CN109562151A

CN109562151A - 使用过继细胞疗法治疗b细胞恶性肿瘤的方法

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Publication number: CN109562151A
Application number: CN201780046873.8A
Authority: CN
Inventors: C·J·特特尔; D·马洛尼; S·R·里德尔; M·吉尔伯特
Original assignee: Fred Hutchinson Cancer Research Center; Juno Therapeutics Inc
Current assignee: Juno Therapeutics Inc; Fred Hutchinson Cancer Center
Priority date: 2016-06-06
Filing date: 2017-06-06
Publication date: 2019-04-02
Also published as: BR112018074406A2; MX2018014911A; US20200016199A1; EP3463437A2; JP7139318B2; MA45341A; KR102644950B1; WO2017214207A2; CA3024725A1; WO2017214207A3; KR20240036704A; KR102540751B1; JP2022033929A; JP2023184646A; KR20190026740A; JP2019517589A; KR20230085947A; AU2017277396A1; WO2017214207A8

Abstract

提供了过继细胞治疗方法，其涉及给予用于治疗B细胞恶性肿瘤的多个剂量的细胞。该细胞通常表达重组受体，如嵌合抗原受体(CAR)。在一些实施方案中，该方法用于治疗患有慢性淋巴细胞白血病(CLL)的受试者。在一些实施方案中，该方法用于治疗患有非霍奇金淋巴瘤(NHL)的受试者。在一些实施方案中，该方法包括事先给予淋巴细胞清除疗法，如事先给予氟达拉滨和/或另一种淋巴细胞清除化学治疗剂例如环磷酰胺。在一些实施方案中，该方法的特征包括根据所提供的方法治疗的受试者的完全缓解、总生存期和/或无进展生存期的增加。

Description

使用过继细胞疗法治疗B细胞恶性肿瘤的方法

政府利益声明

本发明是在国立卫生研究院授予的CA136551下由政府支持完成的。政府对本发明拥有一定的权利。

相关申请

本申请要求2016年6月6日提交的美国临时申请号62/346,547、2016年11月3日提交的美国临时申请号62/417,292和2016年12月3日提交的美国临时申请号62/429,737的优先权，这些申请的内容通过引用以其全部内容并入本文。

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本申请与电子格式的序列表一起提交。序列表以2017年6月6日创建、大小为36,277千字节的名为735042006740seqlist.txt的文件提供。将在电子格式的序列表中的信息通过引用以其全文并入。

技术领域

本公开内容涉及过继细胞疗法，其涉及给予用于治疗B细胞恶性肿瘤的多个剂量的细胞。该细胞通常表达重组受体，如嵌合抗原受体(CAR)。在一些实施方案中，该方法用于治疗患有慢性淋巴细胞白血病(CLL)的受试者。在一些实施方案中，该方法用于治疗患有非霍奇金淋巴瘤(NHL)的受试者。在一些实施方案中，该方法包括事先给予淋巴细胞清除疗法，如事先给予氟达拉滨和/或另一种淋巴细胞清除化学治疗剂例如环磷酰胺。在一些实施方案中，该方法的特征包括根据所提供的方法治疗的受试者的完全缓解、总生存期和/或无进展生存期的增加。

发明背景

多种免疫疗法和/或细胞疗法可用于治疗疾病和病况。例如，过继细胞疗法(包括涉及给予表达对感兴趣的疾病或病症具有特异性的嵌合受体(如嵌合抗原受体(CAR)和/或其他重组抗原受体)的细胞的那些过继细胞疗法，以及其他过继免疫细胞和过继T细胞疗法)可有效治疗癌症以及其他疾病和病症。例如，需要改进的方法来增加这种方法的功效。提供了满足这种需求的方法和用途。

发明概述

提供了工程化细胞(例如，T细胞)及其组合物用于治疗患有疾病或病况的受试者的方法和用途，该疾病或病况通常是或包括白血病或淋巴瘤，最特别地是慢性淋巴细胞白血病(CLL)和/或非霍奇金淋巴瘤(NHL)。在一些方面，与某些替代方法(如特别是治疗的受试者组)相比，该方法和用途提供或实现改善的或更持久的应答或功效和/或降低的毒性风险或其他副作用。在一些实施方案中，该方法通过以下项是有利的：通过给予指定数量或相对数量的工程化细胞，给予确定比例的特定类型的细胞，用特定淋巴细胞清除疗法预处理受试者，治疗特定患者群体(如具有特定风险预测、分期和/或先前治疗历史的那些患者群体)和/或其组合。

在一些实施方案中，该方法和用途包括在过继细胞疗法中向该受试者给予表达基因工程化(重组)细胞表面受体的细胞，该基因工程化(重组)细胞表面受体通常是嵌合受体(如嵌合抗原受体(CAR))，识别通过白血病或淋巴瘤所表达的、与白血病或淋巴瘤相关的和/或特异于白血病或淋巴瘤的抗原的细胞，和/或该抗原所来源的细胞类型。该细胞通常以配制用于给药的组合物给予；该方法通常包括向该受试者给予一个或多个剂量的细胞，该一个或多个剂量可包括特定数量或相对数量的细胞或工程化细胞，和/或在组合物中确定比例的两种或更多种亚型如CD4与CD8T细胞。

受试者通常已经用淋巴细胞清除疗法预处理，与不进行预处理或使用不同淋巴细胞清除疗法进行预处理的方法相比，这在一些方面增加了给药后细胞的持久性和/或功效。淋巴细胞清除疗法通常包括给予氟达拉滨，其通常与另一种化学疗法或其他药剂如环磷酰胺组合给予，它们可以以任何顺序依次或同时给予。

在一些实施方案中，该方法包括治疗患有或怀疑患有慢性淋巴细胞白血病(CLL)的受试者。在一些方面，该方法包括向该受试者给予一剂表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，该嵌合抗原受体特异性地结合至由CLL表达的靶抗原。在一些方面，该剂量含有(a)2 x 10⁵或约2 x 10⁵个细胞/公斤受试者体重(细胞/kg)；(b)2 x 10⁶或约2 x 10⁶个细胞/kg，(c)不超过2 x 10⁶或不超过约2 x 10⁶个细胞/kg，(d)不超过2 x 10⁵或不超过约2 x 10⁵个细胞/kg和/或(e)在2 x 10⁵或约2 x 10⁵个细胞/kg和2 x 10⁶或约2 x 10⁶个细胞/kg之间。在一些方面，在给药之前受试者已经用淋巴细胞清除疗法预处理，该淋巴细胞清除疗法包括给予氟达拉滨。

还提供了治疗患有或怀疑患有慢性淋巴细胞白血病(CLL)的受试者的方法，该方法包括向该受试者给予一剂表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，该嵌合抗原受体特异性地结合至由CLL表达的靶抗原，所述剂量含有(a)1 x 10⁷或约1 x 10⁷个总细胞或总CAR表达细胞，(b)1.5 x 10⁸或约1.5 x 10⁸个总细胞或总CAR表达细胞，(c)不超过1 x 10⁷或不超过约1 x 10⁷个总细胞或总CAR表达细胞，(d)不超过1.5 x 10⁸或不超过约1.5 x 10⁸个总细胞或总CAR表达细胞和/或(e)在1 x 10⁷或约1 x 10⁷个总细胞或总CAR表达细胞和1.5 x 10⁸或约1.5 x 10⁸个总细胞或总CAR表达细胞之间，其中在给药前该受试者已经用包括给予氟达拉滨的淋巴细胞清除疗法预处理。

在一些实施方案中，该方法包括治疗患有非霍奇金淋巴瘤(NHL)的受试者，如侵袭性NHL和/或特定亚型的NHL(如弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤(TCHRBCL)、伯基特淋巴瘤和/或其他侵袭性NHL)、套细胞淋巴瘤(MCL)和/或滤泡性淋巴瘤(FL)。

在一些方面，该方法包括向该受试者给予表达嵌合抗原受体(CAR)的一剂细胞，该嵌合抗原受体特异性地结合至由NHL表达的靶抗原。在一些方面，该剂量含有(a)2 x 10⁵或约2 x 10⁵个细胞/公斤受试者体重(细胞/kg)；(b)2 x 10⁶或约2 x 10⁶个细胞/kg，(c)不超过2 x 10⁶或不超过约2 x 10⁶个细胞/kg，(d)不超过2 x 10⁵或不超过约2 x 10⁵个细胞/kg和/或(e)在2 x 10⁵或约2 x 10⁵个细胞/kg和2 x 10⁶或约2 x 10⁶个细胞/kg之间。该剂量通常进一步含有确定比例的特定细胞亚型，如确定比例的表达该CAR的CD4⁺细胞与表达该CAR的CD8⁺细胞和/或确定比例的CD4⁺细胞与CD8⁺细胞。

在一些方面，在给药之前受试者已经用淋巴细胞清除疗法预处理，该淋巴细胞清除疗法包括给予氟达拉滨。

在任何实施方案的一些方面，给予的该剂细胞包含确定的或预定的或工程化比例的特定细胞亚型。该比例可包括表达该CAR的CD4⁺细胞与表达该CAR的CD8⁺细胞的比例和/或CD4⁺细胞与CD8⁺细胞的比例。在一些方面，CD4+或CD8+细胞针对特定亚型(如中枢记忆细胞)进行富集或衍生自这样的富集群体，如衍生自CD8+中枢记忆细胞的细胞，和/或与大量T细胞或大量CD8+T细胞相比展现出增加的CD62L和/或CD45RO和/或CCR7表达的那些细胞，或衍生自大量T细胞或大量CD8+T细胞的细胞。在一些方面，该比例为1:1或大约1:1。在一些方面，它在1:3或大约1:3和3:1或大约3:1之间。

在一些实施方案中，在给予该剂细胞时或在给予该剂细胞之前：受试者被鉴定为或已经被鉴定为具有一种或多种细胞遗传学异常，任选地与高风险NHL相关；该受试者被鉴定为或已经被鉴定为患有高风险NHL；和/或NHL选自下组，该组由以下各项组成：侵袭性NHL、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤(TCHRBCL)、伯基特淋巴瘤、套细胞淋巴瘤(MCL)和/或滤泡性淋巴瘤(FL)。

在任何实施方案的一些方面，受试者是成年人和/或年龄超过30岁、40岁、50岁、60岁或70岁或超过约30岁、40岁、50岁、60岁或70岁。

在一些方面，淋巴细胞清除疗法进一步包括给予除氟达拉滨以外的另一种化学治疗剂，如环磷酰胺。在一些方面，例如经由淋巴细胞清除疗法(如氟达拉滨和/或环磷酰胺)的预处理在给予细胞之前至少24小时或至少约24小时或者至少48小时或至少约48小时或在给予细胞之前在48小时或约48小时和96小时或约96小时之间的时间开始。在一些方面，淋巴细胞清除疗法包括以30-60mg/kg或以约30-60mg/kg受试者给予环磷酰胺(如每天一次持续一天、两天或三天)，和/或氟达拉滨如25mg/m²(例如，每天给予持续2天、3天、4天或5天或更多天，如3-5天)。

在任何实施方案的一些方面，该细胞剂量和/或淋巴细胞清除疗法的给予经由门诊递送进行。

在一些实施方案中，在给予该剂细胞时或给予该剂细胞之前，受试者被鉴定为或已经被鉴定为具有一种或多种细胞遗传学异常和/或其他风险因子。在一些方面，异常或一种或多种因子与高风险或极高风险疾病(如高风险或极高风险CLL和/或NHL)相关。

这样的因子可以是通过FISH检测到的或可检测的因子和/或通过FISH不可检测的因子。异常可包括复杂核型(CK)、易位、13号染色体的长臂的缺失(del 13q)、del 11、三体性12、del 17p、del 6q和del 13q.14，任选地如通过FISH检测到的。在一些方面，异常包括CK和/或del17p。在一些方面，通过该方法和用途治疗的受试者被鉴定为或已经被鉴定为具有高风险CLL或极高风险CLL，并且被任选地选择进行基于这种分类和/或特定异常的治疗。在任何实施方案的一些方面，该受试者被鉴定为或已经被鉴定为和/或选择为具有转移性、侵袭性、晚期和/或髓外形式的疾病或病况；和/或该受试者是成年人和/或年龄超过30岁、40岁、50岁、60岁或70岁或超过约30岁、40岁、50岁、60岁或70岁。

在一些实施方案中，在给予该剂细胞之前，受试者已经用两种或更多种，任选3、4、5、6、7、8或9种以上的白血病或淋巴瘤(如NHL和/或CLL)疗法进行治疗，和/或采用两种或更多种，任选3、4、5、6、7、8或9种以上的除淋巴细胞清除疗法以外的疗法和/或除另一剂表达该CAR的细胞以外的疗法进行治疗。在一些实施方案中，在给予该剂细胞之前，已经用激酶抑制剂，任选Btk的抑制剂，任选依鲁替尼和/或生物和/或免疫疗法(如单克隆抗体)治疗了该受试者的CLL。在一些实施方案中，在给予该剂细胞之前，受试者已经用两种或更多种，任选2、3或4种以上的白血病或淋巴瘤疗法进行治疗，这些白血病或淋巴瘤疗法通常是除淋巴细胞清除疗法和/或表达该CAR的细胞或另一剂表达该CAR的细胞以外的疗法，任选地除表达不同CAR的细胞以外的疗法。

在一些实施方案中，在给予该剂细胞时或紧临给予该剂细胞之前，该受试者在用这样的一种或多种现有疗法治疗之后出现缓解后复发或变得难以治疗。

在一些实施方案中，在给予该剂细胞之前，已经用单克隆抗体(如特异性地结合至由CLL或NHL的细胞表达的或先前表达的抗原的单克隆抗体)治疗了该受试者的白血病或淋巴瘤(如CLL或NHL)。在一些实施方案中，在给予该剂细胞时或紧临给予该剂细胞之前，该受试者在用一种或多种针对CLL的现有疗法治疗之后出现缓解后复发或变得难以治疗。

在一些实施方案中，该方法进一步包括在给予该细胞剂量之前，向该受试者给予淋巴细胞清除疗法。

在一些实施方案中，该剂细胞含有确定比例的表达该CAR的CD4+细胞与表达该CAR的CD8+细胞，和/或确定比例的CD4+细胞与CD8+细胞，该比例任选为大约1:1或在大约1:3和大约3:1之间。在一些实施方案中，肠胃外给予该剂细胞，任选静脉内。

在本文提供的方法的一些实施方案中，根据该方法治疗的受试者中的至少50％实现完全缓解(CR)和/或客观应答(OR)；和/或受试者在给予该剂细胞的1个月内展现出CR、OR、尺寸小于20mm或小于约20mm的淋巴结；和/或未在该受试者的骨髓中(或在根据该方法治疗的超过50％受试者的骨髓中)检测到恶性免疫球蛋白重链(IGH)基因座和/或疾病或病况如CLL或NHL的指数克隆，任选地如通过IGH深度测序所评估的，任选地在给予该剂细胞后1、2、3、4、5、6、12、18或24个月或约1、2、3、4、5、6、12、18或24个月或至少1、2、3、4、5、6、12、18或24个月或至少约1、2、3、4、5、6、12、18或24个月的时间进行。

在本文提供的方法的一些实施方案中，根据该方法治疗并且实现完全缓解(CR)的受试者中的至少50％展现出超过12个月的无进展生存期(PFS)和/或总生存期(OS)；平均而言，根据该方法治疗的受试者展现出超过6个月、12个月或18个月或者超过约6个月、12个月或18个月的平均PFS或OS；和/或受试者展现出至少6、12、18或更多个月或者至少约6、12、18或更多个月的治疗后PFS或OS。

在一些实施方案中，抗原是B细胞抗原。在一些方面，抗原是CD19。在一些方面，抗原是或包括CD20、CD22、CD30、CD33、CD38、ROR1或与B细胞或B细胞癌相关的其他标志物。

在一些实施方案中，CAR含有结合结构域，该结合结构域通常是或包含对该抗原据具有特异性的scFv、跨膜结构域和一个或多个细胞质信号传导结构域或区域，该一个或多个细胞质信号传导结构域或区域可以衍生自天然或内源信号传导分子或其功能变体。在一些方面，信号传导区域包括能够将主信号和副信号传递给T细胞或其他免疫细胞的结构域。结构域可包括衍生自共刺激分子的那些结构域，如衍生自4-1BB(例如人4-1BB)和/或CD28分子(例如人CD28)。结构域可进一步包括衍生自含有主信号传导ITAM的分子(如CD3ζ，例如人CD3ζ)的细胞质信号传导结构域。在一些实施方案中，CAR含有间隔区和/或铰链区，其在一些方面可衍生自人IgG。

在一些实施方案中，根据该方法治疗的受试者中的至少50％或至少约50％、至少60％或至少约60％、至少70％或至少约70％、至少80％或至少约80％或者至少90％或至少约90％实现完全缓解(CR)，如通过RECIST标准和/或Lugano标准和/或用于评估应答的许多已知标准中的任何一种测量的。在一些实施方案中，根据该方法治疗的受试者中的至少50％或至少约50％、至少60％或至少约60％、至少70％或至少约70％、至少80％或至少约80％或者至少90％或至少约90％实现客观应答(OR)，如通过RECIST标准和/或Lugano标准和/或用于评估应答的许多已知标准中的任何一种测量的。在一些实施方案中，受试者或根据该方法治疗且实现完全缓解(CR)的受试者中的至少50％或至少约50％、至少60％或至少约60％、至少70％或至少约70％、至少80％或至少约80％或者至少90％或至少约90％展现出超过12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或更多个月(例如平均而言)和/或超过6、12或18个月的无进展生存期(PFS)和/或总生存期(OS)。在一些实施方案中，受试者或根据该方法治疗的受试者中的至少50％或至少约50％、至少60％或至少约60％、至少70％或至少约70％、至少80％或至少约80％或者至少90％或至少约90％展现出超过6个月、12个月或18个月或者超过约6个月、12个月或18个月的平均PFS或OS；和/或展现出至少6、12、18或24或更多个月或者至少约6、12、18或24个月或更多个月的治疗后PFS或OS。

在一些实施方案中，受试者未展现出3级或更高的神经毒性和/或未展现出严重的CRS，或者在治疗后的一定时间段内(如在给予细胞的一周、两周或一个月内)没有展现出上述情况。

提供了治疗患有非霍奇金淋巴瘤(NHL)的受试者的方法，该方法包括向该受试者给予一剂表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，该嵌合抗原受体特异性地结合至由该NHL表达的靶抗原，其中所述剂量(i)含有(a)2 x 10⁵或约2 x 10⁵个细胞/公斤受试者体重(细胞/kg)，(b)2 x 10⁶或约2 x 10⁶个细胞/kg，(c)不超过2 x 10⁶或不超过约2 x 10⁶个细胞/kg，(d)不超过2 x 10⁵或不超过约2 x 10⁵个细胞/kg和/或(e)在2 x 10⁵或约2 x 10⁵个细胞/kg和2 x 10⁶或约2 x 10⁶个细胞/kg之间，并且(ii)含有确定比例的表达该CAR的CD4⁺细胞与表达该CAR的CD8⁺细胞和/或确定比例的CD4⁺细胞与CD8⁺细胞，该比例任选地为大约1:1或在大约1:3和大约3:1之间，其中在给予之前该受试者已经用包括给予氟达拉滨的淋巴细胞清除疗法进行预处理。

还提供了治疗患有非霍奇金淋巴瘤(NHL)的受试者的方法，该方法包括向该受试者给予一剂表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，该嵌合抗原受体特异性地结合至由该NHL表达的靶抗原，其中所述剂量(i)含有(a)1 x 10⁷或约1 x 10⁷个总细胞或总CAR表达细胞，(b)1.5 x 10⁸或约1.5 x 10⁸个总细胞或总CAR表达细胞，(c)不超过1 x 10⁷或不超过约1 x10⁷个总细胞或总CAR表达细胞，(d)不超过1.5 x 10⁸或不超过约1.5 x 10⁸个总细胞或总CAR表达细胞和/或(e)在1 x 10⁷或约1 x 10⁷个总细胞或总CAR表达细胞和1.5 x 10⁸或约1.5 x 10⁸个总细胞或总CAR表达细胞之间，并且(ii)含有确定比例的表达该CAR的CD4⁺细胞与表达该CAR的CD8⁺细胞和/或确定比例的CD4⁺细胞与CD8⁺细胞，该比例任选地为大约1:1或在大约1:3和大约3:1之间，其中在给予之前该受试者已经用包括给予氟达拉滨的淋巴细胞清除疗法进行预处理。

在一些实施方案中，在给予该剂细胞时或在给予该剂细胞之前：受试者被鉴定为或已经被鉴定为具有一种或多种细胞遗传学异常，任选地与高风险NHL相关，该受试者被鉴定为或已经被鉴定为患有高风险NHL；和/或NHL选自下组，该组由以下各项组成：侵袭性NHL、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤(TCHRBCL)、伯基特淋巴瘤、套细胞淋巴瘤(MCL)和/或滤泡性淋巴瘤(FL)；和/或受试者是成年人和/或年龄超过30、40、50、60或70岁或超过约30、40、50、60或70岁。

在任何此类实施方案的一些中，其中在给予该剂细胞之前受试者已经用除淋巴细胞清除疗法以外和/或除另一剂表达该CAR的细胞以外的两种或更多种，任选2、3或4种或更多种针对NHL的疗法进行治疗。在任何此类实施方案的一些中，在给予该剂细胞时或紧临给予该剂细胞之前，该受试者在用一种或多种针对NHL的现有疗法治疗之后出现缓解后复发或变得难以治疗。

在任何此类实施方案的一些中，该方法进一步包括在给予该细胞剂量之前，向该受试者给予淋巴细胞清除疗法。在一些实施方案中，淋巴细胞清除疗法(i)进一步包括给予除氟达拉滨以外的另一种化学治疗剂，其任选地为环磷酰胺；(ii)在给予细胞前至少48小时或至少约48小时或在48小时或约48小时和96小时或约96小时之间的时间开始；并且(iii)包括以约30-60mg/kg给予环磷酰胺，任选每天一次持续一天或两天，和/或以约25mg/m²给予氟达拉滨，每天给予持续3-5天。在任何此类实施方案的一些中，该细胞剂量和/或淋巴细胞清除疗法的给予经由门诊递送进行。

在任何此类实施方案的一些中，确定比例是1:1或约1:1的表达该CAR的CD4+细胞与表达该CAR的CD8+细胞的确定比例和/或1:1或约1:1的CD4+细胞与CD8+细胞的确定比例。在一些实施方案中，肠胃外给予该剂细胞，任选静脉内。

在任何此类实施方案的一些中，根据该方法治疗的受试者中的至少50％实现完全缓解(CR)和/或客观应答(OR)。在该方法的一些实施方案中，根据该方法治疗并且实现完全缓解(CR)的至少50％的受试者展现出超过12个月的无进展生存期(PFS)和/或总生存期(OS)；平均而言，根据该方法治疗的受试者展现出超过6个月、12个月或18个月或者超过约6个月、12个月或18个月的平均PFS或OS；和/或受试者展现出至少6、12、18或更多个月或者至少约6、12、18或更多个月的治疗后PFS或OS。

在任何此类实施方案的一些中，抗原是B细胞抗原，其任选地是CD19。在一些实施方案中，CAR含有对该抗原具有特异性的scFv、跨膜结构域、衍生自任选为4-1BB的共刺激分子的细胞质信号传导结构域以及衍生自任选为CD3ζ的含有主信号传导ITAM的分子的细胞质信号传导结构域。在一些情况下，CAR含有各自任选地衍生自人IgG的间隔区和/或铰链区。

在任何此类实施方案的一些中，CAR依次含有对该抗原具有特异性的scFv、跨膜结构域、任选为或任选包括4-1BB信号传导结构域的衍生自共刺激分子的细胞质信号传导结构域以及任选为CD3ζ信号传导结构域的衍生自含有主信号传导ITAM的分子的细胞质信号传导结构域；或CAR依次含有对该抗原具有特异性的scFv、间隔区、跨膜结构域、任选为4-1BB信号传导结构域的衍生自共刺激分子的细胞质信号传导结构域以及任选为或任选包括CD3ζ信号传导结构域的衍生自含有主信号传导ITAM的分子的细胞质信号传导结构域；并且其中该间隔区任选地是多肽间隔区，该多肽间隔区(a)含有全部或部分免疫球蛋白铰链或其修饰形式或由其组成，或含有约15个氨基酸或更少，并且不含CD28胞外区域或CD8胞外区域，(b)含有全部或部分免疫球蛋白铰链任选IgG4或其修饰形式或由其组成，和/或含有约15个氨基酸或更少，并且不含CD28胞外区域或CD8胞外区域，或(c)长度为12个氨基酸或为约12个氨基酸和/或含有全部或部分免疫球蛋白铰链任选IgG4或其修饰形式或由其组成；或(d)具有SEQ ID NO:1的序列或由其组成，该序列是由以下各项所编码的一个序列：SEQID NO:2、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34或前述任何一项的变体，该变体与前述任何一项具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列一致性，或(e)包括式X1PPX2P或由其组成，其中X1是甘氨酸、半胱氨酸或精氨酸，且X2是半胱氨酸或苏氨酸；和/或共刺激结构域含有SEQ ID NO:12或其变体，该变体与其具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列一致性；和/或主信号传导结构域含有SEQ ID NO:13或14或15，它们具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列一致性；和/或scFv含有RASQDISKYLN的CDRLl序列(SEQ ID NO:35)、SRLHSGV的CDRL2序列(SEQ ID NO:36)和/或GNTLPYTFG的CDRL3序列(SEQ ID NO:37)和/或DYGVS的CDRH1序列(SEQ ID NO:38)、VIWGSETTYYNSALKS的CDRH2序列(SEQ ID NO:39)和/或YAMDYWG的CDRH3序列(SEQ IDNO:40)或其中scFv包含FMC63的可变重链区和FMC63的可变轻链区和/或FMC63的CDRLl序列、FMC63的CDRL2序列、FMC63的CDRL3序列、FMC63的CDRH1序列、FMC63的CDRH2序列和FMC63的CDRH3序列，或者结合至与前述任何一项相同的表位或竞争与前述任何一项的结合，并且任选地其中scFv依次含有VH、任选包含SEQ ID NO:24的接头和VL，和/或scFv含有柔性接头和/或包含SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列。

提供一种预后或分期的方法，该方法包括检测来自患有B细胞恶性肿瘤的受试者的样品中恶性免疫球蛋白重链基因座(IGH)序列的存在或不存在，所述受试者先前已接受给予用于治疗该B细胞恶性肿瘤的细胞疗法，该细胞疗法包括一剂表达重组受体的基因工程化细胞或其组合物，其中检测该恶性IGH序列的存在或不存在决定了该受试者对该细胞疗法的应答的预后。在一些方面，检测该恶性IGH序列的存在或不存在是在该细胞疗法开始后3至6周内或约3至6周内或者开始后约3至6周进行，任选地在开始给予该细胞疗法的4周内或约4周内进行。

在任何此类实施方案的一些中，如果检测到恶性IGH序列，则将该受试者鉴定为对细胞疗法没有反应或不展现完全应答(CR)或总体应答(OR)或者鉴定为很可能针对细胞疗法复发。在一些实施方案中，如果检测到恶性IGH序列，则将该受试者鉴定为进一步治疗的候选者和/或接受改变的或替代的治疗的候选者。在一些实施方案中，如果检测到恶性IGH序列，则停止给予细胞疗法，向该受试者给予另一剂量的细胞疗法，向该受试者给予更高剂量的细胞疗法，向该受试者给予不同的细胞疗法(任选表达不同重组受体的细胞疗法)和/或向该受试者给予用于治疗B细胞恶性肿瘤的替代治疗剂。

在任何此类实施方案的一些中，如果未检测到恶性IGH序列，则将该受试者鉴定为对细胞疗法有反应和/或对细胞疗法展现完全应答(CR)或总体应答(OR)或鉴定为很可能针对细胞疗法不复发。在一些实施方案中，如果未检测到恶性IGH序列，则将该受试者鉴定为不进行进一步治疗和/或不被进一步治疗的候选者，任选不用细胞疗法进一步治疗和/或不用B细胞恶性肿瘤的替代疗法进一步治疗。

提供一种预测对细胞疗法的应答的持久性的方法，该方法包括检测来自患有B细胞恶性肿瘤的受试者的样品中恶性免疫球蛋白重链基因座(IGH)序列的存在或不存在，所述受试者先前已接受给予用于治疗该B细胞恶性肿瘤的细胞疗法，该细胞疗法包括一剂表达重组受体的基因工程化细胞或其组合物，其中该恶性IGH序列的存在或不存在预测对该细胞疗法的应答的持久性。在一些方面，检测该恶性IGH序列的存在或不存在是在该细胞疗法开始后4周、6周、8周、12周或16周内或约4周、6周、8周、12周或16周内或者开始后约4周、6周、8周、12周或16周进行。

在任何此类实施方案的一些中，如果未检测到恶性IGH序列，则预测该受试者展现出或很可能展现出对细胞疗法的持久应答和/或在一定的时间段内具有低的或相对低的复发风险和/或在至少一定的时间段内具有展现出无进展存活的高可能性。在一些实施方案中，如果未检测到恶性IGH序列，则预测该受试者在开始细胞疗法后展现出大于或约3个月、大于约6个月、大于约9个月或大于约12个月的无进展生存期；和/或在开始细胞疗法后保持存活大于3个月或大于约3个月、大于6个月或大于约6个月、大于9个月或大于约9个月或大于约12个月；和/或在开始细胞疗法后展现出大于3个月或大于约3个月、大于6个月或大于约6个月或大于9个月或大于约9个月的持久CR或OR；和/或在开始给予细胞疗法后很可能不复发，任选地在开始给予细胞疗法后3个月、6个月或9个月内很可能不复发。

在任何此类实施方案的一些中，如果检测到恶性IGH序列，则预测该受试者在一定的时间段内展现出或很可能展现出不持久的和/或处于高的或相对高复发风险的对细胞疗法的应答，和/或在至少一定的时间段内展现出无进展存活的低可能性。在一些实施方案中，如果未检测到恶性IGH序列，则预测该受试者在开始细胞疗法后展现出大于或约3个月、大于约6个月、大于约9个月或大于约12个月的无进展生存期；和/或在开始细胞疗法后保持存活大于3个月或大于约3个月、大于6个月或大于约6个月、大于9个月或大于约9个月或大于约12个月；和/或在开始细胞疗法后不展现大于3个月或大于约3个月、大于6个月或大于约6个月或大于9个月或大于约9个月的持久CR或OR。

在任何此类实施方案的一些中，如果检测到恶性IGH序列，则向该受试者给予另一剂量的细胞疗法，向该受试者给予更高剂量的细胞疗法，向该受试者给予不同的细胞疗法(任选表达不同重组受体的细胞疗法)和/或向该受试者给予用于治疗B细胞恶性肿瘤的替代治疗剂。在一些实施方案中，通过IGH测序(任选地包括IGH靶DNA的PCR扩增)确定恶性IGH序列的存在或不存在。

在任何此类实施方案的一些中，样品含有B细胞。在一些实施方案中，样品含有血液或骨髓样品。在一些方面，样品已从该受试者获得。在任何此类实施方案的一些中，该方法是离体进行的。

在任何此类实施方案的一些中，B细胞恶性肿瘤是癌症。在一些情况下，B细胞恶性肿瘤是或包括白血病。在一些例子中，B细胞恶性肿瘤是抗原或与选自CD19、CD20、CD22、CD30、CD33或CD38、ROR1的抗原相关。在一些实施方案中，B细胞恶性肿瘤选自和/或是急性淋巴细胞白血病(ALL)、成人ALL、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)和弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。在一些例子中，B细胞恶性肿瘤是或包括慢性淋巴细胞白血病(CLL)或高风险CLL。在一些情况下，B细胞恶性肿瘤是或包括非霍奇金淋巴瘤(NHL)。在一些方面，NHL选自下组，该组由以下各项组成：侵袭性NHL、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、NOS(新形成的和从惰性转化的)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤(TCHRBCL)、伯基特淋巴瘤、套细胞淋巴瘤(MCL)和/或滤泡性淋巴瘤(FL)，任选地3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)。

在任何此类实施方案的一些中，重组受体特异性地结合至与疾病或病况相关的或在与B细胞恶性肿瘤相关的病变环境的细胞中表达的抗原。在一些实施方案中，重组受体是T细胞受体或功能性非T细胞受体。在一些情况下，重组受体是嵌合抗原受体(CAR)。在一些情况下，CAR含有特异性地结合至抗原的细胞外抗原识别结构域和包含ITAM的细胞内信号传导结构域，其中该细胞内信号传导结构域任选包括CD3-ζ(CD3ζ)链的细胞内结构域；和/或其中CAR进一步包括共刺激信号传导区域，其任选包括CD28或4-1BB的信号传导结构域。在一些实施方案中，CAR含有对该抗原具有特异性的scFv、跨膜结构域、衍生自任选为4-1BB的共刺激分子的细胞质信号传导结构域以及衍生自任选为CD3ζ的含有主信号传导ITAM的分子的细胞质信号传导结构域。在一些实施方案中，CAR含有各自任选地衍生自人IgG的间隔区和/或铰链区。

在任何此类实施方案的一些中，CAR依次含有对该抗原具有特异性的scFv、跨膜结构域、任选为或任选包括4-1BB信号传导结构域的衍生自共刺激分子的细胞质信号传导结构域以及任选为CD3ζ信号传导结构域的衍生自含有主信号传导ITAM的分子的细胞质信号传导结构域；或CAR依次含有对该抗原具有特异性的scFv、间隔区、跨膜结构域、任选为4-1BB信号传导结构域的衍生自共刺激分子的细胞质信号传导结构域以及任选为或任选包括CD3ζ信号传导结构域的衍生自含有主信号传导ITAM的分子的细胞质信号传导结构域；并且其中该间隔区任选地是多肽间隔区，该多肽间隔区(a)含有全部或部分免疫球蛋白铰链或其修饰形式或由其组成，或含有约15个氨基酸或更少，并且不包含CD28胞外区域或CD8胞外区域，(b)含有全部或部分免疫球蛋白铰链任选IgG4或其修饰形式或由其组成，和/或包含约15个氨基酸或更少，并且不包含CD28胞外区域或CD8胞外区域，或(c)长度为12个氨基酸或为约12个氨基酸和/或包含全部或部分免疫球蛋白铰链任选IgG4或其修饰形式或由其组成；或(d)具有SEQ ID NO:1的序列或由其组成，该序列是由以下各项所编码的一个序列：SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34或前述任何一项的变体，该变体与前述任何一项具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列一致性，或(e)含有式X1PPX2P或由其组成，其中X1是甘氨酸、半胱氨酸或精氨酸，且X2是半胱氨酸或苏氨酸；和/或共刺激结构域包含SEQ ID NO:12或其变体，该变体与其具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列一致性；和/或主信号传导结构域包含SEQ ID NO:13或14或15，它们具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列一致性；和/或scFv含有RASQDISKYLN的CDRLl序列(SEQ ID NO:35)、SRLHSGV的CDRL2序列(SEQID NO:36)和/或GNTLPYTFG的CDRL3序列(SEQ ID NO:37)和/或DYGVS的CDRH1序列(SEQ IDNO:38)、VIWGSETTYYNSALKS的CDRH2序列(SEQ ID NO:39)和/或YAMDYWG的CDRH3序列(SEQID NO:40)或其中scFv包含FMC63的可变重链区和FMC63的可变轻链区和/或FMC63的CDRLl序列、FMC63的CDRL2序列、FMC63的CDRL3序列、FMC63的CDRH1序列、FMC63的CDRH2序列和FMC63的CDRH3序列，或者结合至与前述任何一项相同的表位或竞争与前述任何一项的结合，并且任选地其中scFv依次包含VH、任选包含SEQ ID NO:24的接头和VL，和/或scFv包含柔性接头和/或包含SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列。

在任何此类实施方案的一些中，工程化细胞含有T细胞，任选CD4+和/或CD8+。在一些情况下，T细胞是从受试者获得的原代T细胞。在一些实施方案中，工程化细胞对于受试者是自体同源的。在一些情况下，工程化细胞与受试者是同种异体的。

提供含有一个或多个剂量的细胞疗法和给予该细胞疗法的说明书的制品，每个剂量包含表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中该说明书规定了向患有慢性淋巴细胞白血病(CLL)的受试者给予的细胞的剂量；并且该说明书规定了给予一定数量的CAR表达细胞或一定数量的细胞，或规定了给予对应于所述指定数量的细胞或含有所述指定数量的细胞的一定量或体积的一种或多种制剂，其中待给予的指定数量的细胞含有一定数量以给予该剂细胞，该剂细胞包含(a)2 x 10⁵或约2 x 10⁵个细胞/公斤受试者体重(细胞/kg)，(b)2 x 10⁶或约2 x 10⁶个细胞/kg，(c)不超过2 x 10⁶或不超过约2 x 10⁶个细胞/kg，(d)不超过2 x10⁵或不超过约2 x 10⁵个细胞/kg和/或(e)在2 x 10⁵或约2 x 10⁵个细胞/kg和2 x 10⁶或约2 x 10⁶个细胞/kg之间。

提供包含一个或多个剂量的细胞疗法(每个剂量含有表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞)和给予细胞疗法的说明书的制品，其中该说明书规定了向患有慢性淋巴细胞白血病(CLL)的受试者给予的细胞的剂量；并且该说明书规定了给予一定数量的CAR表达细胞或一定数量的细胞，或规定了给予对应于所述指定数量的细胞或含有所述指定数量的细胞的一定量或体积的一种或多种制剂，其中待给予的指定数量的细胞含有一定数量以给予该剂细胞，该剂细胞包含(a)1 x 10⁷或约1 x 10⁷个总细胞或总CAR表达细胞；(b)1.5 x 10⁸或约1.5 x 10⁸个总细胞或总CAR表达细胞，(c)不超过1 x 10⁷或不超过约1 x 10⁷个总细胞或总CAR表达细胞，(d)不超过1.5 x 10⁸或不超过约1.5x10⁸个总细胞或总CAR表达细胞和/或(e)在1 x 10⁷或约1 x 10⁷个总细胞或总CAR表达细胞和1.5 x 10⁸或约1.5 x 10⁸个总细胞或总CAR表达细胞之间。

在制品的一些实施方案中，进一步包括与淋巴细胞清除疗法一起、在淋巴细胞清除疗法之后或与淋巴细胞清除疗法结合使用的说明书，该淋巴细胞清除疗法包括氟达拉滨。在一些情况下，说明书规定细胞疗法将被给予被鉴定为或已经被鉴定为具有一种或多种细胞遗传学异常(任选地与高风险CLL相关)的受试者，该一种或多种细胞遗传学异常任选地选自：复杂核型、13号染色体的长臂的缺失(del 13q)、del 11、三体性12、del 17p、del6q和del13q.14，任选地如通过FISH检测到的；被鉴定为或已经被鉴定为患有高风险CLL；和/或被鉴定为或已经被鉴定为患有髓外疾病；和/或被鉴定为或已经被鉴定为患有中枢神经系统(CNS)疾病；和/或是成年人和/或年龄超过30岁、40岁、50岁、60岁或70岁或超过约30岁、40岁、50岁、60岁或70岁。

在一些实施方案中，说明书规定细胞疗法将被给予如下受试者，该受试者已经用除淋巴细胞清除疗法以外和/或除另一剂表达该CAR的细胞之外的针对CLL的两种或更多种，任选3、4、5、6、7、8或9种或更多种疗法进行治疗；和/或已经用激酶抑制剂，任选Btk的抑制剂，任选依鲁替尼治疗了该受试者的CLL；和/或已经用单克隆抗体治疗了该受试者的CLL，该单克隆抗体特异性地结合至由CLL的细胞表达或先前由CLL的细胞表达的抗原；和/或已经用venetoclax、包含氟达拉滨和利妥昔单抗的组合疗法、放射疗法和/或造血干细胞移植(HSCT)治疗了该受试者的CLL。

在任何此类实施方案的一些中，说明书规定细胞疗法将被给予如下受试者，该受试者在用一种或多种针对CLL的现有疗法治疗之后出现缓解后复发或变得难以治疗。

提供含有一个或多个剂量的细胞疗法和给予细胞疗法的说明书的制品，每个剂量含有表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中该说明书规定了向患有非霍奇金淋巴瘤(NHL)的受试者给予的细胞的剂量；并且该说明书规定了给予一定数量的CAR表达细胞或一定数量的细胞，或规定了给予对应于所述指定数量的细胞或含有所述指定数量的细胞的一定量或体积的一种或多种制剂，其中待给予的指定数量的细胞含有一定数量以给予该剂细胞，该剂细胞含有(a)2 x 10⁵或约2 x 10⁵个细胞/公斤受试者体重(细胞/kg)，(b)2 x 10⁶或约2x 10⁶个细胞/kg，(c)不超过2 x 10⁶或不超过约2 x 10⁶个细胞/kg，(d)不超过2 x 10⁵或不超过约2 x 10⁵个细胞/kg和/或(e)在2 x 10⁵或约2 x 10⁵个细胞/kg和2 x 10⁶或约2 x 10⁶个细胞/kg之间。

提供含有一个或多个剂量的细胞疗法和给予该细胞疗法的说明书的制品，每个剂量包含表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中该说明书规定了向患有非霍奇金淋巴瘤(NHL)的受试者给予的细胞的剂量；并且该说明书规定了给予一定数量的CAR表达细胞或一定数量的细胞，或规定了给予对应于所述指定数量的细胞或含有所述指定数量的细胞的一定量或体积的一种或多种制剂，其中待给予的指定数量的细胞含有一定数量以给予该剂细胞，该剂细胞含有(a)1 x 10⁷或约1 x 10⁷个总细胞或总CAR表达细胞；(b)1.5 x 10⁸或约1.5 x10⁸个总细胞或总CAR表达细胞，(c)不超过1 x 10⁷或不超过约1 x 10⁷个总细胞或总CAR表达细胞，(d)不超过1.5 x 10⁸或不超过约1.5 x 10⁸个总细胞或总CAR表达细胞和/或(e)在1x 10⁷或约1 x 10⁷个总细胞或总CAR表达细胞和1.5 x 10⁸或约1.5 x 10⁸个总细胞或总CAR表达细胞之间。在一些实施方案中，制品进一步含有与淋巴细胞清除疗法一起、在淋巴细胞清除疗法之后或与淋巴细胞清除疗法结合使用的说明书，该淋巴细胞清除疗法包括氟达拉滨。

在任何此类实施方案的一些中，说明书规定细胞疗法将被给予如下受试者，该受试者被鉴定为或已经被鉴定为具有一种或多种细胞遗传学异常，任选地与高风险NHL相关；被鉴定为或已经被鉴定为患有高风险NHL；和/或选自下组，该组由以下各项组成：侵袭性NHL、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤(TCHRBCL)、伯基特淋巴瘤、套细胞淋巴瘤(MCL)和/或滤泡性淋巴瘤(FL)；和/或是成年人和/或年龄超过30、40、50、60或70岁或者超过约30、40、50、60或70岁。

在任何此类实施方案的一些中，说明书规定细胞疗法将被给予如下受试者，该受试者已经用除淋巴细胞清除疗法以外和/或除另一剂表达该CAR的细胞以外的两种或更多种，任选2、3或4种或更多种针对NHL的疗法进行治疗。在一些实施方案中，说明书规定细胞疗法将被给予如下受试者，该受试者在用一种或多种针对NHL的现有疗法治疗之后出现缓解后复发或变得难以治疗。

在任何此类实施方案的一些中，淋巴细胞清除疗法(i)进一步包括给予除氟达拉滨以外的另一种化学治疗剂，其任选地为环磷酰胺；和/或(ii)包括以约30-60mg/kg给予环磷酰胺，任选每天一次持续一天或两天，和/或以约25mg/m²给予氟达拉滨，每天给予持续3-5天。在一些实施方案中，说明书规定淋巴细胞清除疗法在给予细胞疗法之前至少48小时或至少约48小时或在给予细胞疗法之前在48小时或约48小时和96小时或约96小时之间的时间开始。

在任何此类实施方案中的一些中，说明书规定以确定比例的表达该CAR的CD4⁺细胞与CD8⁺细胞给予细胞疗法，或规定给予对应于这种确定比例的一定量或体积的一种或多种制剂，或包括具有这种比例的细胞的制剂，或含有这种比例的表达该CAR的细胞和/或这种比例的CD4⁺细胞与CD8⁺细胞，该比例任选为大约1:1或在大约1:3和大约3:1之间。在任何此类实施方案的一些中，说明书进一步规定细胞疗法用于肠胃外给药，任选静脉内给药。在任何此类实施方案的一些中，说明书进一步规定在门诊环境中和/或在无需使受试者住院过夜或连续多天的情况下和/或无需使受试者住院一天或多天的情况下细胞疗法将被给予或可被给予受试者。

在任何此类实施方案的一些中，细胞疗法含有从受试者获得的原代T细胞。在一些情况下，T细胞对于受试者是自体同源的。在一些情况下，T细胞对于受试者是同种异体的。

在任何此类实施方案的一些中，CAR含有对该抗原具有特异性的scFv、跨膜结构域、衍生自任选为4-1BB的共刺激分子的细胞质信号传导结构域以及衍生自任选为CD3ζ的含有主信号传导ITAM的分子的细胞质信号传导结构域。在一些实施方案中，CAR含有各自任选地衍生自人IgG的间隔区和/或铰链区。在一些实施方案中，抗原是B细胞抗原，其任选地是CD19。

在任何此类实施方案的一些中，CAR依次含有对该抗原具有特异性的scFv、跨膜结构域、任选为或任选含有4-1BB信号传导结构域的衍生自共刺激分子的细胞质信号传导结构域以及任选为CD3ζ信号传导结构域的衍生自含有主信号传导ITAM的分子的细胞质信号传导结构域；或CAR依次含有对该抗原具有特异性的scFv、间隔区、跨膜结构域、任选为4-1BB信号传导结构域的衍生自共刺激分子的细胞质信号传导结构域以及任选为或任选包括CD3ζ信号传导结构域的衍生自含有主信号传导ITAM的分子的细胞质信号传导结构域；并且其中该间隔区任选地是多肽间隔区，该多肽间隔区(a)包含全部或部分免疫球蛋白铰链或其修饰形式或由其组成，或包含约15个氨基酸或更少，并且不包含CD28胞外区域或CD8胞外区域，(b)含有全部或部分免疫球蛋白铰链任选IgG4或其修饰形式或由其组成，和/或含有约15个氨基酸或更少，并且不包含CD28胞外区域或CD8胞外区域，或(c)长度为12个氨基酸或为约12个氨基酸和/或含有全部或部分免疫球蛋白铰链任选IgG4或其修饰形式或由其组成；或(d)具有SEQ ID NO:1的序列或由其组成，该序列是由以下各项所编码的一个序列：SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34或前述任何一项的变体，该变体与前述任何一项具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列一致性，或(e)包含式X1PPX2P或由其组成，其中X1是甘氨酸、半胱氨酸或精氨酸，且X2是半胱氨酸或苏氨酸；和/或共刺激结构域含有SEQ ID NO:12或其变体，该变体与其具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列一致性；和/或主信号传导结构域含有SEQ ID NO:13或14或15，它们具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列一致性；和/或scFv含有RASQDISKYLN的CDRLl序列(SEQ ID NO:35)、SRLHSGV的CDRL2序列(SEQID NO:36)和/或GNTLPYTFG的CDRL3序列(SEQ ID NO:37)和/或DYGVS的CDRH1序列(SEQ IDNO:38)、VIWGSETTYYNSALKS的CDRH2序列(SEQ ID NO:39)和/或YAMDYWG的CDRH3序列(SEQID NO:40)或其中scFv包含FMC63的可变重链区和FMC63的可变轻链区和/或FMC63的CDRLl序列、FMC63的CDRL2序列、FMC63的CDRL3序列、FMC63的CDRH1序列、FMC63的CDRH2序列和FMC63的CDRH3序列，或者结合至与前述任何一项相同的表位或竞争与前述任何一项的结合，并且任选地其中scFv依次包含VH、任选包含SEQ ID NO:24的接头和VL，和/或scFv包含柔性接头和/或包含SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列。

提供含有表达特异性地结合至慢性淋巴细胞白血病(CLL)的靶抗原的嵌合抗原受体(CAR)的细胞的组合物，其用于治疗患有或怀疑患有CLL的受试者，其中该治疗包括向该受试者给予一剂表达该CAR的细胞，所述剂量含有(a)2 x 10⁵或约2 x 10⁵个细胞/公斤受试者体重(细胞/kg)，(b)2 x 10⁶或约2 x 10⁶个细胞/kg，(c)不超过2 x 10⁶或不超过约2 x10⁶个细胞/kg，(d)不超过2 x 10⁵或不超过约2 x 10⁵个细胞/kg和/或(e)在2 x 10⁵或约2x 10⁵个细胞/kg和2 x 10⁶或约2 x 10⁶个细胞/kg之间，其中在给予之前该受试者已经用包括给予氟达拉滨的淋巴细胞清除疗法进行预处理。

提供含有表达特异性地结合至慢性淋巴细胞白血病(CLL)的靶抗原的嵌合抗原受体的细胞的组合物，其用于治疗患有或怀疑患有CLL的受试者，其中该治疗包括向该受试者给予一剂表达该CAR的细胞，所述剂量包含(a)1 x 10⁷或约1 x 10⁷个总细胞或总CAR表达细胞，(b)1.5 x 10⁸或约1.5 x 10⁸个总细胞或总CAR表达细胞，(c)不超过1 x 10⁷或不超过约1 x 10⁷个总细胞或总CAR表达细胞，(d)不超过1.5 x 10⁸或不超过约1.5 x 10⁸个总细胞或总CAR表达细胞和/或(e)在1 x 10⁷或约1 x 10⁷个总细胞或总CAR表达细胞和1.5 x 10⁸或约1.5 x 10⁸个总细胞或总CAR表达细胞之间，其中在给药前该受试者已经用包括给予氟达拉滨的淋巴细胞清除疗法预处理。

在该组合物的用途的一些实施方案中，该组合物用于治疗如下受试者，其中在给予该剂细胞时或给予该剂细胞之前：该受试者被鉴定为或已经被鉴定为具有一种或多种细胞遗传学异常，任选地与高风险CLL相关，任选地选自：复杂核型、13号染色体的长臂的缺失(del 13q)、del 11、三体性12、del 17p、del 6q和del 13q.14，任选地如通过FISH检测到的；该受试者被鉴定为或已经被鉴定为患有高风险CLL；和/或该受试者被鉴定为或已经被鉴定为患有髓外疾病；和/或该受试者被鉴定为或已经被鉴定为患有中枢神经系统(CNS)疾病；和/或该受试者是成年人和/或年龄超过30岁、40岁、50岁、60岁或70岁或超过约30岁、40岁、50岁、60岁或70岁。

在任何此类实施方案的一些中，该组合物用于治疗如下受试者，其中在给予该剂细胞之前该受试者已经用除淋巴细胞清除疗法以外和/或除另一剂表达该CAR的细胞以外的两种或更多种，任选3、4、5、6、7、8或9种或更多种针对CLL的疗法进行治疗。在任何此类实施方案的一些中，该组合物用于治疗如下受试者，其中在给予该剂细胞之前该受试者已经用除另一剂表达该CAR的细胞以外或除另一剂表达该CAR的细胞和预处理疗法以外的两种或更多种，任选3、4、5、6、7、8或9种或更多种针对CLL的疗法进行治疗。

在任何此类实施方案的一些中，该组合物用于治疗如下受试者，其中在给予该剂细胞之前已经用激酶抑制剂治疗了该受试者的CLL，该激酶抑制剂任选为Btk的抑制剂，任选依鲁替尼。在一些实施方案中，该组合物用于治疗如下受试者，其中在给予该剂细胞之前已经用单克隆抗体治疗了该受试者的CLL，该单克隆抗体特异性地结合至由CLL的细胞表达或先前由CLL的细胞表达的抗原。

在任何此类实施方案的一些中，该组合物用于治疗如下受试者，其中在给予该剂细胞之前已经用venetoclax、包含氟达拉滨和利妥昔单抗的组合疗法、放射疗法和/或造血干细胞移植(HSCT)治疗了该受试者的CLL。在一些方面，该组合物用于治疗如下受试者，其中在给予该剂细胞时或紧临给予该剂细胞之前，该受试者在用一种或多种针对CLL的现有疗法治疗之后出现缓解后复发或变得难以治疗。

提供了含有表达特异性地结合至非霍奇金淋巴瘤(NHL)的靶抗原的嵌合抗原受体(CAR)的细胞的组合物，其用于治疗患有或怀疑患有NHL的受试者，其中该治疗包括向该受试者给予一剂表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，该嵌合抗原受体特异性地结合至由该NHL表达的靶抗原，其中该治疗包括向该受试者给予一剂表达该CAR的细胞，所述剂量(i)含有(a)2 x 10⁵或约2 x 10⁵个细胞/公斤受试者体重(细胞/kg)，(b)2 x 10⁶或约2 x 10⁶个细胞/kg，(c)不超过2 x 10⁶或不超过约2 x 10⁶个细胞/kg，(d)不超过2 x 10⁵或不超过约2 x10⁵个细胞/kg和/或(e)在2 x 10⁵或约2 x 10⁵个细胞/kg和2 x 10⁶或约2 x 10⁶个细胞/kg之间，并且(ii)含有确定比例的表达该CAR的CD4⁺细胞与表达该CAR的CD8⁺细胞和/或确定比例的CD4⁺细胞与CD8⁺细胞，该比例任选地为大约1:1或在大约1:3和大约3:1之间，其中在给予之前该受试者已经用包括给予氟达拉滨的淋巴细胞清除疗法进行预处理。

提供了含有表达特异性地结合至非霍奇金淋巴瘤(NHL)的靶抗原的嵌合抗原受体(CAR)的细胞的组合物，其用于治疗患有或怀疑患有NHL的受试者，其中该治疗包括向该受试者给予一剂表达该CAR的细胞，所述剂量(i)含有(a)1 x 10⁷或约1 x 10⁷个总细胞或总CAR表达细胞，(b)1.5 x 10⁸或约1.5 x 10⁸个总细胞或总CAR表达细胞，(c)不超过1 x 10⁷或不超过约1 x 10⁷个总细胞或总CAR表达细胞，(d)不超过1.5 x 10⁸或不超过约1.5 x 10⁸个总细胞或总CAR表达细胞和/或(e)在1 x 10⁷或约1 x 10⁷个总细胞或总CAR表达细胞和1.5 x 10⁸或约1.5 x 10⁸个总细胞或总CAR表达细胞之间，并且(ii)含有确定比例的表达该CAR的CD4⁺细胞与表达该CAR的CD8⁺细胞和/或确定比例的CD4⁺细胞与CD8⁺细胞，该比例任选地为大约1:1或在大约1:3和大约3:1之间，其中在给予之前该受试者已经用包括给予氟达拉滨的淋巴细胞清除疗法进行预处理。

在一些实施方案中，该组合物用于治疗如下受试者，其中在给予该剂细胞时或在给予该剂细胞之前，该受试者被鉴定为或已经被鉴定为具有一种或多种细胞遗传学异常，任选地与高风险NHL相关，该受试者被鉴定为或已经被鉴定为患有高风险NHL；和/或NHL选自下组，该组由以下各项组成：侵袭性NHL、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤(TCHRBCL)、伯基特淋巴瘤、套细胞淋巴瘤(MCL)和/或滤泡性淋巴瘤(FL)；和/或受试者是成年人和/或年龄超过30、40、50、60或70岁或者超过约30、40、50、60或70岁。

在任何此类实施方案的一些中，该组合物用于治疗如下受试者，其中在给予该剂细胞之前该受试者已经用除淋巴细胞清除疗法以外和/或除另一剂表达该CAR的细胞以外的两种或更多种，任选2、3或4种或更多种针对NHL的疗法进行治疗。在一些情况下，该组合物用于治疗如下受试者，其中在给予该剂细胞时或紧临给予该剂细胞之前，该受试者在用一种或多种针对NHL的现有疗法治疗之后出现缓解后复发或变得难以治疗。

在此类实施方案的一些中，淋巴细胞清除疗法(i)进一步包括给予除氟达拉滨以外的另一种化学治疗剂，其任选地为环磷酰胺；(ii)在给予细胞前至少48小时或至少约48小时或在48小时或约48小时和96小时或约96小时之间的时间开始；并且(iii)包括以约30-60mg/kg给予环磷酰胺，任选每天一次持续一天或两天，和/或以约25mg/m²给予氟达拉滨，每天给予持续3-5天。在一些实施方案中，该治疗包括经由门诊递送来给予该细胞剂量和/或淋巴细胞清除疗法。

在此类实施方案的一些中，该组合物和/或该剂细胞含有确定比例的表达该CAR的CD4+细胞与表达该CAR的CD8+细胞，和/或确定比例的CD4+细胞与CD8+细胞，该比例任选为大约1:1或在大约1:3和大约3:1之间。在任何此类实施方案的一些中，该组合物和/或该剂细胞被配制用于肠胃外给药，任选静脉内给药。

在一些实施方案中，抗原是B细胞抗原，其任选地是CD19。在任何此类实施方案的一些中，CAR含有对该抗原具有特异性的scFv、跨膜结构域、衍生自任选为4-1BB的共刺激分子的细胞质信号传导结构域以及衍生自任选为CD3ζ的含有主信号传导ITAM的分子的细胞质信号传导结构域。在一些情况下，CAR含有各自任选地衍生自人IgG的间隔区和/或铰链区。

在任何此类实施方案的一些中，CAR依次含有对该抗原具有特异性的scFv、跨膜结构域、任选为或任选包含4-1BB信号传导结构域的衍生自共刺激分子的细胞质信号传导结构域以及任选为CD3ζ信号传导结构域的衍生自含有主信号传导ITAM的分子的细胞质信号传导结构域；或CAR依次含有对该抗原具有特异性的scFv、间隔区、跨膜结构域、任选为4-1BB信号传导结构域的衍生自共刺激分子的细胞质信号传导结构域以及任选为或任选包括CD3ζ信号传导结构域的衍生自含有主信号传导ITAM的分子的细胞质信号传导结构域；并且其中该间隔区任选地是多肽间隔区，该多肽间隔区(a)含有全部或部分免疫球蛋白铰链或其修饰形式或由其组成，或含有约15个氨基酸或更少，并且不包含CD28胞外区域或CD8胞外区域，(b)含有全部或部分免疫球蛋白铰链任选IgG4或其修饰形式或由其组成，和/或包含约15个氨基酸或更少，并且不包含CD28胞外区域或CD8胞外区域，或(c)长度为12个氨基酸或为约12个氨基酸和/或包含全部或部分免疫球蛋白铰链任选IgG4或其修饰形式或由其组成；或(d)具有SEQ ID NO:1的序列或由其组成，该序列是由以下各项所编码的一个序列：SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34或前述任何一项的变体，该变体与前述任何一项具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列一致性，或(e)包含式X1PPX2P或由其组成，其中X1是甘氨酸、半胱氨酸或精氨酸，且X2是半胱氨酸或苏氨酸；和/或共刺激结构域包含SEQ ID NO:12或其变体，该变体与其具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列一致性；和/或主信号传导结构域包含SEQ ID NO:13或14或15，它们具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列一致性；和/或scFv包含RASQDISKYLN的CDRLl序列(SEQ ID NO:35)、SRLHSGV的CDRL2序列(SEQID NO:36)和/或GNTLPYTFG的CDRL3序列(SEQ ID NO:37)和/或DYGVS的CDRH1序列(SEQ IDNO:38)、VIWGSETTYYNSALKS的CDRH2序列(SEQ ID NO:39)和/或YAMDYWG的CDRH3序列(SEQID NO:40)或其中scFv含有FMC63的可变重链区和FMC63的可变轻链区和/或FMC63的CDRLl序列、FMC63的CDRL2序列、FMC63的CDRL3序列、FMC63的CDRH1序列、FMC63的CDRH2序列和FMC63的CDRH3序列，或者结合至与前述任何一项相同的表位或竞争与前述任何一项的结合，并且任选地其中scFv依次含有VH、任选包含SEQ ID NO:24的接头和VL，和/或scFv含有柔性接头和/或含有SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列。

附图简述

图1A示出了用单次输注2 x 10⁵、2 x 10⁶或2 x 10⁷个CAR表达T细胞/公斤(kg)受试者体重治疗的复发或难治性(R/R)CD19⁺慢性淋巴细胞白血病(CLL)受试者的无进展生存期(PFS)百分比曲线。示出了实现完全缓解(CR)的受试者和未实现完全缓解(非CR)的受试者的单独曲线。在输注之前，受试者每天用60mg/kg环磷酰胺和25mg/m²氟达拉滨(Flu)预处理，持续3-5天。

图1B示出了用单次输注2 x 10⁵、2 x 10⁶或2 x 10⁷个CAR表达T细胞/公斤(kg)受试者体重治疗的复发或难治性(R/R)CD19⁺慢性淋巴细胞白血病(CLL)受试者的总生存期(OS)百分比曲线。示出了实现完全缓解(CR)的受试者和未实现完全缓解(非CR)的受试者的单独曲线。在输注之前，受试者每天用60mg/kg环磷酰胺和25mg/m²氟达拉滨(Flu)预处理3-5天。

图2A示出了用单次输注2 x 10⁶个CAR表达T细胞/公斤(kg)受试者体重治疗的非霍奇金淋巴瘤(NHL)受试者的无进展生存期(PFS)百分比曲线。示出了实现完全缓解(CR)的受试者和未实现完全缓解(非CR)的受试者的单独曲线。在输注之前，受试者每天用60mg/kg环磷酰胺和25mg/m²氟达拉滨(Flu)预处理，持续3-5天。

图2B示出了用单次输注2 x 10⁶个CAR表达T细胞/公斤(kg)受试者体重治疗的非霍奇金淋巴瘤(NHL)受试者的总生存期(OS)百分比曲线。示出了实现完全缓解(CR)的受试者和未实现完全缓解(非CR)的受试者的单独曲线。在输注之前，受试者每天用60mg/kg环磷酰胺和25mg/m²氟达拉滨(Flu)预处理，持续3-5天。

图3示出了用单次输注2 x 10⁵、2 x 10⁶或2 x 10⁷个CAR表达T细胞治疗并每天用30-60mg/kg环磷酰胺和25mg/m²氟达拉滨(Flu)预处理持续3-5天(n＝13)的复发或难治性(R/R)CD19⁺慢性淋巴细胞白血病(CLL)受试者的无进展生存期(PFS)百分比曲线。示出了实现完全缓解(CR)的受试者和未实现完全缓解(非CR)的受试者的单独的曲线。

图4A至图4E示出了对于用Cy/Fu和2 x 10⁶个CAR-T细胞/kg治疗的患者，CAR-T细胞扩增与骨髓中存在的异常B细胞百分比(A)、肿瘤横截面积(B)、血液中绝对异常B细胞计数(C)、PET成像上的最大SUV(D)和免疫检查点生物标志物CD200(E)的相关性。

图5示出了研究中所有CLL患者的总生存期(OS)和无进展生存期(PFS)。平均随访时间为12.4个月。

图6A和图6B示出了在以2 x 10⁵或2 x 10⁶个CAR-T细胞/kg输注Cy/Flu淋巴细胞清除和CAR-T细胞后，通过IWCLL 2008节点应答标准测量的患者的无进展生存期(PFS)和总生存期(OS)。图6A示出了具有CR、PR的患者或无应答者(n＝20)的患者的PFS和OS。图6B示出了具有CR、PR或无应答(SD/PD)的患者的PFS和OS，这些患者不包括图6A中的一名在再分期前死亡的患者。对于图6A和图6B，示出了实现CR的受试者组、实现PR的受试者组和无应答者的受试者组的单独曲线。对于CR/PR患者的平均PFS和OS随访时间分别为12.3和12.4个月。mPFS，平均PFS；mOS，平均OS；NR，未达到。

图7示出了通过流式细胞术在CAR-T细胞输注后4周实现从骨髓完全缓解(CR)并且与具有可检测到的恶性IGH拷贝(IGHseq阳性)的那些受试者相比不具有可检测到的恶性IGH拷贝(IGHseq阴性)的十四名受试者的无进展生存期(PFS)和总生存期(OS)百分比曲线。

图8示出了实现完全缓解(CR)并且进行了骨髓IGH深度测序的十四名受试者的CD4⁺/EGFRt⁺和CD8⁺/EGFRt⁺CAR-T细胞计数。

图9A示出了通过高分辨率流式细胞术从骨髓清除疾病(是)或没有从骨髓清除疾病(否)的患者的血液中的峰值CD4+/EGFRt+(左)和CD8+/EGFRt+(右)CAR-T细胞计数。

图9B示出了通过高分辨率流式细胞术从骨髓清除疾病并且在骨髓中具有或不具有可检测到的恶性IGH序列的患者的血液中的峰值CD4+/EGFRt+(左)和CD8+/EGFRt+(右)CAR-T细胞计数。

图10A示出了基于血液中CD4⁺/EGFRt⁺或CD8⁺/EGFRt⁺CAR-T细胞的数量构建的应答的估计概率曲线和形成3-5级神经毒性的估计概率曲线。

图10B示出了基于血液中CD4⁺/EGFRt⁺或CD8⁺/EGFRt⁺CAR-T细胞在血液中的数量构建的骨髓应答、通过IWCLL标准的完全或部分缓解(CR/PR)、形成2-5级细胞因子释放综合征(CRS)和形成2-5级神经毒性(NT)的估计概率曲线。

图11示出了在CAR-T细胞免疫疗法后高风险CLL患者的最佳应答下通过IWCLL(2008)成像标准的CT扫描上6个最大淋巴结的横截面积变化的瀑布图。未示出没有进行高分辨率成像以实现肿瘤测量的四名患者(2名CR、1名SD、1名死亡)。

发明详述

I.用基因工程化细胞进行的细胞疗法的方法和用途

提供了用于治疗疾病或病况(包括各种癌症和肿瘤)的方法及用在细胞疗法中的组合物。该方法包括给予表达重组受体的工程化细胞，该重组受体被设计为识别和/或特异性地结合至与疾病或病况相关的分子并导致应答，如在结合至这种分子时针对这种分子的免疫应答。受体可包括嵌合受体例如嵌合抗原受体(CAR)和其他转基因抗原受体，包括转基因T细胞受体(TCR)。

在一些实施方案中，将细胞、群体和组合物给予患有有待于例如经由过继细胞疗法如过继T细胞疗法治疗的特定疾病或病况的受试者。在一些实施方案中，该方法包括用一剂抗原受体表达细胞(例如CAR表达细胞)治疗患有慢性淋巴细胞白血病(CLL)或非霍奇金淋巴瘤(NHL)的受试者。

在一些实施方案中，该受试者已经用免疫清除(例如淋巴细胞清除)疗法预处理。用免疫清除(例如，淋巴细胞清除)疗法预处理受试者可以改善过继细胞疗法(ACT)的效果。用淋巴细胞清除剂(包括环孢霉素和氟达拉滨的组合)预处理已经有效地改善转移的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)在细胞疗法中的功效，包括改善转移细胞的应答和/或持久性。参见例如Dudley等人,2002Science,298,850-54；Rosenberg等人,Clin Cancer Res 2011,17(13):4550–4557。可以进行这种预处理，目的是降低可能抑制该疗法的功效的各种结果中的一种或多种的风险。这些结果包括被称为“细胞因子吸收”的现象，通过该现象，T细胞、B细胞、NK细胞与TIL竞争稳态的和激活的细胞因子，如IL-2、IL-7和/或IL-15；通过调节性T细胞、NK细胞或免疫系统的其他细胞抑制TIL；负调节物对肿瘤微环境的影响。Muranski等人,Nat Clin Pract Oncol.2006December；3(12):668–681。

因此，在一些实施方案中，该方法包括在给予该该剂细胞之前给予化学治疗剂例如调节化学治疗剂，例如用以减轻肿瘤负荷。在一些实施方案中，该方法包括给予预处理剂如淋巴细胞清除剂或化学治疗剂，如环磷酰胺、氟达拉滨或其组合。在一些实施方案中，该方法包括给予氟达拉滨和任选除氟达拉滨以外的另一种化学治疗剂。在一些实施方案中，其他化学治疗剂是环磷酰胺。在一些实施方案中，可以在给予该该剂细胞之前至少2天如至少3、4、5、6或7天向该受试者给予淋巴细胞清除疗法。在一些实施方案中，在给予该剂细胞之前至少48小时或至少约48小时或者48小时或约48小时或者至少96小时或至少约96小时给予或开始淋巴细胞清除疗法。在一些实施方案中，在给予该剂细胞之前在48小时或约48小时和96小时或约96小时之间给予或开始淋巴细胞清除疗法。

因此，在一些实施方案中，该方法包括在第一或后续剂量之前向受试者给予预处理剂如淋巴细胞清除剂或化学治疗剂，如环磷酰胺、氟达拉滨或其组合。例如，可以在第一或后续剂量之前至少2天如至少3、4、5、6或7天向该受试者给予预处理剂。在一些实施方案中，在第一或后续剂量之前不超过7天如不超过6、5、4、3或2天向受试给予预处理剂。

在一些实施方案中，将该受试者用在20mg/kg和100mg/kg之间或在约20mg/kg和100mg/kg之间如在40mg/kg和80mg/kg之间或在约40mg/kg和80mg/kg之间或在30mg/kg和约60mg/kg之间或在约30mg/kg和约60mg/kg之间的剂量的环磷酰胺进行预处理。在一些方面，将该受试者用60mg/kg或约60mg/kg的环磷酰胺进行预处理。在一些实施方案中，环磷酰胺可以以单剂量给予或者可以以多个剂量给予，如每天给药、每隔一天给药或每三天给药。在一些实施方案中，环磷酰胺每天给予一次，持续一天或两天。在一些实施方案中，当淋巴细胞清除剂包含环磷酰胺时，向该受试者给予剂量在100mg/m²和500mg/m²(含)之间或在约100mg/m²和500mg/m²(含)之间如在200mg/m²和400mg/m²或250mg/m²和350mg/m²(含)之间或在约200mg/m²和400mg/m²或250mg/m²和350mg/m²(含)之间的环磷酰胺。在一些情况下，向该受试者给予约300mg/m²的环磷酰胺。在一些实施方案中，环磷酰胺可以以单剂量给予或者可以以多个剂量给予，如每天给药、每隔一天给药或每三天给药。在一些实施方案中，每天给予环磷酰胺，如持续1-5天，例如持续3至5天。在一些情况下，在开始细胞疗法之前每天向该受试者给予约300mg/m²的环磷酰胺，持续3天。

在一些实施方案中，当淋巴细胞清除剂包含氟达拉滨时，向该受试者给予剂量在1mg/m²和100mg/m²之间或在约1mg/m²和100mg/m²之间如在10mg/m²和75mg/m²、15mg/m²和50mg/m²、20mg/m²和40mg/m²、20mg/m²和30mg/m²、24mg/m²和35mg/m²或24mg/m²和26mg/m²之间或者在约10mg/m²和75mg/m²、15mg/m²和50mg/m²、20mg/m²和40mg/m²、20mg/m²和30mg/m²、24mg/m²和35mg/m²或24mg/m²和26mg/m²之间的氟达拉滨。在一些情况下，向该受试者给予25mg/m²的氟达拉滨。在一些情况下，向该受试者给予约30mg/m²的氟达拉滨。在一些实施方案中，氟达拉滨可以以单剂量给予或者可以以多个剂量给予，如每天给药、每隔一天给药或每三天给药。在一些实施方案中，每天给予氟达拉滨，如持续1-5天，例如持续3至5天。在一些情况下，在开始细胞疗法之前每天向该受试者给予约30mg/m²的氟达拉滨，持续3天。

在一些实施方案中，淋巴细胞清除剂包含药剂的组合，如环磷酰胺和氟达拉滨的组合。因此，药剂的组合可包括任何剂量或给药时间表(如上述那些剂量或给药时间表)下的环磷酰胺以及任何剂量或给药时间表(如上述那些剂量或给药时间表)下的氟达拉滨。例如，在一些方面，在给予该剂细胞之前向该受试者给予30-60mg/kg(约1-2g/m²)的环磷酰胺和3至5剂量的25mg/m²氟达拉滨。在一些方面，在第一或后续剂量之前，向该受试者给予60mg/kg(约2g/m²)的环磷酰胺和3至5剂量的25mg/m²氟达拉滨。在一些实施方案中，可以通过减少或省略环磷酰胺的剂量或给予与氟达拉滨同时给予的较低总剂量的环磷酰胺的方案来修改淋巴细胞清除化学疗法，以最小化对受试者的毒性，如已经接受多个先前化疗周期、先前已经历同种异体移植、骨髓储备不良和/或有其他严重的合并症的受试者。

在一些实施方案中，抗原受体(例如CAR)特异性地结合至与疾病或病况相关如与CLL或NHL相关的靶抗原。在一些实施方案中，与疾病或病症相关的抗原选自CD20、CD19、CD22、ROR1、CD45、CD21、CD5、CD33、Igκ、Igλ、CD79a、CD79b或CD30。

在一些实施方案中，该方法包括向受试者、组织或细胞给予该细胞或含有该细胞的组合物，如患有该疾病、病况或病症、处于患有该疾病、病况或病症的风险或怀疑患有该疾病、病况或病症的受试者、组织或细胞。在一些实施方案中，受试者是成年受试者。在一些实施方案中，受试者年龄超过30岁、40岁、50岁、60岁或70岁或超过约30岁、40岁、50岁、60岁或70岁。

在一些实施方案中，所提供的方法包括过继细胞治疗方法(例如CAR+T细胞)，用于治疗慢性淋巴细胞白血病(CLL)。CLL是最常见的成人白血病。在一些情况下，患有高风险疾病的患者(包括那些显示del(17)(p13.1)、p53突变、复杂核型或突变的免疫球蛋白可变区的那些患者)需要更早的治疗和/或具有更短的生存期(Dohner等人(2000)N.Engl.J.Med.,343:1910-1916；Stilgenbauer等人(2014)Blood,123:3247-3254；Thompson等人(2015)Cancer,121:3612-3621)。高风险CLL的治疗包括化学疗法(Hallek等人(2010)Lancet 376:1164-1174)，但最近BTK抑制剂依鲁替尼首先被批准用于复发和难治性疾病，并随后用于一线治疗(Burger等人(2015)N.Engl J.Med.,373:2425-2437；Byrd等人(2013)N.Engl.J.Med.,369:32-42)。虽然对依鲁替尼的总体应答率(ORR)高，但在一些情况下可能完全应答率(CR；或完全缓解)低，并且针对依鲁替尼进展的患者的生存期可能是短的。高风险CLL的另一种治疗方法是BCL2抑制剂venetoclax，其在一些依鲁替尼疗法失败的患者中显示活性，但CR很少见且持久性尚未报道(Stilgenbauer等人(2016)Lancet Oncol.,17:768-778)。

基于T细胞的疗法如过继T细胞疗法(包括涉及给予表达对感兴趣的疾病或病症特异的嵌合受体(如嵌合抗原受体(CAR)和/或其他重组抗原受体)的细胞的那些过继细胞疗法，以及其他过继免疫细胞和过继T细胞疗法)可有效治疗癌症以及其他疾病和病症。在T细胞表面上重组受体(如嵌合抗原受体(CAR))的工程化表达使得能够重定向T细胞特异性。在临床研究中，CAR-T细胞例如抗CD19CAR-T细胞在白血病和淋巴瘤患者中均产生了持久的完全应答(Porter等人(2015)Sci Transl Med.,7:303ra139；Kochenderfer(2015)J.Clin.Oncol.,33:540-9；Lee等人(2015)Lancet,385:517-28；Maude等人(2014)N Engl JMed,371:1507-17)。

在一些实施方案中，与某些替代方法相比，所提供的方法和用途提供或实现如在特定的治疗的受试者组中(如在患有白血病(如CLL或NHL)的患者中，包括那些患有高危疾病的患者)改善的或更持久的应答或功效。在一些实施方案中，该方法通过给予T细胞疗法(如包括用于过继性细胞疗法例如T细胞疗法(例如CAR表达T细胞)的细胞的组合物)和淋巴细胞清除疗法(例如环磷酰胺、氟达拉滨或其组合)是有利的。在一些实施方案中，所提供的方法基于以下观察结果：在淋巴细胞清除和CLL靶向CAR-T细胞疗法如抗CD19CAR+T细胞疗法后在患有高风险依鲁替尼难治性CLL的患者中可以实现骨髓疾病的高消除率和分子CR的速率。该结果的实现伴随相对低的严重毒性发生率，这通常是可控制的。

在一些实施方案中，该方法包括向被选择或鉴定为具有CLL的某种预后或风险的受试者给予细胞。慢性淋巴细胞白血病(CLL)通常是一种可变疾病。一些患有CLL的受试者可以在没有治疗的情况下存活，而其他患有CLL的受试者可能需要直接干预。在一些情况下，患有CLL的受试者可以被分类为可以提供疾病预后和/或推荐的治疗策略的信息的组。在一些情况下，这些组可能是“低风险”、“中度风险”、“高风险”和/或“极高风险”，并且患者可能会根据多种因素被如此分类，包括但不限于遗传异常和/或形态或物理特征。在一些实施方案中，基于CLL的风险对根据该方法治疗的受试者进行分类或鉴定。在一些实施方案中，受试者是具有高风险CLL的受试者。

在一些情况下，一种对受试者进行分类的方法是Rai系统。在一些方面，Rai系统包括5个分期：Rai 0期：淋巴细胞增多且淋巴结、脾或肝无增大，并且具有接近正常的红细胞和血小板计数；血液中的淋巴细胞>15000/mcL且骨髓中的淋巴细胞>40％。Rai I期：淋巴细胞增多加上淋巴结增大。脾和肝无增大，且红细胞和血小板计数接近正常。Rai II期：淋巴细胞增多加上脾增大(且可能肝增大)，有或无淋巴结增大。红细胞和血小板计数接近正常。Rai III期：淋巴细胞增多加上贫血(红细胞过少)，有或无淋巴结、脾或肝增大。血小板计数接近正常。Rai IV期：淋巴细胞增多加上血小板减少(血小板过少)，有或无贫血、淋巴结、脾或肝增大。Rai分期可以进一步分为如下风险组：0期被认为是低风险；I期和II期被认为是中等风险；III期和IV期被认为是高风险，并且在一些分级系统中进一步包括疾病相关性贫血(血红蛋白水平<11.0g/dL或血细胞比容<33％)或血小板<100,000/mcL。在一些情况下，根据Binet系统也可以或可替代地将受试者分类，这在一些方面涉及评估受影响的淋巴组织组的数量(颈淋巴结、腹股沟淋巴结、腋下淋巴结、脾和肝脏)以及评估患者是否患有贫血(红细胞过少)或血小板减少(血小板过少)。在一些方面，Binet系统包括三个分期：Binet A期：血红蛋白≥10g/dL，血小板≥100,000/mm3且<3个增大区域；Binet B期：血红蛋白≥10g/dL，血小板≥100,000/mm3且≥3个增大区域；和Binet C期：血红蛋白<10g/dL，血小板<100,000/mm3，且存在任何数量的增大区域和贫血和/或血小板减少。(Rai KR,KeatingHJ.Chronic lymphocytic leukemia.In:Cancer Medicine.第4版Baltimore,Md:Williamsand Wilkins；1997.Vol II:2697-728；Hallek M.等人Guidelines for the diagnosisand treatment of chronic lymphocytic leukemia:a report from the InternationalWorkshop on Chronic Lymphocytic Leukemia updating the National CancerInstitute-Working Group 1996 guidelines.Blood 2008.111:5446-56.)。

对患有CLL的受试者进行分类的其他方法包括遗传分析和确定存在或不存在遗传异常。在一些情况下，预后遗传异常包括细胞遗传学异常，其可包括13号染色体的长臂的缺失(del 13q)、del 11q、三体性12、del 17p和del 6q。11q、13q、17p和三体性12的缺失可具有预后价值，并且可能有助于CLL发病机制和演变并提供结果和治疗策略的信息。异常还包括一些通过更传统的方法如FISH分析未检测到的异常。在一些方面，染色体易位(包括不平衡易位)和复杂核型可能与不良结果和/或不良预后相关。复杂核型(CK)通常定义为三种或更多种染色体异常的存在，其在近16％的CLL受试者中检测到，并且已经与未突变的IgHV状态和CD38表达相关。CK可预测用挽救疗法(包括氯脱氧腺苷(cdA))治疗的CLL受试者的首次治疗时间缩短(TTFT)和总生存期(OS)。核型异常的数量可能与调节后的造血干细胞移植(HSCT)后较短的无进展生存期(PFS)和OS相关。可能表明受试者具有高风险或极高风险的其他遗传修饰包括IgVH、ZAP70和/或CD38的突变。(Gribben,ASH Education Book；January1,2008,vol.2008no.1,444-449；Puiggros等人,BioMed Research International,Volume2014(2014),Article ID 435983)。在一些情况下，高风险或极高风险的患者可能展现出一种或多种遗传异常。

在一些实施方案中，受试者一种或多种细胞遗传学异常，如复杂核型、展现出13号染色体的长臂的缺失(del 13q)、del 11、三体性12、del 17p、del 6q和del 13q.14中的一种或多种。在一些实施方案中，可以通过荧光原位杂交(FISH)检测任何一种或多种细胞遗传学异常。

在一些实施方案中，患有CLL的受试者展现出Richter综合征(RS)。RS定义为CLL转变为侵袭性淋巴瘤，最常见的是弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)(参见例如Parikh等人Blood2014 123:1647-1657)。

在一些实施方案中，患有CLL和/或RS的受试者展现出神经系统症状或神经系统并发症，如中枢神经系统(CNS)中的症状或并发症。在一些实施方案中，CNS(例如脑、脊柱)的磁共振成像(MRI)和/或具有脑脊液(CSF)分析的腰椎穿刺可用于评估CNS相关症状，例如，CSF中淋巴细胞的单克隆群体的存在(参见例如Mozzam等人,J.Neurooncol.2012 106:185-200；Strati等人,Haematologica 2016 101:458-465)。

在一些实施方案中，该方法包括向被选择或鉴定为具有高风险NHL的受试者给予细胞。在一些实施方案中，受试者展现出一种或多种细胞遗传学异常，如与高风险NHL相关。在一些实施方案中，基于具有如下疾病或病况来选择或鉴定受试者，该疾病或病况的特征为或被确定为侵袭性NHL、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤(TCHRBCL)、伯基特淋巴瘤、套细胞淋巴瘤(MCL)和/或滤泡性淋巴瘤(FL)。

在一些实施方案中，在给予表达重组抗原受体的细胞之前该受试者先前已经用靶向疾病或病况例如CLL或NHL的疗法或治疗剂治疗。在一些实施方案中，该治疗剂是激酶抑制剂如布鲁顿酪氨酸激酶(Btk)的抑制剂，例如依鲁替尼。在一些实施方案中，该治疗剂是B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)的抑制剂，例如venetoclax。在一些实施方案中，该治疗剂是特异性地结合至由CLL或NHL的细胞表达的抗原的抗体(例如单克隆抗体)，例如来自CD20、CD19、CD22、ROR1、CD45、CD21、CD5、CD33、Igκ、Igλ、CD79a、CD79b或CD30中的任何一种或多种的抗原。在一些实施方案中，该治疗剂是抗CD20抗体，例如利妥昔单抗。在一些实施方案中，该治疗剂是消耗化学疗法，其是包括利妥昔单抗的组合疗法，例如氟达拉滨和利妥昔单抗的组合疗法或蒽环霉素和利妥昔单抗的组合疗法。在一些实施方案中，该受试者先前已经用造血干细胞移植(HSCT)治疗，例如同种异体HSCT或自体HSCT。在一些实施方案中，该受试者已经进行治疗或先前已接受除淋巴细胞清除疗法和/或该剂表达抗原受体的细胞以外的至少或约至少1、2、3或4种其他用于治疗NHL或CLL的疗法。在一些实施方案中，该受试者先前已经用化学疗法或放射疗法治疗。

在一些方面，该受试者对于其他疗法或治疗剂是难以治疗的或无反应的。在一些实施方案中，该受试者例如在用另一种疗法或治疗性干预(包括化学疗法或放射)治疗后患有持续性或复发性疾病。

在一些情况下，对于低风险和中等风险类别的CLL受试者，可能不推荐治疗或疗法(或特定类别的那些治疗或疗法)。在一些情况下，高风险和极高风险受试者的治疗策略可包括氟达拉滨、环磷酰胺和利妥昔单抗(FCR)、BTK抑制剂(例如依鲁替尼)和/或同种异体干细胞移植。(Puiggros等人,BioMed Research International,Volume 2014(2014),Article ID 435983)。在一些方面，针对CLL进行治疗的受试者展现出不良的长期结果。例如，在一些情况下，难治性(R/R)高风险CLL受试者在依鲁替尼停药后展现出差的生存期(Jain等人(2015)Blood 125(13):2062-2067)。需要改进治疗CLL的方法，并且在一些方面，需要那些适合于治疗高风险和/或极高风险CLL和/或已经复发或对于多种现有疗法难以治疗的受试者的改进方法。

在一些实施方案中，所提供的方法用于患有癌症的受试者，其中该受试者和/或癌症对依鲁替尼的抑制具有抗性，或者包含对抑制剂的抑制具有抗性的细胞群。在一些方面，患者是如下选择的患者，该患者基于高风险细胞遗传学和/或基于复发之前的突变的存在如通过早期检测而变得或很可能变得对于依鲁替尼难以治疗。在一些实施方案中，提供的方法用于患有癌症的受试者，其中该受试者和/或癌症包含编码BTK的核酸中的突变或破坏，其中这种突变能够减少或阻止抑制剂例如依罗替尼对BTK的抑制。在本文提供的任何方法的一些方面，编码BTK的核酸中的突变含有在位置C481任选为C481S或C481R的取代，和/或在位置T474任选为T474I或T474M的取代。在一些实施方案中，所提供的方法用于患有癌症的受试者，其中在给予过继细胞疗法例如T细胞疗法(例如，CAR表达T细胞)时和/或在给予淋巴细胞清除疗法时，该受试者在用依鲁替尼治疗后出现缓解后复发或者被认为对于用依鲁替尼进行的治疗来说难以治疗。

用于过继细胞疗法的细胞的给予方法是已知的，并且可以与所提供的方法和组合物一起使用。例如，过继T细胞治疗方法描述于例如Gruenberg等人的美国专利申请公开号2003/0170238；Rosenberg的美国专利号4,690,915；Rosenberg(2011)Nat Rev ClinOncol.8(10):577-85。参见例如Themeli等人(2013)Nat Biotechnol.31(10):928-933；Tsukahara等人(2013)Biochem Biophys Res Commun 438(1):84-9；Davila等人(2013)PLoS ONE 8(4):e61338。

在一些实施方案中，细胞疗法例如过继性细胞疗法例如过继T细胞疗法通过自体转移进行，其中从要接受细胞疗法的受试者或从来源于这种受试者的样品分离和/或以其他方式制备细胞。因此，在一些方面，细胞来源于需要治疗的受试者(例如患者)，并且该细胞在分离和加工后被给予同一受试者。

在一些实施方案中，细胞疗法例如过继细胞疗法例如过继T细胞疗法通过同种异体转移进行，其中从除要接受或最终接受细胞疗法的受试者例如第一受试者以外的受试者分离和/或以其他方式制备细胞。在此类实施方案中，细胞随后被给予相同物种的不同受试者例如第二受试者。在一些实施方案中，第一和第二受试者在遗传上是相同的。在一些实施方案中，第一和第二受试者在遗传上是相似的。在一些实施方案中，第二受试者表达与第一受试者相同的HLA类或超型。

该细胞可以通过任何合适的方式给予，例如通过推注输注，通过注射例如静脉内或皮下注射、眼内注射、眼周注射、视网膜下注射、玻璃体内注射、经中隔注射、巩膜下注射、脉络膜内注射、前房注射、结膜下注射、结膜下注射、眼球筋膜囊下注射、球后注射、球周注射或后巩膜递送。在一些实施方案中，它们通过肠胃外、肺内和鼻内给予以及(如果需要用于局部治疗的话)病灶内给药。肠胃外输注包括肌肉内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下给药。在一些实施方案中，给定剂量通过细胞的单次推注给药来给予。在一些实施方案中，给定剂量通过细胞的多次推注给药例如在不超过3天的时间内来给予，或通过细胞的连续输注给药。

为了预防或治疗疾病，适当的剂量可取决于待治疗的疾病类型、细胞或重组受体的类型、疾病的严重程度和病程、细胞是否针对预防或治疗目的而被给予、先前的治疗、受试者的临床病史和对细胞的应答以及主治医师的决断。在一些实施方案中，该组合物和细胞适合一次或在一系列治疗中给予受试者。

在将该细胞给予受试者(例如人)后，在一些方面中工程化细胞群的生物活性通过许多已知方法中的任何一种来测量。待评估的参数包括工程化或天然T细胞或其他免疫细胞与抗原的特异性结合，其在体内例如通过成像进行评估，或离体例如通过ELISA或流式细胞术进行评估。在某些实施方案中，可以使用本领域已知的任何合适的方法测量工程化细胞破坏靶细胞的能力，如在例如Kochenderfer等人,J.Immunotherapy,32(7):689-702(2009)和Herman等人J.Immunological Methods,285(1):25-40(2004)中描述的细胞毒性测定。在某些实施方案中，还可以通过测定某些细胞因子如CD107a、IFNγ、IL-2和TNF的表达和/或分泌来测量细胞的生物活性。在一些方面，通过评估临床结果如肿瘤负荷或负载的减少来测量生物活性。在一些方面，评估毒性结果、细胞的持久性和/或扩增和/或宿主免疫应答的存在或不存在。

在某些实施方案中，以许多方式修饰工程化细胞，使得其治疗或预防功效增加。例如，由群体表达的工程化CAR或TCR可以直接或通过接头间接缀合至靶向部分。将化合物例如CAR或TCR与靶向部分缀合的实践是本领域已知的。参见例如Wadwa等人,J.DrugTargeting 3:1 1 1(1995)和美国专利5,087,616。

在一些实施方案中，该细胞作为组合治疗的一部分给予，如与另一种治疗性干预如抗体或工程化细胞或受体或药剂(如细胞毒性剂或治疗剂)同时给予或以任何顺序依次给予。在一些实施方案中，该细胞与一种或多种附加治疗剂共同给予或与另一种治疗性干预联合给予(同时或以任何顺序依次给予)。在一些情况下，该细胞与另一种疗法以足够接近的时间共同给予，使得细胞群增强一种或多种附加治疗剂的作用，或者相反。在一些实施方案中，该细胞在一种或多种附加治疗剂之前给予。在一些实施方案中，该细胞在一种或多种附加治疗剂之后给予。在一些实施方案中，该一种或多种附加药剂包括细胞因子如IL-2，例如用于增强持久性。

本文还提供了在用细胞疗法例如T细胞疗法(例如CAR表达T细胞)治疗后受试者的预后或分期方法、监测接受这种细胞疗法的受试者的应答的方法和/或预测对这种细胞疗法的应答的持久性的方法，其中这种方法包括对从已接受细胞疗法的受试者获得的含有或可能含有肿瘤细胞的样品中的免疫球蛋白重链(IGH)基因座进行测序。在一些实施方案中，这种方法包括对从骨髓或血液收获的样品(如那些潜在的白血病细胞例如B细胞)的IGH基因座，和/或由骨髓或血液制备的样品的IGH基因座进行测序，以检测残余瘤的存在或不存在。

在一些实施方案中，用于预后、分期和/或监测患有白血病或淋巴瘤例如CLL的受试者中对治疗的应答率的典型方法包括测量淋巴结尺寸。例如，评估应答率的常用标准是慢性淋巴细胞白血病国际研讨会(IWCLL)应答标准(Hallek,等人,Blood 2008,Jun 15；111(12):5446-5456)，其中在一些方面要求所有淋巴结≤15mm。然而，在一些情况下，发现对细胞疗法的应答是快速的并且可以在可测量的淋巴结尺寸变化之前实现。因此，在一些方面，仅通过肿瘤标准的早期再分期(如在细胞疗法后4周内或约4周内)可能不是预后的最佳决定因素。基于本文提供的观察结果，发现即使早在给予细胞疗法例如T细胞疗法(如CAR+T细胞)后4周，通过IGH测序观察到骨髓中CLL的高消除率。这些结果表明，与依赖于肿瘤尺寸标准的方法相比，通过IGH测序对受试者的早期再分期可以提供有效且更早的预后或应答和应答持久性的预测物。在所提供方法的一些实施方案中，IGH测序在开始给予细胞疗法后不超过3个月，如不超过2个月或不超过1个月进行。在一些实施方案中，IGH测序在开始细胞疗法后2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周或12周或者约2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周或12周时或这些时间内进行。

在一些实施方案中，IGH测序方法用于在用细胞疗法治疗后提供关于受试者的分期的预后信息。在一些实施方案中，如果检测到或观察到缺乏可检测的恶性IGH拷贝，则将该受试者鉴定为响应细胞疗法、很可能响应细胞疗法和/或很可能展现或出现诸如CR和/或持久应答的应答。在一些实施方案中，通过所提供的方法没有检测到恶性IGH拷贝被用于鉴定如早期鉴定(例如，在开始给予细胞疗法的3-6周内或约3-6周内，如在开始的4周或约4周内)是否受试者展现出或很可能展现出对细胞疗法的应答，如展现出对细胞疗法的完全应答(CR)或总体应答(OR)。在一些方面，如果检测到恶性IGH拷贝，则将该受试者鉴定为不响应细胞疗法和/或不展现出完全应答和/或预后较差或需要附加治疗。在一些实施方案中，通过所提供的方法检测到恶性IGH拷贝被用于鉴定如早期鉴定(例如，在开始给予细胞疗法的3-6周内或约3-6周内，如在开始的4周或约4周)是否受试者未展现出对细胞疗法的应答或未展现出对细胞疗法的完全应答(CR)或总体应答(OR)。在一些方面，可针对可能的替代或附加治疗策略的给予以改善应答或应答的可能性来鉴定患者。在一些实施方案中，该方法在接受如含有工程化T细胞例如CAR+T细胞的细胞疗法的受试者中进行，用于治疗B细胞恶性肿瘤例如CLL或NHL。在一些实施方案中，该方法在已接受细胞疗法的受试者中进行以用于治疗CLL。

在一些实施方案中，IGH测序方法用于评估或确定对细胞疗法例如CAR+T细胞疗法的应答的持久性。在一些实施方案中，如果检测到没有可检测的恶性IGH序列，则预测该受试者展现出或很可能展现出对细胞疗法的持久应答和/或具有低的或相对低的复发风险或在至少一定的时间段内具有展现出无进展存活的高可能性。在一些实施方案中，通过所提供的方法没有检测到恶性IGH拷贝被用于鉴定如早期鉴定(例如，在开始给予细胞疗法的90天内或约90天或更早的时间)，预测受试者具有低复发风险和/或具有出现无进展存活(PFS)或持久应答(如大于3个月、大于6个月、大于9个月或更长时间)的增加的可能性。在一些方面，如果检测到恶性IGH拷贝，则预测该受试者不展现或很可能不展现对细胞疗法的持久应答和/或具有高或相对高的复发风险或具有在至少一段特定时间内展现无进展存活的低可能性。在一些实施方案中，通过所提供的方法检测到恶性IGH拷贝被用于鉴定如早期鉴定(例如，在开始给予细胞疗法的90天内或约90天或更早的时间)，预测受试者具有高复发风险和/或具有出现无进展存活(PFS)或持久应答(如短于3个月、短于6个月、短于9个月或更短时间)的降低的可能性。在一些方面，可针对可能的替代或附加治疗策略的给予以改善应答功效和/或持久性来鉴定患者。在一些实施方案中，该方法在接受如含有工程化T细胞例如CAR+T细胞的细胞疗法的受试者中进行，用于治疗B细胞恶性肿瘤例如CLL或NHL。

A.给药

在一些实施方案中，根据所提供的方法将一剂细胞给予受试者。在一些实施方案中，剂量的大小或时间安排根据受试者的特定疾病或病况确定。鉴于所提供的描述，凭经验确定特定疾病的剂量的大小或时间安排在技术人员的水平内。

在某些实施方案中，向该受试者给予约10万至约1000亿个细胞和/或该量的细胞/公斤受试者体重的范围的细胞或单独细胞亚型群体，如例如10万至约500亿个细胞(例如，约500万个细胞、约2500万个细胞、约5亿个细胞、约10亿个细胞、约50亿个细胞、约200亿个细胞、约300亿个细胞、约400亿个细胞或由前述任何两个值限定的范围)、100万至约500亿个细胞(例如，约500万个细胞、约2500万个细胞、约5亿个细胞、约10亿个细胞、约50亿个细胞、约200亿个细胞、约300亿个细胞、约400亿个细胞或由前述任何两个值限定的范围)，如约1000万至约1000亿个细胞(例如，约2000万个细胞、约3000万个细胞、约4000万个细胞、约6000万个细胞、约7000万个细胞、约8000万个细胞、约9000万个细胞、约100亿个细胞、约250亿个细胞、约500亿个细胞、约750亿个细胞、约900亿个细胞或由前述任何两个值定义的范围)，并且在一些情况下，约1亿个细胞至约500亿个细胞(例如，约1.2亿个细胞、约2.5亿个细胞、约3.5亿个细胞、约4.5亿个细胞、约6.5亿个细胞、约8亿个细胞、约9亿个细胞、约30亿个细胞、约300亿个细胞、约450亿个细胞)或这些范围之间的任何值和/或每公斤受试者体重。剂量可以根据疾病或病症和/或患者和/或其他治疗特有的属性而变化。在一些实施方案中，这些值是指重组受体表达细胞的数量；在其他实施方案中，它们是指给予的T细胞或PBMC或总细胞的数量。

在一些实施方案中，细胞疗法包括给予包含许多细胞的剂量，该细胞为至少或至少约0.1 x 10⁶个细胞/kg受试者体重、0.2 x 10⁶个细胞/kg、0.3 x 10⁶个细胞/kg、0.4 x10⁶个细胞/kg、0.5 x 10⁶个细胞/kg、1 x 10⁶个细胞/kg、2.0 x 10⁶个细胞/kg、3 x 10⁶个细胞/kg或5 x 10⁶个细胞/kg或至少约0.1 x 10⁶个细胞/kg、0.2 x 10⁶个细胞/kg、0.3 x 10⁶个细胞/kg、0.4 x 10⁶个细胞/kg、0.5 x 10⁶个细胞/kg、1 x 10⁶个细胞/kg、2.0 x 10⁶个细胞/kg、3 x 10⁶个细胞/kg或5 x 10⁶个细胞/kg，或者为0.1 x 10⁶个细胞/kg、0.2 x 10⁶个细胞/kg、0.3 x 10⁶个细胞/kg、0.4 x 10⁶个细胞/kg、0.5 x 10⁶个细胞/kg、1 x 10⁶个细胞/kg、2.0 x 10⁶个细胞/kg、3 x 10⁶个细胞/kg或5 x 10⁶个细胞/kg或约0.1 x 10⁶个细胞/kg、0.2 x 10⁶个细胞/kg、0.3 x 10⁶个细胞/kg、0.4 x 10⁶个细胞/kg、0.5 x 10⁶个细胞/kg、1 x 10⁶个细胞/kg、2.0 x 10⁶个细胞/kg、3 x 10⁶个细胞/kg或5 x 10⁶个细胞/kg。

在一些实施方案中，细胞疗法包括给予包含一定细胞数量的剂量，该剂量在0.1 x10⁶个细胞/kg受试者体重和1.0 x 10⁷个细胞/kg之间或在约0.1 x 10⁶个细胞/kg受试者体重和1.0 x 10⁷个细胞/kg之间、在0.5 x 10⁶个细胞/kg和5 x 10⁶个细胞/kg之间或在约0.5x 10⁶个细胞/kg和5 x 10⁶个细胞/kg之间、在0.5 x 10⁶个细胞/kg和3 x 10⁶个细胞/kg之间或在约0.5 x 10⁶个细胞/kg和3 x 10⁶个细胞/kg之间、在0.5 x 10⁶个细胞/kg和2 x 10⁶个细胞/kg之间或在约0.5 x 10⁶个细胞/kg和2 x 10⁶个细胞/kg之间、在0.5 x 10⁶个细胞/kg和1 x 10⁶个细胞/kg之间或在约0.5 x 10⁶个细胞/kg和1 x 10⁶个细胞/kg之间、在1.0 x10⁶个细胞/kg受试者体重和5 x 10⁶个细胞/kg之间或在约1.0 x 10⁶个细胞/kg受试者体重和5 x 10⁶个细胞/kg之间、在1.0 x 10⁶个细胞/kg和3 x 10⁶个细胞/kg之间或在约1.0 x10⁶个细胞/kg和3 x 10⁶个细胞/kg之间、在1.0 x 10⁶个细胞/kg和2 x 10⁶个细胞/kg之间或在约1.0 x 10⁶个细胞/kg和2 x 10⁶个细胞/kg之间、在2.0 x 10⁶个细胞/kg受试者体重和5 x 10⁶个细胞/kg之间或在约2.0 x 10⁶个细胞/kg受试者体重和5x 10⁶个细胞/kg之间、在2.0 x 10⁶个细胞/kg和3 x 10⁶个细胞/kg之间或在约2.0 x 10⁶个细胞/kg和3 x 10⁶个细胞/kg之间或者在3.0 x 10⁶个细胞/kg受试者体重和5 x 10⁶个细胞/kg之间或在约3.0 x10⁶个细胞/kg受试者体重和5 x 10⁶个细胞/kg之间(包含每个端点)。

在一些实施方案中，该剂细胞包含在2 x 10⁵或约2 x 10⁵个细胞/kg和2 x 10⁶或约2 x 10⁶个细胞/kg之间，如在4 x 10⁵或约4 x 10⁵个细胞/kg和1 x 10⁶或约1 x 10⁶个细胞/kg之间或在6 x 10⁵或约6 x 10⁵个细胞/kg和8 x 10⁵或约8 x 10⁵个细胞/kg之间。在一些实施方案中，该剂细胞包含不超过2 x 10⁵个细胞(例如抗原表达细胞如CAR表达细胞)/公斤受试者体重(细胞/kg)，如不超过3 x 10⁵或不超过约3 x 10⁵个细胞/kg、不超过4 x10⁵或不超过约4 x 10⁵个细胞/kg、不超过5 x 10⁵或不超过约5 x 10⁵个细胞/kg、不超过6x 10⁵或不超过约6 x 10⁵个细胞/kg、不超过7 x 10⁵或不超过约7 x 10⁵个细胞/kg、不超过8 x 10⁵或不超过约8 x 10⁵个细胞/kg、不超过9 x 10⁵或不超过约9 x 10⁵个细胞/kg、不超过1 x 10⁶或不超过约1 x 10⁶个细胞/kg或者不超过2 x 10⁶或不超过约2 x 10⁶个细胞/kg。在一些实施方案中，该剂细胞包含至少2 x 10⁵个细胞或至少约2 x 10⁵个细胞或2 x10⁵个细胞或约2 x 10⁵个细胞(例如抗原表达细胞如CAR表达细胞)/公斤受试者体重(细胞/kg)，如至少3 x 10⁵个细胞/kg或至少约3 x 10⁵个细胞/kg或者3 x 10⁵个细胞/kg或约3 x10⁵个细胞/kg、至少4 x 10⁵个细胞/kg或至少约4 x 10⁵个细胞/kg或者4 x 10⁵个细胞/kg或约4 x 10⁵个细胞/kg、至少5 x 10⁵个细胞/kg或至少约5 x 10⁵个细胞/kg或者5 x 10⁵个细胞/kg或约5 x 10⁵个细胞/kg、至少6 x 10⁵个细胞/kg或至少约6 x 10⁵个细胞/kg或者6x 10⁵个细胞/kg或约6 x 10⁵个细胞/kg、至少7 x 10⁵个细胞/kg或至少约7 x 10⁵个细胞/kg或者7 x 10⁵个细胞/kg或约7 x 10⁵个细胞/kg、至少8 x 10⁵个细胞/kg或至少约8 x 10⁵个细胞/kg或者8 x 10⁵个细胞/kg或约8 x 10⁵个细胞/kg、至少9 x 10⁵个细胞/kg或至少约9 x 10⁵个细胞/kg或者9 x 10⁵个细胞/kg或约9 x 10⁵个细胞/kg、至少1 x 10⁶个细胞/kg或至少约1 x 10⁶个细胞/kg或者1 x 10⁶个细胞/kg或约1 x 10⁶个细胞/kg、或者至少2 x10⁶个细胞/kg或至少约2 x 10⁶个细胞/kg或者2 x 10⁶个细胞/kg或约2 x 10⁶个细胞/kg。

在一些实施方案中，例如，当受试者是人时，剂量包括少于约1 x 10⁸个总重组受体(例如，CAR)表达细胞、T细胞或外周血单核细胞(PBMC)，例如，在约1 x 10⁶至1 x 10⁸个此类细胞(如2 x 10⁶、5 x 10⁶、1 x 10⁷、5 x 10⁷或1 x 10⁸)或总的此类细胞的范围中，或前述任何两个值之间的范围。在一些实施方案中，当受试者是人时，剂量包括约1 x 10⁶和3 x10⁸个总重组受体(例如，CAR)表达细胞之间，例如，在约1 x 10⁷至2 x 10⁸个此类细胞(如1x 10⁷、5 x 10⁷、1 x 10⁸或1.5 x 10⁸个总的此类细胞)的范围中，或前述任何两个值之间的范围。在一些实施方案中，给予患者多个剂量，并且每个剂量或总剂量可以在任何前述值内。在一些实施方案中，该剂细胞包括给予从1 x 10⁵或从约1 x 10⁵至5 x 10⁸个总重组受体表达T细胞或总T细胞、1 x 10⁵至1 x 10⁸个总重组受体表达T细胞或总T细胞、从5 x 10⁵或从约5 x 10⁵至1 x 10⁷个总重组受体表达T细胞或总T细胞或从1 x 10⁶或从约1 x 10⁶至1 x 10⁷个总重组受体表达T细胞或总T细胞(包含每个端点)。

在过继细胞疗法的背景下，给定“剂量”的给予包括以单一组合物和/或单次不间断给药的方式(例如以单次注射或连续输注的方式)给予给定量或数量的细胞，并且还包括在不超过3天的指定时间段内以在多个单独组合物或输注中提供的分割剂量的方式给予给定量或数量的细胞。因此，在一些情况下，剂量是指定数量的细胞的单次或连续给药，在单个时间点给予或开始。然而，在一些情况下，剂量在不超过三天的时间内以多次注射或输注的方式给予，如每天一次持续三天或两天或者通过在一天的时间内多次输注。

因此，在一些方面，该剂量的细胞以单一药物组合物施用。在一些实施方案中，该剂量的细胞以共同含有该剂量的细胞的多种组合物施用。

术语“分割剂量”是指分割的剂量，使其在超过一天的时间内给予。这种类型的给药包括在本方法中并且被认为是单剂量。

因此，该剂细胞可以以分割剂量的形式给予。例如，在一些实施方案中，剂量可以在2天或3天内给予受试者。用于分割给药的示例性方法包括在第一天给予25％的剂量并在第二天给予剩余的75％的剂量。在其他实施方案中，可以在第一天给予33％的剂量，并且在第二天给予剩余的67％。在一些方面，在第一天给予10％的剂量，在第二天给予30％的剂量，并且在第三天给予60％的剂量。在一些实施方案中，分割剂量不超过3天。

在一些实施方案中，该剂细胞通常足够大以有效减轻疾病负荷。

在一些实施方案中，细胞以所需剂量给予，该所需剂量在一些方面包括所需剂量或数量的细胞或一种或多种细胞类型和/或所需比例的细胞类型。因此，在一些实施方案中，细胞剂量基于细胞总数(或每kg体重的细胞数)和所需的单独群体或亚型的比例，如CD4+与CD8+的比例。在一些实施方案中，细胞剂量基于所需的单独群体中的细胞或单独细胞类型的总数(或每kg体重的细胞数)。在一些实施方案中，剂量基于这种特征的组合，如所需的总细胞数、所需比例和所需的单独群体中的细胞总数。

在一些实施方案中，以所需剂量的总细胞(如期望剂量的T细胞)的耐受差异或在该耐受差异之内给予细胞的群体或亚型如CD8⁺和CD4⁺T细胞。在一些方面，所需剂量是所需细胞数或被给予该细胞的受试者的每单位体重的所需细胞数例如细胞/kg。在一些方面，所需剂量等于或高于最小细胞数或每单位体重的最小细胞数。在一些方面，在以所需剂量给予的总细胞中，单独群体或亚型以等于或接近所需输出比例(如CD4⁺与CD8⁺比例)存在，例如，在这种比例的一定耐受差异或误差内。

在一些实施方案中，细胞以所需剂量的一种或多种单独细胞群体或亚型的耐受差异或在该耐受差异之内给予，如所需剂量的CD4+细胞和/或所需剂量的CD8+细胞。在一些方面，所需剂量是所需的亚型或群体的细胞数或所需的被给予该细胞的受试者的每单位体重的此类细胞数(例如细胞/kg)。在一些方面，所需剂量等于或高于最小的群体或亚型的细胞数或每单位体重的最小的群体或亚型的细胞数。

因此，在一些实施方案中，剂量基于所需的总细胞的固定剂量和所需比例，和/或基于所需的一种或多种单独亚型或亚群(例如各自)的固定剂量。因此，在一些实施方案中，剂量基于所需的T细胞的固定或最小剂量和所需的CD4⁺与CD8⁺细胞的比例，和/或基于所需的CD4⁺和/或CD8⁺细胞的固定或最小剂量。

在一些实施方案中，细胞在多种细胞群或亚型(如CD4+和CD8+细胞或亚型)的所需输出比例的耐受范围下或耐受范围内给予。在一些方面，所需比例可以是特定比例或可以是一系列比例。例如，在一些实施方案中，所需比例(例如，CD4⁺与CD8⁺细胞的比例)在1:5或约1:5和5:1或约5:1之间(或大于约1:5且小于约5:1)，或在1:3或约1:3和3:1或约3:1之间(或大于约1:3且小于约3:1)，如在2:1或约2:1和1:5或约1:5之间(或大于约1:5且小于约2:1，如5:1、4.5:1、4:1、3.5:1、3:1、2.5:1、2:1、1.9:1、1.8:1、1.7:1、1.6:1、1.5:1、1.4:1、1.3:1、1.2:1、1.1:1、1:1、1:1.1、1:1.2、1:1.3、1:1.4、1:1.5、1:1.6、1:1.7、1:1.8、1:1.9、1:2、1:2.5、1:3、1:3.5、1:4、1:4.5或1:5或者约5:1、4.5:1、4:1、3.5:1、3:1、2.5:1、2:1、1.9:1、1.8:1、1.7:1、1.6:1、1.5:1、1.4:1、1.3:1、1.2:1、1.1:1、1:1、1:1.1、1:1.2、1:1.3、1:1.4、1:1.5、1:1.6、1:1.7、1:1.8、1:1.9、1:2、1:2.5、1:3、1:3.5、1:4、1:4.5或1:5)。在一些方面，耐受差异在所需比例的约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％，包括这些范围之间的任何值。

在特定的实施方案中，细胞的数量和/或浓度是指重组受体(例如CAR)表达细胞的数量。在其他实施方案中，细胞的数量和/或浓度是指给予的所有细胞、T细胞或外周血单核细胞(PBMC)的数量或浓度。

在一些方面，剂量的大小基于一个或多个标准来确定，如受试者对现有治疗例如化学疗法的反应、受试者的疾病负荷如肿瘤负载、体积、尺寸或程度、转移的程度或类型、分期和/或受试者发生毒性结果的可能性或发生率，例如CRS、巨噬细胞激活综合征、肿瘤溶解综合征、神经毒性和/或针对所给予的细胞和/或重组受体的宿主免疫应答。

在一些实施方案中，该方法还包括给予一个或多个附加剂量的表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞和/或淋巴细胞清除疗法，和/或重复该方法的一个或多个步骤。在一些实施方案中，该一个或多个附加剂量与初始剂量相同。在一些实施方案中，该一个或多个附加剂量不同于初始剂量，例如更高如比初始剂量高2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍或更多倍，或者更低如比初始剂量低2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍或更多倍。在一些实施方案中，一个或多个附加剂量的给予基于以下各项来确定，如受试者对初始治疗或任何现有治疗的反应、受试者的疾病负荷如肿瘤负载、体积、尺寸或程度、转移的程度或类型、分期和/或受试者发生毒性结果的可能性或发生率，例如CRS、巨噬细胞激活综合征、肿瘤溶解综合征、神经毒性和/或针对所给予的细胞和/或重组受体的宿主免疫应答。

B.应答、功效和存活

在一些实施方案中，尽管受试者已经对另一种疗法产生抗性，但给药有效地治疗了受试者。在一些实施方案中，至少或约至少50％的受试者、至少或约至少60％的受试者、至少或约至少70％的受试者、至少或约至少80％的受试者或至少或约至少90％的根据该方法治疗的受试者实现完全缓解(CR)和/或实现客观应答(OR)。

在一些方面，根据所提供的方法的给药通常减少或防止受试者的疾病或病况的扩展或负荷。例如，在疾病或病况是肿瘤的情况下，该方法通常减少肿瘤尺寸、体积、转移、骨髓中的原始细胞百分比或分子上可检测的癌症和/或改善预后或存活或与肿瘤负荷相关的其他症状。

在一些方面，无进展生存期(PFS)被描述为治疗疾病(如癌症)期间和之后受试者伴随疾病生存但疾病不恶化的时间长度。在一些方面，客观应答(OR)被描述为可测量的应答。在一些方面，客观应答率(ORR)被描述为实现CR或PR的患者的比例。在一些方面，总生存期(OS)被描述为从诊断或开始治疗疾病(如癌症)的日期到被诊断患有该疾病的受试者仍然存活时的时间长度。在一些方面，无事件生存期(EFS)被描述为癌症治疗结束后受试者保持没有该治疗旨在预防或延迟的某些并发症或事件的时间长度。这些事件可包括癌症的复发或某些症状的发作，如已经扩散到骨骼的癌症引起的骨痛，或死亡。

在一些实施方案中，与使用替代给药方案如其中受试者接受一种或多种替代治疗剂的替代给药方法和/或受试者未接受根据所提供的方法的一剂细胞和/或淋巴细胞清除剂的替代给药方法的可比较方法所观察到的减轻相比，该方法在更大的程度上和/或在更长的时间段内减轻疾病或病况的负荷，例如，肿瘤细胞的数量、肿瘤的尺寸、患者存活或无事件存活的持续时间。在一些实施方案中，检测、评估或测量受试者中疾病或病况的负荷。可以在一些方面通过检测受试者中或受试者的器官、组织或体液(如血液或血清)中的疾病或疾病相关细胞例如肿瘤细胞的总数来检测疾病负荷。在一些方面，评估受试者的存活、特定时间段内的存活、存活程度、无事件或无症状存活的存在或持续时间或无复发存活。在一些实施方案中，评估疾病或病况的任何症状。在一些实施方案中，指定疾病或病况负荷的量度。

在一些实施方案中，与其他方法相比，例如其中受试者接受一种或多种替代治疗剂的方法和/或其中受试者未接受根据所提供方法的一剂细胞和/或淋巴细胞清除剂的方法，通过该方法改善受试者的无事件存活率或总存活率。例如，在一些实施方案中，在该剂量后6个月时通过该方法治疗的受试者的无事件存活率或概率大于约40％、大于约50％、大于约60％、大于约70％、大于约80％、大于约90％或大于约95％。在一些方面，总存活率大于约40％、大于约50％、大于约60％、大于约70％、大于约80％、大于约90％或大于约95％。在一些实施方案中，用该方法治疗的受试者展现出无事件存活、无复发存活或存活至少6个月或至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10年。在一些实施方案中，进展的时间得到改善，如进展的时间大于6个月或大于约6个月或至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10年。

在一些实施方案中，与其他方法相比，例如其中受试者接受一种或多种替代治疗剂的方法和/或其中受试者未接受根据所提供方法的一剂细胞和/或淋巴细胞清除剂的方法，在通过该方法治疗后复发的概率降低。例如，在一些实施方案中，在第一剂量后6个月时复发的概率小于约80％、小于约70％、小于约60％、小于约50％、小于约40％、小于约30％、小于约20％或小于约10％。

疾病负载可以包括受试者中或受试者的器官、组织或体液(如肿瘤的器官或组织或另一位置，例如将指示转移的位置)中的疾病细胞的总数。例如，可以在某些血液恶性肿瘤环境中在血液或骨髓中检测和/或定量肿瘤细胞。在一些实施方案中，疾病负载可包括肿瘤的质量、转移的数量或程度和/或骨髓中存在的原始细胞的百分比。

在一些方面，应答评估利用临床、血液学和/或分子方法中的任何一种。

1.IWCLL应答标准

在一些方面，受试者如患有CLL的受试者中的应答率基于慢性淋巴细胞白血病国际研讨会(IWCLL)应答标准(Hallek,等人,Blood 2008,Jun 15；111(12):5446-5456；也称为IWCLL 2008)。在一些方面，这些标准描述如下：完全缓解(CR)，其在一些方面要求不存在通过免疫表型分析的外周血克隆淋巴细胞、不存在淋巴结病、不存在肝肿大或脾肿大、不存在全身症状和令人满意的血细胞计数；完全缓解伴随不完全骨髓恢复(CRi)，其在一些方面被描述为上述CR但没有正常的血细胞计数；部分缓解(PR)，其在一些方面被描述为淋巴细胞计数下降≥50％、淋巴结病减少≥50％或肝或脾减少≥50％以及外周血细胞计数改善；进展性疾病(PD)，其在一些方面被描述为淋巴细胞计数增加≥50％至≥5 x 10⁹/L、淋巴结病增加≥50％、肝或脾尺寸增加≥50％、Richter转化或由于CLL导致新的血细胞减少；和稳定的疾病，其在一些方面被描述为不符合CR、CRi、PR或PD的标准。

在一些实施方案中，如果在给予该剂细胞的1个月内受试者中的淋巴结的尺寸小于20mm或小于约20mm、小于10mm或小于约10mm或小于10mm或小于约10mm，则受试者展现出CR或OR。

2.骨髓或血液中的疾病

在一些实施方案中，受试者患有白血病。疾病负荷的程度可以通过评估血液或骨髓中的残留白血病来确定。

在一些实施方案中，如果骨髓中存在例如通过光学显微镜检测的大于或等于5％原始细胞，则受试者展现出形态学疾病，如骨髓中大于或等于10％原始细胞、骨髓中大于或等于20％原始细胞、骨髓中大于或等于30％原始细胞、骨髓中大于或等于40％原始细胞或骨髓中大于或等于50％原始细胞。在一些实施方案中，如果骨髓中存在少于5％原始细胞，则受试者展现出完全或临床缓解。

在一些实施方案中，受试者可展现出完全缓解，但存在一小部分形态学上(通过光学显微镜技术)不可检测的残留白血病细胞。如果受试者展现在骨髓中小于5％原始细胞并且展现分子可检测的癌症，则称受试者展现最小残留病(MRD)。在一些实施方案中，可以使用允许灵敏检测少量细胞的各种分子技术中的任何一种来评估分子可检测的癌症。在一些方面，此类技术包括PCR测定，其可确定由染色体易位产生的独特Ig/T细胞受体基因重排或融合转录物。在一些实施方案中，流式细胞术可用于基于白血病特异性免疫表型鉴定癌细胞。在一些实施方案中，癌症的分子检测可检测10,000个正常细胞中的仅1个白血病细胞或100,000个正常细胞中的仅1个白血病细胞。在一些实施方案中，如果检测到如通过PCR或流式细胞术检测到10,000个细胞中的至少或大于1个白血病细胞或者检测到100,000个细胞中的1个白血病细胞，则受试者展现出分子可检测的MRD。在一些实施方案中，受试者的疾病负荷是分子不可检测的或MRD^-，使得在一些情况下使用PCR或流式细胞术技术不能检测到受试者中的白血病细胞。

在一些实施方案中，在该受试者的骨髓中(或在根据该方法治疗的大于50％、60％、70％、80％、90％或更多的受试者的骨髓中)未检测到白血病例如CLL的指数克隆。在一些实施方案中，通过IGH深度测序来评估白血病例如CLL的指数克隆。在一些实施方案中，在给予细胞之后或给予细胞之后1、2、3、4、5、6、12、18或24个月或者至少1、2、3、4、5、6、12、18或24个月或约1、2、3、4、5、6、12、18或24个月的时间未检测到指数克隆。

a.通过流式细胞术测定MRD

在一些方面，通过流式细胞术检测MRD。流式细胞术可用于监测癌细胞的骨髓和外周血样品。在特定方面，流式细胞术用于检测或监测骨髓中癌细胞的存在。在一些方面，通过流式细胞术的多参数免疫学检测用于检测癌细胞(参见例如Coustan-Smith等人,(1998)Lancet 351:550-554)。在一些方面，通过质谱流式细胞术的多参数免疫学检测用于检测癌细胞。在一些例子中，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25、30、35、40、45或50个参数可用于检测癌细胞。基于正在检测的癌症选择用于检测的抗原(Foon和Todd(1986)Blood 68:1-31)。

在一些例子中，通过骨髓抽吸物或骨髓活检收获骨髓，并分离淋巴细胞用于分析。与荧光染料(例如，异硫氰酸荧光素(FITC)、藻红蛋白、多甲藻素叶绿素蛋白或生物素)缀合的单克隆和/或多克隆抗体可用于检测分离的淋巴细胞上的表位，如末端脱氧核苷酸基转移酶(TdT)、CD3、CD10、CD11c、CD13、CD14、CD33、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD34、CD45、CD56、CD79b、IgM和/或KORSA3544。然后可以使用流式细胞术如多参数流式细胞术或质谱流式细胞术来检测标记的细胞以检测多个表位。

可以基于光散射点图鉴定和门控淋巴细胞，然后进行二次门控以鉴定表达感兴趣的免疫表型特征的细胞群。示例性表位列于下表1中。Foon和Todd(Blood(1986)68(1):1-31)提供了白血病和淋巴瘤的其他免疫学分类。在一些方面，可以通过将携带一种或多种CLL免疫表型的活淋巴细胞(例如，低前向/侧向散射；CD3^-；CD5⁺；CD14^-；CD19⁺；CD23⁺；CD45⁺；CD56^-)定量来实现MRD的流式细胞术评估。

b.IGH深度测序

在一些方面，收获的B细胞的免疫球蛋白重链(IGH)基因座的深度测序可用于检测微小残留病(MRD)。特定IgG重排的克隆存在可以提供标志物以检测B细胞恶性肿瘤(如CLL或NHL)的存在和/或其恶性细胞的残留存在。在一些方面，从血液中收获并分离细胞，如含有或怀疑含有B细胞的群体。在一些方面，从骨髓中例如从骨髓抽吸物或骨髓活检和/或从其他生物样品中收获并分离细胞。在一些方面，使用针对基因座的V和J区内的高度保守序列的引物实现互补决定区3(CDR3)的聚合酶链反应(PCR)扩增，其可用于鉴定细胞的克隆群体，目的是评估微小残留病。可以使用用于检测克隆群体的其他方法如单细胞测序法，包括提供关于特定谱系的细胞数量和/或表达特定可变链(如可变重链或其结合位点如克隆群体)的信息的那些单细胞测序法。在一些方面，使用简并引物或识别不同细胞克隆之间共有的可变链区的引物(如识别IGH序列的共有V和简并共有J区的那些引物)扩增IGH DNA。V区的示例性序列是ACACGGCCTCGTGTATTACTGT(SEQ ID NO:17)。J区的示例性简并共有序列是ACCTGAGGAGACGGTGACC(SEQ ID NO:18)。

在一些方面，PCR产物或测序结果对重排的等位基因是特异性的，并且用作MRD检测的克隆标志物。在CDR3区域的PCR扩增之后，可以对PCR产物进行测序以产生患者特异性寡核苷酸，其构建为等位基因特异性PCR的探针，用于在用CAR-T细胞疗法例如CD19CAR-T细胞疗法治疗B细胞恶性肿瘤后灵敏检测MRD。在使用共有引物不生成PCR产物的例子中，可以替代地使用框架区1的V区家族特异性引物。

在一些方面，在治疗后PCR可检测的肿瘤细胞(如B细胞恶性肿瘤如NHL或CLL的细胞)如对应于恶性或克隆IGH序列的可检测IGH序列的持久性与复发风险增加相关。在一些方面，与具有持续IGH序列的患者相比，治疗后呈恶性IGH序列阴性的患者(在一些方面，甚至在指示进行性疾病或仅部分应答的其他标准的情况下，如淋巴结增大的持久性或在一些情况下可能与疾病或缺乏完全应答相关的其他标准)可被认为具有增加的PFS可能性或进入CR或持久CR或延长的生存期。在一些实施方案中，这种预后和分期测定对于如下治疗尤其相关，其中在给予疗法后的短时间内观察到例如与其他临床症状如淋巴结尺寸或其他分期标准的消退相比恶性细胞清除。例如，在一些这样的方面，与其他可用的分期或预后方法相比，在诸如骨髓的样品中可检测的IGH或最小残留病的不存在可能是应答或应答的可能性或其持久性的优选读数。在一些方面，MRD的结果例如IGH深度测序信息可以提供进一步干预或无需干预的信息。例如，该方法和在一些上下文中其他提供的实施方案规定被认为呈恶性IGH阴性的受试者在一些方面可以不进一步治疗或不进一步给予所提供的疗法的剂量，或者受试者被给予较低的或减少的剂量。相反，可以提供或指定经由IGH深度测序展现MRD的受试者例如用最初以相似或更高剂量给予的疗法或用其他治疗方法治疗。

3.Lugano标准

在一些方面，使用Lugano标准评估应答(Cheson等人,JCO September 20,2014vol.32no.27 3059-3067；Johnson等人,(2015)Imaging for staging and responseassessment in lymphoma.Radiology 2:323–338)。Lugano标准包括通过成像进行评估、肿瘤体积测量以及脾、肝和骨髓侵犯的评估。

在一些方面，使用Lugano标准评估的应答包括使用正电子发射断层扫描(PET)计算机断层扫描(CT)和/或CT(视情况而定)以用于成像评估。PET-CT评估可进一步包括使用氟脱氧葡萄糖(FDG)来评估在嗜FDG淋巴瘤中的FDG吸收。嗜FDG淋巴瘤包括霍奇金淋巴瘤(HL)和某些非霍奇金淋巴瘤(NHL)，其包括弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、具有侵袭性转化的边缘区NHL和嗜FDG淋巴结淋巴瘤(基本上所有组织学类型除外：慢性淋巴细胞白血病(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤、淋巴浆细胞淋巴瘤/巨球蛋白血症和蕈样真菌病)。在一些情况下，对于非嗜FDG组织学，CT是优选的成像方法。在一些方面，在给予治疗后尽可能长时间地进行治疗后扫描。在一些方面，在治疗后进行最少3周的治疗后扫描，如在给予治疗后进行3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周或更长时间的治疗后扫描。

在一些方面，在PET-CT将用于评估嗜FDG组织学中的应答的情况下，5分量表如Deauville五分量表(Deauville 5ps)可用于评估或分期。Dauville得分基于与两个参考器官即纵膈膜(即血池)和肝相比，对每个病变通过PET/CT扫描可见的氟脱氧葡萄糖(FDG)吸收的目视判读。在治疗之前进行一次评估(初始分期)，并且在治疗期间和/或之后使用第二轮FDG PET/CT扫描来评估残余质量(与参考器官中的FDG更新相比)。量表范围为1到5，其中1为最佳且5为最差。每个嗜FDG(或先前嗜FDG)的病变都是独立评定的。在一些方面，5分量表包括以下标准：1，无高于背景的吸收；2，吸收≤纵隔膜；3，吸收>纵膈膜但≤肝；4，中等吸收>肝；5，吸收明显高于肝(例如，最大标准吸收值(SUV_MAX>2个肝；5a)和/或可能与淋巴瘤有关的新病变(基于应答评估)(5b)；X，不大可能与淋巴瘤有关的新的吸收区域。

Deauville得分为1或2被认为表示治疗中期和结束时的完全代谢应答(CMR)。Deauville得分为3也表示CMR，但得分3的解释取决于评估的时间、临床背景和治疗。中期的Deauville得分4或5被认为表示部分代谢应答。然而，如果吸收从基线降低，则在治疗结束时Deauville得分4或5表示残留代谢疾病；如果从基线的吸收没有变化，则表示无代谢应答(NMR)；并且如果从基线的吸收增加和/或有新的病变，则表示进行性代谢疾病(PMD)。在治疗的中期和结束时，NMR或PMD表示治疗失败。

在一些方面，如使用Lugano标准所描述的，在治疗结束时的完全应答包括在各种可测量部位处的完全代谢应答和完全放射应答。在一些方面，这些部位包括淋巴结和淋巴外部位，其中当使用PET-CT时，在5分量表上CR被描述为得分为1、2或3，其具有或不具有残余质量。在一些方面，在具有高生理吸收或在脾或骨髓内激活(例如，用化学疗法或骨髓集落刺激因子)的Waldeyer环或结外部位中，吸收可能大于正常纵膈膜和/或肝。在这种情况下，如果初始侵犯部位的吸收不大于周围正常组织，即使组织具有高生理吸收，也可以推断完全代谢应答。在一些方面，使用CT在淋巴结中评估应答，其中CR被描述为没有患病的淋巴外部位，并且靶淋巴结/淋巴结肿块的病变的最长横径(LDi)必须恢复至≤1.5cm。其他评估部位包括骨髓，其中基于PET-CT的评估应表明在骨髓中缺乏嗜FDG疾病的证据，并且基于CT的评估应表明正常形态，如果不确定则应该是IHC阴性。其他部位可能包括器官增大的评估，其应该恢复正常。在一些方面，评估未测量的病变和新病变，其在CR的情况下应该不存在。(Cheson等人,JCO September 20,2014vol.32no.273059-3067；Johnson等人,(2015)Imaging for staging and response assessment in lymphoma.Radiology 2:323–338)。

4.实体瘤应答评估标准(RECIST)标准

在一些方面，实体瘤应答评估标准(RECIST)标准用于确定客观肿瘤应答；在一些方面，在实体瘤中。(Eisenhauer等人,European Journal of Cancer 45(2009)228-247.)在一些方面，RECIST标准用于确定针对靶病变的客观肿瘤应答。在一些方面，使用RECIST标准确定的完全应答被描述为所有靶病变的消失，并且任何病理性淋巴结(无论是靶标还是非靶标)必须在短轴上减少至<10mm。在其他方面，使用RECIST标准确定的部分应答被描述为靶病变的直径总和减少至少30％，以基线总和直径为参考。在其他方面，进行性疾病(PD)被描述为靶病变直径总和增加至少20％，以研究中的最小总和作为参考(这包括基线总和，如果这是研究中最小的)。除了相对增加20％之外，总和还必须证明至少5mm的绝对增加(在一些方面，一个或多个新病变的外观也被认为是进展)。在其他方面，疾病稳定(SD)被描述为既没有足够的收缩以符合PR，也没有足够的增加以符合PD，在研究时将最小总直径作为参考。

C.毒性

在一些实施方案中，该方法不引起或降低毒性或毒性结果(如细胞因子释放综合征(CRS)、严重CRS(sCRS)、巨噬细胞激活综合征、肿瘤溶解综合征、至少38摄氏度或至少约38摄氏度发热三天或更多天以及至少20mg/dL或至少约20mg/dL的血浆CRP水平)、神经毒性和/或神经毒性的可能性。在一些实施方案中，根据该方法治疗的受试者中的至少50％(例如，所治疗的受试者中的至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多)没有展现出毒性结果(例如CRS或神经毒性)或未展现出严重的毒性结果(例如严重的CRS或严重的神经毒性)。在一些实施方案中，受试者未展现出3级或更高的神经毒性和/或未展现出严重的CRS，或者在治疗后的一定时间段内(如在给予细胞的一周、两周或一个月内)没有展现出上述情况。

给予过继T细胞疗法如用表达嵌合抗原受体的T细胞进行的治疗可以诱导毒性作用或结果，如细胞因子释放综合征和神经毒性。在一些例子中，这种效果或结果与高水平的循环细胞因子并行，高水平的循环细胞因子可能是观察到的毒性的基础。

在一些方面，毒性结果是细胞因子释放综合征(CRS)或严重CRS(sCRS)或与细胞因子释放综合征(CRS)或严重CRS(sCRS)相关或指示细胞因子释放综合征(CRS)或严重CRS(sCRS)。在一些情况下，在过继T细胞疗法和向受试者给予其他生物制品后可发生CRS，例如sCRS。参见Davila等人,Sci Transl Med 6,224ra25(2014)；Brentjens等人,Sci.Transl.Med.5,177ra38(2013)；Grupp等人,N.Engl.J.Med.368,1509–1518(2013)；和Kochenderfer等人,Blood 119,2709–2720(2012)；Xu等人,Cancer Letters 343(2014)172-78。

通常，CRS由例如通过T细胞、B细胞、NK细胞、单核细胞和/或巨噬细胞介导的过度的全身免疫应答引起。这种细胞可释放大量炎症介质如细胞因子和趋化因子。细胞因子可引发急性炎症应答和/或诱导内皮器官损伤，该内皮器官损伤可能导致微血管渗漏、心力衰竭或死亡。严重危及生命的CRS可导致肺浸润和肺损伤、肾衰竭或弥散性血管内凝血。其他严重危及生命的毒性可包括心脏毒性、呼吸窘迫、神经毒性和/或肝衰竭。

可以使用抗炎疗法如抗IL-6疗法(例如抗IL-6抗体，例如托珠单抗或抗生素)治疗CRS。CRS的结果、体征和症状是已知的，并且包括本文所述的那些。在一些实施方案中，当特定剂量方案或给药影响或不影响给定的CRS相关的结果、体征或症状时，可指定特定结果、体征和症状和/或量或程度。

在给予CAR表达细胞的情况下，CRS通常在输注表达该CAR的细胞后6-20天发生。参见Xu等人,Cancer Letters 343(2014)172-78。在一些情况下，CRS在CAR T细胞输注后少于6天或超过20天发生。CRS的发生率和时间可能与输注时的基线细胞因子水平或肿瘤负荷有关。通常，CRS包括干扰素(IFN)-γ、肿瘤坏死因子(TNF)-α和/或白细胞介素(IL)-2的血清水平升高。可在CRS中快速诱导的其他细胞因子是IL-1β、IL-6、IL-8和IL-10。

与CRS相关的示例性结果包括发热、寒颤、发冷、低血压、呼吸困难、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、脑病、ALT/AST升高、肾衰竭、心脏病、缺氧、神经紊乱和死亡。神经系统并发症包括谵妄、癫痫样活动、意识模糊、找词困难、失语和/或变得迟钝。与CRS相关的其他结果包括疲劳、恶心、头痛、癫痫、心跳过速、肌痛、皮疹、急性血管渗漏综合征、肝功能损害和肾衰竭。在一些方面，CRS与一种或多种因子(如血清铁蛋白、d-二聚体、氨基转移酶、乳酸脱氢酶和甘油三酯)的增加相关，或与低纤维蛋白原血或肝脾肿大相关。

在一些实施方案中，与CRS相关的结果包括以下一种或多种：持续发热例如指定温度的发热(例如大于38摄氏度或大于约38摄氏度)两天或更多天，例如三天或更多天，例如四天或更多天或至少连续三天；大于38摄氏度或大于约38摄氏度的发热；与至少两种细胞因子(例如，下组中的至少两种，该组由以下各项组成：干扰素γ(IFNγ)、GM-CSF、IL-6、IL-10、Flt-3L、fracktalkine和IL-5和/或肿瘤坏死因子α(TNFα))的治疗前水平相比细胞因子升高，如最大倍数变化例如至少75倍或至少约75倍，或至少一种这样的细胞因子的最大倍数变化例如至少250倍或至少约250倍；和/或至少一种毒性临床体征如低血压(例如，如通过至少一种静脉内血管活性加压器测量的)；缺氧(例如，血浆氧(PO₂)水平低于90％或低于约90％)；和/或一种或多种神经病症(包括精神状态改变、迟钝和癫痫)。

示例性CRS相关结果包括一种或多种因子的增加的或高血清水平，该一种或多种因子包括细胞因子和趋化因子以及与CRS相关的其他因子。示例性结果进一步包括一种或多种此类因子的合成或分泌的增加。这种合成或分泌可以通过T细胞或与T细胞相互作用的细胞(如先天免疫细胞或B细胞)。

在一些实施方案中，CRS相关的血清因子或CRS相关的结果包括炎性细胞因子和/或趋化因子，该炎性细胞因子和/或趋化因子包括干扰素γ(IFN-γ)、TNF-a、IL-1β、IL-2、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、sIL-2Ra、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-1、肿瘤坏死因子α(TNFα)、IL-6和IL-10、IL-1β、IL-8、IL-2、MIP-1、Flt-3L、fracktalkine和/或IL-5。在一些实施方案中，该因子或结果包括C反应蛋白(CRP)。除了作为CRS的早期且易于测量的风险因子外，CRP也是细胞扩增的标志物。在一些实施方案中，测量具有高水平CRP(如≥15mg/dL)的受试者患有CRS。在一些实施方案中，测量具有高水平CRP的受试者不具有CRS。在一些实施方案中，CRS的量度包括CRP的量度和指示CRS的另一因子。

在一些实施方案中，在CAR治疗之前、期间或之后监测一种或多种炎性细胞因子或趋化因子。在一些方面，一种或多种细胞因子或趋化因子包括IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-1β、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、sIL-2Rα、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)或巨噬细胞炎性蛋白(MIP)。在一些实施方案中，监测IFN-γ、TNF-α和IL-6。

已开发CRS标准，它似乎与CRS的发病相关以预测哪些患者更有可能具有形成sCRS的风险(参见Davilla等人Science translational medicine.2014；6(224):224ra25)。因素包括发热、缺氧、低血压、神经系统改变、升高的炎性细胞因子血清水平，如一组七种细胞因子(IFNγ、IL-5、IL-6、IL-10、Flt-3L、曲动蛋白和GM-CSF)，这七种细胞因子的治疗诱导的升高可以与治疗前肿瘤负荷和sCRS症状相关联。关于CRS的诊断和管理的其他指南是已知的(参见例如Lee等人,Blood.2014；124(2):188-95)。在一些实施方案中，反映CRS等级的标准是下表2中详述的那些标准。

如本文所用，受试者被认为响应于或继发于细胞疗法或其一剂细胞的给予而产生“严重CRS”(“sCRS”)，条件是给药后该受试者显示：(1)至少38摄氏度的发热至少三天；(2)细胞因子升高，其包括(a)与紧跟着给药后的水平相比，下列七种细胞因子中至少两种的最大倍数变化为至少75倍：干扰素γ(IFNγ)、GM-CSF、IL-6、IL-10、Flt-3L、fracktalkine和IL-5和/或(b)与紧跟着给药后的水平相比，下列七种细胞因子中的至少一种的最大倍数变化为至少250倍：干扰素γ(IFNγ)、GM-CSF、IL-6、IL-10、Flt-3L、fracktalkine和IL-5；(c)至少一种毒性临床症状如低血压(需要至少一次静脉血管活性加压药)或缺氧(PO₂<90％)或一种或多种神经病症(包括精神状态改变、迟钝和/或或癫痫)。在一些实施方案中，严重CRS包括3级或更高等级的CRS，如表2中所列。

在一些实施方案中，CRS包括以下项的组合：(1)持续发热(至少38摄氏度的发热至少三天)和(2)CRP的血清水平为至少20mg/dL或至少约20mg/dL。

在一些实施方案中，CRS包括需要使用两种或更多种血管加压药的低血压或需要机械通气的呼吸衰竭。

可以指定测量或检测各种结果的方法。

在一些方面，毒性结果是神经毒性或与神经毒性相关。在一些实施方案中，与神经毒性的临床风险相关的症状包括意识模糊、谵妄、表达性失语、迟钝、肌阵挛、嗜睡、精神状态改变、惊厥、癫痫样活动、癫痫(任选地通过脑电图[EEG]证实)、升高的β淀粉样蛋白(Aβ)水平，升高的谷氨酸水平和升高的氧自由基水平。在一些实施方案中，基于严重程度对神经毒性进行分级(例如，使用1-5级量表(参见例如Guido Cavaletti&Paola MarmiroliNature Reviews Neurology 6,657-666(December 2010)；美国国家癌症研究所—常见毒性标准第4.03版(NCI-CTCAE v4.03))。

在一些情况下，神经症状可能是sCRS的最早症状。在一些实施方案中，观察到神经症状在细胞疗法输注后5至7天开始。在一些实施方案中，神经变化的持续时间可以为3至19天。在一些情况下，在sCRS的其他症状消退后，会发生神经变化的恢复。在一些实施方案中，通过用抗IL-6和/或一种或多种类固醇治疗不会加速神经变化的消退时间或程度。

如本文所用，如果在给药后受试者显示出如下限制自理(例如洗澡、穿衣和脱衣、进食、如厕、服药)的症状，则认为受试者响应于或继发于细胞疗法或其一剂细胞的给予而产生“严重神经毒性”：1)外周运动神经病的症状，包括外周运动神经的炎症或退化；2)外周感觉神经病的症状，包括外周感觉神经的炎症或退化、感觉迟钝(如感官知觉失真)，导致异常和不愉快的感觉、神经痛(如沿着神经或一组神经的剧烈疼痛感)，和/或感觉异常如感觉神经元的功能性紊乱，导致在没有刺激的情况下刺痛、麻木、压迫、冷和温的异常皮肤感觉。在一些实施方案中，严重神经毒性包括3级或更高等级的神经毒性，如表3中所列。

表3：神经毒性的示例性分级标准

在一些实施方案中，与其他方法相比，该方法减少了与神经毒性相关的症状。例如，与通过其他方法治疗的受试者相比，根据本方法治疗的受试者可能具有减轻的神经毒性症状如四肢无力或麻木、丧失记忆、视力和/或智力、无法控制的强迫性和/或强制性行为、妄想、头痛、认知和行为问题(包括丧失运动控制、认知恶化和自主神经系统功能障碍以及性功能障碍)。在一些实施方案中，根据本发明方法治疗的受试者可具有与外周运动神经病、外周感觉神经病、感觉迟钝、神经痛或感觉异常相关的症状减轻。

在一些实施方案中，该方法减轻与神经毒性相关的结果，包括对神经系统和/或脑的损害，如神经元的死亡。在一些方面，该方法降低与神经毒性相关的因子的水平，如β淀粉样蛋白(Aβ)、谷氨酸和氧自由基。

II.细胞表达的重组抗原受体

在一些实施方案中，用于所提供的方法或与所提供的方法一起给予的细胞含有或经工程化以含有工程化受体例如工程化抗原受体如嵌合抗原受体(CAR)或T细胞受体(TCR)。还提供了此类细胞群、含有此类细胞和/或富含此类细胞的组合物，如其中富集或选择某种类型的细胞如T细胞或CD8+或CD4+细胞。在这些组合物中有用于给予(如过继细胞疗法)的药物组合物和制剂。还提供了根据所提供的方法将该细胞和组合物给予受试者例如患者的治疗方法。

在一些实施方案中，该细胞包括经由基因工程引入的一种或多种核酸，从而表达此类核酸的重组或基因工程化产物。在一些实施方案中，通过首先刺激细胞来完成基因转移，如通过将细胞与诱导例如通过细胞因子或激活标志物的表达所测量的应答(如增殖、存活和/或激活)的刺激组合，随后转导激活的细胞，并在培养物中扩增至足以用于临床应用的数量。

细胞通常表达重组受体如抗原受体(包括功能性非TCR抗原受体，例如嵌合抗原受体(CAR))和其他抗原结合受体如转基因T细胞受体(TCR)。受体中还有其他嵌合受体。

A.嵌合抗原受体(CAR)

在所提供的方法和用途的一些实施方案中，嵌合受体如嵌合抗原受体含有一个或多个结构域，该一个或多个结构域将提供对于所需抗原(例如肿瘤抗原)的特异性的配体结合结构域(例如抗体或抗体片段)与细胞内信号传导结构域相结合。在一些实施方案中，细胞内信号传导结构域是激活细胞内结构域部分如T细胞激活结构域，从而提供主激活信号。在一些实施方案中，细胞内信号传导结构域含有或另外含有共刺激信号传导结构域以促进效应子功能。在一些实施方案中，当遗传工程化至免疫细胞中时，嵌合受体可调节T细胞活性，并且在一些情况下可调节T细胞分化或稳态，从而产生具有改善的寿命、存活和/或持久性的基因工程化细胞，如以用于过继细胞治疗方法。

示例性抗原受体(包括CAR)以及将这种受体工程化并引入细胞中的方法包括例如国际专利申请公开号WO 200014257、WO 2013126726、WO 2012/129514、WO 2014031687、WO2013/166321、WO 2013/071154、WO 2013/123061、美国专利申请公开号US 2002131960、US2013287748、US 20130149337、美国专利号：6,451,995、7,446,190、8,252,592、8,339,645、8,398,282、7,446,179、6,410,319、7,070,995、7,265,209、7,354,762、7,446,191、8,324,353和8,479,118以及欧洲专利申请号EP2537416中描述的那些抗原受体，和/或Sadelain等人,Cancer Discov.2013April；3(4):388–398；Davila等人(2013)PLoS ONE 8(4):e61338；Turtle等人,Curr.Opin.Immunol.,2012October；24(5):633-39；Wu等人,Cancer,2012March 18(2):160-75描述的那些抗原受体。在一些方面，抗原受体包括如美国专利号7,446,190中描述的CAR以及国际专利申请公开号WO/2014055668 A1中描述的那些抗原受体。CAR的例子包括任何上述出版物中公开的CAR，如WO 2014031687、US 8,339,645、US 7,446,179、US 2013/0149337、美国专利号：7,446,190、美国专利号：8,389,282、Kochenderfer等人,2013,Nature Reviews Clinical Oncology,10,267-276(2013)；Wang等人(2012)J.Immunother.35(9):689-701；以及Brentjens等人,Sci Transl Med.2013 5(177)。还参见WO 2014031687、US 8,339,645、US 7,446,179、US 2013/0149337、美国专利号：7,446,190和美国专利号：8,389,282。

嵌合受体如CAR通常包括细胞外抗原结合结构域如抗体分子的一部分，通常是抗体例如scFv抗体片段的可变重(VH)链区和/或可变轻(VL)链区。

在一些实施方案中，受体靶向的抗原是多肽。在一些实施方案中，它是碳水化合物或其他分子。在一些实施方案中，与正常或非靶向细胞或组织相比，抗原在疾病或病况的细胞例如肿瘤细胞或致病细胞上选择性表达或过表达。在其他实施方案中，抗原在正常细胞上表达和/或在工程化细胞上表达。

在一些实施方案中，受体靶向的抗原包括与B细胞恶性肿瘤相关的抗原，如许多已知B细胞标志物中的任何一种。在一些实施方案中，受体靶向的抗原是CD20、CD19、CD22、ROR1、CD45、CD21、CD5、CD33、Igκ、Igλ、CD79a、CD79b或CD30。

在一些实施方案中，scFv和/或VH结构域衍生自FMC63。FMC63通常是指针对表达人源CD19的Nalm-1和-16细胞产生的小鼠单克隆IgG1抗体(Ling,N.R.,等人(1987).Leucocyte typing III.302)。FMC63抗体包含SEQ ID NO:38、39分别所示的CDRH1和H2、SEQ ID NO:40或54所示的CDRH3和SEQ ID NO:35所示的CDRL1和CDR L2 36或55以及CDR L3序列37或56。FMC63抗体包含含有SEQ ID NO:41的氨基酸序列的重链可变区(V_H)和含有SEQID NO:42的氨基酸序列的轻链可变区(V_L)。在一些实施方案中，svFv包含含有CDRLl序列35、CDRL2序列36和CDRL3序列37的可变轻链和/或含有CDRH1序列38、CDRH2序列39和CDRH3序列40的可变重链。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:41所示的FMC63的可变重链区和42所述的FMC63的可变轻链区。在一些实施方案中，可变重链和可变轻链通过接头连接。在一些实施方案中，接头如SEQ ID NO:24所示。在一些实施方案中，scFv依次包含VH、接头和VL。在一些实施方案中，scFv依次包含VL、接头和VH。在一些实施方案中，svFc由SEQ IDNO:25所示的核苷酸序列或展现出与SEQ ID NO:25至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列一致性的序列进行编码。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列或展现出与SEQ ID NO:43至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列一致性的序列。

在一些实施方案中，scFv衍生自SJ25C1。SJ25C1是指针对表达人源CD19的Nalm-1和-16细胞产生的小鼠单克隆IgG1抗体(Ling,N.R.,等人(1987).Leucocyte typingIII.302)。SJ25C1抗体包含SEQ ID NO:47-49分别所示的CDRH1、H2和H3，以及SEQ ID NO:44-46分别所示的CDRL1、L2和L3序列。SJ25C1抗体包含含有SEQ ID NO:50的氨基酸序列的重链可变区(V_H)和含有SEQ ID NO:51的氨基酸序列的轻链可变区(V_L)。在一些实施方案中，svFv包含含有CDRLl序列44、CDRL2序列45和CDRL3序列46的可变轻链和/或含有CDRH1序列47、CDRH2序列48和CDRH3序列49的可变重链。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:50所示的SJ25C1的可变重链区和51该的SJ25C1的可变轻链区。在一些实施方案中，可变重链和可变轻链通过接头连接。在一些实施方案中，接头如SEQ ID NO:52所示。在一些实施方案中，scFv依次包含VH、接头和VL。在一些实施方案中，scFv依次包含VL、接头和VH。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列或展现出与SEQ ID NO:53至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列一致性的序列。

在一些实施方案中，嵌合抗原受体包括含有抗体或抗体片段的细胞外部分。在一些方面，嵌合抗原受体包括含有抗体或片段的细胞外部分和细胞内信号传导结构域。在一些实施方案中，抗体或片段包括scFv。

在一些实施方案中，重组受体例如CAR的抗体部分进一步包括免疫球蛋白恒定区(如铰链区，例如IgG4铰链区)和/或CH1/CL和/或Fc区的至少一部分。在一些实施方案中，恒定区或部分具有人IgG如IgG4或IgG1。在一些方面，恒定区的部分用作抗原识别组分(例如scFv)和跨膜结构域之间的间隔区。与不存在间隔区相比，间隔区可具有能提供抗原结合后增强的细胞响应性的长度。示例性间隔区包括但不限于Hudecek等人(2013)Clin.CancerRes.,19:3153、国际专利申请公开号WO 2014031687、美国专利号8,822,647或公开的申请号US 2014/0271635。

在一些实施方案中，恒定区或部分具有人IgG如IgG4或IgG1。在一些实施方案中，间隔区具有序列ESKYGPPCPPCP(如SEQ ID NO:1所示)，并且由SEQ ID NO:2所示的序列编码。在一些实施方案中，间隔区具有SEQ ID NO:3所示的序列。在一些实施方案中，间隔区具有SEQ ID NO:4所示的序列。在一些实施方案中，恒定区或部分具有IgD。在一些实施方案中，间隔区具有SEQ ID NO:5所示的序列。在一些实施方案中，间隔区具有展现出与SEQ IDNO:1、3、4或5中的任一个至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％,98％,99％或更多序列一致性的氨基酸序列。在一些实施方案中，间隔区具有SEQ ID NO:26-34所示的序列。在一些实施方案中，间隔区具有展现出与SEQ ID NO:26-34中任一个至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多序列一致性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，抗原受体包含直接或间接连接至细胞外结构域的细胞内结构域。在一些实施方案中，嵌合抗原受体包含连接细胞外结构域和细胞内信号传导结构域的跨膜结构域。在一些实施方案中，细胞内信号传导结构域包含ITAM。例如，在一些方面，抗原识别结构域(例如细胞外结构域)通常与一种或多种细胞内信号传导组分(如模拟在CAR的情况下通过抗原受体复合物(如TCR复合物)的激活和/或经由另一种细胞表面受体的信号的信号传导组分)连接。在一些实施方案中，嵌合受体包含在细胞外结构域(例如scFv)和细胞内信号传导结构域之间连接或融合的跨膜结构域。因此，在一些实施方案中，抗原结合组分(例如，抗体)与一个或多个跨膜和细胞内信号传导结构域连接。

在一个实施方案中，使用与受体例如CAR中的一个结构域天然相关的跨膜结构域。在一些情况下，通过氨基酸取代选择或修饰跨膜结构域以避免这种结构域与相同或不同表面膜蛋白的跨膜结构域的结合，以最小化与受体复合物的其他成员的相互作用。

在一些实施方案中，跨膜结构域衍生自天然或合成来源。在天然来源的情况下，在一些方面，结构域衍生自任何膜结合或跨膜蛋白。跨膜区包括衍生自T细胞受体、CD28、CD3ε、CD45、CD4、CD5、CDS、CD9、CD 16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD 134、CD137、CD154的的α、β或ζ链的那些跨膜区(即至少包含它们的一个或多个跨膜区)。可替代地，一些实施方案中的跨膜结构域是合成的。在一些方面，合成跨膜结构域主要包含疏水残基如亮氨酸和缬氨酸。在一些方面，将在合成跨膜结构域的每个末端发现苯丙氨酸、色氨酸和缬氨酸的三联体。在一些实施方案中，连接是通过接头、间隔区和/或一个或多个跨膜结构域。在一些方面，跨膜结构域含有CD28的跨膜部分。

在一些实施方案中，细胞外结构域和跨膜结构域可以直接或间接连接。在一些实施方案中，细胞外结构域和跨膜通过间隔区如本文所述该的任何间隔区连接。在一些实施方案中，受体含有衍生跨膜结构域的分子的细胞外部分，如CD28细胞外部分。

细胞内信号传导结构域是模拟或接近于通过天然抗原受体的信号、通过与共刺激受体结合的这种受体的信号和/或仅通过共刺激受体的信号的那些细胞内信号传导结构域。在一些实施方案中，存在短的寡肽或多肽接头例如长度为2至10个氨基酸的接头(如含有甘氨酸和丝氨酸的接头，例如甘氨酸-丝氨酸双联体)，并在CAR的跨膜结构域和细胞质信号传导结构域之间形成连接。

在一些方面，T细胞激活被描述为由两类细胞质信号传导序列介导：通过TCR启动抗原依赖性主激活的那些细胞质信号传导序列(主细胞质信号传导序列)，以及以抗原非依赖性方式起作用以提供副信号或共刺激信号的那些细胞质信号传导序列(副细胞质信号传导序列)。在一些方面，CAR包括这种信号传导组分中的一种或两种。

受体例如CAR通常包括至少一种细胞内信号传导组分或多种细胞内信号传导组分。在一些方面，CAR包括调节TCR复合物的主激活的主细胞质信号传导序列。以刺激方式起作用的主细胞质信号传导序列可含有信号传导基序，其被称为基于免疫受体酪氨酸的激活基序或ITAM。含有主细胞质信号传导序列的ITAM的例子包括衍生自CD3ζ链、FcRγ、CD3γ、CD3δ和CD3ε的那些主细胞质信号传导序列。在一些实施方案中，CAR中的一种或多种细胞质信号传导分子含有细胞质信号传导结构域、其部分或衍生自CD3ζ的序列。

在一些实施方案中，受体包括TCR复合物的细胞内组分，如介导T细胞激活和细胞毒性的TCR CD3链例如CD3ζ链。因此，在一些方面，抗原结合部分与一个或多个细胞信号传导模块连接。在一些实施方案中，细胞信号传导模块包括CD3跨膜结构域、CD3细胞内信号传导结构域和/或其他CD跨膜结构域。在一些实施方案中，受体例如CAR进一步包括一种或多种附加分子(如Fc受体γ、CD8、CD4、CD25或CD16)的一部分。例如，在一些方面，CAR或其他嵌合受体包括CD3-ζ(CD3-ζ)或Fc受体γ与CD8、CD4、CD25或CD16之间的嵌合分子。

在一些实施方案中，在连接CAR或其他嵌合受体后，受体的细胞质结构域或细胞内信号传导结构域激活免疫细胞(例如工程化以表达该CAR的T细胞)的正常效应子功能或应答中的至少一种。例如，在一些情况下，CAR诱导T细胞的功能，如细胞毒活性或T辅助活性如细胞因子或其他因子的分泌。在一些实施方案中，使用抗原受体组分或共刺激分子的细胞内信号传导结构域的截短部分代替完整的免疫刺激链，例如条件是该截短部分转导效应子功能信号。在一些实施方案中，细胞内信号传导结构域或多个结构域包括T细胞受体(TCR)的细胞质序列，并且在一些方面还包括共受体的那些细胞质序列，该共受体在自然环境中与这种受体协同作用以启动抗原参与后的信号转导。

在天然TCR的情况下，完全激活通常不仅需要通过TCR发信号，还需要共刺激信号。因此，在一些实施方案中，为了促进完全激活，用于生成继发或共刺激信号的组分也包含在CAR中。在其他实施方案中，CAR不包含用于生成共刺激信号的组分。在一些方面，附加CAR在同一细胞中表达，并提供用于生成副信号或共刺激信号的组分。

在一些实施方案中，嵌合抗原受体含有T细胞共刺激分子的细胞内结构域。在一些实施方案中，CAR包括共刺激受体如CD28、4-1BB、OX40、DAP10和ICOS的信号传导结构域和/或跨膜部分。在一些方面，相同的CAR包括激活和共刺激组分。在一些实施方案中，嵌合抗原受体含有衍生自T细胞共刺激分子的细胞内结构域或其功能变体，如在跨膜结构域和细胞内信号传导结构域之间。在一些方面，T细胞共刺激分子是CD28或41BB。

在一些实施方案中，激活结构域包含在一个CAR内，而共刺激组分由识别另一种抗原的另一种CAR提供。在一些实施方案中，CAR包括激活或刺激CAR、共刺激CAR，它们均在相同细胞上表达(参见WO2014/055668)。在一些方面，细胞包含一种或多种刺激或激活CAR和/或共刺激CAR。在一些实施方案中，细胞进一步包含抑制性CAR(iCAR，参见Fedorov等人,Sci.Transl.Medicine,5(215)(2013年12月))，如识别除了与疾病或病况相关和/或对疾病或病况具有特异性的抗原以外的抗原的CAR，其中由疾病靶向CAR递送的激活信号通过抑制性CAR结合至其配体而减弱或抑制，例如以减少脱靶效应。

在某些实施方案中，细胞内信号传导结构域包含与CD3(例如CD3-ζ)细胞内结构域连接的CD28跨膜和信号传导结构域。在一些实施方案中，细胞内信号传导结构域包含与CD3ζ细胞内结构域连接的嵌合CD28和CD137(4-1BB、TNFRSF9)共刺激结构域。

在一些实施方案中，CAR在细胞质部分中包含一个或多个，例如两个或更多个共刺激结构域和激活结构域，例如主激活结构域。示例性CAR包含CD3-ζ、CD28和4-1BB的细胞内组分。

在一些实施方案中，抗原受体进一步包括标志物和/或表达该CAR或其他抗原受体的细胞进一步包含替代标志物如细胞表面标志物，其可用于确认细胞的转导或工程化以表达受体。在一些方面，标志物包括CD34、NGFR或表皮生长因子受体的全部或部分(例如截短形式)，如这种细胞表面受体的截短形式(例如tEGFR)。在一些实施方案中，编码标志物的核酸与编码接头序列如可切割的接头序列(例如T2A、P2A、E2A或F2A，例如SEQ ID NO:6或19-23中任一项所示)的多核苷酸可操作地连接。例如，标志物和任选接头序列可以是公开的专利申请号WO 2014031687中公开的任何一种。例如，标志物可以是截短的EGFR(tEGFR)，其任选地与接头序列如T2A可切割的接头序列连接。

截短的EGFR(例如tEGFR)的示例性多肽包含SEQ ID NO:7或16所示的氨基酸序列或展现出与SEQ ID NO:7或16至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列一致性的氨基酸序列。示例性T2A接头序列包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列或展现出与SEQ ID NO:6至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列一致性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，该标志物是分子例如细胞表面蛋白，其非天然存在于T细胞上或非天然存在于T细胞表面或其部分上。在一些实施方案中，该分子是非自身分子例如非自身蛋白质，即未被该细胞所过继转移的宿主的免疫系统识别为“自身”的分子。

在一些实施方案中，除了用作基因工程的标志物(例如，用于选择成功工程化的细胞)以外，标志物不起任何治疗功能和/或不起作用。在其他实施方案中，该标志物可以是治疗性分子或以其他方式发挥一些所需作用的分子如在体内遇到的细胞配体，如共刺激或免疫检查点分子以增强和/或抑制在过继转移和遇到配体时细胞的应答。

在一些情况下，CAR被称为第一代、第二代和/或第三代CAR。在一些方面，第一代CAR是在抗原结合时仅提供CD3链诱导的信号的CAR；在一些方面，第二代CAR是提供这种信号和共刺激信号的CAR，如包括来自共刺激受体如CD28或CD137的细胞内信号传导结构域的信号；在一些方面，第三代CAR是包括不同共刺激受体的多个共刺激结构域的CAR。

例如，在一些实施方案中，CAR含有抗体例如抗体片段、跨膜结构域(其是CD28的跨膜部分或其功能变体或含有CD28跨膜部分或其功能变体的)以及含有CD28的信号传导部分或其功能变体和CD3ζ的信号传导部分或其功能变体的细胞内信号传导结构域。在一些实施方案中，CAR含有抗体例如抗体片段，跨膜结构域(其是CD28的跨膜部分或其功能变体或含有CD28的跨膜部分或其功能变体)以及含有4-1BB的信号传导部分或其功能变体和CD3ζ的信号传导部分或其功能变体的细胞内信号传导结构域。在一些此类实施方案中，受体进一步包括含有Ig分子(如人Ig分子，如Ig铰链，例如IgG4铰链)的一部分的间隔区如仅含铰链的间隔区。

在一些实施方案中，重组受体例如CAR的跨膜结构域是人CD28(例如登录号P01747.1)的跨膜结构域或其变体或包括人CD28的跨膜结构域或其变体，如包含SEQ IDNO:8所示的氨基酸序列或展现出与SEQ ID NO:8至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列一致性的氨基酸序列的跨膜结构域；在一些实施方案中，重组受体的含有跨膜结构域的部分包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列或与其具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高或者约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列一致性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，重组受体例如CAR的一个或多个细胞内信号传导组分含有人CD28的细胞内共刺激信号传导结构域或其功能变体或部分，如在天然CD28蛋白的位置186-187具有LL至GG取代的结构域。例如，细胞内信号传导结构域可包含SEQ ID NO:10或11所示的氨基酸序列或展现出与SEQ ID NO:10或11至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列一致性的氨基酸序列。在一些实施方案中，细胞内结构域包含4-1BB(例如登录号Q07011.1)的细胞内共刺激信号传导结构域或其功能变体或部分，如SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列或展现出与SEQ ID NO:12至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列一致性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，重组受体例如CAR的细胞内信号传导结构域包含人CD3ζ刺激信号传导结构域或其功能变体，如人CD3ζ(登录号：P20963.2)的同种型3的112AA细胞质结构域或如美国专利号7,446,190或美国专利号8,911,993所述的CD3ζ信号传导结构域。例如，在一些实施方案中，细胞内信号传导结构域包含SEQ ID NO:13、14或15所示的氨基酸序列或展现出与SEQ ID NO:13、14或15至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列一致性的氨基酸序列。

在一些方面，间隔区仅含有IgG的铰链区如仅含有IgG4或IgG1的铰链，如SEQ IDNO:1所示的仅含铰链的间隔区。在其他实施方案中，间隔区是Ig铰链或含有Ig铰链例如IgG4衍生的铰链，其任选与CH2和/或CH3结构域连接。在一些实施方案中，间隔区是Ig铰链例如IgG4铰链，其与如SEQ ID NO:4所示的CH2和CH3结构域连接。在一些实施方案中，间隔区是Ig铰链例如IgG4铰链，其仅与如SEQ ID NO:3所示的CH3结构域连接。在一些实施方案中，间隔区是或包含富含甘氨酸-丝氨酸的序列或其他柔性接头如已知的柔性接头。

例如，在一些实施方案中，CAR包括抗体(如抗体片段，包括scFv)、间隔区(如含有免疫球蛋白分子的一部分的间隔区，如铰链区和/或重链分子的一个或多个恒定区，如含有Ig铰链的间隔区)、含有CD28衍生的跨膜结构域、CD28衍生的细胞内信号传导结构域和CD3ζ信号传导结构域中的全部或部分的跨膜结构域。在一些实施方案中，CAR包括抗体或片段(例如scFv)、间隔区(如任何含Ig铰链的间隔区)、CD28衍生的跨膜结构域、4-1BB衍生的细胞内信号传导结构域和CD3ζ衍生的信号传导结构域。

在一些实施方案中，编码此类CAR构建体的核酸分子进一步包括编码T2A核糖体跳跃元件的序列和/或tEGFR序列例如在编码CAR的序列的下游。在一些实施方案中，该序列编码SEQ ID NO:6所示的T2A核糖体跳跃元件或展现出与SEQ ID NO:6至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列一致性的氨基酸序列。在一些实施方案中，还可以生成表达抗原受体(例如CAR)的T细胞以将截短的EGFR(EGFRt)表达为非免疫原性选择表位(例如通过引入编码被T2A核糖体开关分隔开的CAR和EGFRt的构建体，以表达来自相同构建体的两种蛋白质)，然后该非免疫原性选择表位可用作检测此类细胞的标志物(参见例如美国专利号8,802,374)。在一些实施方案中，该序列编码SEQ ID NO:7或16所示的tEGFR序列或展现出与SEQ ID NO:7或16至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列一致性的氨基酸序列。

由给予受试者的细胞表达的重组受体例如CAR通常识别或特异性地结合至分子，该分子在被治疗的疾病或病况或其细胞中表达、与被治疗的疾病或病况或其细胞相关和/或特异于被治疗的疾病或病况或其细胞。在与分子例如抗原特异性结合后，受体通常将免疫刺激信号(如ITAM转导的信号)递送到细胞中，从而促进靶向疾病或病况的免疫应答。例如，在一些实施方案中细胞表达该CAR，其特异性地结合至由疾病或病况的细胞或组织表达的或与疾病或病况相关的抗原。

B.TCR

在一些实施方案中，基因工程化的抗原受体包括从天然存在的T细胞克隆的重组T细胞受体(TCR)和/或TCR。在一些实施方案中，鉴定针对靶抗原(例如癌抗原)的高亲和力T细胞克隆，从患者分离并引入细胞中。在一些实施方案中，已经在用人免疫系统基因(例如人白细胞抗原系统或HLA)工程化的转基因小鼠中生成了针对靶抗原的TCR克隆。参见例如肿瘤抗原(参见例如Parkhurst等人(2009)Clin Cancer Res.15:169–180和Cohen等人(2005)J Immunol.175:5799–5808)。在一些实施方案中，噬菌体展示用于针对靶抗原分离TCR(参见例如Varela-Rohena等人(2008)Nat Med.14:1390–1395和Li(2005)NatBiotechnol.23:349–354)。

在一些实施方案中，在获得T细胞克隆后，分离TCRα和β链并克隆到基因表达载体中。在一些实施方案中，TCRα和β基因经由小核糖核酸病毒2A核糖体跳跃肽连接，使得两条链共表达。在一些实施方案中，TCR的遗传转移经由逆转录病毒或慢病毒载体或经由转座子完成(参见例如Baum等人(2006)Molecular Therapy:The Journal of the AmericanSociety of Gene Therapy.13:1050–1063；Frecha等人(2010)Molecular Therapy:TheJournal of the American Society of Gene Therapy.18:1748–1757；和Hackett等人(2010)Molecular Therapy:The Journal of the American Society of GeneTherapy.18:674–683)。

III.基因工程化细胞和产生细胞的方法

在一些实施方案中，所提供的方法包括向患有疾病或病况的受试者给予表达重组抗原受体的细胞。用于引入基因工程化组分例如重组受体(例如CAR或TCR)的各种方法是公知的，并且可以与所提供的方法和组合物一起使用。示例性方法包括用于转移编码受体的核酸的那些方法，包括经由病毒(例如逆转录病毒或慢病毒)、转导、转座子和电穿孔。

表达受体的细胞和通过所提供的方法给予的细胞是工程化细胞。基因工程通常包括将编码重组或工程化组分的核酸引入含有细胞的组合物中，如通过逆转录病毒转导、转染或转化。

A.用于基因工程的载体和方法

在一些实施方案中，使用重组感染性病毒颗粒(例如衍生自猿猴病毒40(SV40)、腺病毒、腺相关病毒(AAV)的载体)将重组核酸转移到细胞中。在一些实施方案中，使用重组慢病毒载体或逆转录病毒载体如γ逆转录病毒载体，将重组核酸转移到T细胞中(参见例如Koste等人(2014)Gene Therapy 2014 Apr 3.doi:10.1038/gt.2014.25；Carlens等人(2000)Exp Hematol 28(10):1137-46；Alonso-Camino等人(2013)Mol Ther Nucl Acids2,e93；Park等人,Trends Biotechnol.2011 November 29(11):550–557)。

在一些实施方案中，逆转录病毒载体具有长末端重复序列(LTR)，例如衍生自莫洛尼鼠白血病病毒(MoMLV)、骨髓增生性肉瘤病毒(MPSV)、鼠胚胎干细胞病毒(MESV)、鼠干细胞病毒(MSCV)、脾病灶形成病毒(SFFV)或腺相关病毒(AAV)的病毒载体。大多数逆转录病毒载体衍生自鼠逆转录病毒。在一些实施方案中，逆转录病毒包括衍生自任何禽类或哺乳动物细胞来源的那些逆转录病毒。逆转录病毒通常是双嗜性的，这意味着它们能够感染包括人在内的几种物种的宿主细胞。在一个实施方案中，待表达的基因替代逆转录病毒gag、pol和/或env序列。已经描述了许多示例性逆转录病毒系统(例如，美国专利号5,219,740；6,207,453；5,219,740；Miller和Rosman(1989)BioTechniques 7:980-990；Miller,A.D.(1990)Human Gene Therapy 1:5-14；Scarpa等人(1991)Virology 180:849-852；Burns等人(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:8033-8037；以及Boris-Lawrie和Temin(1993)Cur.Opin.Genet.Develop.3:102-109)。

慢病毒转导的方法是已知的。示例性方法描述于例如Wang等人(2012)J.Immunother.35(9):689-701；Cooper等人(2003)Blood.101:1637–1644；Verhoeyen等人(2009)Methods Mol Biol.506:97-114；和Cavalieri等人(2003)Blood.102(2):497-505中。

在一些实施方案中，经由电穿孔将重组核酸转移到T细胞中(参见例如Chicaybam等人,(2013)PLoS ONE 8(3):e60298和Van Tedeloo等人(2000)Gene Therapy 7(16):1431-1437)。在一些实施方案中，经由转座将重组核酸转移到T细胞中(参见例如Manuri等人(2010)Hum Gene Ther 21(4):427-437；Sharma等人(2013)Molec Ther Nucl Acids 2,e74；和Huang等人(2009)Methods Mol Biol 506:115-126)。在免疫细胞中引入和表达遗传物质的其他方法包括磷酸钙转染(例如，如Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley&Sons,New York.N.Y.中所述)、原生质体融合、阳离子脂质体介导的转染；钨颗粒促进的微粒轰击(Johnston,Nature,346:776-777(1990))；和磷酸锶DNA共沉淀(Brash等人,Mol.Cell Biol.,7:2031-2034(1987))。

用于转移编码重组产物的核酸的其他方法和载体是例如国际专利申请公开号：WO2014055668和美国专利号7,446,190中描述的那些方法和载体。

在一些实施方案中，细胞例如T细胞可在扩增期间或之后例如用T细胞受体(TCR)或嵌合抗原受体(CAR)进行转染。例如，这种用于引入所需受体的基因的转染可以用任何合适的逆转录病毒载体进行。然后可以使基因修饰的细胞群摆脱初始刺激物(例如CD3/CD28刺激物)，并随后用第二种类型的刺激物例如经由从头引入的受体进行刺激。该第二种类型的刺激物可包括肽/MHC分子形式的抗原刺激物、遗传引入的受体的同源(交联)配体(例如CAR的天然配体)或在新受体的框架内直接结合(例如通过识别受体内的恒定区)的任何配体(如抗体)。参见例如Cheadle等人,“Chimeric antigen receptors for T-cell basedtherapy”Methods Mol Biol.2012；907:645-66或Barrett等人,Chimeric AntigenReceptor Therapy for Cancer Annual Review of Medicine Vol.65:333-347(2014)。

在一些情况下，可以使用不需要激活细胞(例如T细胞)的载体。在一些这样的情况下，可以在激活之前选择和/或转导细胞。因此，可以在培养细胞之前或之后将细胞工程化，并且在一些情况下在培养的同一时间或至少一部分期间将细胞工程化。

用于引入的附加核酸例如基因是用于如通过促进转移细胞的活力和/或功能来改善治疗功效的那些基因；用于提供针对细胞选择和/或评估(如评估体内存活或定位)的遗传标志物的基因；用于改善安全性的基因，例如如由Lupton S.D.等人,Mol.and CellBiol.,11:6(1991)；和Riddell等人,Human Gene Therapy 3:319-338(1992)所述通过使细胞易于在体内进行阴性选择；还参见Lupton等人的出版物PCT/US91/08442和PCT/US94/05601，其描述了使用来源于将显性阳性可选择标志物与阴性可选择标志物融合的双功能可选择融合基因的用途。参见例如Riddell等人的美国专利号6,040,177中的第14-17列。

B.用于基因工程的细胞和细胞的制备

在一些实施方案中，核酸是异源的，即通常不存在于细胞或从细胞获得的样品中，如从另一种生物或细胞获得的核酸，例如，该核酸通常不在被工程化的细胞和/或这种细胞所来源的生物中发现。在一些实施方案中，核酸不是天然存在的如自然界中未发现的核酸，包括包含编码来自多种不同细胞类型的各种结构域的核酸的嵌合组合的核酸。

细胞通常是真核细胞如哺乳动物细胞，并且通常是人细胞。在一些实施方案中，细胞衍生自血液、骨髓、淋巴或淋巴器官，它是免疫系统的细胞如先天或适应性免疫的细胞例如骨髓或淋巴细胞(包括淋巴细胞，通常为T细胞和/或NK细胞)。其他示例性细胞包括干细胞如多能和多潜能干细胞，包括诱导的多潜能干细胞(iPSC)。细胞通常是原代细胞如直接从受试者分离和/或从受试者分离并冷冻的那些原代细胞。在一些实施方案中，细胞包括T细胞或其他细胞类型的一个或多个亚组，如整个T细胞群、CD4+细胞、CD8+细胞及其亚群，如由以下各项所定义的那些亚群：功能、激活状态、成熟度、分化的可能性、扩增、再循环、定位和/或持久能力、抗原特异性、抗原受体类型、在特定器官或区室中的存在、标志物或细胞因子分泌特征和/或分化程度。关于待治疗的受试者，该细胞可以是同种异体的和/或自体同源的。这些方法包括现有方法。在一些方面，如对于现有技术，该细胞是多能和/或多潜能的如干细胞，如诱导的多潜能干细胞(iPSC)。在一些实施方案中，该方法包括从受试者分离细胞、制备、加工、培养和/或将它们工程化，并在冷冻保存之前或之后将它们重新引入同一受试者中。

在T细胞和/或CD4+和/或CD8+T细胞的亚型和亚群中，有幼稚T(T_N)细胞、效应T细胞(T_EFF)、记忆T细胞及其亚型(如干细胞记忆T(T_SCM)、中枢记忆T(T_CM)，效应记忆T(T_EM)或终末分化效应记忆T细胞)、肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)、未成熟T细胞、成熟T细胞、辅助T细胞、细胞毒性T细胞、粘膜相关不变T(MAIT)细胞、天然存在和适应性调节T(Treg)细胞、辅助T细胞(如TH1细胞、TH2细胞、TH3细胞、TH17细胞、TH9细胞、TH22细胞、滤泡辅助细胞T细胞)、α/βT细胞和δ/γT细胞。

在一些实施方案中，该细胞是天然杀伤(NK)细胞。在一些实施方案中，该细胞是单核细胞或粒细胞，例如骨髓细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、树突细胞、肥大细胞、嗜酸性粒细胞和/或嗜碱性粒细胞。

在一些实施方案中，该细胞包括经由基因工程引入的一种或多种核酸，从而表达此类核酸的重组或基因工程化产物。在一些实施方案中，核酸是异源的，即通常不存在于细胞或从细胞获得的样品中，如从另一种生物或细胞获得的核酸，例如，该核酸通常不在被工程化的细胞和/或这种细胞所来源的生物中发现。在一些实施方案中，核酸不是天然存在的如自然界中未发现的核酸，包括包含编码来自多种不同细胞类型的各种结构域的核酸的嵌合组合的核酸。

在一些实施方案中，工程化细胞的制备包括一个或多个培养和/或制备步骤。用于引入编码转基因受体如CAR的核酸的细胞可以从样品(如生物样品，例如从受试者获得或来源于受试者的生物样品)分离。在一些实施方案中，从中分离细胞的受试者是患有疾病或病况或需要细胞疗法或将给予细胞疗法的受试者。在一些实施方案中，受试者是需要特定治疗性干预(如过继细胞疗法，其中细胞被分离、加工和/或工程化)的人。

因此，在一些实施方案中，该细胞是原代细胞例如原代人细胞。样品包括直接从受试者采集的组织、流体和其他样品以及从一个或多个加工步骤如分离、离心、基因工程化(例如用病毒载体转导)、洗涤和/或孵育得到的样品。生物样品可以是直接从生物来源获得的样品或经过加工的样品。生物样品包括但不限于体液(如血液、血浆、血清、脑脊液、滑液、尿液和汗液)、组织和器官样品，包括由其衍生的加工样品。

在一些方面，由其衍生或分离细胞的样品是血液或血液衍生的样品，或来自或衍生自单采术或白细胞去除术产物。示例性样品包括全血、外周血单核细胞(PBMC)、白细胞、骨髓、胸腺、组织活检、肿瘤、白血病、淋巴瘤、淋巴结、肠相关淋巴组织、粘膜相关淋巴组织、脾、其他淋巴组织、肝、肺、胃、肠、结肠、肾、胰腺、乳房、骨、前列腺、子宫颈、睾丸、卵巢、扁桃体或其他器官和/或由其衍生的细胞。在细胞疗法例如过继细胞疗法的背景下，样品包括来自自体同源和同种异体来源的样品。

在一些实施方案中，细胞衍生自细胞系例如T细胞系。在一些实施方案中，细胞从异种来源例如从小鼠、大鼠、非人灵长类动物和猪获得。

在一些实施方案中，细胞的分离包括一种或多种基于制备和/或非亲和力的细胞分离步骤。在一些例子中，细胞在一种或多种试剂的存在下洗涤、离心和/或孵育，例如以去除不需要的组分，富集所需组分，裂解或去除对特定试剂敏感的细胞。在一些例子中，基于一种或多种性质如密度、粘附性质、尺寸、对特定组分的敏感性和/或抗性分离细胞。

在一些例子中，例如通过单采术或白细胞去除术获得来自受试者的循环血液的细胞。在一些方面，样品含有淋巴细胞(包括T细胞、单核细胞、粒细胞、B细胞、其他有核白细胞、红细胞和/或血小板)，并且在一些方面含有除红细胞和血小板以外的细胞。

在一些实施方案中，洗涤从受试者收集的血细胞，例如以去除血浆级分并将细胞置于合适的缓冲液或培养基中用于后续加工步骤。在一些实施方案中，用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤细胞。在一些实施方案中，洗涤溶液缺乏钙和/或镁和/或许多或所有二价阳离子。在一些方面，根据制造商的说明书通过半自动“流通”离心机(例如，Cobe 2991细胞处理器，Baxter)完成洗涤步骤。在一些方面，根据制造商的说明书通过切向流过滤(TFF)完成洗涤步骤。在一些实施方案中，在洗涤后将细胞重悬于各种生物相容性缓冲液中，例如不含Ca⁺⁺/Mg⁺⁺的PBS。在某些实施方案中，去除血细胞样品的组分并将细胞直接重悬于培养基中。

在一些实施方案中，该方法包括基于密度的细胞分离方法如通过裂解红细胞由外周血制备白细胞并通过Percoll或Ficoll梯度离心。

在一些实施方案中，分离方法包括基于细胞中一种或多种特异性分子(如表面标志物例如表面蛋白，细胞内标志物或核酸)的表达或存在来分离不同细胞类型。在一些实施方案中，可以使用任何已知的基于此类标志物的分离方法。在一些实施方案中，分离是基于亲和力或免疫亲和力的分离。例如，在一些方面，分离包括基于细胞中一种或多种标志物(通常是细胞表面标志物)的表达或表达水平来分离细胞和细胞群，例如通过与特异性地结合至此类标志物的抗体或结合配偶体一起孵育，随后通常是洗涤步骤和已结合至抗体或结合配偶体的细胞与那些未结合至抗体或结合配偶体的细胞的分离。

这种分离步骤可以基于阳性选择，其中保留了结合试剂的细胞以供进一步使用和/或阴性选择，其中保留了未结合至抗体或结合配偶体的细胞。在一些例子中，保留两种级分以供进一步使用。在一些方面，当没有可用于特异性地鉴定异质群体中的细胞类型的抗体时，阴性选择可能特别有用，使得基于由除所需群体以外的细胞表达的标志物进行最佳分离。

分离不需要导致100％富集或去除表达特定标志物的特定细胞群或细胞。例如，特定类型的细胞如表达标志物的细胞的阳性选择或富集是指增加此类细胞的数量或百分比，但不需要导致不表达该标志物的细胞的完全不存在。同样，特定类型的细胞如表达标志物的细胞的阴性选择、去除或消耗是指减少此类细胞的数量或百分比，但不需要导致所有此类细胞的完全去除。

在一些例子中，进行多轮分离步骤，其中来自一个步骤的阳性或阴性选择的级分经历另一个分离步骤，如随后的阳性或阴性选择。在一些例子中，单个分离步骤可以如通过将细胞与多种抗体或结合配偶体一起孵育而同时消耗表达多种标志物的细胞，每种抗体或结合配偶体对于针对阴性选择靶向的标志物是特异性的。同样地，通过将细胞与在各种细胞类型上表达的多种抗体或结合配偶体一起孵育，多种细胞类型可以同时进行阳性选择。

例如，在一些方面，T细胞的特定亚群例如对于表达高水平的一种或多种表面标志物呈阳性的细胞(例如CD28⁺、CD62L⁺、CCR7⁺、CD27⁺、CD127⁺、CD4⁺、CD8⁺、CD45RA⁺和/或CD45RO⁺T细胞)通过阳性或阴性选择技术进行分离。

例如，CD3⁺、CD28⁺T细胞可以使用CD3/CD28缀合的磁珠(例如，M-450CD3/CD28T细胞扩增器)进行阳性选择。

在一些实施方案中，通过经由阳性选择富集特定细胞群，或经由隐形选择消耗特定细胞群来进行分离。在一些实施方案中，通过将细胞与一种或多种抗体或其他结合剂一起孵育来实现阳性或阴性选择，该一种或多种抗体或其他结合剂特异性地结合至分别在阳性或阴性选择的细胞上表达或以相对高水平(标志物^高)表达的一种或多种表面标志物(标记物⁺)，其在阳性或阴性上以相对较高水平(^标记物高)表达。

在一些实施方案中，通过在非T细胞(如B细胞、单核细胞或其他白细胞)上表达的标志物例如CD14的阴性选择，将从PBMC样品分离T细胞。在一些方面，CD4⁺或CD8⁺选择步骤用于分离CD4⁺辅助和CD8⁺细胞毒性T细胞。通过对一种或多种初试、记忆和/或效应T细胞亚群上表达或表达相对较高程度的标志物的阳性或阴性选择，可以将这样的CD4⁺和CD8⁺群体进一步分类成亚群。

在一些实施方案中，CD8⁺细胞进一步富集或消耗初试、中枢记忆、效应记忆和/或中枢记忆干细胞，如通过基于与相应亚群相关的表面抗原的阳性或阴性选择。在一些实施方案中，进行中枢记忆T(T_CM)细胞的富集以增加功效，如改善给药后的长期存活率、扩增和/或植入，这在一些方面在这样的亚群中特别稳健。参见Terakura等人(2012)Blood.1:72–82；Wang等人(2012)J Immunother.35(9):689-701。在一些实施方案中，将富含T_CM的CD8⁺T细胞和CD4⁺T细胞组合进一步增强了功效。

在实施方案中，记忆T细胞存在于CD8⁺外周血淋巴细胞的CD62L⁺和CD62L^-亚组中。PBMC可以富集或消耗CD62L^-CD8⁺和/或CD62L⁺CD8⁺级分，如使用抗CD8和抗CD62L抗体。

在一些实施方案中，中枢记忆T(T_CM)细胞的富集基于CD45RO、CD62L、CCR7、CD28、CD3和/或CD 127的阳性或高表面表达；在一些方面，它基于对表达或高度表达CD45RA和/或颗粒酶B的细胞的阴性选择。在一些方面，通过表达CD4、CD14、CD45RA的细胞的消耗和表达CD62L的细胞的阳性选择或富集来进行富含T_CM细胞的CD8⁺群体的分离。在一个方面，中心记忆T(T_CM)细胞的富集从基于CD4表达所选择的阴性细胞级分开始进行，该阴性细胞级分基于CD14和CD45RA的表达进行阴性选择且基于CD62L进行阳性选择。在一些方面这种选择是同时进行的，而在其他方面以任何顺序依次进行。在一些方面，用于制备CD8⁺细胞群或亚群的相同的基于CD4表达的选择步骤也用于生成CD4⁺细胞群或亚群，使得来自基于CD4的分离的阳性和阴性级分被保留并用于该方法的后续步骤中，任选地在一个或多个其他阳性或阴性选择步骤之后。

在特定例子中，PBMC样品或其他白细胞样品进行CD4⁺细胞的选择，其中保留了阴性和阳性级分。然后该阴性级分基于CD14和CD45RA或CD19的表达进行阴性选择，并基于中枢记忆T细胞(如CD62L或CCR7)的标志物特征进行阳性选择，其中以任何顺序进行该阳性和阴性选择。

通过鉴定具有细胞表面抗原的细胞群，将CD4⁺T辅助细胞分类为幼稚、中枢记忆和效应细胞。CD4⁺淋巴细胞可通过标准方法获得。在一些实施方案中，初试CD4⁺T淋巴细胞是CD45RO^-、CD45RA⁺、CD62L⁺、CD4⁺T细胞。在一些实施方案中，中枢记忆CD4⁺细胞是CD62L⁺和CD45RO⁺。在一些实施方案中，效应CD4⁺细胞是CD62L^-和CD45RO^-。

在一个例子中，为了通过阴性选择富集CD4⁺细胞，单克隆抗体混合物通常包括抗CD14、CD20、CD11b、CD16、HLA-DR和CD8的抗体。在一些实施方案中，抗体或结合配偶体结合至固体支持物或基质(如磁珠或顺磁珠)，以允许细胞分离用于阳性和/或阴性选择。例如，在一些实施方案中，使用免疫磁性(或亲和磁性)分离技术分离或隔离细胞和细胞群(在Methods in Molecular Medicine,vol.58:Metastasis Research Protocols,Vol.2:CellBehavior In Vitro and In Vivo,p 17-25Edited by:S.A.Brooks and U.Humana Press Inc.,Totowa,NJ中综述)。

在一些方面，待分离的细胞的样品或组合物与小的可磁化或磁响应材料一起孵育，如磁响应颗粒或微粒如顺磁珠(例如Dynalbead或MACS珠)。磁响应材料例如颗粒通常直接或间接地附着于结合配偶体例如抗体，其特异性地结合至存在于希望分离例如希望进行阴性或阳性选择的细胞、多个细胞或细胞群上的分子例如表面标志物。

在一些实施方案中，磁性颗粒或珠粒包含结合至特异性结合成员如抗体或其他结合配偶体的磁响应材料。存在许多用于磁分离方法的公知的磁响应材料。合适的磁性颗粒包括在通过引用并入于此的Molday美国专利号4,452,773和欧洲专利说明书EP 452342 B中描述的那些磁性颗粒。胶体大小的颗粒如在Owen美国专利号4,795,698和Liberti等人美国专利号5,200,084中描述的那些颗粒是其他例子。

该孵育通常在如下条件下进行，其中该抗体或结合配偶体，或者分子，诸如特异性地结合至这种抗体或结合配偶体的二级抗体或其他试剂(其附着于磁性颗粒或珠粒)，特异性地结合至细胞表面分子(如果存在于样品内的细胞上的话)。

在一些方面，将样品置于磁场中，并且具有附着其上的磁响应或可磁化颗粒的那些细胞将被吸引至磁铁并与未标记的细胞分离。对于阳性选择，保留了被磁铁吸引的细胞；对于阴性选择，保留了未被吸引的细胞(未标记的细胞)。在一些方面，在相同的选择步骤期间进行阳性和阴性选择的组合，其中保留阳性和阴性级分并进一步加工或进行进一步的分离步骤。

在某些实施方案中，磁响应颗粒被涂覆一级抗体或其他结合配偶体、二级抗体、凝集素、酶或链霉亲和素。在某些实施方案中，磁性颗粒经由对于一种或多种标志物具有特异性的一级抗体的涂覆而附着于细胞。在某些实施方案中，用一级抗体或结合配偶体标记细胞而不是珠粒，然后加入细胞类型特异性二级抗体或其他结合配偶体(例如链霉亲和素)涂覆的磁性颗粒。在某些实施方案中，链霉亲和素涂覆的磁性颗粒连同生物素化的一级或二级抗体一起使用。

在一些实施方案中，将磁响应颗粒从左侧附着于细胞，随后将其孵育、培养和/或工程化；在一些方面，将颗粒从左侧附着于细胞以给予患者。在一些实施方案中，从细胞去除可磁化或磁响应颗粒。从细胞中去除可磁化颗粒的方法是已知的，并且包括例如使用竞争的非标记抗体和与可切割接头缀合的可磁化颗粒或抗体。在一些实施方案中，可磁化颗粒是可生物降解的。

在一些实施方案中，基于亲和力的选择是经由磁激活的细胞分选(MACS)(Miltenyi Biotech，Auburn，CA)进行的。磁激活的细胞分选(MACS)系统能够高纯度选择附着有磁化颗粒的细胞。在某些实施方案中，MACS以如下模式操作，其中在施加外部磁场之后依次洗脱非靶物质和靶物质。也就是说，附着于磁化颗粒的细胞被保持在适当的位置，而未附着的物质被洗脱。然后，在完成第一次洗脱步骤之后，以某种方式释放被捕获在磁场中且被防止洗脱的物质，使得它们可以被洗脱和回收。在某些实施方案中，非靶细胞被标记并从异质细胞群中消耗。

在某些实施方案中，使用执行该方法的隔离、细胞制备、分离、加工、孵育、培养和/或配制步骤中的一种或多种的系统、设备或装置进行隔离或分离。在一些方面，该系统用于在封闭或无菌环境中执行这些步骤中的每一个，例如以最小化误差、用户操作和/或污染。在一个例子中，该系统是如国际专利申请公开号WO 2009/072003或US 20110003380 A1中所述的系统。

在一些实施方案中，该系统或装置在集成或自含式系统中和/或以自动化或可编程方式执行分离、加工、工程化和配制步骤中的一个或多个例如全部。在一些方面，该系统或装置包括与该系统或装置通信的计算机和/或计算机程序，该计算机和/或计算机程序允许用户编程、控制、评估该加工、分离、工程化和配制步骤的结果和/或调整该加工、分离、工程化和配制步骤的各个方面。

在一些方面，使用CliniMACS系统(Miltenyi Biotic)进行分离和/或其他步骤，例如用于在封闭和无菌系统中在临床规模水平上的细胞的自动化分离。组件可包括集成的微计算机、磁分离单元、蠕动泵和各种夹管阀。在一些方面，集成计算机控制仪器的所有组件并指示系统以标准化顺序执行重复过程。在一些方面，磁分离单元包括可移动的永磁体和用于选择柱的支架。蠕动泵控制整个管组的流速，并与夹管阀共同确保缓冲液受控制的流动通过系统以及细胞的持续悬浮。

在一些方面，CliniMACS系统使用抗体偶联的可磁化颗粒，其在无菌的无热原溶液中提供。在一些实施方案中，在用磁性颗粒标记细胞后，洗涤细胞以去除过量的颗粒。然后将细胞制备袋连接至管组，管组又连接至含有缓冲液的袋和细胞收集袋。管组由包括前置柱和分离柱且仅供一次性使用的预装配的无菌管组成。在启动分离程序后，系统自动将细胞样品施加于分离柱。标记的细胞被保留在柱内，而未标记的细胞通过一系列洗涤步骤被去除。在一些实施方案中，与本文描述的方法一起使用的细胞群是未标记的并且不保留在柱中。在一些实施方案中，用于与本文所述方法一起使用的细胞群被标记并保留在柱中。在一些实施方案中，用于与本文所述方法一起使用的细胞群在去除磁场后从柱中洗脱，并收集在细胞收集袋内。

在某些实施方案中，使用CliniMACS Prodigy系统(Miltenyi Biotec)进行分离和/或其他步骤。在一些方面，CliniMACS Prodigy系统配备有细胞加工联合体，其允许通过离心自动化洗涤和分级分离细胞。CliniMACS Prodigy系统还可以包括机载相机和图像识别软件，其通过辨别源细胞产物的宏观层来确定最佳的细胞分级分离终点。例如，外周血自动分离成红细胞、白细胞和血浆层。CliniMACS Prodigy系统还可以包括集成细胞养殖室，其实现细胞培养方案例如细胞分化和扩增、抗原加载和长期细胞培养。输入端口可允许无菌移除和补充培养基，并且可以使用集成显微镜监测细胞。参见例如Klebanoff等人(2012)J Immunother.35(9):651–660、Terakura等人(2012)Blood.1:72–82和Wang等人(2012)JImmunother.35(9):689-701。

在一些实施方案中，经由流式细胞术收集和富集(或消耗)本文所述的细胞群，其中在流体流中携带针对多个细胞表面标志物染色的细胞。在一些实施方案中，经由制备规模(FACS)分选来收集和富集(或消耗)本文所述的细胞群。在某些实施方案中，通过微机电系统(MEMS)芯片与基于FACS的检测系统的结合使用来收集和富集(或消耗)本文所述的细胞群(参见例如WO 2010/033140,Cho等人(2010)Lab Chip 10,1567-1573；和Godin等人(2008)J Biophoton.1(5):355–376)。在两种情况下，细胞可以用多种标志物标记，从而允许以高纯度分离明确定义的T细胞亚组。

在一些实施方案中，该抗体或结合配偶体用一种或多种可检测标志物标记，以促进对于阳性和/或阴性选择的分离。例如，分离可以基于与荧光标记的抗体的结合。在一些例子中，细胞的分离基于对于一种或多种细胞表面标志物具有特异性的抗体或其他结合配偶体的结合，该细胞在流体流中携带，如通过荧光激活的细胞分选(FACS)(包括制备规模(FACS)和/或微机电系统(MEMS)芯片)例如与流式细胞检测系统组合。这种方法允许同时基于多种标志物进行阳性和阴性选择。

在一些实施方案中，制备方法包括在分离、孵育和/或工程化之前或之后冷冻(例如冷冻保存)细胞的步骤。在一些实施方案中，冷冻和随后的解冻步骤去除细胞群中的粒细胞，并且在一定程度上去除单核细胞。在一些实施方案中，例如在洗涤步骤之后将细胞悬浮在冷冻溶液中以除去血浆和血小板。在一些方面可以使用各种已知的冷冻溶液和参数中的任何一种。一个例子包括使用含有20％DMSO和8％人血清白蛋白(HSA)的PBS或其他合适的细胞冷冻培养基。其随后用培养基1:1稀释，使得DMSO和HSA的最终浓度分别为10％和4％。然后通常将细胞以1°/分钟的速率冷冻至-80℃并储存在液氮储罐的气相中。

在一些实施方案中，在基因工程之前或与基因工程一起孵育和/或培养细胞。孵育步骤可包括培养、养殖、刺激、激活和/或繁殖。孵育和/或工程化可以在培养容器中进行，如单元、室、孔、柱、管、管组、阀、小瓶、培养皿、袋或用于培养物或养殖细胞的其他容器。在一些实施方案中，组合物或细胞在刺激条件或刺激剂的存在下孵育。这些条件包括针对以下而设计的那些条件：用于诱导群体中细胞的增殖、扩增、激活和/或存活的条件，用于模拟抗原暴露和/或用于引发细胞进行基因工程化，如以引入重组抗原受体。

该条件可包括以下的一种或多种：特定培养基、温度、氧含量、二氧化碳含量、时间、药剂，例如营养素、氨基酸、抗生素、离子和/或刺激因子(如细胞因子、趋化因子)、抗原、结合配偶体、融合蛋白、重组可溶性受体和设计用于激活细胞的任何其他药剂。

在一些实施方案中，刺激条件或药剂包括一种或多种药剂例如配体，其能够激活TCR复合物的细胞内信号传导结构域。在一些方面，该药剂在T细胞中开启或启动TCR/CD3细胞内信号级联放大。这种药剂可包括抗体如对于TCR具有特异性的抗体，例如抗CD3。在一些实施方案中，刺激条件包括一种或多种药剂例如配体，其能够刺激共刺激受体，例如抗CD28。在一些实施方案中，这种药剂和/或配体可结合至固体支持物如珠粒和/或一种或多种细胞因子。任选地，扩增方法可进一步包括向培养基中加入抗CD3和/或抗CD28抗体(例如，以至少约0.5ng/ml的浓度)的步骤。在一些实施方案中，刺激剂包括IL-2、IL-15和/或IL-7。在一些方面，IL-2浓度为至少约10单位/mL。

在一些方面，根据技术如美国专利号6,040,177到Riddell等人,Klebanoff等人(2012)J Immunother.35(9):651–660、Terakura等人(2012)Blood.1:72–82和/或Wang等人(2012)J Immunother.35(9):689-701中描述的那些技术进行孵育。

在一些实施方案中，通过以下方法扩增T细胞：向培养起始组合物中加入饲养细胞(如非分裂外周血单核细胞(PBMC))(例如，使得所得细胞群含有至少约5、10、20或40种或更多种PBMC饲养细胞，以使初始群体中的每种T淋巴细胞进行扩增)；以及孵育培养物(例如，持续足以扩增T细胞数量的时间)。在一些方面，非分裂饲养细胞可包含γ辐射的PBMC饲养细胞。在一些实施方案中，用约3000至3600拉德范围内的γ射线照射PBMC以防止细胞分裂。在一些方面，在添加T细胞群之前将饲养细胞加入到培养基中。

在一些实施方案中，刺激条件包括适合于人T淋巴细胞生长的温度例如至少约25摄氏度，通常至少约30摄氏度且通常37摄氏度或约37摄氏度。任选地，孵育可进一步包括加入非分裂的EBV转化的类淋巴母细胞(LCL)作为饲养细胞。LCL可以用约6000至10,000拉德范围内的γ射线照射。在一些方面，LCL饲养细胞以任何合适的量提供，如LCL饲养细胞与初始T淋巴细胞的比例为至少约10:1。

在实施方案中，通过用抗原刺激初试或抗原特异性T淋巴细胞获得抗原特异性T细胞如抗原特异性CD4+和/或CD8+T细胞。例如，可通过从感染的受试者分离T细胞并用相同的抗原在体外刺激细胞，针对巨细胞病毒抗原生成抗原特异性T细胞系或克隆。

IV.组合物和制剂

在一些实施方案中，以组合物或制剂例如药物组合物或制剂的方式提供包含用重组抗原受体例如CAR或TCR工程化的细胞的该剂细胞。这种组合物可以根据所提供的方法使用，如在预防或治疗疾病、病况和病症或检测、诊断和预后方法中。

术语“药物制剂”是指呈使得其中含有的活性成分的生物活性有效的形式，并且不含对该制剂所给予的受试者具有不可接受的毒性的其他组分的制剂。

“药学上可接受的载体”是指药物制剂中除活性成分外的成分，其对受试者无毒。药学上可接受的载体包括但不限于缓冲液、赋形剂、稳定剂或防腐剂。

在一些方面，载体的选择部分地由特定细胞或药剂和/或通过给药方法确定。因此，存在多种合适的制剂。例如，药物组合物可含有防腐剂。合适的防腐剂可包括例如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、苯甲酸钠和苯扎氯铵。在一些方面，使用两种或更多种防腐剂的混合物。防腐剂或其混合物通常以总组合物重量的约0.0001％至约2％的量存在。例如由Remington's Pharmaceutical Sciences第16版,Osol,A.编辑(1980)描述了载体。药学上可接受的载体在所使用的剂量和浓度下通常对受体无毒，并且包括但不限于缓冲剂，例如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(例如十八烷基二甲基苄基氯化铵；六甲氯铵；苯扎氯铵；苄索氯铵；苯酚、丁醇或苄醇；烷基对羟基苯甲酸酯，例如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，例如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，例如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，例如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂例如EDTA；糖类，例如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐抗衡离子例如钠；金属络合物(例如，锌-蛋白质络合物)；和/或非离子表面活性剂如聚乙二醇(PEG)。

在一些方面，缓冲剂包含在组合物中。合适的缓冲剂包括例如柠檬酸、柠檬酸钠、磷酸、磷酸钾和各种其他酸和盐。在一些方面，使用两种或更多种缓冲剂的混合物。缓冲剂或其混合物通常以总组合物重量的约0.001％至约4％的量存在。制备可给予的药物组合物的方法是已知的。示例性方法更详细地描述于例如Remington:The Science and Practiceof Pharmacy,Lippincott Williams&Wilkins；21st ed.(2005年5月1日)中。

制剂或组合物还可含有多于一种活性成分，其可用于用细胞或药剂预防或治疗的特定适应症、疾病或病况，其中各自的活性不会相互产生不利影响。这种活性成分适合以对预期目的有效的量组合存在。因此，在一些实施方案中，药物组合物进一步包含其他药物活性剂或药物如化学治疗剂，例如天冬酰胺酶、白消安、卡铂、顺铂、柔红霉素、多柔比星、氟尿嘧啶、吉西他滨、羟基脲、甲氨蝶呤、紫杉醇、利妥昔单抗、长春碱、长春新碱等。在一些实施方案中，该药剂或细胞以盐(例如药学上可接受的盐)的形式给予。合适的药学上可接受的酸加成盐包括衍生自无机酸(如盐酸、氢溴酸、磷酸、偏磷酸，硝酸和硫酸)和有机酸(如酒石酸、乙酸、柠檬酸、苹果酸、乳酸、富马酸、苯甲酸、乙醇酸、葡萄糖酸、琥珀酸和芳基磺酸，例如对甲苯磺酸)的那些盐。

活性成分可以包埋在微胶囊、胶体药物递送系统(例如，脂质体、白蛋白微球、微乳液、纳米颗粒和纳米胶囊)或粗乳液中。在某些实施方案中，将药物组合物配制为包合复合物如环糊精包合复合物，或配制为脂质体。脂质体可用于将药剂或宿主细胞(例如，T细胞或NK细胞)靶向特定组织。许多方法可用于制备脂质体，如在例如Szoka等人,Ann.Rev.Biophys.Bioeng.,9:467(1980)和美国专利4,235,871、4,501,728、4,837,028和5,019,369中描述的那些方法。

在一些方面，药物组合物可以采用定时释放、延迟释放和持续释放递送系统，使得组合物的递送发生在待治疗部位的致敏之前，并且有足够的时间引起致敏。许多类型的释放递送系统是可用且已知的。这种系统可以避免重复给予组合物，从而增加受试者和医师的便利。

在一些实施方案中，药物组合物含有有效治疗或预防疾病或病况的量(如治疗有效量或预防有效量)的药剂或细胞。在一些实施方案中通过定期评估治疗的受试者来监测治疗或预防功效。对于数天或更长时间的重复给药，取决于病状，重复治疗直至出现所希望的疾病症状抑制。然而，其他剂量方案可能是有用的并且可以确定。所需剂量可以通过单次推注给予组合物、通过多次推注给予组合物或通过连续输注给予组合物来递送。

该药剂或细胞可以通过任何合适的方式给予，例如通过推注输注，通过注射例如静脉内或皮下注射、眼内注射、眼周注射、视网膜下注射、玻璃体内注射、经中隔注射、巩膜下注射、脉络膜内注射、前房注射、结膜下注射、结膜下注射、眼球筋膜囊下注射、球后注射、球周注射或后巩膜递送。在一些实施方案中，它们通过肠胃外、肺内和鼻内给予以及(如果需要用于局部治疗的话)病灶内给药。肠胃外输注包括肌肉内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下给药。在一些实施方案中，给定剂量通过细胞或药剂的单次推注给药来给予。在一些实施方案中，给定剂量通过细胞或药剂的多次推注给药例如在不超过3天的时间内来给予，或通过细胞或药剂的连续输注给药。

为了预防或治疗疾病，适当的剂量可取决于待治疗的疾病类型、一种或多种药剂的类型、细胞或重组受体的类型、疾病的严重程度和病程、该药剂或细胞是否针对预防或治疗目的而被给予、先前的治疗、受试者的临床病史和对该药剂或细胞的应答以及主治医师的决断。在一些实施方案中，该组合物适合一次或在一系列治疗中给予受试者。

可以使用标准给药技术、制剂和/或设备给予细胞或药剂。提供了用于组合物的储存和给予的制剂和设备如注射器和小瓶。关于细胞，给药可以是自体同源的或异源的。例如，免疫应答细胞或祖细胞可以从一个受试者获得，并给予相同受试者或不同的相容性受试者。外周血衍生的免疫应答细胞或其后代(例如，体内、离体或体外衍生的)可以经由局部注射给予，包括导管给药、全身注射、局部注射、静脉内注射或肠胃外给药。当给予治疗组合物(例如，含有基因修饰的免疫应答细胞或治疗或改善神经毒性症状的药剂的药物组合物)时，通常将其配制成单位剂量可注射形式(溶液、悬浮液、乳液)。

制剂包括用于口服、静脉内、腹膜内、皮下、肺、透皮、肌肉内、鼻内、口腔、舌下或栓剂给药的制剂。在一些实施方案中，肠胃外给予药剂或细胞群。本文所用的术语“肠胃外”包括静脉内、肌肉内、皮下、直肠、阴道和腹膜内给药。在一些实施方案中，使用通过静脉内、腹膜内或皮下注射的外周全身递送向受试者给予药剂或细胞群。

在一些实施方案中，组合物作为无菌液体制剂提供，例如等渗水溶液、悬浮液、乳液、分散体或粘性组合物，其在一些方面可以缓冲至选择的pH。液体制剂通常比凝胶、其他粘性组合物和固体组合物更容易制备。另外，液体组合物稍微更方便给予，特别是通过注射。在另一方面，粘性组合物可以配制在适当的粘度范围内，以提供与特定组织的更长的接触时间。液体或粘性组合物可包含载体，该载体可以是含有例如水、盐水、磷酸盐缓冲盐水、多元醇(例如甘油、丙二醇、液体聚乙二醇)及其合适的混合物的溶剂或分散介质。

无菌可注射溶液可以通过将该药剂或细胞掺入溶剂中来制备，如具有合适的载体、稀释剂或赋形剂(如无菌水、生理盐水、葡萄糖、右旋糖等)的混合物中。组合物也可以冻干。组合物可含有辅助物质如润湿剂、分散剂或乳化剂(例如甲基纤维素)、pH缓冲剂、胶凝或粘度增强添加剂、防腐剂、调味剂、着色剂等，这取决于给药途径和所需的制剂。在一些方面可以参考标准文本来制备合适的制剂。

可以加入各种增强组合物稳定性和无菌性的添加剂，包括抗微生物防腐剂、抗氧化剂、螯合剂和缓冲液。通过各种抗细菌剂和抗真菌剂例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸等，可以确保防止微生物的作用。通过使用延迟吸收的药剂例如单硬脂酸铝和明胶可以实现可注射药物形式的延长吸收。

可以制备持续释放制剂。持续释放制剂的合适实子包括含有抗体的固体疏水聚合物的半透性基质，该基质呈成型制品(例如薄膜或微胶囊)的形式。

用于体内给给药的制剂通常是无菌的。例如，通过无菌过滤膜过滤可以容易地实现无菌。

V.制品和试剂盒

还提供了制品和试剂盒，其含有表达重组受体的工程化细胞或其组合物以及任选的使用说明书例如根据所提供的方法的给药说明书。

在一些实施方案中，提供了制品和/或试剂盒，其包含含有治疗有效量的本文所述的任何工程化细胞的组合物，以及向受试者给药以治疗疾病或病况的说明书。在一些实施方案中，说明说可规定本文提供的方法的一些或全部元件。在一些实施方案中，说明书规定了用于给予细胞疗法的细胞的特定说明，例如剂量、时间安排、针对给药和给药条件对受试者进行选择和/或鉴定。在一些实施方案中，制品和/或试剂盒进一步包含用于淋巴细胞清除疗法的药剂，并且任选地进一步包含用于给予淋巴细胞清除疗法的说明书。在一些实施方案中，说明书可以作为伴随用于给予的组合物的标签或包装说明书而包含在内。

在一些实施方案中，说明书规定了针对疗法对受试者进行选择或鉴定的标准。在一些实施方案中，这种标准包括患有高风险CLL的受试者。在一些实施方案中，说明书规定受试者被鉴定为或已经被鉴定为具有一种或多种细胞遗传学异常(任选地与高风险CLL相关)的受试者，该一种或多种细胞遗传学异常任选地选自：复杂核型、13号染色体的长臂的缺失(del 13q)、del 11、三体性12、del 17p、del 6q和del 13q.14，任选地如通过FISH检测到的；受试者被鉴定为或已经被鉴定为患有高风险CLL；和/或受试者被鉴定为或已经被鉴定为患有髓外疾病；和/或是成年人和/或年龄超过30岁、40岁、50岁、60岁或70岁或超过约30岁、40岁、50岁、60岁或70岁。在一些实施方案中，用于选择或鉴定的标准包括受试者患有高风险NHL。在一些实施方案中，受试者被鉴定为或已经被鉴定为具有一种或多种细胞遗传学异常，任选地与高风险NHL相关；该受试者被鉴定为或已经被鉴定为患有高风险NHL；和/或NHL选自下组，该组由以下各项组成：侵袭性NHL、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤(TCHRBCL)、伯基特淋巴瘤、套细胞淋巴瘤(MCL)和/或滤泡性淋巴瘤(FL)；和/或受试者是成年人和/或年龄超过30、40、50、60或70岁或者超过约30、40、50、60或70岁。

在一些实施方案中，说明书规定受试者是已接受一种或多种用于治疗白血病(例如CLL或NHL)的先前或现有疗法(如已经接受2、3或4种现有疗法)的受试者。在一些实施方案中，说明书规定受试者被选择用于用细胞疗法(例如CAR+T细胞)进行的治疗，条件是在接受一种或多种这种现有疗法后受试者被鉴定为难以治疗或被鉴定为很可能难以治疗和/或已经复发。

在一些实施方案中，说明书规定了待给予的细胞的剂量。例如，在一些实施方案中，说明书规定该剂量(i)包含(a)2 x 10⁵或约2 x 10⁵个细胞/公斤受试者体重(细胞/kg)，(b)2 x 10⁶或约2 x 10⁶个细胞/kg，(c)不超过2 x 10⁶或不超过约2 x 10⁶个细胞/kg，(d)不超过2 x 10⁵或不超过约2 x 10⁵个细胞/kg和/或(e)在2 x 10⁵或约2 x 10⁵个细胞/kg和2 x 10⁶或约2 x 10⁶个细胞/kg之间。在一些实施方案中，说明书规定了细胞疗法的细节，包括细胞疗法的靶标，例如规定该细胞疗法是CD19靶向细胞疗法。在一些实施方案中，说明书规定细胞疗法包括给予CAR+工程化细胞，其包含确定比例的表达该CAR的CD4+细胞与表达该CAR的CD8+细胞，和/或确定比例的CD4+细胞与CD8+细胞，该比例任选为大约1:1或在大约1:3和大约3:1之间。

在一些实施方案中，制品和/或试剂盒进一步包含一种或多种用于疗法(例如本文所述的淋巴细胞清除疗法和/或组合疗法)的附加药剂，以及任选的用于给予附加药剂的说明书。在一些实施方案中，制品和/或试剂盒进一步包含一种或多种用于测定生物样品(例如来自作为给药候选者或已给予该治疗的受试者的生物样品)的试剂，以及任选的试剂或测定的使用说明书。在一些实施方案中，试剂可以在给予细胞疗法之前或给予细胞疗法之后用于诊断目的，以鉴定受试者和/或评估治疗结果和/或毒性。例如，在一些实施方案中，制品和/或试剂盒进一步含有用于测量与毒性相关的特定生物标志物(例如细胞因子)水平的试剂，以及测量说明书。在一些实施方案中，试剂包含用于进行体外测定以测量生物标志物的组分，如免疫测定、基于适体的测定、组织学或细胞学测定或mRNA表达水平测定。在一些实施方案中，体外测定选自酶联免疫吸附测定(ELISA)、免疫印迹、免疫沉淀，放射免疫测定(RIA)、免疫染色、流式细胞术测定、表面等离子体共振(SPR)、化学发光测定、侧流免疫测定、抑制测定和亲合力测定。在一些方面，试剂是特异性地结合生物标志物的结合试剂。在一些情况下，结合试剂是抗体或其抗原结合片段、适体或核酸探针。

该制品和/或试剂盒可以包含容器以及在该容器上或与该容器相关联的标签或包装说明书。合适的容器包括例如瓶子、小瓶、注射器、IV溶液袋等。容器可以由各种材料(例如玻璃或塑料)形成。在一些实施方案中，容器容纳组合物自身或该组合物与有效于治疗、预防和/或诊断病况的另一种组合物的组合。在一些实施方案中，容器具有无菌入口。示例性容器包括静脉内溶液袋、小瓶(包括具有可被注射针刺穿的塞子的那些溶液袋、小瓶)或用于口服给药剂的瓶子或小瓶。标签或包装说明书可表明该组合物用于治疗疾病或病况如CLL或NHL。

制品可包括其中含有组合物的容器，其中该组合物包含表达重组受体的工程化细胞；以及在一些情况下包括其中含有组合物的一种或多种其他容器，其中该组合物包含一种或多种其他的一种或多种药剂。该制品可进一步包括包装说明书，其表明该组合物可用于治疗特定病况。可替代地或另外，制品可进一步包括另一种或相同的容器，该容器包含药学上可接受的缓冲液。它可进一步包括其他材料，如其他缓冲液、稀释剂、过滤器、针头和/或注射器。

VI.示例性实施方案

所提供的实施方案为：

1.一种治疗患有或怀疑患有慢性淋巴细胞白血病(CLL)的受试者的方法，该方法包括向该受试者给予一剂表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，该嵌合抗原受体特异性地结合至由该CLL表达的靶抗原，所述剂量包含(a)2 x 10⁵或约2 x 10⁵个细胞/公斤受试者体重(细胞/kg)，(b)2 x 10⁶或约2 x 10⁶个细胞/kg，(c)不超过2 x 10⁶或不超过约2 x 10⁶个细胞/kg，(d)不超过2 x 10⁵或不超过约2 x 10⁵个细胞/kg和/或(e)在2 x 10⁵或约2 x 10⁵个细胞/kg和2 x 10⁶或约2 x 10⁶个细胞/kg之间，

其中在给药之前该受试者已经用包括给予氟达拉滨的淋巴细胞清除疗法预处理。

2.一种治疗患有或怀疑患有慢性淋巴细胞白血病(CLL)的受试者的方法，该方法包括向该受试者给予一剂表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，该嵌合抗原受体特异性地结合至由该CLL表达的靶抗原，所述剂量包含(a)1 x 10⁷或约1 x 10⁷个总细胞或总CAR表达细胞，(b)1.5 x 10⁸或约1.5 x 10⁸个总细胞或总CAR表达细胞，(c)不超过1 x 10⁷或不超过约1 x 10⁷个总细胞或总CAR表达细胞，(d)不超过1.5 x 10⁸或不超过约1.5 x 10⁸个总细胞或总CAR表达细胞和/或(e)在1 x 10⁷或约1 x 10⁷个总细胞或总CAR表达细胞和1.5 x 10⁸或约1.5 x 10⁸个总细胞或总CAR表达细胞之间，

3.实施方案1的方法，其中在给予该剂细胞时或给予该剂细胞之前：

该受试者被鉴定为或已经被鉴定为具有一种或多种细胞遗传学异常，任选地与高风险CLL相关，任选地选自：复杂核型、13号染色体的长臂的缺失(del 13q)、del 11、三体性12、del 17p、del 6q和del 13q.14，任选地如通过FISH检测到的；

该受试者被鉴定为或已经被鉴定为患有高风险CLL；和/或

该受试者被鉴定为或已经被鉴定为患有髓外疾病；和/或

该受试者被鉴定为或已经被鉴定为患有中枢神经系统(CNS)疾病；和/或

该受试者是成年人和/或年龄超过30岁、40岁、50岁、60岁或70岁或者超过约30岁、40岁、50岁、60岁或70岁。

4.实施方案1或实施方案3的方法，其中在给予该剂细胞之前该受试者已经用除淋巴细胞清除疗法以外和/或除另一剂表达该CAR的细胞以外的两种或更多种，任选3、4、5、6、7、8或9种或更多种针对该CLL的疗法进行治疗。

5.实施方案1或实施方案3的方法，其中在给予该剂细胞之前该受试者已经用除另一剂表达该CAR的细胞以外或除另一剂表达该CAR的细胞和预处理疗法以外的两种或更多种，任选3、4、5、6、7、8或9种或更多种针对该CLL的疗法进行治疗。

6.实施方案1-5种任一项的方法，其中在给予该剂细胞之前已经用激酶抑制剂治疗了该受试者的CLL，该激酶抑制剂任选为Btk的抑制剂，任选依鲁替尼。

7.实施方案1-6种任一项的方法，其中在给予该剂细胞之前已经用单克隆抗体治疗了该受试者的CLL，该单克隆抗体特异性地结合至由该CLL的细胞表达或先前由该CLL的细胞表达的抗原。

8.实施方案1-7种任一项的方法，其中在给予该剂细胞之前已经用venetoclax、包含氟达拉滨和利妥昔单抗的组合疗法、放射疗法和/或造血干细胞移植(HSCT)治疗了该受试者的CLL。

9.实施方案1-8中任一项的方法，其中在给予该剂细胞时或紧临给予该剂细胞之前，该受试者在用一种或多种针对该CLL的现有疗法治疗之后出现缓解后复发或变得难以治疗。

10.实施方案1-9中任一项的方法，该方法进一步包括在给予该细胞剂量之前，向该受试者给予淋巴细胞清除疗法。

11.实施方案1-10中任一项的方法，其中淋巴细胞清除疗法：

(i)进一步包括给予除氟达拉滨以外的另一种化学治疗剂，其任选地为环磷酰胺；

(ii)在给予细胞前至少48小时或至少约48小时或在48小时或约48小时和96小时或约96小时之间的时间开始；并且

(iii)包括以约30-60mg/kg给予环磷酰胺，任选每天一次持续一天或两天，和/或以约25mg/m²给予氟达拉滨，每天给予持续3-5天。

12.实施方案1-11中任一项的方法，其中该细胞剂量和/或淋巴细胞清除疗法的给予经由门诊递送进行。

13.实施方案1-12中任一项的方法，其中该该剂细胞包含确定比例的表达该CAR的CD4+细胞与表达该CAR的CD8+细胞，和/或确定比例的CD4+细胞与CD8+细胞，该比例任选为大约1:1或在大约1:3和大约3:1之间。

14.实施方案1-13中任一项的方法，其中该该剂细胞经肠胃外给予，任选静脉内给药。

15.实施方案1-14中任一项的方法，其中：

根据该方法治疗的受试者中的至少50％实现完全缓解(CR)和/或客观应答(OR)；和/或

该受试者在给予该剂细胞的1个月内展现出CR、OR、尺寸小于20mm或小于约20mm的淋巴结；和/或

其中未在该受试者的骨髓中(或在根据该方法治疗的超过50％受试者的骨髓中)检测到恶性免疫球蛋白重链(IGH)基因座和/或CLL的指数克隆，任选地如通过IGH深度测序所评估的，任选地在给予该细胞剂量后1、2、3、4、5、6、12、18或24个月或约1、2、3、4、5、6、12、18或24个月或至少1、2、3、4、5、6、12、18或24个月或至少约1、2、3、4、5、6、12、18或24个月的时间进行。

16.实施方案1-15中任一项的方法，其中：

根据该方法治疗的受试者中的至少50％实现完全缓解(CR)，展现出超过12个月的无进展生存期(PFS)和/或总生存期(OS)；

平均而言，根据该方法治疗的受试者展现出超过6个月、12个月或18个月或者超过约6个月、12个月或18个月的平均PFS或OS；和/或

该受试者展现出至少6、12、18或更多个月或者至少约6、12、18或更多个月的治疗后PFS或OS。

17.实施方案1-16中任一项的方法，其中该抗原是B细胞抗原，其任选地是CD19。

18.实施方案1-17中任一项的方法，其中CAR包含对该抗原具有特异性的scFv、跨膜结构域、衍生自任选为4-1BB的共刺激分子的细胞质信号传导结构域以及衍生自任选为CD3ζ的含有主信号传导ITAM的分子的细胞质信号传导结构域。

19.实施方案1-18中任一项的方法，其中CAR包含各自任选地衍生自人IgG的间隔区和/或铰链区。

20.一种治疗患有非霍奇金淋巴瘤(NHL)的受试者的方法，该方法包括向该受试者给予一剂表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，该嵌合抗原受体特异性地结合至由该NHL表达的靶抗原，其中：

所述剂量(i)包含(a)2 x 10⁵或约2 x 10⁵个细胞/公斤受试者体重(细胞/kg)，(b)2 x 10⁶或约2 x 10⁶个细胞/kg，(c)不超过2 x 10⁶或不超过约2 x 10⁶个细胞/kg，(d)不超过2 x 10⁵或不超过约2 x 10⁵个细胞/kg和/或(e)在2 x 10⁵或约2 x 10⁵个细胞/kg和2 x10⁶或约2 x 10⁶个细胞/kg之间，并且(ii)包含确定比例的表达该CAR的CD4⁺细胞与表达该CAR的CD8⁺细胞和/或确定比例的CD4⁺细胞与CD8⁺细胞，该比例任选地为大约1:1或在大约1:3和大约3:1之间，

21.一种治疗患有非霍奇金淋巴瘤(NHL)的受试者的方法，该方法包括向该受试者给予一剂表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，该嵌合抗原受体特异性地结合至由该NHL表达的靶抗原，其中：

所述剂量(i)包含(a)1 x 10⁷或约1 x 10⁷个总细胞或总CAR表达细胞，(b)1.5 x10⁸或约1.5 x 10⁸个总细胞或总CAR表达细胞，(c)不超过1 x 10⁷或不超过约1 x 10⁷个总细胞或总CAR表达细胞，(d)不超过1.5 x 10⁸或不超过约1.5 x 10⁸个总细胞或总CAR表达细胞和/或(e)在1 x 10⁷或约1 x 10⁷个总细胞或总CAR表达细胞和1.5 x 10⁸或约1.5 x 10⁸个总细胞或总CAR表达细胞之间，并且(ii)包含确定比例的表达该CAR的CD4⁺细胞与表达该CAR的CD8⁺细胞和/或确定比例的CD4⁺细胞与CD8⁺细胞，该比例任选地为大约1:1或在大约1:3和大约3:1之间，

22.实施方案20的方法，其中在给予该剂细胞时或给予该剂细胞之前：

该受试者被鉴定为或已经被鉴定为具有一种或多种细胞遗传学异常，任选地与高风险NHL相关；

该受试者被鉴定为或已经被鉴定为患有高风险NHL；和/或

该NHL选自下组，该组由以下各项组成：侵袭性NHL、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤(TCHRBCL)、伯基特淋巴瘤、套细胞淋巴瘤(MCL)和/或滤泡性淋巴瘤(FL)；和/或

23.实施方案20或实施方案22的方法，其中在给予该剂细胞之前该受试者已经用除淋巴细胞清除疗法以外和/或除另一剂表达该CAR的细胞以外的两种或更多种，任选2、3或4种或更多种针对该NHL的疗法进行治疗。

24.实施方案20-23中任一项的方法，其中在给予该剂细胞时或紧临给予该剂细胞之前，该受试者在用一种或多种针对该NHL的现有疗法治疗之后出现缓解后复发或变得难以治疗。

25.实施方案20-24中任一项的方法，该方法进一步包括在给予该细胞剂量之前，向该受试者给予淋巴细胞清除疗法。

26.实施方案20-25中任一项的方法，其中淋巴细胞清除疗法：

27.实施方案20-26中任一项的方法，其中该细胞剂量和/或淋巴细胞清除疗法的给予经由门诊递送进行。

28.实施方案20-27中任一项的方法，其中该确定比例是1:1或约1:1的表达该CAR的CD4+细胞与表达该CAR的CD8+细胞的确定比例和/或1:1或约1:1的CD4+细胞与CD8+细胞的确定比例。

29.实施方案20-28中任一项的方法，其中该该剂细胞经肠胃外给予，任选静脉内给药。

30.实施方案20-29中任一项的方法，其中根据该方法治疗的受试者中的至少50％实现完全缓解(CR)和/或客观应答(OR)。

31.实施方案20-30中任一项的方法，其中：

根据该方法治疗并实现完全缓解(CR)的受试者中的至少50％展现出超过12个月的无进展生存期(PFS)和/或总生存期(OS)；

32.实施方案20-31中任一项的方法，其中该抗原是B细胞抗原，其任选地是CD19。

33.实施方案20-32中任一项的方法，其中CAR包含对该抗原具有特异性的scFv、跨膜结构域、衍生自任选为4-1BB的共刺激分子的细胞质信号传导结构域以及衍生自任选为CD3ζ的含有主信号传导ITAM的分子的细胞质信号传导结构域。

34.实施方案20-33中任一项的方法，其中CAR包含各自任选地衍生自人IgG的间隔区和/或铰链区。

35.实施方案1-34中任一项的方法，其中：

该CAR依次包含对该抗原具有特异性的scFv、跨膜结构域、任选为或任选包含4-1BB信号传导结构域的衍生自共刺激分子的细胞质信号传导结构域以及任选为CD3ζ信号传导结构域的衍生自含有主信号传导ITAM的分子的细胞质信号传导结构域；或

该CAR依次包含对该抗原具有特异性的scFv、间隔区、跨膜结构域、任选为4-1BB信号传导结构域的衍生自共刺激分子的细胞质信号传导结构域以及任选为或任选包含CD3ζ信号传导结构域的衍生自含有主信号传导ITAM的分子的细胞质信号传导结构域；

并且其中：

该间隔区任选地是多肽间隔区，该多肽间隔区(a)包含全部或部分免疫球蛋白铰链或其修饰形式或由其组成，或包含约15个氨基酸或更少，并且不包含CD28胞外区域或CD8胞外区域，(b)包含全部或部分免疫球蛋白铰链任选IgG4或其修饰形式或由其组成，和/或包含约15个氨基酸或更少，并且不包含CD28胞外区域或CD8胞外区域，或(c)长度为12个氨基酸或为约12个氨基酸和/或包含全部或部分免疫球蛋白铰链任选IgG4或其修饰形式或由其组成；或(d)具有SEQ ID NO:1的序列或由其组成，该序列是由以下各项所编码的一个序列：SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34或前述任何一项的变体，该变体与前述任何一项具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列一致性，或(e)包含式X1PPX2P或由其组成，其中X1是甘氨酸、半胱氨酸或精氨酸，且X2是半胱氨酸或苏氨酸；和/或

该共刺激结构域包含SEQ ID NO:12或其变体，该变体与其具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列一致性；和/或

该主信号传导结构域包含SEQ ID NO:13或14或15，它们具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列一致性；和/或

该scFv包含RASQDISKYLN的CDRLl序列(SEQ ID NO:35)、SRLHSGV的CDRL2序列(SEQID NO:36)和/或GNTLPYTFG的CDRL3序列(SEQ ID NO:37)和/或DYGVS的CDRH1序列(SEQ IDNO:38)、VIWGSETTYYNSALKS的CDRH2序列(SEQ ID NO:39)和/或YAMDYWG的CDRH3序列(SEQID NO:40)或其中该scFv包含FMC63的可变重链区和FMC63的可变轻链区和/或FMC63的CDRLl序列、FMC63的CDRL2序列、FMC63的CDRL3序列、FMC63的CDRH1序列、FMC63的CDRH2序列和FMC63的CDRH3序列，或者结合至与前述任何一项相同的表位或竞争与前述任何一项的结合，并且任选地其中该scFv依次包含VH、任选包含SEQ ID NO:24的接头和VL，和/或该scFv包含柔性接头和/或包含SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列。

36.一种预后方法，该方法包括检测来自患有B细胞恶性肿瘤的受试者的样品中恶性免疫球蛋白重链(IGH)基因座序列的存在或不存在，所述受试者先前已接受给予用于治疗该B细胞恶性肿瘤的细胞疗法，该细胞疗法包括一剂表达重组受体的基因工程化细胞或其组合物，其中检测该恶性IGH序列的存在或不存在决定了该受试者对该细胞疗法的应答的预后。

37.实施方案36的方法，其中检测该恶性IGH序列的存在或不存在是在该细胞疗法开始后3至6周内或约3至6周内或者开始后约3至6周进行，任选地在开始给予该细胞疗法的4周内或约4周内进行。

38.实施方案36或实施方案37的方法，其中如果检测到该恶性IGH序列，则将该受试者鉴定为对该细胞疗法没有反应或不展现完全应答(CR)或总体应答(OR)或者鉴定为很可能针对该细胞疗法复发。

39.实施方案36-38中任一项的方法，其中如果检测到该恶性IGH序列，则将该受试者鉴定为进一步治疗的候选者和/或接受改变的或替代的治疗的候选者。

40.实施方案36-38中任一项的方法，其中如果检测到该恶性IGH序列，则停止给予该细胞疗法，向该受试者给予另一剂量的该细胞疗法，向该受试者给予更高剂量的该细胞疗法，向该受试者给予不同的细胞疗法(任选表达不同重组受体的细胞疗法)和/或向该受试者给予用于治疗该B细胞恶性肿瘤的替代治疗剂。

41.实施方案36或实施方案37的方法，其中如果未检测到该恶性IGH序列，则将该受试者鉴定为对该细胞疗法有反应和/或对该细胞疗法展现完全应答(CR)或总体应答(OR)或鉴定为很可能针对该细胞疗法不复发。

42.实施方案36、37和41中任一项的方法，其中如果未检测到该恶性IGH序列，则将该受试者鉴定为不进行进一步治疗和/或不被进一步治疗的候选者，任选不用该细胞疗法进一步治疗和/或不用该B细胞恶性肿瘤的替代疗法进一步治疗。

43.一种预测对细胞疗法的应答的持久性的方法，该方法包括检测来自患有B细胞恶性肿瘤的受试者的样品中恶性免疫球蛋白重链基因座(IGH)序列的存在或不存在，所述受试者先前已接受给予用于治疗该B细胞恶性肿瘤的细胞疗法，该细胞疗法包括一剂表达重组受体的基因工程化细胞或其组合物，其中该恶性IGH序列的存在或不存在预测对该细胞疗法的应答的持久性。

44.实施方案43的方法，其中检测该恶性IGH序列的存在或不存在是在该细胞疗法开始后4周、6周、8周、12周或16周内或约4周、6周、8周、12周或16周内或者开始后约4周、6周、8周、12周或16周进行。

45.实施方案43或实施方案44的方法，其中如果未检测到该恶性IGH序列，则预测该受试者展现出或很可能展现出对该细胞疗法的持久应答和/或在一定的时间段内具有低的或相对低的复发风险和/或在至少一定的时间段内具有展现出无进展存活的高可能性。

46.实施方案43-45中任一项的方法，其中如果未检测到该恶性IGH序列，则预测该受试者：

在开始该细胞疗法后展现出大于或约3个月、大于约6个月、大于约9个月或大于约12个月的无进展生存期；和/或

在开始该细胞疗法后保持存活大于3个月或大于约3个月、大于6个月或大于约6个月、大于9个月或大于约9个月或大于约12个月；和/或

在开始该细胞疗法后展现出大于3个月或大于约3个月、大于6个月或大于约6个月或大于9个月或大于约9个月的持久CR或OR；和/或

在开始给予该细胞疗法后很可能不复发，任选地在开始给予该细胞疗法后3个月、6个月或9个月内很可能不复发。

47.实施方案43或实施方案44的方法，其中如果检测到该恶性IGH序列，则预测该受试者在一定的时间段内展现出或很可能展现出不持久的和/或处于高的或相对高复发风险的对该细胞疗法的应答，和/或在至少一定的时间段内展现出无进展存活的低可能性。

48.实施方案43或实施方案44的方法，其中如果未检测到该恶性IGH序列，则预测该受试者：

在开始该细胞疗法后未展现出大于或约3个月、大于约6个月、大于约9个月或大于约12个月的无进展生存期；和/或

在开始该细胞疗法后未保持存活大于3个月或大于约3个月、大于6个月或大于约6个月、大于9个月或大于约9个月或大于约12个月；和/或

在开始该细胞疗法后未展现出大于3个月或大于约3个月、大于6个月或大于约6个月或大于9个月或大于约9个月的持久CR或OR。

49.实施方案43、44和48的方法，其中如果检测到该恶性IGH序列，则向该受试者给予另一剂量的该细胞疗法，向该受试者给予更高剂量的该细胞疗法，向该受试者给予不同的细胞疗法，任选表达不同重组受体的细胞疗法，和/或向该受试者给予用于治疗该B细胞恶性肿瘤的替代治疗剂。

50.实施方案36-49中任一项的方法，其中通过IGH测序，任选地包括IGH靶DNA的PCR扩增，确定该恶性IGH序列的存在或不存在。

51.实施方案36-38中任一项的方法，其中该样品包含B细胞。

52.实施方案36-51中任一项的方法，其中该样品包含血液或骨髓样品。

53.实施方案36-52中任一项的方法，其中该样品已从该受试者获得。

54.实施方案36-53中任一项的方法，其中该方法离体进行。

55.实施方案36-54中任一项的方法，其中该B细胞恶性肿瘤是癌症。

56.实施方案36-55中任一项的方法，其中该B细胞恶性肿瘤是或包含白血病。

57.实施方案37-56中任一项的方法，其中该B细胞恶性肿瘤包含抗原或与选自CD19、CD20、CD22、CD30、CD33或CD38、ROR1的抗原相关。

58.实施方案36-57中任一项的方法，其中该B细胞恶性肿瘤选自和/或是急性淋巴细胞白血病(ALL)、成人ALL、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)和弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。

59.实施方案37-58中任一项的方法，其中该B细胞恶性肿瘤是或包括慢性淋巴细胞白血病(CLL)或高风险CLL。

60.实施方案37-58中任一项的方法，其中该B细胞恶性肿瘤是或包括非霍奇金淋巴瘤(NHL)。

61.实施方案60的方法，其中该NHL选自下组，该组由以下各项组成：侵袭性NHL、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、NOS(新形成的和从惰性转化的)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤(TCHRBCL)、伯基特淋巴瘤、套细胞淋巴瘤(MCL)和/或滤泡性淋巴瘤(FL)，任选地3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)。

62.实施方案37-61中任一项的方法，其中该重组受体特异性地结合至与该疾病或病况相关的或在与该B细胞恶性肿瘤相关的病变环境的细胞中表达的抗原。

63.实施方案37-62中任一项的方法，其中该重组受体是T细胞受体或功能性非T细胞受体。

64.实施方案37-63中任一项的方法，其中该重组受体是嵌合抗原受体(CAR)。

65.实施方案64的方法，其中该CAR包含特异性地结合至该抗原的细胞外抗原识别结构域和包含ITAM的细胞内信号传导结构域，其中该细胞内信号传导结构域任选包含CD3-ζ(CD3ζ)链的细胞内结构域；和/或其中CAR进一步包含共刺激信号传导区域，其任选包含CD28或4-1BB的信号传导结构域。

66.实施方案37-65中任一项的方法，其中CAR包含对该抗原具有特异性的scFv、跨膜结构域、衍生自任选为4-1BB的共刺激分子的细胞质信号传导结构域以及衍生自任选为CD3ζ的含有主信号传导ITAM的分子的细胞质信号传导结构域。

67.实施方案37-66中任一项的方法，其中CAR包含各自任选地衍生自人IgG的间隔区和/或铰链区。

68.实施方案37-67中任一项的方法，其中：

并且其中：

69.实施方案37-68中任一项的方法，其中该工程化细胞包括T细胞，任选CD4+和/或CD8+。

70.实施方案69的方法，其中该T细胞是从受试者获得的原代T细胞。

71.实施方案37-70中任一项的方法，其中该工程化细胞对于受试者是自体同源的。

72.实施方案37-71中任一项的方法，其中该工程化细胞对于受试者是同种异体的。

73.一种包含一个或多个剂量的细胞疗法和给予该细胞疗法的说明书的制品，每个剂量包含表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中：

该说明书规定了向患有慢性淋巴细胞白血病(CLL)的受试者给予的细胞的剂量；并且

该说明书规定了给予一定数量的CAR表达细胞或一定数量的细胞，或规定了给予对应于所述指定数量的细胞或含有所述指定数量的细胞的一定量或体积的一种或多种制剂，其中待给予的指定数量的细胞包含一定数量以给予一剂细胞，该剂细胞包含(a)2 x10⁵或约2 x 10⁵个细胞/公斤受试者体重(细胞/kg)，(b)2 x 10⁶或约2 x 10⁶个细胞/kg，(c)不超过2 x 10⁶或不超过约2 x 10⁶个细胞/kg，(d)不超过2 x 10⁵或不超过约2 x 10⁵个细胞/kg和/或(e)在2 x 10⁵或约2 x 10⁵个细胞/kg和2 x 10⁶或约2 x 10⁶个细胞/kg之间。

74.一种包含一个或多个剂量的细胞疗法和给予该细胞疗法的说明书的制品，每个剂量包含表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中：

该说明书规定了给予一定数量的CAR表达细胞或一定数量的细胞，或规定了给予对应于所述指定数量的细胞或含有所述指定数量的细胞的一定量或体积的一种或多种制剂，其中待给予的指定数量的细胞包含一定数量以给予一剂细胞，该剂细胞包含(a)1 x10⁷或约1 x 10⁷个总细胞或总CAR表达细胞；(b)1.5 x 10⁸或约1.5 x 10⁸个总细胞或总CAR表达细胞，(c)不超过1 x 10⁷或不超过约1 x 10⁷个总细胞或总CAR表达细胞，(d)不超过1.5x 10⁸或不超过约1.5 x 10⁸个总细胞或总CAR表达细胞和/或(e)在1 x 10⁷或约1 x 10⁷个总细胞或总CAR表达细胞和1.5 x 10⁸或约1.5 x 10⁸个总细胞或总CAR表达细胞之间。

75.实施方案73的制品，其进一步包含与淋巴细胞清除疗法一起、在淋巴细胞清除疗法之后或与淋巴细胞清除疗法结合使用的说明书，该淋巴细胞清除疗法包括氟达拉滨。

76.实施方案73或实施方案75的制品，其中该说明书规定该细胞疗法将被给予如下受试者，该受试者：

被鉴定为或已经被鉴定为具有一种或多种细胞遗传学异常，任选地与高风险CLL相关，任选地选自：复杂核型、13号染色体的长臂的缺失(del 13q)、del 11、三体性12、del17p、del 6q和del 13q.14，任选地如通过FISH检测到的；

被鉴定为或已经被鉴定为具有高风险的CLL；和/或

被鉴定为或已经被鉴定为患有髓外疾病；和/或

被鉴定为或已经被鉴定为患有中枢神经系统(CNS)疾病；和/或

是成年人和/或年龄超过30岁、40岁、50岁、60岁或70岁或超过约30岁、40岁、50岁、60岁或70岁。

77.实施方案73-76中任一项的制品，其中该说明书规定该细胞疗法将被给予如下受试者，该受试者：

已经用除淋巴细胞清除疗法以外和/或除另一剂表达该CAR的细胞以外的两种或更多种，任选3、4、5、6、7、8或9种或更多种针对该CLL的疗法进行治疗；和/或

已经用激酶抑制剂治疗了该受试者的CLL，该激酶抑制剂任选为Btk的抑制剂，任选依鲁替尼；和/或

已经用单克隆抗体治疗了该受试者的CLL，该单克隆抗体特异性地结合至由该CLL的细胞表达或先前由该CLL的细胞表达的抗原；和/或

已经用venetoclax、包含氟达拉滨和利妥昔单抗的组合疗法、放射疗法和/或造血干细胞移植(HSCT)治疗了该受试者的CLL。

78.实施方案73-77中任一项的制品，其中该说明书规定该细胞疗法将被给予如下受试者，该受试者在用一种或多种针对该CLL的现有疗法治疗之后出现缓解后复发或变得难以治疗。

79.一种包含一个或多个剂量的细胞疗法和给予该细胞疗法的说明书的制品，每个剂量包含表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中：

该说明书规定了向患有非霍奇金淋巴瘤(NHL)的受试者给予的细胞的剂量；并且

80.一种包含一个或多个剂量的细胞疗法和给予该细胞疗法的说明书的制品，每个剂量包含表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中：

该说明书规定了给予一定数量的CAR表达细胞或一定数量的细胞，或规定了给予对应于所述指定数量的细胞或含有所述指定数量的细胞的一定量或体积的一种或多种制剂，其中待给予的指定数量的细胞包含一定数量以给予一剂细胞，该剂细胞包含(a)1 x10⁷或约1 x 10⁷个总细胞或总CAR表达细胞；(b)1.5 x 10⁸或约1.5 x 10⁸个总细胞或总CAR表达细胞，(c)不超过1 x 10⁷或不超过约1 x 10⁷个总细胞或总CAR表达细胞，(d)不超过1.5x 10⁸或不超过约1.5 x 10⁸个总细胞或总CAR表达细胞和/或(e)在1 x 10⁷或约1x10⁷个总细胞或总CAR表达细胞和1.5 x 10⁸或约1.5 x 10⁸个总细胞或总CAR表达细胞之间。

81.实施方案79的制品，其进一步包含与淋巴细胞清除疗法一起、在淋巴细胞清除疗法之后或与淋巴细胞清除疗法结合使用的说明书，该淋巴细胞清除疗法包括氟达拉滨。

82.实施方案79或实施方案81的制品，其中该说明书规定该细胞疗法将被给予如下受试者，该受试者：

被鉴定为或已经被鉴定为具有一种或多种细胞遗传学异常，任选地与高风险NHL相关；

被鉴定为或已经被鉴定为具有高风险的NHL；和/或

选自下组，该组由以下各项组成：侵袭性NHL、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤(TCHRBCL)、伯基特淋巴瘤、套细胞淋巴瘤(MCL)和/或滤泡性淋巴瘤(FL)；和/或

83.实施方案79-82中任一项的制品，其中该说明书规定该细胞疗法将被给予如下受试者，该受试者已经用除淋巴细胞清除疗法以外和/或除另一剂表达该CAR的细胞以外的两种或更多种，任选2、3或4种或更多种针对该NHL的疗法进行治疗。

84.实施方案79-83中任一项的制品，其中该说明书规定该细胞疗法将被给予如下受试者，该受试者在用一种或多种针对该NHL的现有疗法治疗之后出现缓解后复发或变得难以治疗。

85.实施方案73-84中任一项的制品，其中该淋巴细胞清除疗法：

(i)进一步包括给予除氟达拉滨以外的另一种化学治疗剂，其任选地为环磷酰胺；和/或

(ii)包括以约30-60mg/kg给予环磷酰胺，任选每天一次持续一天或两天，和/或以约25mg/m²给予氟达拉滨，每天给予持续3-5天。

86.实施方案73-84中任一项的制品，其中该说明书规定淋巴细胞清除疗法在给予该细胞疗法之前至少48小时或至少约48小时或在给予该细胞疗法之前在48小时或约48小时和96小时或约96小时之间的时间开始。

87.实施方案73-86中任一项的制品，其中该说明书规定以确定比例的表达该CAR的CD4⁺细胞与CD8⁺细胞给予该细胞疗法，或规定给予对应于这种确定比例的一定量或体积的一种或多种制剂，或包括具有这种比例的细胞的制剂，或包含这种比例的表达该CAR的细胞和/或这种比例的CD4⁺细胞与CD8⁺细胞，该比例任选为大约1:1或在大约1:3和大约3:1之间。

88.实施方案73-87中任一项的制品，其中该说明书进一步规定该细胞疗法用于肠胃外给药，任选静脉内给药。

89.实施方案73-88中任一项的制品，其中该说明书进一步规定在门诊环境中和/或在无需使该受试者住院过夜或连续多天的情况下和/或无需使该受试者住院一天或多天的情况下该细胞疗法将被给予或可被给予该受试者。

90.实施方案73-89中任一项的制品，其中该细胞疗法包含从该受试者获得的原代T细胞。

91.实施方案89的制品，其中该T细胞对于受试者是自体同源的。

92.实施方案91的制品，其中该T细胞对于受试者是同种异体的。

93.实施方案73-92中任一项的制品，其中CAR包含对该抗原具有特异性的scFv、跨膜结构域、衍生自任选为4-1BB的共刺激分子的细胞质信号传导结构域以及衍生自任选为CD3ζ的含有主信号传导ITAM的分子的细胞质信号传导结构域。

94.实施方案73-93中任一项的制品，其中CAR包含各自任选地衍生自人IgG的间隔区和/或铰链区。

95.实施方案93或实施方案94的制品，其中该抗原是B细胞抗原，其任选地是CD19。

96.实施方案73-95中任一项的制品，其中：

并且其中：

97.一种包含表达特异性地结合至慢性淋巴细胞白血病(CLL)的靶抗原的嵌合抗原受体(CAR)的细胞的组合物，其用于治疗患有或怀疑患有CLL的受试者，其中该治疗包括向该受试者给予一剂表达该CAR的细胞，所述剂量包含(a)2 x 10⁵或约2 x 10⁵个细胞/公斤受试者体重(细胞/kg)，(b)2 x 10⁶或约2 x 10⁶个细胞/kg，(c)不超过2 x 10⁶或约2 x 10⁶个细胞/kg，(d)不超过2 x 10⁵或约2 x 10⁵个细胞/kg和/或(e)在2 x 10⁵或约2 x 10⁵个细胞/kg和2 x 10⁶或约2 x 10⁶个细胞/kg之间，

98.一种包含表达特异性地结合至慢性淋巴细胞白血病(CLL)的靶抗原的嵌合抗原受体的细胞的组合物，其用于治疗患有或怀疑患有CLL的受试者，其中该治疗包括向该受试者给予一剂表达该CAR的细胞，所述剂量包含(a)1 x 10⁷或约1 x 10⁷个总细胞或总CAR表达细胞，(b)1.5 x 10⁸或约1.5 x 10⁸个总细胞或总CAR表达细胞，(c)不超过1 x 10⁷或不超过约1 x 10⁷个总细胞或总CAR表达细胞，(d)不超过1.5 x 10⁸或不超过约1.5 x 10⁸个总细胞或总CAR表达细胞和/或(e)在1 x 10⁷或约1 x 10⁷个总细胞或总CAR表达细胞和1.5 x10⁸或约1.5 x 10⁸个总细胞或总CAR表达细胞之间，

99.实施方案97或实施方案98的用途，其中该组合物用于治疗如下受试者，其中在给予该剂细胞时或给予该剂细胞之前：

该受试者被鉴定为或已经被鉴定为患有高风险CLL；和/或

该受试者被鉴定为或已经被鉴定为患有髓外疾病；和/或

100.实施方案97-99中任一项的用途，其中该组合物用于治疗如下受试者，其中在给予该剂细胞之前该受试者已经用除淋巴细胞清除疗法以外和/或除另一剂表达该CAR的细胞以外的两种或更多种，任选3、4、5、6、7、8或9种或更多种针对该CLL的疗法进行治疗。

101.实施方案97-100中任一项的用途，其中该组合物用于治疗如下受试者，其中在给予该剂细胞之前该受试者已经用除另一剂表达该CAR的细胞以外或除另一剂表达该CAR的细胞和预处理疗法以外的两种或更多种，任选3、4、5、6、7、8或9种或更多种针对该CLL的疗法进行治疗。

102.实施方案97-101中任一项的用途，其中该组合物用于治疗如下受试者，其中在给予该剂细胞之前已经用激酶抑制剂治疗了该受试者的CLL，该激酶抑制剂任选为Btk的抑制剂，任选依鲁替尼。

103.实施方案97-102中任一项的用途，其中该组合物用于治疗如下受试者，其中在给予该剂细胞之前已经用单克隆抗体治疗了该受试者的CLL，该单克隆抗体特异性地结合至由该CLL的细胞表达或先前由该CLL的细胞表达的抗原。

104.实施方案97-102中任一项的用途，其中该组合物用于治疗如下受试者，其中在给予该剂细胞之前已经用venetoclax、包含氟达拉滨和利妥昔单抗的组合疗法、放射疗法和/或造血干细胞移植(HSCT)治疗了该受试者的CLL。

105.实施方案97-102中任一项的用途，其中该组合物用于治疗如下受试者，其中在给予该剂细胞时或紧临给予该剂细胞之前，该受试者在用一种或多种针对该CLL的现有疗法治疗之后出现缓解后复发或变得难以治疗。

106.一种包含表达特异性地结合至非霍奇金淋巴瘤(NHL)的靶抗原的嵌合抗原受体(CAR)的细胞的组合物，其用于治疗患有或怀疑患有NHL的受试者，其中该治疗包括向该受试者给予一剂表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，该嵌合抗原受体特异性地结合至由该NHL表达的靶抗原，其中该治疗包括向该受试者给予一剂表达该CAR的细胞，所述剂量(i)包含(a)2 x 10⁵或约2 x 10⁵个细胞/公斤受试者体重(细胞/kg)，(b)2 x 10⁶或约2 x 10⁶个细胞/kg，(c)不超过2 x 10⁶或不超过约2 x 10⁶个细胞/kg，(d)不超过2 x 10⁵或不超过约2 x10⁵个细胞/kg和/或(e)在2 x 10⁵或约2 x 10⁵个细胞/kg和2 x 10⁶或约2 x 10⁶个细胞/kg之间，并且(ii)包含确定比例的表达该CAR的CD4⁺细胞与表达该CAR的CD8⁺细胞和/或确定比例的CD4⁺细胞与CD8⁺细胞，该比例任选地为大约1:1或在大约1:3和大约3:1之间，

107.一种包含表达特异性地结合至非霍奇金淋巴瘤(NHL)的靶抗原的嵌合抗原受体(CAR)的细胞的组合物，其用于治疗患有或怀疑患有NHL的受试者，其中该治疗包括向该受试者给予一剂表达该CAR的细胞，所述剂量(i)包含(a)1 x 10⁷或约1 x 10⁷个总细胞或总CAR表达细胞，(b)1.5 x 10⁸或约1.5 x 10⁸个总细胞或总CAR表达细胞，(c)不超过1 x 10⁷或约1 x 10⁷个总细胞或总CAR表达细胞，(d)不超过1.5 x 10⁸或约1.5 x 10⁸个总细胞或总CAR表达细胞和/或(e)在1 x 10⁷或约1 x 10⁷个总细胞或总CAR表达细胞和1.5 x 10⁸或约1.5 x 10⁸个总细胞或总CAR表达细胞之间，并且(ii)包含确定比例的表达该CAR的CD4⁺细胞与表达该CAR的CD8⁺细胞和/或确定比例的CD4⁺细胞与CD8⁺细胞，该比例任选地为大约1:1或在大约1:3和大约3:1之间，

108.实施方案106或实施方案107的用途，其中该组合物用于治疗如下受试者，其中在给予该剂细胞时或给予该剂细胞之前：

该受试者被鉴定为或已经被鉴定为患有高风险NHL；和/或

109.实施方案106-108中任一项的用途，其中该组合物用于治疗如下受试者，其中在给予该剂细胞之前该受试者已经用除淋巴细胞清除疗法以外和/或除另一剂表达该CAR的细胞以外的两种或更多种，任选2、3或4种或更多种针对该NHL的疗法进行治疗。

110.实施方案106-109中任一项的用途，其中该组合物用于治疗如下受试者，其中在给予该剂细胞时或紧临给予该剂细胞之前，该受试者在用一种或多种针对该NHL的现有疗法治疗之后出现缓解后复发或变得难以治疗。

111.实施方案97-110中任一项的用途，其中该淋巴细胞清除疗法：

112.实施方案97-101中任一项的用途，其中该治疗包括经由门诊递送来给予该细胞剂量和/或淋巴细胞清除疗法。

113.实施方案97-112中任一项的用途，其中该组合物和/或该剂细胞包含确定比例的表达该CAR的CD4+细胞与表达该CAR的CD8+细胞，和/或确定比例的CD4+细胞与CD8+细胞，该比例任选为大约1:1或在大约1:3和大约3:1之间。

114.实施方案97-113中任一项的用途，其中该组合物和/或该剂细胞被配制用于肠胃外给药，任选静脉内给药。

115.实施方案97-114中任一项的用途，其中该抗原是B细胞抗原，其任选地是CD19。

116.实施方案97-115中任一项的用途，其中CAR包含对该抗原具有特异性的scFv、跨膜结构域、衍生自任选为4-1BB的共刺激分子的细胞质信号传导结构域以及衍生自任选为CD3ζ的含有主信号传导ITAM的分子的细胞质信号传导结构域。

117.实施方案97-116中任一项的用途，其中CAR包含各自任选地衍生自人IgG的间隔区和/或铰链区。

118.实施方案97-117中任一项的方法，其中：

并且其中：

VII.定义

术语“多肽”和“蛋白质”可互换使用，是指氨基酸残基的聚合物，并且不限于最小长度。多肽(包括提供的受体和其他多肽)例如接头或肽可包含氨基酸残基，包括天然和/或非天然氨基酸残基。该术语还包括多肽的表达后修饰，例如糖基化、唾液酸化、乙酰化和磷酸化。在一些方面，多肽可含有关于原生或天然序列的修饰，只要蛋白质保持所需活性即可。这些修饰可能是故意而为的，如通过定点诱变，或者可能是偶然发生的，如通过产生蛋白质的宿主的突变或通过由于PCR扩增而引起的错误。

如本文所用，“受试者”是哺乳动物如人或其他动物，并且通常是人。在一些实施方案中，给予一种药剂或多种药剂、细胞、细胞群或组合物的受试者(例如患者)是哺乳动物，通常是灵长类动物如人。在一些实施方案中，灵长类动物是猴子或猿。受试者可以是男性或女性，并且可以是任何合适的年龄，包括婴儿、少年、青少年、成年人和老年受试者。在一些实施方案中，受试者是非灵长类哺乳动物如啮齿动物。

如本文所用，“治疗(treatment)”(及其语法变体如“治疗”(“treat”或“treating”))是指疾病或病况或病症或症状、不良反应或结果或与之相关的表型的完全或部分改善或减轻。理想的治疗效果包括但不限于预防疾病的发生或复发、症状的缓解、疾病的任何直接或间接病理后果的减少、预防转移、降低疾病进展的速度、改善或缓解疾病状态以及缓解或改善预后。该术语并不意味着完全治愈疾病或完全消除任何症状或所有症状或结果的一种或多种影响。

如本文所用，“延迟疾病的发展”意指推迟、阻碍、减缓、延缓、稳定、抑制和/或顺延疾病(如癌症)的发展。此延迟可以具有不同的时间长度，这取决于疾病的历史和/或被治疗的个体。如对于本领域技术人员显而易见的，足够或显著的延迟实际上可以涵盖预防，使个体不会患上疾病。例如，可延迟晚期癌症如转移的发展。

如本文所用，“预防”包括提供关于受试者中疾病的发生或复发的预防，该受试者可能易患该疾病但尚未被诊断患有该疾病。在一些实施方案中，所提供的细胞和组合物用于延迟疾病的发展或延缓疾病的进展。

如本文所用，“抑制”功能或活性是当与除了感兴趣的条件或参数以外的原本相同的条件相比时，或者与另一种条件相比时，减少功能或活性。例如，与不存在该细胞的情况下的肿瘤生长速率相比，抑制肿瘤生长的细胞降低了肿瘤的生长速率。

在给药的情况下，药剂(例如药物制剂、细胞或组合物)的“有效量”是指在必要的剂量/量下和必要的时间段内有效实现所需结果(例如治疗或预防结果)的量。

药剂(例如药物制剂或细胞)的“治疗有效量”是指在必要的剂量下和必要的时间段内有效实现所需治疗结果(如针对治疗疾病、病况或病症)和/或治疗的药代动力学或药效动力学作用的量。治疗有效量可以根据诸如疾病状态、年龄、性别和受试者体重以及所给予的细胞群等因素而变化。在一些实施方案中，所提供的方法包括以有效量(例如治疗有效量)给予该细胞和/或组合物。

“预防有效量”是指在必要的剂量下和必要的时间段内有效实现所需预防结果的量。通常但不是必要地，因为在疾病之前或疾病的早期阶段在受试者中使用预防剂量，所以预防有效量将小于治疗有效量。在肿瘤负荷较低的情况下，在一些方面，预防有效量将高于治疗有效量。

如本文使用的术语“约”是指本技术领域的技术人员容易知道的相应值的一般误差范围。本文对“约”值或参数的引用包括(并描述)涉及该值或参数本身的实施方案。

如本文所用，单数形式“一个”、“一种”以及“该”包括复数指示物，除非上下文另有明确规定。例如，“一个”或“一种”意指“至少一个”或“一个或多个”。

贯穿本公开内容，所要求保护的主题的各个方面以范围形式呈现。应当理解，范围形式的描述仅仅是为了方便和简洁，并且不应该被解释为对所要求保护的主题的范围的僵硬限制。因此，应当认为范围的描述具体公开了所有可能的子范围以及该范围内的各个数值。例如，在提供一系列值的情况下，应当理解，在该范围的上限和下限之间的每个中间值以及在该范围内的任何其他所述或中间值包含在所要求保护的主题内。这些更小范围的上限和下限可以独立地被包括在更小范围之内，并且也被涵盖在所要求保护地主题之内，服从于在所陈述范围内任何确切排除的限制。在所陈述的范围包括一个或两个限制时，排除了那些被包括的限制的任一个或两者的范围也被包括在所要求保护的主题之内。无论范围的广度如何，这都适用。

如本文所用，组合物是指两种或更多种产物、物质或化合物(包括细胞)的任何混合物。它可以是溶液、悬浮液、液体、粉末、糊剂、水性的、非水性的或其任何组合。

如本文所用，当提及一种或多种特定细胞类型或细胞群时，“富集”是指例如与组合物中的细胞总数或组合物体积相比或者相对于其他细胞类型，如通过基于该群体或细胞表达的标志物的阳性选择，或通过基于不存在于待消耗的该细胞群或细胞上的标志物的阴性选择来增加该细胞类型或群体的数量或百分比。该术语不需要从组合物中完全去除其他细胞、细胞类型或群体，并且不需要如此富集的细胞在富集的组合物中以等于或甚至接近100％存在。

如本文所用，细胞或细胞群对于特定标志物呈“阳性”的陈述是指特定标志物(通常是表面标志物)在细胞上或细胞中的可检测存在。当提及表面标志物时，该术语是指通过流式细胞术检测的表面表达的存在，例如通过用特异性地结合至标志物的抗体染色并检测所述抗体，其中可通过流式细胞术以如下水平检测到染色：以基本上高于检测到的染色的水平，在原本同样的条件下执行与同种型匹配的对照或荧光减1(FMO)门控对照相同的程序，和/或以与对于已知对标志物呈阳性的细胞的基本上相似的水平，和/或以基本上高于已知对标志物呈阴性的细胞的水平。

如本文所用，细胞或细胞群对于特定标志物呈“阴性”的陈述是指在特定标志物(通常是表面标志物)的细胞上或细胞中不存在实质上可检测的存在。当提及表面标志物时，该术语是指通过流式细胞术检测到不存在表面表达，例如通过用特异性地结合至该标志物的抗体染色并检测所述抗体，其中通过流式细胞术检测不到以下水平下的染色：以基本上高于检测到的染色的水平，在原本同样的条件下执行与同种型匹配的对照或荧光减1(FMO)门控对照相同的程序，和/或以与对于已知对标志物呈阳性的细胞的基本上相似的水平，和/或以基本上类似于已知对标志物呈阴性的细胞的水平。

如本文所用，术语“载体”是指这样的核酸分子，它传播与其连接的另一个核酸。该术语包括作为自我复制核酸结构的载体以及掺入已引入了其的宿主细胞的基因组中的载体。某些载体能够指导它们可操作连接的核酸的表达。此类载体在本文中称为“表达载体”。

除非另外定义，否则本文使用的所有技术术语、符号和其他技术术语和科学术语或用词旨在具有与所要求保护的主题所属领域的普通技术人员通常所理解的相同意义。在一些情况下，为了清楚和/或为了便于引用而在本文中定义具有通常理解的含义的术语，并且本文中包含的这些定义不必被解释为代表与本领域通常所理解的意义有实质性差异。

本申请中提及的所有出版物，包括专利文件、科学文章和数据库，出于所有目的通过引用它们的整体并入，其程度如同每个单独的出版物通过引用单独并入。如果本文所述的定义与通过引用并入本文的专利、申请、公开申请和其他出版物中阐述的定义相反或不一致，则本文所述的定义优先于通过引用并入本文的定义。

这里使用的章节标题仅用于组织目的，而不应解释为限制所描述的主题。

实施例

以下实施例被包括在内仅用于说明目的，并不旨在限制本发明的范围。

实施例1：

用CD19特异性的嵌合抗原受体(CAR)治疗患有复发或难治性(R/R)CD19⁺慢性淋巴细胞白血病(CLL)的受试者

将表达CD19特异性的嵌合抗原受体(CAR)的自体T细胞给予患有复发或难治性(R/R)CD19⁺慢性淋巴细胞白血病(CLL)的十三(13)名成年受试者。受试者的年龄范围为四十(40)至七十三(73)，平均年龄为六十一(61)。基于淋巴细胞减少、循环肿瘤、先前移植或试验扩张，没有排除任何受试者。该组受试者展现出高风险的细胞遗传学(10/13(77％)del17p；8/13(62％)复杂核型)；12/13(92％)展现出髓外疾病。所有受试者先前已用一种或多种针对CLL的疗法进行治疗(平均数为五(5)，且范围为三(3)至九(9)，现有治疗线)，包括在每种情况下采用依鲁替尼(七(7)(54％)名患者难以治疗，且两(2)(15％)名患者不耐受)。就在治疗之前，所有受试者的骨髓中异常B细胞的平均百分比为66％(范围为0.4％至90％)。

该CAR包括CD19特异性的scFv(在VL-接头-VH方向)，以及衍生自FMC63的可变区、IgG铰链区、跨膜区和衍生自人41BB和CD3ζ的细胞内信号传导结构域。该构建体进一步编码截短的EGFR(EGFRt)，其用作CAR表达的替代标志物；通过T2A跳跃序列将EGFRt编码区与CAR序列分隔开。在给予细胞之前，患者接受白细胞去除术；通过基于免疫亲和力的富集方法选择CD4+和CD8+群体，用含有CAR构建体的病毒载体转导，并在培养物中扩增十五(15)天。为了制备CAR+T细胞，将CD8+中枢记忆T细胞群工程化，不同的是在患有严重淋巴细胞减少的患者中将大量CD8+T细胞工程化，从而产生低CD8+中枢记忆T细胞。在接受由CD4+T细胞和大量CD8+T细胞或CD8+中枢记忆T细胞制备的CAR+T细胞的患者之间没有观察到临床结果的差异。

在CAR+T细胞输注前至少四十八(48)小时(至最长九十六(96))小时开始，受试者接受淋巴细胞清除化疗，其用(a)含或不含依托泊苷的环磷酰胺(Cy，60mg/kg)(2/13受试者)或(b)环磷酰胺(Cy，60mg/kg)与氟达拉滨组合(flu，每天25mg/m²持续3-5天)(cy/flu，11/13受试者)。

用于给予的细胞通常以大约1:1的CAR⁺CD4⁺T细胞与CAR⁺CD8⁺T细胞比例配制。成功地为生产了针对所有受试者的治疗组合物。对于1/13受试者，生产了少于目标剂量(2 x10⁶/kg CAR+)的细胞。

以三种不同剂量水平之一(每公斤(kg)受试者体重2 x 10⁵(N＝4)、2 x 10⁶(N＝8)或2 x 10⁷(N＝1)个CAR+T细胞)向该受试者输注具有大约1:1比例的CD8⁺CAR⁺T细胞与CD4⁺CAR-T细胞的组合物。淋巴细胞清除疗法和T细胞输注在门诊基础上给予。在一名CLL患者在接受2 x 107个CAR+T细胞/kg后产生4级CRS和3级神经毒性之后，为随后的CLL患者选择最大剂量2 x 10⁶个CAR+T细胞/kg。

在给予CAR+T细胞组合物之前和之后4周，患者进行全身成像以及诊断质量CT扫描。通过慢性淋巴细胞白血病国际研讨会(IWCLL)应答标准(Hallek,等人,Blood 2008,Jun15；111(12):5446-5456；IWCLL(2008))确定应答。将淋巴结肿瘤体积评估为在诊断质量CT扫描中鉴定的6个最大指数淋巴结的横截面积的总和。在一些情况下，还进行了通过Lugano标准(Cheson等人,JCO September 20,2014vol.32no.27 3059-3067)的全身PEG成像。

通过在淋巴细胞清除前在患有骨髓疾病的那些受试者中输注CAR-T细胞之后4周和给予CAR+T细胞组合物之后4周获得的骨髓抽吸物和活检来评估骨髓应答。在骨髓上进行形态学分析和高分辨率流式细胞术，并对具有已鉴定的细胞遗传学异常的患者进行常规核型分析和FISH。对来自在CAR-T细胞输注后4周通过流式细胞术没有可检测到的骨髓疾病和在淋巴细胞清除之前具有鉴定的恶性克隆序列的患者的骨髓进行IGH深度测序(AdaptiveBiotechnologies)。在CAR-T细胞输注后2周以及1、2、3、6和12个月对血液进行高分辨率流式细胞术。

使用美国国家癌症研究所-常见毒性标准第4.03版(NCI-CTCAE v4.03)对毒性进行分级，不同的是细胞因子释放综合征如Lee等人,Blood.2014；124(2):188-95中所述进行分级。

在用环磷酰胺和氟达拉滨(cy/flu)联合预处理的十一(11)名受试者中，客观应答率(ORR)为91％(10/11受试者)，并且如通过流式细胞术测量的，观察到10/11受试者(91％)对于骨髓中的肿瘤细胞呈阴性，并且如通过Lugano标准测量的，观察到11名中有5名(45％)实现完全缓解(CR)。在未经cy/flu预处理的两名受试者中，ORR为50％(1/2受试者)，其中如通过流式细胞术测量的，观察到2名受试者中有1名对于骨髓中的肿瘤细胞呈阴性，但通过Lugano标准，未观察到实现CR。在评估为实现部分缓解(PR)的那两名受试者中，观察到最大17-18mm的淋巴结。在已经实现CR的四(4)名受试者中，在治疗后进行骨髓的IGH深度测序。在4/4(100％)的这些受试者中，在骨髓中未检测到指数克隆。

用环磷酰胺预处理的11名受试者中的无进展存活率(PFS)和总存活率(OS)示于图1A和图1B中，实现CR的受试者组与未实现CR的受试者组具有单独曲线。已实现CR的受试者未达到平均PFS；PFS范围为自第一次CAR+T细胞输注3+到19+个月。

在该研究中，13名受试者中的百分之二十三(23％)展现出严重的细胞因子释放综合征(CRS)，根据Lee等人,Blood.2014；124(2):188-95所评估的；23％展现出3级或更高级的神经毒性。

结果证明，以确定的CD4+/CD8+比例给予CD19特异性CAR+-T细胞导致在大多数患有高风险复发/难治性CLL的受试者中的持久CR。

实施例2

用CD19特异性的嵌合抗原受体(CAR)治疗患有非霍奇金淋巴瘤(NHL)的受试者

将表达CD19特异性的嵌合抗原受体(CAR)的自体T细胞给予患有CD19⁺非霍奇金淋巴瘤(NHL)的四十一(41)名成年受试者。受试者的年龄范围为二十八(28)到七十(70)，平均年龄为五十六(56)。基于淋巴细胞减少、循环肿瘤、先前移植或试验扩张，没有排除任何受试者。该组受试者展现出多种疾病类型，包括侵袭性NHL(30/41受试者，包括弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤(TCHRBCL)和伯基特淋巴瘤)、套细胞淋巴瘤(MCL；5/41受试者)和滤泡性淋巴瘤(FL；6/41受试者)。所有受试者先前均已进行治疗，其中平均数为四(4)次治疗且范围为一(1)至十一(11)次现有治疗，在所有受试者中，二十七(27)名受试者已用大于或等于4次现有疗法进行治疗。41名受试者中的十九(19)名已经接受了现有的自体和/或异体造血干细胞移植(HSCT)。

该CAR包括抗CD19scFv(在VL-接头-VH方向)，以及衍生自FMC63的可变区、IgG铰链区、衍生自人CD28的跨膜区和衍生自人41BB和CD3ζ的细胞内信号传导结构域。该构建体进一步编码截短的EGFR(EGFRt)，其用作CAR表达的替代标志物；通过T2A跳跃序列将EGFRt编码区与CAR序列分隔开。在给予细胞之前，患者接受白细胞去除术；通过基于免疫亲和力的富集方法选择CD4+和CD8+群体，用含有CAR构建体的病毒载体转导，并在培养物中扩增15天。用于给予的细胞通常在给予前以大约1:1的CD4⁺T细胞与CD8⁺T细胞比例进行配制。成功地为生产了针对所有受试者的治疗组合物。

在CAR+T细胞输注前至少四十八(48)(至最长九十六(96))小时开始，39名受试者接受淋巴细胞清除化疗，其用(a)含或不含依托泊苷的环磷酰胺(Cy，60mg/kg)(12/39受试者)或(b)环磷酰胺(Cy，60mg/kg)与氟达拉滨组合(flu，每天25mg/m²持续3-5天)(cy/flu，27/39受试者)。

以三种不同剂量水平之一(每公斤(kg)受试者体重2 x 10⁵(N＝5)、2 x 10⁶(N＝27)或2 x 10⁷(N＝9)个CAR+T细胞)向该受试者输注具有大约1:1比例的CD8⁺CAR⁺T细胞与CD4⁺CAR-T细胞的组合物。淋巴细胞清除疗法和T细胞输注在门诊基础上给予。在该研究中，最大耐受剂量是剂量水平2(2 x 10⁶个CAR+T细胞/kg)。

在用环磷酰胺和氟达拉滨(cy/flu)预处理的二十七(27)名受试者中，客观应答率(ORR)为74％(20/27名受试者)。观察到27名中的12名(44％)实现完全缓解(CR)。

在用cy/flu预处理的27名受试者中有二十(20)名受试者跨越上文概述的所有疾病亚型而被给予剂量水平2(2 x 10⁶个CAR+T细胞/kg)。在这些受试者中，ORR为80％(16/20)，并且观察到20名受试者中的10名(50％)实现CR。患有侵袭性淋巴瘤的三十(30)名受试者中的十六(16)名用cy/flu疗法进行预处理且被给予剂量水平2。在这16名受试者中，ORR为81％(13/16受试者)且八(8)名受试者(50％)实现CR。6名FL患者中的两(2)名用cy/flu预处理且被给予剂量水平2。在这两名受试者中，ORR为50％(1/2)且1名受试者(50％)实现CR。五(5)名患有MCL的受试者中的两(2)名用cy/flu预处理且被给予剂量水平2。在这些受试者中，ORR为100％(2/2)且1名受试者(50％)实现CR。

用环磷酰胺和氟达拉滨(cy/flu)预处理且被给予2 x 10⁶个CAR+T细胞/kg的20名受试者中的无进展存活率(PFS)和总存活率(OS)示于图2A和图2B中，实现CR的受试者与未实现CR的受试者具有单独曲线。实现CR的受试者未达到平均PFS；PFS范围为自第一次CAR+T细胞输注3到11+个月。未实现CR的受试者的平均PFS为4.1个月。

在该研究中，在所有剂量水平下的受试者中的百分之十七(17％)的受试者展现出严重的细胞因子释放综合征(CRS)，根据Lee等人,Blood.2014；124(2):188-95评估的；百分之五(5％，2/41)展现出5级CRS，且20％展现出3级或更高级的神经毒性。在用cy/flu预处理后给予2 x 10⁶个CAR+T细胞/kg的受试者(20名受试者)中，仅百分之十(10％)展现出严重的细胞因子释放综合征(CRS)且仅10％展现出3级或更高级的神经毒性。

实施例3

用CD19特异性的嵌合抗原受体(CAR)治疗患有复发或难治性(R/R)CD19⁺CLL的受试者：附加患者

在实施例1中描述的研究的扩展中，评估了具有复发或难治性(R/R)CD19+慢性淋巴细胞白血病(CLL)的附加受试者。向十八(18)名成年受试者给予表达CD19特异性的嵌合抗原受体(CAR)的自体T细胞，并如下所述进行评估。

受试者的年龄范围为四十(40)到七十三(73)，平均年龄为六十(60)。十二(12)名受试者具有复杂核型且十一(11)名受试者具有17p缺失。所有受试者均患有髓外疾病，且两(2)名患有中枢神经系统(CNS)疾病。所有受试者先前已用一种或多种针对CLL的疗法进行治疗(平均数为五(5)，且范围为三(3)至九(9)，现有治疗线)，包括在每种情况下采用依鲁替尼(十一(11)(61％)名患者难以治疗，且三(3)(17％)名患者不耐受)。三(3)名(17％)受试者在先前的同种异体干细胞移植中失败，且四(4)名(22％)受试者对venetoclax难以治疗。在接受含有氟达拉滨和利妥昔单抗的消耗化学疗法方案后，所有受试者也难以治疗或已经复发。就在治疗之前，所有受试者的骨髓中异常B细胞的平均百分比为77％(范围为0.4％至90％)。

制备自体CAR-T细胞用于所有受试者并如实施例1所述给予受试者，但治疗附加的受试者。16/18受试者接受具有大约1:1的CAR⁺CD4⁺T细胞与CAR⁺CD8⁺T细胞比例的细胞组合物。受试者以如下不同剂量水平输注细胞组合物：(2 x 10⁵(N＝4)；2 x 10⁶(N＝13)；或2 x10⁷(N＝1)个CAR+T细胞/公斤(kg)受试者体重)。

在CAR-T细胞输注之前，经治疗的受试者接受淋巴细胞清除化学疗法，其用(a)环磷酰胺30-60mg/kg x 1天与氟达拉滨25mg/m²/天x 3天的组合(cy/flu，15/18受试者)，(b)氟达拉滨25mg/m²/天x 3天(flu，2/18受试者)或(c)环磷酰胺60mg/kg(cy，1/18受试者)。患有持续性疾病的四(4)名受试者接受高于第一次输注10倍的剂量下的第二周期的淋巴消耗化学疗法和CAR+T细胞。

在最后一次CAR+T细胞输注后4周如实施例1中所述评估受试者。

十七名受试者完成了应答和毒性评估。在评估的十七(17)名受试者中，客观应答率(ORR)为76％(13/17受试者；8名部分缓解(PR)且5名完全缓解(CR))。基于淋巴结尺寸标准(IWCLL 2008)具有PR的两(2)名受试者在治疗后具有阴性PET扫描。在十三(13)名依鲁替尼难治性或不耐受的受试者中，ORR为77％(10/13受试者，7PR和3CR)。在四(4)名venetoclax难治性受试者中，ORR为50％(2/4受试者，2PR)。在那些未经过cy/flu组合预处理的三(3)名受试者中，ORR为33％(1/3受试者)。

在第28天，在接受cy/flu淋巴细胞清除和2 x 10⁵或2 x 10⁶个CAR+T细胞/kg的13名受试者中，十一(11)名(85％)展现出通过流式细胞术的骨髓疾病的完全消除；患有淋巴结疾病的10/13(77％)展现出PR或CR；1/13(8％)具有混合的应答；并且2/13(15％)展现出进行性疾病(PD)，

在已经实现CR的四(4)名受试者中，进行了骨髓的IGH深度测序。在4/4(100％)的这些受试者中未检测到恶性序列。

在接受cy/flu淋巴细胞清除和2 x 10⁵或2 x 10⁶个CAR+T细胞/kg的十三(13)名受试者中的无进展存活率(PFS)示于图3中，实现CR的受试者组与未实现CR的受试者组具有单独曲线。该组的总存活率(OS)为100％。在平均随访8.4个月后，实现CR的受试者没有复发或死亡。结果还表明，实现CR的受试者在血液中展现出较高的CD8+(p＝0.006)而非CD4+CAR+T细胞的峰值百分比。在一些无应答者中观察到稳健的CAR-T细胞扩增。

结果进一步证明，给予以确定的CD4+/CD8+比例下的CD19特异性CAR+-T细胞导致患有高风险复发/难治性CLL的大多数受试者(如依鲁替尼治疗失败的患者)中的高应答率和持久CR。

实施例4

用CD19特异性的嵌合抗原受体(CAR)治疗患有复发或难治性(R/R)CD19⁺CLL的受试者：其他患者

A.受试者和治疗

在实施例1和实施例3中描述的研究的扩展中，评估了具有复发或难治性(R/R)CD19+慢性淋巴细胞白血病(CLL)的其他受试者。总计二十四(24)名已接受先前疗法的成年人受试者在淋巴细胞清除后被给予表达CD19特异性的嵌合抗原受体(CAR)的自体T细胞，并如实施例1和实施例3和以下所述进行评估。

如表4所述，受试者的年龄范围为40至73岁，平均年龄为61岁。十六(16)名受试者具有复杂核型，且14名受试者具有17p缺失。八(8)名受试者具有高风险组织学。二十三(23)名受试者患有髓外疾病。所有受试者先前已采用一种或多种针对CLL的其他疗法治疗，其中平均5(范围为3-9)个现有治疗线，其在每种情况下包括用依鲁替尼治疗(其中19(79％)难以治疗；3(13％)不耐受)。18名依鲁替尼难治性受试者中的九(9)名具有BTK或PLCG2突变(50％；BTK，n＝7；PLCG2，n＝2)。在淋巴消除前，所有受试者均停用依鲁替尼。四(4)名(17％)受试者在先前的同种异体干细胞移植中失败，且6名(25％)受试者对venetoclax难以治疗。就在治疗之前，所有受试者的骨髓中异常B细胞的平均百分比为61.6％(范围为0.0％-96％)。就在治疗之前，所有受试者的血液中的平均异常B细胞计数为1.1 x 10³/μL(范围为0.0-76.68 x 10³/μL)。

制备自体CAR-T细胞用于所有受试者并如实施例1和实施例3所述给予受试者，但治疗附加的受试者。24名受试者中的二十二(22)名接受了具有大约1:1的CAR⁺CD4⁺T细胞与CAR⁺CD8⁺T细胞比例的细胞组合物，并且2名患者接受低于靶标CD8+CAR-T细胞剂量(58.5％和56.3％)。受试者以如下不同剂量水平输注细胞组合物：(2 x 10⁵(N＝4)；2 x 10⁶(N＝19)；或2x10⁷(N＝1)个CAR+T细胞/公斤(kg)受试者体重。在CAR-T细胞输注之前，21名受试者接受淋巴细胞清除化学疗法，如表5中所述。经治疗的受试者接受淋巴细胞清除化学疗法，其用(a)环磷酰胺30-60mg/kg(1-2g/m²)x 1天与氟达拉滨25mg/m²/天x 3天的组合(cy/flu，18/24受试者)，(b)环磷酰胺60mg/kg(1-2g/m²)x 1与氟达拉滨25mg/m²/天x 5天的组合(cy/flu，1/24名受试者)，(c)氟达拉滨25mg/m²/天x 3天(flu，2/24受试者)，(d)环磷酰胺60mg/kg(cy，1/24受试者)或(e)500mg/m²x 3天与氟达拉滨25mg/m²/天x 3天的组合(cy/flu，2/24名受试者)。该研究中总计15名患者接受了Cy/Flu淋巴细胞清除和2 x 10⁶个CAR+T细胞。

*1名患者在再分期前死亡

患有持续性疾病的六(6)名受试者接受与第一次输注相同(N＝1)或高10倍的剂量(N＝5)的第二周期的淋巴细胞清除化学疗法和CAR+T细胞输注。

在白细胞分离术和淋巴细胞清除化学疗法之间的3周期间，6名患者需要高剂量皮质类固醇来控制进行性疾病，而另外2名患者需要治疗肿瘤相关的高钙血症。

B.对治疗的应答

在最后一次CAR+T细胞输注后4周如实施例1中所述评估受试者的应答。接受Cy/Flu淋巴细胞清除的二十一(21)名受试者的评估证明了如表8所示在输注后四周时高风险CLL患者的高应答率。通过以下方式测量受试者的应答：(a)骨髓分析；(b)PET-CT；(c)CLL标准国际研讨会(IWCLL)标准。

1.CAR-T细胞扩增和持久性

在CAR-T细胞输注后，通过流式细胞术在所有患者中检测血液中的CAR-T细胞以评估扩增和持久性。在接受环磷酰胺/氟达拉滨(Cy/Flu)淋巴细胞清除且输注2 x 10⁶个CAR-T细胞的受试者中，较大的CAR-T细胞扩增与骨髓中存在的异常B细胞百分比(r＝0.67，p＝0.006)、肿瘤横截面积(r＝0.57，p＝0.025)和血液中的绝对异常B细胞计数分别呈正相关，如图4A至图4C所示。此外，在预处理PEG扫描时患有嗜FDG疾病的那些受试者中CAR-T细胞扩增和SUVmax之间为负相关(图4D)。在被评估且未经历随后的同种异体HCT的所有患者(n＝11)中≥6个月时通过QPCR在血液中检测到CAR-T细胞。

在接受Cy/Flu淋巴细胞清除且输注2 x 10⁶个CAR-T细胞的受试者中，CAR-T细胞扩增与免疫检查点生物标志物CD200呈负相关(r＝-0.25，p＝0.4)，如图4E所示。CAR-T细胞扩增也与免疫检查点生物标志物PDL1和PDL2呈负相关。

2.淋巴结应答率

通过IWCLL标准在CAR-T细胞输注后4周评估二十三(23)名患者的淋巴结应答。在23名再分期的患者中，通过IWCLL淋巴结标准的CAR+T细胞输注后4周时的总体应答率(ORR)为70％(16/23)。在未接受Cy/Flu淋巴细胞清除的3名患者中，1名清除骨髓疾病，1名具有部分应答(PR)并且全部发展为进行性疾病。

在完成IWCLL分析且接受Cy/Flu淋巴细胞清除和单次CD19CAR-T细胞输注≤2 x10⁶个CAR-T细胞/kg的19名受试者中，在74％的患者(14/19)中观察到通过IWCLL标准的淋巴结应答[95％置信区间(CI)：49％-91％]：21％(4/19)CR；53％(10/19)PR。当仅考虑16名依鲁替尼难治性患者时观察到相似的应答率：69％(11/16)ORR[95％CI：41-89％]；25％(4/26)CR。

在可行的情况下，还在CAR-T细胞输注后4周通过PET成像评估淋巴结应答。PET-CT再分期后依鲁替尼难治性患者的CR率为64％(7/11)[95％CI：31％-89％]，Deauville得分为1-2。通过PET-CT比通过IWCLL能将更多患者分为CR(64％与25％)。实现通过IWCLL的PR且进行PET成像的5名患者中的四(4)名在CAR-T细胞输注后没有嗜FDG疾病。在CAR-T细胞输注后4周根据PET-CT患有稳定疾病的另一名患者随后在8周后的随访PET-CT时实现CR。

3.评估来自骨髓的恶性IGH序列

24名患者中有二十二名在治疗前患有骨髓疾病，且21名患者在CAR+T细胞给予后4周进行了骨髓评估。21名患者中的十七名(81％)没有通过高分辨率流式细胞术检测到骨髓疾病。在治疗前接受Cy/Flu淋巴细胞清除，给予≤2 x 10⁶个CAR-T细胞/kg且具有骨髓侵犯的受试者中，十七分之十五(15/17)通过高分辨率流式细胞术展现出骨髓疾病的清除(88％[95％CI：64％-99％])。依鲁替尼难治性患者亚组的流式细胞术阴性骨髓应答率相似(12/14；86％[95％CI：57％-98％])。FISH和常规核型分析通过流式细胞术未鉴定出没有可检测疾病的患者的残留CLL；然而，2名患者具有被认为是由于先前化学疗法对骨髓谱系的影响而产生的异常，并且一名患者具有持续存在的组织易位。

在Cy/Flu和≤2 x 10⁶个CAR-T细胞/kg输注后，通过流式细胞术骨髓清除的12名患者也具有治疗前在CLL细胞中鉴定的克隆恶性IGH序列。鉴定为具有克隆性恶性IGH序列的12名受试者中的七名(7/12；58％)在CAR-T细胞输注后4周通过IGH测序展现出骨髓疾病的清除。

在接受相同(n＝1)或10倍高的剂量(n＝5)的第二周期的淋巴细胞化学疗法和CAR-T细胞输注的6名患者中，2名(2/6；33％)实现CR(PET-CT)且通过流式细胞术和IGH测序，消除骨髓疾病。在第二次CAR-T细胞输注后，6名患者中的四名(4/6；67％)发展为CRS(2级≥3)，且一名出现可逆性神经毒性(3级)。

在4周初次再分期时实现通过IWCLL的PR的患者亚组没有通过PET-CT标准的嗜FDG疾病(4/5)，和/或在骨髓中没有可检测的恶性IGH序列(4/6)。这一观察结果与IWCLL标准可能低估CAR-T细胞所实现的应答的发现一致，该发现进一步由通过IWCLL应答测量的以下所述存活率数据支持，该存活率数据显示在实现PR或CR的患者中相等的PFS以及在一名患者的初始应答后持续的肿瘤退缩。

4.无进展存活率和总存活率

所有CLL患者的无进展存活率(PFS)和总存活率(OS)示于图5中。与未能应答(SD/PD)相比，淋巴结应答(通过IWCLL的CR/PR)与更长的PFS和OS相关。在接受CyFlu淋巴细胞清除和2 x 10⁵或2 x 10⁶个CAR-T细胞/kg的受试者中，通过IWCLL淋巴结应答标准测量的无进展存活率(PFS)和总存活率(OS)示于图6A中。图6B还描绘了在与图6A相同的受试者组(不同之处在于不包括在再分期前死亡的一名患者)中，通过IWCLL测量的PFS和OS。对于图6A和图6B，示出了实现CR的受试者组、实现PR的受试者组和无应答者的受试者组的单独曲线，并且表明实现通过IWCLL标准的PR的患者的PFS和OS不逊于实现CR的患者。在实现CR或PR的受试者中OS为100％。在第一次CAR-T细胞输注的24个月内，实现CR或PR的受试者没有死亡。

在CAR-T细胞输注后4周针对骨髓中恶性IGH序列的存在(检测到)或不存在(无)分析通过流式细胞术骨髓清除的患者的存活率。在14名受试者中，7名受试者具有通过IGH深度测序检测的恶性序列。PFS和OS示于图7中。与没有恶性序列的7名受试者相比，在具有恶性序列的7名受试者中PFS和OS降低。因此，与IWCLL应答无关，恶性IGH序列阴性的患者与具有持久恶性IGH序列的患者相比具有更好的PFS。两组均未达到平均OS。当分析仅限于通过IWCLL标准应答(CR/PR)的PFS患者时，也观察到通过IGH测序的骨髓清除对结果的正面影响(p＝0.063，IGHseq阳性的Mpfs＝8.5个月，IGHseq阴性的mPFS未达到)。

结果进一步证明，给予以确定的CD4+/CD8+比例下的CD19特异性CAR+-T细胞导致患有高风险复发/难治性CLL的大多数受试者(如依鲁替尼和/或venetoclax治疗失败的患者)中的高应答率和持久CR。此外，结果表明，在CAR T细胞治疗法后通过骨髓的IGH深度测序检测恶性序列可提供持久应答的早期体征。

C.毒性

评估二十四(24)名受试者的细胞因子释放综合征(CRS)和神经毒性的症状，分别如表6和表7所示。

将托珠单抗(4-8mg/kg I.V.)和地塞米松(10mg bid I.V.)给予需要在重症监护病房(ICU)进行管理或处于ICU护理评估下的患者。对患有2-3级细胞因子释放综合征(Lee等，Blood，2014)的患者开始干预，这些患者对静脉内液和/或低剂量血管加压药支持和2-3级神经毒性无反应。在接受治疗的患者中，从第4天进展至3-4级CRS的1名患者对于托珠单抗和地塞米松难以治疗，在第9天出现脑水肿，其对于西妥昔单抗和甘露醇难以治疗并且在CAR-T细胞输注后11天死亡。其他患者未出现大于2级的CRS，且只有4名患者出现3级神经毒性。仅6/24的患者展现出需要进行干预疗法的足够严重的临床症状，并且根据这些标准治疗的所有患者的CRS和神经毒性均消退，但患有致命脑水肿的患者除外。

实施例5

与基于高风险CLL患者中CAR T细胞扩增峰值的应答和/或毒性相关的因素

在评估扩增和针对复发或难治性(R/R)CD19⁺慢性淋巴细胞白血病(CLL)的CD19CAR-T细胞疗法的应答后，如上文实施例1、实施例3和实施例4所述，评估患有复发或难治性(R/R)CD19+慢性淋巴细胞白血病(CLL)的受试者的扩增和应答。

输注后升高的CD4+或CD8+CAR-T细胞计数峰值与高风险CLL受试者中更好的骨髓应答相关，如通过CAR-T细胞输注后4周在骨髓中恶性IGH序列的存在(检测到)或不存在(无)所评估的(图8)。在通过流式细胞术最终骨髓清除的患者中CD4⁺/EGFRt⁺和CD8⁺/EGFRt⁺CAR-T细胞计数峰值高于未能从骨髓中消除CLL的患者(图9A)，并且在通过流式细胞术实现CR且在骨髓中没有检测到恶性IGH序列的患者中这些也高于通过流式细胞术具有CR与可检测到的恶性IGH序列的患者(图9B)。

生成了概率曲线并描绘于图10A和图10B中，该概率曲线描绘了通过与血液中的CD4+/EGFRt⁺和CD8⁺/EGFRt⁺CAR-T细胞计数峰值相关的临床结果的逻辑回归估计的概率。基于血液中CD4⁺/EGFRt⁺或CD8⁺/EGFRt⁺CAR-T细胞的数量构建应答的估计概率曲线和形成3-5级神经毒性的估计概率曲线(图10A)。基于血液中CD4⁺/EGFRt⁺或CD8⁺/EGFRt⁺CAR-T细胞的数量构建应答的估计概率曲线和形成2-5级神经毒性或CRS的估计概率曲线(图10B)。通常，随着CAR-T细胞数量的增加，骨髓应答的概率增加，然后达到平稳状态，同时出现毒性、3-5级神经毒性(图10A)或2-5级神经毒性或CRS(图10B)的概率增加。这些曲线证明了CD4+/EGFRt⁺和CD8⁺/EGFRt⁺CAR-T细胞计数峰值的治疗窗口，其中在大多数患者中可以在不具有神经毒性或CRS的高风险的情况下实现骨髓清除。

在具有大淋巴结肿瘤负荷的患者亚组(包括具有Richter转化的那些患者)中观察到稳健的抗肿瘤活性，如通过IWCLL成像标准在CT扫描中6个最大淋巴结的横截面积的变化所确定的(图11)，然而，淋巴结肿瘤体积较大的患者总体上不太可能对CAR-T细胞有反应(通过IWCLL，CR与PR与NR，p＝0.098)，用较少现有疗法的患者也是如此(通过IWCLL，CR/PR与NR；5.5与4；p＝0.04)。这表明庞大和侵袭性的淋巴结病可能不太适合CAR-T细胞疗法。血液中CAR-T细胞计数峰值与淋巴结中应答的概率之间的关系不如记录的骨髓的应答稳健，但血液中较高的CD3⁺/EGFRt⁺CAR-T细胞计数峰值与高风险CLL患者中的疾病进展和死亡的降低的风险相关(HR 0.56，95％置信区间0.34-0.93，p＝0.025)。

本发明并不旨在限于具体公开的实施方案的范围，所提供的实施例例如是为了说明本发明的各个方面。根据本文的描述和传授，对组合物和方法的各种修改将变得清楚。可以在不脱离本公开文本的真实范围和精神的情况下实践这些变化，并且这些变化旨在落入本公开文本的范围内。

序列

序列表

<110> 弗雷德哈钦森癌症研究中心（Fred Hutchinson Cancer Research Center）

朱诺治疗学股份有限公司（Juno Therapeutics, Inc.）

Turtle, Cameron

Maloney, David

Riddell, Stanley

Gilbert, Mark

<120> 使用过继细胞疗法治疗B细胞恶性肿瘤的方法

<130> 735042006740

<150> 62/346,547

<151> 2016-06-06

<150> 62/417,292

<151> 2016-11-03

<150> 62/429,737

<151> 2016-12-03

<160> 56

<170> PatentIn 3.5版

<210> 1

<211> 12

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未归类的特征

<223> 间隔区 (IgG4铰链)

<400> 1

Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro

1 5 10

<210> 2

<211> 36

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> 尚未归类的特征

<223> 间隔区 (IgG4铰链)

<400> 2

gaatctaagt acggaccgcc ctgcccccct tgccct 36

<210> 3

<211> 119

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未归类的特征

<223> 铰链-CH3间隔区

<400> 3

Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Gly Gln Pro Arg

1 5 10 15

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

20 25 30

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

35 40 45

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

50 55 60

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

65 70 75 80

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

85 90 95

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

100 105 110

Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

115

<210> 4

<211> 229

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未归类的特征

<223> 铰链-CH2-CH3间隔区

<400> 4

Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe

1 5 10 15

Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

20 25 30

Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val

35 40 45

Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val

50 55 60

Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser

65 70 75 80

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu

85 90 95

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser

100 105 110

Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro

115 120 125

Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln

130 135 140

Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala

145 150 155 160

Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr

165 170 175

Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu

180 185 190

Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser

195 200 205

Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Gly Lys

225

<210> 5

<211> 282

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未归类的特征

<223> IgD-铰链-Fc

<400> 5

Arg Trp Pro Glu Ser Pro Lys Ala Gln Ala Ser Ser Val Pro Thr Ala

1 5 10 15

Gln Pro Gln Ala Glu Gly Ser Leu Ala Lys Ala Thr Thr Ala Pro Ala

20 25 30

Thr Thr Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys

35 40 45

Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro

50 55 60

Ser His Thr Gln Pro Leu Gly Val Tyr Leu Leu Thr Pro Ala Val Gln

65 70 75 80

Asp Leu Trp Leu Arg Asp Lys Ala Thr Phe Thr Cys Phe Val Val Gly

85 90 95

Ser Asp Leu Lys Asp Ala His Leu Thr Trp Glu Val Ala Gly Lys Val

100 105 110

Pro Thr Gly Gly Val Glu Glu Gly Leu Leu Glu Arg His Ser Asn Gly

115 120 125

Ser Gln Ser Gln His Ser Arg Leu Thr Leu Pro Arg Ser Leu Trp Asn

130 135 140

Ala Gly Thr Ser Val Thr Cys Thr Leu Asn His Pro Ser Leu Pro Pro

145 150 155 160

Gln Arg Leu Met Ala Leu Arg Glu Pro Ala Ala Gln Ala Pro Val Lys

165 170 175

Leu Ser Leu Asn Leu Leu Ala Ser Ser Asp Pro Pro Glu Ala Ala Ser

180 185 190

Trp Leu Leu Cys Glu Val Ser Gly Phe Ser Pro Pro Asn Ile Leu Leu

195 200 205

Met Trp Leu Glu Asp Gln Arg Glu Val Asn Thr Ser Gly Phe Ala Pro

210 215 220

Ala Arg Pro Pro Pro Gln Pro Gly Ser Thr Thr Phe Trp Ala Trp Ser

225 230 235 240

Val Leu Arg Val Pro Ala Pro Pro Ser Pro Gln Pro Ala Thr Tyr Thr

245 250 255

Cys Val Val Ser His Glu Asp Ser Arg Thr Leu Leu Asn Ala Ser Arg

260 265 270

Ser Leu Glu Val Ser Tyr Val Thr Asp His

275 280

<210> 6

<211> 24

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> T2A

<400> 6

Leu Glu Gly Gly Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp

1 5 10 15

Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Arg

20

<210> 7

<211> 357

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> tEGFR

<400> 7

Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro

1 5 10 15

Ala Phe Leu Leu Ile Pro Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly

20 25 30

Glu Phe Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe

35 40 45

Lys Asn Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala

50 55 60

Phe Arg Gly Asp Ser Phe Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu

65 70 75 80

Leu Asp Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile

85 90 95

Gln Ala Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu

100 105 110

Glu Ile Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala

115 120 125

Val Val Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu

130 135 140

Ile Ser Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr

145 150 155 160

Ala Asn Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys

165 170 175

Thr Lys Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly

180 185 190

Gln Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu

195 200 205

Pro Arg Asp Cys Val Ser Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys

210 215 220

Val Asp Lys Cys Asn Leu Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu

225 230 235 240

Asn Ser Glu Cys Ile Gln Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met

245 250 255

Asn Ile Thr Cys Thr Gly Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala

260 265 270

His Tyr Ile Asp Gly Pro His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val

275 280 285

Met Gly Glu Asn Asn Thr Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His

290 295 300

Val Cys His Leu Cys His Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro

305 310 315 320

Gly Leu Glu Gly Cys Pro Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala

325 330 335

Thr Gly Met Val Gly Ala Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly

340 345 350

Ile Gly Leu Phe Met

355

<210> 8

<211> 27

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未归类的特征

<223> CD28 (登录号P10747的氨基酸153-179)

<400> 8

Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu

1 5 10 15

Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val

20 25

<210> 9

<211> 66

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未归类的特征

<223> CD28 (登录号P10747的氨基酸114-179)

<400> 9

Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn

1 5 10 15

Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu

20 25 30

Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly

35 40 45

Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe

50 55 60

Trp Val

65

<210> 10

<211> 41

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未归类的特征

<223> CD28 (P10747的氨基酸180-220)

<400> 10

Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr

1 5 10 15

Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro

20 25 30

Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser

35 40

<210> 11

<211> 41

<212> PRT

<213> 智人

<400> 11

Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr

1 5 10 15

Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro

20 25 30

Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser

35 40

<210> 12

<211> 42

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未归类的特征

<223> 4-1BB (Q07011.1的氨基酸214-255)

<400> 12

Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met

1 5 10 15

Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe

20 25 30

Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu

35 40

<210> 13

<211> 112

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未归类的特征

<223> CD3ζ

<400> 13

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly

1 5 10 15

Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr

20 25 30

Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

35 40 45

Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys

50 55 60

Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg

65 70 75 80

Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala

85 90 95

Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

100 105 110

<210> 14

<211> 112

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未归类的特征

<223> CD3ζ

<400> 14

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Pro Pro Ala Tyr Gln Gln Gly

1 5 10 15

Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr

20 25 30

Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

35 40 45

Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys

50 55 60

Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg

65 70 75 80

Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala

85 90 95

Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

100 105 110

<210> 15

<211> 112

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未归类的特征

<223> CD3ζ

<400> 15

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly

1 5 10 15

Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr

20 25 30

Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

35 40 45

Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys

50 55 60

Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg

65 70 75 80

Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala

85 90 95

Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

100 105 110

<210> 16

<211> 335

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> tEGFR

<400> 16

Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu

1 5 10 15

Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile

20 25 30

Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe

35 40 45

Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr

50 55 60

Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn

65 70 75 80

Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg

85 90 95

Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile

100 105 110

Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val

115 120 125

Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp

130 135 140

Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn

145 150 155 160

Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala Leu

165 170 175

Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val Ser

180 185 190

Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys Asn Leu

195 200 205

Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys Ile Gln

210 215 220

Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys Thr Gly

225 230 235 240

Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp Gly Pro

245 250 255

His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met Gly Glu Asn Asn Thr

260 265 270

Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys His Leu Cys His

275 280 285

Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly Cys Pro

290 295 300

Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala Thr Gly Met Val Gly Ala

305 310 315 320

Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly Ile Gly Leu Phe Met

325 330 335

<210> 17

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> IGH的V区的示例性简并序列

<400> 17

acacggcctc gtgtattact gt 22

<210> 18

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> IGH的J区的示例性简并序列

<400> 18

acctgaggag acggtgacc 19

<210> 19

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> T2A

<400> 19

Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro

1 5 10 15

Gly Pro

<210> 20

<211> 22

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2A

<400> 20

Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val

1 5 10 15

Glu Glu Asn Pro Gly Pro

20

<210> 21

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2A

<400> 21

Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn

1 5 10 15

Pro Gly Pro

<210> 22

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> E2A

<400> 22

Gln Cys Thr Asn Tyr Ala Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu Ser

1 5 10 15

Asn Pro Gly Pro

20

<210> 23

<211> 22

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> F2A

<400> 23

Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val

1 5 10 15

Glu Ser Asn Pro Gly Pro

20

<210> 24

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 接头

<400> 24

Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 25

<211> 735

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码scFv的序列

<400> 25

gacatccaga tgacccagac cacctccagc ctgagcgcca gcctgggcga ccgggtgacc 60

atcagctgcc gggccagcca ggacatcagc aagtacctga actggtatca gcagaagccc 120

gacggcaccg tcaagctgct gatctaccac accagccggc tgcacagcgg cgtgcccagc 180

cggtttagcg gcagcggctc cggcaccgac tacagcctga ccatctccaa cctggaacag 240

gaagatatcg ccacctactt ttgccagcag ggcaacacac tgccctacac ctttggcggc 300

ggaacaaagc tggaaatcac cggcagcacc tccggcagcg gcaagcctgg cagcggcgag 360

ggcagcacca agggcgaggt gaagctgcag gaaagcggcc ctggcctggt ggcccccagc 420

cagagcctga gcgtgacctg caccgtgagc ggcgtgagcc tgcccgacta cggcgtgagc 480

tggatccggc agccccccag gaagggcctg gaatggctgg gcgtgatctg gggcagcgag 540

accacctact acaacagcgc cctgaagagc cggctgacca tcatcaagga caacagcaag 600

agccaggtgt tcctgaagat gaacagcctg cagaccgacg acaccgccat ctactactgc 660

gccaagcact actactacgg cggcagctac gccatggact actggggcca gggcaccagc 720

gtgaccgtga gcagc 735

<210> 26

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 铰链

<220>

<221> 变体

<222> (1)..(1)

<223> X = G、C或R

<220>

<221> 变体

<222> (4)..(4)

<223> X = C或T

<400> 26

Xaa Pro Pro Xaa Pro

1 5

<210> 27

<211> 15

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未归类的特征

<223> 铰链

<400> 27

Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

1 5 10 15

<210> 28

<211> 12

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未归类的特征

<223> 铰链

<400> 28

Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro

1 5 10

<210> 29

<211> 61

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未归类的特征

<223> 铰链

<400> 29

Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr His Thr Cys Pro Arg Cys Pro

1 5 10 15

Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Glu

20 25 30

Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Glu Pro

35 40 45

Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro

50 55 60

<210> 30

<211> 12

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未归类的特征

<223> 铰链

<400> 30

Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro

1 5 10

<210> 31

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 铰链

<400> 31

Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro

1 5 10

<210> 32

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 铰链

<400> 32

Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro

1 5

<210> 33

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 铰链

<400> 33

Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro

1 5 10

<210> 34

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 铰链

<400> 34

Glu Val Val Val Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro

1 5 10

<210> 35

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> FMC63 CDR L1

<400> 35

Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn

1 5 10

<210> 36

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> FMC63 CDR L2

<400> 36

Ser Arg Leu His Ser Gly Val

1 5

<210> 37

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> FMC63 CDR L3

<400> 37

Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly

1 5

<210> 38

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> FMC63 CDR H1

<400> 38

Asp Tyr Gly Val Ser

1 5

<210> 39

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> FMC63 CDR H2

<400> 39

Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 40

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> FMC63 CDR H3

<400> 40

Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly

1 5

<210> 41

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> FMC63 VH

<400> 41

Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln

1 5 10 15

Ser Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr

20 25 30

Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu

35 40 45

Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu

65 70 75 80

Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 42

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> FMC63 VL

<400> 42

Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln

65 70 75 80

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr

100 105

<210> 43

<211> 245

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> FMC63 scFv

<400> 43

Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln

65 70 75 80

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr Gly Ser Thr Ser Gly

100 105 110

Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Val Lys

115 120 125

Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser

130 135 140

Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser

145 150 155 160

Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile

165 170 175

Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser Arg Leu

180 185 190

Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys Met Asn

195 200 205

Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys His Tyr

210 215 220

Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser

225 230 235 240

Val Thr Val Ser Ser

245

<210> 44

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SJ25C1 CDR L1

<400> 44

Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala

1 5 10

<210> 45

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SJ25C1 CDR L2

<400> 45

Ser Ala Thr Tyr Arg Asn Ser

1 5

<210> 46

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SJ25C1 CDR L3

<400> 46

Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr Thr

1 5

<210> 47

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SJ25C1 CDR H1

<400> 47

Ser Tyr Trp Met Asn

1 5

<210> 48

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SJ25C1 CDR H2

<400> 48

Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 49

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SJ25C1 CDR H3

<400> 49

Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 50

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SJ25C1 VH

<400> 50

Glu Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Gln Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 51

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SJ25C1 VL

<400> 51

Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Pro Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Thr Tyr Arg Asn Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Asn Val Gln Ser

65 70 75 80

Lys Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr

85 90 95

Thr Ser Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

100 105

<210> 52

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 接头

<400> 52

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10 15

<210> 53

<211> 245

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SJ25C1 scFv

<400> 53

Glu Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Gln Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser

130 135 140

Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly Asp Arg Val Ser Val Thr Cys

145 150 155 160

Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys

165 170 175

Pro Gly Gln Ser Pro Lys Pro Leu Ile Tyr Ser Ala Thr Tyr Arg Asn

180 185 190

Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe

195 200 205

Thr Leu Thr Ile Thr Asn Val Gln Ser Lys Asp Leu Ala Asp Tyr Phe

210 215 220

Cys Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr Thr Ser Gly Gly Gly Thr Lys

225 230 235 240

Leu Glu Ile Lys Arg

245

<210> 54

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> FMC63 CDR H3

<400> 54

His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 55

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> FMC63 CDR L2

<400> 55

His Thr Ser Arg Leu His Ser

1 5

<210> 56

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> FMC63 CDR L3

<400> 56

Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr

1 5

Claims

1.一种治疗患有或怀疑患有慢性淋巴细胞白血病(CLL)的受试者的方法，该方法包括向该受试者给予一剂表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，该嵌合抗原受体特异性地结合至由该CLL表达的靶抗原，所述剂量包含(a)2x10⁵或约2x10⁵个细胞/公斤受试者体重(细胞/kg)，(b)2x10⁶或约2x10⁶个细胞/kg，(c)不超过2x10⁶或不超过约2x10⁶个细胞/kg，(d)不超过2x10⁵或不超过约2x10⁵个细胞/kg和/或(e)在2x10⁵或约2x10⁵个细胞/kg和2x10⁶或约2x10⁶个细胞/kg之间，其中在给药之前该受试者已经用包括给予氟达拉滨的淋巴细胞清除疗法预处理。

2.一种治疗患有或怀疑患有慢性淋巴细胞白血病(CLL)的受试者的方法，该方法包括向该受试者给予一剂表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，该嵌合抗原受体特异性地结合至由该CLL表达的靶抗原，所述剂量包含(a)1x10⁷或约1x10⁷个总细胞或总CAR表达细胞，(b)1.5x10⁸或约1.5x10⁸个总细胞或总CAR表达细胞，(c)不超过1x10⁷或不超过约1x10⁷个总细胞或总CAR表达细胞，(d)不超过1.5x10⁸或不超过约1.5x10⁸个总细胞或总CAR表达细胞和/或(e)在1x10⁷或约1x10⁷个总细胞或总CAR表达细胞和1.5x10⁸或约1.5x10⁸个总细胞或总CAR表达细胞之间，

3.权利要求1的方法，其中，在给予该剂细胞时或给予该剂细胞之前：

该受试者被鉴定为或已经被鉴定为患有高风险CLL；和/或

该受试者被鉴定为或已经被鉴定为患有髓外疾病；和/或

4.权利要求1或权利要求3的方法，其中，在给予该剂细胞之前该受试者已经用除淋巴细胞清除疗法以外和/或除另一剂表达该CAR的细胞以外的两种或更多种，任选3、4、5、6、7、8或9种或更多种针对该CLL的疗法进行治疗。

5.权利要求1或权利要求3的方法，其中，在给予该剂细胞之前该受试者已经用除另一剂表达该CAR的细胞以外或除另一剂表达该CAR的细胞和预处理疗法以外的两种或更多种，任选3、4、5、6、7、8或9种或更多种针对该CLL的疗法进行治疗。

6.权利要求1-5中任一项的方法，其中，在给予该剂细胞之前已经用激酶抑制剂治疗了该受试者的CLL，该激酶抑制剂任选为Btk的抑制剂，任选依鲁替尼。

7.权利要求1-6中任一项的方法，其中，在给予该剂细胞之前已经用单克隆抗体治疗了该受试者的CLL，该单克隆抗体特异性地结合至由该CLL的细胞表达或先前由该CLL的细胞表达的抗原。

8.权利要求1-7中任一项的方法，其中，在给予该剂细胞之前已经用venetoclax、包含氟达拉滨和利妥昔单抗的组合疗法、放射疗法和/或造血干细胞移植(HSCT)治疗了该受试者的CLL。

9.权利要求1-8中任一项的方法，其中，在给予该剂细胞时或紧临给予该剂细胞之前，该受试者在用一种或多种针对该CLL的现有疗法治疗之后出现缓解后复发或变得难以治疗。

10.权利要求1-9中任一项的方法，其进一步包括，在给予该细胞剂量之前，向该受试者给予淋巴细胞清除疗法。

11.权利要求1-10中任一项的方法，其中该淋巴细胞清除疗法：

12.权利要求1-11中任一项的方法，其中该细胞剂量和/或淋巴细胞清除疗法的给予经由门诊递送进行。

13.权利要求1-12中任一项的方法，其中该剂细胞包含确定比例的表达该CAR的CD4+细胞与表达该CAR的CD8+细胞，和/或确定比例的CD4+细胞与CD8+细胞，该比例任选为大约1:1或在大约1:3和大约3:1之间。

14.权利要求1-13中任一项的方法，其中胃肠外给予该剂细胞，任选静脉内。

15.权利要求1-14中任一项的方法，其中：

其中未在该受试者的骨髓中(或在根据该方法治疗的超过50％受试者的骨髓中)检测到，任选地如通过IGH深度测序所评估的恶性免疫球蛋白重链基因座(IGH)和/或CLL的指数克隆，任选地在给予该细胞剂量后1、2、3、4、5、6、12、18或24个月或约1、2、3、4、5、6、12、18或24个月或至少1、2、3、4、5、6、12、18或24个月或至少约1、2、3、4、5、6、12、18或24个月的时间进行。

16.权利要求1-15中任一项的方法，其中：

17.权利要求1-16中任一项的方法，其中该抗原是B细胞抗原，其任选地是CD19。

18.权利要求1-17中任一项的方法，其中该CAR包含对该抗原具有特异性的scFv、跨膜结构域、衍生自任选为4-1BB的共刺激分子的细胞质信号传导结构域以及衍生自任选为CD3ζ的含有主信号传导ITAM的分子的细胞质信号传导结构域。

19.权利要求1-18中任一项的方法，其中该CAR包含各自任选地衍生自人IgG的间隔区和/或铰链区。

所述剂量(i)包含(a)2x10⁵或约2x10⁵个细胞/公斤受试者体重(细胞/kg)，(b)2x10⁶或约2x10⁶个细胞/kg，(c)不超过2x10⁶或不超过约2x10⁶个细胞/kg，(d)不超过2x10⁵或不超过约2x10⁵个细胞/kg和/或(e)在2x10⁵或约2x10⁵个细胞/kg和2x10⁶或约2x10⁶个细胞/kg之间，并且(ii)包含确定比例的表达该CAR的CD4⁺细胞与表达该CAR的CD8⁺细胞和/或确定比例的CD4⁺细胞与CD8⁺细胞，该比例任选地为大约1:1或在大约1:3和大约3:1之间，

所述剂量(i)包含(a)1x10⁷或约1x10⁷个总细胞或总CAR表达细胞，(b)1.5x10⁸或约1.5x10⁸个总细胞或总CAR表达细胞，(c)不超过1x10⁷或不超过约1x10⁷个总细胞或总CAR表达细胞，(d)不超过1.5x10⁸或不超过约1.5x10⁸个总细胞或总CAR表达细胞和/或(e)在1x10⁷或约1x10⁷个总细胞或总CAR表达细胞和1.5x10⁸或约1.5x10⁸个总细胞或总CAR表达细胞之间，并且(ii)包含确定比例的表达该CAR的CD4⁺细胞与表达该CAR的CD8⁺细胞和/或确定比例的CD4⁺细胞与CD8⁺细胞，该比例任选地为大约1:1或在大约1:3和大约3:1之间，

22.权利要求20的方法，其中，在给予该剂细胞时或给予该剂细胞之前：

该受试者被鉴定为或已经被鉴定为患有高风险NHL；和/或

23.权利要求20或权利要求22的方法，其中，在给予该剂细胞之前该受试者已经用除淋巴细胞清除疗法以外和/或除另一剂表达该CAR的细胞以外的两种或更多种，任选2、3或4种或更多种针对该NHL的疗法进行治疗。

24.权利要求20-23中任一项的方法，其中，在给予该剂细胞时或紧临给予该剂细胞之前，该受试者在用一种或多种针对该NHL的现有疗法治疗之后出现缓解后复发或变得难以治疗。

25.权利要求20-24中任一项的方法，其进一步包括，在给予该细胞剂量之前，向该受试者给予淋巴细胞清除疗法。

26.权利要求20-25中任一项的方法，其中该淋巴细胞清除疗法：

27.权利要求20-26中任一项的方法，其中该细胞剂量和/或淋巴细胞清除疗法的给予经由门诊递送进行。

28.权利要求20-27中任一项的方法，其中该确定比例是1:1或约1:1的表达该CAR的CD4+细胞与表达该CAR的CD8+细胞的确定比例和/或1:1或约1:1的CD4+细胞与CD8+细胞的确定比例。

29.权利要求20-28中任一项的方法，其中胃肠外给予该剂细胞，任选静脉内。

30.权利要求20-29中任一项的方法，其中根据该方法治疗的受试者中的至少50％实现完全缓解(CR)和/或客观应答(OR)。

31.权利要求20-30中任一项的方法，其中：

32.权利要求20-31中任一项的方法，其中该抗原是B细胞抗原，其任选地是CD19。

33.权利要求20-32中任一项的方法，其中该CAR包含对该抗原具有特异性的scFv、跨膜结构域、衍生自任选为4-1BB的共刺激分子的细胞质信号传导结构域以及衍生自任选为CD3ζ的含有主信号传导ITAM的分子的细胞质信号传导结构域。

34.权利要求20-33中任一项的方法，其中该CAR包含各自任选地衍生自人IgG的间隔区和/或铰链区。

35.权利要求1-34中任一项的方法，其中：

并且其中：

该scFv包含RASQDISKYLN的CDRLl序列(SEQ ID NO:35)、SRLHSGV的CDRL2序列(SEQ IDNO:36)和/或GNTLPYTFG的CDRL3序列(SEQ ID NO:37)和/或DYGVS的CDRH1序列(SEQ ID NO:38)、VIWGSETTYYNSALKS的CDRH2序列(SEQ ID NO:39)和/或YAMDYWG的CDRH3序列(SEQ IDNO:40)或其中该scFv包含FMC63的可变重链区和FMC63的可变轻链区和/或FMC63的CDRLl序列、FMC63的CDRL2序列、FMC63的CDRL3序列、FMC63的CDRH1序列、FMC63的CDRH2序列和FMC63的CDRH3序列，或者结合至与前述任何一项相同的表位或竞争与前述任何一项的结合，并且任选地其中该scFv依次包含VH、任选包含SEQ ID NO:24的接头和VL，和/或该scFv包含柔性接头和/或包含SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列。

36.一种预后或分期的方法，该方法包括检测来自患有B细胞恶性肿瘤的受试者的样品中恶性免疫球蛋白重链基因座(IGH)序列的存在或不存在，所述受试者先前已接受给予用于治疗该B细胞恶性肿瘤的细胞疗法，该细胞疗法包括一剂表达重组受体的基因工程化细胞或其组合物，其中检测该恶性IGH序列的存在或不存在决定了该受试者对该细胞疗法的应答的预后。

37.权利要求36的方法，其中检测该恶性IGH序列的存在或不存在是在该细胞疗法开始后3至6周内或约3至6周内或者开始后约3至6周进行，任选地在开始给予该细胞疗法的4周内或约4周内进行。

38.权利要求36或权利要求37的方法，其中如果检测到该恶性IGH序列，则将该受试者鉴定为对该细胞疗法没有反应或不展现完全应答(CR)或总体应答(OR)或者鉴定为很可能针对该细胞疗法复发。

39.权利要求36-38中任一项的方法，其中如果检测到该恶性IGH序列，则将该受试者鉴定为进一步治疗的候选者和/或接受改变的或替代的治疗的候选者。

40.权利要求36-38中任一项的方法，其中如果检测到该恶性IGH序列，则停止给予该细胞疗法，向该受试者给予另一剂量的该细胞疗法，向该受试者给予更高剂量的该细胞疗法，向该受试者给予不同的细胞疗法(任选表达不同重组受体的细胞疗法)和/或向该受试者给予用于治疗该B细胞恶性肿瘤的替代治疗剂。

41.权利要求36或权利要求37的方法，其中如果未检测到该恶性IGH序列，则将该受试者鉴定为对该细胞疗法有反应和/或对该细胞疗法展现完全应答(CR)或总体应答(OR)或鉴定为很可能针对该细胞疗法不复发。

42.权利要求36、37和41中任一项的方法，其中如果未检测到该恶性IGH序列，则将该受试者鉴定为不进行进一步治疗和/或不被进一步治疗的候选者，任选不用该细胞疗法进一步治疗和/或不用该B细胞恶性肿瘤的替代疗法进一步治疗。

44.权利要求43的方法，其中检测该恶性IGH序列的存在或不存在是在该细胞疗法开始后4周、6周、8周、12周或16周内或约4周、6周、8周、12周或16周内或者开始后约4周、6周、8周、12周或16周进行。

45.权利要求43或权利要求44的方法，其中如果未检测到该恶性IGH序列，则预测该受试者展现出或很可能展现出对该细胞疗法的持久应答和/或在一定的时间段内具有低的或相对低的复发风险和/或在至少一定的时间段内具有展现出无进展存活的高可能性。

46.权利要求43-45中任一项的方法，其中如果未检测到该恶性IGH序列，则预测该受试者：

47.权利要求43或权利要求44的方法，其中如果检测到该恶性IGH序列，则预测该受试者在一定的时间段内展现出或很可能展现出不持久的和/或处于高的或相对高复发风险的对该细胞疗法的应答，和/或在至少一定的时间段内展现出无进展存活的低可能性。

48.权利要求43或权利要求44的方法，其中如果未检测到该恶性IGH序列，则预测该受试者：

49.权利要求43、44和48的方法，其中如果检测到该恶性IGH序列，则向该受试者给予另一剂量的该细胞疗法，向该受试者给予更高剂量的该细胞疗法，向该受试者给予不同的细胞疗法，任选表达不同重组受体的细胞疗法，和/或向该受试者给予用于治疗该B细胞恶性肿瘤的替代治疗剂。

50.权利要求36-49中任一项的方法，其中通过IGH测序，任选地包括IGH靶DNA的PCR扩增，确定该恶性IGH序列的存在或不存在。

51.权利要求36-38中任一项的方法，其中该样品包含B细胞。

52.权利要求36-51中任一项的方法，其中该样品包含血液或骨髓样品。

53.权利要求36-52中任一项的方法，其中该样品已从该受试者获得。

54.权利要求36-53中任一项的方法，其中该方法离体进行。

55.权利要求36-54中任一项的方法，其中该B细胞恶性肿瘤是癌症。

56.权利要求36-55中任一项的方法，其中该B细胞恶性肿瘤是或包括白血病。

57.权利要求37-56中任一项的方法，其中该B细胞恶性肿瘤包含抗原或与选自CD19、CD20、CD22、CD30、CD33或CD38、ROR1的抗原相关。

58.权利要求36-57中任一项的方法，其中该B细胞恶性肿瘤选自和/或是急性淋巴细胞白血病(ALL)、成人ALL、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)和弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。

59.权利要求37-58中任一项的方法，其中该B细胞恶性肿瘤是或包括慢性淋巴细胞白血病(CLL)或高风险CLL。

60.权利要求37-58中任一项的方法，其中该B细胞恶性肿瘤是或包括非霍奇金淋巴瘤(NHL)。

61.权利要求60的方法，其中该NHL选自下组，该组由以下各项组成：侵袭性NHL、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、NOS(新形成的和从惰性转化的)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤(TCHRBCL)、伯基特淋巴瘤、套细胞淋巴瘤(MCL)和/或滤泡性淋巴瘤(FL)，任选地3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)。

62.权利要求37-61中任一项的方法，其中该重组受体特异性地结合至与该疾病或病况相关的或在与该B细胞恶性肿瘤相关的病变环境的细胞中表达的抗原。

63.权利要求37-62中任一项的方法，其中该重组受体是T细胞受体或功能性非T细胞受体。

64.权利要求37-63中任一项的方法，其中该重组受体是嵌合抗原受体(CAR)。

65.权利要求64的方法，其中该CAR包含特异性地结合至该抗原的细胞外抗原识别结构域和包含ITAM的细胞内信号传导结构域，其中该细胞内信号传导结构域任选包含CD3-ζ(CD3ζ)链的细胞内结构域；和/或其中CAR进一步包含共刺激信号传导区域，其任选包含CD28或4-1BB的信号传导结构域。

66.权利要求37-65中任一项的方法，其中该CAR包含对该抗原具有特异性的scFv、跨膜结构域、衍生自任选为4-1BB的共刺激分子的细胞质信号传导结构域以及衍生自任选为CD3ζ的含有主信号传导ITAM的分子的细胞质信号传导结构域。

67.权利要求37-66中任一项的方法，其中该CAR包含各自任选地衍生自人IgG的间隔区和/或铰链区。

68.权利要求37-67中任一项的方法，其中：

并且其中：

69.权利要求37-68中任一项的方法，其中该工程化细胞包含T细胞，任选CD4+和/或CD8+。

70.权利要求69的方法，其中该T细胞是从受试者获得的原代T细胞。

71.权利要求37-70中任一项的方法，其中该工程化细胞对于该受试者是自体同源的。

72.权利要求37-71中任一项的方法，其中该工程化细胞对于该受试者是同种异体的。

该说明书规定了给予一定数量的CAR表达细胞或一定数量的细胞，或规定了给予对应于所述指定数量的细胞或含有所述指定数量的细胞的一定量或体积的一种或多种制剂，其中待给予的指定数量的细胞包含一定数量以给予一剂细胞，该剂细胞包含(a)2x10⁵或约2x10⁵个细胞/公斤受试者体重(细胞/kg)，(b)2x10⁶或约2x10⁶个细胞/kg，(c)不超过2x10⁶或不超过约2x10⁶个细胞/kg，(d)不超过2x10⁵或不超过约2x10⁵个细胞/kg和/或(e)在2x10⁵或约2x10⁵个细胞/kg和2x10⁶或约2x10⁶个细胞/kg之间。

该说明书规定了给予一定数量的CAR表达细胞或一定数量的细胞，或规定了给予对应于所述指定数量的细胞或含有所述指定数量的细胞的一定量或体积的一种或多种制剂，其中待给予的指定数量的细胞包含一定数量以给予一剂细胞，该剂细胞包含(a)1x10⁷或约1x10⁷个总细胞或总CAR表达细胞；(b)1.5x10⁸或约1.5x10⁸个总细胞或总CAR表达细胞，(c)不超过1x10⁷或不超过约1x10⁷个总细胞或总CAR表达细胞，(d)不超过1.5x10⁸或不超过约1.5x10⁸个总细胞或总CAR表达细胞和/或(e)在1x10⁷或约1x10⁷个总细胞或总CAR表达细胞和1.5x10⁸或约1.5x10⁸个总细胞或总CAR表达细胞之间。

75.权利要求73的制品，其进一步包含与淋巴细胞清除疗法一起、在淋巴细胞清除疗法之后或与淋巴细胞清除疗法结合使用的说明书，该淋巴细胞清除疗法包括氟达拉滨。

76.权利要求73或权利要求75的制品，其中该说明书规定该细胞疗法将被给予如下受试者，该受试者：

被鉴定为或已经被鉴定为具有一种或多种细胞遗传学异常，任选地与高风险CLL相关，任选地选自：复杂核型、13号染色体的长臂的缺失(del13q)、del 11、三体性12、del 17p、del 6q和del 13q.14，任选地如通过FISH检测到的；

被鉴定为或已经被鉴定为具有高风险的CLL；和/或

被鉴定为或已经被鉴定为患有髓外疾病；和/或

被鉴定为或已经被鉴定为患有中枢神经系统(CNS)疾病；和/或

77.权利要求73-76中任一项的制品，其中该说明书规定该细胞疗法将被给予如下受试者，该受试者：

78.权利要求73-77中任一项的制品，其中该说明书规定该细胞疗法将被给予如下受试者，该受试者在用一种或多种针对该CLL的现有疗法治疗之后出现缓解后复发或变得难以治疗。

81.权利要求79的制品，其进一步包含与淋巴细胞清除疗法一起、在淋巴细胞清除疗法之后或与淋巴细胞清除疗法结合使用的说明书，该淋巴细胞清除疗法包括氟达拉滨。

82.权利要求79或权利要求81的制品，其中该说明书规定该细胞疗法将被给予如下受试者，该受试者：

被鉴定为或已经被鉴定为具有高风险的NHL；和/或

83.权利要求79-82中任一项的制品，其中该说明书规定该细胞疗法将被给予如下受试者，该受试者已经用除淋巴细胞清除疗法以外和/或除另一剂表达该CAR的细胞以外的两种或更多种，任选2、3或4种或更多种针对该NHL的疗法进行治疗。

84.权利要求79-83中任一项的制品，其中该说明书规定该细胞疗法将被给予如下受试者，该受试者在用一种或多种针对该NHL的现有疗法治疗之后出现缓解后复发或变得难以治疗。

85.权利要求73-84中任一项的制品，其中该淋巴细胞清除疗法：

86.权利要求73-84中任一项的制品，其中说明书规定淋巴细胞清除疗法在给予该细胞疗法之前至少48小时或至少约48小时或在给予该细胞疗法之前在48小时或约48小时和96小时或约96小时之间的时间开始。

87.权利要求73-86中任一项的制品，其中该说明书规定以确定比例的表达该CAR的CD4⁺细胞与CD8⁺细胞给予该细胞疗法，或规定给予对应于这种确定比例的一定量或体积的一种或多种制剂，或包括具有这种比例的细胞的制剂，或包含这种比例的表达该CAR的细胞和/或这种比例的CD4⁺细胞与CD8⁺细胞，该比例任选为大约1:1或在大约1:3和大约3:1之间。

88.权利要求73-87中任一项的制品，其中该说明书进一步规定该细胞疗法用于肠胃外给药，任选静脉内给药。

89.权利要求73-88中任一项的制品，其中该说明书进一步规定在门诊环境中和/或在无需使该受试者住院过夜或连续多天的情况下和/或无需使该受试者住院一天或多天的情况下该细胞疗法将被给予或可被给予该受试者。

90.权利要求73-89中任一项的制品，其中该细胞疗法包括从该受试者获得的原代T细胞。

91.权利要求89的制品，其中该T细胞对于该受试者是自体同源的。

92.权利要求91的制品，其中该T细胞对于该受试者是同种异体的。

93.权利要求73-92中任一项的制品，其中该CAR包含对该抗原具有特异性的scFv、跨膜结构域、衍生自任选为4-1BB的共刺激分子的细胞质信号传导结构域以及衍生自任选为CD3ζ的含有主信号传导ITAM的分子的细胞质信号传导结构域。

94.权利要求73-93中任一项的制品，其中该CAR包含各自任选地衍生自人IgG的间隔区和/或铰链区。

95.权利要求93或权利要求94的制品，其中该抗原是B细胞抗原，其任选地是CD19。

96.权利要求69-89中任一项的制品，其中：

并且其中：

97.一种包含表达特异性地结合至慢性淋巴细胞白血病(CLL)的靶抗原的嵌合抗原受体(CAR)的细胞的组合物，其用于治疗患有或怀疑患有CLL的受试者，其中该治疗包括向该受试者给予一剂表达该CAR的细胞，所述剂量包含(a)2x10⁵或约2x10⁵个细胞/公斤受试者体重(细胞/kg)，(b)2x10⁶或约2x10⁶个细胞/kg，(c)不超过2x10⁶或约2x10⁶个细胞/kg，(d)不超过2x10⁵或约2x10⁵个细胞/kg和/或(e)在2x10⁵或约2x10⁵个细胞/kg和2x10⁶或约2x10⁶个细胞/kg之间，

98.一种包含表达特异性地结合至慢性淋巴细胞白血病(CLL)的靶抗原的嵌合抗原受体的细胞的组合物，其用于治疗患有或怀疑患有CLL的受试者，其中该治疗包括向该受试者给予一剂表达该CAR的细胞，所述剂量包含(a)1x10⁷或约1x10⁷个总细胞或总CAR表达细胞，(b)1.5x10⁸或约1.5x10⁸个总细胞或总CAR表达细胞，(c)不超过1x10⁷或不超过约1x10⁷个总细胞或总CAR表达细胞，(d)不超过1.5x10⁸或不超过约1.5x10⁸个总细胞或总CAR表达细胞和/或(e)在1x10⁷或约1x10⁷个总细胞或总CAR表达细胞和1.5x10⁸或约1.5x10⁸个总细胞或总CAR表达细胞之间，

99.权利要求97或权利要求98的用途，其中该组合物用于治疗如下受试者，其中在给予该剂细胞时或给予该剂细胞之前：

该受试者被鉴定为或已经被鉴定为患有高风险CLL；和/或

该受试者被鉴定为或已经被鉴定为患有髓外疾病；和/或

100.权利要求97-99中任一项的用途，其中该组合物用于治疗如下受试者，其中在给予该剂细胞之前该受试者已经用除淋巴细胞清除疗法以外和/或除另一剂表达该CAR的细胞以外的两种或更多种，任选3、4、5、6、7、8或9种或更多种针对该CLL的疗法进行治疗。

101.权利要求97-100中任一项的用途，其中该组合物用于治疗如下受试者，其中在给予该剂细胞之前该受试者已经用除另一剂表达该CAR的细胞以外或除另一剂表达该CAR的细胞和预处理疗法以外的两种或更多种，任选3、4、5、6、7、8或9种或更多种针对该CLL的疗法进行治疗。

102.权利要求97-101中任一项的用途，其中该组合物用于治疗如下受试者，其中在给予该剂细胞之前已经用激酶抑制剂治疗了该受试者的CLL，该激酶抑制剂任选为Btk的抑制剂，任选依鲁替尼。

103.权利要求97-102中任一项的用途，其中该组合物用于治疗如下受试者，其中在给予该剂细胞之前已经用单克隆抗体治疗了该受试者的CLL，该单克隆抗体特异性地结合至由该CLL的细胞表达或先前由该CLL的细胞表达的抗原。

104.权利要求97-102中任一项的用途，其中该组合物用于治疗如下受试者，其中在给予该剂细胞之前已经用venetoclax、包含氟达拉滨和利妥昔单抗的组合疗法、放射疗法和/或造血干细胞移植(HSCT)治疗了该受试者的CLL。

105.权利要求97-102中任一项的用途，其中该组合物用于治疗如下受试者，其中在给予该剂细胞时或紧临给予该剂细胞之前，该受试者在用一种或多种针对该CLL的现有疗法治疗之后出现缓解后复发或变得难以治疗。

106.一种包含表达特异性地结合至非霍奇金淋巴瘤(NHL)的靶抗原的嵌合抗原受体(CAR)的细胞的组合物，其用于治疗患有或怀疑患有NHL的受试者，其中该治疗包括向该受试者给予一剂表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，该嵌合抗原受体特异性地结合至由该NHL表达的靶抗原，其中该治疗包括向该受试者给予一剂表达该CAR的细胞，所述剂量(i)包含(a)2x10⁵或约2x10⁵个细胞/公斤受试者体重(细胞/kg)，(b)2x10⁶或约2x10⁶个细胞/kg，(c)不超过2x10⁶或不超过约2x10⁶个细胞/kg，(d)不超过2x10⁵或不超过约2x10⁵个细胞/kg和/或(e)在2x10⁵或约2x10⁵个细胞/kg和2x10⁶或约2x10⁶个细胞/kg之间，并且(ii)包含确定比例的表达该CAR的CD4⁺细胞与表达该CAR的CD8⁺细胞和/或确定比例的CD4⁺细胞与CD8⁺细胞，该比例任选地为大约1:1或在大约1:3和大约3:1之间，

107.一种包含表达特异性地结合至非霍奇金淋巴瘤(NHL)的靶抗原的嵌合抗原受体(CAR)的细胞的组合物，其用于治疗患有或怀疑患有NHL的受试者，其中该治疗包括向该受试者给予一剂表达该CAR的细胞，所述剂量(i)包含(a)1x10⁷或约1x10⁷个总细胞或总CAR表达细胞，(b)1.5x10⁸或约1.5x10⁸个总细胞或总CAR表达细胞，(c)不超过1x10⁷或不超过约1x10⁷个总细胞或总CAR表达细胞，(d)不超过1.5x10⁸或不超过约1.5x10⁸个总细胞或总CAR表达细胞和/或(e)在1x10⁷或约1x10⁷个总细胞或总CAR表达细胞和1.5x10⁸或约1.5x10⁸个总细胞或总CAR表达细胞之间，并且(ii)包含确定比例的表达该CAR的CD4⁺细胞与表达该CAR的CD8⁺细胞和/或确定比例的CD4⁺细胞与CD8⁺细胞，该比例任选地为大约1:1或在大约1:3和在约3:1之间，

108.权利要求106或权利要求107的用途，其中该组合物用于治疗如下受试者，其中在给予该剂细胞时或给予该剂细胞之前：

该受试者被鉴定为或已经被鉴定为患有高风险NHL；和/或

109.权利要求106-108中任一项的用途，其中该组合物用于治疗如下受试者，其中在给予该剂细胞之前该受试者已经用除淋巴细胞清除疗法以外和/或除另一剂表达该CAR的细胞以外的两种或更多种，任选2、3或4种或更多种针对该NHL的疗法进行治疗。

110.权利要求106-109中任一项的用途，其中该组合物用于治疗如下受试者，其中在给予该剂细胞时或紧临给予该剂细胞之前，该受试者在用一种或多种针对该NHL的现有疗法治疗之后出现缓解后复发或变得难以治疗。

111.权利要求97-110中任一项的用途，其中该淋巴细胞清除疗法：

112.权利要求97-101中任一项的用途，其中该治疗包括经由门诊递送来给予该细胞剂量和/或淋巴细胞清除疗法。

113.权利要求97-112中任一项的用途，其中该组合物和/或该剂细胞包含确定比例的表达该CAR的CD4+细胞与表达该CAR的CD8+细胞，和/或确定比例的CD4+细胞与CD8+细胞，该比例任选为大约1:1或在大约1:3和大约3:1之间。

114.权利要求97-113中任一项的用途，其中该组合物和/或该剂细胞被配制用于肠胃外给药，任选静脉内给药。

115.权利要求97-114中任一项的用途，其中该抗原是B细胞抗原，其任选地是CD19。

116.权利要求97-115中任一项的用途，其中该CAR包含对该抗原具有特异性的scFv、跨膜结构域、衍生自任选为4-1BB的共刺激分子的细胞质信号传导结构域以及衍生自任选为CD3ζ的含有主信号传导ITAM的分子的细胞质信号传导结构域。

117.权利要求97-116中任一项的用途，其中该CAR包含各自任选地衍生自人IgG的间隔区和/或铰链区。

118.权利要求97-117中任一项的方法，其中：

并且其中：