CN109563054B

CN109563054B - 新型芳基乙烯衍生物以及以该新型芳基乙烯为有效成分的药物组合物

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Publication number: CN109563054B
Application number: CN201680087227.1A
Authority: CN
Inventors: 黄成渊; 曹圣震; 金鉁婀; 陈政郁; 黄河暎; 李仁奎; 田溶铉; 李载泰; 全宰汉; 金尚郁
Original assignee: Qingbei National University Hospital; Industry Academic Cooperation Foundation of KNU; Daegu Gyeongbuk Medical Innovation Foundation
Current assignee: Qingbei National University Hospital; Qingbei University School Industry University Cooperative Force; Daegu Gyeongbuk Medical Innovation Foundation
Priority date: 2016-06-27
Filing date: 2016-09-13
Publication date: 2022-08-05
Anticipated expiration: 2036-09-13
Also published as: CN109563054A; EP3459936A1; ES2919557T3; EP3459936A4; US20190167820A1; EP3459936B1; US20200078476A1; US11285226B2; WO2018004066A1

Abstract

本发明涉及抑制雌激素相关受体γ(Estrogen related receptor gamma，以下称为“ERRγ”)的活性的芳基乙烯衍生物、其前药、其溶剂合物、其立体异构体或其药剂学上可接受的盐以及以该新型芳基乙烯为有效成分的药物组合物。

Description

新型芳基乙烯衍生物以及以该新型芳基乙烯为有效成分的药物组合物

技术领域

本发明涉及抑制雌激素相关受体γ(Estrogen related receptor gamma，以下称为‘ERRγ’)的活性的芳基乙烯衍生物、其前药、其溶剂合物、其立体异构体或其药剂学上可接受的盐以及以该新型芳基乙烯为有效成分的药物组合物。

背景技术

为了通过细胞内的基因表达变化调节细胞的产生或生长、分化，需要与激素反应的激素受体，大致分为细胞膜受体与核受体。其中，作为核受体，对于其中未发现与之结合的配体的孤儿核受体(Orphan Nuclear Rece ptor)的关注正在增加。

作为孤儿核受体中的一种的ERR(雌激素相关受体，Eestrogen RelatedReceptor)存在ERRα、ERRβ和ERRγ这3种类型，被活化的位置各不相同。

尤其ERRγ是在脊柱和中枢神经系统中表现活性且参与肝中的葡萄糖生物合成的转录调节蛋白，是与配体结合后自然而然地增加转录活性而帮助葡萄糖合成相关基因表达的核激素受体。即，ERRγ直接参与葡萄糖代谢。

另外，ERRγ是被称为NR3B3的人核受体蛋白，通过ESRRG基因进行编码。ERRγ在转录中发挥组成型激活剂(constitutive activator)的功能。ERRγ是类固醇激素受体的核激素受体家族的一个成员。

已知ERRγ蛋白是在心肌中与脂肪酸氧化和线粒体生物发生(biogenes is)相关的多种基因的主要调节因子，还已知在肝中参与葡萄糖生成。

另一方面，糖尿病视网膜病变是患有糖尿病的患者发生特有的视网膜的循环障碍而发病的疾病，与糖尿病性神经病变、糖尿病性肾病一同成为糖尿病中的3大微血管并发症中的一种。糖尿病视网膜病变的发生与患糖尿病的疾病持续时间相关，30岁之前被诊断为1型糖尿病的情况下，疾病持续时间为5年以下时有17％发生糖尿病视网膜病变，疾病持续时间为15年以上时有98％发生糖尿病视网膜病变，对于其中更恶化的增殖性糖尿病视网膜病变，疾病持续时间为10年以下时发生约1％，疾病持续时间为35年以上时发生67％。2型糖尿病中，疾病持续时间为5年以下时29％发生糖尿病视网膜病变，疾病持续时间为15年以上时78％发生糖尿病视网膜病变变，对于增殖性糖尿病视网膜病变，疾病持续时间为5年以下时发生2％，疾病持续时间为15年以上时发生16％。已知在糖尿病患者的视网膜中，出现视网膜毛细血管基底膜的肥厚、血管周围细胞的消失、微血管瘤的发生等毛细血管中的血管变化，随着时间的经过，继广泛的毛细血管无灌注之后在视网膜新生血管中也会发生。这样的糖尿病视网膜病变虽然是糖尿病并发症中的一种，但是，一旦发病，则难以通过血糖调节等阻止其发展，视网膜病变需要特异性的治疗方法。

最近的研究报道了作为(Z)-4-(1-(4-(2-(二甲基氨基)乙氧基)苯基)-5-羟基-2-苯基戊-1-烯-1-基)苯酚的以GSK5182已知的低分子有机化合物作为配体作用于ERRγ而抑制ERRγ的活性，从而表现出缓解高血糖和胰岛素抗性等抗糖尿病效果和视网膜病变的治疗效果。

要求开发一种与以往报道的GSK5182相比特异性地显著抑制ERRγ的转录活性的新型物质。

另一方面，未分化的甲状腺癌(anaplastic thyroid cancer；ATC)是已知在人类中发病的最具攻击性且致命性的癌症中的一种。ATC从甲状腺迅速地向肺、骨、局部淋巴结和脑转移。这与大部分的表明甲状腺癌的高分化(well-differentiated)良性甲状腺癌的性质成对比，因此，单独实施手术、放射线疗法及和化学疗法或将这些组合的ATC的治疗，对于患者生存方面未显示出效果。其结果，迫切需要新型治疗方法的开发。

碘化钠同向转运体(sodium iodide symporter；NIS)是介导碘的细胞内活性流入的细胞膜(plasma membrane)糖蛋白。在甲状腺癌中，内源性的NIS在临床情况下广泛应用于放射性碘疗法，经过多年，已知这是以最小的副作用除去恶性细胞的有效的治疗方法。包括ATC细胞在内，低分化性癌细胞具有表现出导致NIS水平减少的渐进性的脱分化的趋势。这导致ATC细胞使碘不能以高浓度蓄积在细胞内，由此导致对于放射性碘疗法的细胞耐性，结果导致不良的预后。因此，进行了大量的采用利用了基因传递和表观基因(epigenome)-改变药物等的表观遗传学调节之类的几种方法来恢复ATC细胞中的NIS功能的尝试，但是至今没有得到满意的结果。

ERRγ的生物学效果在各种疾病模型(通过2型真性糖尿病、乙醇-诱导的氧化应激、肝损伤、以及损伤的肝的糖异生(gluconeogenesis)的微生物感染、肝胰岛素信号、以及铁代谢之类的几种代谢性疾病)中广泛地进行了研究，但对于ATC中的NIS功能的ERRγ的作用至今没有明确地研究出来。最近的研究报道了作为(Z)-4-(1-(4-(2-(二甲基氨基)乙氧基)苯基)-5-羟基-2-苯基戊-1-烯-1-基)苯酚的以GSK5182已知的低分子有机化合物作为配体作用于ERRγ而抑制ERRγ的活性，从而提高NIS的功能，增加ATC细胞内放射性碘摄取，最终表现出放射性碘治疗增大效果。但是，将GSK5182对ATC小鼠肿瘤模型进行给药时，肿瘤内放射性碘摄取没有增加。因此，要求开发一种与GSK5182相比能够特异性地显著抑制ERRγ转录活性，其结果，从细胞水平至动物水平能够诱发放射性同位素摄取增加的新型物质。

发明内容

发明要解决的问题

对此，本发明的发明人发现通过在芳基乙烯衍生物中导入特定取代物，从而与以往报道的GSK5182相比，ERRγ的抑制活性变得更优异，同时药物稳定性、药理活性和毒性得到改善，从而完成了本发明。

本发明的目的是提供一种能够有效地抑制ERRγ的活性的新型芳基乙烯衍生物、其前药、其溶剂合物、其立体异构体或其药剂学上可接受的盐。

本发明的另一目的是提供一种含有上述芳基乙烯衍生物、其前药、其溶剂合物、其立体异构体或其药剂学上可接受的盐作为有效成分的由ERRγ介导的疾病的预防或治疗用药物组合物。

本发明的另一目的是提供一种含有上述芳基乙烯衍生物、其前药、其溶剂合物、其立体异构体或其药剂学上可接受的盐作为有效成分的视网膜病变的预防或治疗用药物组合物。

本发明的另一目的是提供一种包含上述芳基乙烯衍生物、其前药、其溶剂合物、其立体异构体或其药剂学上可接受的盐、以及药剂学上可接受的载体且与放射性碘协同使用的甲状腺癌治疗用药物组合物。

本发明的另一目的是提供一种包含上述芳基乙烯衍生物、其前药、其溶剂合物、其立体异构体或其药剂学上可接受的盐、以及放射性碘的甲状腺癌治疗用试剂盒。

用于解决问题的手段

为了达到上述目的，本发明提供一种作为能够有效地抑制ERRγ的活性的新型化合物的由下述化学式1表示的芳基乙烯衍生物、其前药、其溶剂合物、其立体异构体或其药剂学上可接受的盐：

[化学式1]

上述化学式1中，

L为(C6-C20)亚芳基、(C3-C20)杂亚芳基或(C3-C20)稠合杂环；

R¹为(C3-C20)杂环烷基、(C3-C20)杂芳基、-O-(CH₂)_m-R¹¹、-(CH₂)_m-R¹²、-NH-(CH₂)_m-R¹³、-NHCO-(CH₂)_n-R¹⁴或-SiR¹⁶R¹⁷-(CH₂)_m-R¹⁵；

R¹¹至R¹⁵各自独立地为(C3-C20)杂环烷基；

R¹⁶和R¹⁷各自独立地为(C1-C20)烷基；

m为1至3的整数；

n为0或1的整数；

Ar为(C6-C20)芳基或(C3-C20)杂芳基，上述Ar的芳基或杂芳基能够被选自羟基、卤素基团、(C1-C20)烷基、卤代(C1-C20)烷基、(C1-C20)烷氧基、硝基、氰基、-NR²¹R²²、(C1-C20)烷基羰氧基、(C1-C20)烷基羰基氨基、胍基、-SO₂-R²³和-OSO₂-R²⁴中的一种以上进一步取代；

R²¹和R²²各自独立地为氢、(C1-C20)烷基磺酰基或(C3-C20)环烷基磺酰基；

R²³和R²⁴各自独立地为(C1-C20)烷基、卤代(C1-C20)烷基或(C3-C20)环烷基；

R²为羟基、卤素基团、(C1-C20)烷基羰氧基或(C1-C20)烷基磺酰基氧基；

上述R¹的杂环烷基或杂芳基以及R¹¹至R¹⁵的杂环烷基能够被选自(C1-C20)烷基、(C3-C20)环烷基、(C2-C20)烯基、脒基(amidino)、(C1-C20)烷氧基羰基、羟基、羟基(C1-C20)烷基和二(C1-C20)烷基氨基(C1-C20)烷基中的一种以上进一步取代；

上述杂环烷基和杂芳基包含选自N、O和S中的一个以上的杂原子，上述杂环烷基是在环内具有碳原子或氮原子作为结合部位的饱和或不饱和的单环、双环或螺环。

另外，本发明确认了由上述化学式1表示的芳基乙烯衍生物具有优异的ERRγ抑制活性，从而提供一种含有上述芳基乙烯衍生物、其前药、其溶剂合物、其立体异构体或其药剂学上可接受的盐作为有效成分的由ERRγ介导的疾病的预防或治疗用药物组合物。

另外，本发明提供一种能够有效地抑制ERRγ的活性的含有上述化学式1的芳基乙烯衍生物、其前药、其溶剂合物、其立体异构体或其药剂学上可接受的盐作为有效成分的视网膜病变的预防或治疗用药物组合物。

另外，本发明提供一种能够特异性地显著抑制ERRγ转录活性的包含上述化学式1的芳基乙烯衍生物、其前药、其溶剂合物、其立体异构体或其药剂学上可接受的盐、以及药剂学上可接受的载体并与放射性碘组合使用的甲状腺癌治疗用药物组合物。

另外，本发明提供一种能够特异性地显著抑制ERRγ转录活性的包含上述化学式1的芳基乙烯衍生物、其前药、其溶剂合物、其立体异构体或其药剂学上可接受的盐、以及放射性碘的甲状腺癌治疗用试剂盒。

发明效果

本发明的芳基乙烯衍生物作为新型化合物，与现有的GSK5182化合物相比，对于ERRγ表现出非常高的抑制活性，同时表现出药物稳定性、药理活性和毒性得到改善的效果，因此作为对由ERRγ介导的疾病、特别是肥胖、糖尿病、高血脂症、脂肪肝或动脉硬化等代谢性疾病、以及视网膜病变有效的预防和治疗剂，可以没有副作用地有用地使用。

另外，本发明的芳基乙烯衍生物与GSK5182相比，能够特异性地显著抑制ERRγ转录活性，其结果，从细胞水平至动物水平，能够诱发放射性同位素摄取增加。因此，能够显著增加用于癌症治疗的放射性碘疗法的治疗效果，并且在对癌细胞进行给药时能够有效地制造NIS(碘化钠同向转运体，sodium iodide symporter)功能得到提高的癌细胞，从而具有能够使未分化的甲状腺癌治疗的相关研究和临床应用更容易的优异的效果。

附图说明

图1至图3表示化合物18a在未分化的甲状腺癌细胞中对放射性碘摄取的效果。

图4和图5表示化合物18a在未分化的甲状腺癌细胞中调节内源性ERRγ和NISmRNA表达的效果。

图6和图7表示化合物18a在未分化的甲状腺癌细胞中调节内源性ERRγ蛋白表达的效果。

图8和图9表示在未分化的甲状腺癌细胞中的化合物18a-诱导的MAP激酶活性。

图10和图11表示PD98059或U0126导致的、化合物18a-处理的未分化的甲状腺癌细胞中的碘摄取的抑制程度。

图12和图13表示PD98059或U0126导致的、活化的MAK激酶信号的反转程度。

图14和图15表示化合物18a导致的在未分化的甲状腺癌细胞中的膜-定位NIS蛋白的量的增加情况。

图16和图17是表示用化合物18a处理未分化的甲状腺癌细胞后增加的¹³¹I的增加的细胞毒性的结果。

图18至图22表示在ATC肿瘤模型中化合物18a的给药导致的对于放射性碘摄取的化合物18a的效果。

具体实施方式

下面，更加具体地对本发明进行说明。此时所使用的技术术语以及科学术语只要没有其它定义，则具有本发明所属技术领域的技术人员通常理解的意思，在下述的说明中，将省略对于可能不必要地混淆本发明的主旨的公知功能以及构成的说明。

本发明提供一种由下述化学式1表示的芳基乙烯衍生物、其前药、其溶剂合物、其立体异构体或药剂学上可接受的盐：

[化学式1]

上述化学式1中，

L为(C6-C20)亚芳基、(C3-C20)杂亚芳基或(C3-C20)稠合杂环；

R¹¹至R¹⁵各自独立地为(C3-C20)杂环烷基；

R¹⁶和R¹⁷各自独立地为(C1-C20)烷基；

m为1至3的整数；

n为0或1的整数；

Ar为(C6-C20)芳基或(C3-C20)杂芳基，上述Ar的芳基或杂芳基可以被选自羟基、卤素基团、(C1-C20)烷基、卤代(C1-C20)烷基、(C1-C20)烷氧基、硝基、氰基、-NR²¹R²²、(C1-C20)烷基羰氧基、(C1-C20)烷基羰基氨基、胍基、-SO₂-R²³以及-OSO₂-R²⁴中的一种以上进一步取代；

R²¹以及R²²各自独立地为氢、(C1-C20)烷基磺酰基或(C3-C20)环烷基磺酰基；

R²³以及R²⁴各自独立地为(C1-C20)烷基、卤代(C1-C20)烷基或(C3-C20)环烷基；

上述R¹的杂环烷基或杂芳基以及R¹¹至R¹⁵的杂环烷基可以被选自(C1-C20)烷基、(C3-C20)环烷基、(C2-C20)烯基、脒基(amidino)、(C1-C20)烷氧基羰基、羟基、羟基(C1-C20)烷基以及二(C1-C20)烷基氨基(C1-C20)烷基中的一种以上进一步取代；

上述杂环烷基以及杂芳基包含选自N、O和S中的一个以上的杂原子，上述杂环烷基是将环内的碳原子或氮原子作为结合部位的饱和或不饱和的单环、双环或螺环。

根据本发明的化学式1的芳基乙烯衍生物作为新型化合物，对于ERRγ具有非常高的抑制活性，因此不仅作为ERRγ介导的疾病、特别是肥胖、糖尿病、高血脂症、脂肪肝或动脉硬化等代谢性疾病的治疗剂和预防剂十分有用，而且在预防或治疗视网膜病变时可作为有效成分来利用。

另外，根据本发明的化学式1的芳基乙烯衍生物通过调节内源性的ERRγ蛋白的表达来调节MAP激酶(丝裂原活化蛋白激酶，mitogen-activated protein kinase)，通过提高NIS(碘化钠同向转运体，sodium iodide symporter)的功能而增加膜-定位NIS(membrane-localized NIS)，从而在治疗甲状腺癌时能够增加放射性碘的摄取。

本发明的术语“烷基”表示仅由碳以及氢原子构成的1价的直链或支链饱和烃基，这样的烷基基团的例子包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基、辛基、壬基等，但并不限定于此。

本发明的术语“芳基”是通过去除一个氢而由芳香族烃诱导的芳香族环的1价的有机基团，包含在各环中适当地包含4至7个、优选为5或6个环原子的单环系或稠环系，还包含多个芳基以单键连接的形态。作为具体的例子，包含苯基、萘基、联苯基、蒽基、茚基(indenyl)、芴基等，但并不限定于此。

本发明的术语“杂芳基”表示包含选自N、O和S中的1至4个杂原子作为芳香族环骨架原子且其余的芳香族环骨架原子为碳的作为芳基基团的杂芳香族环1价的基团，是5至6元单环杂芳基、以及与一个以上的苯环稠合而成的多环杂芳基，也可以部分饱和。另外，本发明中的杂芳基还包含一个以上的杂芳基由单键连接的形态。上述杂芳基的例子包含吡咯基、吡唑基、喹啉基、异喹啉基、吡啶基、嘧啶基、

唑基、噻唑基、噻二唑基、三唑基、咪唑基、苯并咪唑基、异

唑基、苯并异

唑基、噻吩基、苯并噻吩基、呋喃基、苯并呋喃基等，但并不限定于此。

本发明的术语“亚芳基”和“杂亚芳基”表示芳香族环和杂芳香族环的2价基团。

本发明的术语“稠合杂环”包含选自N、O和S中的1至4个杂原子的非芳香族杂环和芳香族环稠合的稠环的2价基团，将稠合杂环内碳原子或氮原子作为结合部位。上述稠合杂环的例子包含吲哚啉、二氢苯并呋喃、二氢苯并噻吩等，但不限定于此。

本发明的术语“杂环烷基”是包含选自N、O和S中的1至4个杂原子的非芳香族杂环的1价基团，饱和或不饱和的单环、多元环或螺环形态均包含在上述非芳香族杂环中，可以通过杂原子或碳原子结合。作为这样的杂环烷基基团的例子，可以包含氮丙啶、吡咯烷、氮杂环丁烷、哌啶、四氢吡啶、哌嗪、吗啉、硫代吗啉、3-氮杂双环[3.1.0]己烷、八氢吡咯并[3,4-c]吡咯、2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷、2-氮杂螺[4.4]壬烷等的非芳香族杂环的1价基团。

本发明的术语“卤代”或“卤素基团”表示氟、氯、溴或碘原子。

本发明的术语“卤代烷基”表示被一个以上的卤素基团取代的烷基，作为一个例子，可举出三氟甲基等。

本发明的术语“烯基”是两个以上的碳原子之间包含一个以上的双键的直链或支链的不饱和烃的1价基团，具体包含乙烯基、丙烯基、丙-1-烯-2基、1-丁烯基、2-丁烯基、异丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-甲基-1-丁烯基、2-甲基-2-丁烯基、2,3-二甲基-2-丁烯基等，但并不限定于此。

本发明的术语“烷氧基”表示-O-烷基基团，在这里，“烷基”与上述定义相同。这样的烷氧基基团的例子包括甲氧基、乙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基等，但并不限定于此。

本发明的术语“烷基羰氧基”表示-OC(＝O)烷基基团，在这里，“烷基”与上述定义相同。这样的烷基羰氧基基团的例子包括甲基羰氧基、乙基羰氧基、异丙基羰氧基、丙基羰氧基、丁基羰氧基、异丁基羰氧基、叔丁基羰氧基等，但并不限定于此。

本发明的术语“烷基羰基氨基”表示-NHC(＝O)烷基基团，在这里，“烷基’”与上述定义相同。这样的烷基羰基氨基基团的例子包含甲基羰基氨基、乙基羰基氨基、异丙基羰基氨基、丙基羰基氨基、丁基羰基氨基、异丁基羰基氨基、叔丁基羰基氨基等，但并不限定于此。

本发明的术语“烷氧基羰基”表示-C(＝O)烷氧基基团，在这里，“烷氧基”与上述定义相同。这样的烷氧基羰基基团的例子包含甲氧基羰基、乙氧基羰基、异丙氧基羰基、丙氧基羰基、丁氧基羰基、异丁氧基羰基、叔丁氧基羰基等，但并不限定于此。

本发明的术语“环烷基”表示由一个以上的环构成的1价的饱和碳环基团。环烷基基团的例子包含环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基等，但并不限定于此。

本发明的术语“烷基磺酰基”表示-SO₂-烷基基团，在这里，“烷基”与上述定义相同。这样的烷基磺酰基基团的例子包含甲基磺酰基、乙基磺酰基等，但并不限定于此。

本发明的术语“环烷基磺酰基”表示-SO₂-环烷基基团，在这里，“环烷基”与上述定义相同。这样的环烷基磺酰基基团的例子包含环丙基磺酰基、环己基磺酰基等，但并不限定于此。

本发明的术语“烷基磺酰基氧基”表示-OSO₂-烷基基团，在这里，“烷基”与上述定义相同。这种烷基磺酰基氧基基团的例子包含甲基磺酰基氧基、乙基磺酰基氧基等，但并不限定于此。

本发明的术语“羟基烷基”表示被一个以上的羟基取代的烷基，作为一个例子，可举出羟基甲基等。

根据本发明的一实施例的芳基乙烯衍生物中，上述芳基乙烯衍生物可以由下述化学式2至5表示：

[化学式2]

[化学式3]

[化学式4]

[化学式5]

上述化学式2至5中，

表示单键或双键；R¹、Ar和R²与上述化学式1中的定义相同。

根据本发明的一实施例的芳基乙烯衍生物中，上述R¹为(C3-C10)杂环烷基、(C3-C10)杂芳基、-O-(CH₂)_m-R¹¹、-(CH₂)_m-R¹²、-NH-(CH₂)_m-R¹³、-NHCO-(CH₂)_n-R¹⁴或-SiR¹⁶R¹⁷-(CH₂)_m-R¹⁵；R¹¹至R¹⁵各自独立地为(C3-C10)杂环烷基；R¹⁶和R¹⁷各自独立地为(C1-C10)烷基；m为1至3的整数；n为0或1的整数；Ar为(C6-C12)芳基或(C3-C12)杂芳基，上述Ar的芳基或杂芳基可以被选自羟基、卤素基团、(C1-C10)烷基、卤代(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷氧基、硝基、氰基、氨基、(C1-C10)烷基磺酰基氨基、(C3-C10)环烷基磺酰基氨基、二((C1-C10)烷基磺酰基)氨基、(C1-C10)烷基羰氧基、(C1-C10)烷基羰基氨基、胍基、(C1-C10)烷基磺酰基、(C1-C10)烷基磺酰基氧基、卤代(C1-C10)烷基磺酰基氧基或(C3-C10)环烷基磺酰基氧基中的一种以上进一步取代；R²为羟基、氟、(C1-C10)烷基羰氧基或(C1-C10)烷基磺酰基氧基；上述R¹的杂环烷基或杂芳基以及R¹¹至R¹⁵的杂环烷基可以被选自(C1-C10)烷基、(C3-C10)环烷基、(C2-C10)烯基、脒基(amidino)、(C1-C10)烷氧基羰基、羟基(C1-C10)烷基和二(C1-C10)烷基氨基(C1-C10)烷基中的一种以上进一步取代。

根据本发明的一实施例的芳基乙烯衍生物中，优选地，上述R¹为(C3-C10)杂环烷基或-O-(CH₂)_m-R¹¹，R¹¹为(C3-C10)杂环烷基，m为1至3的整数，上述R¹和R¹¹的杂环烷基可以被选自(C1-C10)烷基、(C3-C10)环烷基、(C2-C10)烯基、脒基(amidino)、(C1-C10)烷氧基羰基、羟基(C1-C10)烷基和二(C1-C10)烷基氨基(C1-C10)烷基中的一种以上进一步取代。

根据本发明的一实施例的芳基乙烯衍生物中，更优选地，上述R¹和R¹¹至R¹⁵的杂环烷基可以各自独立地选自下述结构：

上述R³¹和R³²各自独立地为氢、(C1-C10)烷基、(C3-C10)环烷基、(C2-C10)烯基、脒基(amidino)、(C1-C10)烷氧基羰基、羟基(C1-C10)烷基或二(C1-C10)烷基氨基(C1-C10)烷基；L为O或S。

根据本发明的一实施例的芳基乙烯衍生物中，上述芳基乙烯衍生物可以更优选地由下述化学式6表示：

[化学式6]

在上述化学式6中，

R¹为(C3-C10)杂环烷基或-O-(CH₂)_m-R¹¹；

R¹¹为(C3-C10)杂环烷基；

m为1至3的整数；

上述R¹和R¹¹的杂环烷基可以被选自(C1-C10)烷基、(C3-C10)环烷基、(C2-C10)烯基、脒基(amidino)、(C1-C10)烷氧基羰基、羟基(C1-C10)烷基和二(C1-C10)烷基氨基(C1-C10)烷基的一种以上进一步取代；

Ar为(C6-C12)芳基或(C3-C12)杂芳基，上述Ar的芳基或杂芳基可以被选自羟基、卤素基团、(C1-C10)烷基、卤代(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷氧基、硝基、氰基、氨基、(C1-C10)烷基磺酰基氨基、(C3-C10)环烷基磺酰基氨基、二((C1-C10)烷基磺酰基)氨基、(C1-C10)烷基羰氧基、(C1-C10)烷基羰基氨基、胍基、(C1-C10)烷基磺酰基、(C1-C10)烷基磺酰基氧基、卤代(C1-C10)烷基磺酰基氧基或(C3-C10)环烷基磺酰基氧基中的一种以上进一步取代；

R²为羟基、氟、(C1-C10)烷基羰氧基或(C1-C10)烷基磺酰基氧基。

根据本发明的一实施例的芳基乙烯衍生物中，上述R¹和R¹¹可以各自独立地为选自下述结构中的杂环烷基：

根据本发明的一实施例的芳基乙烯衍生物中，上述Ar为(C6-C12)芳基，上述Ar的芳基可以被选自羟基、卤素基团、(C1-C10)烷基、卤代(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷氧基、硝基、氰基、氨基、(C1-C10)烷基磺酰基氨基、(C3-C10)环烷基磺酰基氨基、二((C1-C10)烷基磺酰基)氨基、(C1-C10)烷基羰氧基、(C1-C10)烷基羰基氨基、胍基、(C1-C10)烷基磺酰基、(C1-C10)烷基磺酰基氧基、卤代(C1-C10)烷基磺酰基氧基或(C3-C10)环烷基磺酰基氧基中的一种以上进一步取代。

根据本发明的一实施例的芳基乙烯衍生物中，上述R²可以为羟基。

根据本发明的一实施例的芳基乙烯衍生物中，更优选地，上述R²可以为羟基，R¹可以为选自下述结构中的杂环烷基：

根据本发明的一实施例的芳基乙烯衍生物中，更优选地，上述R²为羟基，R¹为-O-(CH₂)_m-R¹¹，m为1或2的整数，R¹¹可以为选自下述结构中的杂环烷基：

上述R³¹和R³²各自独立地为氢、(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷氧基羰基或羟基(C1-C10)烷基；L为O或S。

根据本发明的一实施例的芳基乙烯衍生物中，更优选地，上述Ar为(C6-C12)芳基，上述Ar的芳基可以被选自羟基、卤素基团、(C1-C10)烷基、卤代(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷氧基、硝基、氰基、氨基、(C1-C10)烷基磺酰基氨基、(C3-C10)环烷基磺酰基氨基、二((C1-C10)烷基磺酰基)氨基、(C1-C10)烷基羰氧基、(C1-C10)烷基羰基氨基、胍基、(C1-C10)烷基磺酰基、(C1-C10)烷基磺酰基氧基、卤代(C1-C10)烷基磺酰基氧基或(C3-C10)环烷基磺酰基氧基中的一种以上进一步取代；R²为羟基，R¹可以为选自下述结构中的杂环烷基：

根据本发明的一实施例的芳基乙烯衍生物中，更进一步优选地，上述Ar为(C6-C12)芳基，上述Ar的芳基可以被选自羟基、卤素基团、(C1-C10)烷基、卤代(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷氧基、硝基、氰基、氨基、(C1-C10)烷基磺酰基氨基、(C3-C10)环烷基磺酰基氨基、二((C1-C10)烷基磺酰基)氨基、(C1-C10)烷基羰氧基、(C1-C10)烷基羰基氨基、胍基、(C1-C10)烷基磺酰基、(C1-C10)烷基磺酰基氧基、卤代(C1-C10)烷基磺酰基氧基或(C3-C10)环烷基磺酰基氧基中的一种以上进一步取代；R²为羟基，R¹为-O-(CH₂)_m-R¹¹，m为1或2的整数，R¹¹可以为选自下述结构中的杂环烷基：

根据本发明的一实施例的芳基乙烯衍生物中，上述芳基乙烯衍生物具体可以选自下述结构，但并不限定于此。

根据本发明的一实施例的芳基乙烯衍生物中，上述芳基乙烯衍生物可以优选地选自下述结构。

根据本发明的一实施例的芳基乙烯衍生物中，上述芳基乙烯衍生物可以更优选选自下述结构。

根据本发明的一实施例的芳基乙烯衍生物中，上述芳基乙烯衍生物可以进一步更优选选自下述结构。

为了增加生物体内的吸收或者增加溶解度，根据本发明的芳基乙烯衍生物可以制成前药、溶剂合物和药剂学上可接受的盐的形式进行使用，因此，上述的前药、溶剂合物和药剂学上可接受的盐也属于本发明的范围。另外，上述芳基乙烯衍生物由于具有手性碳，所以存在其立体异构体，这样的立体异构体也包含在本发明的范畴内。

根据本发明的芳基乙烯衍生物根据其取代物的种类可以用已知的多种方法制造，作为一个例子，例示了下述反应式1至21，但下述的制备方法不限定制造本发明的芳基乙烯衍生物的方法。更详细的内容在下述实施例1至121中进行说明。在下述反应式1至21中公开的制备方法仅是例示，本领域技术人员能够根据特定取代物容易地进行变形，这对于本领域技术人员而言是显而易见的。

[反应式1]

[反应式2]

[反应式3]

[反应式4]

[反应式5]

[反应式6]

[反应式7]

[反应式8]

[反应式9]

[反应式10]

[反应式11]

[反应式12]

[反应式13]

[反应式14]

[反应式15]

[反应式16]

[反应式17]

[反应式18]

[反应式19]

[反应式20]

[反应式21]

另外，本发明提供一种包含上述化学式1的芳基乙烯衍生物、其前药、其溶剂合物、其立体异构体或其药剂学上可接受的盐作为有效成分的ERRγ抑制剂组合物。

另外，本发明提供一种包含上述化学式1的芳基乙烯衍生物、其前药、其溶剂合物、其立体异构体或其药剂学上可接受的盐作为有效成分并进一步包含药剂学上可接受的载体的由ERRγ介导的疾病的预防或治疗用药物组合物。

如上所述，化学式1的芳基乙烯衍生物、其前药、其溶剂合物、其立体异构体或其药剂学上可接受的盐对ERRγ表现出高抑制活性，因此包含它们作为有效成分的药物组合物能对由ERRγ介导的疾病，例如肥胖、糖尿病、高血脂症、脂肪肝或动脉硬化等代谢性疾病的治疗或预防十分有用。

另外，本发明提供能够有效地抑制ERRγ的活性的含有上述化学式1的芳基乙烯衍生物、其前药、其溶剂合物、其立体异构体或其药剂学上可接受的盐作为有效成分的视网膜病变的预防或治疗用药物组合物。

上述“视网膜病变(retinopathy)”是在眼睛的视网膜，由于慢性或急性的损伤而引发的疾病。这样的视网膜病变可以伴有持续进行中的炎症和血管重塑(vascularremodeling)。另外，视网膜病变也会因糖尿病或高血压之类的全身疾病的视觉表达而出现。这样的视网膜病变的种类，有糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy)和早产儿视网膜病变(retinopathy of prematurity,ROP)等。

其中，糖尿病视网膜病变是指作为全身性疾病的糖尿病导致的末梢循环障碍引发障碍而发生视力减退的眼睛的并发症。糖尿病视网膜病变虽然初期没有症状，但随着发生黄斑部的侵犯而出现视力下降。糖尿病视网膜病变伴有微细血管瘤、静脉扩张、视网膜出血、视网膜梗塞、黄斑水肿、新生血管、玻璃体出血、牵引性膜等多种病理学特征，如果这样的现象被观察为眼底症状，则被诊断为糖尿病视网膜病变。糖尿病视网膜病变是复合性地伴有上述多种症状而发病的疾病，即便能够缓解其中的一种以上的症状也不一定能治疗疾病。

另外，早产儿视网膜病变是可能在早产儿、尤其是低体重新生儿中发生的增殖性视网膜病变。出生时视网膜的血管没有完全形成的早产儿在出生后在血管形成过程中发生障碍，则在视网膜的血管形成部位和没有形成血管的部位的界面发生非正常的纤维血管增殖，由此导致视网膜剥离，最终可能导致失明。

根据本发明的芳基乙烯衍生物可以以药剂学上接受的盐的形式使用，药剂学上接受的盐可以通过该技术领域中通常的方法制造，例如包含盐酸、氢溴酸、硫酸、硫酸氢钠、磷酸、硝酸、碳酸等与无机酸形成的盐；甲酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、草酸、琥珀酸、苯甲酸、柠檬酸、马来酸、丙二酸、扁桃酸、肉桂酸、硬脂酸、棕榈酸、乙醇酸、谷氨酸、酒石酸、葡糖酸、乳酸、富马酸、乳糖酸、抗坏血酸、水杨酸或乙酰水杨酸(阿司匹林)之类的与有机酸形成的盐；甘氨酸、丙氨酸、香草醛、异亮氨酸、丝氨酸、半胱氨酸、胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酰胺、赖氨酸、精氨酸、酪氨酸、脯氨酸等与氨基酸形成的盐；甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸等与磺酸形成的盐；通过与钠、钾等碱金属的反应而形成的金属盐；或者与铵离子形成的盐等。

本发明的芳基乙烯衍生物可以以溶剂化的形式例如水合的形式、以及非溶剂化的形式存在，根据本发明的芳基乙烯衍生物的溶剂合物包括具有制药活性的所有溶剂化的形式。即，将本发明的芳基乙烯衍生物溶于甲醇、乙醇、丙酮、1,4-二

烷之类的能够与水混合的溶剂中后，加入游离酸或游离碱后，进行结晶化或重结晶化，从而可形成包括水合物在内的溶剂合物。因此，作为本发明的新型化合物，除了可用冻干之类的方法制造的含水量不同的化合物以外，还包含以水合物为代表的化学计量的溶剂合物。

本发明的芳基乙烯衍生物可以具有手性中心，可以以外消旋物、外消旋混合物、以及各个对映异构体或部分立体异构体的形式存在。这样的异构体可以利用通常的方法进行分离或分解，任意的规定的异构体可以通过通常的合成方法、或者立体特异性或非对称性合成而获得。这样的所有异构体形式和它们的混合物包括在本发明的范围内。

本发明的芳基乙烯衍生物可以以在人或动物的体内分解而提供本发明的化合物的前药的形式进行给药。前药可以用于改变或改善某化合物的物理和(或)药代动力学特性，在含有能够诱导某化合物形成前药的适合的基团或取代物时能够形成。

另外，本发明的药物组合物可以通过在由上述化学式1表示的芳基乙烯衍生物、其前药、其溶剂合物、其立体异构体或其药剂学上可接受的盐中添加通常的无毒性药剂学上可允许的载体和赋形剂等而制成药剂学领域中常见的制剂，例如片剂、丸剂、硬质胶囊、软质胶囊、液体制剂、悬浊剂、乳化剂、糖浆剂、颗粒剂、酏剂(elixirs)等口服给药用制剂；或者静脉内、皮下、舌下、肌肉内或眼内给药用灭菌性水性或油状溶剂的非口服给药用制剂。

能够在本发明的药物组合物中使用的药剂学上可允许的载体是制剂时通常利用的载体，包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、淀粉、阿拉伯树胶、磷酸钙、藻酸盐、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆、甲基纤维素、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁和/或矿物油等，但并不限定于此。

作为能够在本发明的药物组合物中使用的赋形剂，有甜味剂、结合剂、溶解剂、溶解助剂、润湿剂、乳化剂、等渗剂、吸附剂、崩解剂、抗氧化剂、防腐剂、润滑剂、填充剂、芳香剂等，这样的赋形剂的比例和性质可以根据选择的片剂的溶解度和化学特性、选择的给药途径和标准药学实践来确定。作为赋形剂的例子，可举出乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露糖醇、山梨糖醇、纤维素、甘氨酸、二氧化硅、滑石、硬脂酸、甾醇、硬脂酸镁、镁铝硅酸盐、淀粉、明胶、黄蓍胶、海藻酸、海藻酸钠、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、琼脂、水、乙醇、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、氯化钠、氯化钙、橘子精华、草莓精华、香草香等。

另外，本发明的药物组合物还可以制成非口服给药形式，这种情况下，可以利用静脉内给药、腹腔内给药、肌肉内给药、皮下给药或局部给药等，从对于视网膜病变的治疗剂这方面考虑，可以利用眼球给药等，但并不限定于此。此时，为了制成上述非口服给药用剂型，上述药物组合物通过有效成分即化学式1的芳基乙烯衍生物、其前药、其溶剂合物、其立体异构体或其药剂学上可接受的盐与稳定剂或缓冲剂一起在水中进行混合而被制成溶液或悬浮液，这样的溶液或悬浮液可以制成悬浮液安瓿或小药瓶的单位给药剂型。

另外，本发明的药物组合物可以进行灭菌或者可以进一步包含防腐剂、稳定剂、可湿性粉剂或乳化促进剂、用于调节渗透压的盐和/或缓冲剂等辅助剂等，还可以进一步包含其它治疗上有用的物质，可以通过混合、颗粒化或涂布等通常的方法制成制剂。

另外，根据本发明的药物组合物中，作为有效成分的由化学式1表示的芳基乙烯衍生物、其前药、其溶剂合物、其立体异构体或其药剂学上可接受的盐对于包括人在内的哺乳类的给药用量可以根据患者的年龄、体重、性别、给药方式、健康状态和疾病程度而不同。一般，可以按一天0.001至100mg/㎏(体重)、优选为0.01至100mg/㎏(体重)的有效量包含于上述药物组合物，这样的药物组合物可以按1天1次或1天分成2次以上通过口服或非口服途径进行给药。但是，可以根据给药途径、疾病的严重程度、性别、体重、年龄等进行增减，因此上述给药量不以任何方式限定本发明的范围。

另外，本发明提供一种能够特异性地显著抑制ERRγ转录活性的包含上述化学式1的芳基乙烯衍生物、其前药、其溶剂合物、其立体异构体或其药剂学上可接受的盐、以及药剂学上可接受的载体且与放射性碘组合使用的甲状腺癌治疗用药物组合物。

本发明的芳基乙烯衍生物通过调节内源性的ERRγ蛋白的表达来调节MAP激酶(丝裂原活化蛋白激酶，mitogen-activated protein kinase)，通过提高NIS(碘化钠同向转运体，sodium iodide symporter)的功能而增加膜-定位NIS(membrane-localized NIS)，从而能够在甲状腺癌的治疗时增加放射性碘的摄取。

以下，通过实施例和实验例详细说明本发明。但是，下述的实施例和实验例仅是例示本发明，本发明的内容并不被下述实施例所限定。

[实施例1](E)-叔丁基4-(2-(4-(5-甲氧基-5-氧代-2-苯基-1-(4-(新戊酰氧基)苯基)戊-1-烯-1-基)苯氧基)乙基)哌嗪-1-羧酸酯(6a)的制备

步骤1：[4-[4-(2,2-二甲基丙酰氧基)苯甲酰]苯基]2,2-二甲基丙烯酸酯(A-1)的制备

将4,4-羟基二苯甲酮(10g，46.6mmol)溶解于140mL的二氯甲烷、40mL的四氢呋喃后，缓慢地添加新戊酰氯(19.7g，186mmol)和三乙胺(26mL，186mmol)后，在常温下反应12小时。在反应液中进一步添加饱和碳酸氢钠和二氯甲烷而萃取有机层。用无水Na₂SO₄干燥有机层，从而进行过滤。对溶剂减压蒸馏后所得到的残渣利用柱色谱法来进行纯化，得到了16g的目标化合物A-1(91％)。

步骤2：[4-(4-羟基苯甲酰)苯基]2,2-二甲基丙烯酸酯(A-2)的制备

将化合物A-1(12.4g，32.3mmol)和碳酸钾(2.2g，16.2mmol)溶解于甲醇(360mL)、二氯甲烷(60mL)后，在常温反应12小时。在反应液中添加1M的柠檬酸水溶液(16.2mL，16.2mmol)后，用乙酸乙酯进行萃取。用无水Na₂SO₄对有机层进行干燥并过滤。对溶剂减压蒸馏后所得到的残渣利用柱色谱法来进行纯化，得到了5.6g的目标化合物A-2(58％)。

步骤3：(E)-5-[4-(2,2-二甲基丙酰氧基)苯基]-5-(4-羟基苯基)-4-苯基-戊-4-炔酸酯(A-3)的制备

在四氢呋喃(130mL)中加入锌(8.8g，134mmol)，将温度降至0℃后，缓慢地添加氯化钛(7.35mL，67mmol)。将反应液在60℃加热两小时后，加入化合物A-2(5g，16.8mmol)和3-苯甲酰丙酸甲酯(4.8g，25.1mmol)。将反应液在50℃加热1小时。将反应混合物倒入10％碳酸钾水溶液中，搅拌30分钟后，利用氟镁石进行过滤。用乙酸乙酯萃取滤液后，用无水Na₂SO₄对有机层进行干燥并过滤。对溶剂减压蒸馏后所得到的残渣利用柱色谱法来进行纯化，得到了5.4g的目标化合物A-3(70％)。

步骤4：(E)-叔丁基4-(2-(4-(5-甲氧基-5-氧代-2-苯基-1-(4-(新戊酰氧基)苯基)戊-1-烯-1-基)苯氧基)乙基)哌嗪-1-羧酸酯(A-4)的制备

在二氯甲烷(3mL)中加入化合物A-3(0.05g，0.11mmol)、2-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)乙醇(30mg，0.13mmol)、三苯基膦(86mg，0.33mmol)，将温度降至0℃后，缓慢地添加偶氮二甲酸二异丙酯(0.064mL，0.33mmol)。15分钟后，将温度升至常温，搅拌12小时。在反应液中进一步添加水和乙酸乙酯，萃取有机层。用无水Na₂SO₄对有机层进行干燥并过滤。对溶剂减压蒸馏后所得到的残渣利用柱色谱法来进行纯化，得到了73mg的目标化合物A-4(99％)。

步骤5：(Z)-4-(5-羟基-1-(4-(2-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)乙氧基)苯基)-2-苯基戊-1-烯-1-基)苯酚(6a)的制备

在四氢呋喃(10mL)中加入化合物C(0.34g，0.05mmol)，将温度降至0℃后，缓慢地添加1M氢化铝锂(LiAlH₄，1.5mL，1.51mmol)。将温度升至常温，搅拌1小时。在反应液中进一步添加水和乙酸乙酯，萃取有机层。用无水Na₂SO₄对有机层进行干燥并过滤。对溶剂减压蒸馏后所得到的残渣利用柱色谱法来进行纯化，得到了0.28g的目标化合物6a(99％)。

[实施例2至13]

根据上述实施例1的方法制造了化合物6b至6m。就化合物6b至6m而言，在实施例1的步骤4中用不同的乙醇来代替2-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)乙醇，除此以外，用相同工序进行制造。将制造的化合物6a至6m的鉴定资料记载于下述表1。

[表1]

[实施例14]

(Z)-4-(5-羟基-2-苯基-1-(4-(2-(哌嗪-1-基)乙氧基)苯基)戊-1-烯-1-基)苯酚2盐酸盐(7a)的制备

在二氯甲烷(5mL)中加入化合物6a(28mg，0.05mmol)，将温度降至0℃后，添加三氟乙酸(0.08mL，1.00mmol)。将温度升至常温，搅拌1小时。在反应液中进一步添加水和乙酸乙酯，萃取有机层。用无水Na₂SO₄对有机层进行干燥并过滤。对溶剂减压蒸馏后所得到的残渣利用柱色谱法来进行纯化后，溶于甲醇：二氯甲烷(1：1)中，将温度降至0℃，缓慢地添加1M的HCl水溶液后，进行减压蒸馏，得到了4mg的目标化合物7a(17％)。

¹H-NMR(CD₃OD,400MHz)δ7.16-7.07(m,5H),7.01(d,J＝8.6Hz,2H),6.83(d,J＝8.8Hz,2H),6.76(d,J＝8.6Hz,2H),4.31(t,J＝4.2Hz,2H),3.66(m,10H),3.41(t,J＝6.8Hz,2H),2.51(m,2H),1.54(m,2H).MS(ESI)m/z:459[M+H]⁺。

[实施例15]

(E)-5-(4-(2-(氮丙啶-1-基)乙氧基)苯基)-5-(4-溴苯基)-4-苯基戊-4-烯-1-醇盐酸盐(13a)的制备

步骤1：(4-溴苯基)(4-甲氧基苯基)甲酮(B-1)的制备

在二氯甲烷(90mL)中溶解4-溴苯甲酰氯(8.2g，50.9mmol)和氯化铝(6.1g，50.9mmol)后，缓慢地添加苯甲醚(5g，46.2mmol)。搅拌3小时后，将温度降至0℃，加入1N的HCl(50mL)。在水层中添加乙酸乙酯进行萃取，用无水Na₂SO₄进行干燥并过滤。对溶剂减压蒸馏后所得到的残渣利用柱色谱法来进行纯化，得到了11g的目标化合物B-1(99％)。

步骤2：(4-溴苯基)(4-羟基苯基)甲酮(B-2)的制备

在甲苯(80mL)中加入化合物B-1(10g，34.3mmol)，将温度降至0℃后，缓慢地添加氯化铝(11.5g，86mmol)。在70℃加热4小时。将反应液冷却至常温后，加入1N的盐酸，添加乙酸乙酯进行萃取。用无水Na₂SO₄对有机层进行干燥并过滤。对溶剂减压蒸馏后所得到的残渣利用柱色谱法来进行纯化，得到了8.1g的目标化合物B-2(85％)。

步骤3：(E)-甲基5-(4-溴苯基)-5-(4-羟基苯基)-4-苯基戊-4-烯酸酯(B-3)的制备

利用与上述实施例1的步骤3相同的方法得到了0.61g的目标化合物B-3(39％)。

步骤4：(E)-甲基5-(4-(2-(氮丙啶-1-基)乙氧基)苯基)-5-(4-溴苯基)-4-苯基戊-4-烯酸酯(B-4)的制备

利用化合物B-3和2-(氮丙啶-1-基)乙醇，用与上述实施例1的步骤4相同方法得到了44mg的目标化合物B-4(54％)。

步骤5：(E)-5-(4-(2-(氮丙啶-1-基)乙氧基)苯基)-5-(4-溴苯基)-4-苯基戊-4-烯-1-醇盐酸盐(13a)的制备

在四氢呋喃(2mL)中加入化合物B-4(44mg，0.09mmol)，将温度降至0℃后，缓慢地添加1M的二异丁基氢化铝(0.26mL，0.26mmol)。将温度升至常温，搅拌1小时。在反应液中进一步添加水和乙酸乙酯，萃取有机层。用无水Na₂SO₄对有机层进行干燥并过滤。对溶剂减压蒸馏后所得到的残渣利用柱色谱法来进行纯化，得到了0.3mg的目标化合物13a(0.7％)。

[实施例16至18]

根据上述实施例15的方法制造了化合物13b至13d。就化合物13b至13d而言，除了在实施例15的步骤4中由不同的乙醇来代替2-(氮丙啶-1-基)乙醇以外，用相同的工序进行制造。将制造的化合物13a至13d的鉴定资料记载于下述表2。

[表2]

[实施例19]

(E)-5-(4-(2-(氮丙啶-1-基)乙氧基)苯基)-5-(4-溴苯基)-4-苯基戊-4-烯-1-醇盐酸盐(18t)的制备

步骤1：5-(4-(新戊酰氧基)苯基)戊-4-炔酸甲酯(C-1)的制备

将4-碘代苯基新戊酸酯(2g，6.6mmol)、氯化亚铜(I)(0.13g，0.66mmol)、双(三苯基膦)二氯化钯(II)(PdCl₂(PPh₃)₂，0.23g，0.33mmol)、戊-4-炔酸甲酯(methyl pent-4-ynoate)(0.74g，0.66mmol)溶解于三乙胺(15mL)后，在50℃反应12小时。将反应液减压浓缩后，利用柱色谱法得到了1.1g的目标化合物C-1(58％)。

步骤2：(E)-叔丁基3-(4-(5-甲氧基-5-氧代-2-苯基-1-(4-(新戊酰氧基)苯基)戊-1-烯-1-基)苯基)氮杂环丁烷-1-羧酸酯(C-2)的制备

将3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(0.27g，0.75mmol)、化合物C-1(0.14g，0.5mmol)、碘苯(84μL，0.75mmol)溶解于DMF(8mL)、水(4mL)后，加入0.025M的PdCl₂(PhCN)₂(0.2mL，5μmol)，在45℃加热10分钟。加入碳酸铯(0.24g，0.75mmol)，在45℃加热12小时。反应结束后，在反应液中进一步添加盐水和乙酸乙酯，萃取有机层。用无水Na₂SO₄对有机层进行干燥并过滤。对溶剂减压蒸馏后所得到的残渣利用柱色谱法来进行纯化，得到了81mg的目标化合物C-2(27％)。

步骤3：叔丁基(E)-3-(4-(5-羟基-1-(4-羟基苯基)-2-苯基戊-1-烯-1-基)苯基)氮杂环丁烷-1-羧酸酯(18t)的制备

在四氢呋喃(2mL)中加入化合物C-2(0.021mmol)，将温度降至0℃后，添加1M的氢化铝锂或二异丁基氢化铝或硼氢化锂(0.024mL，0.024mmol)。将温度升至常温，搅拌1小时。在反应液中进一步添加水和乙酸乙酯，萃取有机层。用无水Na₂SO₄对有机层进行干燥并过滤。对溶剂减压蒸馏后所得到的残渣利用柱色谱法来进行纯化后，溶于甲醇：二氯甲烷(1：1)，将温度降至0℃，缓慢地添加1M的HCl水溶液后，进行减压蒸馏而得到了24mg的目标化合物18t(78％)。

[实施例20至39]

利用上述实施例19的方法制造化合物18a至18s和18u。制造的化合物18a至18u的鉴定资料记载于下述表3。

[表3]

[实施例40](E)-5-(4-溴苯基)-4-苯基-5-(4-(哌嗪-1-基)苯基)戊-4-烯-1-醇(20a)的制备

步骤1：甲基(E)-5-(4-溴苯基)-4-苯基-5-(4-(哌嗪-1-基)苯基)戊-4-烯酸酯(D-2)的制备

在二氯甲烷(2mL)中加入化合物D-1(6mg，0.01mmol)，将温度降至0℃后，缓慢地添加三氟乙酸(0.05mL，0.65mmol)。将温度升至常温，搅拌12小时。在反应液中进一步添加水和乙酸乙酯，萃取有机层。用无水Na₂SO₄对有机层进行干燥并过滤。对溶剂减压蒸馏后所得到的残渣利用柱色谱法来进行纯化，得到了5mg的目标化合物D-2(99％)。

步骤2：(E)-5-(4-溴苯基)-4-苯基-5-(4-(哌嗪-1-基)苯基)戊-4-烯-1-醇(20a)的制备

利用化合物D-2，用与上述实施例19的步骤3相同的方法得到了7mg的目标化合物20a(41％)。

[实施例41至51]

利用上述实施例40的方法制造化合物20b至20l。制造的化合物20a至20l的鉴定资料记载于下述表4。

[表4]

[实施例52]

(E)-4-(5-羟基-1-(4-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)苯基)-2-苯基戊-1-烯-1-基)苯酚(22a)的制备

步骤1：甲基(E)-5-(4-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)苯基)-4-苯基-5-(4-(新戊酰氧基)苯基)戊-4-烯酸酯(E-2)的制备

在二氯乙烷(3mL)中加入化合物E-1(0.03g，0.06mmol)、丙酮(0.14mL，1.9mmol)、三乙酰氧基硼氢化钠(NaBH(OAc)₃，41mg，0.19mmol)，在常温搅拌1小时。在反应液中进一步添加水和乙酸乙酯，萃取有机层。用无水Na₂SO₄对有机层进行干燥并过滤。对溶剂减压蒸馏后所得到的残渣利用柱色谱法来进行纯化，得到了18mg的目标化合物E-2(54％)。

步骤2：(E)-4-(5-羟基-1-(4-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)苯基)-2-苯基戊-1-烯-1-基)苯酚(22a)的制备

利用化合物E-2，用与上述实施例19的步骤3相同的方法得到了4mg的目标化合物22a(27％)。

[实施例53至82]

利用上述实施例52的方法，制造了化合物22b至22ae。制造的化合物22a至22ae的鉴定资料记载于下述表5。

[表5]

[实施例83]

(Z)-5-(4-氨基苯基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-4-苯基戊-4-烯-1-醇(26a)的制备

在甲醇(0.5mL)、四氢呋喃(0.5mL)中加入化合物F-1(0.01g，0.02mmol)、氯化铵(11mg，0.21mmol)，将温度降至0℃后，加入锌(13mg，0.21mmol)。在常温搅拌12小时。利用氟镁石进行过滤后，对溶剂减压蒸馏后所得到的残渣利用柱色谱法来进行纯化，得到了9mg的目标化合物26a(99％)。

[实施例84至86]

利用上述实施例83的方法制造化合物26b至26d。将制造的化合物26a至26d的鉴定资料记载于下述表6。

[表6]

[实施例87]

(E)-N-(4-(5-羟基-1-(4-(4-异丙基哌嗪-1-基)苯基)-2-苯基戊-1-烯-1-基)苯基)甲磺酰胺(27a)的制备

在二氯甲烷(2mL)中加入化合物26b(5mg，10μmol)、三乙胺(3μL，0.02mmol)，将温度降至0℃后，加入甲烷磺酰氯(1μL，0.01mmol)。在常温搅拌12小时。在反应液中进一步添加饱和碳酸氢钠和二氯甲烷，萃取有机层。用无水Na₂SO₄对有机层进行干燥并过滤。对溶剂减压蒸馏后所得到的残渣利用柱色谱法来进行纯化后，溶于甲醇：二氯甲烷(1：1)，将温度降至0℃，缓慢地加入1M的HCl水溶液后，进行减压蒸馏而得到了1mg的目标化合物27a(17％)。

[实施例87至94]

利用上述实施例87的方法制造化合物27b至27h。制造的化合物27a至27h的鉴定资料记载于下述表7。

[表7]

[实施例95]

(E)-4-(5-羟基-1-(4-(4-异丙基哌嗪-1-基)苯基)-2-苯基戊-1-烯-1-基)苯基甲磺酸酯(28a)的制备

在二氯甲烷(2mL)中加入化合物G-1(10mg，22μmol)、二异丙基乙基胺(8μL，0.04mmol)，将温度降至0℃后，加入甲烷磺酰氯(3μL，0.02mmol)。在常温搅拌12小时。在反应液中进一步添加饱和碳酸氢钠和二氯甲烷，萃取有机层。用无水Na₂SO₄对有机层进行干燥并过滤。对溶剂减压蒸馏后所得到的残渣利用柱色谱法来进行纯化，得到了1mg的目标化合物28a(9％)。

[实施例96至101]

利用上述实施例95的方法制造化合物28b至28g。制造的化合物28a至28g的鉴定资料记载于下述表8。

[表8]

[实施例102]

(E)-4-(5-羟基-1-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-2-苯基戊-1-烯-1-基)苯酚(30a)的制备

步骤1：甲基(E)-5-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-4-苯基-5-(4-(新戊酰氧基)苯基)戊-4-烯酸酯(H-2)的制备

在二氯乙烷(3mL)中加入化合物H-1(0.01g，0.02mmol)、1-甲基哌嗪(7μL，0.06mmol)、三乙酰氧基硼氢化钠(NaBH(OAc)₃，14mg，0.06mmol)，在50℃加热12小时。在反应液中进一步添加水和乙酸乙酯，萃取有机层。用无水Na₂SO₄对有机层进行干燥并过滤。对溶剂减压蒸馏后所得到的残渣利用柱色谱法来进行纯化，得到了12mg的目标化合物H-2(99％)。

步骤2：(E)-4-(5-羟基-1-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-2-苯基戊-1-烯-1-基)苯酚(30a)的制备

利用化合物H-2，用与上述实施例19的步骤3相同的方法得到了2mg的目标化合物30a(18％)。

[实施例103]

利用上述实施例102的方法制造化合物30b。制造的化合物30a至30b的鉴定资料记载于下述表9。

[表9]

[实施例104]

(Z)-4-(5-羟基-2-苯基-1-(1-(2-(吡咯烷-1-基)乙基)吲哚啉-5-基)戊-1-烯-1-基)苯酚(33)的制备

步骤1：甲基(Z)-5-(吲哚啉-5-基)-4-苯基-5-(4-(新戊酰氧基)苯基)戊-4-烯酸酯(I-2)的制备

利用化合物I-1，用与上述实施例40的步骤1相同的方法得到了0.2g的目标化合物I-2(99％)。

步骤2：甲基(Z)-4-苯基-5-(4-(新戊酰氧基)苯基)-5-(1-(2-(吡咯烷-1-基)乙基)吲哚啉-5-基)戊-4-烯酸酯(I-3)的制备

在二甲基甲酰胺(1mL)中加入化合物I-2(20mg，0.04mmol)、碳酸钾(17mg，0.12mmol)、碘化钠(0.06mg，0.414μmol)，在常温搅拌12小时。在反应液中添加饱和碳酸氢钠和乙酸乙酯，萃取有机层。用无水Na₂SO₄对有机层进行干燥并过滤。对溶剂减压蒸馏后所得到的残渣利用柱色谱法来进行纯化，得到了3mg的目标化合物I-3(11％)。

步骤3：(Z)-4-(5-羟基-2-苯基-1-(1-(2-(吡咯烷-1-基)乙基)吲哚啉-5-基)戊-1-烯-1-基)苯酚(33)的制备

利用化合物I-3，用与上述实施例1的步骤5相同的方法得到了1mg的目标化合物33(55％)。

¹H-NMR(CD₃OD,400MHz)δ7.19-6.97(m,7H),6.77(d,J＝8.5H z,2H),6.64(m,2H),6.41(d,J＝8.7Hz,2H),3.67(m,2H),3.41(m,2H),3.51(m,2H),2.06(m,6H),1.55(m,2H),0.89(m,4H).MS(ESI)m/z:469[M+H]⁺。

[实施例105]

(Z)-4-(5-羟基-2-苯基-1-(1-(2-(哌啶-1-基)乙基)-1H-吲哚-5-基)戊-1-烯-1-基)苯酚(36)的制备

步骤1：甲基(Z)-5-(1H-吲哚-5-基)-4-苯基-5-(4-(新戊酰氧基)苯基)戊-4-烯酸酯(J-2)的制备

利用化合物J-1，用与上述实施例40的步骤2相同的方法得到了24mg的目标化合物J-2(99％)。

步骤2：甲基(Z)-4-苯基-5-(1-(2-(哌啶-1-基)乙基)-1H-吲哚-5-基)-5-(4-(新戊酰氧基)苯基)戊-4-烯酸酯(J-3)的制备

利用化合物J-2，用与上述实施例104的步骤1相同的方法得到了9mg的目标化合物J-3(31％)。

步骤3：(Z)-4-(5-羟基-2-苯基-1-(1-(2-(哌啶-1-基)乙基)-1H-吲哚-5-基)戊-1-烯-1-基)苯酚(36)的制备

利用化合物J-3，用与上述实施例1的步骤5相同的方法得到了2mg的目标化合物36(18％)。

¹H-NMR(CD₃OD,400MHz)δ7.30-6.95(m,14H),4.41(m,2H),3.61(m,4H),3.44(m,2H),3.11(m,2H),2.56(m,2H),1.93(m,6H),1.57(m,2H).MS(ESI)m/z:481[M+H]⁺。

[实施例106]

(Z)-4-(1-(4-(2-(3-氮杂二环[3.1.0]己烷-3-基)乙氧基)苯基)-5-羟基-2-苯基戊-1-烯-1-基)苯酚(38a)的制备

步骤1：甲基(E)-5-(4-(2-(3-氮杂二环[3.1.0]己烷-3-基)乙氧基)苯基)-4-苯基-5-(4-(新戊酰氧基)苯基)戊-4-烯酸酯(K-2)的制备

在二甲基甲酰胺(1mL)中加入K-1(10mg，0.02mmol)、3-氮杂二环[3,1,0]己烷(7mg，0.06mmol)、碘化钠(0.3mg，2μmol)、三乙胺(11μL，0.08mmol)，在80℃加热12小时。对溶剂减压蒸馏后所得到的残渣利用柱色谱法来进行纯化，得到了6mg的目标化合物K-2(53％)。

步骤2：(Z)-4-(1-(4-(2-(3-氮杂二环[3.1.0]己烷-3-基)乙氧基)苯基)-5-羟基-2-苯基戊-1-烯-1-基)苯酚(38a)的制备

利用化合物K-2，用与上述实施例1的步骤5相同的方法得到了3mg的目标化合物38a(62％)。

[实施例107至109]

利用上述实施例106的方法制造化合物38b至38d。制造的化合物38a至38d的鉴定资料示于下述表10。

[表10]

[实施例110]

(Z)-4-(1-(4-(2-(2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-基)乙氧基)苯基)-5-羟基-2-苯基戊-1-烯-1-基)苯酚(39)的制备

利用化合物Q，用与上述实施例40的步骤1相同的方法得到了0.8mg的目标化合物39(24％)。

¹H-NMR(CD₃OD,400MHz)δ7.18-7.07(m,5H),7.0(d,J＝7.0Hz,2H),6.83(d,J＝7.2Hz,2H),6.76(d,J＝7.0Hz,2H),6.68(d,J＝7.6Hz,2H),4.23(s,2H),3.81(m,2H),3.66(m,2H),3.41(m,8H),2.51(m,2H),2.21(m,4H),1.54(m,2H).MS(ESI)m/z:499[M+H]⁺。

[实施例111]

4-((Z)-1-(4-(2-((3aR,6aS)-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)乙氧基)苯基)-5-羟基-2-苯基戊-1-烯-1-基)苯酚(40)的制备

利用化合物R，用与上述实施例40的步骤1相同的方法得到了2mg的目标化合物40(19％)。

¹H-NMR(CD₃OD,400MHz)δ7.08-7.16(m,5H),7.04(d,J＝8.8Hz,2H),6.85(d,J＝8.0Hz,2H),6.79(d,J＝8.8Hz,2H),6.70(d,J＝8.0Hz,2H),4.31(m,2H),4.04(m,2H),3.83(m,1H),3.68(m,3H),3.36-3.49(m,8H),2.55(m,2H),1.57(m,2H).MS(ESI)m/z:485[M+H]⁺。

[实施例112]

(Z)-4-(1-(4-(二甲基((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)甲硅烷基)苯基)-5-羟基-2-苯基戊-1-烯-1-基)苯酚(42a)的制备

步骤1：甲基(Z)-5-(4-(二甲基((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)甲硅烷基)苯基)-4-苯基-5-(4-(新戊酰氧基)苯基)戊-4-烯酸酯(L-2)的制备

利用化合物L-1，通过与上述实施例106的步骤1相同的方法得到了8mg的目标化合物L-2(34％)。

步骤2：(Z)-4-(1-(4-(二甲基((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)甲硅烷基)苯基)-5-羟基-2-苯基戊-1-烯-1-基)苯酚(42a)的制备

利用化合物L-2，通过与上述实施例1的步骤5相同的方法得到了3mg的目标化合物42a(44％)。

[实施例113至116]

利用上述实施例112的方法制造化合物42b至42e。制造的化合物42a至42e的鉴定资料记载于下述表11。

[表11]

[实施例117]

(E)-N-(4-(5-羟基-1-(4-羟基苯基)-2-苯基戊-1-烯-1-基)苯基)-2-(哌啶-1-基)乙酰胺(44)的制备

步骤1：甲基(E)-4-苯基-5-(4-(2-(哌啶-1-基)乙酰氨基)苯基)-5-(4-(新戊酰氧基)苯基)戊-4-烯酸酯(M-2)的制备

利用化合物M-1，通过与上述实施例106的步骤1相同的方法得到了7mg的目标化合物M-2(80％)。

步骤2：(E)-N-(4-(5-羟基-1-(4-羟基苯基)-2-苯基戊-1-烯-1-基)苯基)-2-(哌啶-1-基)乙酰胺(44)的制备

利用化合物M-2，通过与上述实施例1的步骤5相同的方法得到了2mg的目标化合物44(28％)。

¹H-NMR(CD₃OD,400MHz)δ7.25(d,J＝7.8Hz,2H),7.17-7.10(m,5H),7.05(d,J＝8.5Hz,2H),6.86(d,J＝8.6Hz,2H),6.79(d,J＝8.5Hz,2H),4.01(s,2H),3.57(m,2H),3.44(t,J＝6.7Hz,2H),3.05(m,2H),2.55(m,2H),1.90(m,6H),1.56(m,2H).MS(ESI)m/z:471[M+H]⁺。

[实施例118]

(E)-4-(5-羟基-2-苯基-1-(4-((2-(哌啶-1-基)乙基)氨基)苯基)戊-1-烯-1-基)苯酚(45)的制备

在四氢呋喃(2mL)中加入化合物44(10mg，0.02mmol)，将温度降至0℃后，添加1M的氢化铝锂(0.051mL，0.05mmol)。在60℃加热12小时。在反应液中进一步添加水和乙酸乙酯，萃取有机层。用无水Na₂SO₄对有机层进行干燥并过滤。对溶剂减压蒸馏后所得到的残渣利用柱色谱法来进行纯化后，溶于甲醇：二氯甲烷(1：1)中，将温度降至0℃，缓慢加入1M的HCl水溶液后，进行减压蒸馏，得到了0.5mg的目标化合物45(6％)。

¹H-NMR(CD₃OD,400MHz)δ7.15-7.07(m,5H),7.01(d,J＝8.4Hz,2H),6.74(m,4H),6.50(d,J＝8.4Hz,2H),3.61(m,2H),3.48(m,2H),3.40(m,6H),2.51(m,2H),1.81(m,4H),1.55(m,4H).MS(ESI)m/z:457[M+H]⁺。

[实施例119]

2-((3aR,6aS)-3a,6a-二甲基六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)-N-(4-((E)-5-羟基-1-(4-羟基苯基)-2-苯基戊-1-烯-1-基)苯基)乙酰胺(46)的制备

步骤1：叔丁基(3aR,6aS)-5-(2-((4-((E)-5-甲氧基-5-氧代-2-苯基-1-(4-(新戊酰氧基)苯基)戊-1-烯-1-基)苯基)氨基)-2-氧代乙基)-3a,6a-二甲基六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-羧酸酯(N-1)的制备

利用化合物M-1，通过与上述实施例106的步骤1相同的方法得到了11mg的目标化合物N-1(99％)。

步骤2：叔丁基(3aR,6aS)-5-(2-((4-((E)-5-羟基-1-(4-羟基苯基)-2-苯基戊-1-烯-1-基)苯基)氨基)-2-氧代乙基)-3a,6a-二甲基六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-羧酸酯(N-2)的制备

利用化合物N-1，通过与上述实施例1的步骤5相同的方法得到了4mg的目标化合物N-2(39％)。

步骤3：2-((3aR,6aS)-3a,6a-二甲基六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)-N-(4-((E)-5-羟基-1-(4-羟基苯基)-2-苯基戊-1-烯-1-基)苯基)乙酰胺(46)的制备

利用化合物N-2，通过与上述实施例40的步骤1相同的方法得到了1mg的目标化合物46(38％)。

¹H-NMR(CD₃OD,400MHz)δ7.23(d,J＝8.4Hz,2H),7.17-7.08(m,5H),7.03(d,J＝8.4Hz,2H),6.83(d,J＝8.5Hz,2H),6.77(d,J＝8.4Hz,2H),4.24(s,2H),3.43(m,8H),2.52(m,2H),1.52(m,4H).MS(ESI)m/z:498[M+H]⁺。

[实施例120]

(Z)-1-(4-(5-羟基-1-(4-(4-异丙基哌嗪-1-基)苯基)-2-苯基戊-1-烯-1-基)苯基)胍(50)的制备

步骤1：(Z)-5-(4-氨基苯基)-5-(4-(4-异丙基哌嗪-1-基)苯基)-4-苯基戊-4-烯-1-醇(O-1)的制备

在二甲基甲酰胺(1mL)中加入化合物26b(5mg，11μmol)、N,N'-二-叔丁氧羰基-硫脲(N,N'-di-Boc-thiourea)(3mg，0.01mmol)、氯化汞(II)(3mg，0.01mmol)、三乙胺(5μL，0.03mmol)，在常温加热12小时。对溶剂减压蒸馏后所得到的残渣利用柱色谱法来进行纯化，得到了6mg的目标化合物O-1(84％)。

步骤2：(Z)-1-(4-(5-羟基-1-(4-(4-异丙基哌嗪-1-基)苯基)-2-苯基戊-1-烯-1-基)苯基)胍(50)的制备

利用化合物O-1，通过与上述实施例40的步骤1相同的方法得到了0.5mg的目标化合物50(9％)。

MS(ESI)m/z：498[M+H]⁺。

[实施例121]

(E)-4-(4-(5-羟基-1-(4-羟基苯基)-2-苯基戊-1-烯-1-基)苯基)哌嗪-1-甲酰亚胺酰胺(52)的制备

步骤1：叔丁基((E)-((叔丁氧基羰基)亚氨基)(4-(4-((E)-5-羟基-1-(4-羟基苯基)-2-苯基戊-1-烯-1-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)氨基甲酸酯(P-1)的制备

利用化合物20c，通过与上述实施例120的步骤1相同的方法得到了5mg的目标化合物P-1(36％)。

步骤2：(E)-4-(4-(5-羟基-1-(4-羟基苯基)-2-苯基戊-1-烯-1-基)苯基)哌嗪-1-甲酰亚胺酰胺(52)的制备

利用化合物P-1，通过与上述实施例40的步骤1相同的方法得到了0.7mg的目标化合物52(23％)。

¹H-NMR(CD₃OD,400MHz)δ7.16-7.07(m,5H),7.01(m,2H),6.78(m,2H),6.67(m,2H),6.40(d,J＝8.6Hz,2H),3.67(m,2H),3.28(m,2H),3.48(m,1H),3.41(t,J＝6.7Hz,2H),3.19(m,2H),3.13(m,1H),2.51(m,2H),1.54(m,2H).MS(ESI)m/z:457[M+H]⁺。

[实验例1]ERRγ、ERRα、ERRβ、ERα结合分析法(binding assay)

1)ERRγ结合分析法(反向激动剂测定(inverse agonist assay))

将本发明的芳基乙烯衍生物从最终浓度10μM开始以2倍浓度进行稀释并依次加入384孔板。并且，将结合有GST的ERRγLBD(ligand-binding domain：配体结合域)以最终浓度为5nM的方式进行添加，将荧光素缀合共激活因子PGC1a(fluorescien-conjugatedcoacitivator PGC1a)和Tb-a-GST抗体分别以成为500nM和5nM的方式进行添加。添加所有试剂后，在20℃轻轻摇晃1小时的同时进行反应，反应后，结合活性以TR-FRET方式进行测定。即，在340nm进行激发，在495nm和520nm分别测定发射值后，结果分析以490nm测定值/520nm测定值表示，分析图表使用Prism 6。

2)ERRα/ERRβ/ERα结合分析法(选择性测试(Selectivity test))

ERRα结合分析法使用了结合有GST的ERRαLBD，此外的所有实验方法与ERRγ结合分析法相同。

ERRβ结合分析法中，结合有GST的ERRαLBD以最终浓度为10nM的方式使用，荧光素缀合共激活因子PGC1a以250nM的方式使用，此外的所有实验方法与ERRγ结合分析法相同。

ERα结合分析法中，在添加有本发明的芳基乙烯衍生物的384孔板中将结合有GST的ERαLBD(ligand-binding domain：配体结合域)以最终浓度成为7.3nM的方式进行添加。并且，将荧光素缀合共激活因子PGC1a和Tb-a-GST抗体以分别成为250nM和5nM的方式进行添加，将作为激动剂的β-雌二醇(β-estradiol)以最终浓度成为4nM的方式进行添加。此后的所有实验方法与ERRγ结合测定相同。

将上述实验例1的结果示于下述表12。

[表12]

[实验例2]ERRγ反向激动剂功能分析法(inverse agonist functional assay)

将AD293按照9×10⁴个/孔浓度，使用添加了0.5％的FBS的DMEM高葡萄糖(Hyclone，USA)培养液，在24孔板培养24小时。替换成添加有10％的FBS的DMEM高葡萄糖培养液，混合TransIT-LT1转染试剂(Mirus，USA)和pCMX-Gal4-ERRγ、pFR-荧光素酶报告基因质粒、pCMV-β-gal并一同进行处理后培养24小时。然后，用本发明的芳基乙烯衍生物处理24小时后，用得到的裂解物(lysate)分别进行荧光素酶活性分析和β-gal分析。全部结果由三次以上的独立且反复的实验导出。

将其结果记载于下述表13，“Cpds”表示经化合物处理时的反向激动剂功能(inverse agonist functional)活性，“Ref 5182”表示每次进行分析时用于验证数据的参照化合物GSK5182的活性，“Cpds/Ref 5182”表示相对于参照化合物的本发明的芳基乙烯衍生物的活性程度。

[表13]

[实验例3]生物体外(in vitro)ADME/Tox(吸收、分布、代谢、排泄和毒性)评价

1)CYP450(细胞色素P450)活性抑制评价

将人肝微粒体(0.25mg/ml)和0.1M的磷酸缓冲溶液(pH 7.4)、5种药物代谢酶的基质药物混合物(非那西丁50μM、双氯芬酸10μM、S-美芬妥英100μM、右美沙芬5μM、咪达唑仑2.5μM)和本发明的芳基乙烯衍生物分别以0、10μM浓度添加，在37℃预培养5分钟后，添加NADPH再生系统溶液，在37℃培养15分钟。然后，为了结束反应，添加包含内标物质(特非那定)的乙腈溶液，离心分离(14000rpm，4℃)5分钟后，将上清液注入LC-MS/MS系统，同时分析基质药物的代谢物，从而评价了本发明的芳基乙烯衍生物带来的药物代谢酶抑制能力。

将其结果记载于下述表14。

[表14]

2)微粒体稳定性评价

将4种肝微粒体(liver microsomes)(人类、狗、大鼠、小鼠0.5mg/ml)和0.1M的磷酸缓冲溶液(pH 7.4)、本发明的芳基乙烯衍生物以1μM的浓度进行添加，在37℃预培养5分钟后，添加NADPH再生系统溶液，在37℃培养30分钟。然后，为了结束反应，添加包含内标物质(氯磺丙脲)的乙腈溶液，离心分离(14000rpm，4℃)5分钟后，将上清液注入LC-MS/MS系统，分析基质药物，从而评价了本发明的芳基乙烯衍生物的代谢稳定性。

将其结果记载于下述表15。

[表15]

3)PAMPA(平行人工膜渗透性试验)评价

PAMPA是为了在试管内测定物质的细胞膜透过度而开发的方法，使用corniggentest公司(NY，US)的脂三层PVDF(lipid tri-layer PVDF)膜而进行的，使用的实际均购自Sigma(MO，US)公司。首先，将待测物质在PBS(pH7.4)中以最终浓度成为10mM的方式进行稀释后，将300mL添加于安装有PVDF膜的96转移孔(transwell)的底部孔(bottom well)，将200mL的PBS添加于上部孔(upper well)。然后，将板在25℃反应5小时后，从各孔中，将20mL的溶液移至新容器中后，添加80mL的包含内标物质(4mM氯磺丙脲)的乙腈。溶液内物质的浓度利用LC-MS/MS(Thermo Fisher Scientific，MO，US)进行分析，物质的透过度根据参考文献中报道的式子进行计算。

参考文献：A Novel Design of artificial membrane for improving thePAMPA model.Chen X,Murawski A,et al.Pharmaceutical Research.25：1511,2007

将其结果记载于下述表16。

[表16]

4)hERG通道结合抑制能力评价

作为阳性对照，将E-4031(有效IC50：10-90nM)化合物以3倍分阶段进行稀释后，与预先准备的含有hERG通道的膜和荧光性示踪剂一起混合，反应4小时后，测定不同浓度的极化(polarization)值，从而得到了IC₅₀。对于本发明的芳基乙烯衍生物，测定分阶段地进行稀释的16点(points)浓度下的荧光强度(530nm激发，590nm发射)，与DMSO溶剂对照组进行比较。

使用了hERG荧光偏振分析(Invitrogen：PV5365)试剂盒。

将其结果记载于下述表17。

[表17]

[实验例4]体内药代动力学(in vivo PK)评价

为了了解将本发明的化合物对大鼠(rat)进行静脉或口服给药时的药代动力学行为，使用最小200g的大鼠，实施如下实验，并将其结果示于下述表18。

甲.实验方法

1.对口服给药组，一天前进行禁食。

2.采集各动物的时间为0时的血液。

3.对静脉给药组(IV)从尾静脉将药物以1mg/kg的用量进行给药(注射器)。

4.对口服给药组(PO)按口服方式将药物以10mg/kg的用量进行给药(口服片(zondec))。

5.给药后静脉给药组的情况下，在颈静脉实施0.08、0.25、0.5、1、2、4、6、8小时期间的第8次采血。1次采血量为400～500ul。

6.给药后口服给药组的情况下，在颈静脉实施0.25、0.5、1、4、6、8小时期间的第6次采血。1次采血量为400～500ul

7.将各血液与3.8％的柠檬酸钠(sodium citrate)溶液混合并保管在冰中。

8.通过离心分离机收集上清液血浆(plasma)。

9.注入LC-MS/MS系统分析药物。

[表18]

[实验例5]对于未分化的甲状腺癌的实验

1.材料和方法

1.1.细胞

从德国微生物菌种保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen undZellkulturen)购买未分化的甲状腺癌细胞株CAL-62。将细胞株全部在用10％FBS、1％抗生素-抗真菌剂(Hyclone)高度补充的DMEM培养基内在5％CO₂气氛下维持37℃。用表达增强的萤火虫荧光素酶(Enhanced firefly luciferase)基因(effluc)的逆转录病毒对CAL-62细胞进行处理，从而确立了能够稳定地表达effluc基因的细胞株。将这样确立的细胞株命名为CAL-62/effluc细胞。

1.2.¹²⁵I摄取分析(Uptake Assay)

使细胞在24-孔板中被覆24小时后，用化合物18a进行处理，制成DMSO中100mM的储藏(stock)溶液，在-80℃储藏24小时。吸出含有药物的培养基后，将细胞用1mL的HBSS进行清洗，与含有0.5％牛血清白蛋白(bHBSS)、3.7kBq无载体(carrier-free)¹²⁵I(Perkin-Elmer)和10μmol/L的碘化钠(非活性740MBq/mmol)的汉克斯平衡盐溶液(Hank'balancedsalt solution：HBSS)500μ一起在37℃孵育30分钟。然后，将细胞用冰冷的bHBSS清洗2次，用500μl的2％十二烷基硫酸钠(SDS)进行裂解。利用伽玛计数器(Cobra II；CanberraPackard,Packard Bioscience)测定放射性。利用通过BCA试剂盒(Pierce ProteinBiology)确定的总蛋白质浓度对细胞的放射性进行标准化。

1.3.根据化合物18a药物浓度的¹²⁵I摄取分析

将细胞用多种浓度的(载体(Vehicle)，6、12uM)化合物18a进行处理后，接下来，如上所述进行¹²⁵I摄取试验。

1.4.KClO₄导致的¹²⁵I摄取抑制分析

将细胞与300μM的KClO₄(是对于NIS的特异性抑制剂)一起预孵育30分钟来抑制碘摄取，接下来，如上述记载的那样，进行¹²⁵I摄取试验。

1.5.MAK激酶抑制剂导致的¹²⁵I摄取抑制分析：将细胞与PD98059或U0126(是对于MAP激酶的特异性抑制剂)一起预孵育30分钟来抑制碘摄取，接下来，如上述记载的那样，进行¹²⁵I摄取试验。

1.6定量RT-PCR

总RNA利用Trizol(Invitrogen,Carlsbad,CA)进行分离。将总RNA(2ug)用RevertAid第一链cDNA合成试剂盒(RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit，ThermoScientific,Pittsburgh,PA)逆转录为cDNA。利用cDNA模板，并利用各目标基因的引物(primer)和YBR Green PCR预混液(YBR Green PCR master mix，Applied Biosystems,Foster City,CA)，用ViiA 7实时PCR系统仪器(Applied Biosystems)设备进行扩增。各目标基因的引物序列如下：ERRγ(正向，5'-CAG ACG CCA GTG GGA GCT A-3'；反向，5'-TGGCGA GTC AAG TCC GTT CT-3')、NIS(正向，5'-TCT AAC CGA TGC TCA CCT CTT CTG-3'；反向，5'-AGA TGA TGG CAC CTC CTT GAA CC-3')和酸性核糖体蛋白36B4(正向，5'-CCA CGCTGC TGA ACA TGC T-3'；反向，5'-TCG AAC ACC TGC TGG ATG AC-3')。各目标基因利用36B4基因进行标准化。

1.7.克隆形成(Clonogenic)分析

将细胞涂抹于6-孔板，放置24小时。利用12μM的化合物18a处理24小时后，去除含有药物的培养基，用PBS将细胞清洗2次。在之后6小时期间存在50μCi¹³¹I(KIRAMS,Korea)或者不存在的条件下，将培养基替换为DMEM。将细胞用冷bHBSS进行清洗，在正规培养培养基中放置对应6次倍增(six doublings)的时间。最终，将细胞在4％多聚甲醛(PFA)溶液内进行固定，用0.05％结晶紫(crystal violet)进行染色。对具有超过50个细胞的控制集落和用¹³¹I进行处理的集落进行计数。

1.8.蛋白质印迹(Western Blot)

将细胞在没有化合物18a的情况下或者与化合物18a一起处理24小时，用冷PBS清洗2次，用含有完整的蛋白酶抑制剂混合物的RIPA缓冲液(Roche)进行溶菌。对于NIS的细胞膜蛋白质的情况下，根据制造商的说明书，利用蛋白质生物素化试剂盒(EZ-Link^TM Sulfo-NHS-Biotin,Thermo Scientific)制造样品。简单地说就是：将未处理的细胞或经处理的细胞中的任意一种用冰冷的PBS/CM(含有0.1mM氯化钙和1mM氯化镁的PBS，pH 7.3)清洗2次，与PBS/CM中的EZ Link NHS-磺酸-SS-生物素(1mg/mL)一起在4℃孵育30分钟。利用冷的含有100mM甘氨酸的PBS/CM清洗2次而使反应萃灭(quenching)，与PBS/CM中的100mM甘氨酸一起在4℃进一步孵育20分钟。然后，将细胞在4℃适当振荡1小时的同时在利用含有蛋白酶抑制剂混合物和磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液(Roche)进行溶菌之前利用PBS/CM快速清洗2次。将溶菌液在4℃以16000g离心分离30分钟。上清液的一部分用于总细胞蛋白质免疫印迹。将其余样品在室温中与100μL链霉抗生物素蛋白珠(Thermo Scientific)一同孵育1小时，从而用于获得膜蛋白。将珠子用RIPA缓冲液清洗3次，将结合的蛋白质在室温中利用50μL的Laemmli缓冲液(62.5M的Tris，pH 6.8；20％的甘油；2％的SDS；5％的b-巯基乙醇；以及0.01％的溴酚蓝)洗脱30分钟。将等量的总细胞膜蛋白质和生物素化细胞膜蛋白质加载(load)于各泳道(lane)上，利用4-12％梯度Bis-Tris凝胶(Invitrogen)进行分解(resolve)。将蛋白质移到0.2μm的PVDF膜(Invitrogen)。将膜与原代小鼠单克隆人NIS-特异性抗体(稀释1：1000，Thermo Scientific，Catalog#：MS-1653-P1，克隆：FP5A)一起孵育，接下来，与HRP-缀合的2次抗体一起在室温进行孵育。ECL-Plus(Amersham Pharmacia)根据制造商的方法而用于检测过氧化物酶活性。类似地，其他蛋白质的情况下，将等量蛋白质加载于各泳道，利用4-12％梯度Bis-Tris凝胶(Invitrogen)进行分解。将蛋白质移至0.2μm的PVDF膜(Invitrogen)。将膜与一次抗体(ERRγ、pERK1/2、β-肌动蛋白(β-actin))一起在4℃孵育一晚，然后在室温中与适当的HRP-缀合的2次抗体一起孵育。根据制造商的说明书，利用ECL-Plus检测过氧化物酶活性。利用ImageJ软件确定带密度。

1.9.动物实验

使用Nude小鼠(Balb/c nu/nu，雌性，6周龄)，所有动物在漆谷庆北大学校医院DMRC中心动物实验室中正常饲养。将5×10⁶CAL-62/effluc细胞向nude小鼠左侧大腿部进行皮下注射而形成肿瘤。摘取肿瘤，切成小尺寸(20mg以上)的小块后，再次对nude小鼠进行皮下注射而形成肿瘤。

形成肿瘤后，对CAL-62/effluc小鼠肿瘤模型按照如下进行分组：组1：载体(Vehicle)，组2：100mpk化合物18a，组3：200mpk化合物18a。对各组的小鼠每天将载体(100％PEG)、化合物18a(100mpk，200mpk)进行口服给药，口服给药6天。为了观察给药前和给药后的肿瘤生长差异，进行光学成像(生物发光成像(bioluminescent imaging))。给药期间，两天观察一次小鼠体重变化。

另外，为了确认CAL-62/effluc肿瘤内的¹²⁵I摄取的增加变化，按照如下进行脏器分布调查(Bio-distribution study)。将药物最后一次进行给药后的第二天，通过对小鼠静脉注射¹²⁵I(5uCi/小鼠)来进行给药。给药4小时后，摘取包含某肿瘤的全部脏器，测定各脏器的重量。然后，将各脏器移到5ml试管后，利用伽玛计数器(gamma counter)测定脏器内的放射性(radioactivity)。脏器内的¹²⁵I摄取程度用每克注射剂量百分比(percentageinjected dose per gram)(％ID/g)来表示。

1.10.动物影像

为了获得光学影像，对小鼠腹腔注射D-荧光素(3mg/小鼠)。注射后约10分钟后，对小鼠进行吸入麻醉(1-2％异氟烷气体)后，置于IVIS Lumina III(PerkinElmer)成像床。将影像获得时间设定为自动后，获得了光学影像。利用活体成像软件(Living imagingsoftware)(version 2.12,PerkinElmer)对从肿瘤中出来的光学影像信号进行定量。

1.11.统计分析

所有数据均以平均±表示，利用GraphPad Prism 5的t检验(Studenttest)确定来统计学意义。将P值<0.05视为具有统计学意义。

2.结果

2.1利用化合物18a的ATC细胞中的增加的放射性碘摄取

用化合物18a进行处理后，根据不同的浓度和不同的时间，在CAL62细胞中可确认放射性碘摄取的显著增加(图1和图2)。在化合物18a的12uM浓度上观察到碘摄取增加最大。为了试验增加的放射性碘摄取是否是通过化合物18a而与NIS作用的调节相关，共同孵育作为NIS的特异性抑制剂的KClO₄与用化合物18a-进行处理的CAL62细胞，观察放射性碘摄取水平的变化。KClO₄在用化合物18a-进行处理的细胞中完全阻断增加的放射性碘摄取(图3)，这暗示碘摄取的增加与由化合物18a介导的NIS的被改善的作用活性直接相关。

2.2在ATC细胞中利用化合物18a的内源性的ERRγ和NIS mRNA表达调节

为了确定在ATC细胞中化合物18a对ERRγmRNA水平的影响，利用ERRγ-和NIS-特异性引物(Primer)进行了实时PCR。用化合物18a进行处理的结果，导致了在CAL62细胞中ERRγmRNA表达的显著减少(图4)，并确认了与载体处理组相比时减少约16倍左右。相反，确认了NIS mRNA表达与载体处理组相比时增加约2倍左右(图5)。

2.3在ATC细胞中基于化合物18a的内源性的ERRγ蛋白表达调节

为了确定在ATC细胞中化合物18a对ERRγ蛋白水平的影响，利用ERRγ-特异性抗体进行了免疫印迹分析。用化合物18a进行处理的结果，导致了在CAL62细胞中ERRγ蛋白表达的显著减少(图6)，并确认了与载体处理组相比时减少约2.8倍左右(图7)。

2.4通过在ATC细胞中基于化合物18a进行的内源性的MAP激酶信号的活化而得到的ATC细胞中的膜-定位(membrane-localized)NIS蛋白的增加

在用化合物18a进行处理的ATC细胞中发现了p44和p42ERK这样的磷酸化的MAP激酶水平的显著增加(图8)。ERK1和ERK2的磷酸化的形态的相对增加分别为2.2-倍和2.8-倍(图9)。

化合物18a导致的放射性碘摄取增加(图10和图11)和ERK1以及ERK2的磷酸化的形态的相对增加，被选择性MEK抑制剂PD98059、U0126完全抑制(图12和图13)。

为了确定在ATC细胞中化合物18a对于NIS蛋白质水平的影响，利用NIS-特异性抗体进行免疫印迹分析。用化合物18a进行处理的结果，导致了CAL62细胞中的总NIS蛋白质(完全或部分糖基化形式(fully or partially glycosylated form))表达的显著增加(图14和图15)，能够确认与载体处理组相比，减少了约1.9倍左右。为了确定化合物18a对于NIS膜蛋白状态的效果，通过利用NIS-特异性抗体的免疫印迹检测，对于利用细胞膜生物素化试剂盒从用化合物18a进行处理的CAL62细胞收集的膜质的(membr anous)总NIS蛋白水平的变化，进行检测。与对照组细胞相比，化合物18a在ATC细胞中诱导具有成熟和未成熟的形态的细胞膜-定位NIS蛋白的急剧增加(图14)。就谱带强度的定量分析而言，在CAL62细胞中分别表现出膜完全糖基化和部分糖基化NIS蛋白的8.1倍和6.4倍的增加(图15)。

2.5在ATC中化合物18a导致的I-131介导的细胞毒性的改良

利用了I-131的克隆形成分析中，利用化合物18a或I-131单独中的任意一个进行处理的CAL62细胞中表现出最小的细胞毒性效果(图16)。I-131或GSK5182组的相对集落形成能力在CAL62细胞中分别为92.9±5.8％和94.5±10.8％(图17)。但是，组合¹³¹I和GSK5182的结果，在CAL-62中以大致58.5±7.4％发生了集落形成能力的显著减少(图17)。

2.6在ATC肿瘤模型中化合物18a的给药导致的放射性碘摄取增加

确立CAL62-effluc小鼠肿瘤模型后，按照如下进行分组(图18，组1：载体，组2：100mpk化合物18a，组3：200mpk化合物18a)。对各组的小鼠，每天口服给药载体(100％PEG)、化合物18a(100mpk，200mpk)，口服给药6天。为了监控给药前和给药后的肿瘤生长差异，进行光学成像(bioluminescent imaging：生物发光成像)。最后一次给药后，第二天将放射性同位素(I-125)对小鼠进行给药，2小时后处死小鼠，然后摘取所有脏器，用伽玛计数器测定放射线数值。确认了通过化合物18a处理，CAL62肿瘤内放射性碘摄取浓度依赖性地增加(图19)。与载体组比较时，在100mpk、200mpk化合物18a组中表现出约4.4倍、16.2倍的放射性碘摄取增加。利用光学成像观察肿瘤生长的差异时，在化合物18a组中表现出明显的肿瘤生长抑制功效(图20)。药物浓度依赖性地显示出肿瘤生长抑制功效(图21)。小鼠的急剧的体重变化在全部组中均未出现(图22)。

以上，本发明只对记载的实施例进行了详细叙述，但是在本发明的技术思想范围内能够进行多种变形和修订对于本领域技术人员而言是显而易见的，而且这样的变形和修订当然也属于本发明要求保护的范围。

产业上的利用可能性

本发明的芳基乙烯衍生物是新型化合物，与现有的GSK5182化合物相比，对于ERRγ表现出非常高的抑制活性的同时表现出药物稳定性、药理活性和毒性得到改善的效果，因此作为对由ERRγ介导的疾病、特别是肥胖、糖尿病、高血脂症、脂肪肝或动脉硬化等代谢性疾病、以及视网膜病变有效的预防和治疗剂，可以没有副作用地有用地使用。