CN117402773A - 一种具有多种益生功能的植物乳杆菌及其在无盐发酵中的应用 - Google Patents

一种具有多种益生功能的植物乳杆菌及其在无盐发酵中的应用 Download PDF

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CN117402773A CN202311189153.0A CN202311189153A CN117402773A CN 117402773 A CN117402773 A CN 117402773A CN 202311189153 A CN202311189153 A CN 202311189153A CN 117402773 A CN117402773 A CN 117402773A
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Abstract

本发明公开了一种具有多种益生功能的植物乳杆菌及其在无盐发酵中的应用。本发明得到一株具有多种益生功能的植物乳植杆菌(Lactiplantibacillus plantarum)JT717菌株，该菌株已于2023年06月07日保存于广东省菌种保藏中心，保藏编号为：GDMCC No：63531。本发明提供的JT717菌株分离自发酵泡菜水，产酸能力高，具有很强的耐酸和耐盐能力，还具有清除DPPH自由基的能力，能够降解亚硝酸盐和脂多糖。将JT717菌株制成菌剂或同时与SA12菌剂联用具有协同作用，能快速发酵泡菜，降低泡菜中的亚硝酸盐和脂多糖含量，为制备无盐酸菜提供技更多技术手段。

Description

一种具有多种益生功能的植物乳杆菌及其在无盐发酵中的 应用
技术领域
本发明属于微生物和食品加工技术领域。更具体地，涉及一种具有多种益生功能的植物乳杆菌及其在无盐发酵中的应用。
背景技术
酸菜是一种中国传统的发酵蔬菜食品，富含维生素、矿物质、有机酸和乳酸菌，其产生的乳酸菌的作用包括抑制有害微生物的生长繁殖及产生独特的风味物质，对发酵泡菜的品质有着重要影响。在蔬菜发酵后其风味会得到改善，保藏期也会延长。采用添加乳酸菌进行发酵其总酸含量明显要高于自然发酵，同时也改善了酸菜的口感。乳酸菌的使用除了对泡菜的风味有重要影响外，在发酵中也有着各种益生作用，产生多种有益物质，如高产酸能力，抗氧化，降解亚硝酸盐、产γ-氨基丁酸、降解内毒素(LPS)和降解生物胺等。目前从泡菜中分离出多种具有多种优良功能的乳酸菌，对泡菜发酵的应用有巨大前景。
在发酵中不仅仅会产生有益物质，也同样会产生有害物质，如亚硝酸亚、黄曲霉素以及脂多糖等；其中，脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)是革兰阴性菌细胞壁外膜的重要组成成分，由革兰阴性菌死亡后释放出来。循环系统中来源于肠道微生物的LPS会引起代谢性内毒素血症。LPS可以通过快速诱导细胞生物合成和释放促炎症细胞因子，如肿瘤坏死因-α、IL-1、IL-6及其他生物活性代谢物，引起机体产生炎症反应，使机体长期处于低度炎症，会产生各种代谢性疾病。由此可知，在泡菜发酵中也会产生大量的LPS，会对人体造生危害。
而酸菜的传统加工方法是利用乳酸菌的自然发酵和食盐保存作用进行加工处理，目前酸菜加工企业普遍采用超过20％以上用量的高盐腌制的方法进行加工，这样虽然可保留酸菜的色泽和脆度，但是在产品加工食用前需要经过脱盐处理，才能降低其盐含量，这样不仅增加了生产成本，同时还会造成环境的污染。现有研究采用的发酵菌剂都具有较好的降解亚硝酸盐、产酸等作用，鲜少有报道能同时具有降解亚硝酸盐和脂多糖的发酵菌，来降低发酵制品对人体的危害，同时能减少泡菜发酵中腌制盐的使用，简化发酵工艺，降低发酵成本，以提发酵高酸菜的品质，对发酵泡菜的制备具有重要的意义。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有泡菜发酵菌株的不足，提供一种具有多种益生功能的植物乳杆菌及其在无盐发酵中的应用。
本发明的目的是提供一株具有多种益生功能的植物乳植杆菌(Lactiplantibacillus plantarum)JT717菌株。
本发明另一目的是提供JT717菌株的应用。
本发明又一目的是提供一种降解亚硝酸盐和/或脂多糖的制剂。
本发明再一目的是提供一种无盐发酵泡菜的制备方法。
本发明另一目的是提供JT717菌株联合SA12菌株在发酵无盐泡菜或在制备无盐泡菜中的应用。
本发明还一目的是提供一种无盐发酵菌剂。
本发明上述目的通过以下技术方案实现：
本发明从自然发酵的酸菜液中分离鉴定得到一株具有多种益生功能的植物乳植杆菌(Lactiplantibacillus plantarum)JT717菌株，该菌株已于2023年06月07日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)（广州市先烈中路100号大院59号楼5楼），保藏编号为：GDMCC No：63531。研究显示JT717菌株具有较强的产酸能力，产酸效果达到22.10g/L；具有良好耐酸和耐胆盐能力，在pH 2.5时存活率11.11％，pH 3.0时存活率为80.59％，0.3％胆盐浓度中存活率为41.28％；有良好的清除DPPH性能，清除率为51.10％；对亚硝酸盐的降解率为97.99％，还具有较好的降解脂多糖(LPS)能力，4h降解率为67.58％。
因此，本发明提供植物乳植杆菌JT717菌株或其菌液的以下应用：
在降解亚硝酸盐和/或脂多糖中的应用。
在制备降解亚硝酸盐和/或脂多糖制剂中的应用。
在制备低亚硝酸盐和/或脂多糖含量的发酵食品中的应用。
在制备无盐发酵食品中的应用。
优选地，所述发酵食品为发酵泡菜。
更优选地，所述泡菜为酸菜，采用芥菜制备得到。
本发明提供一种降解亚硝酸盐和/或脂多糖的制剂，含植物乳植杆菌JT717菌株或其菌液。
本发明提供一种无盐发酵泡菜的制备方法，采用植物乳植杆菌JT717菌株或其菌液进行发酵制备得到。本发明提供的制备方法不采用腌制盐进行制备，无盐发酵，此方法生产的酸菜富含活性乳酸菌，发酵液中含量约为：107CFU/mL，不添加任何添加剂、防腐剂，酸爽可口，食用广泛具有开胃、助食增强营养和免疫的功效，能降低酸菜中亚硝酸亚和脂多糖的含量；并缩短生产时间，降低成本，大量减少环境污染。
本发明还提供一种无盐酸菜，由如下重量份的主要原料制备而成：芥菜50～100份、植物乳植杆菌JT717菌剂0.01～0.2份、玉米发酵液100～200份。
作为一种更加具体的实施例，本发明提供无盐酸菜由如下方法制备而成：
(1)将100份玉米发酵液接种0.1份JT717菌剂，发酵两天；
(2)采用新鲜的芥菜50份，将原料用水清洗干净；
(3)在容器中加水烧开，将清洗的芥菜放入热水中热烫，时间为30s；
(4)将热烫后的芥菜放在太阳下晾晒干水分；
(5)将晾晒好的芥菜放置于发酵罐中，倒入(1)中发酵好的玉米发酵液，使发酵液浸没芥菜，并填满整个发酵罐；将发酵罐密封放入25℃温度下发酵9天；
(6)将发酵好的酸菜取出，清洗表面发酵液，进行真空打包。
本发明采用JT717菌株进行发酵泡菜的制备，能够低剂量快速发酵酸菜，以新鲜芥菜为原料，通过烫漂、沥干制备的酸菜无盐、还富含多种有益成分，具有营养丰富、风味独特、无盐健康等特点；进一步将JT717菌株与SA12菌株联合使用，进行发酵制备大大降低了酸菜中LPS的含量，且SA12和JT717联合使用具有协同增效的作用，能使发酵酸菜中LPS的含量下降81.32％。
因此，本发明还提供JT717菌株联合SA12菌株在发酵无盐泡菜或在制备无盐泡菜中的应用。
本发明还提供一种无盐发酵菌剂，含JT717菌株和/或SA12菌株。
优选地，所述SA12菌株为凝结芽孢杆菌(Weizmannia coagulans)SA12菌株，该菌株已于2022年06月06日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，菌种保藏号为GDMCC NO:62518。
更优选地，所述无盐发酵菌剂由JT717菌株或SA12菌株制备的菌剂按照质量比1：1的比例混合制备得到。
更优选地，所述菌剂的菌数含量不低于1×1011CFU/g。
进一步优选地，所述菌剂的制备方法为：活化菌株，将菌株按2％接种量接种于MRS液体培养基中个，37℃培养24h，共活化三次。取活化后的菌株，按2％接种量，分别大批量的接种到液体MRS中，静置培养发酵24h。再取培养好的发酵液，用离心机离心发酵液，离心条件为：4℃、10000r/min、10min，取出倒掉上清液，保留下层菌泥，在加入生理盐水洗涤菌泥，然后离心保留菌泥，重复三次，最后得到干净的菌泥，两种菌株分开制备。取制作出来的菌泥，按菌泥：保护液＝1:3的比例加入菌株保护液，保护液的配方为：20％脱脂乳粉、12％甘露醇、6％谷氨酸钠、0.1％吐温-80，把保护剂与菌泥混匀，放入-80℃冰箱冷冻12h，冷冻12h后将冷冻的菌泥放入冷冻干燥机中冷冻48h，得到菌株冻干粉菌剂。
本发明具有以下有益效果：
本发明提供一株有多种益生功能且能低剂量快速无盐发酵芥菜的植物乳植杆菌(Lactiplantibacillus plantarum)JT717菌株，研究显示JT717菌株分离自发酵泡菜水，产酸能力高，具有很强的耐酸和耐盐能力，具有清除DPPH自由基的能力，能够降解亚硝酸盐和脂多糖，能用于制备无盐发酵酸菜，降低亚硝酸盐和脂多糖含量，提高酸菜食品的安全性。进一步将JT717制备为菌剂或与SA12菌株联合进行泡菜发酵产，在采用较低剂量的条件下能快速发酵芥菜，降低泡菜中亚硝酸盐和脂多糖含量，能大大降低泡菜中脂多糖含量，与SA12联合发酵时具有协同效果，比单独添加JT717降解率更高。
本发明为减少腌制盐的使用，降低发酵产品中亚硝酸盐和脂多糖含量，并为制备无盐酸菜提供了更多的方法手段，为提高发酵酸菜品质提供了技术支持。本发明提供无盐酸菜的发酵工艺简单、成本低、接种量少、发酵时间短、发酵产品健康无公害，具有良好的工业化应用前景。
附图说明
图1为JT717菌株菌落图。
图2为JT717菌株的系统发育树图。
图3为JT717菌株的DPPH清除率结果图。
图4为JT717菌株亚硝酸盐清除率结果图。
图5为JT717菌株的耐酸结果图。
图6为JT717菌株的耐胆盐结果图。
图7为JT717菌株的降解LPS能力结果图。
图8为不同发酵酸菜中LPS含量结果图。
具体实施方式
以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
MRS液体培养基：蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，牛肉浸膏10g/L，无水葡萄糖20g/L，磷酸氢二钾2g/L，无水乙酸钠5g/L，柠檬酸三铵2g/L，硫酸镁0.1g/L，硫酸锰0.05g/L，吐温80 1g/L，用蒸馏水配制而成。
MRS固体培养基：蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，牛肉浸膏10g/L，无水葡萄糖20g/L，磷酸氢二钾2g/L，无水乙酸钠5g/L，柠檬酸三铵2g/L，硫酸镁0.1g/L，硫酸锰0.05g/L，吐温80 1g/L，琼脂15g/L，用蒸馏水配制而成。
玉米发酵液：玉米粉24g/L，红糖15g/L，用蒸馏水配制而成。
本发明采用的SA12菌株为凝结芽孢杆菌(Weizmannia coagulans)SA12菌株，该菌株已于2022年06月06日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，菌种保藏号为GDMCC NO:62518；该菌株已经公开并记载在现有技术中：CN115161237A一株能降解脂多糖并抑制α-葡萄糖苷酶的凝结芽孢杆菌及其应用。
实施例1菌株的筛选和鉴定
1、菌株的分离
取各种泡菜发酵液样品1mL，用无菌生理盐水进行10倍梯度稀释，取各梯度100μL稀释液均匀涂布于CaCO3-MRS固体培养基上，每个梯度做三个平行，置于37℃恒温箱中培养48h。选取有溶钙圈的单菌落，观察菌落形态，并从平板上挑选形态、大小、颜色不同的菌落，在MRS固体平板上纯化直至单菌落。把筛选得到的单一菌株进行编号，并用20％甘油保存，存放于-80℃备用。
2、高产酸菌株筛选
取筛选得到的无溶血活性的不同的菌株进行产酸性能试验。取保藏于甘油管中的菌株按2％的接种量接种到MRS液体中，37℃培养24h，总共活化三代。取活化两次的菌株液体按2％接种量接种到MRS液体培养基中，37℃培养48h，取培养48h的菌液离心，用上清液通过酸碱滴定法测个菌株的产酸量并测定pH，每株菌做3个平行。通过酸碱滴定结果和PH值选出产酸多的菌株，不同菌株的产酸能力如表1所示，其中显示产酸能力最高的菌株为JT717菌株。
表1不同菌株的产酸能力
3、菌株形态鉴定
经过筛选后，选出最佳产酸菌JT717接种于MRS固体培养基平板上37℃倒置培养24h，观察其菌落形态。菌株在培养基培养24h的菌落形态如图1所示，菌落呈现不透明乳白色，表面光滑湿润，菌株通过革兰氏染色呈阳性，经测定该菌的适宜生长温度范围30～37℃，适宜生长pH范围6～7。
4、细菌的分子生物学鉴定
将纯化得到的JT717单菌落进行16S rDNA鉴定，使用SDS法提取菌株DNA。吸取1mL培养12h的菌液，10000r/min 5min，倒掉上清液，加入1mL无菌水吹打均匀，继续用10000r/min离心5min，去掉上清液；往菌体中加入10μL的1％SDS，震荡8min，加入490μL无菌水，手动摇匀，作为PCR扩增模板备用；之后用引物27F(5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’)和1492R(5’-TACGGYTACCTTGTTAYGACTT-3’)进行PCR扩增。然后采用琼脂糖凝胶电泳法检测PCR产物。并对在1400bp附近有明亮条带的扩增DNA样品送至广州擎科生物技术有限公司进行测序，将测序结果提交至NCBI(https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/)进行BLAST同源性比对。
菌株的系统发育树如图2所示，根据比对结果显示，JT717菌株的16S rRNA基因序列与Lactiplantibacillus plantarum strain Sourdough的同源性最高，达到100％。并综合上述菌株形态特性、分子生物学鉴定的结果，将JT717菌株归属于植物乳植杆菌(Lactiplantibacillus plantarum)，命名为JT717菌株，并于2023年06月07日保存于广东省微生物菌种保藏中心，保藏号为GDMCC No：63531，保藏地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
实施例2菌株的功能分析
1、DPPH清除能力测定
将活化三代的JT717菌株用无菌PBS缓冲液冲洗两遍，制作成OD600＝1.00的悬浮液。取0.5mL菌悬浮液，加入浓度为0.2mmol/L的DPPH无水乙醇溶液0.5mL，混匀后避光反应30min后，8000r/min离心10min，在517nm下测定上清液的吸光度。以上每组做三次平行实验。DPPH清除率按以下公式计算：
X—DPPH清除率(％)；
Ai—为样品组吸光度；
Aj—对照组(乙醇+样品)吸光度；
A0—对照组(乙醇+DPPH)吸光度。
测定结果如图3所示，显示JT717菌株具有较好的DPPH清除能力，对DPPH的清除率为51.10％。
2、亚硝酸盐清除率
将活化三代的JT717菌株用无菌PBS缓冲液冲洗两遍，制作成OD600＝1.00的悬浮液。按2％接种量将悬浮液接种到含NaNO2的、浓度为125mg/L的MRS液体培养基中，以不加菌株的培养基为对照，在37℃培养24h，计算亚硝酸盐含量。NaNO2含量的测定采用GB/T5009.33-2016《食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定》中盐酸萘乙二胺分光光度法；亚硝酸盐降解率按以下公式计算：
X—亚硝酸盐降解率；
A—初始NaNO2含量；
B—发酵后NaNO2含量。
测定结果如图4所示，不添加JT717的培养基亚硝酸盐含量没有下降，添加JT717菌株的培养基对亚硝酸盐的降解率为97.99％。
3、耐酸能力
将JT717菌株接种于5mL MRS液体培养基中，放置于37℃恒温培养箱，培养12h，活化三代。将该培养液在4℃、4000r/min条件下离心5min，弃上清，用无菌生理盐水洗涤2到3次，取对应pH浓度(pH＝2.5和3.0)的5mL液体培养基重新悬浮，震荡均匀，放入37℃培养箱培养，分别在0、4h取培养液稀涂布样于MRS固体培养基中，37℃培养24h，计数菌落生长情况，每株菌做3个平行，检测菌株耐酸情况，耐酸率按以下公式计算：
X—酸耐受性能；
B—4h的菌落数，单位CFU/mL；
A—0h的菌落数，单位CFU/mL。
测定结果如图5所示，显示JT717菌株具有很好的耐酸能力，在pH 2.5时存活率为11.11％，pH 3.0时存活率为80.59％。
4、耐胆盐能力
将JT717菌株接种于5mL MRS液体培养基中，放置于37℃恒温培养箱，培养12h，活化三代。将该培养液在4℃、4000r/min条件下离心5min，弃上清，用生理盐水洗涤2到3次，取对应胆盐浓度(0.30％和0.10％)的5mL液体培养基重新悬浮，震荡均匀，放入37℃培养箱培养，分别在0、4h取培养液稀释涂布于MRS固体培养基中，37℃培养24h，计数菌落生长情况，每株菌做3个平行，检测菌株耐胆盐情况，耐胆盐率按以下公式计算：
X—胆盐耐受性能；
B—4h的菌落数，单位CFU/mL；
A—0h的菌落数，单位CFU/mL；
测定结果如图6所示，显示JT717菌株具有很好耐胆盐能力，在0.3％胆盐浓度中存活率为41.28％，在0.1％胆盐浓度存活率为104.84％。
5、脂多糖降解实验
选择TSB培养基进行实验，将JT717菌株以0.2％的接种量接入灭菌后的TSB培养基中，在37℃中180r/min摇床中培养12h，备用。从培养好的JT717菌液中吸取5mL菌液置于去热源的离心管中，离心4000r/min，10min，吸取离心后的上清液置于去热源的试管中。
实验处理组为去除株JT717菌体的上清液；
对照组为没有接入株JT717的空白TSB培养基；
分别取菌液上清液，菌液沉淀物置于TSB培养基内，准备TSB空白培养基，各加入1mL 90EU的脂多糖中，在37℃条件下分别反应0h、4h。分别取0h反应后溶液、4h反应后溶液，分别稀释200倍、400倍以及800倍稀释液。然后各取0.1mL的稀释后的溶液，加到除热原微孔板内，每一浓度加3孔，再分别加入0.1mL鲎试剂，采用中速振摇10s混匀后，将微孔板放入已预热好的内毒素自动分析仪ELx808中进行检测。同时建立标准内毒素标准曲线，标曲检测范围为0.005-5EU/mL，检测的结果取三个平行处理的结果平均值。再根据制作得到的标准曲线y＝-0.3188x+2.9524，R2＝0.998，y为时间(s)，x为质量浓度，单位为EU/mL，计算内毒素浓度。
测定结果如图7所示，显示在0～4h期间，在对照组TSB中脂多糖含量未变，浓度为80.00U/mL，而实验组JT717菌株的上清液组中的脂多糖含量在刚添加时就急速下降到54.12U/mL，过4小时后为29.17U/mL，0h的降解率为39.85％，4h的降解率为67.58％；表明JT717菌株具有较好的降解脂多糖能力。
实施例3菌株JT717冻干粉菌剂的制作
(1)菌株活化
取冻存于-20℃的JT717菌株，按2％接种量接种于MRS液体培养基中个，37℃培养24h，共活化三次。
(2)菌株大批量培养
取步骤(1)中活化后的JT717菌株，按2％接种量，分别大批量的接种到液体MRS中，静置培养发酵24h。
(3)菌泥制备
取步骤(2)中培养好的发酵液，用离心机离心发酵液，离心条件为：4℃、10000r/min、10min，取出倒掉上清液，保留下层菌泥，在加入生理盐水洗涤菌泥，然后离心保留菌泥，重复三次，最后得到干净的菌泥。
(4)菌泥冻干
取步骤(3)中制作出来的菌泥，按菌泥：保护液＝1:3的比例加入菌株保护液，保护液的配方为：20％脱脂乳粉、12％甘露醇、6％谷氨酸钠、0.1％吐温-80，把保护剂与菌泥混匀，放入-80℃冰箱冷冻12h，冷冻12h后将冷冻的菌泥放入冷冻干燥机中冷冻48h，得到JT717的冻干粉菌剂，菌数含量为1×1011CFU/g以上。
实施例4无盐酸菜发酵工艺
本实施例提供一种由JT717冻干粉发酵制备的新型无盐酸菜，由如下重量份的主要原料制备而成：芥菜50～100份、JT717冻干粉菌剂0.01～0.2份、玉米发酵液100～200份。
无盐酸菜由如下方法制备而成：
(1)将100份玉米发酵液接种0.1份JT717冻干粉，发酵两天；
(2)采用新鲜的芥菜50份，将原料用水清洗干净；
(3)在容器中加水烧开，将清洗的芥菜放入热水中热烫，时间为30s；
(4)将热烫后的芥菜放在太阳下晾晒干水分；
(5)将晾晒好的芥菜放置于发酵罐中，倒入(1)中发酵好的玉米发酵液，使发酵液浸没芥菜，并填满整个发酵罐；将发酵罐密封放入25℃温度下发酵9天；
(6)将发酵好的酸菜取出，清洗表面发酵液，进行真空打包。
采用本发明提供的JT717冻干粉制备得到的酸菜中亚硝酸盐和脂多糖含量低，能很好地提高酸菜食品的安全性，制备得到无添加腌制盐的发酵泡菜。
实施例5混合菌剂联合发酵酸菜工艺
本实施例提供一种由混合菌剂发酵制备得到的无盐酸菜，其混合菌剂为JT717冻干粉菌剂与SA12冻干粉菌剂混合制备得到。其中SA12冻干粉菌剂由凝结芽孢杆菌(Weizmannia coagulans)SA12菌株通过实施例3的方法制备得到(SA12菌株为本发明课题组团队前期研发的得到，具有降解脂多糖、抑制α-葡萄糖苷酶和DPPH自由基作用的菌株，已于2022年06月06日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，菌种保藏号为GDMCC NO:62518)。
无盐酸菜由如下重量份的主要原料制备而成：芥菜50～100份、混合菌剂冻干发酵粉0.01～0.2份、玉米发酵液100～200份。
由如下方法制备而成：
(1)将100份玉米发酵液接种0.1份混合菌剂(由JT717和SA12两种菌剂按菌落数1：1比例混合得到)，发酵两天；
(2)采用新鲜的芥菜50份，将原料用水清洗干净；
(3)在容器中加水烧开，将清洗的芥菜放入热水中热烫，时间为30s；
(4)将热烫后的芥菜放在太阳下晾晒干水分；
(5)将晾晒好的芥菜放置于发酵罐中，倒入(1)中发酵好的玉米发酵液，使发酵液浸没芥菜，并填满整个发酵罐；将发酵罐密封放入25℃温度下发酵9天；
(6)将发酵好的酸菜取出，清洗表面发酵液，进行真空打包。
实施例6发酵酸菜中LPS含量的测定
将上述实施例4和实施例5中发酵得到的酸菜产品和不添加任何菌剂的通过自然发酵得到的酸菜，以及单独采用SA12菌剂进行发酵制得的酸菜进行LPS含量的测定。
分别取几种酸菜的发酵液过滤，分别稀释200倍、400倍以及800倍稀释液。然后各取0.1mL的稀释后的溶液，加到除热原微孔板内，每一浓度加3孔，再分别加入0.1mL鲎试剂，采用中速振摇10s混匀后，将微孔板放入已预热好的内毒素自动分析仪ELx808中进行检测，同时采用0.005EU/mL、0.05EU/mL、0.5EU/mL和5EU/mL浓度的标准内毒素建立标准曲线，每一浓度内毒素溶液至少3个平行孔，阴性对照平行2孔，检测的结果取三个平行处理的结果平均值。再根据制作得到的标准曲线y＝-0.3113x+2.9258，R2＝0.996，y为时间(s)，x为质量浓度，单位为EU/mL，计算内毒素浓度。
测定结果如图8所示，自然发酵酸菜中的脂多糖含量为834.47EU/mL，实施例4中采用JT717菌剂发酵的酸菜脂多糖含量中为260.25EU/mL，单独采用SA12菌剂发酵的酸菜中为592.2EU/mL；在实施例5中采用JT717+SA12混合菌剂发酵的酸菜中的含量为155.91EU/mL。表明采用JT717菌剂进行发酵能有效的降低酸菜中LPS的含量，而单独加入JT717菌剂发酵的酸菜中LPS的含量下降68.81％，单独加入SA12菌剂发酵的酸菜中LPS含量下降29.03％，而采用混合菌剂联合加入SA12和JT717发酵的酸菜中LPS的含量下降了81.32％，显示采用JT717与SA12联合发酵的效果由于单个发酵，表明SA12和JT717联合使用能起到协同效果，促进酸菜中脂多糖的降解，能够极大地降低泡菜中LPS的含量，利于酸菜的安全食用。
综上，本发明提供一株有多种益生功能且能低剂量快速无盐发酵芥菜的植物乳植杆菌(Lactiplantibacillus plantarum)JT717菌株，研究显示JT717菌株分离自发酵泡菜水，产酸能力高，具有很强的耐酸和耐盐能力，具有清除DPPH自由基的能力，能够降解亚硝酸盐和脂多糖，能够用于制备无盐发酵酸菜，降低其亚硝酸盐和脂多糖含量，提高食品安全性。进一步将JT717制备为菌剂与SA12菌株联合进行泡菜发酵产，在采用较低剂量的条件下能快速发酵芥菜，降低泡菜中的脂多糖含量，且与SA12联合发酵具有协同效果，能大大降低泡菜中脂多糖含量，对比单菌跟能提高食品安全性。本发明为减少腌制盐的使用，降低发酵产品中亚硝酸盐和脂多糖含量，为制备无盐酸菜提供了更多的方法手段，为提高发酵酸菜品质提供了技术支持。本发明提供无氧酸菜的发酵工艺简单、成本低、接种量少、发酵时间短、发酵产品健康无公害，具有良好的工业化应用前景。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一株具有多种益生功能的植物乳植杆菌(Lactiplantibacillus plantarum)JT717菌株，其特征在于，该菌株已于2023年06月07日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏编号为：GDMCC No：63531。
2.权利要求1所述JT717菌株或其菌液在降解亚硝酸盐和/或脂多糖中的应用。
3.权利要求1所述JT717菌株或其菌液在制备降解亚硝酸盐和/或脂多糖的制剂中的应用。
4.权利要求1所述JT717菌株或其菌液在制备低亚硝酸盐和/或脂多糖含量的发酵食品中的应用。
5.权利要求1所述JT717菌株或其菌液在制备无盐发酵食品中的应用。
6.一种降解亚硝酸盐和/或脂多糖的制剂，其特征在于，含权利要求1所述JT717菌株或其菌液。
7.一种无盐发酵泡菜的制备方法，其特征在于，采用权利要求1所述JT717菌株或其菌液进行发酵制备得到。
8.权利要求1所述JT717菌株联合SA12菌株在发酵无盐泡菜或在制备无盐泡菜中的应用。
9.一种无盐发酵菌剂，其特征在于，含权利要求1所述JT717菌株和/或SA12菌株。
10.根据权利要求8所述应用或权利要求9所述菌剂，其特征在于，所述SA12菌株为凝结芽孢杆菌(Weizmannia coagulans)SA12菌株，该菌株已于2022年06月06日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，菌种保藏号为GDMCCNO:62518。
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Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116694506A (zh) * 2023-04-26 2023-09-05 佛山科学技术学院 一种植物乳杆菌hyy-db36及其应用

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