CN109619184B - 植物乳杆菌cqpc02在制备预防肝脏氧化损伤的药品中的应用 - Google Patents
植物乳杆菌cqpc02在制备预防肝脏氧化损伤的药品中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109619184B CN109619184B CN201811639687.8A CN201811639687A CN109619184B CN 109619184 B CN109619184 B CN 109619184B CN 201811639687 A CN201811639687 A CN 201811639687A CN 109619184 B CN109619184 B CN 109619184B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cqpc02
- lactobacillus plantarum
- liver
- oxidative damage
- milk
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 title claims abstract description 49
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 title claims abstract description 43
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 title claims abstract description 43
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 title claims abstract description 32
- 230000004792 oxidative damage Effects 0.000 title claims abstract description 17
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 10
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims abstract description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 16
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 14
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 13
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 12
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 11
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 11
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 11
- VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N tetrachloromethane Chemical compound ClC(Cl)(Cl)Cl VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 9
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 description 9
- 235000021110 pickles Nutrition 0.000 description 9
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 8
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 8
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 description 7
- 235000020185 raw untreated milk Nutrition 0.000 description 7
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 7
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- 235000015140 cultured milk Nutrition 0.000 description 6
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 6
- 210000004051 gastric juice Anatomy 0.000 description 5
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 5
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 4
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 4
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 235000021107 fermented food Nutrition 0.000 description 4
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 4
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 4
- 235000020122 reconstituted milk Nutrition 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 108700000707 bcl-2-Associated X Proteins 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 3
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 3
- 230000006799 invasive growth in response to glucose limitation Effects 0.000 description 3
- 235000020124 milk-based beverage Nutrition 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 3
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 description 2
- 206010067125 Liver injury Diseases 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 238000002869 basic local alignment search tool Methods 0.000 description 2
- 108700041737 bcl-2 Genes Proteins 0.000 description 2
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 2
- 229940093761 bile salts Drugs 0.000 description 2
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 2
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 2
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 210000004211 gastric acid Anatomy 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 2
- 231100000753 hepatic injury Toxicity 0.000 description 2
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 235000021108 sauerkraut Nutrition 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 2
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 2
- GOZMBJCYMQQACI-UHFFFAOYSA-N 6,7-dimethyl-3-[[methyl-[2-[methyl-[[1-[3-(trifluoromethyl)phenyl]indol-3-yl]methyl]amino]ethyl]amino]methyl]chromen-4-one;dihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.C=1OC2=CC(C)=C(C)C=C2C(=O)C=1CN(C)CCN(C)CC(C1=CC=CC=C11)=CN1C1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 GOZMBJCYMQQACI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 102100021569 Apoptosis regulator Bcl-2 Human genes 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003794 Gram staining Methods 0.000 description 1
- 101000971171 Homo sapiens Apoptosis regulator Bcl-2 Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 238000012449 Kunming mouse Methods 0.000 description 1
- 244000199885 Lactobacillus bulgaricus Species 0.000 description 1
- 235000013960 Lactobacillus bulgaricus Nutrition 0.000 description 1
- 201000010538 Lactose Intolerance Diseases 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 241000194020 Streptococcus thermophilus Species 0.000 description 1
- 241001052560 Thallis Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000009692 acute damage Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 102000055102 bcl-2-Associated X Human genes 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 210000003445 biliary tract Anatomy 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 230000009693 chronic damage Effects 0.000 description 1
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229940004208 lactobacillus bulgaricus Drugs 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 235000020191 long-life milk Nutrition 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 230000008621 organismal health Effects 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 1
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 1
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- GNBVPFITFYNRCN-UHFFFAOYSA-M sodium thioglycolate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)CS GNBVPFITFYNRCN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940046307 sodium thioglycolate Drugs 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
- A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
- A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
- A23C9/1234—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt characterised by using a Lactobacillus sp. other than Lactobacillus Bulgaricus, including Bificlobacterium sp.
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
- A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
- A23V2400/169—Plantarum
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Mycology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了保藏编号为CGMCC NO.14491的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CQPC02在制备预防肝脏氧化损伤的药品中的应用，不仅扩大了植物乳杆菌CQPC02的应用范围，提高了其开发利用价值，而且给肝脏氧化损伤的预防带来了新的希望。
Description
技术领域
本发明属于微生物技术领域，涉及一种乳酸菌在制备食品或药品中的应用。
背景技术
乳酸菌广泛存在于发酵食品、动物和人体体内。研究表明，乳酸菌与机体健康密切相关，具有提高免疫力、预防龋齿、缓解乳糖不耐受症和促进机体消化吸收等功能。此外其在提高食品营养价值、改善食品风味、延长保存时间和改善食品功能特性方面也发挥重要作用。为了更好的利用这些微生物资源，应开展更广泛的分离和鉴定工作，积累丰富的菌种资源，开发出丰富的工业用益生菌种类。
四川泡菜的生产过程是将新鲜的泡菜洗净，密封于坛内，在盐水中厌氧发酵浸泡的泡菜。泡菜水中含有丰富的天然乳酸菌，对泡菜风味和品质的形成起着关键作用。其使用可溶性成分(主要是糖和含氮物质)进行增殖，产生酸性物质并代谢出风味成分，使泡菜产生独特的酸脆口味。
肝脏在维持机体健康方面具有重要作用，包括代谢、解毒、造血、免疫、胆道和肝再生等。同时，肝脏也容易受到病毒、毒素、药物、酒精和创伤等一系列的刺激，最终都导致肝脏的急性或慢性损伤。临床研究发现，长期肝损伤可能导致肝纤维化、肝硬化和肝细胞癌。
发明内容
本发明的目的在于考察从泡菜水中分离得到的乳酸菌对肝脏氧化损伤的作用效果，以开发功能保健制品。
经研究，本发明提供如下技术方案：
保藏编号为CGMCC NO.14491的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CQPC02在制备食品或预防肝脏氧化损伤的药品中的应用。
优选的，所述食品为发酵食品。
优选的，所述发酵食品为乳酸菌奶饮料、发酵乳、乳粉或乳粉胶囊。
植物乳杆菌CQPC02是从泡菜水中分离得到，于2017年8月4日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏编号为CGMCC NO.14491。
本发明的植物乳杆菌CQPC02具有很好的抗胃酸能力，经pH3.0人工胃液处理3h后的存活率达到92.06％；在0.3％胆盐中该菌也可缓慢生长，生长效率达到无胆盐培养的17.3％。
四氯化碳诱导肝脏氧化损伤小鼠模型实验结果显示，植物乳杆菌CQPC02能明显减轻小鼠肝脏的氧化损伤，显著降低血清中ALT、AST和MDA的水平并提高SOD和GSH的水平，还能显著降低肝脏中IL-1β、TNF-α和Bax基因的表达水平并增加Bcl-2基因的表达水平。由此可见，植物乳杆菌CQPC02对肝脏氧化损伤具有较好的预防作用。
本发明的有益效果在于：本发明提供了植物乳杆菌CQPC02在制备食品或预防肝脏氧化损伤的药品中的应用，不仅扩大了植物乳杆菌CQPC02的应用范围，提高了其开发利用价值，而且给肝脏氧化损伤的预防带来了新的希望。
附图说明
图1为植物乳杆菌CQPC02的菌落形态。
图2为植物乳杆菌CQPC02的细胞形态。
图3为植物乳杆菌CQPC02的16S rDNA PCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳图，其中M为DNA分子量标准，0为阴性对照，1为植物乳杆菌CQPC02。
图4为实验各组小鼠肝脏病理学变化。
图5为实验各组小鼠血清中相关因子水平。
图6为实验各组小鼠肝脏中相关基因表达水平。
图5和图6中，##表示与正常组比较存在显著差异(p<0.05)；**表示与模型组比较存在显著差异(p<0.05)。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本发明的优选实施例进行详细的描述。
实施例1、植物乳杆菌CQPC02的分离与鉴定
1、实验材料
采自重庆市南岸区农家自然发酵泡菜水6份，分别吸取40mL泡菜水放入无菌离心管中，置于食品采样箱内，放于实验室4℃冰箱保存备用。
2、乳酸菌的分离纯化
分别取1mL泡菜水样品，用无菌生理盐水进行10倍梯度稀释至10-6，然后分别取10-4、 10-5、10-6 3个梯度的稀释液100μL进行平板涂布，37℃培养24-48h，观察并记录菌落形态。挑取平板上不同形态的菌落进行划线分离，经37℃培养48h后，再次挑取平板上不同形态的单菌落进行划线分离，如此重复2至3次，直至得到形态一致的纯的单菌落。
编号为CQPC02的菌株菌落形态如图1所示，菌落颜色多为白色或乳白色，形状为圆形，边缘整齐，表面湿润光滑。
3、乳酸菌的初步鉴定
挑取平板上的纯菌落接种于5mL MRS液体培养基中，37℃培养24h。取上述含菌培养基1mL于无菌离心管中，4000r/min离心10min后弃去上层培养基，菌体沉淀重悬于无菌生理盐水并进行革兰氏染色镜检，革兰氏染色镜检为阳性的初步鉴定为乳酸菌。
编号为CQPC02的菌株革兰氏染色呈现阳性，在100倍油镜下，菌株细胞形态如图2所示，细胞杆状，成单、成对或者成链，不形成芽孢，两端圆形。
4、乳酸菌DNA提取
将已纯化的疑似目标菌株接种于MRS肉汤中，37℃培养18-24h后，采用细菌基因组DNA提取试剂盒进行DNA提取。提取的DNA放于-20℃冰柜保藏备用。
5、基因组DNA PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳检测
取提取的DNA，PCR扩增16S rDNA，其中上游引物27F(5'－AGAGTTTGATCCTGGCTCAG－3'，SEQ ID No.1)1μL、下游引物1495R(5'－CTACGGCTACCTTGTTACGA－ 3'，SEQ IDNo.2)1μL，2×Taq plus Buffer 12.5μL、模板DNA 1μL，用无菌dd H2O将体系补足至25μL。并以无菌超纯水替代模板DNA作为阴性对照。扩增条件为：94℃5min；94℃ 30s，55℃30s，72℃1min，共29个循环；最后72℃延伸5min。然后取5μL扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，琼脂糖浓度为1.5％，电泳条件为110V，45min。
编号为CQPC02的菌株16S rDNA扩增产物的琼脂糖凝胶电泳检测结果如图3所示，阴性对照组的泳道无条带，表明PCR扩增过程中未受到污染；编号为CQPC02的菌株的泳道有一条长度约为1500bp的条带，符合预期扩增片段的长度。
将编号为CQPC02的菌株的16S rDNA扩增产物委托北京擎科生物技术有限公司进行测序，测得序列如SEQ ID No.3所示。使用NCBI中的BLAST(Basic Local AlignmentSearch Tool) 程序对测得序列进行同源性比对分析，结果显示，编号为CQPC02的菌株为乳酸菌中的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)，其与Gene Bank数据库中已知乳酸菌的同源性均达99％。
6、乳酸菌体外抗性筛选
(1)耐受0.3％胆盐的能力
在MRS-THIO培养基(含0.2％巯基乙酸钠的MRS肉汤)中添加猪胆盐使其浓度为0.3％， 121℃灭菌15min；将活化好的5mL菌种以2％(v/v)的接种量分别接入不含胆盐(0.0％)的 MRS-THIO培养基和含0.3％胆盐的MRS-THIO培养基中，以空白培养基(未接菌的MRS-THIO培养基)为对照，37℃培养24h后，分别测定上述不同浓度培养基的OD600nm值，按公式(1)计算菌株对胆盐的耐受力：
结果显示，编号为CQPC02的菌株在0.3％胆盐中能够缓慢生长，生长效率达到无胆盐培养的17.3±0.19％。
(2)人工胃液耐受性试验
人工胃液的配制：由0.2％NaCl和0.35％胃蛋白酶组成，用1mol/L HCl调节pH为3.0，再用孔径为0.22μm的滤膜过滤除菌备用。
在超净工作台中吸取5mL培养好的含菌培养基于10mL无菌离心管中，经3000r/min离心10min，弃去上层培养基并收集菌体，加入等体积(5mL)无菌生理盐水混匀制成菌悬液，然后取1mL菌悬液与9mL pH 3.0的人工胃液混匀，此时取1mL上述混合液作为人工胃液处理0h的样品，剩余9mL混合液置于恒温水浴摇床(37℃，150r/min)中培养3h。0 h和3h的样品分别经10倍梯度稀释，选择合适梯度采用平板涂布的方法测定活菌数，在MRS 固体培养基上37℃培养48h，按公式(2)计算存活率(％)。
结果显示，编号为CQPC02的菌株具有很好的抗胃酸能力，经pH3.0人工胃液处理3h后的存活率达到92.06±6.91％。
实施例2、植物乳杆菌CQPC02对肝脏氧化损伤的预防作用
1、实验动物
健康6周龄雄性昆明小鼠，30只，购于重庆医科大学实验动物中心。饲养于室温25±2℃、相对湿度50±10％、12h光照/12h黑暗的标准化实验室中，适应性喂养一周后开始实验。
2、实验方法
30只小鼠根据体重随机分为3组，每组10只，分别为正常组、模型组和L.plantarum组。实验共持续14天，正常组和模型组小鼠每天自由摄食基础饲料和饮水，L.plantarum组小鼠每天除自由摄食基础饲料和饮水外，还按1.0×109CFU/kg·BW灌胃植物乳杆菌CQPC02；实验最后一天，对模型组和L.plantarum组小鼠按10mL/kg·BW腹腔注射1％四氯化碳的大豆油溶液，正常组腹腔注射等量大豆油。注射完毕后，所有小鼠禁食不禁水，16h后脱脊椎处死小鼠，取适量肝脏固定于10％福尔马林溶液中，按照HE染色流程制作其HE染色切片，另取适量肝脏匀浆；取小鼠血液，于4℃、3000r/min离心15min，收集血清。
3、小鼠肝脏病理学变化观察
实验各组小鼠肝脏病理学变化如图4所示，相对于正常组，模型组小鼠肝脏出现严重损伤，伴有肝细胞坏死、炎性细胞浸润和肝细胞在中央静脉周围无规则排列，而L.plantarum 组小鼠肝脏的损伤程度明显减弱，说明植物乳杆菌CQPC02对四氯化碳引起的肝脏氧化损伤具有一定的预防作用。
4、小鼠血清中相关因子水平测定
按照ALT、AST、SOD、GSH和MDA试剂盒说明书测定小鼠血清中上述因子的水平。
结果如图5所示，相对于模型组，L.plantarum组小鼠血清中ALT、AST、SOD、GSH 和MDA的水平均得到明显改善，血清中ALT、AST和MDA的水平均显著低于模型组，而 SOD和GSH的水平均显著高于模型组，说明植物乳杆菌CQPC02对四氯化碳引起的肝脏氧化损伤具有一定的预防作用。
5、小鼠肝脏中相关基因表达水平的测定
取小鼠肝脏匀浆，按照Trizol试剂盒说明书提取RNA，然后将RNA反转录为cDNA，以得到的cDNA为模板，按照
Green实时荧光定量PCR方法测定基因IL-1β、TNF-α、 Bcl-2和Bax相对于β-actin基因的表达水平。
结果如图6所示，与模型组相比，L.plantarum组小鼠肝脏中IL-1β、TNF-α和Bax基因的表达水平显著降低，而Bcl-2基因的表达水平显著增加，说明植物乳杆菌CQPC02对四氯化碳引起的肝脏氧化损伤及炎症相关基因的表达具有一定的调节作用。
实施例3、利用植物乳杆菌CQPC02制备发酵食品
植物乳杆菌CQPC02原始菌种的保存：在温度-75℃下以30wt％甘油悬液形式保存，或在温度4℃下以冷冻干燥菌粉的形式保存。
植物乳杆菌CQPC02工作发酵剂的制备，可采用下述两种方法中的任意一种：
第一种方法：将植物乳杆菌CQPC02的原始菌种接种于经110℃灭菌10min的12wt％脱脂乳中，37℃培养14-16h至凝乳，连续培养活化两代，用作母发酵剂；然后将母发酵剂按3-5vol％接种于灭菌乳中，培养14-16h至凝乳，凝乳中的活菌数约109cfu/mL，用作工作发酵剂。
第二种方法：将植物乳杆菌CQPC02的原始菌种接种于MRS液体培养基中，37℃培养12-16h进行活化，连续活化两代，然后将活化培养物按2-4vol％接种于MRS培养基中，培养16-18h，4℃、4000r/min离心15min，去除上清夜，细胞沉淀用无菌脱脂乳制成悬浮液，用作工作发酵剂。
1、制备乳酸菌奶饮料
将原料乳(选自脱脂奶、鲜奶和复原奶中的一种或多种)在95℃下加热杀菌20min或在 140℃下高温热杀菌2s，冷却到4℃，加入植物乳杆菌CQPC02工作发酵剂使其浓度达到106cfu/ml以上，即得到含植物乳杆菌CQPC02的乳酸菌奶饮料，4℃冷藏保存。
2、制备发酵乳
将原料乳(选自脱脂奶、鲜奶和复原奶中的一种或多种)在95℃下加热杀菌20min或在 140℃下高温热杀菌2s，冷却到37℃，按照原料乳体积的4％加入植物乳杆菌CQPC02工作发酵剂，37℃发酵16h，即得到植物乳杆菌CQPC02发酵乳，4℃冷藏保存。
或者，将原料乳(选自脱脂奶、鲜奶和复原奶中的一种或多种)在95℃下加热杀菌20min 或在140℃下高温热杀菌2s，冷却到37℃，按照原料乳体积的4％加入植物乳杆菌CQPC02 工作发酵剂，再按照原料乳体积的4％加入其它可共生的制备发酵乳的商业发酵剂(如保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌)，混匀，37℃混菌发酵至滴定酸度以乳酸计为0.6-0.7％，即得到混菌发酵乳，4℃冷藏保存。
3、制备乳粉
将原料乳(选自脱脂奶、鲜奶和复原奶中的一种或多种)在95℃下加热杀菌20min或在 140℃下高温热杀菌2s，冷却到37℃，按照体积比3：1加入植物乳杆菌CQPC02发酵乳，均质，真空浓缩，喷雾干燥，即得到含植物乳杆菌CQPC02的乳粉。
4、制备乳粉胶囊
将含植物乳杆菌CQPC02的乳粉装入胶囊壳中，即得到乳粉胶囊。
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过参照本发明的优选实施例已经对本发明进行了描述，但本领域的普通技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离所附权利要求书所限定的本发明的精神和范围。
序列表
<110> 重庆第二师范学院
<120> 植物乳杆菌CQPC02在制备预防肝脏氧化损伤的食品或药品中的应用
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
agagtttgat cctggctcag 20
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
ctacggctac cttgttacga 20
<210> 3
<211> 1421
<212> DNA
<213> 植物乳杆菌CQPC02(Lactobacillus plantarum CQPC02)
<400> 3
ttaggcggtg gttctaaagg ttacccaccg actttgggtg ttaaaactct catggtgtga 60
cgggcggtgt gtacaaggcc cgggaacgta ttcaccgcgg catgctgatc cgcgattact 120
agcgattccg acttcatgta ggcgagttgc agcctacaat ccgaactgag aatggcttta 180
agagattagc ttactctcgc gagttcgcaa ctcgttgtac catccattgt agcacgtgtg 240
tagcccaggt cataaggggc atgatgattt gacgtcatcc ccaccttcct ccggtttgtc 300
accggcagtc tcaccagagt gcccaactta atgctggcaa ctgataataa gggttgcgct 360
cgttgcggga cttaacccaa catctcacga cacgagctga cgacaaccat gcaccacctg 420
tatccatgtc cccgaaggga acgtctaatc tcttagattt gcatagtatg tcaagacctg 480
gtaaggttct tcgcgtagct tcgaattaaa ccacatgctc caccgcttgt gcgggccccc 540
gtcaattcct ttgagtttca gccttgcggc cgtactcccc aggcggaatg cttaatgcgt 600
tagctgcagc actgaagggc ggaaaccctc caacacttag cattcatcgt ttacggtatg 660
gactaccagg gtatctaatc ctgtttgcta cccatacttt cgagcctcag cgtcagttac 720
agaccagaca gccgccttcg ccactggtgt tcttccatat atctacgcat ttcaccgcta 780
cacatggagt tccactgtcc tcttctgcac tcaagtttcc cagtttccga tgcacttctt 840
cggttgagcc gaaggctttc acatcagact taaaaaaccg cctgcgctcg ctttacgccc 900
aataaatccg gacaacgctt gccacctacg tattaccgcg gctgctggca cgtagttagc 960
cgtggctttc tggttaaata ccgtcaatac ctgaacagtt actctcagat atgttcttct 1020
ttaacaacag agttttacga gccgaaaccc ttcttcactc acgcggcgtt gctccatcag 1080
actttcgtcc attgtggaag attccctact gctgcctccc gtaggagttt gggccgtgtc 1140
tcagtcccaa tgtggccgat taccctctca ggtcggctac gtatcattgc catggtgagc 1200
cgttacccca ccatctagct aatacgccgc gggaccatcc aaaagtgata gccgaagcca 1260
tctttcaaac tcggaccatg cggtccaagt tgttatgcgg tattagcatc tgtttccagg 1320
tgttatcccc cgcttctggg caggtttccc acgtgttact caccagttcg ccactcactc 1380
aaatgtaaat catgatgcaa gcaccaatca ataccagagt c 1421
Claims (1)
1.保藏编号为CGMCC NO.14491的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CQPC02在制备预防肝脏氧化损伤的药品中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201811639687.8A CN109619184B (zh) | 2018-12-29 | 2018-12-29 | 植物乳杆菌cqpc02在制备预防肝脏氧化损伤的药品中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201811639687.8A CN109619184B (zh) | 2018-12-29 | 2018-12-29 | 植物乳杆菌cqpc02在制备预防肝脏氧化损伤的药品中的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN109619184A CN109619184A (zh) | 2019-04-16 |
| CN109619184B true CN109619184B (zh) | 2022-04-15 |
Family
ID=66054922
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201811639687.8A Active CN109619184B (zh) | 2018-12-29 | 2018-12-29 | 植物乳杆菌cqpc02在制备预防肝脏氧化损伤的药品中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN109619184B (zh) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114774302B (zh) * | 2022-03-09 | 2023-06-16 | 善恩康生物科技（苏州）有限公司 | 植物乳杆菌cqpc02在制备用于预防和/或治疗狼疮性肾炎的产品中的应用 |
| CN115176841A (zh) * | 2022-06-27 | 2022-10-14 | 重庆第二师范学院 | 一种降低血糖功能的复合植物乳杆菌制剂制备方法及装置 |
| CN115418332A (zh) * | 2022-09-02 | 2022-12-02 | 重庆第二师范学院 | 一种具有预防和改善化学性肝损伤的植物乳杆菌 |
| CN115873761A (zh) * | 2022-11-10 | 2023-03-31 | 重庆第二师范学院 | 一种植物乳杆菌ksfy01及其应用 |
| CN116042490B (zh) * | 2023-03-03 | 2023-09-01 | 善恩康生物科技（苏州）有限公司 | 一种用于抗疲劳、提高运动能力的复合益生菌及制备方法和应用 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102994422A (zh) * | 2012-11-12 | 2013-03-27 | 北京和美科健生物技术有限责任公司 | 一种植物乳杆菌在改善酒精性肝损伤中的应用 |
| CN106074623A (zh) * | 2016-07-07 | 2016-11-09 | 吉林省农业科学院 | 植物乳杆菌在制备具有保肝护肝功能的产品中的应用 |
| CN107151638A (zh) * | 2017-05-25 | 2017-09-12 | 中驭(北京)生物工程有限公司 | 一株改善肝功能的植物乳杆菌zy001及其在发酵乳中的应用 |
| CN108384735A (zh) * | 2018-03-15 | 2018-08-10 | 江南大学 | 植物乳杆菌ccfm1019、其发酵食品及其在制备药物中的应用 |
-
2018
- 2018-12-29 CN CN201811639687.8A patent/CN109619184B/zh active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102994422A (zh) * | 2012-11-12 | 2013-03-27 | 北京和美科健生物技术有限责任公司 | 一种植物乳杆菌在改善酒精性肝损伤中的应用 |
| CN106074623A (zh) * | 2016-07-07 | 2016-11-09 | 吉林省农业科学院 | 植物乳杆菌在制备具有保肝护肝功能的产品中的应用 |
| CN107151638A (zh) * | 2017-05-25 | 2017-09-12 | 中驭(北京)生物工程有限公司 | 一株改善肝功能的植物乳杆菌zy001及其在发酵乳中的应用 |
| CN108384735A (zh) * | 2018-03-15 | 2018-08-10 | 江南大学 | 植物乳杆菌ccfm1019、其发酵食品及其在制备药物中的应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 新疆传统乳制品中抗氧化乳酸菌的筛选及其特性的初步研究;蒋琰洁;《中国优秀博硕士学位论文全文数据库（硕士）工程科技I辑》;20160215(第02期);B024-280 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN109619184A (zh) | 2019-04-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN109619184B (zh) | 植物乳杆菌cqpc02在制备预防肝脏氧化损伤的药品中的应用 | |
| CN105132318B (zh) | 植物乳杆菌Grx16及其应用 | |
| CN109481476B (zh) | 发酵乳杆菌cqpc04在制备食品或改善溃疡性结肠炎的药品中的应用 | |
| CN109628346B (zh) | 发酵乳杆菌cqpc04及其在制备发酵食品中的应用 | |
| CN112195139B (zh) | 植物乳杆菌菌株ldvs007及其应用 | |
| CN104357353A (zh) | 一株植物乳杆菌在发酵果蔬汁制作中的应用 | |
| CN114591854B (zh) | 一种具有降解植物性脂肪功能的植物乳杆菌lz026及其应用 | |
| CN116396890A (zh) | 用于防治结肠癌的植物乳杆菌zjuids15及其应用 | |
| CN109504636B (zh) | 一种植物乳杆菌p12及其用途 | |
| CN109362882B (zh) | 发酵乳杆菌cqpc07及其在制备食品或改善溃疡性结肠炎的药品中的应用 | |
| CN108373983B (zh) | 戊糖片球菌ccfm1012、其发酵食品及其在制备拮抗空肠弯曲杆菌感染药物中的应用 | |
| CN109645490A (zh) | 植物乳杆菌cqpc02在制备预防糖尿病的食品或药品中的应用 | |
| CN109619183B (zh) | 植物乳杆菌cqpc03在制备预防肝脏氧化损伤的药品中的应用 | |
| US11160839B2 (en) | Pediococcus pentosaceus CCFM1012 and application thereof to preparation of Campylobacter jejuni infection antagonism medicine | |
| CN117402773A (zh) | 一种具有多种益生功能的植物乳杆菌及其在无盐发酵中的应用 | |
| CN110250270B (zh) | 一种利用植物乳杆菌提高发酵乳叶酸含量的方法 | |
| CN116555097A (zh) | 一种耐辣椒碱胁迫的植物乳杆菌、菌剂及其应用 | |
| CN113046276B (zh) | 一种母乳源鼠李糖乳杆菌及其应用 | |
| CN113717887B (zh) | 一种鹅源植物乳杆菌及其应用 | |
| CN109609409A (zh) | 发酵乳杆菌cqpc06及其在制备改善溃疡性结肠炎的食品或药品中的应用 | |
| CN110699271B (zh) | 植物乳杆菌cqpc02及其在制备改善便秘的食品中的应用 | |
| CN114410532A (zh) | 一株降低血浆氧化三甲胺和盲肠三甲胺水平的长双歧杆菌及其应用 | |
| CN110982737A (zh) | 一种犬用生物被膜态乳酸菌剂及其制备方法 | |
| CN110692726A (zh) | 植物乳杆菌cqpc01及其在制备改善便秘的食品中的应用 | |
| CN109364102A (zh) | 植物乳杆菌cqpc03在制备预防糖尿病的食品或药品中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20221017 Address after: 215300 Sanjia Road 388, Zhangpu Town, Kunshan City, Suzhou City, Jiangsu Province Patentee after: THANKCOME BIOTECHNOLOGY (SUZHOU) CO.,LTD. Address before: No.9, Xuefu Avenue, Nan'an District, Chongqing, 400067 Patentee before: CHONGQING University OF EDUCATION |
|
| TR01 | Transfer of patent right |