CN109633189A - 用于荧光免疫分析仪校准和质控的荧光标准卡及测试方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于荧光免疫分析仪校准和质控的荧光标准卡,包括荧光标准卡本体和荧光检测单元,荧光检测单元由荧光溶液、光固化荧光材料、荧光油墨或荧光墨水制得。所述荧光标准卡与使用质控品、参考品或标准品相比,具有发光性质稳定、不易随时间衰减,线宽精度高、荧光物质空间分布均匀,荧光物质的量和荧光强度呈线性以及制备一致性好的特点。还公开了一种测试方法,建立了一种荧光标准卡评估设备的方法和参数,该方法评估内容完整、易于操作,是一套系统的测量评估方案,有利于对荧光免疫分析仪进行校准和质控,提高了荧光免疫分析仪的检测准确性,以及各方法的溯源方案,能够可靠保证荧光标准卡在制作和使用过程中本身的属性严谨受控。
Description
技术领域
本发明属于荧光免疫分析技术领域,具体地说涉及一种用于荧光分析仪校准和质控的荧光标准卡及测试方法。
背景技术
荧光免疫分析技术是标记免疫技术中发展最早的一种,是将抗原抗体反应的特异性与荧光物质检测的敏感性和直观性结合起来的一种方法。其原理为:将不影响抗原、抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。荧光免疫检测技术具有专一性强、灵敏度高、实用性好等优点,可被用于检测含量很低的生物活性化合物,如蛋白质(酶、接受体、抗体)、激素、药物及微生物等。
目前,行业内通常采用荧光免疫分析仪进行荧光免疫分析检测,仪器由于自身因素和外界环境的干扰,有时检测结果会存在一定偏差,为提升仪器检测数据的精确度,在使用仪器前,需要对仪器进行校准和质控。对设备性能参数的校准和评估方法一般包括以下几种:(1)使用纳米晶等荧光材料配制为溶液,将溶液印刷或喷涂或通过凝胶等方法固化在基材上制作成为标准卡,使用该标准卡对设备进行测量以评估设备的性能参数;(2)使用LED灯或灯条制作成标准卡,使用该标准卡对设备进行测量以评估设备的性能参数;(3)使用荧光矿物质或荧光矿物质混合物制作标准卡,使用标准卡对设备进行测量以评估设备的性能参数。
上述方法存在如下技术问题:(1)纳米晶材料溶液在制备不良情况下,往往会随时间发生明显的衰减,导致标准卡的信号发生变化,无法作为稳定的标准品对设备进行可靠评估,同时,溶液进行细线打印时,线宽精度难以保证,如果溶液在基材上发生层析或扩散,标准卡的一致性更加难以保证,而通过凝胶法进行固化,往往达不到良好的分散性,制作的标准卡个体差异大,无法作为标准的判断物。(2)LED灯本身具有发光强度和颜色的差异,用LED灯或灯条制作的标准卡一致性较差,另外,LED灯或灯条本身是发光源而非受激发光,难以对设备中光学模块的激光光源性能进行评估。现有的方案一般通过设计单一的T线,通过T线的荧光信号强度和溶液浓度的关系进行线性拟合,但对于荧光分析仪的设计原理而言,由于最终输出的信号一般是经过放大的信号,且信号放大的倍数往往是动态的,如要进行线性拟合,则需要将倍数进行归一化,操作不便,同时,对于单一的T线,在制作过程中,低浓度和高浓度的溶液制作出来的T线,往往随时间的衰减程度不一致,很难保证长期使用后,维持稳定的线性关系。而且目前现有方法只对荧光标准卡的制作方式和结构进行说明,没有将荧光标准卡结合设备的特性,形成合理而系统的测量评估方案以及溯源方案。
发明内容
为此,本发明正是要解决上述技术问题,从而提出一种发光物质稳定、结构合理、可稳定保存和固化发光物质、能定量判断设备重复性、稳定性、准确性和线性相关性且可进行溯源的用于荧光分析仪校准和质控的荧光标准卡及测试方法。
为解决上述技术问题,本发明的技术方案为:
本发明提供一种用于荧光免疫分析仪校准和质控的荧光标准卡,所述荧光标准卡包括荧光标准卡本体和荧光检测单元,所述荧光检测单元由荧光溶液、光固化荧光材料、荧光油墨或荧光墨水制得。
作为优选,所述荧光标准卡本体的观测窗口处开设置有沟槽或容置腔,所述荧光溶液、光固化荧光材料容置于所述沟槽或容置腔内;或者所述荧光溶液、光固化荧光材料容置于毛细管或微流控芯片的流道中,所述毛细管或所述微流控芯片设置于所述观测窗口处。
作为优选,所述荧光标准卡本体内设置有载片,所述载片表面制作有荧光检测部,所述荧光检测部制作有荧光油墨货荧光墨水层,所述荧光检测部设置于荧光标准卡本体的观测窗口处。
作为优选,所述载片表面还设置有遮光片,所述遮光片对应于所述荧光检测部的位置为镂空位。
本发明还有一种利用所述的荧光标准卡的测试方法,根据荧光检测单元中荧光物质的浓度或荧光检测单元的面积将荧光标准卡设定为1-9级梯度,浓度可以从0~100%,例如0%、1%、5%、10%、20%、30%、50%、60%、90%,所对应的信号值可以从0-100000000,例如卡1~卡9信号值可以为:10、100、500、1000、5000、10000、50000、100000、500000,采用具有不同浓度或面积梯度的荧光标准卡对荧光免疫分析仪进行校准测试,所述校准测试包括重复性测试、稳定性测试、准确性测试和线性相关测试。
作为优选,所述重复性测试包括:将具有1-9级浓度或面积梯度的荧光标准卡分别插入荧光免疫分析仪的检测口连续测量十次,按照以下公式计算每个荧光标准卡测量结果的变异系数,根据所述变异系数判定荧光免疫分析仪的重复性:其中,s为样品测试值的标准差;为样品测试值的平均值。
作为优选,所述稳定性测试包括:取第1、5、9浓度或面积梯度的荧光标准卡分别插入荧光免疫分析仪的卡槽中连续测量3次,4、8h后分别再测量3次,分别取每3次测量的平均值作为测量值,初始3次测量的平均值作为基准值,按照以下公式计算稳定性系数:其中,为第4h、第8h时3次测量的平均值;为初3次始测量的平均值;
所述准确性测试包括:取第1、5、9浓度或面积梯度的荧光标准卡分别插入荧光免疫分析仪的卡槽中各连续测量3次,分别取每3次测量的平均值作为每次的测量值,以荧光标准卡的标称值为真值,按照以下公式计算测量的准确度系数:其中,xi为每次的测量值,n为测量次数,X为真值。
作为优选,所述线性相关性测试包括:取T/C值为不同梯度的荧光标准卡,所述荧光标准卡的标称值的梯度的数量级不小于2,梯度数量不小于5,将所述荧光标准卡分别插入荧光免疫分析仪连续测量3次,计算每三次测量的平均值,并按照以下公式计算线性关系系数:其中,Xi为荧光标准卡的标称值;Yi为标准卡测量3次的测量值的平均值。
作为优选,校准测试之前还包括荧光标准卡溯源的步骤,所述荧光标准卡中荧光物质为荧光溶液或光固化荧光材料,根据线性测试浓度配比的要求,将所述荧光溶液或光固化荧光材料稀释为1-9级浓度梯度,将不同浓度梯度的荧光溶液或光固化荧光材料分别注入荧光标准卡的卡槽或容置腔中,得到不同浓度梯度的荧光标准卡;或采用同一浓度的荧光物质,分别注入面积为1-9级的卡槽或容置腔内,得到面积不同的检测条带,通过上述溯源步骤进行溯源。
作为优选,校准测试之前还包括荧光标准卡溯源的步骤,所述荧光标准卡中荧光物质为荧光油墨或荧光墨水,将荧光油墨或荧光墨水制备于载片表面,根据荧光油墨或荧光墨水中荧光物质的浓度制备为1-9级荧光色块,用标准光源照射所述荧光色块并测量所述色块的的亮度,取3次测量得到的平均值作为色块的亮度测量值,当荧光色块的亮度测量值与色块定义的标称值间相对偏差小于1%,则安装于荧光标准卡本体;或采用同一荧光物质浓度,制备1-9级面积的荧光色块,通过上述溯源步骤进行溯源。
本发明的上述技术方案相比现有技术具有以下优点:
(1)本发明所述的用于荧光免疫分析仪校准和质控的荧光标准卡,所述荧光标准卡包括荧光标准卡本体和荧光检测单元,所述荧光检测单元由荧光溶液、荧光溶液与光固化胶黏剂混合物或荧光油墨制得。荧光标准卡中的荧光物质与常规荧光材料相比,发光性质稳定,不易随时间衰减,线宽精度高,标准卡的一致性好。能够在理论和实际中,将标准卡的荧光物质和设备检测到的荧光强度形成线性关系,可评估分析仪的线性相关性。
(2)本发明所述的测试方法,根据荧光检测单元中荧光物质的浓度将荧光标准卡设定为1-9级浓度或面积梯度,采用具有不同浓度或面积梯度的荧光标准卡对荧光免疫分析仪进行校准测试,所述校准测试包括重复性测试、稳定性测试、准确性测试和线性相关测试。建立了一种荧光标准卡评估设备的方法和评估参数,还提供了荧光标准卡的制备方法,该方法评估内容完整、易于操作,是一套系统的测量评估方案,有利于对荧光免疫分析仪进行校准和质控,提高了荧光免疫分析仪的检测准确性,同时能够实现标准卡的溯源,能够可靠保证荧光标准卡在制作和使用过程中本身的属性能够严谨受控。
附图说明
为了使本发明的内容更容易被清楚的理解,下面根据本发明的具体实施例并结合附图,对本发明作进一步详细的说明,其中
图1是本发明实施例1所述的荧光标准卡的结构示意图;
图2是本发明实施例所述的荧光免疫分析仪与荧光标准卡示意图;
图3是本发明实施例2所述的荧光标准卡的结构示意图;
图4是本发明实施例所述的测试方法中面积参考法的示意图;
图5是本发明实施例所述的测试方法中荧光油墨溯源过程的示意图;
图6是本发明实施例3所述的测试方法中质控曲线。
图中附图标记表示为:1-荧光标准卡;11-荧光标准卡本体;12-荧光检测单元;121-载片;13-观测窗口;14-遮光片;2-荧光免疫分析仪;21-检测口。
具体实施方式
实施例1
本实施例提供一种用于荧光免疫分析仪校准和质控的荧光标准卡,请参阅图1,所述荧光标准卡1包括荧光标准卡本体11和荧光检测单元12,所述荧光检测单元12由荧光溶液、光固化荧光材料、荧光油墨或荧光墨水制得。
具体地,所述荧光标准卡本体11为有机材料、金属材料、无机非金属材料或木材制成的壳体,其具有观测窗口13,所述观测窗口13内设置有一检测卡,所述检测卡上设置有用于容纳所述荧光检测单元12的沟槽,所述沟槽呈长条状,其中设置有荧光溶液,容置有荧光溶液的沟槽形成检测线,所述荧光溶液由荧光发光物质与溶剂通过机械搅拌或超声振荡混合均匀而得。本实施例中,所述荧光发光物质为白色色酚N-(5-氯-2-甲氧基苯基)-3-羟基-2-萘甲酰胺和Ba3MgSi2O8:Eu2+,M n2+,所述溶剂为NaOH溶液,所述白色色酚N-(5-氯-2-甲氧基苯基)-3-羟基-2-萘甲酰胺为1g,所述Ba3MgSi2O8:Eu2+,M n2+为0.5g,所述NaOH溶液浓度为1mol/L,体积为5ml。荧光溶液的优点在于,其中荧光物质分布均匀,溶液状态可解决线性测量中需将光信号与物质浓度进行对应的问题。
通过配制不同浓度的荧光溶液,或者用同一浓度的溶液根据不同槽宽制作出不同线宽的标准卡,从而得到一些列具有不同荧光信号梯度的荧光标准卡对荧光免疫分析仪2(如图2所示)设备的性能进行测试。
所述荧光免疫分析仪2为采用荧光免疫层析定量检测、荧光免疫吸附测定、时间分辨荧光检测、原位杂交、生物芯片级微流控技术的定量检测设备中的一种。其具有检测口21,所述荧光标准卡1插入所述检测口21对设备进行校准测定。
或者,所述荧光检测单元12由光固化荧光材料注入沟槽中制得,所述光固化荧光材料通过将荧光物质溶解在溶剂中,形成荧光物质溶液,所述荧光物质溶液为上述白色色酚N-(5-氯-2-甲氧基苯基)-3-羟基-2-萘甲酰胺和Ba3MgSi2O8:Eu2+,Mn2+的氢氧化钠溶液,再掺入一定量光固化胶黏剂,机械搅拌或超声振荡充分混合均匀制得。所述光固化胶黏剂包括光固化单体、预聚物和分散剂,三者的比例为其中光固化单体在固化胶黏剂的比例为1-60%,预聚物比例为1-60%,分散剂为1-10%,荧光溶液与光固化剂的成分比例为1:0.001到1:1000。其中,所述光固化单体为双官能团单体TPGDA、HDDA、DEGDA、NPGDA、多官能团单体TMPTA、PETA中的至少一种。所述预聚物为环氧丙烯酸酯、聚氨酯丙烯酸酯、聚醚丙烯酸酯、聚酯丙烯酸酯、丙烯酸树脂中的至少一种。所述光引发剂为1173、184、907、二苯甲酮中的至少一种。在上述成分和配比下得到的光固化胶黏剂可在紫外光的照射下固化。
所述荧光溶液与光固化胶黏剂混合物注入沟槽中后,用紫外光线使其固化,从而使得荧光物质均匀分散在固化的凝胶中,能够稳定长期保存。
作为可变换的实施方式,所述沟槽也可以为一容置腔,所述容置腔表面具有透明窗口,以便于观察荧光检测单元。所述荧光溶液或荧光溶液与光固化胶黏剂混合物也可先注入于毛细管或微流控芯片的流道中,再将所述毛细管或微流控芯片置于沟槽内,或者置于观测窗口13处。
实施例2
本实施例提供一种用于荧光免疫分析仪校准和质控的荧光标准卡,请参阅图3,其包括荧光标准卡本体1和荧光检测单元12,所述荧光检测单元12通过荧光油墨或荧光墨水、荧光颜料制得,荧光油墨、荧光墨水中含有耐老化剂和稳定剂,其中的荧光物质具有良好的分散性和颗粒均匀度,与其它常规荧光材料相比,具有更高的稳定性。设置于所述荧光标准卡本体1内。本实施例中,所述荧光检测单元12包括一载片121,其表面印刷或打印制作有荧光检测部,所述荧光检测部为打印或印刷的荧光油墨层或荧光墨水层,所述荧光检测部可从观测窗口13被观测到。进一步地,所述载片121表面还设置有一遮光片14,所述遮光片对应于所述荧光检测部的位置为镂空位,使荧光油墨检测部不被遮光片遮挡,遮光片的作用是让镂空位漏光的区域边界整齐,从而使得漏光的区域一致性高。
所述荧光检测单元12可以为直接采购的荧光色卡,也可是将荧光油墨通过平版印刷、凹版印刷、凸版印刷、孔版印刷、柔性版印刷、丝网印刷以及喷墨打印等工艺在载片121表面制备荧光条纹(荧光油墨检测线)或荧光油墨检测色块,所述载片为铜版纸、胶版纸、金属(如铝箔、不锈钢板等)、塑料(如PVC、PET等)、不干胶贴纸、透气膜、无纺布等纺织品、玻璃、陶瓷或木头等材质,遮光片材料可以是塑料、金属等,通过机加工、激光切割或者线割等方式制作,可以保持很高的尺寸精密度,保证标准卡测试信号窗口的一致性和精确度。
实施例3
本实施例还提供一种利用实施例1、2所述的荧光标准卡对荧光免疫分析仪进行校准和质控的测试方法,利用荧光强度与荧光物质浓度的关系、荧光强度与发光面积的关系原理,分别采用浓度参考法和面积参考法对设备性能进行评估。
1、浓度参考法
在一定浓度范围内,荧光物质的溶液浓度与光强呈线性关系(朗伯-比尔定律),当采用荧光溶液与光固化荧光材料制作荧光标准卡时,荧光物质在固化后固化剂的立体空间内分散程度不变,即空间的浓度不变,由于光固化胶黏剂为透明物质,不影响光的传输。因此,这种荧光标准卡可形成浓度和光强的线性关系。当采用荧光油墨(或荧光墨水、荧光颜料)制作荧光标准卡时,得到荧光检测线或荧光色块,由于荧光油墨在制作过程中经过了分散或混匀,在印刷或打印到载片121表面后,荧光物质也均匀分布。
通过将设备测试得到的光强和制作标准卡的一系列浓度的荧光溶液与光固化胶黏剂混合物或荧光油墨对应分析,可拟合得到测量信号值与浓度的线性关系,从而合理评估设备的测量线性度。
2、面积参考法
采用荧光溶液与光固化胶黏剂混合物或荧光油墨制备固态物质,在荧光物质分散良好的情况下,其表面单位面积荧光物质可以认为是均匀的,可将荧光溶液与光固化胶黏剂或荧光油墨按照不同的长宽比支撑一系列条带,本实施例中,荧光条带宽度均为5mm,高度分别为0.05mm、0.1mm、0.3mm、0.5mm、1mm、2mm、2.5mm、3mm和5mm(如图4所示)。最大和最小高度的条带宽度比为100,当条带表面荧光物质分布均匀且浓度相同的情况下,单位面积的条带发出的荧光信号值理论上是相同的,当标准卡以相同的方式经过光学模块底部并进行扫描时,对于光学模块接收到的条带上的荧光信号值将是单位面积的荧光信号的积分。如:当标准卡荧光条带的高度分别为0.1mm(标准卡1)和2mm(标准卡2)时,两个标准卡分别以相同的速度从荧光免疫分析仪光学模块底部通过时,在激发光和接收装置状态相同的情况下,当光学模块扫描卡2时,可认为光学模块以相同的条件连续读取了20个标准卡1的荧光信号,即荧光测量值为20个标准卡1的积分值,因此,荧光条带的高度或条带的面积与设备检测到的荧光信号值成正比。通过将设备测得的光强和条带的宽度对应分析,可拟合得到测量信号值与浓度的线性关系,从而合理评估测量设备的测量线性度。
在制作荧光标准卡和测试前,首先进行荧光检测单元的溯源操作,当荧光物质为荧光溶液或光固化材料时,首先进行荧光溶液原液的溯源:采购或制备荧光物质原料(如白色色酚N-(5-氯-2-甲氧基苯基)-3-羟基-2-萘甲酰胺和Ba3MgSi2O8:Eu2+,Mn2+),将荧光物质原料用水或其它溶剂配制为浓度为5mg/mL的荧光溶液原液,采用荧光分光光度计对制备的荧光溶液原液的发光强度进行测量,当制备的荧光溶液原液的发光强度与标准值的偏差在5%以内,用其制作荧光溶液或光固化荧光材料。
荧光溶液或光固化荧光材料的溯源方法为:根据现行测试浓度配比的要求,将上述荧光溶液原液用水或其它溶剂稀释为不同浓度的荧光溶液或光固化荧光材料,将不同浓度的荧光溶液加注到荧光标准卡中,得到具有不同浓度比的荧光标准卡,采用制得的荧光标准卡对荧光免疫分析仪的线性相关性进行测量。具体地,制作具有1-9级浓度梯度的荧光标准卡,即将荧光标准卡的荧光检测单元中荧光物质(荧光溶液或光固化荧光材料)制作为由低到高9级浓度,本实施例中,浓度分别为0%、1%、5%、10%、20%、30%、50%、60%、90%,或者用同一浓度的荧光材料制备1-9级宽度相同、高度不同的荧光条带(如图4所示),进而得到9种荧光信号梯度的荧光标准卡,对应的信号值可为10、100、500、1000、5000、10000、50000、100000、500000,根据浓度参考法或面积参考法,采用上述不同浓度梯度的荧光标准卡对荧光免疫分析仪进行校准测试。
荧光标准卡的制备过程中,用于容置荧光物质的的结构可以为设置于荧光标准卡本体1表面的沟槽,可使沟槽面积相同、配制浓度不同的荧光物质,得到具有浓度梯度的一组荧光标准卡,也可使荧光物质浓度相同,制作沟槽面积不同的一组荧光标准卡。所述荧光物质可为荧光溶液,得到液相标准卡,也可为荧光溶液与光固化胶黏剂的混合物(光固化荧光材料),当其加注于沟槽内后,用紫外光照射使其固化,形成卡槽固化荧光标准卡。
用于容置荧光物质的结构也可为毛细管,荧光物质为荧光溶液或光固化材料,制作时,将毛细管(如毛细采血管或石英、透明塑料材质的毛细管)插入所述荧光溶液或光固化材料中,液体由于毛细效应被吸取到毛细管中,形成连续的液段,当荧光物质为光固化材料时,用紫外光照射毛细管,使其中的混合物固化,存储于毛细管中,发光材料在固化后的混合物中保持分散状态,将毛细管截取一段(如5mm),将其嵌在标准卡的观测窗口13处,得到毛细管固化荧光标准卡,毛细管的直径与检测条纹宽度类似。根据荧光物质浓度不同制备为不同浓度的荧光标准卡(1-9级),或根据毛细管直径不同制备为不同线宽或截面积的荧光标准卡。
用于容置荧光物质的结构还可为微流控芯片的流道,荧光物质通过注射针管加注到微流控芯片的流道中,形成连续液段。荧光物质为荧光溶液与光固化胶黏剂的混合物,紫外固化后,荧光物质固化于流道中,根据荧光物质浓度不同制备为不同浓度的荧光标准卡(1-9级),或根据流道宽度不同制备为不同线宽或截面积的荧光标准卡。
或者,所述荧光物质为荧光油墨,在载片121(铜版纸/胶版纸/塑料薄片/玻璃片/金属薄片)上印刷制备荧光条带,将该荧光条带裁剪下来贴覆到标准卡表面或将载片置于荧光标准卡内部,荧光条带部分露出观测窗口13,当采用荧光油墨时,无需制作沟槽或容置腔、毛细管等。也可直接荧光油墨打印于荧光标准卡1表面。根据油墨浓度制备1-9级浓度梯度的荧光标准卡,或用同一浓度荧光油墨打印制备不同宽度的荧光条带,得到荧光标准卡。
所述荧光物质为荧光油墨的溯源方法为:使用荧光油墨印刷制备荧光色块,依据荧光油墨或墨水中荧光物质的浓度打印为不同荧光色块,本实施例中,荧光色块为9个,依次对应于9个荧光物质的浓度(如0%、1%、5%、10%、20%、30%、50%、60%、90%),色块制备后,用标准光源(UV-紫外光源,波长:365nm、功率:200W)以45度角度照射荧光条带,使用光密度计在垂直荧光色块的位置测量色块发射的荧光亮度测量值(如图5所示),测量时可采用滤光片以过滤干扰光,滤光片波长为615nm,半峰宽40nm,取3次测量得到的亮度值的算数平均值作为该荧光色块的最终测试结果,对9个荧光色块分别测量,并与条带所定义的标称值比较,相对偏差小于5%,则具有上述荧光浓度的荧光油墨可制备为于荧光标准卡并妥善保存、防潮、防污染、防长时间强光照射。将荧光油墨或荧光墨水打印成色块进行测试的原因主要是标准光源的光斑是有一定的面积的,需要一定的色块面积才能容纳光斑以进行测试。将同样的油墨制作色块和制作标准卡,只要色块通过该方法控制其信号,就可以通过这个方法对标准卡的荧光条带的工艺和性能参数进行控制和溯源。
当所述荧光物质为荧光墨水,通过喷墨打印制备不同浓度或不同面积梯度的荧光条带,具有荧光墨水的荧光标准卡制备过程和溯源过程与荧光油墨基本相同。
另外,还可以在载片表面设置遮光片,得到三明治结构的荧光标准卡。
对荧光免疫分析仪的校准测试包括重复性测试、稳定性测试、准确性测试和线性相关测试四个指标:
(1)重复性测试,指多次重复测定同一量时各测定值之间彼此相符合的程度,表示测定过程中随机误差的大小。取浓度梯度(或面积梯度)为1-9级的荧光标准卡分别插入设备的检测口21连续测量10次,读取测量值,按照以下公式计算每个荧光标准卡测量结果的变异系数(CV,%),根据所述变异系数判定荧光免疫分析仪的重复性:其中,s为样品测试值的标准差;为样品测试值的平均值,结果应符合涉及参数值的要求。
(2)稳定性测试,指间隔一定时间后,测试同一个对象,其前后测量数值之间的差异,表示系统的测量稳定程度。取第1、5、9浓度或面积梯度的荧光标准卡分别插入荧光免疫分析仪的卡槽中连续测量3次,4、8h后分别再测量3次,分别取每3次测量的平均值作为测量值,初始3次测量的平均值作为基准值,按照以下公式计算稳定性系数(a,%):其中,为第4h、第8h时3次测量的平均值;为初3次始测量的平均值。
(3)所述准确性测试指在一定实验条件下多次测定的平均值与真值相符合的程度,以相对误差来表示,它用来表示系统误差的大小。包括:取第1、5、9浓度或面积梯度的荧光标准卡分别插入荧光免疫分析仪的卡槽中各连续测量3次,分别取每3次测量的平均值作为每次的测量值,以标准卡的标称值为真值,与待测机的测试结果进行对比得到其测量的准确性,按照以下公式计算测量的准确度系数:其中,xi为每次的测量值,n为测量次数,X为真值。
(4)线性相关性,在不小于2个数量级的测量值范围内,线性相关系数(r)≥0.99。取T/C值为不同梯度的荧光标准卡,所述荧光标准卡的标称值的梯度的数量级不小于2,梯度数量不小于5,将所述荧光标准卡分别插入荧光免疫分析仪连续测量3次,计算每三次测量的平均值(Yi),并按照以下公式计算线性关系系数:
其中,Xi为荧光标准卡的标称值;Yi为标准卡测量3次的测量值的平均值。
荧光标称值是通过标准光源和标准测量仪(例如光密度计或者光功率计)经过反复测量得到统计平均值得到,或者通过理论计算得到的数值。通过使用标准光源和标准测量仪测量制备的大片色块的信号值,作为同一批次制取的荧光标准卡的标称值,用于检查和溯源该批次制取的标准卡的质量和参数是否在使用范围内。
上述参数中,准确性和线性相关性的真值为制备该荧光标准卡时根据工艺所赋予的信号值,将所测得的测量值和真值进行计算相对偏差和拟合线性相关性,可以评估设备本身的性能参数。通过使用该荧光标准卡定期对荧光免疫分析仪进行测量,并记录每次的测量数据,可以得到设备本身测量性能的质控数据,并通过分析仪自带的设备质控软件功能记录和显示出来(如图6所示),本实施例通过将设备性能质控和试剂卡的质控检测区分进行,结合所述的荧光标准卡,方便可靠地对设备本身的运行状态进行检测,在确定设备本身性能良好的基础上再进行试剂卡的质控,两个数据采集互相独立,但检测整个系统的质量监控又互相协助,互为补充,对于监控设备从设计、生产、使用和维修等整个过程具有重要作用。
显然,上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例,而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说,在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。
Claims (10)
1.一种用于荧光免疫分析仪校准和质控的荧光标准卡,其特征在于,所述荧光标准卡包括荧光标准卡本体和荧光检测单元,所述荧光检测单元由荧光溶液、光固化荧光材料、荧光油墨或荧光墨水制得。
2.根据权利要求1所述的用于荧光免疫分析仪校准和质控的荧光标准卡,其特征在于,所述荧光标准卡本体的观测窗口处开设置有沟槽或容置腔,所述荧光溶液、光固化荧光材料容置于所述沟槽或容置腔内;或者所述荧光溶液、光固化荧光材料容置于毛细管或微流控芯片的流道中,所述毛细管或所述微流控芯片设置于所述观测窗口处。
3.根据权利要求1所述的用于荧光免疫分析仪校准和质控的荧光标准卡,其特征在于,所述荧光标准卡本体内设置有载片,所述载片表面制作有荧光检测部,所述荧光检测部制作有荧光油墨或荧光墨水层,所述荧光检测部设置于荧光标准卡本体的观测窗口处。
4.根据权利要求3所述的用于荧光免疫分析仪校准和质控的荧光标准卡,其特征在于,所述载片表面还设置有遮光片,所述遮光片对应于所述荧光检测部的位置为镂空位。
5.一种利用如权利要求1-4任一项所述的荧光标准卡的测试方法,其特征在于,根据荧光检测单元中荧光物质的浓度或荧光检测单元的面积将荧光标准卡设定为1-9级梯度,采用具有不同浓度或面积梯度的荧光标准卡对荧光免疫分析仪进行校准测试,所述校准测试包括重复性测试、稳定性测试、准确性测试和线性相关测试。
6.根据权利要求5所述的测试方法,其特征在于,所述重复性测试包括:将具有1-9级浓度或面积梯度的荧光标准卡分别插入荧光免疫分析仪的检测口连续测量十次,按照以下公式计算每个荧光标准卡测量结果的变异系数,根据所述变异系数判定荧光免疫分析仪的重复性:其中,s为样品测试值的标准差;为样品测试值的平均值。
7.根据权利要求6所述的测试方法,其特征在于,所述稳定性测试包括:取第1、5、9浓度或面积梯度的荧光标准卡分别插入荧光免疫分析仪的卡槽中连续测量3次,4、8h后分别再测量3次,分别取每3次测量的平均值作为测量值,初始3次测量的平均值作为基准值,按照以下公式计算稳定性系数:其中,为第4h、第8h时3次测量的平均值;为初3次始测量的平均值;所述准确性测试包括:取第1、5、9浓度或面积梯度的荧光标准卡分别插入荧光免疫分析仪的卡槽中各连续测量3次,分别取每3次测量的平均值作为每次的测量值,以荧光标准卡的标称值为真值,按照以下公式计算测量的准确度系数:其中,xi为每次的测量值,n为测量次数,X为真值。
8.根据权利要求7所述的测试方法,其特征在于,所述线性相关性测试包括:取T/C值为不同梯度的荧光标准卡,所述荧光标准卡的标称值的梯度的数量级不小于2,梯度数量不小于5,将所述荧光标准卡分别插入荧光免疫分析仪连续测量3次,计算每三次测量的平均值,并按照以下公式计算线性关系系数:其中,Xi为荧光标准卡的标称值;Yi为标准卡测量3次的测量值的平均值。
9.根据权利要求8所述的测试方法,其特征在于,校准测试之前还包括荧光标准卡溯源的步骤,所述荧光标准卡中荧光物质为荧光溶液或光固化荧光材料,根据线性测试浓度配比的要求,将所述荧光溶液或光固化荧光材料稀释为1-9级浓度梯度,将不同浓度梯度的荧光溶液或光固化荧光材料分别注入荧光标准卡的卡槽或容置腔中,得到不同浓度梯度的荧光标准卡;或采用同一浓度的荧光物质,分别注入面积为1-9级的卡槽或容置腔内,得到面积不同的检测条带,通过上述溯源步骤进行溯源。
10.根据权利要求8所述的测试方法,其特征在于,校准测试之前还包括荧光标准卡溯源的步骤,所述荧光标准卡中荧光物质为荧光油墨或荧光墨水,将荧光油墨或荧光墨水制备于载片表面,根据荧光油墨或荧光墨水中荧光物质的浓度制备为1-9级荧光色块,用标准光源照射所述荧光色块并测量所述色块的的亮度,取3次测量得到的平均值作为色块的亮度测量值,当荧光色块的亮度测量值与色块定义的标称值间相对偏差小于5%,则安装于荧光标准卡本体;或采用同一荧光物质浓度,制备1-9级面积的荧光色块,通过上述溯源步骤进行溯源。
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