화합물 36c)의 제조

6-클로로-2-프로필설판일-N4-(p-톨릴메틸)피리미딘-4,5-다이아민(화합물 36b)을 N-벤질-6-클로로-2-(프로필설판일)피리미딘-4,5-다이아민(화합물 1g) 대신에 사용하여 화합물 36c를 실시예 1, 방법 B, 단계 3과 유사하게 제조하였다. 6-클로로-2-프로필설판일-9-(p-톨릴메틸)-7H-푸린-8-온(2.2 g, 화합물 36c)을 백색 고체로 수득하였다. MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 349.

단계 4: 6-[(4-메톡시페닐)메틸아미노]-2-프로필설판일-9-(p-톨릴메틸)-7H-푸린-8-온(화합물 36d)의 제조

6-클로로-2-프로필설판일-9-(p-톨릴메틸)-7H-푸린-8-온(화합물 36c)을 9-벤질-6-클로로-2-프로필설판일-7H-푸린-8-온(화합물 1h) 대신에 사용하여 화합물 36d를 실시예 1, 방법 B, 단계 4와 유사하게 제조하였다. 6-[(4-메톡시페닐)메틸아미노]-2-프로필설판일-9-(p-톨릴메틸)-7H-푸린-8-온(2.0 g, 화합물 36d)을 백색 고체로 수득하였다. MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 450.

단계 5: 6-아미노-2-프로필설판일-9-(p-톨릴메틸)-7H-푸린-8-온(화합물 36e)의 제조

6-[(4-메톡시페닐)메틸아미노]-2-프로필설판일-9-(p-톨릴메틸)-7H-푸린-8-온(화합물 36d)을 6-아미노-9-벤질-2-프로필설판일-7H-푸린-8-온(화합물 1i) 대신에 사용하여 화합물 36e를 실시예 1, 방법 B, 단계 5와 유사하게 제조하였다. 6-아미노-2-프로필설판일-9-(p-톨릴메틸)-7H-푸린-8-온(1.0 g, 화합물 36e)을 백색 고체로 수득하였다. MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 330.

단계 6: 6-아미노-2-프로필설핀일-9-(p-톨릴메틸)-7H-푸린-8-온(화합물 36f)의 제조

6-아미노-2-프로필설판일-9-(p-톨릴메틸)-7H-푸린-8-온(화합물 36e)을 6-아미노-9-벤질-2-(2-프로필설판일)-7H-푸린-8-온(화합물 1c) 대신에 사용하여 화합물 36f를 실시예 1, 방법 B, 단계 6과 유사하게 제조하였다. 6-아미노-2-프로필설핀일-9-(p-톨릴메틸)-7H-푸린-8-온(220 mg, 화합물 36f)을 백색 고체로 수득하였다. MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 345.

단계 7: 6-아미노-2-(프로필설폰이미도일)-9-(p-톨릴메틸)-7H-푸린-8-온(화합물 36g)의 제조

6-아미노-2-프로필설핀일-9-(p-톨릴메틸)-7H-푸린-8-온(화합물 36f)을 6-아미노-9-벤질-2-프로필설핀일-7H-푸린-8-온(화합물 1d) 대신에 사용하여 화합물 36g를 실시예 1, 방법 B, 단계 7과 유사하게 제조하였다. 6-아미노-2-(프로필설폰이미도일)-9-(p-톨릴메틸)-7H-푸린-8-온(127 mg, 화합물 36g)을 백색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 10.67 (br. s., 1H), 7.23 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.13 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 6.98 (br. s., 2H), 4.91 (s, 2H), 4.05 (s, 1H), 3.34-3.27 (m, 2H), 2.26 (s, 3H), 1.67-1.62 (m, 2H), 0.92 (t, J = 8.0 Hz, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 361.

키랄팩 AD-3 컬럼 상에서 30% 이소프로판올 (0.05%DEA)/CO₂를 사용하는 키랄 HPLC로 화합물 36g를 분리하여 화합물 36g-A(보다 빠르게 용리, 50 mg) 및 화합물 36g-B(보다 느리게 용리, 49 mg)를 백색 고체로 수득하였다.

화합물 36g-A: ¹H NMR: (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 10.51 (s, 1 H), 7.22 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.12 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.00 (s, 2 H), 4.91 (s, 2H), 4.03 (s, 1H), 3.35 - 3.31 (m, 2H), 2.26 (s, 3H), 1.70 - 1.58 (m, 2H), 0.93 (t, J = 7.40 Hz, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 361.

화합물 36g-B: ¹H NMR: (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 10.54 (s, 1H), 7.23 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.13 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 6.97 (s, 2H), 4.91 (s, 2H), 4.04 (s, 1H), 3.34 - 3.30 (m, 2H), 2.26 (s, 3H), 1.72 - 1.57 (m, 2H), 0.93 (t, J = 7.40 Hz, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 361.

단계 8: 6-아미노-N-메틸-8-옥소-N-프로필-2[S(S)-프로필설폰이미도일]-9-(p-톨릴메틸)푸린-7-카복스아미드 및 6-아미노-N-메틸-8-옥소-N-프로필-2[S(R)-프로필설폰이미도일]-9-(p-톨릴메틸)푸린-7-카복스아미드(실시예 36-A 및 실시예 36-B)의 제조

화합물 36g-A를 6-아미노-9-벤질-2-(프로필설폰이미도일)-7H-푸린-8-온(화합물 1e) 대신에 사용하여 실시예 36-A를 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. 실시예 36-A(108 mg)를 백색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.27 (d, J = 8 Hz, 2H), 7.14 (d, J = 8 Hz, 2H), 6.87 (br. s., 2H), 4.95 (s, 2H), 4.15 (s, 1H), 3.33-3.57 (m, 4H), 3.05 (s, 2H), 3.02 (s, 1H), 2.26 (s, 3H), 1.52-1.73 (m, 4H), 0.75-0.97 (m, 6H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 460.

화합물 36g-B를 6-아미노-9-벤질-2-(프로필설폰이미도일)-7H-푸린-8-온(화합물 1e) 대신에 사용하여 실시예 36-B를 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. 실시예 36-B(125 mg): ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.27 (d, J = 8 Hz, 2H), 7.14 (d, J = 8 Hz, 2H), 6.87 (br. s., 2H), 4.95 (s, 2H), 4.15 (s, 1H), 3.33-3.57 (m, 4H), 3.05 (s, 2H), 3.02 (s, 1H), 2.26 (s, 3H), 1.52-1.73 (m, 4H), 0.75-0.97 (m, 5H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 460.

실시예 37-A 및 실시예 37-B

6-아미노-2-[S(S)- 프로필설폰이미도일 ]-9-(p- 톨릴메틸 )-7-( 피롤리딘 -1-카본일)푸린-8-온 및 6-아미노-2-[S(R)- 프로필설폰이미도일 ]-9-(p- 톨릴메틸 )-7-( 피롤리딘 -1-카본일)푸린-8-온

화합물 36g-A 및 피롤리딘-1-카본일 클로라이드를 6-아미노-9-벤질-2-(프로필설폰이미도일)-7H-푸린-8-온(화합물 1e) 및 N-메틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(중간체 AA) 대신에 사용하여 실시예 37-A를 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다.

실시예 37-A(390 mg)를 백색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.31 - 7.11 (m, 4H), 7.04 (s, 2H), 4.95 (s, 2H), 4.15 (s, 1H), 3.65 - 3.47 (m, 4H), 3.37 (m, 2H), 2.27 (s, 3H), 1.97 - 1.81 (m, 4H), 1.71 - 1.59 (m, 2H), 0.94 (t, J = 7.4 Hz, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 458.2.

화합물 36g-B를 화합물 36g-A 대신에 사용하여 실시예 37-B(125 mg)를 실시예 37-A를 제조하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.28 - 7.14 (m, 4H), 7.04 (s, 2H), 4.95 (s, 2H), 4.15 (s, 1H), 3.65 - 3.47 (m, 4H), 3.37 (m, 2H), 2.27 (s, 3H), 1.93 - 1.84 (m, 4H), 1.65 - 1.60 (m, 2H), 0.95 (t, J = 7.4 Hz, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 458.3.

실시예 38-A 및 실시예 38-B

6-아미노-N-(2- 메톡시에틸 )-N- 메틸 -8-옥소-2-[S(S)- 프로필설폰이미도일 ]-9-(p-톨릴메틸)푸린-7-카복스아미드 및 6-아미노-N-(2- 메톡시에틸 )-N- 메틸 -8-옥소-2-[S(R)-프로필설폰이미도일]-9-(p-톨릴메틸)푸린-7-카복스아미드

화합물 36g-A 및 N-(2-메톡시에틸)-N-메틸-카바모일 클로라이드(중간체 AB)를 6-아미노-9-벤질-2-(프로필설폰이미도일)-7H-푸린-8-온(화합물 1e) 및 N-메틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(중간체 AA) 대신에 사용하여 실시예 38-A를 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다.

실시예 38-A(57.8 mg)를 백색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.26 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.14 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 6.89 - 6.78 (m, 2H), 4.95 (s, 2H), 4.18 (s, 1H), 3.62 -3.58 (m, 2H), 3.43 - 3.37 (m, 2H), 3.30 - 3.10 (m, 3H), 3.09 - 3.08 (m, 3H), 3.08 - 3.05 (m, 2H), 2.27 (s, 3H), 1.77 - 1.54 (m, 2H), 0.95 (t, J = 7.4 Hz, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 476.3.

화합물 36g-B를 화합물 36g-A 대신에 사용하여 실시예 38-B(46.6 mg)를 실시예 38-A와 유사하게 제조하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.26 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.14 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 6.89 - 6.78 (m, 2H), 4.95 (s, 2H), 4.18 (s, 1H), 3.62 -3.58 (m, 2H), 3.43 - 3.37 (m, 2H), 3.30 - 3.10 (m, 3H), 3.09 - 3.08 (m, 3H), 3.08 - 3.05 (m, 2H), 2.27 (s, 3H), 1.77 - 1.54 (m, 2H), 0.95 (t, J = 7.4 Hz, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 476.3.

실시예 39

6-아미노-N-에틸-N- 메틸 -8-옥소-2-( 프로필설폰이미도일 )-9-(p- 톨릴메틸 ) 푸린 -7-카복스아미드

N-에틸-N-메틸-카바모일 클로라이드 및 6-아미노-2-(프로필설폰이미도일)-9-(p-톨릴메틸)-7H-푸린-8-온(화합물 36g)을 N-메틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(중간체 AA) 및 6-아미노-9-벤질-2-(프로필설폰이미도일)-7H-푸린-8-온(화합물 1e) 대신에 사용하여 표제 화합물을 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. 6-아미노-N-에틸-N-메틸-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)-9-(p-톨릴메틸)푸린-7-카복스아미드(141.8 mg, 실시예 39)를 연황색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.26 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.15 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 6.89 (s, 2H), 4.95 (s, 2H), 4.24 - 4.07 (m, 1H), 3.52 - 3.35 (m, 4H), 3.10 - 2.95 (m, 3H), 2.26 (s, 3H), 1.77 - 1.55 (m, 2H), 1.24 - 1.10 (m, 3H), 0.95 (t, J = 7.4 Hz, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 446.1.

실시예 40

6-아미노-N-부틸-N- 메틸 -8-옥소-2-( 프로필설폰이미도일 )-9-(p- 톨릴메틸 ) 푸린 -7-카복스아미드

6-아미노-2-(프로필설폰이미도일)-9-(p-톨릴메틸)-7H-푸린-8-온(화합물 36g) 및 N-부틸-N-메틸-카바모일 클로라이드를 6-아미노-9-벤질-2-(프로필설폰이미도일)-7H-푸린-8-온(화합물 1e) 및 N-메틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(중간체 AA) 대신에 사용하여 표제 화합물을 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. 6-아미노-N-부틸-N-메틸-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)-9-(p-톨릴메틸)푸린-7-카복스아미드(32 mg, 실시예 40)를 백색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.28 - 7.14 (m, 4H), 6.88 (s, 2H), 4.95 (s, 2H), 4.16 (s, 1H), 3.41 - 3.36 (m, 2H), 3.10 - 2.99 (m, 3H), 2.53 - 2.51 (m, 2H), 2.27 (s, 3H), 1.71 - 1.63 (m, 2H), 1.62 - 1.51 (m, 2H), 1.42 - 1.26 (m, 2H), 0.97 - 0.74 (m, 6H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 474.3

실시예 41-A 및 실시예 41-B

6-아미노-9-[(4- 클로로페닐 ) 메틸 ]-2-[S(R)- 에틸설폰이미도일 ]-N- 메틸 -8-옥소-N-프로필-푸린-7-카복스아미드(실시예 41-A) 및 6-아미노-9-[(4-클로로페닐)메틸]-2-[S(S)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-푸린-7-카복스아미드(실시예 41-B)

단계 1: 6-아미노-9-[(4-클로로페닐)메틸]-2-에틸설판일-7H-푸린-8-온(화합물 41a)의 제조

요오도에탄 및 6-아미노-9-[(4-클로로페닐)메틸]-2-설판일-7H-푸린-8-온(화합물 34b)을 브로모프로판 및 6-아미노-9-페닐메틸-2-설판일-7H-푸린-8-온(화합물 1b) 대신에 사용하여 화합물 41a를 실시예 1, 방법 A, 단계 3과 유사하게 제조하였다. 6-아미노-9-[(4-클로로페닐)메틸]-2-에틸설판일-7H-푸린-8-온(2.5 g, 화합물 41a)을 백색 고체로 수득하였다. MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 336.

단계 2: 6-아미노-9-(4-클로로벤질)-2-에틸설핀일-7H-푸린-8-온(화합물 41b)의 제조

6-아미노-9-[(4-클로로페닐)메틸]-2-에틸설판일-7H-푸린-8-온(화합물 41a)을 6-아미노-9-벤질-2-프로필설판일-7H-푸린-8-온(화합물 1c) 대신에 사용하여 화합물 41b를 실시예 1, 방법 A, 단계 4와 유사하게 제조하였다. 6-아미노-9-(4-클로로벤질)-2-에틸설핀일-7H-푸린-8-온(1.94 g, 화합물 41b)을 백색 고체로 수득하였다. MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 352.

단계 3: 6-아미노-9-[(4-클로로페닐)메틸]-2-(에틸설폰이미도일)-7H-푸린-8-온(화합물 41c)의 제조

6-아미노-9-(4-클로로벤질)-2-에틸설핀일-7H-푸린-8-온(화합물 41b)을 6-아미노-9-벤질-2-(2-메틸설핀일)-7H-푸린-8-온(화합물 1d) 대신에 사용하여 화합물 41c를 실시예 1, 방법 A, 단계 5와 유사하게 제조하였다. 6-아미노-9-[(4-클로로페닐)메틸]-2-(에틸설폰이미도일)-7H-푸린-8-온(217 mg, 실시예 41c)을 백색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 10.61 (s, 1H), 7.42 - 7.35 (m, 4H), 6.98 (s, 2H), 4.96 (s, 2H), 4.05 (s, 1H), 3.42 - 3.37 (m, 2H), 1.16 (t, J = 7.4 Hz, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 367.0.

키랄팩 IC-3 컬럼 상에서 메탄올 5%-40% (0.05%DEA)/CO₂를 사용하는 키랄 HPLC에 의해 화합물 41c를 분리하여 화합물 41c-A(보다 빠르게 용리, 31.8 mg) 및 화합물 41c-B(보다 느리게 용리, 10 mg)를 백색 고체로 수득하였다.

화합물 41c-A: ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 10.76 (s, 1H), 7.45 - 7.33 (m, 4H), 7.01 (s, 2H), 4.96 (s, 2H), 4.03 (s, 1H), 3.40 - 3.34 (m, 2H), 1.17 (t, J = 7.4 Hz, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 367.0.

화합물 41c-B: ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 10.70 (s, 1H), 7.46 -7.28 (m, 4H), 7.01 (s, 2H), 4.96 (s, 2H), 4.03 (s, 1H), 3.44 - 3.36 (m, 2H), 1.17 (t, J = 7.4 Hz, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 367.0.

단계 4: 6-아미노-9-[(4-클로로페닐)메틸]-2-[S(R)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-푸린-7-카복스아미드(실시예 41-A) 및 6-아미노-9-[(4-클로로페닐)메틸]-2-[S(S)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-푸린-7-카복스아미드(실시예 41-B)

화합물 41c-B를 6-아미노-9-벤질-2-(프로필설폰이미도일)-7H-푸린-8-온(화합물 1e) 대신에 사용하여 실시예 41-A를 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. 6-아미노-9-[(4-클로로페닐)메틸]-2-[S(R)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-푸린-7-카복스아미드(실시예 41-A, 78 mg)를 백색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.43 - 7.41 (m, 4H), 6.90 (s, 2H), 5.00 (s, 2H), 4.19 (s, 1H), 3.46-3.39 (m, 2H), 3.39 - 3.38 (m, 2H), 3.09-2.99 (m, 3H), 1.69 - 1.52 (m, 2H), 1.19 (t, J = 7.28 Hz, 3H), 0.95 - 0.66 (m, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 466.1.

화합물 41c-A를 6-아미노-9-벤질-2-(프로필설폰이미도일)-7H-푸린-8-온(화합물 1e) 대신에 사용하여 실시예 41-B(125 mg)를 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. 6-아미노-9-[(4-클로로페닐)메틸]-2-[S(S)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-푸린-7-카복스아미드(실시예 41-B, 38 mg)를 백색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.43 - 7.41 (m, 4H), 6.90 (s, 2H), 5.00 (s, 2H), 4.20 (s, 1H), 3.46 - 3.41 (m, 2H), 3.40 - 3.39 (m, 2H), 3.10 - 3.00 (m, 3H), 1.69 - 1.50 (m, 2H), 1.24 - 1.12 (m, 3H), 0.93 - 0.73 (m, 3H). (MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 466.2.

실시예 41-B의 입체화학을 단결정 X-선 회절에 의해 결정하여 도 1에 나타냈다.

실시예 42-A 및 실시예 42-B

6-아미노-9-[(4- 클로로페닐 ) 메틸 ]-N-에틸-2[S(S)- 에틸설폰이미도일 ]-N- 메틸 -8-옥소-푸린-7-카복스아미드(실시예 42-A) 및 6-아미노-9-[(4- 클로로페닐 ) 메틸 ]-N-에틸-2-[S(R)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-푸린-7-카복스아미드(실시예 42-B)

화합물 41c-A 및 N-에틸-N-메틸-카바모일 클로라이드를 6-아미노-9-벤질-2-(프로필설폰이미도일)-7H-푸린-8-온(화합물 1e) 및 N-메틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(중간체 AA) 대신에 사용하여 실시예 42-A를 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. 6-아미노-9-[(4-클로로페닐)메틸]-N-에틸-2[S(S)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-푸린-7-카복스아미드(실시예 42-A, 40 mg)를 백색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.43 - 7.41 (m, 4H), 6.90 (s, 2H), 4.99 (s, 2H), 4.18 (s, 1H), 3.48 - 3.40 (m, 2H), 3.39 (s, 2H), 3.05 - 3.01 (m, 3H), 1.20 - 1.14 (m, 6H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 452.2.

화합물 41c-B 및 N-에틸-N-메틸-카바모일 클로라이드를 6-아미노-9-벤질-2-(프로필설폰이미도일)-7H-푸린-8-온(화합물 1e) 및 N-메틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(중간체 AA) 대신에 사용하여 실시예 42-B를 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. 6-아미노-9-[(4-클로로페닐)메틸]-N-에틸-2-[S(R)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-푸린-7-카복스아미드(실시예 42-B, 38 mg)를 백색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.43 - 7.41 (m, 4H), 6.91 (s, 2H), 4.98 (s, 2H), 4.19 (s, 1H), 3.48 - 3.40 (m, 2H), 3.39 (s, 2H), 3.09 - 2.97 (m, 3H), 1.23 - 1.11 (m, 6H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 452.2.

실시예 42-A의 입체화학을 단결정 X-선 회절에 의해 결정하여 도 2에 나타냈다.

실시예 43-A 및 실시예 43-B

6-아미노-2-[S(R)- 에틸설폰이미도일 ]-N- 메틸 -8-옥소-N-프로필-9-(p- 톨릴메틸 )푸린-7-카복스아미드(실시예 43-A) 및 6-아미노-2-[S(S)- 에틸설폰이미도일 ]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-9-(p-톨릴메틸)푸린-7-카복스아미드(실시예 43-B)

단계 1: 4-아미노-2-옥소-3-(p-톨릴메틸)-1H-이미다졸-5-카보니트릴(화합물 43a)의 제조

4-메틸벤질 이소시아네이트를 벤질 이소시아네이트 대신에 사용하여 화합물 43a를 실시예 1, 방법 A, 단계 1과 유사하게 제조하였다. 4-아미노-2-옥소-3-(p-톨릴메틸)-1H-이미다졸-5-카보니트릴(26.6 g, 화합물 43a)을 회색 고체로 수득하고 후속 단계에 추가적 정제 없이 직접 사용하였다. MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 229.2.

단계 2: 6-아미노-9-(p-톨릴메틸)-2-설판일-7H-푸린-8-온(화합물 43b)의 제조

4-아미노-2-옥소-3-(p-톨릴메틸)-1H-이미다졸-5-카보니트릴(화합물 43a)을 4-아미노-3-벤질-2-옥소-1H-이미다졸-5-카보니트릴(화합물 1a) 대신에 사용하여 화합물 43b를 실시예 1, 방법 A, 단계 2와 유사하게 제조하였다. 6-아미노-9-(p-톨릴메틸)-2-설판일-7H-푸린-8-온(20.0 g, 화합물 43b)을 황색 고체로 수득하였다. MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 288.

단계 3: 6-아미노-2-에틸설판일-9-(p-톨릴메틸)-7H-푸린-8-온(화합물 43c)의 제조

6-아미노-9-(p-톨릴메틸)-2-설판일-7H-푸린-8-온(화합물 43b) 및 요오도에탄을 6-아미노-9-벤질-2-설판일-7H-푸린-8-온(화합물 1b) 및 브로모프로판 대신에 사용하여 화합물 43c를 실시예 1, 방법 A, 단계 3과 유사하게 제조하였다. 6-아미노-2-에틸설판일-9-(p-톨릴메틸)-7H-푸린-8-온(13 g, 화합물 43c)을 황색 고체로 수득하였다. MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 316.

단계 4: 6-아미노-2-에틸설핀일-9-(p-톨릴메틸)-7H-푸린-8-온(화합물 43d)의 제조

6-아미노-2-에틸설판일-9-(p-톨릴메틸)-7H-푸린-8-온(화합물 43c)을 6-아미노-9-벤질-2-메틸설판일-7H-푸린-8-온(화합물 1c) 대신에 사용하여 화합물 43d를 실시예 1, 방법 A, 단계 4와 유사하게 제조하였다. 6-아미노-2-에틸설핀일-9-(p-톨릴메틸)-7H-푸린-8-온(3.5 g, 화합물 43d)을 황색 고체로 수득하였다. MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 332.

단계 5: 6-아미노-2-(에틸설폰이미도일)-9-(p-톨릴메틸)-7H-푸린-8-온(화합물 43e)의 제조

6-아미노-2-에틸설핀일-9-(p-톨릴메틸)-7H-푸린-8-온(화합물 43d)을 6-아미노-9-벤질-2-메틸설핀일-7H-푸린-8-온(화합물 1d) 대신에 사용하여 화합물 43e를 실시예 1, 방법 A, 단계 5와 유사하게 제조하였다. 6-아미노-2-(에틸설폰이미도일)-9-(p-톨릴메틸)-7H-푸린-8-온(530 mg, 화합물 43e)을 황색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 10.53 (s, 1H), 7.24 (d, J = 8.03 Hz, 2H), 7.13 (d, J = 8.03 Hz, 2H), 6.94 (br. s., 2H), 4.91 (s, 2H), 4.03 (s, 1H), 3.36 - 3.41 (m, 2H), 2.26 (s, 3H), 1.18 (t, J = 7.28 Hz, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 347.

키랄팩 AD-3 컬럼 상에서 메탄올 5%-40% (0.05%DEA)/CO₂를 사용하는 키랄 HPLC에 의해 화합물 43e를 분리하여 화합물 43e-A(보다 빠르게 용리, 56.8 mg) 및 화합물 43e-B(보다 느리게 용리, 56.7 mg)를 백색 고체로 수득하였다.

화합물 43e-A: ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 10.52 (br. s., 1H), 7.23 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.13 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 6.94 (br. s., 2H), 4.90 (s, 2H), 4.03 (s, 1H), 3.42 - 3.33 (m, 2H), 2.25 (s, 3H), 1.17 (t, J = 7.3 Hz, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 347.

화합물 43e-B: ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 10.56 (br. s., 1H), 7.23 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.13 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 6.95 (br. s., 2H), 4.90 (s, 2H) 4.03 (s, 1H), 3.44 - 3.29 (m, 2H), 2.25 (s, 3H), 1.17 (t, J = 7.3 Hz, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 347.

단계 6: 6-아미노-2-[S(R)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-9-(p-톨릴메틸)푸린-7-카복스아미드(실시예 43-A) 및 6-아미노-2-[S(S)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-9-(p-톨릴메틸)푸린-7-카복스아미드(실시예 43-B)의 제조

화합물 43e-A를 6-아미노-9-벤질-2-(프로필설폰이미도일)-7H-푸린-8-온(화합물 1e) 대신에 사용하여 실시예 43-A를 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. 6-아미노-2-[S(R)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-9-(p-톨릴메틸)푸린-7-카복스아미드(실시예 43-A, 58.1 mg, 보다 빠르게 용리, 키랄팩 AD-3 컬럼 상에서 이소프로판올 5% 내지 40% (0.05%DEA)/CO₂)를 백색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.28 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.15 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 6.88 (br. s., 2H), 5.03 - 4.87 (m, 2H), 4.19 (s, 1H), 3.61 - 3.36 (m, 4H), 3.11 - 2.96 (m, 3H), 2.26 (s, 3H), 1.72 - 1.45 (m, 2H), 1.20 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.97 - 0.65 (m, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 446.

화합물 43e-B를 6-아미노-9-벤질-2-(프로필설폰이미도일)-7H-푸린-8-온(화합물 1e) 대신에 사용하여 실시예 43-B를 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. 6-아미노-2-[S(S)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-9-(p-톨릴메틸)푸린-7-카복스아미드(실시예 43-B, 40.1 mg, 보다 느리게 용리, 키랄팩 AD-3 컬럼 상에서 이소프로판올 5% 내지 40% (0.05%DEA)/CO₂)를 백색 고체로 수득하였다: ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.28 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.15 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 6.89 (br. s., 2H), 5.03 - 4.86 (m, 2H), 4.19 (s, 1H), 3.49 - 3.37 (m, 4H), 3.08 - 3.00 (m, 3H), 2.27 (s, 3H), 1.70 - 1.48 (m, 2H), 1.20 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.95 - 0.71 (m, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 446.3.

실시예 43-B의 입체화학을 단결정 X-선 회절에 의해 결정하여 도 3에 나타냈다.

실시예 44-A 및 실시예 44-B

6-아미노-N-에틸-2[S(S)- 에틸설폰이미도일 ]-N- 메틸 -8-옥소-9-(p- 톨릴메틸 ) 푸린 -7-카복스아미드(실시예 44-A) 및 6-아미노-N-에틸-2-[S(R)- 에틸설폰이미도 일]-N-메틸-8-옥소-9-(p-톨릴메틸)푸린-7-카복스아미드(실시예 44-B)

화합물 43e-B 및 N-에틸-N-메틸-카바모일 클로라이드를 6-아미노-9-벤질-2-(프로필설폰이미도일)-7H-푸린-8-온(화합물 1e) 및 N-메틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(중간체 AA) 대신에 사용하여 실시예 44-A를 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. 6-아미노-N-에틸-2[S(S)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-9-(p-톨릴메틸)푸린-7-카복스아미드(실시예 44-A, 73.1 mg)를 백색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.28 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.15 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 6.90 (br. s., 2H), 4.95 (s, 2H), 4.19 (br. s., 1H), 3.48 - 3.39 (m, 4H), 3.06 - 3.00 (m, 3H), 2.27 (s, 3H), 1.29 - 1.04 (m, 6H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 432.

화합물 43e-A 및 N-에틸-N-메틸-카바모일 클로라이드를 6-아미노-9-벤질-2-(프로필설폰이미도일)-7H-푸린-8-온(화합물 1e) 및 N-메틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(중간체 AA) 대신에 사용하여 실시예 44-B를 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. 6-아미노-N-에틸-2-[S(R)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-9-(p-톨릴메틸)푸린-7-카복스아미드(실시예 44-B, 46.7 mg)를 백색 고체로 수득하였다: ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.28 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.15 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 6.90 (br. s., 2H), 4.95 (s, 2H), 4.19 (br. s., 1H), 3.50 - 3.39 (m, 4H), 3.10 - 2.96 (m, 3H), 2.27 (s, 3H), 1.27 - 1.10 (m, 6H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 432.

실시예 45-A 및 실시예 45-B

6-아미노-2-[ S(R)에틸설폰이미도일 ]-9-[(4- 플루오로페닐 ) 메틸 ]-N- 메틸 -8-옥소-N-프로필-푸린-7-카복스아미드 및 6-아미노-2-[ S(S)에틸설폰이미도일 ]-9-[(4- 플루오로페닐 )메틸]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-푸린-7-카복스아미드

단계 1: 4-아미노-3-[(4-플루오로페닐)메틸]-2-옥소-1H-이미다졸-5-카보니트릴(화합물 45a)의 제조

4-플루오로벤질 이소시아네이트를 벤질 이소시아네이트 대신에 사용하여 화합물 45a를 실시예 1, 방법 A, 단계 1과 유사하게 제조하였다. 4-아미노-3-[(4-플루오로페닐)메틸]-2-옥소-1H-이미다졸-5-카보니트릴(48 g, 화합물 45a)을 연황색 고체로 수득하고 후속 단계에 추가적 정제 없이 직접 사용하였다. MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 233.

단계 2: 6-아미노-9-[(4-플루오로페닐)메틸]-2-설판일-7H-푸린-8-온(화합물 45b)의 제조

4-아미노-3-[(4-플루오로페닐)메틸]-2-옥소-1H-이미다졸-5-카보니트릴(화합물 45a)을 4-아미노-3-페닐메틸-2-옥소-1H-이미다졸-5-카보니트릴(화합물 1a) 대신에 사용하여 화합물 45b를 실시예 1, 방법 A, 단계 2와 유사하게 제조하였다. 6-아미노-9-[(4-플루오로페닐)메틸]-2-설판일-7H-푸린-8-온(32.0 g, 화합물 45b)을 황색 고체로 수득하였다. MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 292.

단계 3: 6-아미노-2-에틸설판일-9-[(4-플루오로페닐)메틸]-7H-푸린-8-온(화합물 45c)의 제조

6-아미노-9-[(4-플루오로페닐)메틸]-2-설판일-7H-푸린-8-온(화합물 45b) 및 요오도에탄을 6-아미노-9-벤질-2-설판일-7H-푸린-8-온(화합물 1b) 및 브로모프로판 대신에 사용하여 화합물 45c를 실시예 1, 방법 A, 단계 3과 유사하게 제조하였다. 6-아미노-2-에틸설판일-9-[(4-플루오로페닐)메틸]-7H-푸린-8-온(5.6 g, 화합물 45c)을 황색 고체로 수득하였다. MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 320.

단계 5: 6-아미노-2-에틸설핀일-9-[(4-플루오로페닐)메틸]-7H-푸린-8-온(화합물 45d)의 제조

6-아미노-2-에틸설판일-9-[(4-플루오로페닐)메틸]-7H-푸린-8-온(화합물 45c)을 6-아미노-9-벤질-2-프로필설판일-7H-푸린-8-온(화합물 1c) 대신에 사용하여 화합물 45d를 실시예 1, 방법 A, 단계 4와 유사하게 제조하였다. 6-아미노-2-에틸설핀일-9-[(4-플루오로페닐)메틸]-7H-푸린-8-온(4.8 g, 화합물 45d)을 황색 고체로 수득하였다. MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 332.

단계 6: 6-아미노-2-(에틸설폰이미도일)-9-[(4-플루오로페닐)메틸]-7H-푸린-8-온(화합물 45e)의 제조

6-아미노-2-에틸설핀일-9-[(4-플루오로페닐)메틸]-7H-푸린-8-온(화합물 45d)을 6-아미노-9-벤질-2-프로필설핀일-7H-푸린-8-온(화합물 1d) 대신에 사용하여 화합물 45e를 실시예 1, 방법 A, 단계 5와 유사하게 제조하였다. 6-아미노-2-(에틸설폰이미도일)-9-[(4-플루오로페닐)메틸]-7H-푸린-8-온(2.9 g, 화합물 45e)을 황색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 10.57 (br. s., 1H), 7.40 (dd, J = 8.5, 5.5 Hz, 2H), 7.16 (t, J = 8.9 Hz, 2H), 6.97 (br. s., 2H), 4.94 (s, 2H), 4.07 (s, 1H), 3.43 - 3.36 (m, 2H), 1.17 (t, J = 7.4 Hz, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 351.

키랄팩 AD-3 컬럼 상에서 메탄올 5%-40% (0.05%DEA)/CO₂를 사용하는 키랄 HPLC로 화합물 45e를 분리하여 화합물 45e-A(보다 빠르게 용리, 85.4 mg) 및 화합물 45e-B(보다 느리게 용리, 36.4 mg)를 백색 고체로 수득하였다.

화합물 45e-A: ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 10.53 (br. s., 1H), 7.41 (dd, J = 8.5, 5.5 Hz, 2H), 7.17 (t, J = 8.9 Hz, 2H), 6.98 (br. s., 2H), 4.95 (s, 2H), 4.07 (s, 1H), 3.45 - 3.36 (m, 2H), 1.17 (t, J = 7.3 Hz, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 351.

화합물 45e-B: ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 10.53 (br. s., 1H), 7.41 (dd, J = 8.5, 5.5 Hz, 2H), 7.17 (t, J = 8.9 Hz, 2H), 6.98 (br. s., 2H), 4.95 (s, 2H), 4.07 (s, 1H), 3.44 - 3.37 (m, 2H) 1.17 (t, J = 7.3 Hz, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 351.

단계 7: 6-아미노-2-(에틸설폰이미도일)-9-[(4-플루오로페닐)메틸]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-푸린-7-카복스아미드(실시예 45), 6-아미노-2-[S(R)에틸설폰이미도일]-9-[(4-플루오로페닐)메틸]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-푸린-7-카복스아미드 및 6-아미노-2-[S(S)에틸설폰이미도일]-9-[(4-플루오로페닐)메틸]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-푸린-7-카복스아미드(실시예 45-A 및 실시예 45-B)의 제조

6-아미노-2-(에틸설폰이미도일)-9-[(4-플루오로페닐)메틸]-7H-푸린-8-온(화합물 45e)을 6-아미노-9-벤질-2-(프로필설폰이미도일)-7H-푸린-8-온(화합물 1e) 대신에 사용하여 실시예 45를 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. 6-아미노-2-(에틸설폰이미도일)-9-[(4-플루오로페닐)메틸]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-푸린-7-카복스아미드(162.4 mg, 실시예 45)를 백색 고체로 수득하였다.

키랄팩 AD-3 컬럼 상에서 메탄올 5%-40% (0.05%DEA)/CO₂를 사용하는 키랄 HPLC로 실시예 45의 화합물을 분리하여 실시예 45-A(보다 빠르게 용리, 85.3 mg) 및 실시예 45-B(보다 느리게 용리, 52 mg)를 백색 고체로 수득하였다.

실시예 45-A: ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.53 - 7.38 (m, 2H), 7.18 (t, J = 8.9 Hz, 2H), 6.90 (br. s., 2H), 4.99 (s, 2H), 4.21 (s, 1H), 3.48 - 3.37 (m, 4H), 3.10 - 3.01 (m, 3H), 1.69 - 1.49 (m, 2H), 1.25 - 1.14 (m, 3H), 0.94 - 0.72 (m, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 450.

실시예 45-B: ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.54 - 7.38 (m, 2H), 7.18 (t, J = 8.9 Hz, 2H), 7.01 - 6.72 (m, 2H), 4.99 (s, 2H), 4.21 (s, 1H), 3.46 - 3.38 (m, 4H), 3.10 - 3.01 (m, 3H), 1.76 - 1.50 (m, 2H), 1.25 - 1.16 (m, 3H), 0.99 - 0.69 (m, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 450.

실시예 46-A 및 실시예 46-B

6-아미노-N-에틸-2-( 에틸설폰이미도일 )-9-[(4- 플루오로페닐 ) 메틸 ]-N- 메틸 -8-옥소-푸린-7-카복스아미드(실시예 46), 6-아미노-N-에틸-2-[S(S)-( 에틸설폰이미도일 )]-9-[(4-플루오로페닐)메틸]-N-메틸-8-옥소-푸린-7-카복스아미드 및 6-아미노-N-에틸-2-[S(R)-(에틸설폰이미도일)]-9-[(4-플루오로페닐)메틸]-N-메틸-8-옥소-푸린-7-카복스아미드(실시예 46-A 및 실시예 46-B)

6-아미노-2-(에틸설폰이미도일)-9-[(4-플루오로페닐)메틸]-7H-푸린-8-온(화합물 45e) 및 N-에틸-N-메틸 카바모일 클로라이드를 6-아미노-9-벤질-2-(프로필설폰이미도일)-7H-푸린-8-온(화합물 1e) 및 N-메틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(중간체 AA) 대신에 사용하여 실시예 46을 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. 6-아미노-N-에틸-2-(에틸설폰이미도일)-9-[(4-플루오로페닐)메틸]-N-메틸-8-옥소-푸린-7-카복스아미드(51 mg, 실시예 46)를 백색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.46 - 7.43 (m, 2H), 7.20-7.15 (m, 2H), 6.90 (br. s., 2H), 4.98 (s, 2H), 4.18 (s, 1H), 3.47 - 3.32 (m, 4H), 3.05 - 3.01 (m, 3H), 1.21 - 1.14 (m, 6H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 436.

키랄팩 AD-3 컬럼 상에서 메탄올 5%-40% (0.05%DEA)/CO₂를 사용하는 키랄 HPLC에 의해 실시예 46의 화합물을 분리하여 실시예 46-A(보다 빠르게 용리, 72 mg) 및 실시예 46-B(보다 느리게 용리, 45 mg)를 백색 고체로 수득하였다.

실시예 46-A: ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.46 - 7.43 (m, 2H), 7.20-7.16 (m, 2H), 6.90 (br. s., 2H), 4.98 (s, 2H), 4.18 (s, 1H), 3.47 - 3.32 (m, 4H), 3.05 - 3.01 (m, 3H), 1.21-1.14 (m, 6H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 436.

실시예 46-B: ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.46 - 7.43 (m, 2H), 7.20-7.14 (m, 2H), 6.92 (br. s., 2H), 4.98 (s, 2H), 4.20 (br. s., 1H), 3.47 - 3.32 (m, 4H), 3.05 - 3.01 (m, 3H), 1.23 - 1.19 (m, 6H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 436.

실시예 47-A 및 실시예 47-B

6-아미노-9-[(4- 브로모페닐 ) 메틸 ]-2-( 에틸설폰이미도일 )-N- 메틸 -8-옥소-N-프로필-푸린-7-카복스아미드(실시예 47), 6-아미노-2-[S(R)- 에틸설폰이미도일 ]-9-[(4-브로모페닐)메틸]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-푸린-7-카복스아미드 및 6-아미노-2-[S(S)-에틸설폰이미도일]-9-[(4-브로모페닐)메틸]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-푸린-7-카복스아미드

단계 1: 4-아미노-3-[(4-브로모페닐)메틸]-2-옥소-1H-이미다졸-5-카보니트릴(화합물 47a)의 제조

4-브로모벤질 이소시아네이트를 벤질 이소시아네이트 대신에 사용하여 화합물 47a를 실시예 1, 방법 A, 단계 1과 유사하게 제조하였다. 4-아미노-3-[(4-브로모페닐)메틸]-2-옥소-1H-이미다졸-5-카보니트릴(500 mg, 화합물 47a)을 연황색 고체로 수득하고 후속 단계에 추가적 정제 없이 직접 사용하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 9.94 (S, 1H), 7.55-7.53 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.20-7.18 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 6.52 (br. s., 2H), 4.74 (s, 2H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 293.

단계 2: 6-아미노-9-[(4-브로모페닐)메틸]-2-설판일-7H-푸린-8-온(화합물 47b)의 제조

4-아미노-3-[(4-브로모페닐)메틸]-2-옥소-1H-이미다졸-5-카보니트릴(화합물 47a)을 4-아미노-3-페닐메틸-2-옥소-1H-이미다졸-5-카보니트릴(화합물 1a) 대신에 사용하여 화합물 47b를 실시예 1, 방법 A, 단계 2와 유사하게 제조하였다. 6-아미노-9-[(4-브로모페닐)메틸]-2-설판일-7H-푸린-8-온(300 mg, 화합물 47b)을 황색 고체로 수득하였다. MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 352.

단계 3: 6-아미노-2-에틸설판일-9-[(4-브로모페닐)메틸]-7H-푸린-8-온(화합물 47c)

6-아미노-9-[(4-브로모페닐)메틸]-2-설판일-7H-푸린-8-온(화합물 45b) 및 요오도에탄을 6-아미노-9-벤질-2-설판일-7H-푸린-8-온(화합물 1b) 및 브로모프로판 대신에 사용하여 화합물 47c를 실시예 1, 방법 A, 단계 3과 유사하게 제조하였다. 6-아미노-2-에틸설판일-9-[(4-브로모페닐)메틸]-7H-푸린-8-온(5.6 g, 화합물 47c)을 황색 고체로 수득하였다. MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 380.

단계 4: 6-아미노-9-[(4-브로모페닐)메틸]-2-에틸설핀일-7H-푸린-8-온(화합물 47d)의 제조

6-아미노-9-[(4-브로모페닐)메틸]-2-에틸설판일-7H-푸린-8-온(화합물 47c)을 6-아미노-9-벤질-2-(2-프로필설판일)-7H-푸린-8-온(화합물 1c) 대신에 사용하여 화합물 47d를 실시예 1, 방법 B, 단계 6과 유사하게 제조하였다. 6-아미노-9-[(4-브로모페닐)메틸]-2-에틸설핀일-7H-푸린-8-온(3.2 g, 화합물 47d)을 백색 고체로 수득하였다. MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 396.

단계 5: 6-아미노-9-[(4-브로모페닐)메틸]-2-(에틸설폰이미도일)-7H-푸린-8-온(화합물 47e)의 제조

6-아미노-9-[(4-브로모페닐)메틸]-2-에틸설핀일-7H-푸린-8-온(화합물 47d)을 6-아미노-9-벤질-2-프로필설핀일-7H-푸린-8-온(화합물 1d) 대신에 사용하여 화합물 47e를 실시예 1, 방법 B, 단계 7과 유사하게 제조하였다. 6-아미노-9-[(4-브로모페닐)메틸]-2-(에틸설폰이미도일)-7H-푸린-8-온(4.0 g, 화합물 47e)을 백색 고체로 수득하였다. MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 411.

키랄팩 AD-3 컬럼 상에서 메탄올 5%-40% (0.05%DEA)/CO₂를 사용하는 키랄 HPLC에 의해 화합물 47e를 분리하여 화합물 47e-A(보다 빠르게 용리, 112 mg) 및 화합물 47e-B(보다 느리게 용리, 99 mg)를 백색 고체로 수득하였다.

화합물 47e-A: ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 10.58 (br. s., 1H), 7.52-7.54 (d, J = 8.0, 2H), 7.31-7.29 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 6.54 (br. s., 2H), 4.93 (s, 2H), 4.05 (s, 1H), 3.42 - 3.31 (m, 2H), 1.15 (t, J = 7.3 Hz, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 411.

화합물 47e-B: ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 10.58 (br. s., 1H), 7.54-7.52 (d, J = 8.0, 2H), 7.31-7.29 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 6.98 (br. s., 2H), 4.93 (s, 2H), 4.06 (s, 1H), 3.40 - 3.37 (m, 2H), 1.15 (t, J = 7.3 Hz, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 411.

단계 6: 6-아미노-9-[(4-브로모페닐)메틸]-2-(에틸설폰이미도일)-N-메틸-8-옥소-N-프로필-푸린-7-카복스아미드(실시예 47), 6-아미노-9-[(4-브로모페닐)메틸]-2-[S(R)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-푸린-7-카복스아미드 및 6-아미노-9-[(4-브로모페닐)메틸]-2-[S(S)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-푸린-7-카복스아미드(실시예 47-A 및 실시예 47-B)

6-아미노-9-[(4-브로모페닐)메틸]-2-(에틸설폰이미도일)-7H-푸린-8-온(화합물 47e)을 6-아미노-9-벤질-2-(프로필설폰이미도일)-7H-푸린-8-온(화합물 1e) 대신에 사용하여 실시예 47을 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. 6-아미노-9-[(4-브로모페닐)메틸]-2-(에틸설폰이미도일)-N-메틸-8-옥소-N-프로필-푸린-7-카복스아미드(570 mg, 실시예 47)를 백색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.56 - 7.53 (m, 2H), 7.36-7.34 (m, 2H), 6.92 (br. s., 2H), 4.97 (s, 2H), 4.18 (s, 1H), 3.45 - 3.38 (m, 4H), 3.05 - 3.02 (m, 3H), 1.65-1.56 (m, 2H), 1.19 (t, J = 8.0 Hz, 3H), 0.93-0.75 (m, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 510.

키랄팩 AD-3 컬럼 상에서 메탄올 5%-40% (0.05%DEA)/CO₂를 사용하는 키랄 HPLC에 의해 실시예 47의 화합물을 분리하여 실시예 47-A(보다 빠르게 용리, 260 mg) 및 실시예 47-B(보다 느리게 용리, 266 mg)를 백색 고체로 수득하였다.

실시예 47-A: ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.56 - 7.54 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.36-7.33 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 6.90 (br. s., 2H), 4.97 (s, 2H), 4.21 (s, 1H), 3.46 - 3.41 (m, 4H), 3.05 - 3.02 (m, 3H),1.65-1.54 (m, 2H), 1.24-1.16 (m, 3H), 0.93-0.75 (m, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 510.

실시예 47-B: ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.54 - 7.53 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.36-7.33 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 6.90 (br. s., 2H), 4.97 (s, 2H), 4.21 (s, 1H), 3.46 - 3.41 (m, 4H), 3.06 - 3.02 (m, 3H), 1.65-1.54 (m, 2H), 1.20-1.16 (m, 3H), 0.93-0.75 (m, 3H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 510.

실시예 48-A 및 실시예 48-B

6-아미노-9-[(4- 브로모페닐 ) 메틸 ]-N-에틸-2-( 에틸설폰이미도일 )-N- 메틸 -8-옥소-푸린-7-카복스아미드(실시예 48), 6-아미노-9-[(4- 브로모페닐 ) 메틸 ]-N-에틸-2-[S(S)-(에틸설폰이미도일)]-N-메틸-8-옥소-푸린-7-카복스아미드 및 6-아미노-9-[(4-브로모페닐)메틸]-N-에틸-2-[S(R)-(에틸설폰이미도일)]-N-메틸-8-옥소-푸린-7-카복스아미드(실시예 48-A 및 실시예 48-B)

6-아미노-9-[(4-브로모페닐)메틸]-2-(에틸설폰이미도일)-7H-푸린-8-온(화합물 47e) 및 N-에틸-N-메틸-카바모일 클로라이드를 6-아미노-9-벤질-2-(프로필설폰이미도일)-7H-푸린-8-온(화합물 1e) 및 N-메틸-N-프로필-카바모일 클로라이드(중간체 AA) 대신에 사용하여 실시예 48을 실시예 1, 방법 A, 단계 6과 유사하게 제조하였다. 6-아미노-9-[(4-브로모페닐)메틸]-2-(에틸설폰이미도일)-N-메틸-8-옥소-N-프로필-푸린-7-카복스아미드(469 mg, 실시예 48)를 백색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.56 - 7.54 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.36-7.34 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 6.98 (br. s., 2H), 4.97 (s, 2H), 3.53 - 3.46 (m, 4H), 3.05 - 3.01 (m, 3H), 1.22-1.16 (m, 6H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 496.

키랄팩 AD-3 컬럼 상에서 메탄올 5%-40% (0.05%DEA)/CO₂를 사용하는 키랄 HPLC에 의해 실시예 48의 화합물을 분리하여 실시예 48-A(보다 빠르게 용리, 198 mg) 및 실시예 48-B(보다 느리게 용리, 202 mg)를 백색 고체로 수득하였다.

실시예 48-A: ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.56 - 7.54 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.36-7.34 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 6.92 (br. s., 2H), 4.97 (s, 2H), 4.19 - 4.18 (m, 1H), 3.46 - 3.41 (m, 4H), 3.05 - 3.01 (m, 3H), 1.20-1.14 (m, 6H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 496.

실시예 48-B: ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm: 7.56 - 7.54 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.36-7.34 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 6.92 (br. s., 2H), 4.97 (s, 2H), 4.24 (br. s., 1H), 3.58 - 3.41 (m, 4H), 3.05 - 3.01 (m, 3H), 1.26-1.01 (m, 6H). MS obsd. (ESI⁺) [(M+H)⁺]: 496.

실시예 49

HEK293 - hTLR -7 분석에서 화합물 및 실시예의 활성

HEK293 - 블루 - hTLR -7 세포 분석

안정한 HEK293-블루-hTLR-7 세포주를 인비보젠(InvivoGen)(카탈로그 번호: hkb-htlr7, 미국 캘리포니아주 샌디에고 소재)으로부터 구입하였다. NF-κB의 활성화를 모니터링함으로써 인간 TLR7의 자극을 연구하도록 이들 세포를 설계하였다. SEAP(분비된 배아 알칼리성 포스파타제) 리포터 유전자를 NF-κB 및 AP-1-결합 부위에 융합된 IFN-β 최소 프로모터의 제어 하에 두었다. TLR7 리간드로 HEK-블루 hTLR7 세포를 자극하여 NF-κB 및 AP-1을 활성화시킴으로써 SEAP를 유도하였다. 따라서, 인간 TLR7을 20시간 동안 자극하여 NF-κB 프로모터에 의해 리포터 발현을 조절하였다. 세포 배양 상청액 SEAP 리포터 활성을 퀀티-블루(QUANTI-Blue, 상표) 키트(카탈로그 번호: rep-qb1, 인비보젠, 미국 캘리포니아주 샌디에고 소재)를 사용하여 640 ㎚의 파장에서 알칼리성 포스파타제의 존재 하에 자색 또는 청색으로 변하는 검출 매질에서 측정하였다.

HEK293-블루-hTLR7 세포를 250,000 내지 450,000 세포/㎖의 밀도에서 180 ㎕의 부피로 96-웰 플레이트에서 4.5 g/L 글루코스, 50 U/㎖ 페니실린, 50 ㎎/㎖ 스트렙토마이신, 100 ㎎/㎖ 노르모신(Normocin), 2 mM L-글루타민, 10%(v/v) 열-불활성화된 소 태아 혈청을 함유하는 둘벡코 변형 이글 매질(Dulbecco's Modified Eagle's medium)(DMEM)에서 24시간 동안 항온처리하였다. 이어서, HEK293-블루-hTLR-7 세포를 최종 DMSO가 1%로 존재하도록 연쇄 희석으로 20 ㎕의 시험 화합물을 첨가하여 37℃에서 CO₂ 항온기에서 20시간 동안 항온처리하였다. 이어서, 각각의 웰로부터의 20 ㎕의 상청액을 180 ㎕ 퀀티-블루 기질 용액으로 37℃에서 2시간 동안 항온처리하였고, 분광광도계를 사용하여 620 내지 655 ㎚에서 흡광도를 판독하였다. TLR7 활성화가 다운스트림 NF-κB 활성화를 일으키는 신호전달 경로를 광범위하게 수용하였고, 따라서 유사한 리포터 분석을 또한 TLR7 작용제 평가를 위해 광범위하게 사용하였다(문헌[Tsuneyasu Kaisho and Takashi Tanaka, Trends in Immunology, Volume 29, Issue 7, July 2008, Pages 329.sci; Hiroaki Hemmi et al, Nature Immunology 3, 196 - 200 (2002)]).

본 발명의 화합물 및 실시예를 본원에 기재된 바와 같이 이들의 TLR7 작용 활성에 대해 HEK293-hTLR-7 분석에서 시험하였고, 결과를 하기 표 1에 제시하였다. 실시예의 전구약물은 약 2.1 내지 약 1000 μM의 EC₅₀을 갖는 것으로 밝혀졌고, 화합물의 활성 형태는 0.2 μM 미만의 EC₅₀을 갖는 것으로 밝혀졌다. 계산된 EC_{50(전구약물)}/EC_{50(활성 형태)}의 비는 32 내지 약 7600 범위였다.

실시예 50

화학식 I의 화합물의 전구약물의 대사

전구약물 또는 화학식 I의 화합물의 이의 상응하는 활성 형태로의 대사 전환을 평가하기 위해 연구를 수행하였다. 화학식 I의 화합물은 전구약물로서 제공되는 경우 체내에서 본 발명의 활성 화합물 또는 다른 화합물로 대사될 수 있다. 인간 간 마이크로솜이 흔히 동물 또는 인간의 체내에서 전구약물의 대사 전환의 정도를 평가하는 데 사용된다.

재료

β-니코틴아미드 아데닌 다이뉴클레오티드 포스페이트(NADP)를 포함하는 NADPH 보조인자 시스템, 이소시트르산 및 이소시트르산 탈수소 효소를 시그마-알드리치 컴패니(Sigma-Aldrich Co., 미국 미주리주 세인트 루이스 소재)로부터 구매하였다. 인간 간 마이크로솜(카탈로그 번호: 452117, 로트 번호: 38290)을 코닝(Corning, 미국 매사추세츠주 우번 소재)으로부터 입수하였다. 마우스 간 마이크로솜(카탈로그 번호: M1000, 로트 번호: 1310028)을 제노테크(Xenotech)로부터 입수하였다.

화합물의 작업 용액 및 다른 용액

화합물을 DMSO에 용해시켜 10 mM 스톡 용액을 제조하였다. 10 μL의 스톡 용액을 아세토니트릴(990 μL)로 희석하여 100 μM 작업 용액을 수득하였다.

배양

마이크로솜을 시험 화합물과 함께 10분 동안 37℃에서 pH 7.4의 100 mM 인산 칼륨 완충제에서 예비배양하였다. 반응을 NADPH 재생 시스템을 첨가함으로써 개시하여 200 μL의 최종 배양 부피를 제공하고 수욕에서 37℃에서 진탕하였다. 배양 혼합물은 간 마이크로솜(0.5 mg 마이크로솜 단백질/mL), 기질(1.0 μM), NADP(1 mM), 이소시트르산 탈수소 효소(1 유닛/mL), 이소시트르산(6 mM)으로 구성되었다.

분석용 샘플의 제조

30분에서, 반응 생성물을, 600 μL의 찬 아세토니트릴(내부 표준으로서 100 ng/mL 톨부타미드(tolbutamide) 및 100 ng/mL 라베탈롤(labetalol)을 포함함)을 첨가함으로써 켄칭하였다. 샘플을 4000 rpm에서 20분 동안 원심분리시키고, 생성된 상청액을 LC-MS/MS 분석하였다.

보정 곡선용 샘플을 하기와 같이 제조하였다. 100 μL/웰의 간 마이크로솜 및 98 μL/웰의 NADPH 재생 시스템 용액을 96-웰 플레이트에 나누어 주었다. 먼저 600 μL의 켄칭 용액을 첨가한 후에, 2 μL의 표준 곡선 및 QC 작업 용액을 첨가하였다.

생분석

화합물을 API4000 LC-MC/MC 기기 상에서 ESI-포지티브 MRM 모드로 정량화하였다.

연구는 인간 간 마이크로솜의 존재 하에 전구약물(1 μM), 실시예 1, 실시예 1-A, 실시예 1-B, 실시예 2, 실시예 2-A, 실시예 2-B, 실시예 3, 실시예 4, 실시예 5, 실시예 6, 실시예 7, 실시예 8, 실시예 9, 실시예 10, 실시예 11, 실시예 12, 실시예 13, 실시예 14, 실시예 15, 실시예 16, 실시예 17, 실시예 21, 실시예 22, 실시예 23, 실시예 25, 실시예 26, 실시예 27, 실시예 28실시예 29, 실시예 30, 실시예 31, 실시예 32, 실시예 33, 실시예 34-A, 실시예 34-B, 실시예 36-A, 실시예 36-B, 실시예 37-A, 실시예 37-B, 실시예 38-A, 실시예 38-B, 실시예 39, 실시예 40, 실시예 41, 실시예 41-A, 실시예 41-B, 실시예 42, 실시예 42-A, 실시예 42-B, 실시예 43, 실시예 43-A, 실시예 43-B, 실시예 44, 실시예 44-A, 실시예 44-B, 실시예 45-A, 실시예 46-A, 실시예 46-B, 실시예 47-A, 실시예 47-B, 실시예 48-A 및 실시예 48-B의 상응하는 활성 형태, 화합물 1e, 화합물 1e-A, 화합물 1e-B, 화합물 34e-A, 화합물 34e-B, 화합물 36g-A, 화합물 36g-B, 화합물 36g, 화합물 41c, 화합물 41c-B, 화합물 41c-A, 화합물 43e, 화합물 43e-A, 화합물 43e-B, 화합물 45e-A, 화합물 45e-B, 화합물 47e-A 및 화합물 47e-B으로의 대사 전환을 평가하도록 수행하였다. 결과를 하기 표 2에 요약하여 나타냈다.

실시예 51

AAV - HBV 마우스 모델에서 실시예 43-A의 생체내 항바이러스 효능

동물 모델

특이적 병원체가 부재하는 4 내지 6주령 수컷 C57BL/6 마우스를 중국 과학 기술원의 상하이 실험 동물 센터(SLAC)로부터 구매하고 동물 실험 윤리 위원회의 지침에 따라 동물 사육 시설에서 개별적으로 환기되는 케이지에서 제어되는 온도 및 빛 조건 하에 사육하였다. AAV/HBV 바이러스를 베이징 파이브플러스 분자 의학 연구소(Beijing FivePlus Molecular Medicine Institute)(중국 베이징 소재)로부터 구매하였다. 이 재조합 바이러스는 AAV 혈청형 8(AAV8) 캡시드 내에 패키징된 1.3 카피의 HBV 게놈을 보유하였다. C57BL/6 마우스에 염수 완충액에 희석된 200 ㎕의 재조합 바이러스를 꼬리 정맥 주사를 통해 주사하였다. 제14일에, 마우스를 채혈하여 주사 후 7일 및 14일에 혈청 내 HBV 표면 항원(HBsAg) 및 HBV 게놈 DNA를 측정한 후에, 동물을 HBV 바이오마커에 따라 무작위로 군으로 나누었다.

HBV 바이오마커의 측정

혈청 HBsAg 및 HBeAg를 CLIA 키트(오토바이오 다이그노스틱스 컴퍼니 리미티드(Autobio Diagnostics Co,. Ltd., 중국 정저우 소재))를 제조자의 지침에 따라 사용하여 측정하였다. HBsAg의 검출 하한값은 0.05 IU/mL였다. 500배 혈청 희석액을 사용하여 표준 곡선의 선형 범위 내에서 값을 얻었다.

혈청 HBV DNA를 마그나 퓨어(MagNA Pure) 96 DNA 및 바이럴 엔에이 스몰 볼륨 키트(Viral NA Small Volume Kit)(로슈(Roche))를 제조자의 지침에 따라 사용하여 추출하였다. DNA 샘플을 뉴클레오티드 2969 내지 3096으로부터의 128 염기쌍 HBV 게놈 영역의 특이적 증폭 및 검출을 위한 HBV-특이적 프라이머 및 프로브 세트를 사용하여 실시간 정량 PCR(qPCR)에 의해 분석하였다. 프라이머 및 프로브의 서열은 하기와 같다:

정방향 프라이머: AAGAAAAACCCCGCCTGTAA;

역방향 프라이머: CCTGTTCTGACTACTGCCTCTCC;

HBV-프로브: 5'TAMRA-CCTGATGTGATGTTCTCCATGTTCAGC-BHQ2-3'

혈청 내 항-HBs를 치료 종료 후 24일에 항-HBs CLIA 키트(오토바이오 다이그노스틱스 컴퍼니 리미티드, 중국 정저우 소재) 및 맵테크 비 엘리스폿(Mabtech B Elispot) 키트의 비오틴과 접합된 마우스 항-IgG(0.5 mg/mL)를 사용하여 시험하였다. 항-IgG 비오틴을 혈청 샘플과 1 μg/mL의 최종 농도로 혼합하였다. 25 μL의 마우스 항-IgG를 1시간의 배양 시간 동안 항-HBs CLIA 키트의 플레이트의 웰에서 혈청 샘플과 혼합하였다. 이어서, 플레이트를 세척하고 실온에서 1시간의 배양 시간 동안 스트렙타비딘-HRP를 첨가하였다. 세척 단계를 반복한 후에, CLIA 키트의 기질 A 및 B를 혼합하고 각각의 웰에 50 μL의 혼합물을 첨가하였다. 실온에서 5분 동안 배양한 후에, 플레이트를 엔비젼(Envision) 플레이트 리더(퍼킨엘머(PerkinElmer)) 상에서 판독하여 발광을 측정하였다.

연구 설계 및 결과

HBV DNA 및 HBsAg 둘 다를 고수준으로 발현하는 마우스 모델을, C57BL/6 마우스를 복제가능한 HBV 게놈을 갖는 재조합 아데노-연관된 바이러스(AAV-HBV)으로 주사하여 생성하였다. 오래 지속되는 HBV 바이러스 혈증 및 완전히 만족할 만한 면역 시스템을 사용하여, AAV-HBV 마우스 모델을, 표 3에 나타낸 연구 설계에 따라 TLR7 작용제의 항바이러스 효능을 평가하는 데 사용하였다.

AAV-HBV 마우스 모델에서 실시예 43-A의 생체내 효능 시험

동물 군	시험 물품	투여량 (mg/kg)	경로	빈도	처리
1	비히클	0	PO	QOD	42일
2	실시예 43-A	10	PO	QOD	42일
3		10	PO	QW	42일

구체적으로, 군 2 및 3에게 실시예 43-A를 10 mg/kg으로 각각 격일로(QOD) 또는 1주일에 1회(QW) 경구 투여하고, 대조군 1에게는 비히클만을 제공하였다. 10 mL/kg의 투여 부피로, 실시예 43-A(1 mg/mL)를 2% 클루켈(Klucel) LF, 0.5% TPGS, 0.09% 메틸파라벤 및 0.01% 수중 프로필파라벤과 함께 포접 화합물로서 제형화하였다. 동물을 총 42일 동안 처리하고, 연구에 걸쳐 혈청 수집을 위해 1주일에 2회 턱밑에서 채혈하였다. 혈청 샘플을 HBV 바이오마커 분석하였다.

도 4에 나타낸 바와 같이, 10 mg/kg QOD의 실시예 43-A의 처리는 HBV DNA(> 3 log) 및 HBsAg(> 2.8 log)의 현저한 감소를 야기하였다. 42-일 처리의 말에, 이들 바이러스 마커의 수준은 감지할 수 없고 정량화 하한(LLOQ)보다 낮아졌다. 덜 빈번한 QW 투여시에도, 실시예 43-A는 HBV DNA(> 2 log) 및 HBsAg(>2.8 log) 둘 다를 상당히 감소시켰다. 또한, QOD 및 QW 투여에 상관 없이 10 mg/kg의 실시예 43-A의 처리는 상당한 수준의 항-HBsAg 항체를 유도하였다. 요컨대, 실시예 43-A는 HBV 바이러스 마커를 감소시키고 HBV-특이적 항체의 생산을 촉진함으로써 양호한 생체내 항-HBV 활성을 나타냈다.

실시예 52

AAV - HBV 마우스 모델에서 실시예 41-A의 생체내 항바이러스 효능

실시예 41-A의 항바이러스 효능을 동일한 AAV-HBV 모델에서 표 4의 연구 설계에 따라 실시예 51에 기재된 바와 동일한 HBV 바이오마커 측정 방법으로 평가하였다.

AAV-HBV 마우스 모델에서 실시예 41-A의 생체내 효능 시험

동물 군	시험 물품	투여량 (mg/kg)	경로	빈도	처리
1	비히클	0	PO	QOD	42일
2	실시예 41-A	1	PO	QOD	42일
3		3	PO	QOD	42일
4		10	PO	QOD	42일
5		10	PO	QW	42일

구체적으로, 군 2, 3 및 4에게 각각 1, 3 또는 10 mg/kg QOD로 실시예 41-A를 경구 투여하였다. 군 5를 10 mg/kg QW로 처리한 반면에, 군 1에게는 비히클만을 제공하였다. 10 mL/kg의 투여 부피로, 실시예 41-A(0.1, 0.3 또는 1 mg/mL)를 2% 클루켈 LF, 0.5% TPGS, 0.09% 메틸파라벤 및 0.01% 수중 프로필파라벤과 함께 포접 화합물로서 제형화하였다. 동물을 총 42일 동안 처리하고 연구에 걸쳐 혈청 수집을 위해 1주일에 2회 턱밑에서 채혈하였다. 혈청 샘플을 HBV 바이오마커 분석하였다.

도 5에 나타낸 바와 같이, 1, 3 또는 10 mg/kg QOD로 실시예 41-A의 처리는 HBV DNA 및 HBsAg를 투여량-의존적으로 감소시켰다. 3개 투여량 모두는 42-일 처리의 말에 LLOQ보다 낮거나 그에 가깝도록 이들 바이러스 마커를 감소시켰다. 덜 빈번한 QW 투여시에도, 10 mg/kg의 실시예 41-A는 또한 처리의 말에 HBV DNA 및 HBsAg를 감지할 수 없는 수준으로 감소시켰다. 또한, 실시예 41-A는 비히클 처리 후보다 상당히 높은 HbsAg에 대한 항체의 수준을 유도하였다. 요컨대, 실시예 41-A는 HBV 바이러스 마커를 감소시키고 HBV-특이적 항체의 생산을 촉진함으로써 양호한 생체내 항-HBV 활성을 나타냈다.

실시예 53

AAV - HBV 마우스 모델에서 실시예 42-A의 생체내 항바이러스 효능

실시예 42-A의 항바이러스 효능을 동일한 AAV-HBV 모델에서 하기 표 5의 연구 설계에 따라 실시예 51에 기재된 바와 동일한 HBV 바이오마커 측정 방법을 사용하여 평가하였다.

AAV-HBV 마우스 모델에서 실시예 42-A의 생체내 효능 시험

동물 군	시험 물품	투여량 (mg/kg)	경로	빈도	처리
1	비히클	0	PO	QOD	42일
2	실시예 42-A	1	PO	QOD	42일
3		3	PO	QOD	42일
4		10	PO	QOD	42일

구체적으로, 군 2, 3 및 4에게 각각 1, 3 또는 10 mg/kg QOD로 실시예 42-A를 경구 투여한 반면에, 군 1에게는 비히클만을 제공하였다. 10 mL/kg의 투여 부피로, 실시예 42-A(0.1, 0.3 및 1 mg/mL)를 2% 클루켈 LF, 0.5% TPGS, 0.09% 메틸파라벤 및 0.01% 수중 프로필파라벤과 함께 포접 화합물로서 제형화하였다. 동물을 총 42일 동안 처리하고 연구에 걸쳐 혈청 수집을 위해 1주일에 2회 턱밑에서 채혈하였다. 혈청 샘플을 HBV 바이오마커 분석하였다.

도 6에 나타낸 바와 같이, 1, 3 또는 10 mg/kg QOD로 실시예 42-A의 처리 모두는 HBV DNA 및 HBsAg를 감소시키는 데 효과적이었다. 보다 높은 투여량이 HBV DNA 및 HBsAg의 보다 빠른 클리어런스(clearance)를 야기한 반면에, 3개의 투여량 모두는 42-일 처리의 말에 LLOQ보다 낮거나 그에 가깝도록 이들 바이러스 마커를 감소시켰다. 실시예 42-A로 처리된 모든 군은 상당히 높은 항-HBsAg 항체 수준을 발생시켰다. 요컨대, 실시예 42-A는 HBV 바이러스 마커를 감소시키고 HBV-특이적 항체의 생산을 촉진함으로써 양호한 생체내 항-HBV 활성을 나타냈다.

실시예 54

AAV - HBV 마우스 모델에서 실시예 41-B의 생체내 항바이러스 효능

실시예 41-B의 항바이러스 효능을 동일한 AAV-HBV 모델에서 하기 표 6의 연구 설계에 따라 실시예 51에 기재된 바와 동일한 HBV 바이오마커 측정 방법을 사용하여 평가하였다.

AAV-HBV 마우스 모델에서 실시예 41-B의 생체내 효능 시험

동물 군	시험 물품	투여량 (mg/kg)	경로	빈도	처리
1	비히클	0	PO	QOD	42일
2	실시예 41-B	1	PO	QOD	42일
3		3	PO	QOD	42일
4		10	PO	QOD	42일

구체적으로, 군 2, 3 및 4에게 각각 1, 3 또는 10 mg/kg QOD로 실시예 41-B를 경구 투여하고, 군 1에게는 비히클만을 제공하였다. 10 mL/kg의 투여 부피로, 실시예 41-B(0.1, 0.3 및 1 mg/mL)를 2% 클루켈 LF, 0.5% TPGS, 0.09% 메틸파라벤 및 0.01% 수중 프로필파라벤과 함께 포접 화합물로서 제형화하였다. 동물을 총 42일 동안 처리하고 연구에 걸쳐 혈청 수집을 위해 1주일에 2회 턱밑에서 채혈하였다. 혈청 샘플을 HBV 바이오마커 분석하였다.

도 7에 나타낸 바와 같이, 1, 3 또는 10 mg/kg QOD로 실시예 41-B의 처리는 HBV DNA 및 HBsAg를 감소시키는 데 효과적이었다. 3개의 투여량 모두는 42-일 처리의 말에 LLOQ보다 낮거나 그에 가깝도록 이들 바이러스 마커를 감소시켰다. 실시예 41-B로 처리된 모든 군은 또한 비히클 군보다 항-HBsAg 항체 수준을 높게 발생시켰다. 요컨대, 실시예 41-B는 HBV 바이러스 마커를 감소시키고 HBV-특이적 항체의 생산을 촉진함으로써 생체내 항-HBV 활성을 나타냈다.

실시예 55

수컷 위스터 -한( Wister - Han ) 래트에서 단일 투여량 PK 연구

수컷 위스터-한 래트의 단일 투여량 PK를 수행하여 시험된 화합물의 약동학 특성을 평가하였다. 2개의 군의 동물에게 각각의 화합물을 위관 영양(POE)를 통해 투여하였다. 혈액 샘플(약 20 μL)을 경정맥 또는 교호하는 부위를 통해 투여 후 15분, 30분, 1시간, 2시간, 4시간, 7시간 및 24시간에 수집하였다. 혈액 샘플을 EDTA-K2 항응고제를 함유하는 튜브 내에 두고 5000 rpm에서 6분 동안 4℃에서 원심분리하여 혈장을 샘플로부터 분리하였다. 원심분리 후에, 생성된 혈장을 전구약물 및 활성 형태 둘 다의 LC/MS/MS 생분석을 위한 깨끗한 튜브에 옮겼다. 전구약물을 투여받은 군에서, 혈장 샘플 내 전구약물의 농도는 검출 한계보다 낮았다. 표 8에서 "시험된 화합물"을 "투여량 화합물"의 생체내 대사물(활성 형태)의 시험을 위한 내부 표준으로서 사용하였다. 약동학 파라미터를 윈논린(WinNonlin, 등록상표) 프로페셔널 6.2의 비-구획 모듈을 사용하여 계산하였다. 피크 농도(C_max)를 실험 관찰로부터 직접 기록하였다. 혈장 농도-시간 곡선 아래 면적(AUC_{0 -t})을 선형적 사다리꼴 규칙을 사용하여 마지막으로 감지가능한 농도까지 계산하였다.

C_max 및 AUC_{0 -last}는 시험된 화합물의 생체내 효능과 관련된 2개의 중요한 PK 파라미터이다. 보다 높은 C_max 및 AUC_{0 -last}를 갖는 화합물은 보다 양호한 생체내 효능을 야기할 것이다. 활성 형태 및 경쟁자 화합물의 경구 투여 후 PK 파라미터의 결과가 표 7에 제시된다. 전구약물의 PK 파라미터가 표 8에 제시된다.

전구약물의 경구 투여 후에, 활성 형태를 혈장에서 관찰하여 시험하였다. 본 발명의 예시된 전구약물(실시예 41-B, 42-A, 42-B, 43-A, 45-A 및 45-B)은 놀랍게도 기준 화합물(GS9620, S-2 및 S-3) 및 본 발명에 언급된 화합물(화합물 41c-A, 41c-B 및 43e-A)(모두 활성 형태임)과 비교하여 훨씬 개선된 C_max(5 내지 175배 증가) 및 AUC_{0 -last}(2.5 내지 56배 증가)를 나타냈다. 결과는, 활성 형태에 비해 전구약물의 PK 파라미터에 대한 예상 밖의 우월성을 분명히 보여주고, 이는 보다 양호한 생체내 효능을 야기하였다.

5 mg/kg 경구 투여 후 활성 형태의 평균 혈장 농도 및 PK 파라미터

투여량 화합물	GS9620	S-2	S-3	화합물 41c-A
시간 (시간)	평균 혈장 농도 (nM)
0.25	56.3	9.49	8.89	16.75
0.5	33.2	16.74	9.99	27.48
1	83.4	19.33	10.16	32.33
2	136	24.89	8.40	27.34
4	16.7	47.55	11.54	27.38
8*	9.49	52.72	8.17	18.02
24	ND	4.90	ND	5.60
Cmax (nM)	164	52.72	11.54	32.33
AUC0 -last (nM·h)	316	748	95	242.5
투여량 화합물	화합물 41c-B	화합물 43e-A	화합물 45e-A	화합물 45e-B
시간 (시간)	평균 혈장 농도 (nM)
0.25	3.41	12.60	64.6	42.8
0.5	0.75	15.22	80.0	52.2
1	2.04	13.01	58.1	37.6
2	5.46	11.98	42.5	24.2
4	2.52	8.20	77.8	53.9
8*	1.21	6.31	34.6	29
24	ND	ND	8.6	5.7
Cmax (nM)	5.46	15.22	80.0	53.9
AUC0 -last (nM·h)	55.8	77	767	568
* 화합물 41c-A, 화합물 41c-B 및 화합물 43e-A의 경우 7시간

5 mg/kg 경구 투여 후 전구약물의 PK 파라미터

투여량 화합물	시험된 화합물	Cmax (nM)	AUC0 -last (nM·h)
실시예 41-B	화합물 41c-A	1315	3658
실시예 42-A	화합물 41c-A	1742	4867
실시예 42-B	화합물 41c-B	956	3148
실시예 43-A	화합물 43e-A	77	229
실시예 45-A	화합물 45e-B	922	1914
실시예 45-B	화합물 45e-A	1436	2619

실시예 56

LYSA 용해도 연구

LYSA 연구를 사용하여 시험된 화합물의 수성 용해도를 결정하였다. 샘플을 10 mM DMSO 스톡 용액으로부터 2개로 제조하였다. DMSO를 원심 진공 증발기에 의해 증발시킨 후에, 화합물을 0.05 M 포스페이트 완충제(pH 6.5)에 용해시키고 1시간 동안 교반하고 2시간 동안 진탕하였다. 하룻밤 후에, 용액을 마이크로타이터 필터 플레이트를 사용하여 여과하였다. 이어서, 여과액 및 이의 1/10 희석물을 HPLC-UV로 분석하였다. 또한, 4-점 보정 곡선을 10 mM 스톡 용액으로부터 생성하고 화합물의 용해도 결정에 사용하였다. 결과를 μg/mL 단위로 표현했다. 샘플 양의 계산된 최대값으로 나눈 증발 후 용액에서 측정된 샘플의 백분율이 80% 초과인 경우, 용해도는 이 값보다 큰 것으로 보고되었다.

LYSA의 결과가 표 9에 지시된다. 다양한 전구약물로 전환시 활성 형태의 용해도가 놀랍게도 10 내지 200배 초과만큼 개선되었다는 것이 분명했다.

실시예 57

문맥 연구

본 연구의 목적은 전구약물이 장을 통해 문맥 순환 내로 흡수되는 동안에 변하지 않은 상태로 남아있는지 여부를 이해하고 일차 전환 부위를 입증하기 위한 것이다.

문맥 캐뉼러 삽입(PVC) 및 경동맥 캐뉼러 삽입( CAC )의 수술적 절차

수술을 펜토바르비탈/이소플루란 마취 하에 수행하였다. 간략히, 복부 영역을 베타딘 및 70% 이소프로필 알코올에 의해 소독한 후에, 복중선 소절개를 수행하였다. 맹장을 꺼내고, 장간막정맥을 확인하고 약 5 mm 관으로 분리하였다. 느슨한 결찰을 근위에 위치시키고 정맥의 말단을 결찰시켰다. 분리된 정맥을 소절개(카테터 삽입을 허용하는 만큼만)하고 PU 카테터를 적절한 길이로 간을 향해 삽입하였다. 카테터를, 캐뉼러 삽입된 관 주위의 느슨한 결찰을 묶어 고정시켰다. 맹장을 복강 내로 재위치시켰다. 우측 복벽에 구멍을 내어 카테터 패스의 말단을 자유롭게 만들었다. 카테터를 복벽 상의 봉합선에 의해 고정시켰다. 복근 절개를 봉합선에 의해 봉합했다. 견갑골 영역을 소절개하여 카테터의 출구 부위로서 제공하였다. 견갑골 절개를 통해 카테터를 피하로 터널링하고 외재화하였다. 고정된 봉합선을 견갑골 영역에 위치시켰다. 카테터의 개방성을 확인한 후에 피하 공간으로부터 등쪽 목 영역으로 외재화하였다. 상기 영역을 부드럽게 닦은 후에, 복강을 봉합했다. 이어서, 좌측 경동맥에 PE50 카테터를 삽입함으로써 캐뉼러 삽입했다. 외재화된 카테터 둘 다를 등쪽 목 영역 상에 단단히 묶고 고정시켰다. 이어서, 동물을 케이지에서 회복시키고 수술 3일 이상 후에 연구를 위해 사용하였다. 모든 카테터를 1일에 1회 헤파린 첨가된 염수로 플러시하여 개방성을 유지하였다.

PVC/ CAC이중 캐뉼러 삽입된 래트에서 경구 PK 연구

동물을 밤새 단식시키고(n=3) 경구 섭식을 통해 투여하였다(10 mg/kg, 10 mL/kg). 혈액 샘플(60 μL)을 문맥 및 경동맥 카테터로부터 0.083, 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 7 및 24시간에 일제히 수집하였다. 모든 혈액 샘플을 항응고제로서 2 μL의 K₂EDTA(0.5 M)를 함유하는 마이크로원심분리 튜브 내로 옮기고 젖은 얼음 위에 두었다. 이어서, 혈액 샘플을 약 4℃에서 3000g에서 원심분리하여 수집 30분 이내에 혈장으로 가공하였다. 혈장 샘플을 폴리프로필렌 튜브에 저장하고 드라이아이스 상에서 신속히 냉동시키고 LC/MS/MS 분석 전까지 -70±10℃에서 저장하였다.

문맥 캐뉼러 삽입된 래트에 전구약물의 경구 투여(10 mg/kg) 후에 문맥 및 경동맥 샘플의 전구약물 및 활성 형태의 약동학 파라미터(평균 ± SD, n= 3)를 검출하고 분석하였다. 실시예 1-B, 41-A, 41-B, 42-A 및 43-A의 시험 결과를 하기에 요약하여 나타냈다.

문맥 캐뉼러 삽입된 래트에서 실시예 41-A의 경구 투여(10 mg/kg) 후에 문맥 및 경동맥 샘플의 실시예 41-A 및 이의 상응하는 활성 형태 화합물 41c-B의 약동학 파라미터

전구약물	실시예 41-A
상응하는 활성 형태	화합물 41c-B
PK 파라미터	문맥 샘플링		경동맥 샘플링
	전구약물	활성 형태	전구약물	활성 형태
Tmax (h)	0.14	0.4	0.19	0.42
Cmax (nM)	9703	2223	210	2185
AUC0 -2 (nM·h)	2188	2246	114	2108
AUCactive/AUCtotal	51%		95%

문맥 캐뉼러 삽입된 래트에서 실시예 43-A의 경구 투여(10 mg/kg) 후에 문맥 및 경동맥 샘플의 실시예 43-A 및 이의 상응하는 활성 형태 화합물 43e-A의 약동학 파라미터

전구약물	실시예 43-A
상응하는 활성 형태	화합물 43e-A
PK 파라미터	문맥 샘플링		경동맥 샘플링
	전구약물	활성 형태	전구약물	활성 형태
Tmax (h)	0.28	0.33	0.22	0.28
Cmax (nM)	4110	818	191	691
AUC0 -2 (nM·h)	2067	679	124	564
AUCactive/AUCtotal	25%		82%

문맥 캐뉼러 삽입된 래트에서 실시예 1-B의 경구 투여(10 mg/kg) 후에 문맥 및 전신 샘플의 실시예 1-B 및 이의 상응하는 활성 형태 화합물 1e-A의 약동학 파라미터

전구약물	실시예 1-B
상응하는 활성 형태	화합물 1e-A
PK 파라미터	문맥 샘플링		경동맥 샘플링
	전구약물	활성 형태	전구약물	활성 형태
Tmax (h)	0.083	0.25	0.083	0.5
Cmax (nM)	670	192	70	174
AUC0 -2 (nM·h)	266	164	40	184
AUCactive/AUCtotal	38%		82%

문맥 캐뉼러 삽입된 래트에서 실시예 42-A의 경구 투여(10 mg/kg) 후에 문맥 및 경동맥 샘플의 실시예 42-A 및 이의 상응하는 활성 형태 화합물 41c-A의 약동학 파라미터

전구약물	실시예 42-A
상응하는 활성 형태	화합물 41c-A
PK 파라미터	문맥 샘플링		경동맥 샘플링
	전구약물	활성 형태	전구약물	활성 형태
Tmax (h)	0.19	0.42	0.22	0.36
Cmax (nM)	8917	3162	286	3326
AUC0 -2 (nM·h)	3461	3199	286	3326
AUCactive/AUCtotal	48%		96%

문맥 캐뉼러 삽입된 래트에서 실시예 41-B의 경구 투여(10 mg/kg) 후에 문맥 및 경동맥 샘플의 실시예 41-B 및 이의 상응하는 활성 형태 화합물 41c-A의 약동학 파라미터

전구약물	실시예 41-B
상응하는 활성 형태	화합물 41c-A
PK 파라미터	문맥 샘플링		경동맥 샘플링
	전구약물	활성 형태	전구약물	활성 형태
Tmax (h)	0.19	0.5	0.25	0.5
Cmax (nM)	7068	3315	29.6	3432
AUC0 -2 (nM·h)	1444	3211	22.5	3301
AUCactive/AUCtotal	69%		99%

상기 결과를 기반으로, 문맥 샘플의 AUC_active/AUC_total와 비교하여 경동맥 샘플에서 AUC_active/AUC_total이 보다 높았기 때문에, 전구약물의 일차 전환 부위가 장이라기 보다는 간인 것으로 결론이 내려졌다.

SEQUENCE LISTING <110> F. Hoffmann-La Roche AG <120> 7-substituted sulfonimidoylpurinone compounds for the treatment and prophylaxis of virus infection <130> P33761 <140> PCT/EP2017/071514 <141> 2017-08-28 <150> PCT/CN2016/097140 <151> 2016-08-29 <150> PCT/CN2017/092653 <151> 2017-07-12 <160> 3 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Hepatitis B virus <400> 1 aagaaaaacc ccgcctgtaa 20 <210> 2 <211> 23 <212> DNA <213> Hepatitis B virus <400> 2 cctgttctga ctactgcctc tcc 23 <210> 3 <211> 27 <212> DNA <213> Hepatitis B virus <400> 3 cctgatgtga tgttctccat gttcagc 27

Claims (25)

1. 6-아미노-9-벤질-2-(프로필설폰이미도일)-7-(피롤리딘-1-카본일)푸린-8-온;
   6-아미노-9-벤질-7-(피페리딘-1-카본일)-2-(프로필설폰이미도일)푸린-8-온;
   6-아미노-9-벤질-7-(모폴린-4-카본일)-2-(프로필설폰이미도일)푸린-8-온;
   6-아미노-9-벤질-7-(3,3-다이메틸피롤리딘-1-카본일)-2-(프로필설폰이미도일)푸린-8-온;
   에틸 1-[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]피롤리딘-2-카복시레이트;
   6-아미노-7-(2-아자스피로[3.3]헵탄-2-카본일)-9-벤질-2-(프로필설폰이미도일)푸린-8-온;
   6-아미노-9-벤질-7-(2-옥사-6-아자스피로[3.3]헵탄-6-카본일)-2-(프로필설폰이미도일)푸린-8-온;
   6-아미노-9-벤질-7-(3,3-다이플루오로피롤리딘-1-카본일)-2-(프로필설폰이미도일)푸린-8-온; 및
   6-아미노-9-벤질-7-(3-플루오로-3-메틸-피롤리딘-1-카본일)-2-(프로필설폰이미도일)푸린-8-온
   및 이들의 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체는 배제되는,
   하기 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체:
   [화학식 I]
   

   

   
   상기 식에서,
   R¹은 C_{1- 6}알킬이고;
   R²는 치환되지 않거나 할로겐 및 C_{1- 6}알킬로부터 독립적으로 선택된 1, 2 또는 3개의 치환기로 치환된 벤질이고;
   R³은 -NR⁴R⁵이되,
   R⁴는 C_{1- 6}알킬 또는 C_{1- 6}알콕시C_{1 - 6}알킬이고,
   R⁵는 (C_{1- 6}알킬)₂NCOOC_{1 - 6}알킬, C_{1- 6}알콕시C_{1 - 6}알킬, C_{1- 6}알콕시카본일(C_1-6알킬)아미노C_{1 -6}알킬, C_{1- 6}알콕시카본일(페닐)C_{1 - 6}알킬, C_{1- 6}알콕시카본일C_{1 - 6}알킬, C_{1- 6}알콕시카본일옥시C_1-6알킬, C_{1- 6}알킬, C_{1- 6}알킬카본일(C_1-6알킬)아미노C_{1 - 6}알킬 또는 피롤리딘일카바모일옥시C_{1 -6}알킬이거나,
   R⁴ 및 R⁵는 이들이 부착된 질소와 함께 헤테로사이클릴을 형성한다.
2. 제1항에 있어서,
   R¹이 C_{1- 6}알킬이고;
   R²가 치환되지 않거나 할로겐 또는 C_{1- 6}알킬로 치환된 벤질이고;
   R³이 아제티딘일, C_{1- 6}알킬로 치환된 피페라진일, 피페리딘일로 치환된 피페리딘일, 피롤리딘일 또는 -NR⁴R⁵이되,
   R⁴가 C_{1- 6}알킬 또는 C_{1- 6}알콕시C_{1 - 6}알킬이고,
   R⁵가 (C_{1- 6}알킬)₂NCOOC_{1 - 6}알킬, C_{1- 6}알콕시C_{1 - 6}알킬, C_{1- 6}알콕시카본일(C_1-6알킬)아미노C_{1 -6}알킬, C_{1- 6}알콕시카본일(페닐)C_{1 - 6}알킬, C_{1- 6}알콕시카본일C_{1 - 6}알킬, C_{1- 6}알콕시카본일옥시C_1-6알킬, C_{1- 6}알킬, C_{1- 6}알킬카본일(C_1-6알킬)아미노C_{1 - 6}알킬 또는 피롤리딘일카바모일옥시C_{1 -6}알킬인, 화합물.
3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
   R¹이 에틸 또는 프로필이고;
   R²가 벤질, 브로모벤질, 클로로벤질, 플루오로벤질 또는 메틸벤질이고;
   R³이 아제티딘일, 4-메틸피페라진일, 피페리딘일피페리딘일, 피롤리딘일 또는 -NR⁴R⁵이되,
   R⁴가 메틸, 에틸, 프로필 또는 메톡시에틸이고,
   R⁵가 아세틸(메틸)아미노에틸, 부틸, 부틸(메틸)카바모일옥시에틸, 다이에틸카바모일옥시에틸, 에톡시카본일(메틸)아미노에틸, 에톡시카본일에틸, 에톡시카본일이소부틸, 에톡시카본일이소펜틸, 에톡시카본일메틸, 에톡시카본일옥시에틸, 에톡시카본일(페닐)에틸, 에틸, 이소부틸, 이소프로폭시카본일이소펜틸, 이소프로폭시카본일(페닐)에틸, 이소프로필, 메톡시카본일(메틸)아미노에틸, 메톡시에틸, 메톡시프로필, 프로필, 프로필(메틸)카바모일옥시에틸, 피롤리딘일카바모일옥시에틸, tert-부톡시카본일(메틸)아미노에틸, tert-부톡시카본일에틸, tert-부톡시카본일이소펜틸 또는 tert-부톡시카본일(페닐)에틸인, 화합물.
4. 제3항에 있어서,
   R³이 아제티딘일, 4-메틸피페라진일, 피페리딘일피페리딘일, 피롤리딘일, 아세틸(메틸)아미노에틸(메틸)아미노, 비스(메톡시에틸)아미노, 부틸(에틸)아미노, 부틸(메틸)아미노, 부틸(메틸)카바모일옥시에틸(메틸)아미노, 다이에틸카바모일옥시에틸(메틸)아미노, 에톡시카본일(메틸)아미노에틸(메틸)아미노, 에톡시카본일에틸(메틸)아미노, 에톡시카본일이소부틸(메틸)아미노, 에톡시카본일이소펜틸(메틸)아미노, 에톡시카본일메틸(메틸)아미노, 에톡시카본일옥시에틸(메틸)아미노, 에톡시카본일(페닐)에틸(메틸)아미노, 에틸(메틸)아미노, 이소부틸(메틸)아미노, 이소프로폭시카본일이소펜틸(메틸)아미노, 이소프로폭시카본일(페닐)에틸(메틸)아미노, 이소프로필(메틸)아미노, 메톡시카본일(메틸)아미노에틸(메틸)아미노, 메톡시에틸(에틸)아미노, 메톡시에틸(메틸)아미노, 메톡시에틸(프로필)아미노, 메톡시프로필(메틸)아미노, 프로필(에틸)아미노, 프로필(메틸)아미노, 프로필(메틸)카바모일옥시에틸(메틸)아미노, 피롤리딘일카바모일옥시에틸(메틸)아미노, tert-부톡시카본일(메틸)아미노에틸(메틸)아미노, tert-부톡시카본일에틸(메틸)아미노, tert-부톡시카본일이소펜틸(메틸)아미노 또는 tert-부톡시카본일(페닐)에틸(메틸)아미노인, 화합물.
5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
   R¹이 에틸인, 화합물.
6. 제1항 또는 제2항에 있어서,
   R²가 할로겐 또는 C_{1- 6}알킬로 치환된 벤질인, 화합물.
7. 제2항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
   R²가 브로모벤질, 클로로벤질, 플루오로벤질 또는 메틸벤질인, 화합물.
8. 제7항에 있어서,
   R²가 브로모벤질, 클로로벤질 또는 플루오로벤질인, 화합물.
9. 제1항 또는 제2항에 있어서,
   R³이 -NR⁴R⁵이되, R⁴가 C_{1- 6}알킬이고, R⁵가 C_{1- 6}알킬인, 화합물.
10. 제9항에 있어서,
    R³이 프로필(메틸)아미노 또는 에틸(메틸)아미노인, 화합물.
11. 제1항, 제2항, 제6항 및 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
    R¹이 C_{1- 6}알킬이고;
    R²가 할로겐 또는 C_{1- 6}알킬로 치환된 벤질이고;
    R³이 -NR⁴R⁵이되, R⁴가 C_{1- 6}알킬이고, R⁵가 C_{1- 6}알킬인, 화합물.
12. 제11항에 있어서,
    R¹이 에틸이고;
    R²가 메틸벤질, 브로모벤질, 클로로벤질 또는 플루오로벤질이고;
    R³이 프로필(메틸)아미노 또는 에틸(메틸)아미노인, 화합물.
13. 6-아미노-9-벤질-N-메틸-8-옥소-N-프로필-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카복스아미드;
    6-아미노-9-벤질-N-(2-메톡시에틸)-N-메틸-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카복스아미드;
    6-아미노-9-벤질-N-에틸-8-옥소-N-프로필-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카복스아미드;
    6-아미노-9-벤질-7-[4-(1-피페리딜)피페리딘-1-카본일]-2-(프로필설폰이미도일)푸린-8-온;
    6-아미노-9-벤질-N-에틸-N-(2-메톡시에틸)-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카복스아미드;
    6-아미노-9-벤질-N-부틸-N-에틸-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카복스아미드;
    6-아미노-9-벤질-N-(2-메톡시에틸)-8-옥소-N-프로필-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카복스아미드;
    6-아미노-9-벤질-N,N-비스(2-메톡시에틸)-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카복스아미드;
    6-아미노-7-(아제티딘-1-카본일)-9-벤질-2-(프로필설폰이미도일)푸린-8-온;
    6-아미노-9-벤질-N-이소프로필-N-메틸-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카복스아미드;
    6-아미노-9-벤질-7-(4-메틸피페라진-1-카본일)-2-(프로필설폰이미도일)푸린-8-온;
    6-아미노-9-벤질-N-(3-메톡시프로필)-N-메틸-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카복스아미드;
    6-아미노-9-벤질-N-이소부틸-N-메틸-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카복스아미드;
    에틸 2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]아세테이트;
    에틸 3-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]프로파노에이트;
    tert-부틸 3-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]프로파노에이트;
    에틸 (2S)-2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]프로파노에이트;
    tert-부틸 (2S)-2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]-4-메틸-펜타노에이트;
    이소프로필 (2S)-2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]-4-메틸-펜타노에이트;
    에틸 (2S)-2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]-3-메틸-부타노에이트;
    에틸 (2S)-2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]-4-메틸-펜타노에이트;
    에틸 (2S)-2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]-3-페닐-프로파노에이트;
    이소프로필 (2S)-2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]-3-페닐-프로파노에이트;
    tert-부틸 (2S)-2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]-3-페닐-프로파노에이트;
    N-[2-[아세틸(메틸)아미노]에틸]-6-아미노-9-벤질-N-메틸-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카복스아미드;
    메틸 N-[2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]에틸]-N-메틸-카바메이트;
    tert-부틸 N-[2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]에틸]-N-메틸-카바메이트;
    에틸 N-[2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]에틸]-N-메틸-카바메이트;
    2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]에틸 N-부틸-N-메틸-카바메이트;
    2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]에틸 피롤리딘-1-카복시레이트;
    2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]에틸 N-메틸-N-프로필-카바메이트;
    2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]에틸 N,N-다이에틸카바메이트;
    2-[[6-아미노-9-벤질-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카본일]-메틸-아미노]에틸 에틸 카보네이트;
    6-아미노-N-부틸-9-[(4-클로로페닐)메틸]-N-메틸-8-옥소-2-[S(S)-프로필설폰이미도일]푸린-7-카복스아미드;
    6-아미노-N-부틸-9-[(4-클로로페닐)메틸]-N-메틸-8-옥소-2-[S(S)-프로필설폰이미도일]푸린-7-카복스아미드;
    6-아미노-9-[(4-클로로페닐)메틸]-N-에틸-N-메틸-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카복스아미드;
    6-아미노-N-메틸-8-옥소-N-프로필-2[S(S)-프로필설폰이미도일]-9-(p-톨릴메틸)푸린-7-카복스아미드;
    6-아미노-N-메틸-8-옥소-N-프로필-2[S(R)-프로필설폰이미도일]-9-(p-톨릴메틸)푸린-7-카복스아미드;
    6-아미노-2-[S(S)-프로필설폰이미도일]-9-(p-톨릴메틸)-7-(피롤리딘-1-카본일)푸린-8-온;
    6-아미노-2-[S(R)-프로필설폰이미도일]-9-(p-톨릴메틸)-7-(피롤리딘-1-카본일)푸린-8-온;
    6-아미노-N-(2-메톡시에틸)-N-메틸-8-옥소-2-[S(S)-프로필설폰이미도일]-9-(p-톨릴메틸)푸린-7-카복스아미드;
    6-아미노-N-(2-메톡시에틸)-N-메틸-8-옥소-2-[S(R)-프로필설폰이미도일]-9-(p-톨릴메틸)푸린-7-카복스아미드;
    6-아미노-N-에틸-N-메틸-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)-9-(p-톨릴메틸)푸린-7-카복스아미드;
    6-아미노-N-부틸-N-메틸-8-옥소-2-(프로필설폰이미도일)-9-(p-톨릴메틸)푸린-7-카복스아미드;
    6-아미노-9-[(4-클로로페닐)메틸]-2-[S(R)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-푸린-7-카복스아미드;
    6-아미노-9-[(4-클로로페닐)메틸]-2-[S(S)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-푸린-7-카복스아미드;
    6-아미노-9-[(4-클로로페닐)메틸]-N-에틸-2[S(S)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-푸린-7-카복스아미드;
    6-아미노-9-[(4-클로로페닐)메틸]-N-에틸-2-[S(R)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-푸린-7-카복스아미드;
    6-아미노-2-[S(S)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-9-(p-톨릴메틸)푸린-7-카복스아미드;
    6-아미노-2-[S(R)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-9-(p-톨릴메틸)푸린-7-카복스아미드;
    6-아미노-N-에틸-2[S(S)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-9-(p-톨릴메틸)푸린-7-카복스아미드;
    6-아미노-N-에틸-2-[S(R)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-9-(p-톨릴메틸)푸린-7-카복스아미드;
    6-아미노-2-[S(S)에틸설폰이미도일]-9-[(4-플루오로페닐)메틸]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-푸린-7-카복스아미드;
    6-아미노-2-[S(R)에틸설폰이미도일]-9-[(4-플루오로페닐)메틸]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-푸린-7-카복스아미드;
    6-아미노-N-에틸-2-(에틸설폰이미도일)-9-[(4-플루오로페닐)메틸]-N-메틸-8-옥소-푸린-7-카복스아미드;
    6-아미노-N-에틸-2-[S(S)-(에틸설폰이미도일)]-9-[(4-플루오로페닐)메틸]-N-메틸-8-옥소-푸린-7-카복스아미드;
    6-아미노-N-에틸-2-[S(R)-(에틸설폰이미도일)]-9-[(4-플루오로페닐)메틸]-N-메틸-8-옥소-푸린-7-카복스아미드;
    6-아미노-9-[(4-브로모페닐)메틸]-2-(에틸설폰이미도일)-N-메틸-8-옥소-N-프로필-푸린-7-카복스아미드;
    6-아미노-2-[S(R)-에틸설폰이미도일]-9-[(4-브로모페닐)메틸]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-푸린-7-카복스아미드;
    6-아미노-2-[S(S)-에틸설폰이미도일]-9-[(4-브로모페닐)메틸]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-푸린-7-카복스아미드;
    6-아미노-9-[(4-브로모페닐)메틸]-N-에틸-2-(에틸설폰이미도일)-N-메틸-8-옥소-푸린-7-카복스아미드;
    6-아미노-9-[(4-브로모페닐)메틸]-N-에틸-2-[S(S)-(에틸설폰이미도일)]-N-메틸-8-옥소-푸린-7-카복스아미드; 및
    6-아미노-9-[(4-브로모페닐)메틸]-N-에틸-2-[S(R)-(에틸설폰이미도일)]-N-메틸-8-옥소-푸린-7-카복스아미드
    로부터 선택되는 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체.
14. 제13항에 있어서,
    6-아미노-9-벤질-N-메틸-8-옥소-N-프로필-2-(프로필설폰이미도일)푸린-7-카복스아미드;
    6-아미노-9-[(4-클로로페닐)메틸]-2-[S(R)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-푸린-7-카복스아미드;
    6-아미노-9-[(4-클로로페닐)메틸]-2-[S(S)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-푸린-7-카복스아미드;
    6-아미노-9-[(4-클로로페닐)메틸]-N-에틸-2[S(S)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-푸린-7-카복스아미드;
    6-아미노-9-[(4-클로로페닐)메틸]-N-에틸-2-[S(R)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-푸린-7-카복스아미드;
    6-아미노-2-[S(S)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-9-(p-톨릴메틸)푸린-7-카복스아미드;
    6-아미노-2-[S(R)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-9-(p-톨릴메틸)푸린-7-카복스아미드;
    6-아미노-N-에틸-2[S(S)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-9-(p-톨릴메틸)푸린-7-카복스아미드;
    6-아미노-N-에틸-2-[S(R)-에틸설폰이미도일]-N-메틸-8-옥소-9-(p-톨릴메틸)푸린-7-카복스아미드;
    6-아미노-2-(에틸설폰이미도일)-9-[(4-플루오로페닐)메틸]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-푸린-7-카복스아미드;
    6-아미노-2-[S(S)에틸설폰이미도일]-9-[(4-플루오로페닐)메틸]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-푸린-7-카복스아미드; 및
    6-아미노-2-[S(R)에틸설폰이미도일]-9-[(4-플루오로페닐)메틸]-N-메틸-8-옥소-N-프로필-푸린-7-카복스아미드
    로부터 선택되는 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체.
15. 피리딘 및 트라이에틸아민; 피리딘 및 DIPEA; DMAP 및 트라이에틸아민; 또는 DMAP 및 DIPEA인 혼합된 염기의 존재 하에 화학식 II의 화합물을 카바모일 클로라이드와 반응시키는 단계
    를 포함하는, 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항의 화합물의 제조 방법:
    [화학식 II]
    

    

    
    상기 식에서,
    R¹ 및 R²는 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같다.
16. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서,
    치료적 활성 물질로서 사용하기 위한 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체.
17. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항의 화합물 및 치료적 불활성 담체를 포함하는 약학 조성물.
18. B형 간염 바이러스 감염의 치료 또는 예방을 위한 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항의 화합물의 용도.
19. B형 간염 바이러스 감염의 치료용 또는 예방용 약제의 제조를 위한 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항의 화합물의 용도.
20. TLR7 작용제로서 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항의 화합물의 용도.
21. 인터페론-α의 생산을 유도하는 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항의 화합물의 용도.
22. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서,
    B형 간염 바이러스 감염의 치료 또는 예방을 위한 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체.
23. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서,
    제15항의 방법에 따라 제조되는 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체.
24. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항의 화합물의 치료적 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 B형 간염 바이러스 감염의 치료 또는 예방 방법.
25. 상기에 기재된 바와 같은 발명.

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