KR20190026740A - 입양 세포 치료법을 이용한 b 세포 악성종양의 치료 방법 - Google Patents

입양 세포 치료법을 이용한 b 세포 악성종양의 치료 방법 Download PDF

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데이빗 멀로니
스탠리 알. 리들
마크 길버트
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주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드
프레드 헛친슨 켄서 리서치 센터
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Abstract

B 세포 악성종양의 치료를 위한 세포 투여량의 투여를 포함하는 입양 세포 치료 방법이 제공된다. 세포는 일반적으로 키메라 항원 수용체 (CAR)와 같은 재조합 수용체를 발현한다. 일부 구체예에서, 상기 방법은 만성 림프구성 백혈병 (CLL)에 걸린 대상자를 치료하기 위한 것이다. 일부 구체예에서, 상기 방법은 비-호지킨 림프종 (NHL)에 걸린 대상자를 치료하기 위한 것이다. 일부 구체예에서, 상기 방법은 림프구고갈 요법의 사전 투여, 예컨대 플루다라빈 및/또는 또 다른 림프구고갈 화학요법제, 예를 들어 사이클로포스파미드의 사전 투여를 포함한다. 일부 구체예에서, 상기 방법의 특징은 제공된 방법에 따라 치료된 대상자들의 완전 관해, 전체 생존 및/또는 무진행 생존의 증가를 포함한다.

Description

입양 세포 치료법을 이용한 B 세포 악성종양의 치료 방법
정부 후원 상황
[1] 본 발명은 국립보건원(National Institute of Health)이 후원하는 CA136551의 정부 지원 하에 이루어졌다. 정부는 본 발명의 일정 지분을 갖는다.
관련 출원의 상호 참조
[2] 본원은 2016년 6월 6일자 미국 가특허출원 62/346,547호, 2016년 11월 3일자 미국 가특허출원 62/417,292호, 및 2016년 12월 3일자 미국 가특허출원 62/429,737호에 기초한 우선권 주장 출원으로서, 상기 출원들의 내용은 그 전체가 본원에 참조 병합된다.
서열목록의 참조 병합
[3] 본원에는 서열목록이 전자 형태로 함께 제출된다. 이 서열목록의 파일명은 735042006740seqlist.txt이고 2017년 6월 6일자 생성되었으며 파일 크기는 36,277 킬로바이트이다. 전자 형태의 서열목록에 담긴 정보는 그 전체가 본원에 참조 병합된다.
분야
[4] 본원은 B 세포 악성종양을 치료하기 위하여 세포의 투여량들을 투여하는 것과 관련한 입양 세포 요법에 관한 것이다. 이들 세포는 일반적으로 키메라 항원 수용체(CARs)와 같은 재조합 수용체를 발현한다. 일부 구체예에서, 이 방법은 만성 림프구성 백혈병 (CLL)에 걸린 대상자를 치료하기 위한 것이다. 일부 구체예에서, 이 방법은 비-호지킨 림프종 (NHL)에 걸린 대상자를 치료하기 위한 것이다. 일부 구체예에서, 이 방법은 플루다라빈 및/또는 또 다른 림프구고갈 화학요법제, 예를 들어 사이클로포스파미드의 사전 투여와 같은, 림프구고갈요법(lymphodepleting therapy)의 사전 투여와 관련된 것이다. 일부 구체예에서, 이 방법의 특징은 제공된 방법에 따라 치료된 대상자들의 완전 관해(complete remission), 전제 생존(overall survival) 및/또는 무진행 생존(progression free survival)의 증가를 포함한다.
배경
[5] 질환 및 상태를 치료하는데 있어 여러가지 면역요법 및/또는 세포요법이 이용가능하다. 예를 들어, 입양 세포 요법 (관심 대상 질환 또는 장애에 특이적인 키메라 수용체를 발현하는 세포, 예컨대 키메라 항원 수용체(CARs) 및/또는 기타 재조합 항원 수용체의 투여와 관련된 요법, 및 다른 입양 면역 세포 및 입양 T 세포 요법들을 포함한다)은 암 및 기타 질환 및 장애의 치료에 효과적일 수 있다. 예를 들어, 이러한 방법의 효능을 증가시키기 위한 개선된 방법이 요구되고 있다. 본원에 따라 이러한 요구를 만족하는 방법이 제공된다.
발명의 개요
[6] 본원에 따라 일반적으로 백혈병 또는 림프종, 가장 구체적으로는 만성 림프구성 백혈병 (CLL) 및/또는 비-호지킨 림프종 (NHL)이거나 또는 이를 포함하는 질환 또는 상태를 갖는 대상자들의 치료를 위한, 조작된 (예컨대, T 세포) 및 조성물의 치료 방법 및 용도가 제공된다. 일부 측면에서, 이러한 방법 및 용도는, 특정의 다른 대안 방법과 비교시, 예를 들어, 특히 치료된 대상자 그룹과 비교시, 개선되거나 더 지속적인 반응 또는 효능 및/또는 감소된 독성 위험 또는 감소된 기타 부작용을 제공하거나 달성한다. 일부 구체예에서, 본원의 방법은 조작된 세포의 특정 수 또는 상대적인 수의 투여, 특정한 유형의 상기 세포들의 소정 비율의 투여, 대상자의 특정한 림프구고갈요법제에 의한 사전 컨디셔닝, 특정 위험 프로파일, 단계를 갖는 환자와 같은 특정 환자 집단의 치료 및/또는 병력의 사전 치료, 및/또는 이의 조합에 의해 유리하다.
[7] 일부 구체예에서, 본 발명의 방법 및 용도는 입양 세포 요법에서 일반적으로, 백혈병 또는 림프종과 연관되거나 및/또는 이에 특이적이거나 및/또는 이로부터 유래된 세포 유형에 의해 발현되는 항원을 인식하는, 키메라 항원 수용체 (CARs)와 같은 키메라 수용체인, 유전자 조작된 (재조합) 세포 표면 수용체를 발현하는 세포를 대상자에게 투여하는 것을 포함한다. 이들 세포들은 일반적으로 투여를 위해 조성된 조성물을 통해 투여된다: 이 방법은 일반적으로 대상자에게 상기 세포를 하나 이상의 투여량으로 투여하는 것을 포함하되 상기 투여량(들)은 특정 수 또는 상대적인 수의 세포 또는 조작된 세포 및/또는 CD4 대 CD8 T 세포와 같이, 조성물 내 두 가지 이상의 서브타입의 소정의 비율을 포함할 수 있다.
[8] 대상자를 일반적으로 림프구고갈요법에 의해 사전컨디셔닝(사전컨디셔닝) 시켰는데, 이 경우 사전컨디셔닝이 수행되지 않았거나 또는 다른 림프구고갈 요법을 이용하여 수행된 경우에 비해, 투여 후 세포의 지속성 및/또는 효능이 일부 측면에서 증가하였다. 림프구고갈 요법은 일반적으로 플루다라빈을, 전형적으로 다른 화학요법 또는 다른 제제 에컨대 사이클로포스파미드와 조합하여 투여하는 것을 포함하는데, 이들은 순차적으로 또는 동시에 투여가능하다.
[9] 일부 구체예에서, 본원의 방법은 만성 림프구성 백혈병 (CLL)을 앓거나 앓는 것으로 의심되는 대상자를 치료하는 것을 포함한다. 일부 측면에서, 이 방법은 대상자에게 대상자 CLL에 의해 발현된 표적 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)을 발현하는 세포를 어떤 투여량(dose)으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 측면에서, 상기 투여량은 (a) 대상자의 킬로그램 체중 당 2 x 105 또는 약 2 x 105의 세포 (세포/kg); (b) 2 x 106 또는 약 2 x 106 세포/kg, (c) 2 x 106 이하 또는 약 2 x 106 세포/kg, (d) 2 x 105 이하 또는 약 2 x 105 세포/kg 및/또는 (e) 2 x 105 이하 또는 약 2 x 105 세포/kg 내지 2 x 106 이하 또는 약 2 x 106 세포/kg을 포함한다. 일부 측면에서, 투여에 앞서, 플루다라빈 투여를 포함하는 림프구고갈 요법으로 대상자를 사전컨디셔닝시켰다.
[10] 또한 본원에 따라 만성 림프구성 백혈병 (CLL)에 걸렸거나 걸린 것으로 의심되는 대상자를 치료하는 방법도 제공되며, 이 방법은 상기 대상자에게 CLL에 의해 발현된 표적 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)을 발현하는 세포를 어떤 투여량으로 투여하는 것으로 포함하며, 상기 투여량은 (a) 1 x 107개 또는 약 1 x 107개의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포; (b) 1.5 x 108개 또는 약 1.5 x 108개의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포, (c) 1 x 107개 이하 또는 약 1 x 107개의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포, (d) 1.5 x 108개 이하 또는 약 1.5 x 108개의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포 및/또는 (e) 1 x 107 개 또는 약 1 x 107개의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포내지 1.5 x 108개 또는 약 1.5 x 108개의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포이며, 여기서, 투여 전에 대상자를 플루다라빈 투여를 포함하는 림프구고갈 요법으로 사전컨디셔닝하였다.
[11] 일부 구체예에서, 상기 방법은 비-호지킨 림프종 (NHL), 예컨대 공격성 NHL 및/또는 특정 서브 타입의 NHL, 예컨대 미만성 거대 B 세포 림프종 (DLBCL), 원발성 종격동 거대 B 세포 림프종 (PMBCL), T 세포/조직구가 풍부한 거대 B 세포 림프종 (TCHRBCL), 버킷 림프종, 및/또는 기타 공격성 NHL, 외투세포 림프종 (MCL), 및/또는 소포성 림프종 (FL)과 같은 비-호지킨 림프종 (NHL)에 걸린 대상자를 치료하는 방법을 포함한다.
[12] 일부 측면에서, 본원의 방법은 NHL에 의해 발현되는 표적 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 세포의 투여량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 측면에서, 상기 투여량은 (a) 대상자의 킬로그램 체중 당 2 x 105 또는 약 2 x 105 세포(세포/kg); (b) 2 x 106 또는 약 2 x 106 세포/kg, (c) 2 x 106 이하 또는 약 2 x 106 세포/kg, (d) 2 x 105 이하 또는 약 2 x 105 세포/kg 및/또는 (e) 2 x 105 또는 약 2 x 105 세포/kg 내지 또는 2 x 106 또는 약 2 x 106 세포/kg를 포함한다. 투여량은 전형적으로 특정 서브타입의 세포들을 소정 비율로 예컨대 CAR을 발현하는 CD4+ 세포 대 CAR을 발현하는 CD8+ 세포 및/또는 CD4+ 세포 대 CD8+ 세포의 비율로 더 함유한다.
[13] 일부 측면에서, 투여에 앞서, 대상자를 플루다라빈의 투여를 포함하는 림프구고갈 요법으로 사전컨디셔닝하였다.
[14] 임의의 구체예들의 일부 측면에서, 투여된 세포들의 투여량은 특정 서브타입들의 세포들을 소정 비율 또는 예비결정된 비율 또는 조작된 비율로 포함한다. 이러한 비율은 CAR을 발현하는 CD4+ 세포 대 CAR을 발현하는 CD8+ 세포의 비율 및/또는 CD4+ 세포 대 CD8+ 세포의 비율을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, CD4+ 또는 CD8+ 세포는 예컨대 중심 기억 세포와 같은 특정 서브타입이 풍부하거나 또는 그러한 풍부한 집단, 예컨대 CD8+ 중심 기억 세포로부터 유래된 세포, 및/또는 벌크 T 세포 또는 벌크 CD8+ T 세포, 또는 벌크 T 세포 또는 벌크 CD8+ T 세포로부터 유래된 세포에 비해 CD62L 및/또는 CD45RO 및/또는 CCR7의 증가된 발현을 나타내는 것들로부터 유래한다. 일부 측면에서, 이러한 비율은 1:1 또는 대략 1:1이다. 일부 측면에서, 이 비율은 1:3 또는 대략 1:3 내지 3:1 또는 대략 3:1이다.
[15] 일부 구체예에서, 세포를 이러한 투여량으로 투여시 또는 투여 전에: 대상자는 경우에 따라 고위험 NHL과 연관된, 세포유전학적 이상(細胞遺傳學的 異常)을 한 가지 이상 갖거나 또는 가졌던 것으로 동정된다; 대상자는 고위험 NHL을 가지거나 가졌던 것으로 동정된다; 및/또는 NHL은 공격성 NHL, 미만성 거대 B 세포 림프종 (DLBCL), 원발성 종격동 거대 B 세포 림프종 (PMBCL), T 세포/조직구가 풍부한 거대 B 세포 림프종 (TCHRBCL), 버킷 림프종, 외투세포 림프종 (MCL), 및/또는 소포성 림프종 (FL)으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
[16] 임의의 구체예들의 일부 측면에서, 대상자는 성인이거나 및/또는 연령이 약 30, 40, 50, 60, 또는 70세이다. (번역자주: 이하 "약"이라는 표현은 "약" 다음에 나오는 숫자를 포함하는 것으로 한다. 예컨대 "약 30, 40, 50, 60, 또는 70세"라는 표현은 "30, 40, 50, 60, 또는 70세"를 포함하는 것으로 한다).
[17] 일부 측면에서, 림프구고갈 요법은 사이클로포스파미드와 같이, 플루다라빈 이외의 다른 화학요법제를 투여하는 것을 더 포함한다. 일부 측면에서, 예컨대 플루다라빈 및/또는 사이클로포스파미드와 같은 림프구고갈 요법을 통한 사전컨디셔닝은 세포를 투여하기 약 24 시간 또는 약 48 시간 전, 또는 세포 투여 전 약 48 시간 내지 약 96 시간 사이에 개시한다. 일부 측면에서, 림프구고갈 요법은 사이클로포스파미드를 약 30-60 mg/kg 대상자 체중(예컨대 1, 2 또는 3일 동안 1일 1회), 및/또는 플루다라빈을 25 mg/m2 (예컨대, 2, 3, 4, 또는 5일 또는 그 이상 동안 매일, 예컨대 3-5 일) 투여하는 것을 포함한다.
[18] 임의의 구체예들의 일부 측면에서, 세포 투여량의 투여 및/또는 림프구고갈 요법은 외래송달을 통해 수행된다.
[19] 일부 구체예에서, 세포 투여량의 투여시 또는 투여 전에, 대상자는 하나 이상의 세포유전학적 이상 및/또는 다른 위험 인자들을 갖거나 갖는 것으로 동정된 바 있는 대상자이다. 일부 측면에서, 이러한 이상 또는 인자(들)은 고위험 또는 매우-고위험군 질환, 예컨대 고위험 또는 매우 고위험 CLL 및/또는 NHL과 연관이 있다.
[20] 이러한 인자들은 FISH에 의해 검출되거나 검출가능한 것들 및/또는 FISH에 의해 검출불가능한 것들일 수 있다. 이러한 이상은 경우에 따라 FISH에 의해 검출되는 바와 같은, 복합 핵형(CK), 전좌 (translocations), 염색체 13의 장완의 결실 (del 13q), del 11, 삼염색체(trisomy) 12, del 17p, del 6q, 및 del 13q.14을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 이상은 CK 및/또는 del17p를 포함한다. 일부 측면에서, 본원 방법 및 용도로 처리된 대상자는 고위험 CLL 또는 매우 고위험 CLL에 걸려있거나 걸린 것으로 동정된 바 있고 경우에 따라 이러한 분류 및/또는 특정 이상에 기초하여 치료되도록 선택된다. 이러한 구체예들의 일부 측면에서, 대상자는 질환 또는 상태의 전이, 공격적, 진행, 및/또는 수질외(골수외) 형태를 갖거나 또는 갖는 것으로 동정되거나 및/또는 이러한 형태를 갖는 것으로 선택되거나; 및/또는 대상자는 성인이거나 및/또는 연령이 약 30, 40, 50, 60, 또는 70세이다.
[21] 일부 구체예에서, 세포의 투여량의 투여에 앞서, 대상자는 백혈병 또는 림프종, 예컨대 NHL 및/또는 CLL에 대해 2 이상, 경우에 따라 3, 4, 5, 6, 7, 8, 또는 9 가지 이상의 치료법으로 치료되거나, 및/또는 2 이상, 경우에 따라 3, 4, 5, 6, 7, 8, 또는 9 가지 이상의 림프구고갈 요법을 제외한 치료법 및/또는 CAR을 발현하는 세포의 또 다른 투여량에 의한 치료로 치료된 바 있는 대상자이다. 일부 구체예에서, 세포의 투여에 앞서, 대상자는 CLL에 대해 키나아제 억제제, 경우에 따라 Btk의 억제제, 경우에 따라 이브루티닙, 및/또는 생물학적 치료법 및/또는 면역요법, 에컨대 모노클로날 항체로 치료된 바 있는 대상자이다. 일부 구체예에서, 세포 투여량의 투여에 앞서, 대상자는 일반적으로 백혈병 또는 림프종의 치료를 위해 일반적으로 림프구고갈 요법이 아닌 2 이상, 경우에 따라 2, 3, 또는 4 가지 이상의 요법 및/또는 CAR을 발현하는 세포 또는 세포의 다른 투여량, 경우에 따라 상이한 CAR을 발현하는 세포 이외의 세포에 의해 치료받은 바 있는 대상자이다.
[22] 일부 구체예에서, 세포의 투여 직전 또는 투여시, 대상자는 하나 이상의 종전 치료법에 의한 치료 후 관해에 이어 재발하거나 또는 그러한 치료에 대해 불응성(refractory)이 된 대상자이다.
[23] 일부 구체예에서, 세포 투여량의 투여에 앞서, 대상자는 CLL 또는 NHL의 세포에 의해 이전에 발현되었거나 발현되는 항원에 특이적으로 결합하는 항체와 같은 모노클로날 항체에 의해 백혈병 또는 림프종(예컨대 CLL 또는 NHL)에 대한 치료를 받은 적이 있는 대상자이다. 일부 구체예에서, 세포의 투여량의 투여시 또는 투여 직전에, 대상자는 CLL에 대한 하나 이상의 종전 치료법에 의한 치료 후 관해에 이어 재발되거나, 이러한 치료에 불응성이 된 대상자이다.
[24] 일부 구체예에서, 본원의 방법은 세포 투여량의 투여에 앞서, 대상자에게 림프구고갈 치료제를 투여하는 것을 더 포함한다.
[25] 일부 구체예에서, 세포 투여량은 CAR을 발현하는 CD4+ 세포 대 CAR을 발현하는 CD8+ 세포의 소정 비율 및/또는 CD4+ 세포 대 CD8+ 세포의 소정 비율을 함유하며, 이러한 비율은 경우에 따라 대략 1:1 또는 대략 1:3 내지 대략 3:1이다. 일부 구체예에서, 세포 투여량은 비경구적으로, 경우에 따라 정맥 투여된다.
[26] 본원에 제공된 방법들의 일부 구체예에서, 본원 방법에 따라 치료된 대상자들의 적어도 50%는 완전 관해 (CR) 및/또는 객관적 반응 (OR)를 달성하거나; 및/또는 대상자는 세포 투여량 투여로부터 1개월 이내에 CR, OR, 림프절 크기 약 20 mm 미만 또는 약 20 mm를 나타내거나; 및/또는 경우에 따라 세포 투여량 투여로부터 약 또는 적어도 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 12, 18, 또는 24 개월 이내의 시점에서, 경우에 따라, 면역글로불린 중쇄 (IGH) 딥 시퀀싱(deep sequencing)에 의해 평가되는 바와 같이, 대상자의 골수에서(또는 본원 방법에 따라 치료된 대상자의 50% 이상의 골수에서) CLL 또는 NHL과 같은 질환 또는 상태의 인덱스 클론 및/또는 악성 면역글로불린 중쇄 (IGH) 자리가 검출되지 않는다.
[27] 본원에 제공된 방법의 일부 구체예에서, 본원 방법에 따라 치료되고, 완전 관해(CR)을 달성한 대상자들의 적어도 50%는 무진행 생존 (PFS) 및/또는 12 개월 이상의 전체 생존 (OS)을 나타내고; 평균적으로, 본원 방법에 따라 치료된 대상자들은 약 6 개월, 12 개월, 또는 18 개월 또는 약 6 개월, 12 개월, 또는 18 개월 이상의 PFS 또는 OS 중앙치(median)를 나타내며; 및/또는 대상자는 치료 후 적어도 또는 약 6, 12, 18 개월 또는 그 이상의 기간 동안 PFS 또는 OS를 나타낸다.
[28] 일부 구체예에서, 항원은 B 세포 항원이다. 일부 측면에서, 항원은 CD19이다. 일부 측면에서, 항원은 CD20, CD22, CD30, CD33, CD38, ROR1, 또는 B 세포 또는 B 세포 암과 연관된 기타 마커이거나 또는 이들을 포함한다.
[29] 일부 구체예에서, CAR은 일반적으로 항원에 특이적인 scFv이거나 또는 이를 포함하는 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 하나 이상의 세포질 시그널링 도메인 또는 영역을 함유하며, 이들은 천연 또는 내인성 시그널링 분자 또는 그의 기능성 변이체들로부터 유래한 것일 수 있다. 일부 측면에서, 시그널링 영역은 일차 및 이차 시그널을 T 세포 또는 다른 면역 세포에 전달할 수 있는 도메인들을 포함한다. 이 도메인들은 4-1BB, 예컨대, 인간 4-1BB와 같은 공동자극 분자, 및/또는 인간 CD28과 같은 CD28 분자로부터 유래한 것들을 포함할 수 있다. 이 도메인들은 CD3제타, 예컨대, 인간 CD3제타와 같은 일차 시그널링 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인을 더 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, CAR은 일부 측면에서 인간 IgG로부터 유래된 것일 수 있는 스페이서 및/또는 힌지 영역을 함유한다.
[30] 일부 구체예에서, 본원의 방법에 따라 치료된 대상자들의 적어도 또는 약 50%, 적어도 또는 약 60%, 적어도 또는 약 70%, 적어도 또는 약 80%, 또는 적어도 또는 약 90%는 RECIST 기준 및/또는 Lugano 기준, 및/또는 반응을 평가하기 위한 임의의 일부 공지 기준에 의해 측정되는 경우 완전 관해 (CR)를 달성한다. 일부 구체예에서, 본원의 방법에 따라 치료된 대상자들의 적어도 또는 약 50%, 적어도 또는 약 60%, 적어도 또는 약 70%, 적어도 또는 약 80%, 또는 적어도 또는 약 90%는 RECIST 기준 및/또는 Lugano 기준, 및/또는 반응을 평가하기 위한 임의의 일부 공지 기준에 의해 측정되는 경우 객관적 반응 (OR)을 달성한다. 일부 구체예에서, 본원의 방법에 따라 치료되고 완전 관해 (CR)를 달성한 대상자 또는 대상자들의 적어도 또는 약 50%, 적어도 또는 약 60%, 적어도 또는 약 70%, 적어도 또는 약 80%, 또는 적어도 또는 약 90%는, 예컨대 평균적으로 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24개월 또는 그 이상의 기간 및/또는 6, 12, 또는 18 개월을 초과하는 기간 동안 무진행 생존 (PFS) 및/또는 전체 생존 (OS)을 나타낸다. 일부 구체예에서, 본원의 방법에 따라 치료된 대상자 또는 대상자들의 적어도 또는 약 50%, 적어도 또는 약 60%, 적어도 또는 약 70%, 적어도 또는 약 80%, 또는 적어도 또는 약 90%는, 약 6 개월, 12 개월, 또는 18 개월을 상회하는 기간의 PFS 또는 OS 중앙치를 나타내거나; 및/또는 치료 후 적어도 또는 약 6, 12, 18, 또는 24개월 이상의 PFS 또는 OS를 나타낸다.
[31] 일부 구체예에서, 대상자는 등급 3 이상의 신경독성을 나타내지 않거나 및/또는 위중한 CRS를 나타내지 않거나, 또는 예컨대 세포 투여로부터 1주일, 2주일 또는 1개월 이내와 같은 치료 후 일정 기간 동안 이러한 증상을 나타내지 않는다.
[32] 본원에 따라 비-호지킨 림프종 (NHL)에 걸린 대상자의 치료 방법이 제공되며, 이 방법은 대상자에게 NHL에 의해 발현되는 표적 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 세포의 투여량을 투여하는 것으로 포함하되, 여기서 상기 투여량은 (i) (a) 대상자의 킬로그램 체중 당 약 2 x 105 세포 (세포/kg); (b) 약 2 x 106 세포/kg, (c) 약 2 x 106 이하의 세포/kg, (d) 약 2 x 105 이하의 세포/kg 및/또는 (e) 약 2 x 105의 세포/kg 내지 약 2 x 106의 세포/kg을 함유하거나, 및 (ii) CAR을 발현하는 CD4+ 세포 대 CAR을 발현하는 CD8+ 세포의 소정 비율 및/또는 CD4+ 세포 대 CD8+ 세포의 소정 비율을 함유하되, 상기 비율은 경우에 따라 대략 1:1 또는 대략 1:3 내지 대략 3:1이며, 여기서 투여 전에 상기 대상자는 플루다라빈의 투여를 포함하는 림프구고갈 요법에 의해 사전컨디셔닝된 대상자이다.
[33] 또한 본원에 따라 비-호지킨 림프종 (NHL)에 걸린 대상자의 치료 방법이 제공되며, 이 방법은 NHL에 의해 발현되는 표적 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 세포의 투여량을 대상자에게 투여하는 것을 포함하되, 여기서 상기 투여량은 (i) (a) 약 1 x 107 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포; (b) 약 1.5 x 108 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포, (c) 약 1 x 107 이하의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포, (d) 약 1.5 x 108 이하의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포 및/또는 (e) 약 1 x 107 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포내지 약 1.5 x 108 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포를 함유하거나, 및 (ii) CAR을 발현하는 CD4+ 세포 대 CAR을 발현하는 CD8+ 세포의 소정 비율 및/또는 CD4+ 세포 대 CD8+ 세포의 소정 비율을 함유하되, 상기 비율은 경우에 따라 대략 1:1이거나 또는 대략 1:3 내지 대략 3:1이고, 여기서, 투여 전에 상기 대상자는 플루다라빈의 투여를 포함하는 림프구고갈 요법으로 사전컨디셔닝된 대상자이다.
[34] 일부 구체예에서, 세포 투여량의 투여시 또는 투여 전에, 대상자는 경우에 따라 고위험 NHL과 연관된 하나 이상의 세포유전학적 이상을 갖는 것으로 동정되거나 동정된 바 있는 대상자이고; 대상자는 고위험 NHL을 갖는 것으로 동정되거나 동정된 바 있는 대상자이고; 및/또는 NHL은 공격성 NHL, 미만성 거대 B 세포 림프종 (DLBCL), 원발성 종격동 거대 B 세포 림프종 (PMBCL), T 세포/조직구가 풍부한 거대 B 세포 림프종 (TCHRBCL), 버킷 림프종, 외투세포 림프종 (MCL), 및/또는 소포성 림프종 (FL)으로 이루어진 군으로부터 선택되거나; 및/또는 대상자는 성인이거나 및/또는 연령이 약 30, 40, 50, 60, 또는 70세 이상이다.
[35] 이러한 임의의 구체예들 중 일부에서, 세포의 투여에 앞서 대상자는 림프구고갈 요법 이외에 및/또는 CAR 발현 세포의 또 다른 투여량 이외에 2종 이상, 경우에 따라 2, 3, 또는 4종 이상의 NHL 치료법으로 치료된 바 있는 대상자이다. 이러한 임의의 구체예들 중 일부에서, 세포 투여량의 투여시 또는 투여 직전에, 대상자는 NHL에 대한 하나 이상의 종전 치료법에 의한 치료 후 관해에 이어 재발하거나 또는 그러한 치료에 대해 불응성이 된 대상자이다.
[36] 이러한 임의의 구체예들 중 일부에서, 본원의 방법은 세포 투여량의 투여에 앞서, 대상자에게 림프구고갈 치료제를 투여하는 것을 더 포함한다. 일부 구체예에서, 림프구고갈 요법은 (i) 플루다라빈 이외의 다른 화학요법제, 경우에 따라 사이클로포스파미드를 투여하는 것을 더 포함하고; (ii) 세포 투여로부터 적어도 또는 약 48 시간 전 또는 세포 투여로부터 약 48 시간 내지 약 96 시간 사이에 개시되며; 및 (iii) 약 30-60 mg/kg의 사이클로포스파미드를, 경우에 따라 1일 또는 2일 동안 하루 한번, 및/또는 약 25 mg/m2의 플루다라빈을 3-5일 동안 매일 투여하는 것을 포함한다. 이러한 임의의 구체예들 중 일부에서, 세포 투여량의 투여 및/또는 림프구고갈 요법은 외래 환자 전달을 통해 수행된다.
[37] 이러한 임의의 구체예들 중 일부에서, 소정 비율은 약 1:1의 CAR을 발현하는 CD4+ 세포 대 CAR을 발현하는 CD8+ 세포의 소정 비율이거나 및/또는 약 1:1의 CD4+ 세포 대 CD8+ 세포의 소정 비율이다. 일부 구체예에서, 세포 투여량은 비경구적으로, 경우에 따라 정맥내 투여된다.
[38] 이러한 임의의 구체예들 중 일부에서, 본원 방법에 따라 치료된 대상자들의 적어도 50%는 완전 관해 (CR) 및/또는 객관적 반응 (OR)을 달성한다. 본원 방법의 일부 구체예에서, 본원 방법에 따라 치료되고 완전 관해 (CR)를 달성한 대상자들의 적어도 50%는, 무진행 생존 (PFS) 및/또는 12개월을 초과하는 전체 생존 (OS)을 나타내고; 평균적으로 본원 방법에 따라 치료된 대상자들은 약 6 개월, 12 개월, 또는 18 개월을 초과하는 PFS 또는 OS 중앙치를 나타내거나; 및/또는 대상자는 치료 후 적어도 또는 약 6, 12, 18개월 이상의 PFS 또는 OS를 나타낸다.
[39] 이러한 임의의 구체예들 중 일부에서, 항원은 B 세포 항원이고, 경우에 따라 CD19이다. 일부 구체예에서, CAR은 항원에 특이적인 scFv, 막관통 도메인, 경우에 따라 4-1BB인 공동자극 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인, 및 경우에 따라3제타인 일차 시그널링 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인을 함유한다. 일부 사례에서, CAR은 스페이서 및/또는 힌지 영역을 함유하되, 이들 각각은 경우에 따라 인간 IgG로부터 유래한다.
[40] 이러한 임의의 구체예들 중 일부에서, CAR은 하기 순서로 항원에 특이적인 scFv, 막관통 도메인, 경우에 따라 4-1BB 시그널링 도메인이거나 이를 함유하는 공동자극 분자로부터 유래한 세포질 시그널링 도메인, 및 경우에 따라 CD3제타 시그널링 도메인인 일차 시그널링 ITAM-함유 분자로부터 유래한 세포질 시그널링 도메인을 함유하거나; 또는 CAR은 하기 순서로 항원에 특이적인 scFv, 스페이서, 막관통 도메인, 경우에 따라 4-1BB 시그널링 도메인인 공동자극 분자로부터 유래한 세포질 시그널링 도메인, 및 경우에 따라 CD3제타 시그널링 도메인이거나 이를 포함하는 일차 시그널링 ITAM-함유 분자로부터 유래한 세포질 시그널링 도메인을 함유하며; 및 여기서 스페이서는 경우에 따라 (a) 면역글로불린 힌지 또는 그의 변형된 버젼 전부 또는 그의 일부를 함유하거나 이것으로 구성되고 또는 약 15개 이하의 아미노산을 함유하며, CD28 세포외 영역 또는 CD8 세포외 영역을 함유하지 않거나, (b) 면역글로불린 힌지, 경우에 따라 IgG4 힌지, 또는 그의 변형된 버젼의 전부 또는 일부를 함유하거나 이것으로 구성되고 및/또는 약 15개 이하의 아미노산을 함유하며, CD28 세포외 영역 또는 CD8 세포외 영역을 함유하지 않거나, (c) 길이가 약 12 아미노산이고 및/또는 면역글로불린 힌지, 경우에 따라 IgG4 힌지, 또는 그의 변형된 버젼의 전부 또는 일부를 함유하거나 이것으로 구성되거나; 또는 (d) SEQ ID NO: 1의 서열, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34, 또는 전술한 임의의 서열에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 변이체에 의해 인코딩된 서열을 갖거나 또는 이들로 구성되거나, 또는 (e) 식 X1PPX2P (X1은 글리신, 시스테인 또는 아르기닌이고 X2는 시스테인 또는 트레오닌임)을 포함하거나 이것으로 구성되는 폴리펩타이드 스페이서이고; 및/또는 공동자극 도메인은 SEQ ID NO: 12 또는 이에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 변이체를 함유하거나; 및/또는 일차 시그널링 도메인은 SEQ ID NO: 13 또는 14 또는 15 또는 이에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖거나; 및/또는 scFv는 RASQDISKYLN (SEQ ID NO: 35)의 CDRLl 서열, SRLHSGV (SEQ ID NO: 36)의 CDRL2 서열, 및/또는 GNTLPYTFG (SEQ ID NO: 37)의 CDRL3 서열 및/또는 DYGVS (SEQ ID NO: 38)의 CDRH1 서열, VIWGSETTYYNSALKS (SEQ ID NO: 39)의 CDRH2 서열, 및/또는 YAMDYWG (SEQ ID NO: 40)의 CDRH3 서열을 함유하거나 또는 scFv는 FMC63의 중쇄 가변 영역 및 FMC63의 경쇄 가변 영역 및/또는 FMC63의 CDRLl 서열, FMC63의 CDRL2 서열, FMC63의 CDRL3 서열, FMC63의 CDRH1 서열, FMC63의 CDRH2 서열, 및 FMC63의 CDRH3 서열을 포함하거나 또는 동일한 에피토프에 결합하거나 또는 전술한 임의의 것들과의 결합을 놓고 경쟁하고, 경우에 따라 scFv는 하기의 순서로 VH, 경우에 따라 SEQ ID NO: 24를 포함하는 링커, 및 VL를 함유하고, 및/또는 scFv는 유연한 링커를 함유하거나 및/또는 SEQ ID NO: 24에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
[41] 본원에 따라 B 세포 악성종양을 갖는 대상자로부터의 샘플에서의 악성 면역글로불린 중쇄 자리 (IGH) 서열의 존재 또는 부재를 검사하는 것을 포함하는, 예후 또는 병기분류(staging) 방법이 제공되며, 여기서 상기 대상자는 B 세포 악성종양을 치료하기 위한 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 투여량 또는 조성물을 포함하는 세포 요법제를 이전에 투여받은 적이 있는 대상자이고, 여기서 상기 악성 IGH 서열의 존재 또는 부재의 검사는 세포 요법에 반응하는 대상자의 예후를 결정하는 것이다. 일부 측면에서, 악성 IGH 서열의 존재 또는 부재 검사는 세포 요법 개시 후 약 3 내지 6주일 이내, 경우에 따라 세포 요법제 투여 개시로부터 약 4주일 이내에 수행된다.
[42] 이러한 임의의 구체예들 중 일부에서, 악성 IGH 서열이 검출되면, 그 대상자는 그 세포 요법에 대해 반응하지 않거나 또는 완전 반응 (CR) 또는 전체 반응 (OR)을 나타내지 않는 것으로 또는 그 세포 요법에 대해 재발할 가능성이 있는 것으로 동정된다. 일부 구체예에서, 악성 IGH 서열이 검출되면 그 대상자를 추가 치료의 후보로서 및/또는 변경된 치료법 또는 대체 요법을 받을 후보로서 동정하는 것이다. 일부 구체예에서, 악성 IGH 서열이 검출되면 그 세포 요법제의 투여 중단, 대상자에게 세포 요법제의 또 다른 투여량 투여, 대상자에게 세포 요법제의 보다 높은 투여량으로 투여, 대상자에게 상이한 세포 요법제, 경우에 따라, 상이한 재조합 수용체를 발현하는 세포 요법제의 투여, 및/또는 B 세포 악성 종양을 치료하기 위한 대체 치료제를 대상자에게 투여한다.
[43] 이러한 임의의 구체예들 중 일부에서, 악성 IGH 서열이 검출되지 않으면, 그 대상자는 그 세포 요법에 반응하거나 및/또는 그 세포 요법에 대해 완전 반응 (CR) 또는 전체 반응 (OR)을 나타내거나 또는 그 세포 요법에 대해 재발할 가능성이 낮은 것으로 동정된다. 일부 구체예에서, 악성 IGH 서열이 검출되지 않으면, 그 대상자는 추가 치료가 필요하지 않은 후보로서 동정되거나 및/또는 추가 치료되지 않거나, 경우에 따라 세포 요법에 의해 추가 치료되지 않으며 및/또는 B 세포 악성 종양에 대한 대체 요법으로 추가 치료되지 않는다.
[44] 본원에 따라 세포 요법에 대한 반응의 지속성(durability)를 예측하는 방법이 제공되며, 이 방법은 B 세포 악성종양을 갖는 대상자로부터의 샘플 중 악성 면역글로불린 중쇄 자리 (IGH) 서열의 존재 또는 부재를 검사하는 것을 포함하되, 상기 대상자는 B 세포 악성종양의 치료를 위해 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 투여량 또는 조성물을 포함하는 세포 요법제를 이전에 투여받은 적이 있는 대상자이고, 여기서 악성 IGH 서열의 존재 또는 부재는 세포 요법에 대한 반응의 지속성을 예측한다. 일부 측면에서, 악성 IGH 서열의 존재 또는 부재의 검사는 세포 요법 개시 후 약 또는 약 4 주일, 6 주일, 8 주일, 12 주일 또는 16 주일 이내에 수행된다.
[45] 이러한 임의의 구체예들 중 일부에서, 악성 IGH 서열이 검출되지 않으면, 그 대상자는 그 세포 요법에 대해 지속적인 반응을 나타내거나 또는 나타낼 가능성이 있는 것으로 예측되며 및/또는 특정 기간 이내에 재발 위험이 낮거나 또는 상대적으로 낮을 것으로 예측되거나 및/또는 적어도 특정 기간 동안 무진행 생존을 나타낼 가능성이 높다고 예측된다. 일부 구체예에서, 악성 IGH 서열이 검출되지 않으면, 그 대상자는 세포 요법 개시로부터 약 3개월 이상, 약 6개월 이상, 약 9개월 이상 또는 약 12개월 이상 동안 무진행 생존을 나타낼 것으로; 및/또는 세포 요법 개시로부터 약 3개월 이상, 약 6개월 이상, 약 9개월 이상 또는 약 12개월 이상 동안 생존할 것으로; 및/또는 세포 요법 개시로부터 약 3개월 이상, 약 6개월 이상, 약 9개월 이상 또는 약 12개월 이상 동안 지속적인 CR 또는 OR을 나타낼 것으로; 및/또는 세포 요법제 투여 개시 후 재발하지 않을 것으로, 경우에 따라 세포 요법 개시로부터 약 3개월 이상, 약 6개월 이상, 약 9개월 이상 또는 약 12개월 이내에 재발하지 않을 것으로 예측된다.
[46] 이러한 임의의 구체예들 중 일부에서, 악성 IGH 서열이 검출되면, 그 대상자는 그 세포 요법에 대해 지속적이지 않은 반응을 나타내거나 나타낼 가능성이 있는 것으로 및/또는 특정 기간 이내에 재발 위험이 높거나 상대적으로 높을 것으로 및/또는 적어도 특정 기간 동안 무진행 생존을 나타낼 가능성이 낮은 것으로 예측된다. 일부 구체예에서, 악성 IGH 서열이 검출되지 않으면, 그 대상자는 세포 요법 개시 후 약 3개월 이상, 약 6 개월 이상, 약 9 개월 이상 또는 약 12 개월 이상 동안 무진행 생존을 나타내지 않을 것으로; 및/또는 세포 요법 개시 후 약 3개월 이상, 약 6 개월 이상, 약 9 개월 이상 또는 약 12 개월 이상 동안 생존한채 남아있지 않을 것으로; 및/또는 세포 요법 개시 후 약 3개월 이상, 약 6 개월 이상, 또는 약 9 개월 이상 동안 지속적인 CR 또는 OR을 나타내지 않을 것으로 예측된다.
[47] 이러한 임의의 구체예들 중 일부에서, 악성 IGH 서열이 검출되면, 대상자에게 세포 요법제의 추가 투여량을 투여하거나, 대상자에게 세포 요법제를 더 고용량으로 투여하거나, 대상자에게 상이한 세포 요법제, 경우에 따라 상이한 재조합 수용체를 발현하는 세포 요법제를 투여하거나, 및/또는 대상자에게 B 세포 악성 종양을 치료하기 위한 대체 치료제를 투여한다. 일부 구체예에서, 악성 IGH 서열의 존재 또는 부재는 경우에 따라 IGH 표적 DNA의 PCR 증폭을 포함하는 IGH 시퀀싱에 의해 결정된다.
[48] 이러한 임의의 구체예들 중 일부에서, 샘플은 B 세포를 함유한다. 일부 구체예에서, 샘플은 혈액 또는 골수 샘플을 함유한다. 일부 측면에서, 샘플은 대상자로부터 얻어진 것이다. 이러한 임의의 구체예들 중 일부에서, 상기 방법은 생체외에서 수행된다.
[49] 이러한 임의의 구체예들 중 일부에서, B 세포 악성종양은 암이다. 일부 사례에서, B 세포 악성종양은 백혈병이거나 이를 포함한다. 일부 예에서, B 세포 악성종양은 CD19, CD20, CD22, CD30, CD33 또는 CD38, ROR1로부터 선택된 항원과 관련되거나 항원이다. 일부 구체예에서, B 세포 악성종양은 급성 림프모구 백혈병 (ALL), 성인 ALL, 만성 림프모구 백혈병 (CLL), 비-호지킨 림프종 (NHL), 및 미만성 거대 B-세포 림프종 (DLBCL)이거나 및/또는 이들로부터 선택된다. 일부 예에서, B 세포 악성종양은 만성 림프모구 백혈병 (CLL) 또는 고위험 CLL이거나 이를 포함한다. 일부 경우에서, B 세포 악성종양은 비-호지킨 림프종 (NHL)이거나 이를 포함한다. 일부 측면에서, NHL은 공격성 NHL, 미만성 거대 B 세포 림프종 (DLBCL), NOS (드 노보 및 무통(indolent)으로부터 변환됨), 원발성 종격동 거대 B 세포 림프종 (PMBCL), T 세포/조직구가 풍부한 거대 B 세포 림프종 (TCHRBCL), 버킷 림프종, 외투세포 림프종 (MCL), 및/또는 소포성 림프종 (FL), 경우에 따라, 소포성 림프종 등급 3B (FL3B)로 이루어진 군으로부터 선택된다.
[50] 이러한 임의의 구체예들 중 일부에서, 재조합 수용체는 질환 또는 상태와 관련되고 B 세포 악성종양과 관련된 병변 환경의 세포에서 발현되는 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 구체예에서, 재조합 수용체는 T 세포 수용체이거나 또는 기능성 비-T 세포 수용체이다. 일부 사례에서, 재조합 수용체는 키메라 항원 수용체 (CAR)이다. 일부 경우에서, CAR은 항원에 특이적으로 결합하는 세포외 항원-인식 도메인 및 ITAM을 포함하는 세포내 시그널링 도메인을 함유하고, 여기서 경우에 따라, 세포내 시그널링 도메인은 CD3-제타 (CD3ζ) 사슬의 세포내 도메인을 포함하거나; 및/또는 CAR은 추가로 공동자극 시그널링 영역을 더 포함하고, 경우에 따라 이것은 CD28 또는 4-1BB의 시그널링 도메인을 포함한다. 일부 구체예에서, CAR은 항원에 특이적인 scFv, 막관통 도메인, 경우에 따라 4-1BB인 공동자극 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인, 및 경우에 따라 CD3제타인 일차 시그널링 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인을 함유한다. 일부 구체예에서, CAR은 경우에 따라 각각 인간 IgG로부터 유래된 스페이서 및/또는 힌지 영역을 함유한다.
[51] 이러한 이러한 임의의 구체예들 중 일부에서, CAR은 하기 순서로 항원에 특이적인 scFv, 막관통 도메인, 경우에 따라 4-1BB 시그널링 도메인이거나 이를 포함하는 공동자극 분자로부터 유래한 세포질 시그널링 도메인, 및 경우에 따라 CD3제타 시그널링 도메인인 일차 시그널링 ITAM-함유 분자로부터 유래한 세포질 시그널링 도메인을 포함하거나; 또는 CAR은 하기 순서로 항원에 특이적인 scFv, 스페이서, 막관통 도메인, 경우에 따라 4-1BB 시그널링 도메인인 공동자극 분자로부터 유래한 세포질 시그널링 도메인, 및 경우에 따라 CD3제타 시그널링 도메인이거나 이를 포함하는 일차 시그널링 ITAM-함유 분자로부터 유래한 세포질 시그널링 도메인을 함유하며; 및 여기서 스페이서는 경우에 따라 (a) 면역글로불린 힌지 또는 그의 변형된 버젼 전부 또는 그의 일부를 함유하거나 이것으로 구성되고 또는 약 15개 이하의 아미노산을 함유하며, CD28 세포외 영역 또는 CD8 세포외 영역을 함유하지 않거나, (b) 면역글로불린 힌지, 경우에 따라 IgG4 힌지, 또는 그의 변형된 버젼의 전부 또는 일부를 함유하거나 이것으로 구성되고 및/또는 약 15개 이하의 아미노산을 함유하며, CD28 세포외 영역 또는 CD8 세포외 영역을 함유하지 않거나, (c) 길이가 약 12 아미노산이고 및/또는 면역글로불린 힌지, 경우에 따라 IgG4 힌지, 또는 그의 변형된 버젼의 전부 또는 일부를 함유하거나 이것으로 구성되거나; 또는 (d) SEQ ID NO: 1의 서열, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34, 또는 전술한 임의의 서열에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 변이체에 의해 인코딩된 서열을 갖거나 또는 이들로 구성되거나, 또는 (e) 식 X1PPX2P (X1은 글리신, 시스테인 또는 아르기닌이고 X2는 시스테인 또는 트레오닌임)을 포함하거나 이것으로 구성되는 폴리펩타이드 스페이서이고; 및/또는 공동자극 도메인은 SEQ ID NO: 12 또는 이에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 변이체를 함유하거나; 및/또는 일차 시그널링 도메인은 SEQ ID NO: 13 또는 14 또는 15 또는 이에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖거나; 및/또는 scFv는 RASQDISKYLN (SEQ ID NO: 35)의 CDRLl 서열, SRLHSGV (SEQ ID NO: 36)의 CDRL2 서열, 및/또는 GNTLPYTFG (SEQ ID NO: 37)의 CDRL3 서열 및/또는 DYGVS (SEQ ID NO: 38)의 CDRH1 서열, VIWGSETTYYNSALKS (SEQ ID NO: 39)의 CDRH2 서열, 및/또는 YAMDYWG (SEQ ID NO: 40)의 CDRH3 서열을 함유하거나 또는 scFv는 FMC63의 중쇄 가변 영역 및 FMC63의 경쇄 가변 영역 및/또는 FMC63의 CDRLl 서열, FMC63의 CDRL2 서열, FMC63의 CDRL3 서열, FMC63의 CDRH1 서열, FMC63의 CDRH2 서열, 및 FMC63의 CDRH3 서열을 포함하거나 또는 동일한 에피토프에 결합하거나 또는 전술한 임의의 것들과의 결합을 놓고 경쟁하고, 경우에 따라 scFv는 하기의 순서로 VH, 경우에 따라 SEQ ID NO: 24를 포함하는 링커, 및 VL를 함유하고, 및/또는 scFv는 유연한 링커를 함유하거나 및/또는 SEQ ID NO: 24에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
[52] 이러한 임의의 구체예들 중 일부에서, 조작된 세포는 T 세포, 경우에 따라 CD4+ 및/또는 CD8+를 함유한다. 일부 사례에서, T 세포는 대상자로부터 수득된 일차 T 세포이다. 일부 구체예에서, 조작된 세포는 대상자에 대해 자가(autologous)이다. 일부 사례에서, 조작된 세포는 대상자에 대해 동종(allogeneic)이다.
[53] 본원에 따라 각 투여량이 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 세포를 포함하는 것인, 세포 요법제의 하나 이상의 투여량, 세포 요법제를 투여하기 위한 지침을 함유하는 제조 물품이 제공되며, 여기서 상기 지침은 만성 림프구성 백혈병 (CLL)를 앓는 대상자에게 투여될 세포의 투여량을 명시하고; 및 상기 지침은 다수의 CAR-발현 또는 세포 수의 투여를 명시하거나, 또는 상기 특정 수의 세포에 상응하거나 또는 이를 포함하는 하나 이상의 제형의 양 또는 부피의 투여를 명시하며, 여기서 투여될 특정 세포 수는 (a) 대상자의 킬로그램 체중 당 약 2 x 105 세포(세포/kg); (b) 약 2 x 106 세포/kg, (c) 약 2 x 106 이하의 세포/kg, (d) 약 2 x 105 이하의 세포/kg 및/또는 (e) 약 2 x 105 세포/kg 내지 또는 약 2 x 106 세포/kg를 포함하는 세포 투여량을 투여하기 위한 수를 포함한다.
[54] 본원에 따라 각 투여량이 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 세포를 포함하는 것인, 세포 요법제의 하나 이상의 투여량, 세포 요법제를 투여하기 위한 지침을 함유하는 제조 물품이 제공되며, 여기서 상기 지침은 만성 림프구성 백혈병 (CLL)를 앓는 대상자에게 투여될 세포의 투여량을 명시하고; 및 상기 지침은 다수의 CAR-발현 또는 세포 수의 투여를 명시하거나, 또는 상기 특정 수의 세포에 상응하거나 또는 이를 포함하는 하나 이상의 제형의 양 또는 부피의 투여를 명시하며, 여기서 투여될 특정 세포 수는 (a) 약 1 x 107 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포; (b) 약 1.5 x 108 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포, (c) 약 1 x 107 이하의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포, (d) 약 1.5 x 108 이하의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포 및/또는 (e) 약 1 x 107의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포내지 약 1.5 x 108의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포를 포함하는 세포 투여량을 투여하기 위한 수를 함유한다.
[55] 제조 물품의 일부 구체예에서, 플루다라빈을 포함하는 림프구고갈 요법과 함께, 또는 그 후 또는 그와 연계한 사용에 대한 지침이 추가로 포함된다. 일부 사례에서, 상기 지침은 경우에 따라 FISH에 의해 검출되는 바와 같이, 경우에 따라 고위험 CLL과 연계되고, 경우에 따라: 복합 핵형, 염색체 13의 장완의 결실 (del 13q), del 11, 삼염색체 12, del 17p, del 6q, 및 del 13q.14로부터 선택되는 하나 이상의 세포유전학적 이상을 갖는 것으로 동정되거나 동정된 바 있거나; 고위험 CLL에 걸린 것으로 동정되거나 동정된 바 있거나; 및/또는 골수외(extramedullary) 질환을 갖는 것으로 동정되거나 동정된 바 있거나; 및/또는 중추신경계 (CNS) 질환을 갖는 것으로 동정되거나 동정된 바 있거나; 및/또는 성인이거나 및/또는 약 30, 40, 50, 60, 또는 70 세 이상인 대상자에게 투여되는 것임을 명시한다.
[56] 일부 구체예에서, 지침은 세포 요법이 림프구고갈 요법 이외 및/또는 CAR을 발현하는 세포의 또 다른 투여량으로 2회 이상, 경우에 따라 3, 4, 5, 6, 7, 8, 또는 9회 이상 CLL에 대해 치료된 바 있거나; 및/또는 키나아제 억제제, 경우에 따라 Btk의 억제제, 경우에 따라 이브루티닙으로 CLL에 대해 치료된 바 있거나; 및/또는 CLL의 세포에 의해 발현되거나 또는 이전에 발현된 항원에 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체로 CLL에 대해 치료된 바 있거나; 및/또는 베네토클락스, 플루다라빈과 리툭시맙을 포함하는 조합 요법, 방사선 요법 및/또는 조혈 줄기 세포 이식 (HSCT)에 의해 CLL에 대해 치료된 바 있는 대상자에게 투여되어야 한다고 명시한다.
[57] 이러한 임의의 구체예들 중 일부에서, 상기 지침은 세포 요법이 CLL에 대한 하나 이상의 이전 요법으로 치료 후 관해 후 재발하거나 또는 CLL에 대한 하나 이상의 이전 요법에 불응성이 있는 대상에게 투여되어야 한다고 명시한다.
[58] 본원에 따라 각 투여량이 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 세포를 포함하는 것인, 세포 요법제의 하나 이상의 투여량, 세포 요법제를 투여하기 위한 지침을 함유하는 제조 물품이 제공되며, 여기서 상기 지침은 비-호지킨 림프종(NHL)을 앓는 대상자에게 투여될 세포의 투여량을 명시하고; 및 상기 지침은 다수의 CAR-발현 또는 세포 수의 투여를 명시하거나, 또는 상기 특정 수의 세포에 상응하거나 또는 이를 포함하는 하나 이상의 제형의 양 또는 부피의 투여를 명시하며, 여기서 투여될 특정 세포 수는 (a) 대상자의 킬로그램 체중 당 약 2 x 105 세포(세포/kg); (b) 약 2 x 106 세포/kg, (c) 약 2 x 106 이하의 세포/kg, (d) 약 2 x 105 이하의 세포/kg 및/또는 (e) 약 2 x 105 세포/kg 내지 또는 약 2 x 106 세포/kg를 포함하는 세포 투여량을 투여하기 위한 수를 포함한다.
[59] 본원에 따라 각 투여량이 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 세포를 포함하는 것인, 세포 요법제의 하나 이상의 투여량, 세포 요법제를 투여하기 위한 지침을 함유하는 제조 물품이 제공되며, 여기서 상기 지침은 비-호지킨 림프종(NHL)을 앓는 대상자에게 투여될 세포의 투여량을 명시하고; 및 상기 지침은 다수의 CAR-발현 또는 세포 수의 투여를 명시하거나, 또는 상기 특정 수의 세포에 상응하거나 또는 이를 포함하는 하나 이상의 제형의 양 또는 부피의 투여를 명시하며, 여기서 투여될 특정 세포 수는 (a) 약 1 x 107 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포; (b) 약 1.5 x 108 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포, (c) 약 1 x 107 이하의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포, (d) 약 1.5 x 108 이하의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포 및/또는 (e) 약 1 x 107의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포내지 약 1.5 x 108의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포를 포함하는 세포 투여량을 투여하기 위한 수를 함유한다. 일부 구체예에서, 제조 물품은 플루다라빈을 포함하는 림프구고갈 요법과 함께, 또는 그 후 또는 그와 연계한 사용에 대한 지침을 추가로 포함한다.
[60] 이러한 임의의 구체예들 중 일부에서, 지침은 경우에 따라 고위험 NHL과 연관된 하나 이상의 세포유전학적 이상을 갖는 것으로 동정되거나 동정된 바 있거나; 고위험 NHL을 갖는 것으로 동정되거나 동정된 바 있거나; 및/또는 공격성 NHL, 미만성 거대 B 세포 림프종 (DLBCL), 원발성 종격동 거대 B 세포 림프종 (PMBCL), T 세포/조직구가 풍부한 거대 B 세포 림프종 (TCHRBCL), 버킷 림프종, 외투세포 림프종 (MCL), 및/또는 소포성 림프종 (FL)으로 이루어진 군으로부터 선택되거나; 및/또는 성인이거나 및/또는 연령이 약 30, 40, 50, 60, 또는 70세 이상인 대상자에게 세포 요법제가 투여되어야 한다고 명시한다.
[61] 이러한 임의의 구체예들 중 일부에서, 지침은 림프구고갈 요법을 제외한 및/또는 CAR을 발현하는 세포의 또 다른 투여량으로 2회 이상, 경우에 따라 2, 3 또는 4회 이상 NHL에 대한 치료를 받은 적이 있는 대상자에게 세포 요법제가 투여되어야 한다고 명시한다. 일부 구체예에서, 지침은 NHL에 대한 1종 이상의 이전 치료 후 관해에 이어 재발하였거나 또는 불응성이 된, 대상자에게 투여되어야 한다고 명시한다.
[62] 이러한 임의의 구체예들 중 일부에서, 림프구고갈 요법은 (i) 경우에 따라 사이클로포스파미드인 플루다라빈 이외의 다른 화학요법제를 투여하는 것을 포함하거나; 및/또는 (ii) 약 30-60 mg/kg의 사이클로포스파미드를 1일 또는 2일 동안 경우에 따라 1일 1회, 및/또는 약 25 mg/m2의 플루다라빈을 3-5일 동안 매일 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 지침은 림프구고갈 요법이 세포 요법제 투여로부터 적어도 약 48 시간 전에 또는 투여 전 약 48 시간 내지 약 96 시간 사이에 개시되어야 함을 명시한다.
[63] 이러한 임의의 구체예들 중 일부에서, 지침은 세포 요법제를 CAR을 발현하는 CD4+ 세포 대 CD8+ 세포의 소정 비율로 투여할 것을 명시하거나, 또는 이러한 소정 비율에 상응하는 제형(들)의 양 또는 부피를 투여할 것을 명시하거나 또는 제형은 세포를 그러한 비율로 갖거나 또는 CAR을 발현하는 그러한 비율 및/또는 CD4+ 세포 대 CD8+ 세포의 비율로 함유하며, 상기 비율은 경우에 따라 대략 1:1 또는 대략 1:3 내지 대략 3:1이다. 이러한 임의의 구체예들 중 일부에서, 지침은 세포 요법제가 비경구 투여, 경우에 따라 정맥 투여용임을 추가로 명시한다. 이러한 임의의 구체예들 중 일부에서, 지침은 세포 요법의 투여는 외래 환자 환경 및/또는 환자를 병원에 하룻밤 또는 1일 이상 연속하여 입원하지 않고 투여하는 것 및/또는 1일 이상 병원에 대상자의 입원없이 투여하는 것을 명시한다.
[64] 이러한 임의의 구체예들 중 일부에서, 세포 요법제는 대상자로부터 수득된 일차 T 세포를 함유한다. 일부 사례에서, T 세포는 대상자에 대해 자가이다. 일부 사례에서, T 세포는 대상자에 대해 동종이다.
[65] 이러한 임의의 구체예들 중 일부에서, CAR은 항원에 특이적인 scFv, 막관통 도메인, 경우에 따라 4-1BB인 공동자극 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인, 및 경우에 따라 CD3제타인 일차 시그널링 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인을 함유한다. 일부 구체예에서, CAR은 경우에 따라 각기 인간 IgG로부터 유래되는 스페이서 및/또는 힌지 영역을 함유한다. 일부 구체예에서, 항원은 경우에 따라 CD19인인 B 세포 항원이다.
[66] 이러한 임의의 구체예들 중 일부에서, CAR은 하기 순서대로, 항원에 특이적인 scFv, 막관통 도메인, 경우에 따라 4-1BB 시그널링 도메인이거나 이를 함유하는 공동자극 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인, 및 경우에 따라 CD3제타인 일차 시그널링 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인을 함유하거나; 또는 CAR은 하기 순서대로 항원에 특이적인 scFv, 스페이서, 막관통 도메인, 경우에 따라 4-1BB인 공동자극 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인, 및 경우에 따라 CD3제타 시그널링 도메인이거나 이를 포함하는 일차 시그널링 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인을 함유하고; 및 여기서 스페이서는 경우에 따라 (a) 면역글로불린 힌지 또는 그의 변형된 버젼 전부 또는 그의 일부를 함유하거나 이것으로 구성되고 또는 약 15개 이하의 아미노산을 함유하며, CD28 세포외 영역 또는 CD8 세포외 영역을 함유하지 않거나, (b) 면역글로불린 힌지, 경우에 따라 IgG4 힌지, 또는 그의 변형된 버젼의 전부 또는 일부를 함유하거나 이것으로 구성되고 및/또는 약 15개 이하의 아미노산을 함유하며, CD28 세포외 영역 또는 CD8 세포외 영역을 함유하지 않거나, (c) 길이가 약 12 아미노산이고 및/또는 면역글로불린 힌지, 경우에 따라 IgG4 힌지, 또는 그의 변형된 버젼의 전부 또는 일부를 함유하거나 이것으로 구성되거나; 또는 (d) SEQ ID NO: 1의 서열, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34, 또는 전술한 임의의 서열에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 변이체에 의해 인코딩된 서열을 갖거나 또는 이들로 구성되거나, 또는 (e) 식 X1PPX2P (X1은 글리신, 시스테인 또는 아르기닌이고 X2는 시스테인 또는 트레오닌임)을 포함하거나 이것으로 구성되는 폴리펩타이드 스페이서이고; 및/또는 공동자극 도메인은 SEQ ID NO: 12 또는 이에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 변이체를 함유하거나; 및/또는 일차 시그널링 도메인은 SEQ ID NO: 13 또는 14 또는 15 또는 이에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖거나; 및/또는 scFv는 RASQDISKYLN (SEQ ID NO: 35)의 CDRLl 서열, SRLHSGV (SEQ ID NO: 36)의 CDRL2 서열, 및/또는 GNTLPYTFG (SEQ ID NO: 37)의 CDRL3 서열 및/또는 DYGVS (SEQ ID NO: 38)의 CDRH1 서열, VIWGSETTYYNSALKS (SEQ ID NO: 39)의 CDRH2 서열, 및/또는 YAMDYWG (SEQ ID NO: 40)의 CDRH3 서열을 함유하거나 또는 scFv는 FMC63의 중쇄 가변 영역 및 FMC63의 경쇄 가변 영역 및/또는 FMC63의 CDRLl 서열, FMC63의 CDRL2 서열, FMC63의 CDRL3 서열, FMC63의 CDRH1 서열, FMC63의 CDRH2 서열, 및 FMC63의 CDRH3 서열을 포함하거나 또는 동일한 에피토프에 결합하거나 또는 전술한 임의의 것들과의 결합을 놓고 경쟁하고, 경우에 따라 scFv는 하기의 순서로 VH, 경우에 따라 SEQ ID NO: 24를 포함하는 링커, 및 VL를 함유하고, 및/또는 scFv는 유연한 링커를 함유하거나 및/또는 SEQ ID NO: 24에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
[67] 본원에 따라 만성 림프구성 백혈병 (CLL)에 걸리거나 걸린 것으로 의심되는 대상자를 치료하는데 사용되기 위한, CLL의 표적 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 세포를 함유하는 조성물이 제공되며, 여기서 상기 치료는 대상자에게 CAR을 발현하는 세포 투여량을 투여하는 것을 포함하되, 상기 투여량은 (a) 약 2 x 105 대상자의 킬로그램 체중 당 세포 (세포/kg); (b) 약 2 x 106 세포/kg, (c) 약 2 x 106 이하의 세포/kg, (d) 약 2 x 105 이하의 세포/kg 및/또는 (e) 약 2 x 105의 세포/kg 내지 약 2 x 106의 세포/kg을 함유하고, 여기서 투여에 앞서, 상기 대상자는 플루다라빈 투여를 포함하는 림프구고갈 요법으로 사전 컨디셔닝된 대상자이다.
[68] 본원에 따라 CLL에 걸리거나 걸린 것으로 의심되는 대상자를 치료하는데 사용되기 위한 만성 림프구성 백혈병 (CLL)의 표적 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 세포를 함유하는 조성물이 제공되며, 여기서 상기 치료는 CAR을 발현하는 세포의 투여량을 대상자에게 투여하는 것을 포함하되, 상기 투여량은 (a) 약 1 x 107 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포; (b) 약 1.5 x 108 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포, (c) 약 1 x 107 이하의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포, (d) 약 1.5 x 108 이하의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포 및/또는 (e) 약 1 x 107의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포내지 약 1.5 x 108의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포를 포함하고, 여기서 투여 전, 상기 대상자는 플루다라빈의 투여를 포함하는 림프구고갈 요법으로 사전 컨디셔닝된 대상자이다.
[69] 설명된 조성물 사용의 일부 구체예에서, 조성물은 세포 투여량의 투여시 또는 투여 전에: 대상자가 경우에 따라 FISH에 의해 검출되는 바와 같이, 경우에 따라 고위험 CLL과 연계되고, 경우에 따라: 복합 핵형, 염색체 13의 장완의 결실 (del 13q), del 11, 삼염색체 12, del 17p, del 6q, 및 del 13q.14로부터 선택되는 하나 이상의 세포유전학적 이상을 갖는 것으로 동정되거나 동정된 바 있거나; 대상자가 고위험 CLL에 걸린 것으로 동정되거나 동정된 바 있거나; 및/또는 골수외(extramedullary) 질환을 갖는 것으로 동정되거나 동정된 바 있거나; 및/또는 대상자가 중추신경계 (CNS) 질환을 갖는 것으로 동정되거나 동정된 바 있거나; 및/또는 대상자가 성인이거나 및/또는 약 30, 40, 50, 60, 또는 70 세 이상인 대상자를 투여하는데 사용되기 위한 것이다.
[70] 이러한 임의의 구체예들 중 일부에서, 조성물은 세포 투여량 투여 전에, 대상자가 2 이상, 선택적으로 3, 4, 5, 6, 7, 8 또는 9 이상의 림프구고갈 요법 이외의 CLL에 대한 치료, 및/또는 CAR을 발현하는 세포의 다른 투여량 이외의 다른 치료법에 사용되는 것이다. 이러한 임의의 구체예들 중 일부에서, 조성물은 세포 투여량 투여 전에, 대상자가 CAR을 발현하는 세포의 다른 투여량 또는 CAR을 발현하는 세포의 다른 투여량 및 사전컨디셔닝 요법을 제외한, 2 이상, 선택적으로 3, 4, 5, 6, 7, 8 또는 9 이상의 CLL에 대한 치료법으로 치료된 바 있는 대상자를 치료하기 위한 것이다.
[71] 이러한 임의의 구체예들 중 일부에서, 조성물은 세포 투여량의 투여에 앞서, 대상자는 CLL에 대해 키나아제 억제제, 경우에 따라 Btk의 억제제, 경우에 따라 이브루티닙으로 치료된 바 있는 대상자를 치료하는데 사용되기 위한 것이다. 일부 구체예에서, 조성물은 세포 투여량의 투여에 앞서, 대상자가 CLL의 세포에 의해 발현되는 또는 이전에 발현된 항원에 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체로 CLL에 대한 치료를 받은 적이 있는 대상자를 치료하는데 사용되기 위한 것이다.
[72] 이러한 임의의 구체예들 중 일부에서, 조성물은 세포 투여량의 투여에 앞서, 대상자가 베네토클락스, 조합 요법으로서 플루다라빈 및 리툭시맙을 포함하는 조합 요법, 방사선 요법 및/또는 조혈 줄기 세포 이식 (HSCT)으로 CLL에 대한 치료를 받은 바 있는 대상자를 치료하는데 사용되기 위한 것이다. 일부 측면에서, 조성물은 세포 투여량의 투여시 또는 투여 직전에, 대상자가 CLL에 대한 하나 이상의 이전 치료법에 대해 불응성이 되거나 또는 그러한 치료 후 관해 후에 재발된 바 있는 대상자를 치료하는데 사용되기 위한 것이다.
[73] 본원에 따라 비-호지킨 림프종 (NHL)에 걸렸거나 걸린 것으로 의심되는 대상자의 치료에 사용되기 위한 NHL의 표적 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 세포를 함유하는 조성물이 제공되며, 여기서 상기 치료는 대상자에게 NHL에 의해 발현되는 표적 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 세포의 투여량을 투여하는 것을 포함하되, 여기서 상기 치료는 대상자에게 CAR을 발현하는 세포의 투여량을 투여하는 것을 포함하고, 상기 투여량은 (i) (a) 대상자의 킬로그램 체중 당 약 2 x 105 세포 (세포/kg); (b) 약 2 x 106 세포/kg, (c) 약 2 x 106 이하의 세포/kg, (d) 약 2 x 105 이하의 세포/kg 및/또는 (e) 약 2 x 105의 세포/kg 내지 약 2 x 106의 세포/kg을 함유하거나, 및 (ii) CAR을 발현하는 CD4+ 세포 대 CAR을 발현하는 CD8+ 세포의 소정 비율 및/또는 CD4+ 세포 대 CD8+ 세포의 소정 비율을 함유하되, 상기 비율은 경우에 따라 대략 1:1 또는 대략 1:3 내지 대략 3:1이며, 여기서 투여 전에 상기 대상자는 플루다라빈의 투여를 포함하는 림프구고갈 요법에 의해 사전컨디셔닝된 대상자이다.
[74] 본원에 따라 비-호지킨 림프종 (NHL)에 걸렸거나 걸린 것으로 의심되는 대상자의 치료에 사용되기 위한 NHL의 표적 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 세포를 함유하는 조성물이 제공되며, 여기서 상기 치료는 대상자에게 CAR을 발현하는 세포의 투여량을 투여하는 것을 포함하되, 상기 투여량은 (i) (a) 약 1 x 107 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포; (b) 약 1.5 x 108 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포, (c) 약 1 x 107 이하의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포, (d) 약 1.5 x 108 이하의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포 및/또는 (e) 약 1 x 107 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포내지 약 1.5 x 108 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포를 함유하거나, 및 (ii) CAR을 발현하는 CD4+ 세포 대 CAR을 발현하는 CD8+ 세포의 소정 비율 및/또는 CD4+ 세포 대 CD8+ 세포의 소정 비율을 함유하되, 상기 비율은 경우에 따라 대략 1:1이거나 또는 대략 1:3 내지 대략 3:1이고, 여기서, 투여 전에 상기 대상자는 플루다라빈의 투여를 포함하는 림프구고갈 요법으로 사전컨디셔닝된 대상자이다.
[75] 일부 구체예에서, 조성물은 경우에 따라 대상자가 고위험 NHL과 연관된 하나 이상의 세포유전학적 이상을 갖는 것으로 동정되거나 동정된 바 있거나; 대상자가 고위험 NHL을 갖는 것으로 동정되거나 동정된 바 있거나; 및/또는 NHL은 공격성 NHL, 미만성 거대 B 세포 림프종 (DLBCL), 원발성 종격동 거대 B 세포 림프종 (PMBCL), T 세포/조직구가 풍부한 거대 B 세포 림프종 (TCHRBCL), 버킷 림프종, 외투세포 림프종 (MCL), 및/또는 소포성 림프종 (FL)으로 이루어진 군으로부터 선택되거나; 및/또는 대상자가 성인이거나 및/또는 연령이 약 30, 40, 50, 60, 또는 70세 이상인 대상자를 치료하는데 사용되기 위한 것이다.
[76] 이러한 임의의 구체예들 중 일부에서, 조성물은 세포 투여량의 투여에 앞서 대상자가 림프구고갈 요법 이외에 및/또는 CAR 발현 세포의 또 다른 투여량 이외에 2종 이상, 경우에 따라 2, 3, 또는 4종 이상의 NHL 치료법으로 치료된 바 있는 대상자이다. 일부 경우에서, 조성물은 세포 투여량의 투여시 또는 투여 직전에, 대상자가 NHL에 대한 하나 이상의 종전 치료법에 의한 치료 후 관해에 이어 재발하거나 또는 그러한 치료에 대해 불응성이 된 대상자를 치료하는데 사용되기 위한 것이다.
[77] 이러한 임의의 구체예들 중 일부에서, 림프구고갈 요법은 (i) 플루다라빈 이외의 다른 화학요법제, 경우에 따라 사이클로포스파미드를 투여하는 것을 더 포함하고; (ii) 세포 투여로부터 적어도 또는 약 48 시간 전 또는 세포 투여 전 약 48 시간 내지 약 96 시간 사이에 개시되며; 및 (iii) 약 30-60 mg/kg의 사이클로포스파미드를, 경우에 따라 1일 또는 2일 동안 하루 한번, 및/또는 약 25 mg/m2의 플루다라빈을 3-5일 동안 매일 투여하는 것을 포함한다. 이러한 임의의 구체예들 에서, 세포 투여량의 투여 및/또는 림프구고갈 요법은 외래 환자 전달을 통해 수행된다.
[78] 이러한 임의의 구체예들 중 일부에서, 조성물 및/또는 세포 투여량은 약 1:1 또는 약 1:3 내지 약 3:1인, CAR을 발현하는 CD4+ 세포 대 CAR을 발현하는 CD8+ 세포의 소정 비율이다. 이러한 임의의 구체예들 중 일부에서, 조성물 및/또는 세포 투여량은 비경구적으로, 경우에 따라 정맥내 투여된다.
[79] 일부 구체예에서, 항원은 B 세포 항원, 경우에 따라 CD19이다. 이러한 임의의 구체예들 중 일부에서, CAR은 항원에 특이적인 scFv, 막관통 도메인, 경우에 따라 4-1BB인 공동자극 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인, 및 경우에 따라 CD3제타인 일차 시그널링 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인을 함유한다. 일부 사례에서, CAR은 경우에 따라 각기 인간 IgG 로부터 유래된 스페이서 및/또는 힌지 영역을 함유한다.
[80] 이러한 임의의 구체예들 중 일부에서, CAR은 하기 순서대로, 항원에 특이적인 scFv, 막관통 도메인, 경우에 따라 4-1BB 시그널링 도메인이거나 이를 함유하는 공동자극 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인, 및 경우에 따라 CD3제타인 일차 시그널링 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인을 함유하거나; 또는 CAR은 하기 순서대로 항원에 특이적인 scFv, 스페이서, 막관통 도메인, 경우에 따라 4-1BB인 공동자극 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인, 및 경우에 따라 CD3제타 시그널링 도메인이거나 이를 포함하는 일차 시그널링 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인을 함유하고; 및 여기서 스페이서는 경우에 따라 (a) 면역글로불린 힌지 또는 그의 변형된 버젼 전부 또는 그의 일부를 함유하거나 이것으로 구성되고 또는 약 15개 이하의 아미노산을 함유하며, CD28 세포외 영역 또는 CD8 세포외 영역을 함유하지 않거나, (b) 면역글로불린 힌지, 경우에 따라 IgG4 힌지, 또는 그의 변형된 버젼의 전부 또는 일부를 함유하거나 이것으로 구성되고 및/또는 약 15개 이하의 아미노산을 함유하며, CD28 세포외 영역 또는 CD8 세포외 영역을 함유하지 않거나, (c) 길이가 약 12 아미노산이고 및/또는 면역글로불린 힌지, 경우에 따라 IgG4 힌지, 또는 그의 변형된 버젼의 전부 또는 일부를 함유하거나 이것으로 구성되거나; 또는 (d) SEQ ID NO: 1의 서열, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34, 또는 전술한 임의의 서열에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 변이체에 의해 인코딩된 서열을 갖거나 또는 이들로 구성되거나, 또는 (e) 식 X1PPX2P (X1은 글리신, 시스테인 또는 아르기닌이고 X2는 시스테인 또는 트레오닌임)을 포함하거나 이것으로 구성되는 폴리펩타이드 스페이서이고; 및/또는 공동자극 도메인은 SEQ ID NO: 12 또는 이에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 변이체를 함유하거나; 및/또는 일차 시그널링 도메인은 SEQ ID NO: 13 또는 14 또는 15 또는 이에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖거나; 및/또는 scFv는 RASQDISKYLN (SEQ ID NO: 35)의 CDRLl 서열, SRLHSGV (SEQ ID NO: 36)의 CDRL2 서열, 및/또는 GNTLPYTFG (SEQ ID NO: 37)의 CDRL3 서열 및/또는 DYGVS (SEQ ID NO: 38)의 CDRH1 서열, VIWGSETTYYNSALKS (SEQ ID NO: 39)의 CDRH2 서열, 및/또는 YAMDYWG (SEQ ID NO: 40)의 CDRH3 서열을 함유하거나 또는 scFv는 FMC63의 중쇄 가변 영역 및 FMC63의 경쇄 가변 영역 및/또는 FMC63의 CDRLl 서열, FMC63의 CDRL2 서열, FMC63의 CDRL3 서열, FMC63의 CDRH1 서열, FMC63의 CDRH2 서열, 및 FMC63의 CDRH3 서열을 포함하거나 또는 동일한 에피토프에 결합하거나 또는 전술한 임의의 것들과의 결합을 놓고 경쟁하고, 경우에 따라 scFv는 하기의 순서로 VH, 경우에 따라 SEQ ID NO: 24를 포함하는 링커, 및 VL를 함유하고, 및/또는 scFv는 유연한 링커를 함유하거나 및/또는 SEQ ID NO: 24에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
[81] 도 1A는 대상자의 킬로그램 (kg) 체중 당 2 x 105, 2 x 106 또는 2 x 107 CAR-발현 T 세포를 1회 주입하여 치료된, 재발되거나 불응성인 (R/R) CD19+ 만성 림프구성 백혈병 (CLL) 대상자들에 대한 퍼센트 무진행 생존 (PFS) 곡선을 나타낸 도면이다. 별도 곡선들은 완전 관해 (CR)를 달성한 대상자들 및 달성하지 못한(비 CR) 대상자들에 대한 도면이다. 주입에 앞서, 대상자들은 3-5일 동안 매일 60 mg/kg 사이클로포스파미드 및 25 mg/m2 플루다라빈 (Flu)으로 사전-컨디셔닝되었다.
[82] 도 1B는 대상자의 킬로그램 (kg) 체중 당 2 x 105, 2 x 106 또는 2 x 107 CAR-발현 T 세포를 1회 주입하여 치료된, 재발되거나 불응성인 (R/R) CD19+ 만성 림프구성 백혈병 (CLL) 대상자들에 대한 퍼센트 전체 생존 (OS) 곡선을 나타낸 도면이다. 별도 곡선들은 완전 관해 (CR)를 달성한 대상자들 및 달성하지 못한(비 CR) 대상자들에 대한 도면이다. 주입에 앞서, 대상자들은 3-5일 동안 매일 60 mg/kg 사이클로포스파미드 및 25 mg/m2 플루다라빈 (Flu)으로 사전-컨디셔닝되었다.
[83] 도 2A는 대상자의 킬로그램 (kg) 체중 당 2 x 106 CAR-발현 T 세포를 1회 주입하여 치료된, 비-호지킨 림프종(NHL) 대상자들에 대한 퍼센트 무진행 생존 (PFS) 곡선을 나타낸 도면이다. 별도 곡선들은 완전 관해 (CR)를 달성한 대상자들 및 달성하지 못한(비 CR) 대상자들에 대한 도면이다. 주입에 앞서, 대상자들은 3-5일 동안 매일 60 mg/kg 사이클로포스파미드 및 25 mg/m2 플루다라빈 (Flu)으로 사전-컨디셔닝되었다.
[84] 도 2B는 대상자의 킬로그램 (kg) 체중 당 2 x 106 CAR-발현 T 세포를 1회 주입하여 치료된, 비-호지킨 림프종(NHL) 대상자들에 대한 퍼센트 전체 생존 (OS) 곡선을 나타낸 도면이다. 별도 곡선들은 완전 관해 (CR)를 달성한 대상자들 및 달성하지 못한(비 CR) 대상자들에 대한 도면이다. 주입에 앞서, 대상자들은 3-5일 동안 매일 60 mg/kg 사이클로포스파미드 및 25 mg/m2 플루다라빈 (Flu)으로 사전-컨디셔닝되었다.
[85] 도 3은 대상자의 킬로그램 (kg) 체중 당 2 x 105, 2 x 106 또는 2 x 107 CAR-발현 T 세포를 1회 주입하여 치료되고 3-5일 동안 매일 60 mg/kg 사이클로포스파미드 및 25 mg/m2 플루다라빈 (Flu)으로 사전-컨디셔닝된, 재발되거나 불응성인 (R/R) CD19+ 만성 림프구성 백혈병 (CLL) 대상자들에 대한 퍼센트 무진행 생존 (PFS) 곡선을 나타낸 도면이다 (n=13). 별도 곡선들은 완전 관해 (CR)를 달성한 대상자들 및 달성하지 못한(비 CR) 대상자들에 대한 도면이다.
[86] 도 4A-E는 Cy/Fu 및 2x106 CAR-T 세포/kg로 치료된 환자들에 있어서 (A) 골수 내 존재하는 이상 B 세포 퍼센트에 따른 CAR-T 세포 증폭의 상관관계, (B) 종양-단면적, (C) 혈액 내 절대 이상 B 세포 카운트, (D) PET 촬영에 대한 최대 SUV 및 (E) 면역 체크포인트 바이오마커 CD200를 나타낸 도면이다.
[87] 도 5는 모든 연구 대상 CLL 환자에 있어서 전체 생존 (OS) 및 무진행 생존 (PFS)을 나타낸 도면이다. 추적 관찰 기간의 중앙값은 12.4 개월이다.
[88] 도 6A 및 도 6B는 Cy/Flu 림프구고갈 및 2x105 또는 2x106 CAR-T 세포/kg의 CAR-T 세포 주입 후 IWCLL 2008 노드 반응 기준으로 측정시 환자에서의 무진행 생존(PFS) 및 전체 생존 (OS)을 나타낸다. 도 6A는 CR, PR 또는 비반응 (n = 20) 환자의 PFS 및 OS를 나타낸다. 도 6B는 CR, PR 또는 비반응 (SD/PD) 환자에서 PFS 및 OS를 보여주며, 이는 재스테이징에 앞서 사망한 도 6A의 한 환자를 배제한 것이다. 도 6A 및 6B 모두에 있어서, CR을 달성한 대상자들, PR을 달성한 대상자들 및 비-반응자 군에 대한 별도 곡선들이 도시되어 있다. CR/PR 환자의 PFS와 OS 추적 기간의 중앙값은 각각 12.3 개월과 12.4 개월이다. mPFS, 중앙 PFS; OS, 중앙 OS; NR에 도달하지 못하였다.
[89] 도 7은 유세포 분석에 의한 CAR-T 세포 주입 4 주 후 골수에서 완전 관해(CR)를 달성하고, 검출 가능한 악성 IGH 카피 (IGHseq-양성)을 가진 대상자들에 비해 검출 불가능한 악성 IGH 카피 (IGHseq-음성)을 가진 14명의 대상자들에 대한 퍼센트 무진행 생존 (PFS) 및 전체 생존 (OS) 곡선을 나타낸다.
[90] 도 8은 도 8은 완전 관해 (CR)를 달성하고 골수의 IGH 심층 시퀀싱을 수행한 14 명의 대상자에 대한 CD4+/EGFRt+ 및 CD8+/EGFRt+CAR-T 세포 카운트를 나타낸다.
[91] 도 9A는 고해상도 유세포 분석법에 의해 골수에서 질환이 소거됐거나(예) 그렇지 않은(아니오) 환자의 혈액 중 피크 CD4+/EGFRt+ (좌측) 및 CD8+/EGFRt+ (우측) CAR-T 세포 카운트를 나타낸 도면이다
[92] 도 9B는 고해상도 유세포 분석법에 의해 골수에서 질환이 소거되고 골수에서 검출가능한 악성 IGH 서열을 갖거나 갖지 않는 환자들의 혈액에서의 피크 CD4+/EGFRt+ (좌측) 및 CD8+/EGFRt+ (우측) CAR-T 세포 카운트를 나타낸다
[93] 도 10A는 혈액 내의 CD4+/EGFRt+ 또는 CD8+/EGFRt+ CAR-T 세포 갯수에 기초하여 구축된 3-5 등급의 신경독성 발달에 관한 추정된 확률곡선 및 추정된 반응 확률곡선을 나타낸 도면이다.
[94] 도 10B는 혈액내 CD4+/EGFRt+ 또는 CD8+/EGFRt+ CAR-T 세포의 갯수에 기초하여 구축된, IWCLL 기준에 의한 골수 반응, 완전 또는 부분 관해(CR/PR), 2-5 등급의 사이토카인 방출 증후군 발생 및 2-5 둥급의 신경독성(NT) 발생의 추정된 확률 곡선을 나타낸 도면이다.
[95] 도 11은 CAR-T 세포 면역요법 후 최상의 반응 중 고위험 CLL 환자에서 IWCLL (2008) 촬영 기준에 의한 CT 스캔에서 6 개의 가장 큰 림프절의 단면적 변화를 나타낸 그래프이다. 종양 측정을 가능하게하는 고해상도 촬영이없는 4 명의 환자 (2 CR, 1 SD, 1 사망)는 표시되지 않았다.
상세한 설명
I. 유전자 조작된 세포를 이용한 세포 치료법 및 사용 방법
[96] 다양한 암 및 종양을 포함하는 질환 또는 상태의 치료를 위한 세포 치료에 사용하기 위한 방법 및 조성물이 제공된다. 상기 방법은 이들 질환 또는 상태와 관련된 분자를 인식 및/또는 특이적으로 결합하도록 설계된 재조합 수용체를 발현하고 그러한 분자에 결합시 이러한 분자에 대한 면역 반응과 같은 반응을 일으키는 조작된 세포를 투여하는 것을 포함한다. 수용체는 키메라 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체 (CAR) 및 트랜스제닉 T 세포 수용체 (TCR)를 포함하는 다른 트랜스제닉 항원 수용체를 포함 할 수 있다.
[97] 일부 구체예에서, 세포, 집단 및 조성물은 예를 들어 입양 T 세포 요법와 같은 입양 세포 요법을 통해, 치료될 특정 질환 또는 상태를 갖는 대상자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 상기 방법은 만성 림프구성 백혈병(CLL) 또는 비-호지킨 림프종(NHL)을 앓는 대상자를 항원 수용체-발현 세포 (예를 들어, CAR-발현 세포)의 투여량으로 치료하는 것을 포함한다.
[98] 일부 구체예에서, 대상자는 면역고갈 (예: 림프구 고갈) 요법으로 사전컨디셔닝시켰다. 면역고갈 (예: 림프구 고갈) 요법을 받는 사전 컨디셔닝 대상자는 입양세포 요법(ACT)의 효과를 향상시킬 수 있다. 사이클로스포린과 플루다라빈의 조합을 포함하여 림프구고갈요법제를 이용한 사전컨디셔닝은 전달된 세포의 반응 및/또는 지속성을 향상시키는 것을 포함하여, 세포 치료에서 전이된 종양 침윤 림프구 (TIL) 세포의 효능을 향상시키는데 효과적이었다. 예를 들어, Dudley et al., 2002 Science, 298, 850-54; Rosenberg 등, Clin Cancer Res 2011, 17 (13): 4550-4557 참조. 이러한 사전 컨디셔닝은 치료 효능을 저해할 수 있는 여러 가지 결과 중 하나 이상의 위험을 줄이려는 목적으로 수행될 수 있다. 여기에는 T 세포, B 세포, NK 세포가 IL-2, IL-7 및/또는 IL-15와 같은 사이토카인의 항상성 및 활성화를 위해 TIL과 경쟁하는 "사이토카인 싱크 (cytokine sink)"로 알려진 현상; 조절 T 세포, NK 세포 또는 면역계의 다른 세포에 의한 TIL 억제; 종양 미세 환경에서 네거티브 레귤레이터의 영향이 포함된다. Muranski 등, Nat Clin Pract Oncol. 2006 년 12 월; 3 (12) : 668-681.
[99] 따라서, 일부 구체예에서, 이 방법은 세포의 투여량 투여 전에 예컨대 종양 부담을 덜기 위해 예컨대, 컨디셔닝 화학요법제와 같은 화학요법제를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 이 방법은 림프구고갈 또는 화학요법제, 예컨대 사이클로포스파미드, 플루다라빈, 또는 이들의 조합과 같은 사전컨디셔닝제를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 이 방법들은 플루다라빈 및, 경우에 따라, 플루다라빈 이외의 다른 화학요법제의 투여를 포함한다. 일부 구체예에서, 다른 화학요법제는 사이클로포스파미드이다. 일부 구체예에서, 대상자는 세포 투여량의 투여로부터 적어도 2일 전, 예컨대 적어도 3, 4, 5, 6, 또는 7일 전에, 림프구고갈 치료제가 투여될 수 있다. 일부 구체예에서, 림프구고갈 치료제는 세포 투여량의 투여로부터 적어도 또는 적어도 약 48 시간 전 또는 적어도 또는 적어도 약 96 시간 전에 투여 또는 개시된다. 일부 구체예에서, 림프구고갈 치료제는 세포의 투여량의 투여 전 약 48 시간 내지 약 96 시간 사이에 투여되거나 개시된다.
[100] 그러므로, 일부 구체예에서, 이들 방법은 1차 투여 또는 후속 투여 전에 대상자에게 사전컨디셔닝 제제, 예컨대 림프구고갈 또는 화학요법제, 예컨대 사이클로포스파미드, 플루다라빈, 또는 이들의 조합을 투여하는 것을 포함한다. 예를 들어, 대상자는 1차 또는 후속 투여로부터 적어도 2 일 전, 예컨대 적어도 3, 4, 5, 6, 또는 7 일 전에 사전컨디셔닝 제제를 투여받을 수 있다. 일부 구체예에서, 대상자는 1차 또는 후속 투여로부터 7일 이하 전, 예컨대. 6, 5, 4, 3, 또는 2 일 이하 전에 사전컨디셔닝 제제를 투여받을 수 있다.
[101] 일부 구체예에서, 대상자는 약 20 mg/kg 내지 100 mg/kg, 예컨대 약 40 mg/kg 내지 80 mg/kg 또는 약 30 mg/kg 내지 60 mg/kg의 투여량의 사이클로포스파미드로 사전컨디셔닝된다. 일부 측면에서, 대상자는 약 60 mg/kg의 사이클로포스파미드로 사전컨디셔닝된다. 일부 구체예에서, 사이클로포스파미드는 1회 투여되거나 또는 복수회 투여될 수 있으며, 예컨대 매일, 격일 또는 3일에 한번 투여될 수 있다. 일부 구체예에서, 사이클로포스파미드는 1일 또는 2일 동안 하루 한번 투여된다. 일부 구체예에서, 림프구고갈 치료제가 사이클로포스파미드를 포함하면, 그 대상자는 사이클로포스파미드를 약 100 mg/m2 내지 500 mg/m2, 에컨대 약 200 mg/m2 내지 400 mg/m2, 또는 250 mg/m2 내지 350 mg/m2의 투여량으로 투여받는다. 일부 경우에서, 대상자는 약 300 mg/m2의 사이클로포스파미드를 투여받는다. 일부 구체예에서, 사이클로포스파미드는 1회 투여되거나 또는 복수회, 예컨대 매일, 격일 또는 3일에 한번 투여된다. 일부 구체예에서, 사이클로포스파미드는 예컨대 1-5일, 에컨대 3-5일 동안 매일 투여된다. 일부 경우에서, 대상자는 약 300 mg/m2의 사이클로포스파미드를 세포 요법 개시 전에 3일간 매일 투여받는다.
[102] 일부 구체예에서, 림프구고갈 치료제가 플루다라빈을 포함하는 경우, 대상자는 플루다라빈을 약 1 mg/m2 내지 100 mg/m2, 예컨대 약 10 mg/m2 내지 75 mg/m2, 15 mg/m2 내지 50 mg/m2, 20 mg/m2 내지 40 mg/m2, 20 mg/m2 내지 30 mg/m2, 24 mg/m2 내지 35 mg/m2 또는 24 mg/m2 내지 26 mg/m2의 투여량으로 투여받는다. 일부 경우에서, 대상자는 25 mg/m2의 플루다라빈을 투여받는다. 일부 경우에서, 대상자는 약 30 mg/m2의 플루다라빈을 투여받는다. 일부 구체예에서, 플루다라빈은 1회 투여되거나 또는 복수회, 예컨대 매일, 격일 또는 3일에 한번 투여될 수 있다. 일부 구체예에서, 플루다라빈은 예컨대 1-5 일, 예를 들어, 3 내지 5 일 동안 매일 투여된다. 일부 경우에서, 대상자는 세포 요법 개시 전에 약 30 mg/m2의 플루다라빈을, 3일간 매일 투여받는다.
[103] 일부 구체예에서, 림프구고갈 치료제는 사이클로포스파미드 및 플루다라빈의 조합과 같은 조합 제제를 포함한다. 그러므로, 제제들의 조합은 임의 투여량의 사이클로포스파미드 또는 전술한 바와 같은 투여 스케쥬르, 및 임의 투여량의 플루다라빈, 또는 전술한 바와 같은 투여 스케쥴을 포함할 수 있다. 예를 들어, 일부 측면에서, 대상자에게 세포 투여에 앞서 30-60 mg/kg (~1-2 g/m2)의 사이클로포스파미드 및 3 내지 5 투여량의 25 mg/m2 플루다라빈을 투여한다. 일부 측면에서, 대상자에게 1차 또는 후속 투여에 앞서 60 mg/kg (~2 g/m2)의 사이클로포스파미드 및 3 내지 5 투여량의 25 mg/m2 플루다라빈을 투여한다. 일부 구체예에서, 대상자들, 예컨대, 이전에 복수 사이클이 화학요법을 받았고, 이전에 동종 이식 수술을 받았으며, 골수 예비율이 낮거나 및/또는, 다른 심각한 합병증이 있는 대상자들의 독성을 최소화하기 위해, 플루다라빈과 통시투여되는 사이클로포스파미드을 보다 낮은 총 투여량으로 투여하거나 또는 사이클로포스파미드의 투여량을 감소 또는 생략함으로써 림프구고갈 화학요법을 변형시킬 수 있다.
[104] 일부 구체예에서, 항원 수용체 (예컨대 CAR)는 CLL 또는 NHL과 관련된 질환 또는 상태와 관련된 표적 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 구체예에서, 질환 또는 장애와 관련된 항원은 CD20, CD19, CD22, ROR1, CD45, CD21, CD5, CD33, Ig카파, Ig람다, CD79a, CD79b 또는 CD30으로부터 선택된다.
[105] 일부 구체예에서, 상기 방법은 세포 또는 세포를 함유하는 조성물을 대상자, 조직 또는 세포, 예를 들어 질환, 상태 또는 장애를 갖거나 또는 갖는 것으로 의심되는 대상에 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 대상자는 성인이다. 일부 구체예에서, 대상자는 연령이 약 30, 40, 50, 60, 또는 70세 이상이다.
[106] 일부 구체예에서, 제공된 방법은 입양 세포 치료 방법, 예컨대 CAR+ T 세포, 만성 림프구성 백혈병 (CLL)을 치료하기 위한 방법이다. CLL은 가장 흔한 성인 백혈병이다. 일부 사례에서, del(17)(p13.1), p53 돌연변이, 복합 핵형(CK), 또는 돌연변이되지 않은 면역글로불린 가변 영역에 의해 나타나는 고위험 질환에 걸린 환자들은 조기 치료가 요구되거나 및/또는 생존기간이 더 짧다 (Dohner 외 (2000) N. Engl. J. Med., 343:1910-1916; Stilgenbauer 외 (2014) Blood, 123:3247-3254; Thompson 외 (2015) Cancer, 121:3612-3621) . 고위험 CCL에 대한 치료 방법으로는 화학요법 (Hallek 외 (2010) Lancet 376:1164-1174)을 들 수 있으며, 최근 BTK 억제제, 이브루티닙이 재발 및 불응성 질환에 대해 초기 승인되었고 이어서 제1선 요법으로서 승인된 바 있다(Burger 외 (2015) N. Engl J. Med., 373:2425-2437; Byrd 외 (2013) N. Engl. J. Med., 369:32-42). 이브루티닙에 대한 전체 반응률 (ORR)은 높지만, 완전 반응률 (CR; 또는 완전 관해)은 일부 경우, 낮을 수 있고, 이브루티닙 진행 환자의 생존기간은 짧을 수 있다. 고위험 CLL에 대한 또 다른 치료법은 BCL2 억제제인 베네토클락스인데, 이것은 이브루티닙이 실패한 일부 환자에서 활성을 보였지만, CR은 희귀하고 지속성은 보고되지 않았다 (Stilgenbauer 외 (2016) Lancet Oncol., 17:768-778).
[107] 입양 T 세포 치료법과 같은 T 세포-기반 치료법 (키메라 항원 수용체 (CAR) 및/또는 다른 재조합 항원 수용체와 같은 관심 대상 질병 또는 장애에 특이적인 키메라 수용체를 발현하는 세포의 투여와 관련된 것들 및 다른 입양 면역 세포 및 입양 T 세포 요법을 포함함)은 암 및 기타 질환 및 장애의 치료에 효과적일 수 있다. T 세포의 표면 상에 키메라 항원 수용체 (CAR)와 같은 재조합 수용체의 조작된 발현은 T-세포 특이성의 전환(redirection)을 가능하게 한다. 임상 연구에서, CAR-T 세포, 예를 들어 항-CD19 CAR-T 세포는 백혈병 및 림프종 환자 모두에서 내구적이고 완전한 반응을 나타냈다 (Porter 외 (2015) Sci Transl Med., 7:303ra139; Kochenderfer (2015) J. Clin. Oncol., 33: 540-9; Lee 외 (2015) Lancet, 385:517-28; Maude 외 (2014) N Engl J Med, 371:1507-17).
[108] 일부 구체예에서, 제공된 방법 및 용도는 특정 대체 방법, 예를 들어 고위험 질환을 갖는 환자를 비롯하여 CLL 또는 NHL과 같은 백혈병 환자와 같은 특정 그룹의 치료된 대상자에서, 특정 대체 방법에 비해 개선되거나 내구성 있는 반응 또는 효능을 제공하거나 달성한다. 일부 구체예에서, 상기 방법은 예를 들어 T 세포 요법제 (예를 들어, CAR-발현 T 세포)과 같은 양성 세포 치료용 세포 및 림프구 결핍 치료제, 예컨대 사이클로포스파미드, 플루다라빈 또는 이의 조합과 같은 T 세포 요법제를 투여함으로써 유리하다. 일부 구체예에서, 제공된 방법은 림프구고갈 및 CLL-표적화 된 CAR-T 세포 요법, 예컨대 항-CD19 CAR+ T 세포 요법 후 고위험성 이브루티닙 불응성 CLL 환자에서 높은 비율의 골수 질환 제거 및 분자 CR이 관찰되었다는데 기초한 것이다. 이러한 결과는 일반적으로 관리가능한 심각한 독성의 발생률이 상대적으로 낮기 때문에 달성되었다.
[109] 일부 구체예에서, 상기 방법은 CLL의 특정 예후 또는 위험성을 갖는 것으로 동정되거나 선택된 대상자에게 세포를 투여하는 것을 포함한다. 만성 림프구성 백혈병 (CLL)은 일반적으로 가변적인 질환이다. CLL에 걸린 일부 대상자는 치료없이 생존할 수 있지만 다른 대상자는 즉각적인 개입이 필요할 수 있다. 어떤 경우에는, CLL에 걸린 대상자는 질병 예후 및/또는 치료 전략을 알릴 수 있는 그룹으로 분류될 수 있다. 일부 사례에서 이들 그룹은 "저위험", "중간 위험", "고위험"및/또는 "매우 고위험"일 수 있으며 환자는 비제한적인 예로서 다음과 같은 여러 요인, 즉, 유전적 이상 및/또는 형태학적 또는 물리적 특성에 따라 분류될 수 있다. 일부 구체예에서, 상기 방법에 따라 치료된 대상자들은 CLL의 위험에 기초하여 분류되거나 동정된다. 일부 구체예에서, 대상자는 고위험 CLL에 걸린 대상자이다.
[110] 일부 사례에서, 대상자들을 분류하는 한 가지 방법은 라이(Rai) 시스템이다. 일부 측면에서 라이 시스템은 5 단계로 구성된다: 라이 단계 0: 림프구 증가 및 림프절, 비장 또는 간의 확대가 없으면서 정상에 가까운 적혈구 및 혈소판 수치: 15,000/mcL 이상의 혈중 림프구 및 골수 내> 40% 림프구. 라이 I 단계: 림프구 증가 플러스와 림프절 확장. 비장과 간은 확대되지 않고 적혈구와 혈소판 수는 정상에 가깝다. 라이 II 단계: 림프구 증가 플러스 확대된 비장 (가능하게는 확대된 간). 림프절 확대는 있거나 없음. 적혈구와 혈소판 수치는 정상에 가깝다. 라이 단계 III: 림프구 증가 플러스 빈혈 (적혈구가 너무 적음), 림프절, 비장 또는 간의 확대가 있거나 없음. 라이 단계들은 다음과 같은 위험군으로 추가 분류될 수도 있다: 단계 0은 저위험으로 고려된다; 단계 I 및 II는 중감 위험으로 고려된다; 단계 III 및 IV는 고위험으로 고려되고 일부 등급 시스템에서는 질병-관련 빈혈도 포함한다(헤모글로빈 수준 < 11.0 g/dL 또는 헤마토크릿 < 33%) 또는 혈소판 < 100,000/mcL. 일부 사례에서, 대상자들은 또한, 비넷(Binet) 시스템에 따른 그룹으로 분류될 수도 있는데, 일부 경우에서 이것은 영향을 받는 림프계 조직 그룹 (목 림프절, 사타구니 림프절, 겨드랑이 림프절, 비장, 간장)의 수를 평가하는 것과 환자가 빈혈 (적혈구가 너무 적음) 또는 혈소판 감소증 (혈소판이 너무 적음)이 있는지의 여부를 평가하는 것을 포함한다. 일부 측면에서 비넷 단계는 다음의 3가지 단계를 포함함다: 비넷 단계 A: 헤모글로빈 ≥ 10 g/dL, 혈소판 ≥ 100,000/mm3 및 <3 개의 확대 된 영역; 비넷 단계 B: 헤모글로빈 ≥ 10 g/dL, 혈소판 ≥ 100,000/mm3, 및 < 3 영역 확대; 및 비넷 단계 C: 헤모글로빈 <10 g/dL, 혈소판 <100,000/mm3 및 임의의 수의 확대 된 영역 및 빈혈 및/또는 혈소판 감소증이 존재한다. (Rai KR, Keating HJ. Chronic lymphocytic leukemia. In: Cancer Medicine. 4th ed. Baltimore, Md: Williams and Wilkins; 1997. Vol II: 2697-728; Hallek M. et al. Guidelines for the diagnosis and treatment of chronic lymphocytic leukemia: a report from the International Workshop on Chronic Lymphocytic Leukemia updating the National Cancer Institute-Working Group 1996 guidelines. Blood 2008. 111:5446-56).
[111] CLL에 걸린 대상자를 분류하는 추가의 방법은 유전적 분석 및 유전적 이상의 존재 또는 부재의 결정을 포함한다. 일부 예에서, 예후 유전자 이상은 염색체 13 (del 13q), del 11q, 삼염색체 12, del 17p 및 del 6q의 장완의 결실을 포함하는 세포유전학적 이상을 포함한다. 11q, 13q, 17p 및 삼염색체 12의 결실은 예후 가치를 가질 수 있으며 CLL의 병인 및 진화에 기여하고 결과 및 치료 전략에 대한 정보를 줄 수 있다. 이상(abhnormalities)은 FISH 분석과 같은 보다 전통적인 방법으로는 검출 할 수없는 것도 포함한다. 일부 측면에서, 불균형 전위 및 복합 핵형을 포함하는 염색체 전위는 나쁜 결과 및/또는 불량 예후와 관련될 수 있다. 일반적으로 세 가지 이상의 염색체 이상의 존재로 정의되는 복합 핵형 (CK)은 CLL 대상자의 거의 16%에서 검출되며 돌연변이가 없는 IgHV 상태 및 CD38 발현과 관련되어 있다. CK는 클로로데옥시아데노신(cdA)을 포함한 구제(salvage) 요법으로 치료받은 CLL 대상자에서 첫 치료 (TTFT) 및 전체 생존 (OS)까지 단축 된 기간을 예측할 수 있다. 핵형 이상의 수는 컨디셔닝 후 조혈 줄기 세포 이식 (HSCT) 후 더 짧은 무진행 생존 (PFS) 및 OS와 연관될 수 있다. 대상자가 고위험 또는 매우 고위험임을 나타낼 수 있는 다른 유전적 변형에는 IgVH, ZAP70 및/또는 CD38의 돌연변이가 포함된다 (Gribben, ASH Education Book; January 1, 2008, vol. 2008 no. 1, 444-449; Puiggros 외, BioMed Research International, Volume 2014 (2014), Article ID 435983). 일부 사례에서, 고위험 또는 매우 고위험 환자들은 하나 이상의 유전자 이상을 나타낼 수 있다.
[112] 일부 구체예에서, 대상자는 하나 이상의 세포유전학적 이상, 예컨대 복합 핵형, 염색체 13의 장완의 결실 (del 13q), del 11, 삼염색체 12, del 17p, del 6q, 및 del 13q.14 중 하나 이상을 나타낼 수 있다. 일부 구체예에서, 세포유전학적 이상 중 임의의 1종 이상은 형광 동소보합법(fluorescence in situ hybridization: FISH)에 의해 검출가능하다.
[113] 일부 구체예에서, CLL에 걸린 대상자들은 리히터 증후군(Richter's syndrome: RS)을 나타낸다. RS는 is defined as the transformation of CLL의 공격성 림프종, 가장 흔하게는 미만성 거대 B-세포 림프종 (DLBCL)으로의 전환으로서 정의된다 (참조: 예컨대, Parikh 외 Blood 2014 123:1647-1657).
[114] 일부 구체예에서, CLL 및/또는 RS에 걸린 대상자들은 중추신경계 (CNS)에서의 증상 또는 합병증과 같은 신경 증상 또는 신경 합병증을 나타낸다. 일부 구체예에서, CNS 관련 증상, 예를 들어, 림프구의 모노클로날 클론 개체군의 존재를 평가하기 위해 CNS (예: 뇌, 척추) 및/또는 뇌척수액 (CSF) 분석의 자기 공명 영상 (MRI)을 이용할 수 있다(참조, 예컨대, Mozzam 외, J. Neurooncol. 2012 106:185-200; Strati 외, Haematologica 2016 101: 458-465).
[115] 일부 구체예에서, 이들 방법은 고위험 NHL을 갖는 것으로 선택 또는 대상자에게 세포를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 대상자는 예컨대 고위험 NHL과 연관된 하나 이상의 세포유전학적 이상을 나타낸다. 일부 구체예에서, 대상자는 공격성 NHL, 미만성 거대 B 세포 림프종 (DLBCL), 원발성 종격동 거대 B 세포 림프종 (PMBCL), T 세포/조직구가 풍부한 거대 B 세포 림프종 (TCHRBCL), 버킷 림프종, 외투세포 림프종 (MCL), 및/또는 소포성 림프종 (FL)인 것으로 특징 또는 결정된 질환 또는 상태를 갖는 것에 기초하여 선택 또는 동정된다.
[116] 일부 구체예에서, 대상자는 재조합 항원 수용체를 발현하는 세포의 투여 전에, 예컨대 CLL 또는 NHL과 같은 질환 또는 상태를 치료하기 위한 치료제 또는 요법으로 이전에 치료된 바 있다. 일부 구체예에서, 치료제는 키나아제 억제제, 예컨대 브루톤 티로신 키나아제 (Btk: Bruton's tyrosine kinase), 예를 들어, 이브루티닙이다. 일부 구체예에서, 치료제는 B-세포 림프종-2 (Bcl-2)의 억제제, 예를 들어, 베네토클락스이다. 일부 구체예에서, 치료제는 CLL 또는 NHL의 세포에 의해 발현되는 항원, 예컨대 CD20, CD19, CD22, ROR1, CD45, CD21, CD5, CD33, Ig카파, Ig람다, CD79a, CD79b 또는 CD30 중 임의의 하나 이상의 항원에 특이적으로 결합하는 항체(예컨대 모노클로날 항체) 이다. 일부 구체예에서, 치료제는 항-CD20 항체, 예컨대, 리툭시맙이다. 일부 구체예에서, 치료제는 리툭시맙을 포함하는 조합 요법, 예컨대, 플루다라빈 및 리툭시맙의 조합 요법 또는 안트라사이클린 및 리툭시맙의 조합 요법인 고갈 화학요법제이다. 일부 구체예에서, 대상자는 조혈 줄기 세포 이식 (HSCT), 예컨대, 동종 HSCT 또는 자가 HSCT로 이전에 치료된 바 있다. 일부 구체예에서, 대상자는 항원 수용체를 발현하는 세포의 투여량 및/또는 림프구고갈 요법 이외의 NHL 또는 CLL을 치료하기 위한 적어도 또는 약 적어도 또는 약 1, 2, 3, 또는 4종의 다른 치료법으로 이전에 치료받은 바 있거나 치료된 적이 있다. 일부 구체예에서, 대상자는 화학요법 또는 방사선 요법을 이전에 받은 바 있다.
[117] 일부 측면에서, 대상자는 다른 치료법 또는 치료제에 대해 불응성이거나 비-반응성이다. 일부 구체예에서, 대상자는 예컨대 화학요법 또는 방사선 치료를 포함하는 다른 치료 또는 치료적 개재로 치료된 후 지속적 또는 재발성 질환을 갖는다.
[118] 일부 사례에서, 치료 또는 요법 (또는 특정 카테고리의 것들)은 저위험 및 중간위험 카테고리의 CLL 대상자들에 있어 권장되지 않을 수 있다. 일부 사례에서, 고위험 및 매우 고위험 대상자들에 대한 치료 전략은 플루다라빈, 사이클로포스파미드, 및 리툭시맙 (FCR), BTK 억제제s (예컨대 이브루티닙), 및/또는 동종 줄기 세포 이식을 포함할 수 있다 (Puiggros 외, BioMed Research International, Volume 2014 (2014), Article ID 435983). 일부 측면에서, CLL 치료를 받은 대상자들은 불량한 장기간 결과를 나타낸다 예를 들어, 일부 경우에서, 불응성 (R/R) 고위험 CLL 대상자들은 이브루티닙 중단 후 불량한 생존을 나타낸다 (Jain 외 (2015) Blood 125(13):2062-2067). CLL 치료를 위한 개선된 방법 및 일부 측면에서, 복수의 이전 치료에 대해 재발성 또는 불응성이 된 고위험 및/또는 매우 고위험 CLL 및/또는 대상자들을 치료하는 적절한 방법이 요구되고 있다.
[119] 일부 구체예에서, 제공된 방법은 암에 걸린 대상자들에 사용되기 위한 것으로서 여기서 상기 대상자 및/또는 암은 이르브루티닙에 의한 억제에 내성이거나 억제제에 의한 억제에 내성을 나타내는 세포 집단을 포함한다. 일부 측면에서, 환자는 고위험 세포유전학에 기초하거나 및/또는 예컨대 이브루티닙 내성을 부여하는 조기 검출에 의한 재발 이전의 돌연변이의 존재에 기초하여 불응성이거나 불응성으로 될 가능성이 높은 자들로부터 선택된다. 일부 구체예에서, 제공된 방법은 암에 걸린 대상자에 사용되기 위한 것으로 여기서 상기 대상자 및/또는 암은 BTK를 인코딩하는 핵산이 돌연변이 또는 파괴를 포함하는 것이고, 상기 돌연변이는 예컨대 이브루티닙과 같은 억제제에 의해 BTK의 억제를 감소 또는 예방할 수 있는 것이다. 본원에 제공된 임의의 방법들의 일부 측면에서, BTK를 인코딩하는 핵산의 돌연변이는 C481 위치에서의 치환, 경우에 따라 C481S 또는 C481R, 및/또는 T474 위치에서의 치환, 경우에 따라 T474I 또는 T474M을 함유한다. 일부 구체예에서, 제공된 방법은 예컨대 T 세포 요법 (예컨대 CAR-발현 T 세포)과 같은 입양 세포 요법 투여시 및/또는 림프구고갈요법 투여시, 암에 걸린 대상자에게 사용되기 위한 것으로, 상기 대상자는 이브루팁 치료에 대해 불응성으로 여겨지거나 또는 치료후 관해에 이어 재발된 대상자이다.
[120] 입양 세포 요법을 위한 세포의 투여 방법은 공지이며 제공된 방법 및 조성물과 연계하여 이용될 수 있다. 예를 들어, 입양 T 세포 치료 방법은 예컨대, in 그루엔버그 등의 미국 특허 출원 공개 No. 2003/0170238외; 로젠버그의 미국 특허 No. 4,690,915; Rosenberg (2011) Nat Rev Clin Oncol. 8(10):577-85)에 설명되어 있다. 참조 [예컨대, Themeli 외 (2013) Nat Biotechnol. 31(10): 928-933; Tsukahara 외 (2013) Biochem Biophys Res Commun 438(1): 84-9; Davila 외 (2013) PLoS ONE 8(4): e61338].
[121] 일부 구체예에서, 세포 요법, 예컨대, 입양 세포 요법, 예컨대, 입양 T 세포 요법은, 세포가 세포 요법을 받을 대상자 또는 그러한 대상자로부터 유래된 샘플로부터 분리 및/또는 달리 조제되는, 자가 전달에 의해 수행된다. 따라서, 일부 측면에서, 세포는 치료를 필요로 하는 대상자, 예컨대 환자로부터 유래되며 세포는 단리 및 가공 후 동일한 대상자에게 투여된다.
[122] 일부 구체예에서, 세포 요법, 예컨대, 입양 세포 요법, 예컨대, 입양 T 세포 요법은, 세포가 세포 요법을 받을 대상자 또는 세포 요법을 궁극적으로 받을 대상자 예컨대 제1 대상자 이외의 대상자로부터 분리 및/또는 달리 조제되는, 동종 전달에 의해 수행된다. 이러한 구체예에서, 세포는 이어서 상이한 대상자, 예컨대 동일한 종의 제2 대상자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 제1 및 제2 대상자들은 유전적으로 동일하다. 일부 구체예에서, 제1 및 제2 대상자들은 유전적으로 유사하다. 일부 구체예에서, 제2 대상자는 제1 대상자와 동일한 HLA 클래스 또는 수퍼타입을 발현한다.
[123] 세포는 적절한 수단, 예를 들어, 볼루스 주입, 주사, 예를 들어, 정맥 내 또는 피하 주사, 안내 주사, 눈 주위 주사, 망막하 주사, 유리체강내 주사, 경 중격 주사, 공막하 주사, 맥락막내 주사, 전방내 주사, 결막하 주사, 결막하 주사, 서브-테넌 주사, 안구후 주사, 과피 주사 또는 후방 경점막 전달에 의해 수행될 수 있다. 일부 구체예에서, 이들은 비경구, 폐내 및 비내 투여되고, 국소 치료를 위해 필요하다면 병변내 투여된다. 비경구 주입에는 근육 내, 정맥 내, 동맥 내, 복강 내 또는 피하 투여가 포함된다. 일부 구체예에서, 주어진 투여량은 세포의 단일 볼루스 투여에 의해 투여된다. 일부 구체예에서, 이는 예를 들어 3 일 이하의 기간에 걸쳐 또는 세포의 연속 주입 투여에 의해 세포의 여러 볼루스 투여에 의해 투여된다.
[124] 질병의 예방 및 치료를 위해, 적절한 투여량은 세포가 예방적 또는 치료목적 목적, 이전 치료법, 대상자의 치료적 기록 및 세포에 대한 반응 및 주치의의 재량으로 투여되는지 여부에 따라 치료될 질병의 유형, 세포 또는 재조합 수용체의 유형, 질병의 중증도 및 결과에 의존한다. 조성물 및 세포는 일부 구체예에서 한번에 또는 일련의 치료에 걸쳐 대상자에게 적절하게 투여된다.
[125] 일단 세포가 대상자 (예를 들어, 사람)에게 투여되면, 일부 관점에 있어서 가공된 세포 모집단의 생물학적 활성은 다수의 공지된 방법 중 임의의 방법에 의해 측정된다. 평가할 파라미터는 가공된 또는 자연의 T 세포 또는 다른 면역 세포의 항원에 대한 특이적 결합, 예를 들어, 생체 내 이미징 또는 예를 들어, 생체 외 ELISA 또는 유동 세포 측정법에 의한 특이적 결합을 포함한다. 특정 구체예에서, 가공된 세포가 표적 세포를 파괴시키는 능력은 예를 들어 Kochenderfer 등, J.Immunotherapy, 32 (7)에 기재된 세포 독성 검정과 같은 당업계에 공지된 임의의 적합한 방법을 사용하여 측정 될 수 있다: 689-702 (2009) 및 Herman et al. J. Immunological Methods, 285 (1): 25-40 (2004). 특정 구체예에서, 세포의 생물학적 활성은 또한 CD 107a, IFNγ, IL-2 및 TNF와 같은 특정 사이토카인의 발현 및/또는 분비를 분석함으로써 측정될 수 있다. 일부 측면에 있어서, 생물학적 활성은 종양 부담 또는 부하의 감소와 같은 치료적 결과를 평가함으로써 측정된다.　일부 측면에 있어서, 독성 결과, 세포의 지속성 및/또는 팽창 및/또는 숙주 면역 반응의 존재 또는 부재가 평가된다.
[126] 특정 구체예에서, 가공된 세포는 그 치료 또는 예방 효능이 증가되도록 임의의 수의 방식으로 변형된다. 예를 들어, 집단에 의해 발현된 가공된 CAR 또는 TCR은 직접적으로 또는 링커를 통해 간접적으로 표적 모이어티에 접합될 수 있다. 화합물, 예를 들어, CAR 또는 TCR을 표적 모이어티에 접합시키는 실시방법은 당업계에 공지되어있다. 예를 들어, Wadwa 등, J. Drug Targeting 3 : 111 (1995) 및 미국 특허 제 5,087,616 호 참조.
[127] 일부 구체예에서, 세포는 항체 또는 조작된 세포 또는 수용체 또는 제제, 예컨대 세포독성제 또는 치료제와 같은 다른 치료적 개재와 동시에 또는 임의 순서로 순차적으로, 조합 치료의 일부로서 투여된다. 일부 구체예에서 세포는 하나 이상의 부가적인 치료제와 공동-투여되거나 또는 다른 치료적 개재와 연계하여 동시에 또는 임의 순서로 순차적으로 투여된다. 일부 맥락에서, 세포는 세포 집단들이 하나 이상의 치료제의 효과를 증강시키도록 또는 그 반대가 되도록, 다른 치료제와 충분히 근접한 시간 내에 공동-투여된다. 일부 구체예에서, 세포는 하나 이상의 부가적인 치료제 투여 전에 투여된다. 일부 구체예에서, 세포는 하나 이상의 부가적인 치료제 후에 투여된다. 일부 구체예에서, 하나 이상의 부가적인 제제는 예를 들어, 지속성 증강을 위해 사이토카인, 예컨대 IL-2를 포함한다.
[128] 본원에 따라 세포 요법, 예컨대, T 세포 요법 (예컨대 CAR-발현 T 세포) 후 대상자들의 예후 또는 병기분류(staging) 방법, 이러한 세포 요법을 받은 대상자들에 있어서의 반응을 모니터링하는 방법 및/또는 이러한 세포 요법에 대한 반응의 내구성을 예측하는 방법이 제공되며, 여기서 이들 방법은 세포요법을 받은 대상자로부터 수득된, 종양 세포를 함유하거나 잠재적으로 함유하는 샘플 내 면역글로불린 중쇄 (IGH) 자리의 시퀀싱을 포함한다. 일부 구체예에서, 이러한 방법은 잔류 종양의 존부를 검사하기 위해, 수확된 샘플, 골수 또는 혈액으로부터의 B 세포 및/ 또는 이로부터 제조된 샘플을 사용하여 예를 들어 잠재적 백혈병 세포의 IGH 유전자좌를 서열화하는 것을 포함한다.
[129] 일부 구체예에서, 예를 들어 백혈병 또는 림프종 예컨대 CLL을 갖는 대상자들의 림프절 크기를 측정하는 것과 관련된 치료법에 대한 반응 속도의 예후, 병기 및/또는 모니터링을 위한 통상적인 방법. CLL은 림프절 크기를 측정하는 것을 포함한다. 예를 들어, 반응률을 평가하기 위한 공통 기준은 만성 림프구성 백혈병에 관한 국제 워크숍 (IWCLL) 반응 기준으로서 (Hallek, et al., Blood 2008, Jun 15; 111 (12) : 5446-5456) 이 기준은, 일부 측면에서 모든 림프절이 ≤ 15 mm일 것을 요구한다. 그러나 어떤 경우에는 세포 치료에 대한 반응이 빠르며 림프절 크기의 측정 가능한 변화 이전에 달성될 수 있음이 밝혀졌다. 따라서, 일부 측면에서, 세포 치료 후 또는 약 4 주 이내와 같은 종양 기준 단독에 의한 초기 재스테이징은 예후의 최적 결정 인자가 아닐 수도 있다. 본원에서 제공된 관측에 기초할 때, 심지어 세포 요법제 투여 후 4 주 이내에, 예를 들어, CAR+ T 세포와 같은 T 세포 요법은 IGH 시퀀싱에 의해 골수로부터 CLL을 제거하는 비율이 높다. 이러한 결과는 IGH 시퀀싱에 의한 대상자들의 조기 재스테이징이 종양 크기 기준에 의존하는 방법에 비해 반응의 반응 및 내구성에 대한 효율적이고 조기 예후 또는 예측 인자를 제공할 수 있음을 나타낸다. 제공된 방법의 일부 구체예에서, IGH 시퀀싱은 세포 치료의 투여 개시 후 2 개월 이하 또는 1 개월 이하와 같이 3 개월 이내로 수행된다. 일부 구체예에서, IGH 시퀀싱은 세포 치료 개시 후 약 2 주일, 약 3 주일, 약 4 주일, 약 5 주일, 약 6 주일, 약 7 주일, 약 8 주일, 약 9 주일, 약 10 주일, 약 11 주일 또는 약 12 주일 이내에 수행된다.
[130] 일부 구체예에서, IGH 서열 방법은 세포 용법으로 치료 후 대상자의 스테이지에 대한 예후 정보를 제공하는데 사용된다. 일부 구체예에서, 검출가능한 악성 IGH 카피 결여가 검출 또는 관찰된 경우, 대상자는 그 세포 요법에 반응하는 것으로, 예컨대 CR 및/또는 내구성 있는 반응과 같은 반응을 나타내거나 발생하거나 및/또는 반응하는 것으로 동정된다. 일부 구체예에서, 제공된 방법에 의해 악성 IGH 카피의 검출 결여는 세포 요법제 투여 개시 후 약 3-6주일 이내, 예컨대 개시 후 약 4주일 이내와 같은 조기 단계에, 대상자가 세포 요법에 대해 완전 반응 (CR) 또는 전체 반응 (OR)을 나타내는 것과 같은, 세포 요법에 대한 반응을 나타내는지 또는 나타낼 가능성이 있는지를 동정하는데 사용된다. 일부 측면에서, 악성 IGH 카피가 검출될 경우 그 대상자는 세포 요법에 반응하지 않거나 및/또는 완전 반응을 나타내지 않거나 및/또는 불량한 예후를 갖거나 또는 부가적인 치료를 필요로 하는 것으로 동정된다. 일부 구체예에서, 제공된 방법에 의한 악성 IGH 카피의 검출은 세포 요법제 투여 개시 후 약 3-6주일 이내, 예컨대 개시 후 약 4주일 이내와 같은 조기 단계에, 대상자가 세포 요법에 대해 반응을 나타내지 않는지 또는 세포 요법에 대해 완전 반응 (CR) 또는 전체 반응 (OR)을 나타내지 않는지를 동정하는데 사용된다. 일부 측면에서, 환자는 반응의 개선 또는 반응 가능성의 개선을 위해 대체적이거나 부가적인 치료 전략의 가능한 투여에 대해 확인될 수 있다. 일부 구체예에서, 이 방법은 예컨대 CLL 또는 NHL와 같은 B 세포 악성 종양을 치료하기 위해, 조작된 T 세포, 예컨대 CAR+ T 세포를 함유하는 것 같은 세포 요법을 받는 대상자들에 대해 수행된다. 일부 구체예에서, 이 방법은 CLL 을 치료하기 위한 세포 요법을 받은 대상자들에 대해 수행된다.
[131] 일부 구체예에서, IGH 시퀀싱 방법은 세포 요법, 예컨대 CAR+ T 세포 요법에 대한 반응 내구성을 평가 또는 결정하는데 사용된다. 일부 구체예에서, 검출가능한 악성 IGH 카피의 결여가 검출되면 대상자는 그 세포 요법에 대해 내구적인 반응을 나타내거나 나타낼 가능성이 있는 것으로 및/또는 재발 위험성이 낮거나 비교적 낮은 것으로 또는 적어도 특정 기간 동안 무진행 생존을 나타내거나 나타낼 가능성이 높은 것으로 예측된다. 일부 구체예에서, 제공된 방법에 의한 악성 IGH 카피의 검출 결여는 세포 요법제 투여 개시로부터 약 90일 이내 또는 이보다 더 일찍과 같은 조기에, 재발 위험성이 낮거나 및/또는 적어도 3개월 이상, 6개월 이상, 9개월 이상 동안 무진행 생존(PFS) 또는 내구성 있는 반응을 발달시킬 가능성이 증가된 대상자들을 조기에 확인하는데 이용된다. 일부 측면에서, 악성 IGH 카피가 검출되면, 그 대상자는 그 세포 요법에 대해 내구성 있는 반응을 나타내지 않거나 또는 나타낼 가능성이 없는 것으로 및/또는 적어도 일정 기간 동안 무진행 생존을 나타낼 가능성이 낮거나 또는 재발 위험성이 높거나 상대적으로 높을 것으로 예측된다. 일부 구체예에서, 제공된 방법에 의한 악성 IGH 카피의 검출은 세포 요법제 투여 개시로부터 약 90일 이내 또는 이보다 더 일찍과 같은 조기에, 재발 위험성이 높거나 및/또는 3개월 미만, 6개월 미만, 9개월 미만 동안 무진행 생존(PFS) 또는 내구성 있는 반응을 발달시킬 가능성이 감소된 대상자들을 조기에 확인하는데 이용된다. 일부 측면에서, 환자는 반응 효능 및/또는 내구성 개선을 위해 대체적이거나 부가적인 치료 전략의 가능한 투여를 위해 확인될 수 있다. 일부 구체예에서, 이 방법은 B 세포 악성종양, 예컨대 CLL 또는 NHL를 치료하기 위해 예컨대 CAR+ T 세포와 같은 조작된 T 세포를 함유하는 것과 같은 세포 요법제를 투여받는 대상자들에 대해 수행된다.
A. 투약 (Dosing)
[132] 일부 구체예에서, 제공된 방법에 따라 대상자들에게 세포 투여량이 투여된다. 일부 구체예에서, 투여량 크기 또는 투여 시기는 대상자에 있어서 특정 질환 또는 상태의 함수로서 결정된다. 이것은 제공된 설명에 비추어 특정 질환에 대한 투여량 크기 또는 투여 시기를 실험적으로 결정하는 통상의 기술자의 수준 범위 내이다.
[133] 특정 구체예에서, the 세포, 또는 세포의 서브집단의 개별 집단을 대상자에게 약 0.1 X 100만개 내지 약 100 X 10억개 세포 및/또는 대상자의 킬로그램 체중 당 세포의 양으로서 예컨대, 0.1 X 100만개 내지 약 50 X 10억개 세포 (예컨대, 약 5 X 100만개 세포, 약 25 X 100만개 세포, 약 500 X 100만개 세포, 약 1 X 10억개 세포, 약 5 X 10억개 세포, 약 20 X 10억개 세포, 약 30 X 10억개 세포, 약 40 X 10억개 세포, 또는 전술한 임의의 두 값에 의해 정의되는 범위), 1 X 100만개 내지 약 50 X 10억개 세포 (예컨대, 약 5 X 100만개 세포, 약 25 X 100만개 세포, 약 500 X 100만개 세포, 약 1 X 10억개 세포, 약 5 X 10억개 세포, 약 20 X 10억개 세포, 약 30 X 10억개 세포, 약 40 X 10억개 세포, 또는 전술한 임의의 두 값에 의해 정의되는 범위), 예컨대 약 10 X 100만개 내지 약 100 X 10억개 세포 (예컨대, 약 20 X 100만개 세포, 약 30 X 100만개 세포, 약 40 X 100만개 세포, 약 60 X 100만개 세포, 약 70 X 100만개 세포, 약 80 X 100만개 세포, 약 90 X 100만개 세포, 약 10 X 10억개 세포, 약 25 X 10억개 세포, 약 50 X 10억개 세포, 약 75 X 10억개 세포, 약 90 X 10억개 세포, 또는 전술한 임의의 두 값에 의해 정의되는 범위), 및 일부 경우 약 100 X 100만개 세포내지 약 50 X 10억개 세포 (예컨대, 약 120 X 100만개 세포, 약 250 X 100만개 세포, 약 350 X 100만개 세포, 약 450 X 100만개 세포, 약 650 X 100만개 세포, 약 800 X 100만개 세포, 약 900 X 100만개 세포, 약 3 X 10억개 세포, 약 30 X 10억개 세포, 약 45 X 10억개 세포) 또는 대상자의 킬로그램 체중 당 이들 범위들 사이의 임의의 값의 범위로 투여한다. 투여량은 질환 또는 장애 및/또는 환자 및/또는 기타 치료법에 특징적인 속성에 따라 변할 수 있다. 일부 구체예에서, 이러한 값들은 재조합 수용체-발현 세포의 갯수를 가리키고; 또 다른 구체예에서, 이들은 투여된 T 세포 또는 PBMCs 또는 총 세포의 수를 가리킨다.
[134] 일부 구체예에서, 세포 요법은 적어도 또는 적어도 약 0.1 x 106 세포/kg 체중 대상자, 0.2 x 106 세포/kg, 0.3 x 106 세포/kg, 0.4 x 106 세포/kg, 0.5 x 106 세포/kg, 1 x 106 세포/kg, 2.0 x 106 세포/kg, 3 x 106 세포/kg 또는 5 x 106 세포/kg의 세포 갯수를 포함하는 투여량의 투여를 포함한다.
[135] 일부 구체예에서, 세포 요법은 0.1 x 106 세포/kg 대상자의 kg 체중 내지 1.0 x 107 세포/kg, 약 0.5 x 106 세포/kg 내지 5 x 106 세포/kg, 약 0.5 x 106 세포/kg 내지 3 x 106 세포/kg, 약 0.5 x 106 세포/kg 내지 2 x 106 세포/kg, 약 0.5 x 106 세포/kg 내지 1 x 106 세포/kg, 약 1.0 x 106 세포/kg 대상자 체중 내지 5 x 106 세포/kg, 약 1.0 x 106 세포/kg 내지 3 x 106 세포/kg, 약 1.0 x 106 세포/kg 내지 2 x 106 세포/kg, 약 2.0 x 106 세포/kg 대상자 체중 및 내지 5 x 106 세포/kg, 약 2.0 x 106 세포/kg 내지 3 x 106 세포/kg, 또는 약 3.0 x 106 세포/kg 대상자 체중 내지 5 x 106 세포/kg의 다수의 세포를 포함하는 투여량을 투여하는 것을 포함한다.
[136] 일부 구체예에서, 세포의 투여량은 약 2 x 105의 세포/kg 내지 약 2 x 106의 세포/kg, 약 4 x 105의 세포/kg 내지 약 1 x 106의 약 6 x 105의 세포/kg 내지 약 8 x 105의 세포/kg이다. 일부 구체예에서, 세포의 투여량은 대상자의 킬로그램 체중 당 2 x 105 이하의 세포 (예컨대 CAR-발현 세포 등의 항원-발현 세포) (세포/kg), 예컨대 약 3 x 105 이하의 세포/kg, 약 4 x 105 이하의 세포/kg, 약 5 x 105 이하의 세포/kg, 약 6 x 105 이하의 세포/kg, 약 7 x 105 이하의 세포/kg, 약 8 x 105 이하의 세포/kg, 약 9 x 105 이하의 세포/kg, 약 1 x 106 이하의 세포/kg, 또는 약 2 x 106 이하의 세포/kg을 포함한다. 일부 구체예에서, 세포의 투여량은 대상자의 킬로그램 체중 당 적어도 또는 적어도 약 2 x 105 세포 (예컨대 CAR-발현 세포 등의 항원-발현 세포) (세포/kg), 예컨대 적어도 또는 적어도 약 3 x 105 세포/kg, 적어도 또는 적어도 약 4 x 105 세포/kg, 적어도 또는 적어도 약 5 x 105 세포/kg, 적어도 또는 적어도 약 6 x 105 세포/kg, 적어도 또는 적어도 약 7 x 105 세포/kg, 적어도 또는 적어도 약 8 x 105 세포/kg, 적어도 또는 적어도 약 9 x 105 세포/kg, 적어도 또는 적어도 약 1 x 106 세포/kg, 또는 적어도 또는 적어도 약 2 x 106 세포/kg을 포함한다.
[137] 일부 구체예에서, 예를 들어, 대상자가 인간인 경우, 투여량은 약 1 x 108 미만의 총 재조합 수용체 (예컨대, CAR)-발현 세포, T 세포, 또는 말초 혈액 단핵 세포 (PBMCs), 예컨대, 약 1 x 106 내지 1 x 108의 그러한 세포, 예컨대 2 x 106, 5 x 106, 1 x 107, 5 x 107, 또는 1 x 108 또는 그러한 총 세포, 또는 전술한 수치들 중 임의의 두 수치 사이의 범위를 포함한다. 일부 구체예에서, 대상자가 인간인 경우, 투여량은 약 1 x 106 내지 3 x 108 총 재조합 수용체 (예컨대, CAR)-발현 세포, 예컨대, 약 1 x 107 내지 2 x 108 범위의 그러한 세포, 예컨대 1 x 107, 5 x 107, 1 x 108 또는 1.5 x 108 그러한 총 세포, 또는 전술한 수치들 중 임의의 두 수치 사이의 범위를 포함한다. 일부 구체예에서, 환자는 다중 투여량으로 투여되고, 투여량 또는 총 투여량은 전술한 값들 중 임의의 값 이내일 수 있다. 일부 구체예에서, 세포의 투여량은 약 1 x 105 내지 5 x 108 총 재조합 수용체-발현 T 세포 또는 총 T 세포, 1 x 105 내지 1 x 108 총 재조합 수용체-발현 T 세포 또는 총 T 세포, 약 5 x 105 내지 1 x 107 총 재조합 수용체-발현 T 세포 또는 총 T 세포, 또는 약 1 x 106 내지 1 x 107 총 재조합 수용체-발현 T 세포 또는 총 T 세포의 투여를 포함한다.
[138] 입양 세포 치료의 관점에 있어서, 주어진 "투여량(dose)"의 투여는 단일 조성물로서의 주어진 양 또는 수의 세포의 투여 및/또는 단일의 연속된 투여, 예컨대 단일 주사 또는 연속 주입으로서의 투여를 포함하며, 또한, 3일 이하의 특정 시간 동안 다수의 개별 조성물 또는 주입에 제공되는 분할 투여량으로서의 주어진 양 또는 세포 수의 투여를 포함한다. 따라서, 일부 측면에 있어서, 투여량은 단일 시점에서 주어지거나 개시되는 특정 수의 세포의 단일 또는 연속 투여이다. 그러나 일부 측면에 있어서는, 투여량을 하루에 3 번 또는 이틀 동안 또는 하루에 여러 번 주입하여 3 일을 넘지 않는 기간 동안 다중 주사 또는 주입으로 투여한다.
[139] 그러므로, 일부 측면에서, 투여량의 세포는 단일 의약 조성물로 투여된다. 일부 구체예에서, 투여량의 세포는 투여량의 세포를 집합적으로 함유하는 복수의 조성물로서 투여된다.
[140] "분할 투여량 (split dose)"이라는 용어는 분할되어 1 일을 초과하여 투여되는 투여량을 의미한다. 이러한 유형의 투여는 본 방법에 포함되며 단일 투여량으로 간주된다.
[141] 그러므로, 세포의 투여량은 분할 투여량으로서 투여될 수 있다. 예를 들어, 일부 구체예에서, 투여량은 2 일 이상 또는 3 일 이상 동안 환자에게 투여 될 수 있다. 분할 투여를 위한 예시적인 방법은 제 1 일에 투여량의 25%를 투여하고 제 2 일째에 투여량의 나머지 75%를 투여하는 것을 포함한다. 다른 구체예에서, 투여량의 33%는 첫날에 투여될 수 있고 나머지 67%는 두 번째 날에 투여 될 수 있다. 일부 측면에서, 투여량의 10%가 첫 번째 날에 투여되고, 투여량의 30%가 두 번째 날에 투여되고, 투여량의 60%가 3 일째 투여된다. 일부 구체예에서, 분할 투여량은 3 일을 초과하여 수행되지 않는다.
[142] 일부 구체예에서, 세포의 투여량은 일반적으로 질병 부담을 줄이는데 효과적일만큼 충분히 크다.
[143] 일부 구체예에서, 세포는 원하는 양 또는 세포 유형(들) 및/또는 세포 유형의 원하는 비율을 포함하는 소정의 양으로 투여된다. 따라서, 일부 구체예에서 세포의 투여 량은 세포의 총 수 (또는 kg 체중 당 수) 및 CD4+ 대 CD8+ 비율과 같은 개별 집단 또는 아형의 원하는 비율에 기초한다. 일부 구체예에서, 세포의 투여 량은 개별 집단 또는 개별 세포 유형의 세포의 원하는 총 수 (또는 kg 체중 당 수)에 기초한다. 일부 구체예에서, 투여량은 개별 인구 집단의 원하는 총 세포 수, 원하는 비율 및 원하는 총 세포 수와 같은 그러한 특징의 조합에 기초한다.
[144] 일부 구체예에서, CD8+ 및 CD4+ T 세포와 같은 세포의 집단 또는 서브타입은 T 세포의 바람직한 투여 량과 같은 총 세포의 바람직한 투여 량의 허용된 차이 또는 그 범위 내에서 투여된다. 일부 측면에서, 바람직한 투여 량은 세포가 투여되는 대상자의 단위 체중 당 원하는 세포 수 또는 원하는 수, 예를 들어 세포/kg이다. 일부 측면에서, 바람직한 투여 량은 단위 체중 당 최소 세포 수 또는 최소 세포 수 이상이다. 일부 측면에서, 바람직한 투여 량으로 투여된 총 세포 중에서, 개별 집단 또는 서브타입은 원하는 아웃풋 비율 (예: CD4+ 대 CD8+ 비율) 예컨대 그러한 비율의 특정한 허용차 오차 이내이다.
[145] 일부 구체예에서, 세포는 목적하는 투여 량의 CD4+ 세포 및/또는 목적하는 투여 량의 CD8+ 세포와 같은 세포의 개별 집단 또는 서브타입의 하나 이상의 목적하는 투여량의 허용차 내에서 투여된다. 일부 양태에서, 바람직한 투여 량은 세포가 투여되는 대상자의 단위 체중 당 그 서브타입 또는 집단의 세포의 소망되는 수, 또는 그러한 세포의 소망되는 수, 예를 들어, 세포/kg이다. 일부 양태에서, 바람직한 투여 량은 단위 체중 당 그 집단 또는 서브타입의 세포의 최소 세포 수 또는 그 집단 또는 서브타입의 세포의 최소 세포 수 이상이다.
[146] 따라서, 일부 구체예에서, 투여 량은 총 세포의 바람직한 고정 투여 량 및 원하는 비율에 기초하고 및/또는 하나 이상의, 예를 들어 각각의 개별적인 서브타입 또는 서브집단의 원하는 고정 투여 량에 기초한다. 따라서, 일부 구체예에서, 투여 량은 T 세포의 원하는 고정 또는 최소 투여 량 및 CD4+ 대 CD8+ 세포의 원하는 비율에 기초하고 및/또는 CD4+ 및/또는 CD8+ 세포의 원하는 고정 또는 최소 투여 량에 기초한다.
[147] 일부 구체예에서, 세포는 CD4+ 및 CD8+ 세포 또는 서브타입과 같은 다중 세포집단 또는 서브타입의 바람직한 아웃풋 비율의 허용 범위 또는 허용 범위내에서 투여된다. 일부 측면에서, 바람직한 비율은 특정 비율일 수 있거나 또는 비율의 범위일 수 있다. 예를 들어 일부 구체예에서 바람직한 비율(예를 들어, CD4+ 대 CD8+ 세포의 비율)은 약 5:1 내지 약 5:1 (또는 약 1:5 초과 내지 약 5:1 미만), 또는 약 1:3 내지 약 3:1 (또는 약 1:3 초과 내지 약 3:1 미만), 예컨대 약 2:1 내지 약 1:5 (또는 약 1:5 초과 내지 약 2:1 미만), 예컨대 약 5:1, 4.5:1, 4:1, 3.5:1, 3:1, 2.5:1, 2:1, 1.9:1, 1.8:1, 1.7:1, 1.6:1, 1.5:1, 1.4:1, 1.3:1, 1.2:1, 1.1:1, 1:1, 1:1.1, 1:1.2, 1:1.3, 1:1.4, 1:1.5, 1:1.6, 1:1.7, 1:1.8, 1:1.9: 1:2, 1:2.5, 1:3, 1:3.5, 1:4, 1:4.5, 또는 1:5이다. 일부 측면에서, 허용 차는 원하는 비율의 약 1 %, 약 2 %, 약 3 %, 약 4 %, 약 5 %, 약 10 %, 약 15 %, 약 20 %, 약 25 %, 약 30 % 약 35 %, 약 40 %, 약 45 %, 약 50 % 이내이며 이들 범위들 사이의 임의의 값도 포함된다.
[148] 특정 구체예에서, 세포의 수 및/또는 농도는 재조합 수용체 (예컨대 CAR) 발현 세포의 수를 지칭한다. 다른 구체예에서, 세포의 수 및/또는 농도는 투여된 모든 세포, T 세포 또는 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)의 수 또는 농도를 지칭한다.
[149] 일부 측면에서, 투여 량의 크기는 이전 치료에 대한 환자의 반응, 예를 들어, 화학 요법, 대상자의 질병 부담, 예컨대 종양 부담, 벌크, 크기, 또는 전이의 정도, 범위 또는 유형 및/또는 독성 결과를 나타내는 대상자의 가능성 또는 발병의 정도, 유형, 예컨대 CRS, 대식세포 활성화 증후군, 종양 용해 증후군, 신경독성 및/또는 투여되는 세포 및/또는 재조합 수용체에 대한 숙주 면역 반응 등 하나 이상의 기준에 기초하여 결정된다.
[150] 일부 구체예에서, 이 방법은 또한 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 세포의 하나 이상의 추가 투여량 및/또는 림프구고갈 요법임파 결핍 치료을 투여하는 것 및/또는 이러한 방법 중 하나 이상의 단계를 반복하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 하나 이상의 추가 투여 량은 초기 투여 량과 동일하다. 일부 구체예에서, 하나 이상의 추가 투여 량은 초기 투여 량과 다르며, 예를 들어, 초기 투여량보다 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배 또는 10배 또는 그 이상 높거나, 또는 초기 투여량보다 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배 또는 10배 또는 그 이상 낮을 수 있다. 일부 구체예에서, 하나 이상의 추가 투여 량의 투여는 초기 치료 또는 임의의 이전 치료에 대한 대상의 반응, 예컨대 종양 부하, 벌크, 크기, 또는 전이의 정도, 범위 또는 유형, 및/또는 독성 결과를 나타내는 대상자의 가능성 또는 발병의 정도, 유형, 예컨대 CRS, 대식세포 활성화 증후군, 종양 용해 증후군, 신경독성 및/또는 투여되는 세포 및/또는 재조합 수용체에 대한 숙주 면역 반응 등 하나 이상의 기준에 기초하여 결정된다.
B. 반응, 효능 및 생존
[151] 일부 구체예에서, 본원의 투여는 대상자가 다른 치료에 내성이 되었음에도 불구하고 효과적으로 환자를 치료한다. 일부 구체예에서, 본원 방법에 따라 치료된 대상자의 적어도 약 50 %, 대상자의 적어도 약 60 %, 대상자의 적어도 약 70 %, 대상자의 적어도 또는 약 80 % 이상 또는 적어도 약 90 % 이상의 대상자가 완전 관해 (CR)를 달성하고 및/또는 객관적 반응 (OR)을 달성할 수 있다.
[152] 일부 측면에서, 제공된 방법에 따른 투여는 일반적으로 대상자의 질환 또는 상태의 부담 또는 증폭을 감소시키거나 예방한다. 예를 들어, 질환 또는 상태가 종양인 경우, 방법은 일반적으로 종양 크기, 벌크, 전이, 골수 모구 퍼센트 또는 분자적으로 검출가능한 암을 감소시키고, 및/또는 종양 부담과 관련된 예후 또는 생존 또는 다른 증상을 개선시킨다.
[153] 일부 관점에서, 무진행 생존 (PFS)은 암과 같은 질병의 치료 중 및 치료 후 대상자가 그 병에 걸려 있으나 악화되지는 않는 기간으로 설명된다. 일부 측면에서 객관적 반응 (OR)은 측정 가능한 반응으로 설명된다. 일부 측면에서 객관적 반응률 (ORR)은 CR 또는 PR을 얻은 환자의 비율로 설명된다. 일부 측면에서 전체인 생존 (OS)은 암과 같은 질병의 진단 날짜 또는 치료 시작 시점부터 그 질병으로 진단받은 대상자가 살아있는 기간으로 설명된다. 일부 측면에서 무사건 생존(EFS: event-free survival)은 암 치료가 끝난 후 대상자에서 그 치료에 의해 예방 또는 치연시키고자 했던 합병증이나 사건가 없는 채로 유지되는 기간으로 설명된다. 이러한 사건에는 암이 재발하거나 뼈로 퍼진 암으로 인한 뼈 통증이나 사망과 같은 특정 증상의 발병이 포함될 수 있다.
[154] 일부 구체예에서, 상기 방법은 대상자가 하나 이상의 대체 치료제를 투여받거나 및/또는 대상자가 제공된 방법에 따른 림프구고갈 요법제 및/또는 세포의 투여량을 받지 않는 것과 같은, 다른 방법을 사용한 경우에 관찰되는 것에 비해, 질환 또는 상태의 부담, 예를 들어, 종양 세포의 수, 종양의 크기, 환자 생존 기간 또는 무사건 생존 기간을 더 크게 및/또는 더 큰 기간으로 감소시킨다. 일부 구체예에서, 대상에서 질환 또는 상태의 부담이 검출, 평가 또는 측정된다. 질병 부담은 어떤 측면에서 혈액 또는 혈청과 같은 대상자의 체액, 조직 또는 장기, 또는 대상자의 종양 세포 등 질병 또는 질병-관련 세포의 총 수를 검출함으로써 검사할 수 있다. 일부 측면에서, 대상자의 생존, 특정 기간 내의 생존율, 생존 범위, 무사건 또는 무증상 생존 존부 또는 기간, 또는 무재발 생존이 평가된니다. 일부 구체예에서, 질병 또는 상태의 임의 증상이 평가된다. 일부 구체예에서, 질병 또는 상태 부담의 척도가 특정된다.
[155] 일부 구체예에서, 환자의 무사건 생존율 또는 전체 생존율은 대상자가 하나 이상의 대체 치료제를 투여받거나 및/또는 대상자가 제공된 방법에 따른 림프구고갈 요법제 및/또는 세포의 투여량을 받지 않는 것과 같은, 다른 방법을 사용한 경우에 관찰되는 것에 비해, 본원 방법에 의해 개선된다. 예를 들어, 일부 구체예에서, 투여 후 6 개월에서 상기 방법으로 치료된 환자에 대한 무사건 생존율 또는 확률은 약 40 % 초과, 약 50 % 초과, 약 60 % 초과, 약 70 % 초과, 약 80 % 초과, 약 90 % 초과, 또는 약 95 % 초과이다. 일부 측면에서, 전체 생존율은 약 40 % 초과, 약 50 % 초과, 약 60 % 초과, 약 70 % 초과, 약 80 % 초과, 약 90 % 초과, 또는 약 95 % 초과이다. 일부 구체예에서, 상기 방법으로 치료 된 대상자는 적어도 6 개월, 또는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10년의 무사건 생존, 무지발 생존 또는 생존을 나타낸다. 일부 구체예에서, 진행까지의 시간은, 예를 들어 약 6 개월 초과 또는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10년으로 개선된다.
[156] 일부 구체예에서, 본원 방법에 의한 치료 후에, 재발 가능성은 대상자가 하나 이상의 대체 치료제를 투여받거나 및/또는 대상자가 제공된 방법에 따른 림프구고갈 요법제 및/또는 세포의 투여량을 받지 않는 것과 같은, 다른 방법을 사용한 경우에 관찰되는 것에 비해 감소된다. 예를 들어, 일부 구체예에서, 제 1 투여 후 6 개월에서 재발 가능성은 약 80 % 미만, 약 70 % 미만, 약 60 % 미만, 약 50 % 미만, 약 40 % 미만, 약 30 % 미만, 약 20 % 미만, 또는 약 10 % 미만이다.
[157] 질병 부담은 대상자 내 또는 대상자의 장기, 조직 또는 체액 내, 예컨대 종양 또는 전이를 가리키는 다른 위치의 장기 또는 조직 내 질병 세포의 총 수를 포함할 수 있다. 예를 들어, 종양 세포는 혈액의 어떤 악성 종양의 맥락에서 혈액 또는 골수에서 검출 및/또는 정량화될 수 있다. 질병 부담은 일부 구체예에서 골수에 존재하는 종양의 질량, 전이의 수 또는 범위 및/또는 골수 내 존재하는 모구 세포의 퍼센트를 포함 할 수 있다.
[158] 일부 측면에서, 반응 평가는 임상적, 혈액학적 및/또는 분자적 방법을 사용한다.
1. IWCLL 반응 기준
[159] 일부 측면에서, CLL에 걸린 대상자와 같은 대상자에서의 반응 속도는 만성 림프구성 백혈병에 관한 국제 워크숍 (IWCLL) 반응 기준 (Hallek, 외, Blood 2008, Jun 15; 111(12): 5446-5456; IWCLL 2008이라고 함)에 기초한다. 일부 측면에서, 이들 기준은 다음과 같이 기술된다: 일부 측면에서 면역 표현형 검사에 의한 말초혈액 클론 림프구의 부재, 림프절 병증의 부재, 간 비대 또는 비장 비대의 부재, 구조적 증상의 부재 및 만족스러운 혈구 수를 필요로 하는 완전 관해 (CR); 불완전 골수 회복을 동반하며, 일부 측면에서는 위의 CR로 기술되지만 정상적인 혈구 수는 없는 것인 완전 관해 (CRi); 일부 측면에서 림프구 수의 ≥ 50% 감소, 림프절병증의 ≥ 50% 감소 또는 말초혈구 수의 개선과 함께 간 또는 비장에서의 ≥ 50% 감소로서 설명되는 부분 관해 (PR); 일부 측면에서 > 5 X 109/L로의 림프구 수의 ≥ 50% 증가, 림프절병증의 ≥ 50% 증가, 간 또는 비장 크기의 ≥ 50% 증가, 리히터 변환 또는 CLL로 인한 새로운 혈구감소증(cytopenias)으로 설명되는 진행성 질환 (PD); 일부 측면에서 CR, CRi, PR 또는 PD에 대한 기준을 충족시키지 못하는 것으로 설명되는 안정된 질병을 포함한다.
[160] 일부 구체예에서, 대상자들은 세포 투여량을 투여한지 1개월 이내에 대상자의 림프절의 크기가 약 20 mm 미만, 약 10 mm 미만 또는 약 10 mm 미만인 경우 CR 또는 OR을 나타낸다.
2. 골수 또는 혈액의 질병
[161] 일부 구체예에서, 대상자는 백혈병을 갖는다. 질병 부담의 정도는 혈액 또는 골수의 잔류 백혈병을 평가하여 결정할 수 있다.
[162] 일부 구체예에서, 예를 들어, 광학 현미경에 의한 검사시 골수내 5% 이상의 모구가 존재하는 경우, 예컨대, 골수내 10% 이상의 모구, 골수내 20% 이상의 모구, 골수내 30% 이상의 모구, 골수내 40% 이상의 모구, 골수내 50% 이상의 모구가 존재하는 경우, 대상자는 형태학적 질환을 나타낸다. 일부 구체예에서, 대상자는 골수에 5% 미만의 모구가 존재하는 경우 완전 관해 또는 임상적 관해를 나타낸다.
[163] 일부 구체예에서, 대상자는 완전 관해를 나타낼 수 있지만, 형태학적으로 검출 불가능한 (광학 현미경 검사 기술에 의한) 잔류 백혈병 세포가 적은 비율로 존재한다. 대상자가 골수에서 5% 미만의 모구를 보이고 분자적으로 검출 가능한 암을 나타내는 경우 대상자는 최소 잔류 질병(MRD: minimum residual disease)을 나타낸다고 일컬어진다. 일부 구체예에서, 분자적으로 검출 가능한 암은 소수의 세포를 민감하게 검출할 수 있는 다양한 분자 기술 중 임의의 방법을 사용하여 평가할 수 있다. 일부 측면에서, 이러한 기술은 독특한 Ig/T-세포 수용체 유전자 재배열 또는 염색체 전위에 의해 생성된 융합 전사체를 결정할 수 있는 PCR 분석을 포함한다. 일부 구체예에서, 유세포 분석법은 백혈병-특이적인 면역표현형에 기초하여 암세포를 동정하는데 사용될 수 있다. 일부 구체예에서, 암의 분자 검출은 10,000 개의 정상 세포에서 1 개의 백혈병 세포 또는 100,000 개의 정상 세포에서 1 개의 백혈병 세포까지도 검출할 수 있다. 일부 구체예에서, 예컨대 PCR 또는 유세포 분석에 의해 10,000 세포에서 1 개 이상의 백혈병 세포가 검출되거나 또는 100,000 세포에서 1 개 백혈병 세포가 검출되면 그 대상자는 분자적으로 검출 가능한 MRD를 나타낸다. 일부 구체예에서, 대상자의 질병 부담은 분자적으로 검출 불가능하거나 MRD-이며, 일부 사례에서 PCR 또는 유동 세포 계측 기술을 사용하서는 백혈병 세포가 대상자에서 검출되지 못한다.
[164] 일부 구체예에서, 백혈병, 예를 들어 CLL의 인덱스 클론은 상기 방법에 따라 치료된 대상자의 골수에서 (또는 대상자들의 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그 이상의 골수에서) 검출되지 않는다. 일부 구체예에서, 백혈병, 예를 들어 CLL의 인덱스 클론은 IGH 딥 시퀀싱에 의해 평가된다. 일부 구체예에서, 인덱스 클론은 세포 투여 후 약 또는 적어도 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 12, 18 또는 24 개월 이내에는 검출되지 않는다.
a. 유세포 분석법에 의한 MRD의 결정
[165] 일부 측면에서 MRD는 유세포 분석법에 의해 검출된다. 유세포 분석법을 사용하여 암세포의 골수 및 말초 혈액 샘플을 모니터링할 수 있다. 특정 측면에서, 유동 세포 계측법은 골수 내 암세포의 존재를 검출하거나 모니터링하는데 사용된다. 일부 양태에서, 유동 세포 계측법에 의한 다중변수 면역학적 탐지는 암세포를 검출하는데 사용된다 (예를 들어, 문헌 [Coustan-Smith et al., (1998) Lancet 351 : 550-554] 참조). 일부 측면에서, 질량 세포계측법에 의한 다중변수 면역학적 탐지가 암 세포를 검출하는데 사용된다. 일부 예에서, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 또는 50 개 변수가 암세포 탐지에 사용된다. 탐지에 사용된 항원은 검출되는 암에 따라 선택된다 (Foon and Todd (1986) Blood 68: 1-31).
[166] 일부 예에서, 골수는 골수 흡인 또는 골수 생검에 의해 수확되고, 림프구는 분석을 위해 분리된다. 형광 색소 (예컨대 플루오레신 이소티오시아네이트 (FITC), 피코에리쓰린, 페리디닌 클로로필 단백질, 또는 바이오틴)에 컨쥬게이트된 모노클로날 항체 및/또는 폴리클로날 항체는 단리된 림프구 상의 에피토프, 예컨대 말단 데옥시뉴클레오티딜 트랜스퍼라제(TdT), CD3, CD10, CD11c, CD13, CD14, CD33, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD34, CD45, CD56, CD79b, IgM 및/또는 KORSA3544를 검출하는데 이용될 수 있다. 이어서 다중 에피토프 검출을 위해 다중 변수 유동 세포 계측법 (muliparameter flow cytometry) 또는 질량 세포 계측법 (mass cytometry)과 같은 유동 세포 계측법을 사용하여 표지된 세포를 검출할 수 있다.
[167] 림프구 세포는 광산란 도트 플롯에 기초하여 동정되고 게이팅될 수 있고, 이어서 이차적으로 게이팅되어 관심대상 면역표현형 특징을 발현하는 세포 집단을 동정할 수 있다. 예시적인 에피토프를 하기 표 1에 기재하였다. 백혈병과 림프종의 다른 면역학적 분류는 문헌 [Foon and Todd (Blood (1986) 68 (1): 1-31)]에 제공되어 있다. 일부 측면에서, MRD의 유세포 분석 평가는 하나 이상의 CLL 면역표현형 (예를 들어, 낮은 전방/측방 산란; CD3neg; CD5+; CD14neg; CD19+; CD23+; CD45+; CD56neg)을 갖는 살아있는 림프구를 정량화함으로써 달성될 수 있다.
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b. IGH 딥 시퀀싱 (IGH Deep Sequencing)
[168] 일부 측면에서, 수확된 B 세포의 면역글로불린 중쇄(IGH) 유전자좌의 딥 시퀀싱을 이용하여 최소 잔류 질환 (MRD)을 검출할 수 있다. 특정 IgG 재배치의 클론 존재는 CLL 또는 NHL과 같은 B 세포 악성 종양의 잔존 여부 및/또는 그의 악성 세포의 잔존 여부를 검출하는 마커를 제공할 수 있다. 일부 측면에서, B 세포를 함유하거나 포함하는 것으로 의심되는 집단과 같은 세포가 혈액으로부터 수확되어 분리된다. 일부 측면에서, 세포는 골수로부터 예컨대 골수 흡인 또는 골수 생검에 의해 수확되거나 및/또는 다른 생물학적 샘플로부터 분리된다. 일부 측면에서, 상보성 결정 영역 3 (CDR3)의 폴리머라제 연쇄 반응 (PCR) 증폭은 유전자좌의 V 및 J 영역 내의 고도로 보존 된 서열에 대한 프라이머를 사용하여 달성되며, 이는 최소한의 잔류 질병을 평가할 목적에서 세포의 클론 집단을 동정하는데 사용될 수 있다. 특정 계통의 세포 수에 관한 정보를 제공하는 것 및/또는 클론 집단과 같은 중쇄 가변 또는 그의 결합 부위 등 특정 가변 사슬을 발현하는 것을 포함하는 단일 세포 시퀀싱 접근법과 같은 클론 집단을 검출하는 다른 방법이 사용될 수 있다. 일부 측면에서, IGH DNA는 IGH 서열의 컨센서스 V 및 축퇴 컨센서스 J 영역을 인식하는 것과 같은 상이한 세포 클론들 간에 공유된 가변 사슬의 영역들을 인식하는 축퇴 프라이머 또는 프라이머를 사용하여 증폭시킨다. V 영역의 예시적인 서열은 ACACGGCCTCGTGTATTACTGT (SEQ ID NO: 17)이다. J 영역의 예시적인 서열은 ACCTGAGGAGACGGTGACC (SEQ ID NO: 18)이다.
[169] 일부 측면에서의 PCR 산물 또는 시퀀싱 결과는 재배열된 대립형질( allele)에 특이적이고 MRD 검출을 위한 클론 마커로서 작용한다. CDR3 영역의 PCR 증폭 후, PCR 산물을 시퀀싱하여 CAR-T 세포 요법, 예컨대 CD19 CAR-T 세포 요법으로 B 세포 악성종양을 치료한 후 MRD의 민감한 검출을 위한 대립형질- 특이적 PCR을 위한 프로브로서 구축된 환자-특이적 올리고뉴클레오타이드를 수득할 수 있다. PCR 산물이 컨센서스 프라이머를 사용하여 생성되지 않는 예에서는, 프레임 워크 영역 1에 대한 V 영역 패밀리-특이적 프라이머가 대신 사용될 수 있다.
[170] 일부 측면에서, 치료 후 악성 또는 클론성 IGH 서열에 상응하는 검출 가능한 IGH 서열과 같은, NHL 또는 CLL 등의 B 세포 악성 종양의 세포와 같은 PCR- 검출가능한 종양 세포의 지속은 증가된 재발 위험과 연관이 있다. 일부 측면에서, 치료 후 악성 IGH 서열에 음성인 환자들 (일부 측면에서, 심지어 진행성 질환 또는 단지 부분 반응, 예컨대 확대된 림프절의 지속을 나타내는 다른 기준 또는 어떤 맥락에서 질병 또는 완전 반응의 결여와 관련될 수 있는 다른 기준의 맥락에서도)은, 지속적인 악성 IGH 서열을 갖는 환자들에 비해, PFS의 가능성이 증가되었거나 CR 또는 내구력있는 CR 또는 연장된 생존에 진입한 것으로 간주될 수 있다. 일부 구체예에서, 그러한 예후 및 병기 결정은 치료제 투여 후 단기간 내에, 예를 들어 림프절 크기 또는 다른 병기 기준과와 비교하여 악성 세포의 제거가 관찰되는 치료와 특히 관련된다. 예를 들어, 일부 그러한 양태에서, 골수와 같은 샘플에서 검출 가능한 IGH 또는 최소 잔여 질환의 부재는 다른 이용 가능한 스테이징 또는 예후 접근법과 비교하여 응답 또는 반응 가능성 또는 우월 가능성에 대한 바람직한 판독 값일 수 있다. 예를 들어, 일부 그러한 양태에서, 골수와 같은 샘플에서 검출 가능한 IGH 또는 최소 잔류 질환의 부재는 다른 이용 가능한 병기 또는 예후 접근법에 비해 반응 또는 반응 가능성 또는 지속성에 대한 바람직한 판독 값일 수 있다. 일부 측면에서, MRD로부터의 결과, 예를 들어, IGH 딥 시퀀싱 정보는 추가 개재 또는 그의 결여를 알려주는 것일 수 있다. 예를 들어, 일부 맥락에서 본 방법 및 제공된 다른 구체예는 악성 IGH에 대해 음성인 것으로 여겨지는 대상자가 일부 측면에서, 제공된 투여량으로 추가 치료되지 않거나 추가 투여되지 않거나, 또는그 대상자를 감소된 또는 더 낮은 투여량으로 치료하는 것을 제공한다. 반대로, IGH 딥 시퀀싱을 통해 MRD를 나타내는 대상자를 예를 들어 유사하거나 더 높은 투여 량으로 초기 치료하거나 또는 추가 치료하는 방안이 제공되거나 특정될 수도 있다.
3. 루가노 기준 (Lugano criteria)
[171] 일부 관점에서, 루가노 기준을 사용하여 반응을 평가한다 (Cheson 외, JCO September 20, 2014 vol. 32 no. 27 3059-3067; Johnson 외, (2015) Imaging for staging and response assessment in lymphoma. Radiology 2:323-338). 루가노 기준에는 촬영, 종양 벌크 측정 및 비장, 간 및 골수 침범의 평가에 의한 평가가 포함된다.
[172] 일부 측면에서, 루가노 기준을 사용하여 평가된 반응은 양전자 방출 단층 촬영 (PET)-컴퓨터 단층 촬영 (CT) 및/또는 CT를 영상 진단에 적절하게 사용하는 것을 포함한다. PET-CT 평가는 플루오로데옥시글루코스(FDG)-친화(avid) 림프종에서 FDG 흡수를 평가하기 위해 FDG의 사용을 추가로 포함할 수 있다. FDG-친화 림프종은 호지킨 림프종(HL) 및 특정한 비-호지킨 림프종(NHL), 예컨대 미만성 거대 B 세포 림프종 (DLBCL), 공격적인 형질전환을 수반한 경계성 NHL 및 FDG-친화 결절성 림프종 (본질적으로 모든 조직학적 유형, 다음을 제외한다: 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 소형 림프구성 림프종, 림프형질세포성 림프종/발덴스트룀 마크로 글로불린혈증 및 균상 식육종)을 포함한다. 어떤 경우에는 비-FDG-친화 조직 검사 (non-FDG-avid hitologies)의 경우 CT가 선호되는 영상 진단 방법이다. 일부 측면에서, 치료 후 스캔은 치료 투여 후 가능한 한 취해진다. 일부 측면에서, 치료 후 스캔은 치료 투여 후 최소 3주, 예컨대 3 주, 4 주, 5 주, 6 주, 7 주, 8 주, 9 주, 10 주, 11 주, 12 주 또는 그 이상 수행된다.
[173] PET-CT가 FDG-친화 조직학에서 반응을 평가하는데 사용될 수 있는 일부 측면에서, 도빌(Deauville) 5-점 척도 (도빌 5ps)와 같은 5 점 척도가 평가 또는 병기 결정에 사용될 수 있다. 도빌 점수는 PET/CT 스캔에 의해 시각화된, 두 개의 기준 장기, 종격동 (즉, 혈액 저장고) 및 간과 비교한, 각 병변의 플루오로데옥시글루코스(FDG) 흡수의 시각적 해석에 기초한다. 치료 전에 한 가지 평가 (초기 병기)를 하고 FDG PET/CT 스캔의 두 번째 라운드는 치료 중 및/또는 치료 후 잔류 종괴를 (기준 장기의 FDG 업데이트와 비교하여) 평가하는 데 사용된다. 눈금은 1에서 5까지이며, 1이 가장 좋고 5가 최악이다. 각 FDG-친화 (또는 이전에 FDG-친화) 병변은 독립적으로 등급을 매긴다. 일부 측면에서 5-점 척도는 다음 기준으로 구성된다: 1, 배경 위에 흡수되지 않음. 2, 흡수 ≤ 종격; 3, 흡수 > 종격 ≤ 간; 4, 중등도의 흡수 > 간; 5, 간보다 현저하게 더 높은 흡수 (예컨대, 최대 표준 흡수값 (SUVMAX>2x 간; 5a) 및/또는 가능하게는 림프종과 연관된 새로운 병변 (5b); 림프종과 관련이 있을것 같지 않은 새로운 영역.
[174] 도빌 점수 1 또는 2는 치료 중간 및 치료 종료시 완전한 대사 반응 (CMR)을 나타내는 것으로 간주된다. 도빌 점수 3은 CMR 역시도 나타내지만 점수 3의 해석은 평가 시점, 임상 상황 및 치료 방법에 따라 다르다. 치료 중간에서의 도빌 점수 4 또는 5는 부분 대사 반응을 나타내는 것으로 간주된다. 그러나 치료 말기 도빌 점수 4 또는 5는, 흡수가 베이스라인으로부터 감소한 경우 잔류 대사 질병을 나타내고; 베이스라인으로부터의 흡수에 변화가 없다면 대사 반응 없음(NMR: no metabolic response)을 나타내며; 및 베이스라인으로부터 흡수에 증가가 있거나 및/또는 새로운 병변이 있는 경우 진행성 대사 질환(PMD: progressive metabolic disease)을 나타낸다. 치료의 중간 및 종료시 NMR 또는 PMD는 치료의 실패를 나타낸다.
[175] 일부 측면에서, 루가노 기준을 사용하여 기술된 바와 같이, 치료 종료시의 완전한 반응은 다양한 측정 가능한 부위에서 완전한 대사 반응 및 완전한 방사선 반응을 포함한다. 일부 측면에서, 이들 부위에는 림프절 및 외흉부 부위가 포함되며, 여기서 CR은 PET-CT가 사용될 때 5-점 척도상의 잔류 질량을 갖거나 갖지 않는 1, 2 또는 3의 점수로 기술된다. 일부 측면에서, 생리학적 흡수가 높거나 비장 또는 골수 내에서 활성화 된 (예를 들어, 화학 요법 또는 골수 콜로니-자극 인자를 갖는) 왈데이어 고리(Waldeyer's ring) 또는 엑스트라노달 부위에서, 흡수는 정상 종격 및/또는 간보다 클 수 있다. 이 상황에서, 조직이 높은 생리학적 흡수를 가진다 해도, 초기 관여 부위의 흡수가 주변의 정상 조직보다 크지 않다면 완전한 대사 반응이 추정될 수 있다. 어떤 측면에서는 CT를 사용하여 림프절에서 반응을 평가하는데 이 경우 CR은 림프절외 병변부위가 아닌 것으로 설명되고 표적 림프절/림프절 종괴는 병변의 최대 횡방향 직경(LDi) ≤ 1.5cm로 퇴행하여야 한다. 또 다른 평가 부위에는 골수가 포함되는데 여기서 PET-CT에 기초한 평가는 골수에서 FDG-친화 질환의 증거가 부족하다는 것을 나타내야 하며, CT에 기초한 평가는 불확실한 경우 IHC 음성이어야하는 정상 형태를 나타내야 한다. 추가 부위는 정상으로 회귀해야하는 장기 확대 평가를 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 측정되지 않은 병변 및 새로운 병변이 평가되며, CR의 경우 부재하여야 한다 (Cheson 외, JCO September 20, 2014 vol. 32 no. 27 3059-3067; Johnson 외, (2015) Imaging for staging and response assessment in lymphoma. Radiology 2:323-338).
4. 고형 종양의 반응 평가 기준 (Response Evaluation Criteria in Solid Tumors: (RECIST)) 기준
[176] 일부 측면에서, 고형 종양의 반응 평가 기준 (RECIST) 기준은 객관적인 종양 반응을 결정하는데 사용된다; 일부 양태에서, 고형 종양에서. (Eisenhauer et al., European Journal of Cancer 45 (2009) 228-247). 일부 측면에서, RECIST 기준은 표적 병변에 대한 객관적인 종양 반응을 결정하는데 사용된다. 어떤 관점에서 RECIST 기준을 사용하여 결정된 완전한 반응은 모든 표적 병변의 소실로 기술되며 임의의 병리학적 임파절 (표적이든 비-표적이든)은 단축에서 < 10mm로 감소해야한다. 다른 측면에서, RECIST 기준을 사용하여 결정된 부분 반응은 베이스라인 합계 직경을 기준으로 할 경우 표적 병변 직경의 합계가 적어도 30% 감소하는 것으로 기술된다. 다른 측면에서, 진행성 질환 (PD)은 연구에서 가장 작은 합계(이것은 그것이 연구 대상 중 가장 작은 경우 베이스라인 합계를 포함한다)를 기준으로 취할 경우 대상 병변 직경의 합계가 적어도 20 % 증가한 것으로 기술된다. 20 %의 상대적 증가에 더해, 그 합계는 또한 적어도 5mm의 절대 증가를 입증하여야 한다 (어떤면에서는 하나 이상의 새로운 병변의 출현도 진행으로 간주된다). 다른 측면에서, 안정된 질환 (SD)은 연구 중에 가장 작은 합계 지름을 기준으로 한 경우, PR 자격을 얻기에 충분한 수축도 아니고, PD 자격을 얻기에 충분한 증가도 아닌 것으로 기술된다.
C. 독성
[177] 일부 구체예에서, 본원의 방법은 사이토카인 방출 증후군 (CRS), 중증 CRS (sCRS), 대식세포 활성화 증후군, 종양 용해 증후군, 3일 이상 동안 적어도 섭씨 약 38도의 발열 및 CRP의 혈장 수준이 적어도 약 20mg/dL, 신경독성 및/또는 신경독성과 같은 독성 또는 독성 결과의 가능성을 일으키지 않거나 감소시킨다. 일부 구체예에서, 본원 방법에 따라 치료된 환자의 50 % 이상 (예를 들어, 치료 된 대상의 적어도 60 %, 적어도 70 %, 적어도 80 %, 적어도 90 % 이상)은 독성 결과(예컨대 CRS 또는 신경독성)를 나타내지 않거나 또는 심각한 독성 결과 (예컨대 중증 CRS 또는 심한 신경독성)를 나타내지 않는다. 일부 구체예에서, 대상자는 3 등급 이상의 신경독성을 나타내지 않으며 및/또는 중증 CRS를 나타내지 않거나, 치료 후 일정 기간, 예를 들어 세포 투여로부터 1 주일, 2 주 또는 1 개월 이내에 그러하지 않다.
[178] 키메라 항원 수용체를 발현하는 T 세포를 이용한 치료와 같은 입양 T 세포 요법제의 투여는 사이토카인 방출 증후군 및 신경독성과 같은 독성 효과 또는 결과를 유도할 수 있다. 일부 예에서, 그러한 효과 또는 결과는 관찰된 독성의 기초가되는 순환하는 사이토카인의 높은 수준과 유사하다.
[179] 일부 측면에서, 독성 결과는 사이토카인 방출 증후군 (CRS) 또는 중증 CRS (sCRS)와 연관되거나 또는 이들과 관련된다. CRS, 예를 들어, sCRS는 일부 경우, 입양 T 세포 요법 및 다른 생물학적 제제를 대상자에게 투여한 후에 발생할 수 있다 [참조: Davila 외, Sci Transl Med 6, 224ra25 (2014); Brentjens 외, Sci. Transl. Med. 5, 177ra38 (2013); Grupp 외, N. Engl. J. Med. 368, 1509-1518 (2013); 및 Kochenderfer 외, Blood 119, 2709-2720 (2012); Xu 외, Cancer Letters 343 (2014) 172-78].
[180] 일반적으로, CRS는 예를 들어 T 세포, B 세포, NK 세포, 단구 및/또는 대식세포에 의해 매개되는 과장된 전신 면역 반응에 의해 유발된다. 이러한 세포는 사이토카인 및 케모카인과 같은 많은 양의 염증성 매개체를 방출할 수 있다. 사이토카인은 급성 염증 반응을 유발하거나 내피 기관 손상을 유도하여 미세 혈관 누출, 심부전 또는 사망을 초래할 수 있다. 중증의 생명을 위협하는 CRS는 폐 침윤 및 폐 손상, 신부전 또는 파종된 혈관내 응고를 유발할 수 있다. 다른 중증의 생명을 위협하는 독성에는 심장 독성, 호흡 곤란, 신경독성 및/또는 간부전이 포함될 수 있다.
[181] CRS는 항 IL-6 치료, 예를 들어, 항 IL-6 항체, 예를 들어 토실리주맙 또는 항생제와 같은 소염 치료를 사용하여 치료할 수 있다. CRS의 결과, 징후 및 증상은 공지이며 본원에 설명된 증상을 포함한다. 일부 구체예에서, 특정 투여 량 요법 또는 투여가 주어진 CRS-관련 결과, 증상 또는 증상에 영향을 미치지 않거나 영향을 미치는 경우, 특정 결과, 징후및 증상 및/또는 양 또는 정도가 특정될 수 있다.
[182] CAR을 발현하는 세포를 투여하는 맥락에서, CRS는 CAR을 발현하는 세포를 주입한 후 전형적으로 6-20 일에 나타난다. [Xu 등, Cancer Letters 343 (2014) 172-78 참조]. 경우에 따라 CRS는 CAR T 세포 주입 후 6 일 미만 또는 20 일 이후에 발생한다. CRS 발병률 및 시기는 주입시의 베이스라인 사이토카인 수준 또는 종양 부하량과 관련될 수 있다. 일반적으로, CRS는 인터페론 (IFN)-γ, 종양 괴사 인자 (TNF)-α 및/또는 인터루킨 (IL)-2의 혈청 농도 상승을 포함한다. CRS에서 신속하게 유도될 수 있는 다른 사이토카인은 IL-1β, IL-6, IL-8 및 IL-10이다.
[183] CRS와 관련된 예시적인 결과는 발열, 경직, 오한, 저혈압, 호흡 곤란, 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS), 뇌병변증, ALT/AST 상승, 신부전, 심장 질환, 저산소증, 신경 장애 및 사망을 포함한다. 신경학적 합병증으로는 정신 착란, 발작 같은 활동, 혼란, 단어 찾기 어려움, 실어증, 및/또는 둔감(obtunded)하게 된다. 다른 CRS 관련 결과에는 피로, 메스꺼움, 두통, 발작, 빈맥, 근육통, 발진, 급성 혈관 누출 증후군, 간 기능 장애 및 신부전이 포함된다. 일부 측면에서, CRS는 혈청 페리틴, d-다이머, 아미노트랜스퍼라제, 락테이트 데히드로게나제 및 트리글리세라이드와 같은 하나 이상의 요인의 증가, 또는 저섬유소원혈증 또는 간비장비대와 관련이 있다.
[184] 일부 구체예에서, CRS와 관련된 결과는 다음 중 하나 이상을 포함한다: 지속적인 발열, 2일 이상, 에컨대 3일 이상, 예컨대 4일 이상, 또는 적어도 3일 연속 특정 온도의 발열, 예컨대 섭씨 약 38도 이상의 발열; 약 38도 이상의 발열; 적어도 2가지 사이토카인(예컨대, 인터페론 감마 (IFNγ), GM-CSF, IL-6, IL-10, Flt-3L, 프랙탈카인, 및 IL-5, 및/또는 종양 괴사인자 알파(TNFα)로 이루어진 군 중 적어도 2가지)의 전처리 수준에 비교시, 사이토카인의 상승, 예컨대 적어도 약 75와 같은 최대 폴드 변화, 또는 그러한 사이토카인 중 적어도 한 가지의 적어도 또는 적어도 약 250과 같은 최대 폴드 변화; 및/또는 저혈압 (예를 들어, 적어도 하나의 정맥내 혈관 활동기도에 의해 측정된 바와 같은)과 같은 적어도 하나의 임상 독성 징후; 저산소증 (예를 들어, 약 90 % 미만의 혈장 산소 (PO2) 수준); 및/또는 하나 이상의 신경 장애 (정신 상태 변화, 혼란 및 발작 포함).
[185] 예시적인 CRS-관련 결과는 사이토카인 및 케모카인 및 CRS와 관련된 다른 인자를 포함하는 하나 이상의 인자의 증가된 또는 높은 혈청 수준을 포함한다. 예시적인 결과는 하나 이상의 그러한 인자의 합성 또는 분비의 증가를 추가로 포함한다. 그러한 합성 또는 분비는 T 세포 또는 선천성 면역 세포 또는 B 세포와 같은, T 세포와 상호 작용하는 세포에 의한 것일 수 있다.
[186] 일부 구체예에서, CRS-관련 혈청 인자 또는 CRS-관련 결과는 인터페론 감마 (IFN-γ), TNF-α, IL-1β, IL-2, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, sIL-2Ra, 과립구 대식세포 콜로니 자극 인자 (GM-CSF), 대식세포 염증 단백질 (MIP)-1, 종양 괴사인자 알파 (TNFα), IL-6, 및 IL-10을 비롯한 염증성 사이토카인 및/또는 케모카인, IL-1β, IL-8, IL-2, MIP-1, Flt-3L, 프랙탈카인, 및/또는 IL-5를 포함한다. 일부 구체예에서, 인자 또는 결과는 C 반응성 단백질 (CRP)을 포함한다. CRS에 대해 초기 및 쉽게 측정가능한 위험 인자가 되는 것 외에도 CRP는 세포 증식에 대한 마커이다. 일부 구체예에서, 15 mg/dL 이상과 같이 높은 CRP 수치를 갖는 것으로 측정된 대상자들은 CRS를 갖는다. 일부 구체예에서, 높은 수준의 CRP를 갖는 것으로 측정된 대상자들은 CRS를 갖지 않는다. 일부 구체예에서, CRS의 척도는 CRP의 척도 및 CRS를 가리키는 다른 인자를 포함한다.
[187] 일부 구체예에서, 하나 이상의 염증성 사이토카인 또는 케모카인이 CAR 치료 전, 동안 또는 후에 모니터링된다. 일부 측면에서, 하나 이상의 사이토카인 또는 케모카인은 IFN-γ, TNF-α, IL-2, IL-1β, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, sIL-2Rα, 과립구 대식세포 콜로니 자극 인자 (GM-CSF), 또는 대식세포 염증 단백질 (MIP)을 포함한다. 일부 구체예에서, IFN-γ, TNF-α 및 IL-6이 모니터링된다.
[188] 어떤 환자가 sCRS 발병 위험이 더 높을지를 예측하기 위해 CRS 발병과 관련이 있는 것으로 보이는 CRS 기준이 개발되었다 (Davilla 등, Science Translational Medicine. 2014; 6 (224) : 224ra25 참조). 인자에는 발열, 저산소증, 저혈압, 신경학적 변화, 염증성 사이토카인, 예컨대 7종의 사이토카인(IFNγ, IL-5, IL-6, IL-10, Flt-3L, 프랙털카인, 및 GM-CSF)의 혈청 수준 상승)과 같이 그의 치료-유도된 상승이 예비치료 종양 부담 및 sCRS 증상 모두와 잘 연관될 수 있는 것들이 포함된다. CRS의 진단 및 관리에 관한 다른 지침이 알려져 있다 (Lee et al., Blood. 2014; 124 (2) : 188-95 참조). 일부 구체예에서, CRS 등급을 반영하는 기준을 하기 표 2에 기재하였다.
Figure pct00003
[189] 본원에서 사용된 바와 같이, 대상자는 세포 치료제 또는 세포 투여량의 투여 후 다음을 나타내면, 세포 치료제 또는 세포 투여량에 반응하여 또는 그에 이차적으로 "중증 CRS"("sCRS")가 발병된 것으로 간주된다: (1) 최소 3일 동안 섭씨 38도 이상의 발열; (2) 다음 중 어느 하나를 포함하는 사이토카인 상승 (a) 투여 직후의 수준과 비교하여 7가지 사이토카인 그룹 (인터페론 감마 (IFNγ), GM-CSF, IL IL-5, IL-10, Flt-3L, 프랙탈카인 및 IL-5) 중 2개 이상에서 최대 폴드 변화가 적어도 75인 사이토카인 상승 및/또는 (b) 투여 직후의 수준과 비교하여 7가지 사이토카인 그룹 (인터페론 감마 (IFNγ), GM-CSF, IL IL-5, IL-10, Flt-3L, 프랙탈카인 및 IL-5) 중 적어도 1개의 최대 폴드 변화가 적어도 250인 사이토카인 상승; (c) 저혈압 (적어도 하나의 정맥 내 혈관 활동성 압박 기가 필요함) 또는 저산소증 (PO2 < 90 %) 또는 하나 이상의 신경 장애 (정신 상태 변화, 혼란 및/또는 발작)와 같은 적어도 한가지의 임상 독성 징후. 일부 구체예에서, 중증 CRS는 표 2에 기재된 바와 같이 등급 3 이상의 CRS를 포함한다.
[190] 일부 구체예에서, CRS는 (1) 지속 발열 (적어도 3 일 동안 적어도 38 ℃의 발열) 및 (2) 적어도 약 20 mg/dL의 CRP의 혈청 수준의 조합을 포함한다.
[191] 일부 구체예에서, CRS는 2 개 이상의 승압기를 필요로 하는 저혈압 또는 기계적 환기를 필요로하는 호흡 부전을 포함한다.
[192] 다양한 결과를 측정하거나 검출하는 방법이 명시될 수 있다.
[193] 일부 측면에서, 독성 결과는 신경독성이거나 신경 독성과 관련된다. 일부 구체예에서, 신경독성의 임상적 위험과 관련된 증상으로는 혼란, 정신 착란, 표현 실어증, 둔감, 근 위축, 혼수 상태, 정신 상태의 변화, 경련, 발작 같은 활동, 발작 (경우에 따라 뇌전도(EEG)에 의해 확인되는 바와 같이), 베타 아밀로이드 (Aβ) 수준의 상승, 글루타메이트의 수준 상승, 산소 라디칼의 수준 상승을 들 수 있다. 일부 구체예에서, 신경독성은 중증도에 기초하여 등급화된다 (예를 들어, 등급 1-5 등급을 사용함) (예컨대, Guido Cavaletti & Paola Marmiroli Nature Reviews Neurology 6, 657-666 (December 2010); National Cancer Institute―Common Toxicity Criteria version 4.03 (NCI-CTCAE v4.03 참조).
[194] 경우에 따라 신경학적 증상이 sCRS의 가장 초기 증상일 수 있다. 일부 구체예에서, 신경학적 증상은 세포 치료 주입 후 5 내지 7 일 후에 시작되는 것으로 보인다. 일부 구체예에서, 신경학적 변화의 기간은 3 일 내지 19 일 범위 일 수 있다. 어떤 경우에는 신경학적 변화의 회복은 sCRS의 다른 증상이 해소된 후에 발생한다. 일부 구체예에서, 신경학적 변화의 시간 또는 분해 정도는 항 -IL-6 및/또는 스테로이드(들)에 의한 치료에 의해 촉진되지 않는다.
[195] 본원에서 사용된 바와 같이, 대상자는 세포 치료제 또는 세포 투여량 투여 후 자기 관리(예컨대 목욕, 옷입고 벗기, 식사, 화장실 사용, 약 복용)를 제한하는 다음과 같은 증상을 나타내면, 세포 치료제 또는 세포 투여량에 반응하여 또는 그에 이차적으로 "중증 신경독성"을 나타내는 것으로 간주된다: 1) 주변 운동 신경의 염증 또는 퇴화를 포함하는 말초운동 신경병증의 증상; 2) 말초감각신경의 염증 또는 퇴화, 예컨대 비정상적이고 불쾌한 감각을 야기하는 감각지각의 왜곡과 같은 이상감각, 예컨대 신경 또는 신경 그룹을 통한 강렬한 통증과 같은 신경통, 및/또는 예컨대 자극 부재 하에서의 저림, 무감각, 압력감, 냉기 및 온기와 같은 비정상적인 피부 감각을 야기하는 감각 뉴런의 기능적 교란과 같은 감각이상을 비롯한 말초감각 신경병증 증상. 일부 구체예에서, 심각한 신경독성은 표 3에 기재된 바와 같은 등급 3 이상의 신경독성을 포함한다.
Figure pct00004
[196] 일부 구체예에서, 상기 방법은 다른 방법과 비교하여 신경독성과 관련된 증상을 감소시킨다. 예를 들어, 본 방법에 따라 치료된 대상자는 다른 방법으로 치료받은 환자와 비교하여, 예컨대 사지의 약화 또는 무감각, 기억 상실, 시력 및/또는 지능 저하, 통제할 수 없는 강박 및/또는 강박 행동, 망상, 두통, 인지 및 행동 문제, 예컨대 운동 조절 장애, 인지 기능 저하 및 자율 신경계 기능 장애 및 성기능 장애 등과 같은 신경독성 증상이 감소될 수 있다. 일부 구체예에서, 본 방법에 따라 치료되는 대상자는 말초운동 신경병증, 말초감각 신경병증, 이상감각, 신경통 또는 감각이상과 관련된 증상이 감소될 수 있다.
[197] 일부 구체예에서, 상기 방법은 뉴런의 죽음과 같은 신경계 및/또는 뇌에 대한 손상을 포함하는 신경독성과 관련된 결과를 감소시킨다. 일부 측면에서, 상기 방법은 베타 아밀로이드 (Aβ), 글루타메이트 및 산소 라디칼과 같은 신경독성과 관련된 인자의 수준을 감소시킨다.
II. 세포에 의해 발현되는 재조합 항원 수용체
[198] 일부 구체예에서, 제공된 방법에 사용되거나 투여된 세포는 조작된 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체 (CAR)와 같은 조작된 항원 수용체 또는 T 세포 수용체(TCR)를 함유하거나 함유하도록 조작된다. 또한 그러한 세포의 집단, T 세포 또는 CD8+ 또는 CD4+ 세포와 같은 특정 유형의 세포가 농축 또는 선택되는 그러한 세포를 함유하는 조성물 및/또는 이러한 세포가 풍부한 조성물이 제공된다. 조성물 중에는 입양 세포 치료와 같은 투여용 제약 조성물 및 제형이 있다. 또한 제공된 방법에 따라 세포 및 조성물을 대상자, 예를 들어 환자에게 투여하기 위한 치료 방법이 제공된다.
[199] 일부 구체예에서, 세포는 유전 공학을 통해 도입된 하나 이상의 핵산을 포함하고, 이에 의해 그러한 핵산의 재조합 또는 유전자 조작된 생성물을 발현한다. 일부 구체예에서, 유전자 전달은 세포를 처음 자극함으로써, 예컨대 사이토카인 또는 활성화 마커의 발현에 의해 측정시, 증식, 생존 및/또는 활성화와 같은 반응을 유도하는 자극과 결합시킴으로써 수행되며, 이어서 활성화된 세포의 형질 도입 및 배양물의 임상적 적용을 위한 충분한 수의 확장을 포함한다.
[200] 세포는 일반적으로 기능성 비-TCR 항원 수용체, 예컨대, 키메라 항원 수용체 (CAR), 및 기타 항원-결합 수용체 예컨대 형질전환 T 세포 수용체 (TCR)을 비롯한 항원 수용체와 같은 재조합 수용체를 발현한다. 수용체들 중에는 다른 키메라 수용체들이 있다.
A. 키메라 항원 수용체(CAR)
[201] 제공된 방법 및 용도의 일부 구체예에서, 키메라 항원 수용체와 같은 키메라 수용체는 원하는 항원(예를 들어, 종양 항원)에 대한 특이성을 제공하는 리간드-결합 도메인 (예컨대 항체 또는 항체 단편)을 세포내 시그널링 도메인과 결합시키는 도메인을 하나 이상 포함한다. 일부 구체예에서, 세포내 시그널링 도메인은 T 세포 활성화 도메인과 같은 활성화 세포내 도메인 부분으로서 일차 활성화 시그널을 제공한다. 일부 구체예에서, 세포내 시그널링 도메인은 이펙터 기능을 촉진하기 위한 공동자극 시그널링 도메인을 함유하거나 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 키메라 수용체는 면역 세포내로 유전적으로 조작될 때 T 세포 활성을 조절할 수 있고, 경우에 따라 T 세포 분화 또는 항상성을 조절하여 예를 들어 입양 세포 치료법에 사용하기 위한, 생체내 수명, 생존 및/또는 지속성이 개선된 유전적으로 조작된 세포를 유도할 수 있다.
[202] CAR을 포함하는 예시적인 항원 수용체 및 이러한 수용체를 조작하여 세포내로 도입시키는 방법은, 예를 들어, 국제특허 출원 공개 WO200014257, WO2013126726, WO2012/129514, WO2014031687, WO2013/166321, WO2013/071154, WO2013/123061 미국특허 출원 공개 US2002131960, US2013287748, US20130149337, 미국특허 Nos.: 6,451,995, 7,446,190, 8,252,592, , 8,339,645, 8,398,282, 7,446,179, 6,410,319, 7,070,995, 7,265,209, 7,354,762, 7,446,191, 8,324,353, 및 8,479,118, 및 유럽특허 출원 EP2537416, 및/또는 문헌 [Sadelain 외, Cancer Discov. 2013 April; 3(4): 388-398; Davila 외 (2013) PLoS ONE 8(4): e61338; Turtle 외, Curr. Opin. Immunol., 2012 October; 24(5): 633-39; Wu 외, Cancer, 2012 March 18(2): 160-75]에 설명되어 있다. 일부 측면에서, 항원 수용체는 미국특허 No.: 7,446,190에 설명된 CAR, 및 국제특허 출원 공개 No.: WO/2014055668 A1에 설명된 것들을 포함한다. CAR의 예로는 전술한 간행물, 예컨대 WO2014031687, US 8,339,645, US 7,446,179, US 2013/0149337, 미국특허 No.: 7,446,190, 미국 특허 No.: 8,389,282, Kochenderfer 외, 2013, Nature Reviews Clinical Oncology, 10, 267-276 (2013); Wang 외 (2012) J. Immunother. 35(9): 689-701; 및 Brentjens 외, Sci Transl Med. 2013 5(177) 중 임의의 문헌에 개시된 CAR을 들 수 있다. 문헌 WO2014031687, US 8,339,645, US 7,446,179, US 2013/0149337, 미국특허 No.: 7,446,190, 및 미국 특허 No.: 8,389,282도 참조가능하다.
[203] CAR과 같은 키메라 수용체는 일반적으로 항체 분자의 일부, 일반적으로 항체의 중쇄 가변 (VH) 및/또는 경쇄 가변 (VL) 영역과 같은 세포외 항원 결합 도메인, 예를 들어, scFv 항체 단편을 포함한다.
[204] 일부 구체예에서, 수용체에 의해 표적화된 항원은 폴리펩타이드이다. 일부 구체예에서, 이는 탄수화물 또는 다른 분자이다. 일부 구체예에서, 항원은 정상 세포 또는 비-표적화된 세포 또는 조직에 비해, 질환 또는 상태의 세포, 예를 들어, 종양 또는 병원성 세포에서 선택적으로 발현되거나 과발현된다. 또 다른 구체예에서, 항원은 정상 세포 상에 발현되고 및/또는 조작된 세포 상에 발현된다.
[205] 일부 구체예에서 수용체에 의해 표적화된 항원은 다수의 공지된 B 세포 마커 중 임의의 것과 같은 B 세포 악성 종양과 관련된 항원을 포함한다. 일부 구체예에서, 수용체에 의해 표적화된 항원은 CD20, CD19, CD22, ROR1, CD45, CD21, CD5, CD33, Ig카파, Ig람다, CD79a, CD79b 또는 CD30이다.
[206] 일부 구체예에서 scFv 및/또는 VH 도메인은 FMC63으로부터 유도된다. FMC63은 일반적으로 인간 기원의 CD19를 발현하는 Nalm-1 및 -16 세포에 대해 발생된 마우스 모노클로날 IgG1 항체를 가리킨다 (Ling, N.R., 등 (1987), Leucocyte typing III.322). FMC63 항체는 각각 SEQ ID NO: 38, 39에 제시된 CDRH1 및 H2, 및 SEQ ID NO: 40 및 54에 제시된 CDRH3 및 SEQ ID NOS: 35에 제시된 CDRL1 및 36 또는 55에 제시된 CDR L2 및 SEQ ID NOS: 37 또는 56의 CDR L3을 포함한다. FMC63 항체는 SEQ ID NO: 41의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 SEQ ID NO: 42의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함한다. 일부 구체예에서, svFv는 SEQ ID NO: 35의 CDRL1 서열, SEQ ID NO: 36의 CDRL2 서열 및 SEQ ID NO: 37의 CDRL3 서열을 함유하는 경쇄 가변 및/또는 SEQ ID NO: 38의 CDRH1 서열, SEQ ID NO:39의 CDRH2 서열 및 SEQ ID NO: 40의 CDRH3 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, scFv는 SEQ ID NO: 41에 제시된 FMC63의 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 42에 제시된 FMC63의 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 중쇄 가변 및 경쇄 가변 사슬은 링커로 연결된다. 일부 구체예에서, 링커는 SEQ ID NO : 24에 제시되어있다. 일부 구체예에서, scFv는 하기 순서로 VH, 링커 및 VL을 포함한다. 일부 구체예에서, scFv는 하기 순서대로 VL, 링커 및 VH를 포함한다. 일부 구체예에서, svFc는 SEQ ID NO:25에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 SEQ ID NO:25에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 나타내는 서열에 의해 인코딩된다. 일부 구체예에서, scFv는 SEQ ID NO:43에 제시된 아미노산 서열 또는 SEQ ID NO:43에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 나타내는 서열을 포함한다.
[207] 일부 구체예에서 scFv는 SJ25C1로부터 유래된다. SJ25C1은 인간 기원의 CD19를 발현하는 Nalm-1 및 -16 세포에 대해 생성된 마우스 모노클로날 IgG1 항체이다 (Ling, N. R., 등 (1987), Leucocyte typing III. 322). SJ25C1 항체는 각각 SEQ ID NO: 47-49에 기재된 CDRH1, H2 및 H3, 그리고 각각 SEQ ID NO: 44-46에 기재된 CDRL1, L2 및 L3 서열을 포함한다. SJ25C1 항체는 SEQ ID NO: 50의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 SEQ ID NO: 51의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함한다. 일부 구체예에서, svFv는 SEQ ID NO: 44의 hte CDRL1 서열, SEQ ID NO: 45의 CDRL2 서열 및 SEQ ID NO: 46의 CDRL3 서열을 포함하는 가변 경쇄 및/또는 SEQ ID NO: 47의 CDRH1 서열, SEQ ID NO: 48의 CDRH2 서열 및 SEQ ID NO: 49의 CDRH3 서열을 함유하는 가변 중쇄를 포함한다. 일부 구체예에서, scFv는 SEQ ID NO: 50에 기재된 SJ25C1의 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 51에 기재된 SJ25C1의 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 가변 중쇄 및 가변 경쇄는 링커에 의해 연결된다. 일부 구체예에서, 링커는 SEQ ID NO: 52에 제시되어있다. 일부 구체예에서, scFv는 하기 순서로 VH, 링커 및 VL을 순차적으로 포함한다. 일부 구체예에서, scFv는 하기 순서로 VL, 링커 및 VH를 포함한다. 일부 구체예에서, scFv는 SEQ ID NO: 53에 제시된 아미노산 서열 또는 SEQ ID NO: 53에 대해 적어도 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 나타내는 서열을 포함한다.
[208] 일부 구체예에서, 키메라 항원 수용체는 항체 또는 항체 단편을 함유하는 세포외 부분을 포함한다. 일부 측면에서, 키메라 항원 수용체는 항체 또는 단편 및 세포내 시그널링 도메인을 함유하는 세포외 부분을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체 또는 단편은 scFv를 포함한다.
[209] 일부 구체예에서, 재조합 수용체, 예를 들어 CAR의 항체 부분은 힌지 영역과 같은 면역글로불린 불변 영역의 적어도 일부, 예를 들어 IgG4 힌지 영역 및/또는 CH1/CL 및/또는 Fc 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 불변 영역 또는 부분은 IgG4 또는 IgG1과 같은 인간 IgG이다. 일부 양태에서, 불변 영역의 부분은 항원 인식 성분, 예를 들어 scFv와 막관통 도메인 사이의 스페이서 영역으로서 작용한다. 스페이서는 스페이서 부재시에 비해, 항원 결합 후 세포의 증가된 반응성을 제공하는 길이일 수 있다. 예시적인 스페이서의 비제한적인 예로는, 문헌 [Hudecek et al. (2013) Clin. Cancer Res., 19 : 3153, 국제특허 출원 공개 WO2014031687, 미국특허 No. 8,822,647 또는 공개 출원 US2014/0271635]에 설명된 것들을 들 수 있다.
[210] 일부 구체예에서, 불변 영역 또는 부분은 IgG4 또는 IgG1과 같은 인간 IgG이다. 일부 구체예에서, 스페이서는 서열 ESKYGPPCPPCP (SEQ ID NO: 1에 기재 됨)를 갖고, SEQ ID NO: 2에 기재된 서열에 의해 인코딩된다. 일부 구체예에서, 스페이서는 SEQ ID NO: 3에 제시된 서열을 갖는다. 일부 구체예에서, 스페이서는 SEQ ID NO: 4에 기재된 서열을 갖는다. 일부 구체예에서, 불변 영역 또는 부분은 IgD이다. 일부 구체예에서, 스페이서는 SEQ ID NO: 5에 기재된 서열을 갖는다. 일부 구체예에서, 스페이서는 SEQ ID NOS: 1, 3, 4 또는 5 중 어느 하나에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구체예에서, 스페이서는 SEQ ID NOS: 26-34에 제시된 서열을 갖는다. 일부 구체예에서, 스페이서는 SEQ ID NOS: 26-34 중 어느 하나에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 갖는다.
[211] 일부 구체예에서, 항원 수용체는 세포외 도메인에 직접적으로 또는 간접적으로 연결된 세포내 도메인을 포함한다. 일부 구체예에서, 키메라 항원 수용체는 세포외 도메인과 세포내 시그널링 도메인을 연결하는 막관통 도메인을 포함한다. 일부 구체예에서, 세포내 시그널링 도메인은 ITAM을 포함한다. 예를 들어, 일부 측면에서, 항원 인식 도메인 (예를 들어, 세포외 도메인)은 일반적으로 CAR의 경우 TCR 복합체와 같은 항원 수용체 복합체 및/또는 다른 세포 표면 수용체를 통한 시그널을 통해 활성화를 모방하는 시그널링 성분과 같은 하나 이상의 세포내 시그널링 성분에 연결된다. 일부 구체예에서, 키메라 수용체는 세포외 도메인 (예컨대 scFv)과 세포내 시그널링 도메인 사이에 연결 또는 융합된 막관통 도메인을 포함한다. 그러므로, 일부 구체예에서, 항원-결합 성분 (예컨대, 항체)은 하나 이상의 막관통 및 세포내 시그널링 도메인에 연결된다.
[212] 한 구체예에서, 수용체, 예를 들어 CAR의 도메인 중 하나에 천연적으로 결합된 막관통 도메인이 사용된다. 일부 경우, 막관통 도메인은 수용체 복합체의 다른 구성원과의 상호 작용을 최소화하기 위해 동일 또는 상이한 표면 막 단백질의 막관통 영역에 이러한 도메인이 결합하는 것을 피하기 위해 아미노산 치환에 의해 선택되거나 변형된다.
[213] 일부 구체예에서 막관통 도메인은 천연 또는 합성 소스로부터 유도된다. 소스가 천연의 것인 경우, 일부 측면의 도메인은 임의의 막-결합 또는 막관통 단백질로부터 유도된다. 막관통 영역은 T 세포 수용체의 알파, 베타 또는 제타 사슬, CD28, CD3 엡실론, CD45, CD4, CD5, CDS, CD9, CD 16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD 134, CD137, CD 154로부터 유래된 것들을 포함한다 (즉, 적어도 막관통 영역을 포함한다). 별법으로, 막관통 도메인을 일부 구체예에서 합성된 것이다. 일부 측면에서, 합성 막관통 도메인은 주로 류신 및 발린과 같은 소수성 잔기를 포함한다. 일부 측면에서, 페닐알라닌, 트립토판 및 발린의 삼중체가 합성 막관통 도메인의 각 말단에서 발견될 것이다. 일부 구체예에서, 결합은 링커, 스페이서 및/또는 막관통 도메인(들)에 의한다. 일부 측면에서, 막관통 도메인은 CD28의 막관통 부분을 함유한다.
[214] 일부 구체예에서, 세포외 도메인 및 막관통 도메인은 직접적으로 또는 간접적으로 연결될 수 있다. 일부 구체예에서, 세포외 도메인 및 막관통 도메인은 본원에 기재된 임의의 것과 같은 스페이서에 의해 연결된다. 일부 구체예에서, 수용체는 CD28 세포외 부분과 같은 막관통 도메인이 유래된 분자의 세포외 부분을 함유한다.
[215] 세포내 시그널링 도메인 중에는 천연 항원 수용체를 통한 시그널, 공동자극 수용체와 조합된 수용체를 통한 시그널 및/또는 공동자극 수용체만을 통한 시그널을 모방하거나 근사하는 것들이 있다. 일부 구체예에서, 짧은 올리고 - 또는 폴리펩타이드 링커, 예를 들어 글리신 및 세린, 예컨대 글리신-세린 더블릿을 함유하는 것과 같은 길이가 2 내지 10개 아미노산인 링커가 존재하며, CAR의 세포질 시그널링 도메인과 막관통 도메인 사이에 연결(linkage)를 형성한다.
[216] T 세포 활성화는 일부 측면에서 두 종류의 세포질 시그널링 서열: 즉 TCR을 통하여 항원-의존성 일차 활성화를 개시하는 것들 (일차 세포질 시그널링 서열) 및 항원-독립적인 방식으로 작용하하여 이차 또는 공동자극 시그널을 제공하는 것들 (이차 세포질 시그널링 서열)에 의해 매개되는 것으로 설명된다. 일부 측면에서, CAR은 그러한 시그널링 성분들 중 하나 또는 두 가지 모두를 포함한다.
[217] 수용체, 예를 들어, CAR은 일반적으로 적어도 하나의 세포내 시그널링 성분 또는 성분들을 포함한다. 일부 측면에서, CAR은 TCR 복합체의 일차 활성화를 조절하는 일차 세포질 시그널링 서열을 포함한다. 자극적인 방식으로 작용하는 일차 세포질 시그널링 서열은 면역수용체 티로신-기반 활성 모티프 또는 ITAM으로 알려진 시그널링 모티프를 함유할 수 있다. 일차 세포질 시그널링 서열을 함유하는 ITAM의 예로는 CD3 제타 사슬, FcR 감마, CD3 감마, CD3 델타 및 CD3 엡실론으로부터 유도된 것들을 들 수 있다. 일부 구체예에서, CAR의 세포질 시그널링 분자(들)은 세포질 시그널링 도메인, 그의 부분, 또는 CD3 제타로부터 유래된 서열을 함유한다.
[218] 일부 구체예에서, 수용체는 T-세포 활성화 및 세포 독성을 매개하는 TCR CD3 사슬, 예컨대 CD3 제타 사슬과 같은 TCR 복합체의 세포내 성분을 포함한다. 따라서 일부 측면에서, 항원-결합 부분은 하나 이상의 세포 시그널링 모듈에 연결된다. 일부 구체예에서, 세포 시그널링 모듈은 CD3 막관통 도메인, CD3 세포내 시그널링 도메인, 및/또는 기타 CD 막관통 도메인들을 포함한다. 일부 구체예에서, 수용체, 예컨대 CAR은 Fc 수용체 γ, CD8, CD4, CD25, 또는 CD16와 같은 하나 이상의 부가적인 분자의 일부를 추가로 포함한다. 예컨대, 일부 측면에서, CAR 또는 다른 키메라 수용체는 CD3-제타 (CD3-ξ) 또는 Fc 수용체 γ 및 CD8, CD4, CD25 또는 CD16 간의 키메라 분자를 포함한다.
[219] 일부 구체예에서, CAR 또는 다른 키메라 수용체의 접합(ligation)에 의해, 수용체의 세포질 도메인 또는 세포내 시그널링 도메인은 정상적인 이펙터 기능 또는 면역 세포, 예컨대 CAR을 발현하도록 조작 된 T 세포의 반응 중 적어도 하나를 활성화시킨다. 예를 들어, 일부 상황에서, CAR은 사이토카인 또는 다른 인자의 분비와 같은 세포용해 활성 또는 T-헬퍼 활성과 같은 T 세포의 기능을 유도한다. 일부 구체예에서, 항원 수용체 성분 또는 공동자극 분자의 세포내 시그널링 도메인의 절단된 부분(truncated portion)은, 예를 들어 그것이 이펙터 기능 시그널을 전달하는 경우, 온전한 면역자극 사슬 대신에 사용된다. 일부 구체예에서, 세포내 시그널링 도메인은 T 세포 수용체 (TCR)의 세포질 서열 및, 일부 측면에서, 자연적 맥락에서 그러한 수용체와 협력하여 항원 수용체 인게이지먼트에 이어 시그널 전달을 개시하는 공동-수용체의 것들도 포함한다.
[220] 천연 TCR의 맥락에서, 완전한 활성화는 일반적으로 TCR을 통한 시그널링 뿐만 아니라 공동자극 신호도 요구한다. 따라서, 일부 구체예에서, 완전한 활성화를 촉진하기 위해, 제2 또는 공동-자극 시그널에 대한 성분 역시도 CAR에 포함된다. 또 다른 구체예에서 CAR은 공동자극 시그널을 생산하기 위한 성분을 포함하지 않는다. 일부 측면에서, 부가적인 CAR은 동일 세포에서 발현되어 제2의 또는 공동자극 시그널을 생산하기 위한 성분을 제공한다.
[221] 일부 구체예에서, 키메라 항원 수용체는 T 세포 공동자극 분자의 세포내 도메인을 함유한다. 일부 구체예에서, CAR은 공동자극 수용체의 시그널링 도메인 및/또는 막투과 부분, 예컨대 CD28, 4-1BB, OX40, DAP10, 및 ICOS를 포함하다. 일부 측면에서, 동일한 CAR은 활성화 성분과 공동자극 성분 두 가지 모두를 포함한다. 일부 구체예에서, 키메라 항원 수용체는 예컨대 막관통 도메인과 세포내 시그널링 도메인 사이에 T 세포 공동자극 분자 또는 그의 기능성 변이체로부터 유래된 세포내 도메인을 함유한다. 일부 측면에서, T 세포 공동자극 분자는 CD28 또는 41BB이다.
[222] 일부 구체예에서, 활성화 도메인은 하나의 CAR 내에 포함되는 반면, 공동자극 성분은 또 다른 항원을 인식하는 다른 CAR에 의해 제공된다. 일부 구체예에서, CAR은 활성화 또는 자극성 CAR, 공동자극 CAR을 포함하는데 이들 두 가지 모두 동일한 세포 상에 발현된다 (WO2014/055668 참조). 일부 측면에서, 세포는 하나 이상의 자극 또는 활성화 CAR 및/또는 공동자극 CAR을 포함한다. 일부 구체예에서, 세포는 억제 CAR(iCAR) [문헌 Fedorov 외, Sci. Transl. Medicine, 5(215) (December, 2013) 참조], 예컨대 질환 또는 상태와 연관되거나 및/또는 그에 특이적인 항원이 아닌 다른 항원을 인식하는 CAR 을 더 포함함으로 해서, 질환-표적화 CAR을 통해 전달된 활성화 시그널이, 억제 CAR의 그의 리간드에 대한 결합에 의해 감소 또는 억제되어 오프-타겟 효과가 저하된다.
[223] 특정 구체예에서, 세포내 시그널링 도메인은 CD3 (예컨대, CD3-제타) 세포내 도메인에 연결된 CD28 막관통 및 시그널링 도메인을 포함한다. 일부 구체예에서, 세포내 시그널링 도메인은 CD3 제타 세포내 도메인에 연결된, 키메라 CD28 및 CD137 (4-1BB, TNFRSF9) 공동-자극 도메인을 포함한다.
[224] 일부 구체예에서, CAR은 세포질 부분에 하나 이상, 예컨대 두 개 이상의 공동자극 도메인 및 활성화 도메인, 예컨대, 일차 활성화 도메인을 포괄한다. 예시적인 CAR에는 CD3-제타의 세포내 성분, CD28, 및 4-1BB이 포함된다.
[225] 일부 구체예에서, 항원 수용체는 마커를 추가로 포함하고 및/또는 CAR 또는 다른 항원 수용체를 발현하는 세포는 수용체 발현을 위해 세포의 형질도입 또는 조작을 확인하는데 사용될 수 있는 세포 표면 마커와 같은 대리 마커를 추가로 포함한다 수용체를 발현한다. 일부 측면에서, 마커는 CD34, NGFR 또는 표피 성장 인자 수용체의 전부 또는 일부 (예를 들어, 절단된 형태), 예컨대 세포 표면 수용체의 절단된 형태 (예컨대 tEGFR)를 포함한다. 일부 구체예에서, 마커를 코딩하는 핵산은 예컨대 SEQ ID NOS: 6 또는 19-23 중 어느 하나에 제시된 바와 같은, 절단 가능한 링커 서열, 예컨대 T2A, P2A, E2A 또는 F2A와 같은 링커 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 작동 가능하게 연결된다. 예를 들어, 마커 및 경우에 따라 링커 서열은 공개된 특허출원 WO2014031687에 개시된 것들 중 임의의 것일 수 있다. 예를 들어, 마커는 경우에 따라 선택적으로 T2A 절단가능한 링커 서열과 같은 링커 서열에 연결된, 절단된 EGFR (tEGFR)일 수 있다.
[226] 절단된 EGFR (예를 들어, tEGFR)에 대한 예시적인 폴리펩타이드는 서열 번호 7 또는 16에 제시된 아미노산 서열, 또는 SEQ ID NO: 7 또는 16에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함한다. 예시적인 T2A 링커 서열은 SEQ ID NO: 6에 제시된 아미노산 서열 또는 SEQ ID NO: 6에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함한다.
[227] 일부 구체예에서, 마커는 T 세포 상에서 자연적으로 발견되지 않거나 또는 T 세포의 표면 상에 자연적으로 발견되지 않는 분자, 예를 들어 세포 표면 단백질 또는 그의 일부이다. 일부 구체예에서, 분자는 비-자가 분자, 예를 들어 비-자가 단백질, 즉 세포가 입양적으로 전달될 숙주의 면역계에 의해 "자기(self)"로 인식되지 않는 비-자가 단백질이다.
[228] 일부 구체예에서, 마커는 치료 기능을 제공하지 않으며 및/또는 예를 들어, 성공적으로 조작된 세포를 선별하기 위한 유전자 공학용 마커로서 사용되는 것 이외의 효과를 발생시키지 않는다. 다른 구체예에서, 마커는 치료용 분자 또는 달리 어떤 소망되는 효과를 발휘하는 분자, 예컨대 생체내에서 조우하게될 세포에 대한 리간드, 예컨대 입양 전달 및 리간드와의 조우시 그 세포의 반응을 강화 및/또는 감쇠(dampen)시키기 위한 공동자극 또는 면역 체크포인트 분자일 수 있다.
[229] 일부 사례에서, CAR은 1 세대, 2 세대 및/또는 3 세대 CAR로 지칭된다. 일부 측면에서, 1 세대 CAR은 항원 결합시 단독으로 CD3-사슬 유도 시그널을 제공하는 것이다; 일부 측면에서, 2 세대 CAR은 CD28 또는 CD137과 같은 공동자극 수용체로부터의 세포내 시그널링 도메인을 포함하는 것과 같은 시그널 및 공동자극 시그널을 제공하는 것이다; 일부 측면에서, 3 세대 CAR은 상이한 공동자극 수용체의 복수의 공동자극 도메인을 포함하는 것이다.
[230] 예를 들어, 일부 구체예에서, CAR은 항체, 예를 들어, 항체 단편, CD28 또는 이의 기능적 변이체의 막관통 부분이거나 이를 함유하는 막관통 도메인, 및 CD8의 시그널링 부분 또는 그의 기능적 변이체 및 CD3 제타의 시그널링 부분 또는 그의 기능적 변이체를 함유하는 세포내 시그널링 도메인을 포함한다. 일부 구체예에서, CAR은 항체, 예를 들어, 항체 단편, CD28 또는 그의 기능적 변이체의 막관통 부분이거나 이를 함유하는 막관통 도메인 및 4-1BB의 시그널링 부분 또는 그의 기능적 변이체 및 CD3 제타의 시그널링 부분 또는 그의 기능적 변이체를 함유하는 세포내 시그널링 도메인을 포함한다. 그러한 일부 구체예에서, 수용체는 Ig 분자, 예컨대 인간 Ig 분자의 일부, 예컨대 Ig 힌지, 예컨대 IgG4 힌지, 예컨대 힌지-온리 스페이서를 추가로 포함한다.
[231] 일부 구체예에서, 재조합 수용체, 예를 들어 CAR의 막관통 도메인은 인간 CD28의 막관통 도메인 (예컨대 수탁번호 P01747.1) 또는 이의 변이체, 예컨대 SEQ ID NO: 8에 제시된 아미노산 서열 또는 SEQ ID NO: 8에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 막관통 도메인이거나 또는 그를 포함한다; 일부 구체예에서, 재조합 수용체의 막관통-도메인 함유 부분은 서열 번호 9에 제시된 아미노산 서열 또는 그에 대해 적어도 또는 약 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
[232] 일부 구체예에서, 재조합 수용체, 예컨대 CAR의 세포내 시그널링 성분(들)은, 천연 CD28 단백질의 186-187 위치에서 LL로부터 GG 치환을 갖는 도메인과 같은 인간 CD28 또는 이의 기능적 변이체 또는 부분의 세포내 공동자극 시그널링 도메인을 함유한다. 예를 들어, 세포내 시그널링 도메인은 서열 번호 10 또는 11에 제시된 아미노산 서열, 또는 서열 번호 10 또는 11에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 세포내 도메인은 4-1BB의 세포내 공동자극 시그널링 도메인 (예를 들어 (수탁번호 Q07011.1) 또는 이의 기능적 변이체 또는 일부, 예컨대 서열 번호 12에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호 12에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
[233] 일부 구체예에서, 재조합 수용체, 예를 들면, CAR의 세포내 시그널링 도메인은 인간 CD3 제타 공동자극 시그널링 도메인 또는 이의 기능적 변이체, 예를 들어, 미국특허 제7,446,190호 또는 미국특허 제8,911,993호에 기재된 바와 같은 CD3 제타 시그널링 도메인 또는 인간 CD3ζ의 이소형 3의 112 AA 세포질 도메인 (수탁번호: P20963.2)을 포함한다. 예를 들어, 일부 구체예에서, 세포내 시그널링 도메인은 SEQ ID NO: 13, 14 또는 15에 제시된 바와 같은 아미노산 서열, 또는 SEQ ID NO: 13, 14 또는 15에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함한다.
[234] 일부 측면에서, 스페이서는 IgG의 힌지 영역만을, 예컨대 IgG4 또는 IgG1의 힌지만을, 예컨대 SEQ ID NO: 1에 제시된 힌지 온리 스페이서를 함유한다. 또 다른 구체예에서, 스페이서는 Ig 힌지, 예컨대 경우에 따라 CH2 및/또는 CH3 도메인에 연결된 IgG4-유래 힌지이거나 이를 함유한다. 일부 구체예에서, 스페이서는 예컨대 SEQ ID NO: 4에 기재된 바와 같은, CH2 및 CH3 도메인에 연결된 Ig 힌지, 예를 들어, IgG4 힌지이다. 일부 구체예에서, 스페이서는 SEQ ID NO: 3에 제시된 바와 같은, CH3 도메인에만 연결된, 예컨대 IgG4 힌지와 같은 Ig 힌지이다. 일부 구체예에서, 스페이서는 글리신-세린 풍부 서열 또는 공지된 가요성 링커와 같은 기타 가요성 링커이거나 이를 포함한다.
[235] 예를 들어, 일부 구체예에서, CAR은 scFv를 포함하는 항체 단편과 같은 항체, 중쇄 분자의 하나 이상의 불변 영역 및/또는 힌지 영역과 같은 면역글로불린 분자의 일부를 함유하는 스페이서 등의 스페이서, 예컨대 Ig-힌지 함유 스페이서, CD28-유래 막관통 도메인의 전부 또는 일부를 함유하는 막관통 도메인, CD28-유도된 세포내 시그널링 도메인 및 CD3 제타 시그널링 도메인을 포함한다. 일부 구체예에서, CAR은 scFv와 같은 항체 또는 단편, Ig-힌지 함유 스페이서 중 임의의 것과 같은 스페이서, CD28-유래 막관통 도메인, 4-1BB-유래 세포내 시그널링 도메인 및 CD3 제타-유래 시그널 도메인을 포함한다.
[236] 일부 구체예에서, 이러한 CAR 구조물을 인코딩하는 핵산 분자는 T2A 리보좀 스킵 요소 및/또는 tEGFR 서열, 예를 들어 CAR을 인코딩하는 서열의 하류를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 서열은 SEQ ID NO: 6에 제시된 T2A 리보좀 스킵 요소 또는 SEQ ID NO: 6에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 인코딩한다. 일부 구체예에서, 절단된 EGFR(EGFRt)를 비-면역원성 선택 에피토프로서 발현시키기 위해 (예를 들어, 동일한 구조물로부터 2 개의 단백질을 발현시키기 위해 T2A 리보솜 스위치에 의해 분리된 CAR 및 EGFRt를 인코딩하는 구조물의 도입에 의해) 항원 수용체 (예를 들어, CAR)를 발현하는 T 세포 역시도 생성할 수 있으며 상기 에피토프는 이어서 이러한 세포를 검출하기 위한 마커로서 사용될 수 있다 (예를 들어, 미국특허 제 8,802,374 호 참조). 일부 구체예에서, 서열은 서열 번호 7 또는 16에 제시된 tEGFR 서열, 또는 서열 번호 7 또는 16에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 이상의 서열 동일성을 나타내는 암노산 서열을 인코딩한다.
[237] 대상자에 투여된 세포에 의해 발현되는 CAR과 같은 재조합 수용체는 일반적으로, 치료 대상 질환 또는 상태 또는 세포에서 발현되거나, 관련되거나, 및/또는 이들에 특이적인 분자를 인식하거나 또는 이들에 특이적으로 결합한다. 예를 들어 항원과 같은 분자에 특이적으로 결합하면, 수용체는 일반적으로 ITAM-형질도입된 시그널과 같은 면역자극 시그널을 세포내로 전달하여, 질병 또는 상태를 표적으로 하는 면역반응을 촉진시킨다. 예를 들어, 일부 구체예에서, 세포는 질환 또는 상태의 세포 또는 조직에 의해 발현되거나 질병 또는 상태와 관련되는 항원에 특이적으로 결합하는 CAR을 발현한다.
B. TCR
[238] 일부 구체예에서, 유전자 조작된 항원 수용체는 재조합 T 세포 수용체 (TCR) 및/또는 자연발생 T 세포로부터 클로닝된 TCR을 포함한다. 일부 구체예에서, 표적 항원 (예컨대, 암 항원)에 대한 고친화성 T 세포 클론이 환자로부터 동정, 분리 및 세포로 도입된다. 일부 구체예에서, 표적 항원에 대한 TCR 클론은 인간 면역계 유전자 (예컨대, 인간 백혈구 항원 시스템, 또는 HLA)에 의해 조작된 트랜스제닉 마우스에서 생성된 것이다. 예컨대, 종양 항원 참조 (예컨대, Parkhurst 외 (2009) Clin Cancer Res. 15:169-180 및 Cohen 외 (2005) J Immunol. 175:5799-5808). 일부 구체예에서는, 파지 디스플레이를 이용하여 표적 항원에 대한 TCR을 분리한다 (참조, 예컨대, Varela-Rohena 외 (2008) Nat Med. 14:1390-1395 및 Li (2005) Nat Biotechnol. 23:349-354).
[239] 일부 구체예에서, T-세포 클론 수득 후, TCR α 및 β 사슬을 분리하여 유전자 발현 벡터에 클로닝시킨다. 일부 구체예에서, TCR α 및 β 유전자를 피코르나바이러스 2A 리보좀 스킵 펩타이드를 통해 링크시켜 두 사슬 모두 공동발현되도록 한다. 일부 구체예에서, TCR의 유전자 전달은 레트로바이러스 또는 렌티바이러스 벡터를 통해, 또는 트랜스포존을 통해 달성된다 (예컨대, Baum 등 (2006) Molecular Therapy: The Journal of the American Society of Gene Therapy. 13:1050-1063; Frecha 등 (2010) Molecular Therapy: The Journal of the American Society of Gene Therapy. 18:1748-1757; an Hackett 등 (2010) Molecular Therapy: The Journal of the American Society of Gene Therapy. 18:674-683 참조).
III. 유전자 조작된 세포 및 세포의 제조 방법
[240] 일부 구체예에서, 제공된 방법은 재조합 항원 수용체를 발현하는 세포를 질환 또는 상태를 갖는 대상에게 투여하는 것을 포함한다. 유전적으로 조작된 성분, 예를 들어, CAR 또는 TCR과 같은 재조합 수용체의 도입을 위한 다양한 방법이 공지되어 있으며, 제공된 방법 및 조성물과 함께 사용될 수 있다. 예시적인 방법은 예를 들어, 레트로바이러스 또는 렌티바이러스 등의 바이러스, 형질도입, 트랜스포존 및 일렉트로포레이션을 통한, 수용체를 코딩하는 핵산의 전달을 위한 방법을 포함한다.
[241] 수용체를 발현하고 제공된 방법으로 투여되는 세포로서 조작된 세포를 들 수 있다. 유전공학은 일반적으로 레트로바이러스 형질도입, 형질감염 또는 형질전환과 같이, 세포를 함유하는 조성물 내로 재조합 또는 조작된 성분을 인코딩하는 핵산을 도입하는 것을 포함한다.
A. 유전자 조작을 위한 벡터 및 방법
[242] 일부 구체예에서, 재조합 핵산은 예컨대 시미안 바이러스 40 (SV40), 아데노바이러스, 아데노-관련 바이러스(AAV)로부터 유래된 벡터와 같은 재조합 감염성 바이러스 입자들을 이용하여 세포내로 도입된다. 일부 구체예에서, 재조합 핵산은 재조합 렌티바이러스 벡터 또는 레트로바이러스 벡터, 예를 들면 감마-레트로바이러스 벡터를 이용하여 T 세포내로 전달된다 (참조: 예컨대, Koste 외 (2014) Gene Therapy 2014 Apr 3. doi: 10.1038/gt.2014.25; Carlens 외 (2000) Exp Hematol 28(10): 1137-46; Alonso-Camino 외 (2013) Mol Ther Nucl Acids 2, e93; Park 외, Trends Biotechnol. 2011 November 29(11): 550-557).
[243] 일부 구체예에서, 레트로바이러스 벡터는 긴 말단 반복 서열 (LTR), 예컨대, 멀로니 쥐 백혈병 바이러스(MoMLV)로부터 유래된 레트로바이러스 벡터, 골수증식 육종 바이러스(MPSV), 쥐의 배아 줄기세포 바이러스(MESV), 쥐의 줄기세포 바이러스(MSCV), 골수 포커스 형성 바이러스(SFFV), 또는 아데노-관련 바이러스(AAV)를 갖는다. 대부분의 레트로바이러스 벡터는 쥐의 레트로바이러스로부터 유래된 것이다. 일부 구체예에서, 레트로바이러스는 조류 또는 포유동물 세포 소스로부터 유래된 것들을 포함한다. 레트로바이러스는 일반적으로 양생(amphotropic)인데, 이는 이들이 인간을 비롯하여 일부 종의 숙주 세포를 감염시킬 수 있음을 의미한다. 일 구체예에서, 발현될 유전자는 레트로바이러스 gag, pol 및/또는 env 서열을 대체한다. 일부 예시적인 레트로바이러스 시스템이 설명된 바 있다(예컨대, 미국특허 Nos. 5,219,740; 6,207,453; 5,219,740; Miller 및 Rosman (1989) BioTechniques 7:980-990; Miller, A. D. (1990) Human Gene Therapy 1:5-14; Scarpa 외 (1991) Virology 180:849-852; Burns 외 (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:8033-8037; 및 Boris-Lawrie 및 Temin (1993) Cur. Opin. Genet. Develop. 3:102-109 참조).
[244] 렌티바이러스 형질도입 방법이 알려져 있다. 예시적인 방법은 예컨대 문헌 [Wang 외 (2012) J. Immunother . 35(9): 689-701; Cooper 외 (2003) Blood. 101:1637-1644; Verhoeyen 외 (2009) Methods Mol Biol . 506: 97-114; 및 Cavalieri 외 (2003) Blood.　 102(2): 497-505]에 설명되어 있다.
[245] 일부 구체예에서, 재조합 핵산은 전기영동을 통해 T 세포에 전달된다 (참조: 예컨대, Chicaybam 외, (2013) PLoS ONE 8(3): e60298 및 Van Tedeloo 외 (2000) Gene Therapy 7(16): 1431-1437). 일부 구체예에서, 재조합 핵산은 전좌(transposition)을 통해 T 세포에 전달된다 (참조: 예컨대, Manuri 외 (2010) Hum Gene Ther 21(4): 427-437; Sharma 외 (2013) Molec Ther Nucl Acids 2, e74; 및 Huang 외 (2009) Methods Mol Biol 506: 115-126). 면역 세포에서 유전자 물질을 도입 및 발현하는 그 밖의 방법으로는 인산칼슘 형질도입 (예컨대, 문헌 Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, New York. N.Y.에 설명됨), 원형질 융합, 양이온성 리포좀-매개된 형질감염; 텅스텐 입자-보조된 마이크로입자 폭발법 (Johnston, Nature, 346: 776-777 (1990)); 및 인산 스트론튬 DNA 공침법 (Brash 외, Mol. Cell Biol., 7: 2031-2034 (1987))을 들 수 있다.
[246] 재조합 산물을 인코딩하는 핵산의 전달을 위한 그 밖의 접근법 및 벡터는 예컨대 국제특허출원 공개 No.: WO2014055668, 및 미국특허 No. 7,446,190에 설명되어 있다.
[247] 일부 구체예에서, 세포, 예를 들어, T 세포는 예컨대 T 세포 수용체 (TCR) 또는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 이용하여 증폭 도중 또는 증폭 후에 형질감염될 수 있다. 바람직한 수용체 유전자의 도입을 위한 이러한 형질감염은 예를 들어 임의의 적합한 레트로바이러스 벡터를 이용하여 수행될 수 있다. 이어서 유전적으로 변형된 세포 집단은 초기 자극 (예를 들어, CD3/CD28 자극)으로부터 분리 될 수 있고, 이어서 두 번째 유형의 자극으로 자극될 수 있다. (예컨대 드 노보 도입된 수용체를 통해). 이 두 번째 유형의 자극으로는 펩타이드/MHC 분자의 형태의 항원 자극, 새로운 수용체의 골격 내에서 직접 결합하는 (예컨대 수용체 내의 불변 영역을 인식함으로써) 유전자 조작된 수용체의 동족(가교) 리간드 (예컨대 CAR의 천연 리간드) 또는 임의의 리간드 (예컨대 항체)를 들 수 있다. 예를 들어, Cheadle 외, "Chimeric antigen receptors for T-cell based therapy" Methods Mol Biol. 2012; 907:645-66 또는 Barrett 외, Chimeric Antigen Receptor Therapy for Cancer Annual Review of Medicine Vol. 65: 333-347 (2014).
[248] 일부 사례에서, 세포, 예를 들어, T 세포의 활성화를 요구하지 않는 벡터가 사용될 수 있다. 그러한 일부의 경우에, 세포는 활성화 전에 선택 및/또는 형질도입될 수 있다. 따라서, 세포는 세포 배양 전 또는 배양 후, 및 경우에 따라서는 배양 기간의 적어도 일부와 동시에 또는 배양 동안 조작될 수 있다.
[249] 부가적인 핵산, 예컨대 도입을 위한 유전자들은 예를 들면 전달된 세포의 생존능 및/또는 기능을 촉진함으로써 치료 효능을 개선시키기 위한 것들; 예컨대 생체내 생존 또는 국소화를 평가하기 위해, 세포의 선택 및/또는 평가를 위한 유전자 마커를 제공하기 위한 유전자; 예컨대 생체내 음성 선택에 세포를 민감하게 만듦으로써 안전성을 향상시키기 위한 유전자들이다, 예컨대 문헌 [Lupton S. D. 외, Mol . 및 Cell Biol ., 11:6 (1991); 및 Riddell 외, Human Gene Therapy 3:319-338 (1992) 참조; 또한 음성 선택가능한 마커와 우점 양성 선택성 마커를 융합시킴으로써 유래된 이기능성 선택가능한 융합 유전자의 사용을 설명하는 PCT/US91/08442 및 PCT/US94/05601 by Lupton 외, 참조]. 예컨대 문헌 [Riddell 외, 미국특허 No. 6,040,177, 컬럼 14-17] 참조.
B. 유전자 조작을 위한 세포 및 세포의 조제
[250] 일부 구체예에서, 핵산은 이종성 (heterologous), 즉 예컨대 세포가 유래되는 조작된 세포 및/또는 장기에서 일반적으로 발견되지 않는, 다른 장기 또는 세포로부터 수득된 것처럼, 그 세포로부터 수득된 세포나 샘플에서는 대개 존재하지 않는 것이다. 일부 구체에에서, 핵산은 복수종의 상이한 세포 유형으로부터의 다양한 도메인을 인코딩하는 핵산들의 키메라 조합을 포함하는 것을 포함하여, 자연에서 발견되지 않는 핵산과 같이, 자연발생적인 것이 아니다.
[251] 세포는 일반적으로 진핵 세포, 예컨대 포유동물 세포이며 전형적으로 인간 세포이다. 일부 구체예에서, 일부 구체예에서, 세포는 혈액, 골수, 림프 또는 림프성 장기로부터 유래하거나, 또는 면역계 세포, 예컨대 선천 또는 후천 면역 세포, 예컨대 림프구, 전형적으로 T 세포 및/또는 NK 세포를 비롯한 골수 또는 림프 세포이다. 그 밖의 예시적인 세포에는 줄기 세포, 예컨대, 유도된 다능성 줄기 세포(iPSCs)를 비롯한 다능성 줄기 세포가 포함된다. 세포는 일반적으로 일차 세포, 예컨대 대상자로부터 직접 단리되거나 및/또는 대상자로부터 단리된 후 냉동된 것이다. 일부 구체예에서, 세포는 T 세포 또는 기타 세포 유형의 하나 이상의 서브세트, 예컨대 전체 T 세포 집단, CD4+ 세포, CD8+ 세포, 및 이의 하위집단, 예컨대 기능, 활성화 상태, 성숙도, 분화에 대한 잠재능, 증식, 재순환, 국소화, 및/또는 지속능, 항원-특이성, 항원 수용체의 유형, 특정 장기 또는 구획 내 존재여부, 마커 또는 시토카인 분비 프로파일, 및/또는 분화도에 의해 정의되는 하위집단을 포함한다. 치료하고자 하는 대상자와 관련하여, 세포는 동종이계(allogeneic) 및/또는 자가(autologous)일 수 있다. 이러한 방법에는 규격품 방법이 포함된다. 일부 측면에서, 예컨대 규격 기술의 경우, 세포는 다능성(pluripotent 및/또는 multipotent), 예컨대 줄기세포, 예컨대 유도된 다능성 줄기 세포 (iPSCs)이다. 일부 구체예에서, 본 발명의 방법은 본 발명에 설명된 바와 같이, 대상자로부터 세포를 분리, 준비, 가공, 배양 및/또는 조작하고, 이들을 냉동보존 전후로 동일한 환자에게 재도입하는 것을 포함한다.
[252] T 세포의 및/또는 CD4+의 및/또는 CD8+ T 세포의 서브타입 및 하위집단들에는 나이브 T (TN) 세포, 이펙터 T 세포 (TEFF), 기억 T 세포 및 그의 서브타입, 예컨대 줄기세포 기억 T (TSCM), 중심 기억 T (TCM), 이펙터 기억 T (TEM), 또는 말단 분화된 이펙터 기억 T 세포, 종양-주입 림프구(tumor-infiltrating lymphocyte: TIL), 미성숙 T 세포, 성숙 T 세포, 헬퍼 T 세포, 세포독성 T 세포, 점막-관련 불변 T (MAIT) 세포, 자연발생적 및 후천조절적 T (Treg) 세포, 헬퍼 T 세포, 예컨대 TH1 세포, TH2 세포, TH3 세포, TH17 세포, TH9 세포, TH22 세포, 소포성 헬퍼 T 세포, α/β T 세포, 및 δ/γ T 세포가 포함된다.
[253] 일부 구체예에서, 세포는 내츄럴 킬러 세포 (NK 세포)이다. 일부 구체예에서, 세포는 단핵 세포 또는 과립구, 예를 들어, 골수 세포, 대식세포, 호중구, 수지상 세포, 비만 세포, 호산구 및/또는 호염기구이다.
[254] 일부 구체예에서, 세포는 유전공학을 통해 도입된 하나 이상의 핵산을 포함하고, 이에 의해 그러한 핵산의 재조합 또는 유전자 조작된 생성물을 발현한다. 일부 구체예에서, 핵산은 이종성, 즉 예컨대 세포가 유래되는 조작된 세포 및/또는 장기에서 일반적으로 발견되지 않는, 다른 장기 또는 세포로부터 수득된 것처럼, 그 세포로부터 수득된 세포나 샘플에서는 대개 존재하지 않는 것이다. 일부 구체에에서, 핵산은 복수종의 상이한 세포 유형으로부터의 다양한 도메인을 인코딩하는 핵산들의 키메라 조합을 포함하는 것을 포함하여, 자연에서 발견되지 않는 핵산과 같이, 자연발생적인 것이 아니다.
[255] 일부 구체예에서, 조작된 세포의 제조는 하나 이상의 배양 및/또는 제조 단계를 포함한다. CAR과 같은 트랜스제닉 수용체를 인코딩하는 핵산 도입용 세포는 생물학적 샘플, 예를 들어 대상자로부터 수득되거나 이로부터 유도된 샘플과 같은 샘플로부터 분리될 수 있다. 일부 구체예에서, 세포가 단리된 대상자는 질환 또는 상태를 가지거나 세포 요법이 필요하거나 세포 요법이 투여될 대상자이다. 일부 구체예에서 대상자는 세포가 분리, 가공 및/또는 조작되는 입양 세포 요법과 같은 특정한 치료적 개재가 필요한 인간이다.
[256] 따라서, 일부 구체예에서 세포는 일차 세포, 예컨대 일차 인간 세포이다. 샘플에는 대상자로부터 직접 채취된 조직, 유액(fluid), 및 기타 세포 뿐만 아니라 분리, 원심분리, 유전자 조작 (예컨대 바이러스 벡터를 이용한 형질도입), 세척, 및/또는 인큐베이션과 같은 한 가지 이상의 프로세싱 단계의 결과 얻어지는 샘플이 포함된다. 생물학적 샘플은 프로세싱되는 샘플 또는 생물학적 공급원으로부터 직접 얻어지는 샘플일 수 있다. 생물학적 샘플의 비제한적인 예로는 체액, 예컨대 혈액, 혈장, 혈청, 뇌척수액, 활액, 뇨 및 땀, 조직 및 장기 샘플 및 이들로부터 유래된 프로세싱된 샘플을 들 수 있다.
[257] 일부 측면에서, 세포가 유래 또는 분리되는 샘플은 혈액 또는 혈액-유래된 샘플이거나 또는 성분채집술 또는 백혈구성분채집술 생성물로부터 유래된 것이다. 예시적인 샘플로는 전혈, 말초혈액단핵 세포(PBMCs), 백혈구, 골수, 흉선, 조직 생검, 종양, 백혈병, 림프종, 림프절, 장연관 림프조직, 점막연관 림프조직, 비장, 기타 림프조직, 간, 폐, 위, 소장, 결장, 신장, 췌장, 유방, 뼈, 전립선, 자궁경부, 고환, 난소, 편도, 또는 기타 장기, 및/또는 이들로부터 유래된 세포를 들 수 있다. 예컨대, 입양세포 치료와 같은 세포 치료 맥락에서 샘플에는 예컨대 자가 공급원 및 동종이계 공급원으로부터의 샘플이 포함된다.
[0258] 일부 구체예에서, 세포는 세포주, 예컨대, T 세포주로부터 유래된다. 일부 구체예에서 세포는 이종발생(xenogeneic) 공급원, 예컨대 마우스, 래트, 비인간 영장류 및 돼지로부터 수득된다.
[259] 일부 구체예에서, 세포의 단리는 하나 이상의 제조 및/또는 비-친화성 기반 세포 단리 단계를 포함한다. 몇 가지 예에서, 세포들은 예컨대 원치 않는 성분들을 제거하고, 원하는 성분들을 농축시키거나, 특정 시약에 민감한 세포들을 용해 또는 제거하기 위한 1종 이상의 시약의 존재 하에, 세척, 원심분리, 및/또는 인큐베이션된다. 몇 가지 예에서, 세포들은 밀도, 흡착 특성, 크기, 민감성 및/또는 특정 성분에 대한 내성과 같은 하나 이상의 성질에 기반하여 분리된다.
[0260] 몇 가지 예에서, 대상자의 순환 혈액으로부터 예컨대 성분채집술 또는 백혈구성분채집술에 의해 세포를 수득한다. 일부 측면에서 샘플은 림프구, 예컨대 T 세포, 단핵구, 과립구, B 그 밖에 유핵 백혈구 세포, 적혈구 세포, 및/또는 혈소판을 포함하며 일부 측면에서 적혈구 세포 및 혈소판 이외의 세포들을 함유한다.
[0261] 일부 구체예에서, 대상자로부터 수집된 혈액 세포들을 세척하여 예컨대 혈장 분획을 제거하고 후속 프로세싱 단계를 위하여 세포를 적절한 완충액 또는 배지에 넣는다. 일부 구체예에서, 세포들을 인산완충염수(PBS)로 세척한다. 일부 구체예에서, 세척용액은 칼슘 및/또는 마그네슘 및/또는 다수의 또는 모든 2가 양이온을 결여한다. 일부 측면에서, 세척 단계는 제조사 지침에 따라 반자동화식 "병류(flow-through)" 원심분리 (예컨대, Cobe 2991 세포 프로세서, Baxter)에 의해 달성된다. 일부 측면에서, 세척 단계는 제조사 지침에 따라 탄젠트 유동 여과(tangential flow filtration: TFF)에 의해 달성된다. 일부 구체예에서, 세포는 예컨대 Ca++/Mg++가 없는 PBS와 같은 다양한 생체적합성 완충액에 재현탁된다. 특정 구체예에서, 혈액세포 샘플 성분들을 제거하고 세포들을 배양 배지에 직접 현탁시킨다
[0262] 일부 구체예에서, 본 발명의 방법은 적혈구 세포의 용해 및 Percoll 또는 Ficoll 구배를 통한 원심분리에 의해 말초혈액으로부터 백혈구 세포를 준비하는 것과 같은, 밀도-기반 세포 단리방법을 포함한다.
[263] 일부 구체예에서, 단리 방법은 세포내 하나 이상의 특이 분자, 예컨대 표면 마커, 예컨대 표면 단백질, 세포내 마커 또는 핵산의 발현 또는 존재여부에 기초하여 상이한 세포 유형을 분리하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 이러한 마커에 기반한 공지의 분리 방법들이 이용될 수 있다. 일부 구체예에서, 분리는 친화성- 또는 면역친화성-기반 분리이다. 예컨대, 일부 측면에서 단리는 세포 발현 또는 전형적으로 세포 표면 마커와 같은 하나 이상의 마커의 발현 수준에 기초하여 세포 및 세포 집단을 분리하는 것을 포함하며, 예컨대 이러한 마커에 특이적으로 결합하는 항체 또는 결합 파트너와 함께 인큐베이션한 다음, 일반적으로 세척 단계 및, 항체 또는 결합 파트너와 결합된 세포를 항체 또는 결합 파트너와 결합하지 않은 세포들로부터 분리함으로써 달성된다
[0264] 이러한 분리 단계는 시약과 결합한 세포가 추가 사용을 위해 유지되는 양성 선택 및/또는 항체 또는 결합 파트너에 결합되지 않은 세포들이 유지되는 음성 선택에 기초할 수 있다. 몇 가지 예에서, 두 가지 분획 모두 추가 사용을 위해 유지된다. 일부 측면에서, 음성 선택은 소망되는 집단 이외의 세포에 의해 발현되는 마커에 기초하여 분리가 최선으로 수행되는 것인, 이종 집단 내의 세포 유형을 특이적으로 동정할 수 있는 항체가 없을 경우 특히 유용할 수 있다.
[0265] 분리에 의해 특정 마커를 발현하는 세포 특정 세포 집단 또는 세포가 반드시 100% 농축되거나 제거되는 것은 아니다. 예컨대, 마커를 발현하는 것과 같은 특정 유형의 세포에 대한 농축 또는 양성 선택은 그러한 세포의 갯수 또는 밸분율을 증가시키는 것을 가리키는 것이지 그 마커를 발현하지 않는 세포의 완전한 부재를 반드시 결과시키는 것은 아니다. 마찬가지로, 예컨대 마커를 발현하는 것처럼 어떤 특정한 유형의 세포의 음성 선택, 제거 또는 고갈은 이러한 세포의 갯수 또는 백분율을 감소시키는 것을 가리키는 것일 뿐 이러한 모든 세포의 완전한 제거를 반드시 결과시키는 것은 아니다.
[0266] 몇 가지 예에서, 분리 단계를 복수 라운드로 수행하는데, 이 경우 어떤 한 단계로부터 양성 또는 음성 선택된 분획을 후속적인 양성 또는 음성 선택과 같은 또 다른 분리 단계로 처리한다. 몇 가지 예에서, 음성 선택에 표적화된 마커에 대해 각각 특이적인 복수개의 항체 또는 결합 하트너와 세포를 함께 인큐베이션시킴으로써, 단일 분리 단계에 의해 복수개의 마커를 동시에 발현하는 세포를 고갈시킬 수 있다. 마찬가지로, 다양한 세포 종류에서 발현되는 복수개의 항체 또는 결합 파트너와 세포를 함께 인큐베이션시킴으로써 복수개의 세포 종류들을 동시에 양성 선택할 수 있다.
[0267] 예컨대, 일부 측면에서, 예컨대, CD28+, CD62L+, CCR7+, CD27+, CD127+, CD4+, CD8+, CD45RA+, 및/또는 CD45RO+ T 세포와 같은, 하나 이상의 표면 마커를 높은 수준으로 발현하거나 이에 대해 양성인 세포와 같은 T 세포의 특별한 하위집단이 양성 또는 음성 선택 기술에 의해 단리된다.
[0268] 예컨대, CD3+, CD28+ T 세포는 CD3/CD28 컨쥬게이트된 자기 비드 (예컨대, DYNABEADS® M-450 CD3/CD28 T Cell Expander)를 이용하여 양성 선택될 수 있다.
[0269] 일부 구체예에서, 단리는 양성 선택에 의한 특정 세포 집단에 대한 농축 또는 음성 선택에 의한 특정 세포 집단의 고갈에 의해 수행된다. 일부 구체예에서, 양성 또는 음성 선택은 각각 양성 또는 음성 선택된 세포 상에서 비교적 고수준 (마커하이)으로 또는 발현되는 (마커+) 하나 이상의 표면 마커에 특이적으로 결합하는 1종 이상의 항체 또는 기타 결합제와 세포를 함께 인큐베이션함으로써 달성된다.
[0270] 일부 구체예에서, T 세포는 비-T 세포, 예컨대 B 세포, 단핵구 또는 기타 백혈구 세포, 예컨대 CD14 상에서 발현되는 마커들의 음성 선택에 의해 PBMC 샘플로부터 분리된다. 일부 측면에서, CD4+ 또는 CD8+ 선택 단계를 이용하여 CD4+ 헬퍼 및 CD8+ 세포독성 T 세포를 분리한다. 이러한 CD4+ 및 CD8+ 집단은 나이브, 기억, 및/또는 이펙터 T 세포 하위집단 중 하나 이상을 비교적 고도로 발현하는 마커의 양성 또는 음성 선택에 의해 하위집단으로 더 분류될 수 있다.
[0271] 일부 구체예에서, CD8+ 세포를 나이브 중심 기억, 이펙터 기억, 및/또는 중심 기억 줄기 세포에 대해, 예컨대 이들 각각의 하위집단과 연계된 표면 항원에 기초한 양성 또는 음성 선택에 의해, 추가로 농축 또는 고갈시킨다. 일부 구체예에서, 효능 증가를 위해, 예컨대 투여 후 장기간 생존, 증식 및/또는 이식을 위해 중심 기억 T (TCM) 세포에 대한 농축이 수행되는데, 이는 일부 측면에서 이러한 하위집단들에서 특히 원기왕성하다. 참조 [Terakura등 (2012) Blood.1:72-82; Wang 등 (2012) J Immunother. 35(9):689-701]. 일부 구체예에서, TCM-농축된 CD8+ T 세포와 CD4+ T 세포의 조합에 의해 효능이 추가로 향상된다.
[0272] 일부 구체예에서, 기억 T 세포는 CD8+ 말초 혈액 림프구의 CD62L+ 및 CD62L- 서브세트 양쪽 모두에 존재한다. PBMC는 예컨대 항-CD8 및 항-CD62L 항체를 이용함으로써, CD62L-CD8+ 및/또는 CD62L+CD8+ 분획을 농축 또는 고갈시킬 수 있다.
[0273] 일부 구체예에서, 중심 기억 T (TCM) 세포의 농축은 CD45RO, CD62L, CCR7, CD28, CD3, CD27 및/또는 CD 127의 양성 또는 높은 표면 발현에 기초한다; 일부 측면에서, 이것은 CD45RA 및/또는 그랜자임(granzyme) B를 발현 또는 고도로 발현하는 세포에 대한 음성 선택에 기반한다. 일부 측면에서, TCM 세포가 농축된 CD8+ 집단의 단리는 CD4, CD14, CD45RA를 발현하는 세포의 고갈 및 CD62L를 발현하는 세포의 양성 선택 또는 농축에 의해 수행된다. 일 측면에서, 중심 기억 T (TCM) 세포에 대한 농축은 CD14 및 CD45RA의 발현에 기초한 음성 선택 및 CD62L에 기초한 양성 선택 처리되는 CD4 발현에 기초하여 선택된 세포들의 음성 분획으로부터 출발하여 수행된다. 일부 측면에서 이러한 선택은 동시적으로 수행되며 또 다른 측면에서는 순서와 상관없이 순차적으로 수행된다. 일부 측면에서, CD8+ 세포 집단 또는 하위집단을 준비하는데 사용된 것과 동일한 CD4 발현-기반 선택 단계를, CD4+ 세포 집단 또는 하위집단을 생성하는데도 이용함으로써, CD4-기반 분리로부터의 양성 및 음성 분획 양방 모두를 유지하여 후속 단계에서 이용할 수 있으며, 한 가지 이상의 추가적인 양성 또는 음성 선택 단계를 임의로 더 실시할 수 있다.
[0274] 특정 예에서, PBMCs 샘플 또는 기타 백혈구 세포 샘플을 CD4+ 세포 선택 처리하여, 음성 분획과 양성 분획 양자 모두를 유지시킨다. 이어서 음성 분획을 CD14 및 CD45RA 또는 CD19의 발현에 기반하여 음성 선택하고, 중심 기억 T 세포, 예컨대 CD62L 또는 CCR7에 특징적인 마커에 기초하여 양성 선택하되, 이 때 양성 선택과 음성 선택을 순서와 관계없이 수행한다.
[0275] CD4+ T 헬퍼 세포는 세포 표면 항원을 갖는 세포 집단의 동정에 의해, 나이브, 중심 기억, 및 이펙터 세포로 분류된다. CD4+ 림프구들은 표준 방법에 의해 수득가능하다. 일부 구체예에서, 나이브 CD4+ T 림프구는 CD45RO-, CD45RA+, CD62L+, CD4+ T 세포이다. 일부 구체예에서, 중심 기억 CD4+ 세포는 CD62L+ 및 CD45RO+이다. 일부 구체예에서, 이펙터 CD4+ 세포는 CD62L- 및 CD45RO-이다.
[0276] 일 실시예에서, 음성 선택에 의해 CD4+ 세포를 농축하기 위해, 모노클로날 항체 칵돌기은 전형적으로 CD14, CD20, CD11b, CD16, HLA-DR, 및 CD8에 대한 항체를 포함한다. 일부 구체예에서, 항체 또는 결합 파트너는 양성 및/또는 음성 선택을 위해 세포를 분리할 수 있도록 고체 지지체 또는 매트릭스, 예컨대 자성 비드 또는 상자성 비드에 결합된다. 예컨대, 일부 구체예에서, 세포 및 세포 집단은 면역자성(또는 친화자성) 분리 기술에 의해 분리 또는 단리된다 (문헌 Methods in Molecular Medicine, vol. 58: Metastasis Research Protocols, Vol. 2: Cell Behavior In Vitro and In Vivo, p 17-25 Edited by: S. A. Brooks 및 U. Schumacher " Humana Press Inc., Totowa, NJ에서 검토됨).
[0277] 일부 측면에서, 분리하고자 하는 세포의 샘플 또는 조성물은 자성 반응성 입자 또는 마이크로입자, 예컨대 상자성 비드(예컨대, (예컨대, 예컨대 Dynalbeads 또는 MACS 비드)와 같이 자화가능하거나 또는 자성적으로 반응성인 소형 물질과 함께 인큐베이션된다. 자성적으로 반응성인 물질, 예컨대, 입자는 일반적으로 분리하고자 하는, 예컨대 양성 또는 음성 선택이 요구되는 세포 또는 세포 집단 상에 존재하는 예컨대 표면 마커와 같은 분자에 특이적으로 결합하는 항체와 같은 결합 파트너에 일반적으로 직접 또는 간접적으로 결합된다.
[0278] 일부 구체예에서, 자성 입자 또는 비드는 항체 또는 기타 결합 파트너와 같은 특이적인 결합 멤버에 결합된 자성적으로 반응성인 물질을 포함한다. 이 분야에는 자성 분리방법에 사용되는 자성적으로 반응성인 많은 물질들이 알려져 있다. 적절한 자성 입자에는 Molday의 미국특허 No. 4,452,773, 및 유럽 특허 명세서 EP 452342 B에 설명된 것들이 포함되며, 이들 문한은 본 발명에 참조 통합되었다. 그 밖의 예로는 예컨대 Owen의 미국특허 No. 4,795,698, 및 Liberti 등의 미국특허 No. 5,200,084에 설명된 콜로이드 크기의 입자를 들 수 있다.
[0279] 인큐베이션은 일반적으로 항체 또는 결합 파트너 또는 분자, 이러한 항체 또는 결합 파트너에 특이적으로 결합하고 자성 입자 또는 비드에 결합된 예컨대 2차 항체 또는 기타 시약이 샘플 내 세포 상에 존재할 경우 세포 표면 분자에 특이적으로 결합하는 그러한 조건 하에서 수행된다.
[0280] 일부 측면에서, 샘플은 자기장에 놓이며, 자성적으로 반응성인 세포 또는 그에 결합된 자화가능한 입자들이 자석에 이끌려 비표지 세포로부터 분리된다. 양성 선택의 경우, 자석에 유인되는 세포들이 유지된다; 음성 선택의 경우, 유인되지 않는 세포(비표지 세포)가 유지된다. 일부 측면에서, 동일한 선택 단계 동안 양성 및 음성 선택의 조합을 수행하여, 양성 및 음성 분획을 유지하여 추가 분리 단계로 처리하거나 또는 추가 프로세싱한다.
[0281] 특정 구체예에서, 자성적으로 반응성인 입자들은 일차 항체 또는 기타 결합 파트너, 이차 항체, 렉틴, 효소, 또는 스트렙트아비딘에서 코팅된다. 특정 구체예에서, 자성 입자들은 하나 이상의 마커에 특이적인 일차 항체의 코팅을 통해 세포에 결합된다. 특정 구체예에서는 비드가 아닌 세포가 일차 항체 또는 결합 파트너로 표지된 다음, 세포-유형 특이적인 이차 항체- 또는 기타 결합 파트너(예컨대, 스트렙트아비딘)-코팅된 자성 입자가 첨가된다. 특정 구체예에서, 스트렙트아비딘-코팅된 자성 입자들은 바이오티닐화된 일차 또는 이차 항체와 연계적으로 사용된다.
[0282] 일부 구체예에서, 자성적으로 반응성인 입자들은 후속적으로 인큐베이션, 배양 및/또는 조작될 세포에 부착된 채로 방치된다; 일부 측면에서, 이들 입자들은 환자에 대한 투여를 위해 세포에 부착된 채로 방치된다. 일부 구체예에서, 자화가능한 또는 자성적으로 반응성인 입자들이 세포로부터 제거된다. 세포로부터 자화가능한 입자를 제거하는 방법은 공지이며 여기에는 예컨대 경쟁적 비-표지 항체의 사용, 자화가능한 입자 또는 절단가능한 링커에 컨쥬게이션된 항체의 사용, 등이 포함된다. 일부 구체예에서, 자화가능한 입자들은 생분해성이다.
[0283] 일부 구체예에서, 친화성-기반 선택은 자기-활성화 세포 소팅(MACS) (Miltenyi Biotech, Auburn, CA)을 경유한다. 자기 활성화 세포 소팅(MACS) 시스템은 그에 결합된 자화된 입자들을 갖는 세포의 고순도 선택이 가능하다. 특정 구체예에서, MACS은 비표적 종 또는 표적 종이 외부 자기장 인가 후에 순차적으로 용리되는 방식으로 작동한다. 즉, 자화된 입자에 부착된 세포들은 그 자리에 유지되는 반면 부착되지 않은 종들은 용리된다. 이어서, 이 1차 용리 단계가 종결된 후, 자기장에 포획된 종들 및 용리되지 않은 종들이 용리 및 회수가능한 일부 방식으로 방출된다. 특정 구체예에서, 비-표적 세포가 표지되어 이질적인 세포 집단으로부터 고갈된다.
[0284] 특정 구체예에서, 본 발명 방법의 단리 또는 분리는 단리, 세포 준비, 분리, 가공, 인큐베이션, 배양 및/또는 제형화 단계 중 하나 이상을 수행하는 시스템, 기기 또는 장치를 이용하여 수행된다. 일부 측면에서, 예컨대 실수, 사용자 핸들링 및/또는 오염을 최소화하기 위해, 밀폐 또는 멸균 환경에서 이들 단계들을 각각 수행하기 위한 시스템이 이용된다. 일례에서, 시스템은 국제특허출원, 공개번호 WO2009/072003, 또는 US 20110003380 A1에 설명된 시스템이다..
[0285] 일부 구체예에서, 시스템 또는 장치는 단리, 가공, 조작 및 제형화 단계 중 하나 이상 예컨대 전부를 통합 시스템 또는 자족 시스템, 및/또는 자동화 또는 프로그램 가능한 방식으로 수행한다. 일부 측면에서, 시스템 또는 장치는 시스템 또는 장치와 교통하는 컴퓨터 및/또는 컴퓨터 프로그램을 포함함으로 해서, 사용자로 하여금 프로세싱, 단리, 조작 및 제형화 단계들의 결과를 프로그램, 제어, 평가하거나 및/또는 이의 다양한 측면을 조정하도록 할 수 있다.
[0286] 일부 측면에서, 분리 및/또는 기타 단계는, 예컨대 폐쇄 또는 멸균 시스템 중 임상규모의 세포 자동화 분리를 위한, CliniMACS 시스템 (Miltenyi Biotic)을 이용하여 수행된다. 부품으로는 일체형 마이크로컴퓨터, 자성 분리 유닛, 연동 펌프, 다양한 핀치 밸브를 들 수 있다. 일부 측면에서 일체형 컴퓨터는 장비의 모든 부품들을 제어하여 시스템으로 하여금 표준화된 시퀀스로 공정을 반복 수행하게 할 수 있다. 일부 측면에서 자성 분리 유닛은 이동가능한 영구자석 및 선택 컬럼용 홀더를 포함한다. 연동 펌프는 튜빙 세트를 통해 유속을 조절하고 핀치 밸브와 함께 시스템을 통한 완충액의 흐름과 세포의 지속적인 현탁을 통제한다.
[0287] 일부 측면에서, CliniMACS 시스템은 멸균된 비발열성 용액에 공급되는 항체-커플링된 자화가능한 입자를 이용한다. 일부 구체예에서, 세포를 자성 입자로 표지한 후 세포들을 세척하여 과량의 입자를 제거한다. 이어서 세포 제조 백을 튜빙 세트에 연결한 다음 이것을 완충액을 함유하는 백과 세포 수집 백에 연결한다. 튜빙 세트는 예비-컬럼 및 분리 컬럼을 비롯하여, 미리-조립된 멸균 튜빙으로 구성되며, 1회 사용만을 염두에 둔 것이다. 분리 프로그램 개시 후, 시스템은 세포 샘플을 분리 컬럼에 자동적으로 적용한다. 표지된 세포들은 컬럼 내에 유지되는 한편, 비표지 세포들은 일련의 세척 단계로부터 제거된다. 일부 구체예에서, 본 발명의 방법에 사용되기 위한 세포 집단은 표지되지 않으며 컬럼에 유지되지 않는다. 일부 구체예에서, 본 발명의 방법에 사용되기 위한 세포 집단은 표지되며 컬럼 내에 유지된다. 일부 구체예에서, 본 발명에 설명된 방법에 사용되기 위한 세포 집단은 자기장 제거 후 컬럼으로부터 용리되어, 세포 수집 백에 수집된다.
[0288] 특정 구체예에서, 분리 및/또는 기타 단계들은 CliniMACS Prodigy 시스템(Miltenyi Biotec)을 이용하여 수행된다. 일부 측면에서 CliniMACS Prodigy 시스템에는 자동세척 및 원심분리에 의한 세포의 분획화를 허용하는 세포 가공 유닛이 장착되어 있다. CliniMACS Prodigy 시스템은 또한 소스 세포 산물의 거시적인 층을 알아차림으로써 최적 세포 분획화 종점을 탐지하는 온보드 카메라 및 영상인식 소프트웨어도 포함할 수 있다. 예컨대, 말초혈액을 적혈구, 백혈구 및 혈장층으로 자동 분류한다. CliniMACS Prodigy 시스템은 또한 예컨대 세포 분화 및 성장, 항원 로딩 및 장기간 세포 배양 등의 세포 배양 프로토콜을 달성하는 일체형 세포 배양 챔버를 포함할 수도 있다. 인풋 포트는 배지의 멸균 제거 및 재보충을 가능케하며 일체형 현미경을 이용하여 세포를 모니터링할 수 있다. 예컨대, Klebanoff 등(2012) J Immunother. 35(9): 651-660, Terakura등 (2012) Blood.1:72-82, 및 Wang 등 (2012) J Immunother. 35(9):689-701 참조.
[0289] 일부 구체예에서, 본 발명에 설명된 세포 집단은 유세포 분석법을 통해 수집 및 농축(또는 고갈)되는데, 이 방법에서는 복수개의 세포 표면 마커에 대해 염색된 세포들이 유체 스트림을 통해 운반된다. 일부 구체예에서, 본 발명에 설명된 세포 집단은 예비 규모(FACS)-소팅을 통하여 수집 및 농축(또는 고갈)된다. 특정 구체예에서, 본 발명에 설명된 세포 집단은 FACS-기반 검출 시스템과 조합적으로 미세전자기계 시스템(MEMS)를 사용함으로써 수집 및 농축(또는 고갈)된다. (예컨대, WO 2010/033140, Cho 등 (2010) Lab Chip 10, 1567-1573; 및 Godin 등 (2008) J Biophoton. 1(5):355-376 참조). 두 가지 경우 모두에서, 세포는 복수개의 마커로 표지되어, 잘-정의된 T 세포 서브세트들을 고순도로 단리할 수 있다.
[02990] 일부 구체예에서는, 양성 및/또는 음성 선택을 위한 분리를 용이화하기 위해 항체 또는 결합 파트너를 하나 이상의 검출 가능한 마커로 표지한다. 예컨대, 분리는 형광 표지된 항체에 대한 결합에 기초할 수 있다. 몇 가지 예에서, 1개 이상의 세포 표면 마커에 특이적인 항체 또는 기타 결합 파트너의 결합에 기초한 세포 분리를 유체 스트림에서, 예컨대, 예비 규모(FACS) 및/또는 미세전자기계 시스템(MEM) 칩을 비롯한, 형광-활성화 세포 소팅(FACS)에 의해, 유세포 검출 시스템과 조합하여 수행한다. 이러한 방법에 의해 복수 마커에 기초하여 양성 및 음성 선택을 동시에 수행할 수 있다.
[291] 일부 구체예에서, 제조 방법은 단리, 인큐베이션, 및/또는 조작 전 또는 후에 세포를 냉동, 예컨대 냉동보존하는 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, 냉동 및 후속적인 해동 단계는 세포 집단 내의 과립구 및, 어느 정도로 단핵구를 제거한다. 일부 구체예에서는 예컨대 혈장 및 혈소판 제거를 위해 세척 단계 후에 냉동 용액에 세포들을 현탁시킨다. 일부 측면에서 공지의 다양한 여하한 냉동 용액 및 파라미터가 모두 사용가능하다. 그 한 가지 예는 20% DMSO 및 8% 인간 혈청 알부민 (HSA)를 함유하는 PBS 또는 그 밖의 적절한 세포 동결 배지의 사용을 포함한다. 이어서 배지로 1:1 희석하여 DMSO 및 HSA의 최종 농도가 각각 10% 및 4%가 되도록 한다. 이어서 세포를 분 당 1℃의 속도로 -80℃까지 냉동시키고 액체질소 저장 탱크의 증기상에 보관한다.
[292] 일부 구체예에서, 일부 구체예에서, 세포를 유전자 조작에 앞서 또는 연게하여 인큐베이션 및/또는 배양한다. 인큐베이션 단계는 배양, 재배, 자극, 활성화 및/또는 증식을 포함할 수 있다. 인큐베이션 및/또는 조작은 배양 용기, 예컨대 유닛, 챔버, 웰, 컬럼, 튜브, 튜빙세트, 밸브, 바이알, 배양 접시, 주머니 또는 기타 배양 또는 배양 세포용 용기에서 수행될 수 있다. 일부 구체예에서, 조성물 또는 세포는 자극 조건 또는 자극제 존재 하에 인큐베이션된다. 이러한 조건은 항원 노출을 모방하기 위해 및/또는 예컨대 재조합 항원 수용체의 도입을 위한 것과 같은 유전자 조작을 위해 세포를 프라이밍시키기 위해, 집단 내 세포의 증식, 팽창, 활성화 및/또는 생존을 유도하도록 설계된 조건을 포함한다.
[293] 이러한 조건은 특정 배지, 온도, 산소 함량, 이산화탄소 함량, 시간, 물질, 예컨대 영양원, 아미노산, 항생제, 이온 및/또는 자극 인자, 예컨대 시토카인, 케모카인, 항원, 결합 파트너, 융합 단백질, 재조합 가용성 수용체 및 세포 활성화를 위해 고안된 기타 물질 중 1종 이상을 포함할 수 있다.
[294] 일부 구체예에서, 자극 조건 또는 자극제는 1 이상의 물질, 예컨대 TCR 복합체의 세포내 시그널링 도메인을 활성화시킬 수 있는 리간드를 포함한다. 일부 측면에서, 이 자극제는 T 세포에서 TCR/CD3 세포내 시그널링 캐스케이드를 켜거나 개시한다. 이러한 자극제는 예컨대 항-CD3와 같이 TCR에 특이적인 항체들을 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 자극 조건은 공동자극 수용체, 예컨대, 항-CD28을 자극할 수 있는 예컨대 리간드와 같은 자극제를 하나 이상 포함한다. 일부 구체예에서, 이러한 자극제 및/또는 리간드는 비드와 같은 고체 지지체에 결합된 것 및/또는 1 이상의 시토카인일 수 있다. 경우에 따라, 증식 방법은 배양 배지에 항-CD3 및/또는 항-CD28 항체를 첨가하는 단계를 추가로 포함할 수 있다(예컨대, 적어도 약 0.5 ng/ml의 농도로). 일부 구체예에서, 자극제는 IL-2, IL-15 및/또는 IL-7을 포함한다. 일부 측면에서, IL-2 농도는 적어도 약 10 유닛/mL이다.
[295] 일부 측면에서, 일부 측면에서, 인큐베이션은 Riddell 등의 미국특허 No. 6,040,177, Klebanoff 등(2012) J Immunother. 35(9): 651-660, Terakura등 (2012) Blood.1:72-82, 및/또는 Wang 등 (2012) J Immunother. 35(9):689-701에 설명된 기술에 따라 수행된다.
[0296] 일부 구체예에서, T 세포는 예컨대 비-분열성 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)와 같은 배양-개시 조성물 피더 세포를 첨가함하고 (예컨대 결과적인 세포 집단이 증식시키고자 하는 초기 집단 중의 각각의 T 림프구에 대해 PBMC 피더 세포를 적어도 5, 10, 20, 또는 40배 또는 그 이상 함유하도록); 배양체를 인큐베이션 (예컨대 일부 T 세포들이 증식하는데 충분한 기간 동안) 함으로써 증식된다. 일부 측면에서, 비분열 피더 세포들은 γ선이 조사된 PBMC 피더 세포를 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 세포 분열을 방지하기 위해 약 3000 내지 3600 rads 범위로 PBMC에 γ선을 조사한다. 일부 측면에서, T 세포 집단을 첨가하기에 앞서서, 배양 배지에 피더 세포를 첨가한다.
[0297] 일부 구체예에서, 자극 조건은 인간 T 림프구의 성장에 적합한 온도예컨대, 적어도 약 25℃, 일반적으로 적어도 약 30도, 및 일반적으로 약 37℃를 포함한다. 필요에 따라, 인큐베이션은 피더 세포로서 비분열 EBV-형질전환된 림프모구 세포(LCL)을 첨가하는 것을 더 포함할 수 있다. LCL에 약 6000 내지 10,000 rads 범위의 γ선을 조사할 수 있다. 일부 측면에서 LCL 피더 세포가 적절한 양, 예컨대 적어도 약 10:1의 초기 T 림프구에 대한 LCL 피더 세포 비율로서 제공된다.
[0298] 일부 구체예에서, 나이브 또는 항원 특이적인 T 림프구를 항원으로 자극함으로써 항원-특이적 T 세포, 예컨대 항원-특이적 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포를 수득할 수 있다. 예컨대, 감염된 대상자로부터 T 세포를 단리하고 시험관 내에서 상기 세포를 동일한 항원으로 자극시킴으로써, 시토메갈로바이러스 항원에 대한 항원-특이적인 T 세포주 또는 클론을 생성할 수 있다.
IV. 조성물 및 제형
[299] 일부 구체예에서, 재조합 항원 수용체, 예컨대 CAR 또는 TCR에 의해 조작된 세포를 포함하는 세포의 투여량은 조성물 또는 제형, 예컨대 의약 조성물 또는 제형으로서 제공된다. 이러한 조성물들은 질환, 상태 및 장애의 예방 또는 치료시, 또는 검사, 진단 및 예후 방법 등 제공된 방법에 따라 사용될 수 있다.
[300] "의약 제형(pharmaceutical formulation)"이라는 용어는 그러한 형태에서, 그에 함유된 활성 성분의 생물확적 활성이 유효하게끔 허용해주는 제제로서, 상기 제형이 투여될 대상자에게 허용불가능하게 독성인 부가적인 성분들을 전혀 함유하지 않는 제제를 가리킨다.
[301] "약학적으로 허용가능한 담체"라 함은 의약 조성물 내에서 활성 성분이 아니면서 대상자에게 비독성인 성분을 가리킨다. 약학적으로 허용가능한 담체의 비제한적인 예로는 완충제, 부형제, 안정화제 또는 보존제를 들 수 있다.
[302] 일부 측면에서, 담체의 선택은 부분적으로 특정한 세포 또는 제제, 및/또는 투여 방법에 따라 결정된다. 따라서, 적절한 제형이 다양하게 존재한다. 예를 들어, 의약 조성물은 보존제를 함유할 수 있다. 적절한 보존제로는 예컨대 메틸파라벤, 프로필파라벤, 소듐 벤조에이트, 및 염화 벤잘코늄을 들 수 있다. 일부 측면에서, 2종 이상의 보존제의 혼합물이 사용된다. 보존제 또는 그의 혼합물은 일반적으로 총 조성물 중 약 0.0001% 내지 약 2 중량%의 양으로 존재한다. 담체는 예컨대 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)]에 설명되어 있다. 약학적으로 허용가능한 담체는 일반적으로 사용되는 투여량 및 농도에서 수용자에게 비독성이며: 완충제 예컨대 포스페이트, 시트레이트 및 기타 유기산; 아스코르브산 및 메티오닌을 비롯한 항산화제; 보존제(예를 들면 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드); 헥사메토늄 클로라이드; 벤잘코늄 클로라이드; 벤제토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알코올; 알킬 파라벤 예를 들면 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 시클로헥사놀; 3-펜타놀; 및 m-크레졸); 저분자량 (약 10개 잔기 미만) 폴리펩타이드; 단백질, 예를 들면 혈청 알부민, 젤라틴, 또는 면역글로불린; 친수성 폴리머 예를 들면 폴리비닐피롤리돈; 아미노산 예를 들면 글라이신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌, 또는 라이신; 단당류, 이당류 및 기타 탄수화물 예컨대 글루코스, 만노스 또는 덱스트린; 킬레이트화제 예를 들면 EDTA; 당 예를 들면 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨; 염-형성 카운터-이온 예를 들면 소듐; 금속 복합체(예컨대 Zn-단백질 복합체); 및/또는 비-이온성 계면활성제 예를 들면 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)를 포함할 수 있으며 이들로 한정되지 않는다.
[303] 완충제는 일부 측면에서 조성물에 포함된다. 적절한 완충제의 예로는 시트르산, 소듐 시트레이트, 인산, 포타슘 포스페이트, 및 그 밖에 다양한 및 염을 들 수 있다. 일부 측면에서, 2종 이상의 완충제의 혼합물이 사용된다. 완충제 또는 그의 혼합물은 총 조성물에 대해 일반적으로 약 0.001% 내지 약 4 중량%의 양으로 존재한다. 투약가능한 의약 조성물의 제조 방법은 공지이다. 예시적인 방법은 예를 들면 문헌 [Remington: The Science 및 Practice of Pharmacy, Lippincott Williams & Wilkins; 21st ed. (May 1, 2005)]에 보다 자세히 설명되어 있다.
[304] 제형 또는 조성물은 또한 각각의 활성이 서로 악영향을 미치지 않는, 세포 또는 제제로 예방되거나 치료되는 특정 징후, 질환 또는 상태에 유용한 하나 이상의 활성 성분을 함유 할 수 있다. 이러한 활성 성분은 적절하게 의도된 목적에 유효한 양으로 조합하여 존재한다. 따라서, 일부 구체예에서, 의약 조성물은 다른 약학적 활성 제제 또는 약물, 예컨대 화학요법제, 아스파라기나제, 부술판, 카보플라틴, 시스플라틴, 다우노루비신, 독소루비신, 플루오로우라실, 겜시타빈, 히드록시우레아, 메토트렉세이트, 파클리탁셀, 리툭시납, 빈블라스틴 등을 더 포함한다. 일부 구체예에서, 이들 제제 또는 세포는 염의 형태로, 예를 들어 약학적으로 허용되는 염으로서 투여된다. 약학적으로 허용되는 적절한 산부가 염은 염산, 브롬 산, 인산, 메타인산, 질산 및 황산과 같은 무기산, 및 타르타르산, 아세트산, 시트르산, 말산, 락트산, 푸마르산, 벤조산, 글리콜산, 글루콘산, 숙신산 및 아릴설폰산, 예를 들어 p-톨루엔설폰산과 같은 유기산을 포함한다.
[305] 활성 성분들은 마이크로캡슐, 콜로이드상 약물전달 시스템 (예컨대, 리포좀, 알부민 마이크로스피어, 마이크로에멀젼, 나노-입자 및 나노캡슐) 또는 마크로에멀젼 내에 포획될 수 있다. 특정 구체예에서, 의약 조성물은 시클로덱스트린 봉입 복합체(inclusion compex)와 같은 봉입 복합체 또는 리포좀으로서 제형화된다. 리포좀은 제제 또는 숙주 세포(예컨대, T-세포 또는 NK 세포)를 특정 조직에 표적화시키는 기능을 할 수 있다. 리포좀을 제조하는 방법이 다수 알려져 있으며, 예컨대 문헌 [Szoka et al., Ann. Rev. Biophys. Bioeng., 9: 467 (1980), 및 미국특허 4,235,871, 4,501,728, 4,837,028, 및 5,019,369]에 설명되어 있다.
[306] 일부 측면에서, 의약 조성물은 시간-방출형, 지연 방출 또는 서방형 전달 시스템을 이용할 수 있음으로 해서, 치료하고자 하는 부위의 감작화가 충분한 시간을 두고, 및 사전에 일어나도록 조성물이 전달된다. 이러한 방출전달계의 많은 유형이 입수가능하고 또 공지이다. 이러한 시스템은 조성물의 반복 투여를 회피시킬 수 있으므로, 대상자와 의사의 편의성을 제고해준다.
[307] 일부 구체예에서, 의약 조성물은 제제 또는 세포를 질병 또는 병태를 치료 또는 예방하는데 효과적인 양, 예컨대 치료적 유효량 또는 예방적 유효량으로 포함한다. 일부 구체예에서 치료 또는 예방적 효능은 치료 대상자에 대한 주기적인 평가에 의해 모니터링된다. 병태에 따라 수일 또는 그 이상 반복 투여를 위해, 질병 증상의 소망되는 억제가 일어날 때까지 치료를 반복한다. 그러나, 다른 투여법도 유용할 수 있으며 찾아볼 수 있다. 소망되는 투여량은 조성물의 단일 볼러스(bolus) 투여, 조성물의 복수회 볼러스 투여 또는 조성물의 연속 주입 투여에 의해 전달될 수 있다.
[308] 이들 제제 또는 세포는 적절한 수단, 예를 들어, 볼루스 주입, 주사, 예를 들어, 정맥 내 또는 피하 주사, 안내 주사, 눈 주위 주사, 망막하 주사, 유리체강내 주사, 경 중격 주사, 공막하 주사, 맥락막내 주사, 전방내 주사, 결막하 주사, 결막하 주사, 서브-테넌 주사, 안구후 주사, 과피 주사 또는 후방 경점막 전달에 의해 수행될 수 있다. 일부 구체예에서, 이들은 비경구, 폐내 및 비내 투여되고, 국소 치료를 위해 필요하다면 병변내 투여된다. 비경구 주입에는 근육 내, 정맥 내, 동맥 내, 복강 내 또는 피하 투여가 포함된다. 일부 구체예에서, 주어진 투여량은 제제 또는 세포의 단일 볼루스 투여에 의해 투여된다. 일부 구체예에서, 이는 예를 들어 3 일 이하의 기간에 걸쳐 또는 제제 또는 세포의 연속 주입 투여에 의해 세포의 여러 볼루스 투여에 의해 투여된다.
[309] 질환의 예방 또는 치료를 위해, 적절한 투여량은 치료될 질환 유형, 제제 또는 제제들의 유형, 세포 또는 재조합 수용체의 유형, 질환의 중증도 및 경과, 제제 또는 세포가 투여되는 목적이 예방인지 치료인지, 이전의 치료법, 환자의 임상 내력 및 제제제 또는 세포에 대한 반응 및 주치의의 재량에 따라 달라질 수 있다. 조성물은 일부 구체예에서 한 번에 또는 일련의 치료에 걸쳐 환자에게 적절하게 투여된다.
[310] 세포 또는 제제는 표준 투여 기술, 제형 및/또는 장치를 이용하여 투여될 수 있다. 조성물의 보관 및 투여를 위한 제형 및 장치, 예컨대 시린지 및 바이알이 제공된다. 세포와 관련하여 투여는 동종 또는 이종일 수 있다. 예컨대, 한 대상자로부터 면역응답 세포 또는 전구세포(progenitors)를 수득하여 이를 동일 또는 상이한, 호환가능한 대상자에게 투여할 수 있다. 말초혈액에서 유래하는 면역응답 세포 또는 그의 자손(예컨대 생체내, 생체외 또는 시험관내 유래됨)은 카테터 투여, 전신 주사, 국소 주사, 정맥 주사 또는 비경구 투여를 비롯한 국소화된 주사를 통해 투여될 수 있다. 치료 조성물(예컨대 신경독성의 증상을 치료 또는 경감시키는 유전자 변형된 면역응답 세포 또는 제제를 함유하는 의약 조성물)을 투여하는 경우, 일반적으로 주사가능한 단위 투여 제형(용액, 현탁액, 에멀젼)으로서 제제화된다.
[311] 일부 구체예에서 세포 집단 및 조성물은 표준 투여 기술, 예컨대 경구, 정맥내, 복강내, 피하, 폐, 경피, 근육내, 비강내, 협강내(buccal), 설하 또는 좌제 투여 경로로 투여된다. 일부 구체예에서, 제제 또는 세포 집단은 비경구 투여된다. 본 발명에서 "비경구"라는 용어는 정맥내, 근육내, 피하, 직장, 질내 및 복강내 투여를 포함한다. 일부 구체예에서, 제제 또는 세포 집단은 정맥내, 복강내 또는 피하 주사에 의한 말초 전신 전달을 이용하여 대상자에게 투여된다.
[312] 일부 구체예에서, 조성물은 멸균 액상 제제, 예컨대 등장성 수용액, 현탁액, 에멀젼, 분산액 또는 점성 조성물로서 제공되며, 이들은 일부 측면에서 선택된 pH로 완충될 수 있다. 액상 제제는 보통 겔, 기타 점성 조성물 및 고체 조성물에 비해 제조하기가 더 쉽다. 이에 더해, 액상 조성물은 특히 주사에 의해, 투여하기가 다소 더 간편하다. 다른 한편으로, 점성 조성물은 특정 조직과의 보다 장기간 접촉을 제공하기 위해 적절한 점도 범위를 갖도록 제제화될 수 있다. 액상 및 점성 조성물은 예컨대 물, 염수, 인산염 완충 염수, 폴리올(예컨대 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 액상 폴리에틸렌 글리콜) 및 이들의 적절한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있는 담체를 포함할 수 있다.
[313] 예컨대 적절한 담체, 희석제 또는 부형제, 예컨대 멸균수, 생리식염수, 글루코스, 덱스트로스 등과 혼합된 용매에 제제 또는 세포를 혼입시킴으로써 주사가능한 멸균 용액을 제조할 수 있다. 조성물은 동결건조될 수도 있다. 투여 경로 및 소망되는 제제에 따라 조성물은 보조 물질, 예컨대 습윤제, 분산제 또는 유화제(예컨대 메틸셀룰로스), pH 완충제, 겔화제 또는 점도증강 첨가제, 방부제, 풍미제, 색소 등을 함유할 수 있다. 일부 측면에서 적절한 제제를 제조하기 위해, 표준 텍스트를 참조할 수 있다.
[314] 항미생물 보존제, 항산화제, 킬레이팅제 및 완충제를 비롯하여, 조성물의 안정성과 멸균성을 향상시키는 다양한 첨가제가 첨가될 수 있다. 다양한 항균제 및 항진균제, 예컨대 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 소르브산 등에 의하여 미생물의 작용을 방지할 수 있다. 예컨대 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴과 같은 흡수지연제를 이용함으로써 주사가능한 의약 형태를 장기간 흡수시킬 수 있다.
[315] 지속-방출형 조제물도 제조될 수 있다. 지속-방출 조제물의 적절한 예에는 항체를 함유하는 소수성 고형 폴리머의 반투과성 매트릭스가 포함되며 상기 매트릭스는 성형 물품, 예컨대 필름 또는 마이크로캡슐 형태이다.
[316] 생체내 투여에 사용될 제형들은 일반적으로 멸균된 것이다. 멸균은 예컨대 멸균 필터막을 통한 여과에 의해 용이하게 달성가능하다.
V. 제조 물품 및 키트
[317] 또한 재조합 수용체 또는 이의 조성물을 발현하는 조작된 세포, 및 경우에 따라 사용 지침, 예를 들어, 제공된 방법에 따른 투여 지침을 함유하는 제조 물품 및 키트도 제공된다.
[318] 일부 구체예에서, 본원에 기술된 임의의 조작된 세포의 치료적 유효량을 포함하는 조성물 및 질병 또는 증상을 치료하기 위한 환자에게 투여하기 위한 지침을 제공하는 제조 물품 및/또는 키트가 제공된다. 일부 구체예에서, 지침은 본 명세서에 제공된 방법들의 요소들의 일부 또는 전부를 특정할 수 있다. 일부 구체예에서, 지침은 세포 치료를 위한 세포 투여를 위한 특정 지침, 예를 들어, 투여량, 투여시기, 투여 대상의 선택 및/또는 동정 및 투여 조건을 명시한다 일부 구체예에서, 제조 물품 및/또는 키트는 림프구고갈 요법을 위한 제제를 추가로 포함하고, 경우에 따라 림프구고갈 요법제를 투여하기 위한 지침을 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 지침은 투여용 조성물에 수반되는 라벨 또는 패키지 삽입물로서 포함될 수 있다.
[319] 일부 구체예에서, 지침은 치료 대상자들의 선택 또는 동정을 위한 기준을 명시한다. 일부 구체예에서, 이러한 기준은 고위험 CLL을 앓는 대상자를 포함한다. 일부 구체예에서, 지침은 경우에 따라 대상자가 FISH에 의해 검출되는 바와 같이, 경우에 따라 고위험 CLL과 연계되고, 경우에 따라: 복합 핵형, 염색체 13의 장완의 결실 (del 13q), del 11, 삼염색체 12, del 17p, del 6q, 및 del 13q.14로부터 선택되는 하나 이상의 세포유전학적 이상을 갖는 것으로 동정되거나 동정된 바 있거나; 대상자가 고위험 CLL에 걸린 것으로 동정되거나 동정된 바 있거나; 및/또는 대상자가 골수외(extramedullary) 질환을 갖는 것으로 동정되거나 동정된 바 있거나; 및/또는 대상자가 성인이거나 및/또는 약 30, 40, 50, 60, 또는 70 세 이상인 대상자에게 투여되는 것임을 명시한다. 일부 구체예에서, 선택 또는 동정 기준은 대상자들이 고위험 NHL을 갖는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 대상자는 경우에 따라 고위험 NHL과 연계된 하나 이상의 세포유전학적 이상을 갖거나 갖는 것으로 동정된다; 대상자는 고위험 NHL을 갖거나 가졌던 것으로 동정된다; 및/또는 NHL은 공격성 NHL, 미만성 거대 B 세포 림프종 (DLBCL), 원발성 종격동 거대 B 세포 림프종 (PMBCL), T 세포/조직구가 풍부한 거대 B 세포 림프종 (TCHRBCL), 버킷 림프종, 외투세포 림프종 (MCL), 및/또는 소포성 림프종 (FL)로 이루어진 군으로부터 선택된다; 및/또는 대상자는 성인이거나 및/또는 연령이 약 30, 40, 50, 60, 또는 70세 이상이다.
[320] 일부 구체예에서, 지침은 대상자가 백혈병 예를 들어, CLL 또는 NHL 치료를 위한 하나 이상의 이전 또는 이전 요법을 받은 대상자, 예를 들어 2, 3 또는 4 번 이상의 이전 요법을 받았음을 설명한다. 일부 구체예에서, 지침은 대상자가 이전의 치료법 중 하나 이상을 받은 후 불응성이되거나 또는 재발 가능성이 있는 것으로 확인되면 예컨대 CAR+ T 세포와 같은 세포 요법으로 치료되도록 선택됨을 명시한다.
[321] 일부 구체예에서, 지침은 투여될 세포 투여량을 명시한다. 예를 들어, 일부 구체예에서, 지침은 투여량이 (i) (a) 대상자의 킬로그램 체중 당 약 2 x 105 세포 (세포/kg); (b) 약 2 x 106 세포/kg, (c) 약 2 x 106 이하의 세포/kg, (d) 약 2 x 105 이하의 세포/kg 및/또는 (e) 약 2 x 105의 세포/kg 내지 약 2 x 106의 세포/kg을 함유함을 명시한다. 일부 구체예에서, 지침은 세포 요법에 대한 표적, 예컨대 그 세포 요법이 CD19-표적화된 세포 요법임을 포함하여 세포 요법의 세부사항을 명시한다. 일부 구체예에서, 지침은 세포 요법이 CAR을 발현하는 CD4+ 세포 대 CAR을 발현하는 CD8+ 세포의 소정 비율 및/또는 CD4+ 세포 대 CD8+ 세포의 소정 비율의 투여를 포함하며, 이러한 비율이 경우에 따라 대략 1:1 또는 대략 1:3 내지 대략 3:1임을 명시한다.
[322] 일부 구체예에서, 제조 물품 및/또는 키트는 본원에 기재된 바와 같은 치료를 위한 하나 이상의 추가의 제제, 예를 들어, 림프구고갈 요법 및/또는 조합 요법 및 임의로 추가의 제제를 투여하기 위한 지침을 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 제조 물품 및/또는 키트는 생물학적 샘플, 예를 들어, 투여 후보이거나 치료제가 투여된 대상자로부터의 생물학적 샘플을 분석하기 위한 하나 이상의 시약, 및 선택적으로 시약의 사용 또는 분석법에 대한 지시를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 시약은 세포 치료의 투여 전에 또는 세포 치료의 투여 후, 진단 목적으로, 대상을 확인하고 /하거나 치료 결과 및/또는 독성을 평가하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 일부 구체예에서, 제조 물품 및/또는 키트는 독성과 관련된 특정 바이오 마커, 예를 들어 사이토카인의 수준을 측정하기위한 시약 및 측정 지침을 추가로 함유한다. 일부 구체예에서, 시약은 면역분석, 앱타머-기반 검정, 조직학적 또는 세포학적 검정 또는 mRNA 발현 수준 검정과 같은 바이오마커를 측정하기 위한 시험관내 검정을 수행하기 위한 성분들을 포함한다. 일부 구체예에서, 시험관내 분석은 효소결합면역흡착분석 (ELISA), 면역블로팅, 면역침강, 방사 면역측정법 (RIA), 면역염색법, 유세포 분석법, 표면 플라스몬 공명(SPR), 화학 발광 분석법, 래터럴 유동 면역분석법, 억제 분석 및 결합능 분석으로부터 선택된다. 일부 양태에서, 시약은 바이오마커에 특이적으로 결합하는 결합 시약이다. 일부 경우, 결합 시약은 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 앱타머 또는 핵산 프로브이다.
[323] 제조 물품 및/또는 키트는 용기 및 용기 상에 또는 용기와 결합된 라벨 또는 포장 삽입물을 포함할 수 있다. 적합한 용기는 예를 들어, 보틀, 바이알, 주사기, IV 용액 주머니 등을 포함한다. 용기는 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 재료로부터 형성될 수 있다. 일부 구체예에서 용기는 그 자체로 또는 상태를 치료, 예방 및/또는 진단하는데 유효한 다른 조성물과 조합된 조성물을 보유한다. 일부 구체예에서, 용기는 무균 접근 포트를 갖는다. 예시적인 용기는 정맥내 용액 주머니, 주사 바늘로 뚫을 수 있는 마개가 있는 것들을 비롯한 바이알, 또는 경구 투여 용 보틀 또는 바이알을 포함한다. 라벨 또는 포장 삽입물은 조성물이 CLL 또는 NHL과 같은 질병 또는 상태를 치료하는데 사용됨을 나타낼 수 있다.
[324] 제조 물품은 재조합 수용체를 발현하는 조작된 세포를 포함하는 조성물을 포함하는 용기를 포함할 수 있으며; 및 일부 경우에서, 그 안에 함유된 조성물을 갖는 하나 이상의 추가의 용기를 포함하며, 상기 조성물은 하나 이상의 추가의 제제 또는 제제들을 포함한다. 제조 물품은 조성물이 특정 상태를 치료하는데 사용될 수 있음을 나타내는 포장 삽입물을 추가로 포함할 수 있다. 별법으로 또는 부가적으로, 제조 물품은 제약 상 허용되는 완충제를 포함하는 다른 또는 동일한 용기를 추가로 포함할 수 있다. 이것은 다른 완충제, 희석제, 필터, 바늘 및/또는 주사기와 같은 다른 물질을 추가로 포함할 수 있다.
VI. 예시적인 구체예
[325] 제공된 구체예들에는 다음이 포함된다:
1. 만성 림프구성 백혈병 (CLL)을 앓거나 앓는 것으로 의심되는 대상자의 치료 방법으로서, 상기 방법은 대상자에게 대상자 CLL에 의해 발현된 표적 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)을 발현하는 세포의 투여량을 투여하는 것을 포함하되, 상기 투여량은 (a) 대상자의 킬로그램 체중 당 약 2 x 105의 세포 (세포/kg); (b) 약 2 x 106 세포/kg, (c) 약 2 x 106 세포/kg 이하, (d) 약 2 x 105 세포/kg 이하 및/또는 (e) 약 2 x 105 세포/kg 내지 약 2 x 106 세포/kg을 포함하며, 여기서 투여에 앞서, 상기 대상자는 플루다라빈 투여를 포함하는 림프구고갈 요법으로 사전컨디셔닝된 것인 방법.
2. 만성 림프구성 백혈병 (CLL)을 앓거나 앓는 것으로 의심되는 대상자의 치료 방법으로서, 상기 방법은 대상자에게 대상자 CLL에 의해 발현된 표적 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)을 발현하는 세포의 투여량을 투여하는 것을 포함하되, 상기 투여량은 (a) 약 1 x 107개의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포; (b) 약 1.5 x 108개의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포, (c) 약 1 x 107개 이하의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포, (d) 약 1.5 x 108개 이하의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포 및/또는 (e) 약 1 x 107개의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포내지 약 1.5 x 108개의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포이며, 여기서 투여에 앞서, 상기 대상자는 플루다라빈 투여를 포함하는 림프구고갈 요법으로 사전컨디셔닝된 것인 방법.
3. 구체예 1에 있어서, 세포 투여량의 투여시 또는 투여 전에:
대상자는 경우에 따라 고위험 CLL과 연관되고, 경우에 따라 FISH로 검출시 복합 핵형, 염색체 13의 장완의 결실 (del 13q), del 11, 삼염색체 12, del 17p, del 6q, 및 del 13q.14로부터 선택된 하나 이상의 세포유전학적 이상을 갖거나 가졌던 것으로 동정되며;
대상자는 고위험 CLL을 갖거나 가졌던 것으로 동정되고; 및/또는
대상자는 골수외 질환을 갖거나 가졌던 것으로 동정되며; 및/또는
대상자는 중추신경계(CNS) 질환을 갖거나 가졌던 것으로 동정되고; 및/또는
대상자는 성인이거나 및/또는 연령이 약 30, 40, 50, 60, 또는 70세 이상인 것인 방법.
4. 구체예 1 또는 구체예 3에 있어서, 세포 투여량의 투여 전에, 대상자는 CLL 치료법으로서 림프구고갈 요법 이외 및/또는 CAR을 발현하는 세포의 또 다른 투여량 이외의 2 가지 이상, 경우에 따라 3, 4, 5, 6, 7, 8, 또는 9 가지 이상의 치료를 받은 대상자인 것인 방법.
5. 구체예 1 또는 구체예 3에 있어서, 세포 투여량의 투여 전에, 대상자는 CLL 치료법으로서 CAR을 발현하는 세포의 또 다른 투여량 이외 또는 CAR을 발현하는 세포의 또 다른 투여량 이외 및 사전컨디셔닝 요법을 2 가지 이상, 경우에 따라 3, 4, 5, 6, 7, 8, 또는 9 가지 이상의 치료를 받은 대상자인 것인 방법.
6. 구체예 1-5 중 어느 하나에 있어서, 세포 투여량의 투여 전에, 대상자는 키나아제 억제제, 경우에 따라 Btk의 억제제, 경우에 따라 이브루티닙에 의해 CLL 치료를 받은 바 있는 대상자인 것인 방법.
7. 구체예 1-6 중 어느 하나에 있어서, 세포 투여량의 투여 전에, 대상자는 CLL의 세포에 의해 발현되거나 이전에 발현된 항원에 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체에 의해 CLL 치료를 받은 바 있는 대상자인 것인 방법.
8. 구체예 1-7 중 어느 하나에 있어서, 세포 투여량의 투여 전에, 대상자는 베네토클락스, 조합 요법으로서 플루다라빈 및 리툭시맙을 포함하는 조합 요법, 방사선 요법 및/또는 조혈 줄기 세포 이식 (HSCT)에 의해 CLL 치료를 받은 바 있는 대상자인 것인 방법.
9. 구체예 1-8 중 어느 하나에 있어서, 세포 투여량의 투여시 또는 투여 직전에, 대상자는 CLL에 대한 하나 이상의 이전 치료에 의해 관해된 후 재발되거나 또는 불응성이된 대상자인 것인 방법.
10. 구체예 1-9 중 어느 하나에 있어서, 세포 투여량의 투여 전에 대상자에게 림프구고갈 요법제를 투여하는 것을 더 포함하는 방법.
11. 구체예 1-10 중 어느 하나에 있어서, 림프구고갈 요법은:
(i) 플루다라빈 이외의 또 다른 화학요법제, 경우에 따라 사이클로포스파미드를 투여하는 것을 더 포함하고
(ii) 세포 투여로부터 적어도 또는 약 48 시간 전 또는 세포 투여로부터 약 48 내지 약 96 시간 전에 개시되며; 및
(iii) 약 30-60 mg/kg의 사이클로포스파미드를, 경우에 따라 1일 또는 2일 동안 하루 한번, 및/또는 약 25 mg/m2의 플루다라빈을 3-5 일 동안 하루 한번 투여하는 것을 포함하는 것인 방법.
12. 구체예 1-11 중 어느 하나에 있어서, 세포 투여량의 투여 및/또는 림프구고갈 요법은 외래 환자 전달을 통해 수행되는 것인 방법.
13. 구체예 1-12 중 어느 하나에 있어서, 세포 투여량은 CAR을 발현하는 CD4+ 세포 대 CAR을 발현하는 CD8+ 세포의 소정 비율 및/또는 대략 1:1 또는 대략 1:3 내지 대략 3:1인 CD4+ 세포 대 CD8+ 세포의 소정 비율인 것인 방법.
14. 구체예 1-13 중 어느 하나에 있어서, 세포 투여량은 비경구적으로, 경우에 따라 정맥내 투여되는 것인 방법.
15. 구체예 1-14 중 어느 하나에 있어서:
상기 방법에 따라 치료된 대상자들의 적어도 50%는 완전 관해 (CR) 및/또는 객관적 반응 (OR)를 달성하거나; 및/또는
상기 방법에 따라 치료된 대상자들의 적어도 50%는 완전 관해 (CR) 및/또는 객관적 반응 (OR)을 달성하거나; 및/또는
경우에 따라 세포 투여량 투여로부터 약 또는 적어도 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 12, 18, 또는 24 개월 이내의 시점에서, 경우에 따라, 면역글로불린 중쇄 (IGH) 딥 시퀀싱(deep sequencing)에 의해 평가되는 바와 같이, 대상자의 골수에서(또는 상기 방법에 따라 치료된 대상자의 50% 이상의 골수에서) CLL의 인덱스 클론 및/또는 악성 면역글로불린 중쇄 (IGH) 자리가 검출되지 않는 것인 방법.
16. 구체예 1-15 중 어느 하나에 있어서:
상기 방법에 따라 치료되고, 완전 관해(CR)을 달성한 대상자들의 적어도 50%는 무진행 생존 (PFS) 및/또는 12 개월 이상의 전체 생존 (OS)을 나타내고;
평균적으로, 상기 방법에 따라 치료된 대상자들은 약 6 개월, 12 개월, 또는 18 개월 이상의 PFS 또는 OS 중앙치(median)를 나타내며; 및/또는
대상자는 치료 후 적어도 또는 약 6, 12, 18 개월 또는 그 이상의 기간 동안 PFS 또는 OS를 나타내는 것인 방법.
17. 구체예 1-16 중 어느 하나에 있어서, 항원은 B 세포 항원이고, 경우에 따라 CD19인 것인 방법.
18. 구체예 1-17 중 어느 하나에 있어서, CAR은 항원에 특이적인 scFv, 막관통 도메인, 경우에 따라 4-1BB인 공동자극 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인, 및 경우에 따라 CD3제타인 일차 시그널링 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인을 포함하는 것인 방법.
19. 구체예 1-18 중 어느 하나에 있어서, CAR은 스페이서 및/또는 힌지 영역을 포함하되, 이들 각각은 경우에 따라 인간 IgG로부터 유래된 것인 방법.
20. 비-호지킨 림프종 (NHL)을 앓거나 앓는 것으로 의심되는 대상자의 치료 방법으로서, 상기 방법은 대상자에게 대상자 NHL에 의해 발현된 표적 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)을 발현하는 세포의 투여량을 투여하는 것을 포함하되, 상기 투여량은 (i) (a) 대상자의 킬로그램 체중 당 약 2 x 105의 세포 (세포/kg); (b) 약 2 x 106 세포/kg, (c) 약 2 x 106 세포/kg 이하, (d) 약 2 x 105 세포/kg 이하 및/또는 (e) 약 2 x 105 세포/kg 내지 약 2 x 106 세포/kg을 포함하고 (ii) CAR을 발현하는 CD4+ 세포 대 CAR을 발현하는 CD8+ 세포의 소정 비율 및/또는 CD4+ 세포 대 CD8+ 세포의 소정 비율로서 경우에 따라 대략 1:1 또는 대략 1:3 내지 대략 3:1인 소정 비율을 포함하며,
여기서 투여에 앞서, 상기 대상자는 플루다라빈 투여를 포함하는 림프구고갈 요법으로 사전컨디셔닝된 것인 방법.
21. 비-호지킨 림프종 (NHL)을 앓거나 앓는 것으로 의심되는 대상자의 치료 방법으로서, 상기 방법은 대상자에게 대상자 NHL에 의해 발현된 표적 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)을 발현하는 세포의 투여량을 투여하는 것을 포함하되, 상기 투여량은 (i) (a) 약 1 x 107개의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포; (b) 약 1.5 x 108개의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포, (c) 약 1 x 107개 이하의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포, (d) 약 1.5 x 108개 이하의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포 및/또는 (e) 약 1 x 107개의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포내지 약 1.5 x 108개의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포를 포함하고, (ii) CAR을 발현하는 CD4+ 세포 대 CAR을 발현하는 CD8+ 세포의 소정 비율 및/또는 CD4+ 세포 대 CD8+ 세포의 소정 비율로서 경우에 따라 대략 1:1 또는 대략 1:3 내지 대략 3:1인 소정 비율을 포함하며, 여기서 투여에 앞서, 상기 대상자는 플루다라빈 투여를 포함하는 림프구고갈 요법으로 사전컨디셔닝된 것인 방법.
22. 구체예 20에 있어서, 세포 투여량의 투여시 또는 투여 전에:
대상자는 경우에 따라 고위험 NHL과 연관된 하나 이상의 세포유전학적 이상을 갖거나 가졌던 것으로 동정되며;
NHL은 공격성 NHL, 미만성 거대 B 세포 림프종 (DLBCL), 원발성 종격동 거대 B 세포 림프종 (PMBCL), T 세포/조직구가 풍부한 거대 B 세포 림프종 (TCHRBCL), 버킷 림프종, 외투세포 림프종 (MCL), 및/또는 소포성 림프종 (FL)으로 이루어진 군으로부터 선택되고; 및/또는
대상자는 성인이거나 및/또는 연령이 약 30, 40, 50, 60, 또는 70세 이상인 것인 방법.
23. 구체예 20 또는 구체예 22에 있어서, 세포 투여량의 투여 전에, 대상자는 NHL 치료법으로서 림프구고갈 요법 이외 및/또는 CAR을 발현하는 세포의 또 다른 투여량 이외의 두 가지 이상, 경우에 따라 2, 3, 또는 4 가지 이상의 치료를 받은 대상자인 것인 방법.
24. 구체예 20-23 중 어느 하나에 있어서, 세포 투여량의 투여시 또는 투여 직전에, 대상자는 NHL에 대한 하나 이상의 이전 치료에 의해 관해된 후 재발되거나 또는 불응성이 된 대상자인 것인 방법.
25. 구체예 20-24 중 어느 하나에 있어서, 세포 투여량의 투여 전에 대상자에게 림프구고갈 요법제를 투여하는 것을 더 포함하는 방법.
26. 구체예 20-25 중 어느 하나에 있어서, 림프구고갈 요법은:
(i) 플루다라빈 이외의 또 다른 화학요법제, 경우에 따라 사이클로포스파미드를 투여하는 것을 더 포함하고
(ii) 세포 투여로부터 적어도 또는 약 48 시간 전 또는 세포 투여로부터 약 48 내지 약 96 시간 전에 개시되며; 및
(iii) 약 30-60 mg/kg의 사이클로포스파미드를, 경우에 따라 1일 또는 2일 동안 하루 한번, 및/또는 약 25 mg/m2의 플루다라빈을 3-5 일 동안 하루 한번 투여하는 것을 포함하는 것인 방법.
27. 구체예 20-26 중 어느 하나에 있어서, 세포 투여량의 투여 및/또는 림프구고갈 요법은 외래 환자 전달을 통해 수행되는 것인 방법.
28. 구체예 20-27 중 어느 하나에 있어서, 소정 비율은 약 1:1의 CAR을 발현하는 CD4+ 세포 대 CAR을 발현하는 CD8+ 세포의 소정 비율로 정의되거나 및/또는 약 1:1인 CD4+ 세포 대 CD8+ 세포의 소정 비율로 정의되는 것인 방법.
29. 구체예 20-28 중 어느 하나에 있어서, 세포 투여량은 비경구적으로, 경우에 따라 정맥내 투여되는 것인 방법.
30. 구체예 20-20 중 어느 하나에 있어서, 상기 방법에 따라 치료된 대상자들의 적어도 50%는 완전 관해 (CR) 및/또는 객관적 반응 (OR)를 달성하는 것인 방법.
31. 구체예 20-30 중 어느 하나에 있어서:
상기 방법에 따라 치료되고, 완전 관해(CR)을 달성한 대상자들의 적어도 50%는 무진행 생존 (PFS) 및/또는 12 개월 이상의 전체 생존 (OS)을 나타내고;
평균적으로, 상기 방법에 따라 치료된 대상자들은 약 6 개월, 12 개월, 또는 18 개월 이상의 PFS 또는 OS 중앙치(median)를 나타내며; 및/또는
대상자는 치료 후 적어도 또는 약 6, 12, 18 개월 또는 그 이상의 기간 동안 PFS 또는 OS를 나타내는 것인 방법.
32. 구체예 20-31 중 어느 하나에 있어서, 항원은 B 세포 항원이고, 경우에 따라 CD19인 것인 방법.
33. 구체예 20-32 중 어느 하나에 있어서, CAR은 항원에 특이적인 scFv, 막관통 도메인, 경우에 따라 4-1BB인 공동자극 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인, 및 경우에 따라 CD3제타인 일차 시그널링 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인을 포함하는 것인 방법.
34. 구체예 20-33 중 어느 하나에 있어서, CAR은 스페이서 및/또는 힌지 영역을 포함하고, 이들 각각은 경우에 따라 인간 IgG로부터 유래된 것인 방법.
35. 구체예 1-34 중 어느 하나에 있어서:
CAR은 하기 순서로 항원에 특이적인 scFv, 막관통 도메인, 경우에 따라 4-1BB 시그널링 도메인이거나 이를 포함하는 공동자극 분자로부터 유래한 세포질 시그널링 도메인, 및 경우에 따라 CD3제타 시그널링 도메인인 일차 시그널링 ITAM-포함 분자로부터 유래한 세포질 시그널링 도메인을 포함하거나; 또는
CAR은 하기 순서로 항원에 특이적인 scFv, 스페이서, 막관통 도메인, 경우에 따라 4-1BB 시그널링 도메인인 공동자극 분자로부터 유래한 세포질 시그널링 도메인, 및 경우에 따라 CD3제타 시그널링 도메인이거나 이를 포함하는 일차 시그널링 ITAM-포함 분자로부터 유래한 세포질 시그널링 도메인을 포함하며;
여기서 스페이서는 경우에 따라 (a) 면역글로불린 힌지 또는 그의 변형된 버젼 전부 또는 그의 일부를 포함하거나 이것으로 구성되고 또는 약 15개 이하의 아미노산을 포함하며, CD28 세포외 영역 또는 CD8 세포외 영역을 포함하지 않거나, (b) 면역글로불린 힌지, 경우에 따라 IgG4 힌지, 또는 그의 변형된 버젼의 전부 또는 일부를 포함하거나 이것으로 구성되고 및/또는 약 15개 이하의 아미노산을 포함하며, CD28 세포외 영역 또는 CD8 세포외 영역을 포함하지 않거나, (c) 길이가 약 12 아미노산이고 및/또는 면역글로불린 힌지, 경우에 따라 IgG4 힌지, 또는 그의 변형된 버젼의 전부 또는 일부를 포함하거나 이것으로 구성되거나; 또는 (d) SEQ ID NO: 1의 서열, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34, 또는 전술한 임의의 서열에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 변이체에 의해 인코딩된 서열을 갖거나 또는 이들로 구성되거나, 또는 (e) 식 X1PPX2P (X1은 글리신, 시스테인 또는 아르기닌이고 X2는 시스테인 또는 트레오닌임)을 포함하거나 이것으로 구성되는 폴리펩타이드 스페이서이고; 및/또는
공동자극 도메인은 SEQ ID NO: 12 또는 이에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 변이체를 포함하거나; 및/또는
일차 시그널링 도메인은 SEQ ID NO: 13 또는 14 또는 15 또는 이에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖거나; 및/또는
scFv는 RASQDISKYLN (SEQ ID NO: 35)의 CDRLl 서열, SRLHSGV (SEQ ID NO: 36)의 CDRL2 서열, 및/또는 GNTLPYTFG (SEQ ID NO: 37)의 CDRL3 서열 및/또는 DYGVS (SEQ ID NO: 38)의 CDRH1 서열, VIWGSETTYYNSALKS (SEQ ID NO: 39)의 CDRH2 서열, 및/또는 YAMDYWG (SEQ ID NO: 40)의 CDRH3 서열을 포함하거나 또는 scFv는 FMC63의 중쇄 가변 영역 및 FMC63의 경쇄 가변 영역 및/또는 FMC63의 CDRLl 서열, FMC63의 CDRL2 서열, FMC63의 CDRL3 서열, FMC63의 CDRH1 서열, FMC63의 CDRH2 서열, 및 FMC63의 CDRH3 서열을 포함하거나 또는 동일한 에피토프에 결합하거나 또는 전술한 임의의 것들과의 결합을 놓고 경쟁하고, 경우에 따라 scFv는 하기의 순서로 VH, 경우에 따라 SEQ ID NO: 24를 포함하는 링커, 및 VL를 포함하고, 및/또는 scFv는 유연한 링커를 포함하거나 및/또는 SEQ ID NO: 24에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
36. B 세포 악성종양을 갖는 대상자로부터의 샘플에서의 악성 면역글로불린 중쇄 자리 (IGH) 서열의 존재 또는 부재를 검사하는 것을 포함하는, 예후 방법으로서, 상기 대상자는 B 세포 악성종양을 치료하기 위한 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 투여량 또는 조성물을 포함하는 세포 요법제를 이전에 투여받은 적이 있는 대상자이고, 여기서 상기 악성 IGH 서열의 존재 또는 부재의 검사는 세포 요법에 반응하는 대상자의 예후를 결정하는 것인 방법.
37. 구체예 36에 있어서, 악성 IGH 서열의 존재 또는 부재 검사는 세포 요법 개시 후 약 3 내지 6주일 이내, 경우에 따라 세포 요법제 투여 개시로부터 약 4주일 이내에 수행되는 것인 방법.
38. 구체예 36 또는 구체예 37에 있어서, 악성 IGH 서열이 검출되면, 그 대상자는 그 세포 요법에 대해 반응하지 않거나 또는 완전 반응 (CR) 또는 전체 반응 (OR)을 나타내지 않는 것으로 또는 그 세포 요법에 대해 재발할 가능성이 있는 것으로 동정되는 것인 방법.
39. 구체예 36-38 중 어느 하나에 있어서, 악성 IGH 서열이 검출되면 그 대상자를 추가 치료의 후보로서 및/또는 변경된 치료법 또는 대체 요법을 받을 후보로서 동정하는 것인 방법.
40. 구체예 36-38 중 어느 하나에 있어서, 악성 IGH 서열이 검출되면 그 세포 요법제의 투여 중단, 대상자에게 세포 요법제의 또 다른 투여량 투여, 대상자에게 세포 요법제의 보다 높은 투여량으로 투여, 대상자에게 상이한 세포 요법제, 경우에 따라, 상이한 재조합 수용체를 발현하는 세포 요법제의 투여, 및/또는 B 세포 악성 종양을 치료하기 위한 대체 치료제를 대상자에게 투여하는 방법.
41. 구체예 36 또는 구체예 37에 있어서, 악성 IGH 서열이 검출되지 않으면, 그 대상자는 그 세포 요법에 반응하거나 및/또는 그 세포 요법에 대해 완전 반응 (CR) 또는 전체 반응 (OR)을 나타내거나 또는 그 세포 요법에 대해 재발할 가능성이 낮은 것으로 동정되는 것인 방법.
42. 구체예 36, 37 및 41 중 어느 하나에 있어서, 악성 IGH 서열이 검출되지 않으면, 그 대상자는 추가 치료가 필요하지 않은 후보로서 동정되거나 및/또는 추가 치료되지 않거나, 경우에 따라 세포 요법에 의해 추가 치료되지 않으며 및/또는 B 세포 악성 종양에 대한 대체 요법으로 추가 치료되지 않는 것인 방법.
43. 세포 요법에 대한 반응의 지속성(durability)을 예측하는 방법으로서, 상기 방법은 B 세포 악성종양을 갖는 대상자로부터의 샘플 중 악성 면역글로불린 중쇄 자리 (IGH) 서열의 존재 또는 부재를 검사하는 것을 포함하되, 상기 대상자는 B 세포 악성종양의 치료를 위해 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 투여량 또는 조성물을 포함하는 세포 요법제를 이전에 투여받은 적이 있는 대상자이고, 여기서 악성 IGH 서열의 존재 또는 부재는 세포 요법에 대한 반응의 지속성을 예측하는 것인 방법.
44. 구체예 43에 있어서, 악성 IGH 서열의 존재 또는 부재의 검사는 세포 요법 개시 후 약 또는 약 4 주일, 6 주일, 8 주일, 12 주일 또는 16 주일 이내에 수행되는 것인 방법.
45. 구체예 43 또는 구체예 44에 있어서, 악성 IGH 서열이 검출되지 않으면, 그 대상자는 그 세포 요법에 대해 지속적인 반응을 나타내거나 또는 나타낼 가능성이 있는 것으로 예측되며 및/또는 특정 기간 이내에 재발 위험이 낮거나 또는 상대적으로 낮을 것으로 예측되거나 및/또는 적어도 특정 기간 동안 무진행 생존을 나타낼 가능성이 높다고 예측되는 것인 방법.
46. 구체예 43-45 중 어느 하나에 있어서, 악성 IGH 서열이 검출되지 않으면, 그 대상자는:
세포 요법 개시로부터 약 3개월 이상, 약 6개월 이상, 약 9개월 이상 또는 약 12개월 이상 동안 무진행 생존을 나타낼 것으로; 및/또는
세포 요법 개시로부터 약 3개월 이상, 약 6개월 이상, 약 9개월 이상 또는 약 12개월 이상 동안 생존할 것으로; 및/또는
세포 요법 개시로부터 약 3개월 이상, 약 6개월 이상, 약 9개월 이상 또는 약 12개월 이상 동안 지속적인 CR 또는 OR을 나타낼 것으로; 및/또는
세포 요법제 투여 개시 후 재발할 가능성이 낮은 것으로, 경우에 따라 세포 요법 개시로부터 약 3개월 이상, 약 6개월 이상, 약 9개월 이상 또는 약 12개월 이내에 재발할 가능성이 낮은 것으로 예측되는 것인 방법.
47. 구체예 43 또는 구체예 44에 있어서, 악성 IGH 서열이 검출되면, 그 대상자는:
그 세포 요법에 대해 지속적이지 않은 반응을 나타내거나 나타낼 가능성이 있는 것으로 및/또는 특정 기간 이내에 재발 위험이 높거나 상대적으로 높을 것으로 및/또는 적어도 특정 기간 동안 무진행 생존을 나타낼 가능성이 낮은 것으로 예측되는 것인 방법.
48. 구체예 43 또는 구체예 44에 있어서, 악성 IGH 서열이 검출되지 않으면, 그 대상자는:
세포 요법 개시 후 약 3개월 이상, 약 6 개월 이상, 약 9 개월 이상 또는 약 12 개월 이상 동안 무진행 생존을 나타내지 않을 것으로; 및/또는
세포 요법 개시 후 약 3개월 이상, 약 6 개월 이상, 약 9 개월 이상 또는 약 12 개월 이상 동안 생존한채 남아있지 않을 것으로; 및/또는
세포 요법 개시 후 약 3개월 이상, 약 6 개월 이상, 또는 약 9 개월 이상 동안 지속적인 CR 또는 OR을 나타내지 않을 것으로 예측되는 것인 방법.
49. 구체예 43, 44 및 48에 있어서, 악성 IGH 서열이 검출되면, 대상자에게 세포 요법제의 추가 투여량을 투여하거나, 대상자에게 세포 요법제를 더 고용량으로 투여하거나, 대상자에게 상이한 세포 요법제, 경우에 따라 상이한 재조합 수용체를 발현하는 세포 요법제를 투여하거나, 및/또는 대상자에게 B 세포 악성 종양을 치료하기 위한 대체 치료제를 투여하는 것인 방법.
50. 구체예 36-49 중 어느 하나에 있어서, 악성 IGH 서열의 존재 또는 부재는 경우에 따라 IGH 표적 DNA의 PCR 증폭을 포함하는 IGH 시퀀싱에 의해 결정되는 것인 방법.
51. 구체예 36-38 중 어느 하나에 있어서, 샘플은 B 세포를 포함하는 방법.
52. 구체예 36-51 중 어느 하나에 있어서, 샘플은 혈액 또는 골수 샘플를 포함하는 방법.
53. 구체예 36-52 중 어느 하나에 있어서, 샘플 대상자로부터 수득된 것인 방법.
54. 구체예 36-53 중 어느 하나에 있어서, 상기 방법은 생체외에서 수행되는 것인 방법.
55. 구체예 36-54 중 어느 하나에 있어서, B 세포 악성종양은 암인 방법.
56. 구체예 36-55 중 어느 하나에 있어서, B 세포 악성종양은 백혈병이거나 이를 포함하는 방법.
57. 구체예 37-56 중 어느 하나에 있어서, B 세포 악성종양은 CD19, CD20, CD22, CD30, CD33 또는 CD38, ROR1으로부터 선택된 항원 또는 이와 관련된 항원을 포함하는 것인 방법.
58. 구체예 36-57 중 어느 하나에 있어서, B 세포 악성종양은 급성 림프모구 백혈병 (ALL), 성인 ALL, 만성 림프모구 백혈병 (CLL), 비-호지킨 림프종 (NHL), 및 미만성 거대 B-세포 림프종 (DLBCL)이거나 이로부터 선택되는 것인 방법.
59. 구체예 37-58 중 어느 하나에 있어서, B 세포 악성종양은 만성 림프모구 백혈병 (CLL) 또는 고위험 CLL이거나 이를 포함하는 것인 방법.
60. 구체예 37-58 중 어느 하나에 있어서, B 세포 악성종양은 비-호지킨 림프종 (NHL)이거나 이를 포함하는 것인 방법.
61. 구체예 60에 있어서, NHL은 공격성 NHL, 미만성 거대 B 세포 림프종 (DLBCL), NOS (드 노보 및 무통(indolent)으로부터 변환됨), 원발성 종격동 거대 B 세포 림프종 (PMBCL), T 세포/조직구가 풍부한 거대 B 세포 림프종 (TCHRBCL), 버킷 림프종, 외투세포 림프종 (MCL), 및/또는 소포성 림프종 (FL), 경우에 따라, 소포성 림프종 등급 3B (FL3B)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
62. 구체예 37-61 중 어느 하나에 있어서, 재조합 수용체는 질환 또는 상태와 관련되고 B 세포 악성종양과 관련된 병변 환경의 세포에서 발현되는 항원에 특이적으로 결합하는 것인 방법.
63. 구체예 37-62 중 어느 하나에 있어서, 재조합 수용체는 T 세포 수용체 또는 기능성 비-T 세포 수용체인 것인 방법.
64. 구체예 37-63 중 어느 하나에 있어서, 재조합 수용체는 키메라 항원 수용체 (CAR)인 것인 방법.
65. 구체예 64에 있어서, CAR은 항원에 특이적으로 결합하는 세포외 항원-인식 도메인 및 ITAM을 포함하는 세포내 시그널링 도메인을 함유하고, 여기서 경우에 따라, 세포내 시그널링 도메인은 CD3-제타 (CD3ζ) 사슬의 세포내 도메인을 포함하거나; 및/또는 CAR은 추가로 공동자극 시그널링 영역을 더 포함하고, 경우에 따라 이것은 CD28 또는 4-1BB의 시그널링 도메인을 포함하는 것인 방법.
66. 구체예 37-65 중 어느 하나에 있어서, CAR은 항원에 특이적인 scFv, 막관통 도메인, 경우에 따라 4-1BB인 공동자극 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인, 및 경우에 따라 CD3제타인 일차 시그널링 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인을 포함하는 것인 방법.
67. 구체예 37-66 중 어느 하나에 있어서, CAR은 경우에 따라 각각 인간 IgG로부터 유래된 스페이서 및/또는 힌지 영역을 포함하는 것인 방법.
68. 구체예 37-67 중 어느 하나에 있어서:
CAR은 하기 순서로 항원에 특이적인 scFv, 막관통 도메인, 경우에 따라 4-1BB 시그널링 도메인이거나 이를 포함하는 공동자극 분자로부터 유래한 세포질 시그널링 도메인, 및 경우에 따라 CD3제타 시그널링 도메인인 일차 시그널링 ITAM-함유 분자로부터 유래한 세포질 시그널링 도메인을 포함하거나; 또는
CAR은 하기 순서로 항원에 특이적인 scFv, 스페이서, 막관통 도메인, 경우에 따라 4-1BB 시그널링 도메인인 공동자극 분자로부터 유래한 세포질 시그널링 도메인, 및 경우에 따라 CD3제타 시그널링 도메인이거나 이를 포함하는 일차 시그널링 ITAM-함유 분자로부터 유래한 세포질 시그널링 도메인을 함유하며;
및 여기서:
스페이서는 경우에 따라 (a) 면역글로불린 힌지 또는 그의 변형된 버젼 전부 또는 그의 일부를 함유하거나 이것으로 구성되고 또는 약 15개 이하의 아미노산을 함유하며, CD28 세포외 영역 또는 CD8 세포외 영역을 함유하지 않거나, (b) 면역글로불린 힌지, 경우에 따라 IgG4 힌지, 또는 그의 변형된 버젼의 전부 또는 일부를 함유하거나 이것으로 구성되고 및/또는 약 15개 이하의 아미노산을 함유하며, CD28 세포외 영역 또는 CD8 세포외 영역을 함유하지 않거나, (c) 길이가 약 12 아미노산이고 및/또는 면역글로불린 힌지, 경우에 따라 IgG4 힌지, 또는 그의 변형된 버젼의 전부 또는 일부를 포함하거나 이것으로 구성되거나; 또는 (d) SEQ ID NO: 1의 서열, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34, 또는 전술한 임의의 서열에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 변이체에 의해 인코딩된 서열을 갖거나 또는 이들로 구성되거나, 또는 (e) 식 X1PPX2P (X1은 글리신, 시스테인 또는 아르기닌이고 X2는 시스테인 또는 트레오닌임)을 포함하거나 이것으로 구성되는 폴리펩타이드 스페이서이고; 및/또는
공동자극 도메인은 SEQ ID NO: 12 또는 이에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 변이체를 함유하거나; 및/또는
일차 시그널링 도메인은 SEQ ID NO: 13 또는 14 또는 15 또는 이에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖거나; 및/또는
scFv는 RASQDISKYLN (SEQ ID NO: 35)의 CDRLl 서열, SRLHSGV (SEQ ID NO: 36)의 CDRL2 서열, 및/또는 GNTLPYTFG (SEQ ID NO: 37)의 CDRL3 서열 및/또는 DYGVS (SEQ ID NO: 38)의 CDRH1 서열, VIWGSETTYYNSALKS (SEQ ID NO: 39)의 CDRH2 서열, 및/또는 YAMDYWG (SEQ ID NO: 40)의 CDRH3 서열을 함유하거나 또는 scFv는 FMC63의 중쇄 가변 영역 및 FMC63의 경쇄 가변 영역 및/또는 FMC63의 CDRLl 서열, FMC63의 CDRL2 서열, FMC63의 CDRL3 서열, FMC63의 CDRH1 서열, FMC63의 CDRH2 서열, 및 FMC63의 CDRH3 서열을 포함하거나 또는 동일한 에피토프에 결합하거나 또는 전술한 임의의 것들과의 결합을 놓고 경쟁하고, 경우에 따라 scFv는 하기의 순서로 VH, 경우에 따라 SEQ ID NO: 24를 포함하는 링커, 및 VL를 함유하고, 및/또는 scFv는 유연한 링커를 함유하거나 및/또는 SEQ ID NO: 24에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
69. 구체예 37-68 중 어느 하나에 있어서, 조작된 세포는 T 세포, 경우에 따라 CD4+ 및/또는 CD8+을 포함하는 것인 방법.
70. 구체예 69에 있어서, T 세포는 대상자로부터 수득된 일차 T 세포인 것인 방법.
71. 구체예 37-70 중 어느 하나에 있어서, 조작된 세포는 대상자에 대해 자가인 것인 방법.
72. 구체예 37-71, 조작된 세포는 대상자에 대해 동종인 것인 방법.
73. 세포 요법제의 하나 이상의 투여량 및 세포 요법제의 투여에 대한 지침을 포함하는 제조 물품으로서, 상기 각 투여량은 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 세포를 포함하는 것이고, 여기서:
상기 지침은 만성 림프구성 백혈병 (CLL)를 앓는 대상자에게 투여될 세포의 투여량을 명시하고; 및
상기 지침은 다수의 CAR-발현 또는 세포 수의 투여를 명시하거나, 또는 상기 특정 수의 세포에 상응하거나 또는 이를 포함하는 하나 이상의 제형의 양 또는 부피의 투여를 명시하며, 여기서 투여될 특정 세포 수는 (a) 대상자의 킬로그램 체중 당 약 2 x 105 세포(세포/kg); (b) 약 2 x 106 세포/kg, (c) 약 2 x 106 이하의 세포/kg, (d) 약 2 x 105 이하의 세포/kg 및/또는 (e) 약 2 x 105 세포/kg 내지 또는 약 2 x 106 세포/kg를 포함하는 세포 투여량을 투여하기 위한 수를 포함하는 것인 제조 물품.
74. 세포 요법제의 하나 이상의 투여량 및 세포 요법제의 투여에 대한 지침을 포함하는 제조 물품으로서, 상기 각 투여량은 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 세포를 포함하는 것이고, 여기서:
상기 지침은 만성 림프구성 백혈병 (CLL)를 앓는 대상자에게 투여될 세포의 투여량을 명시하고; 및
상기 지침은 다수의 CAR-발현 또는 세포 수의 투여를 명시하거나, 또는 상기 특정 수의 세포에 상응하거나 또는 이를 포함하는 하나 이상의 제형의 양 또는 부피의 투여를 명시하며, 여기서 투여될 특정 세포 수는 (a) 약 1 x 107 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포; (b) 약 1.5 x 108 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포, (c) 약 1 x 107 이하의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포, (d) 약 1.5 x 108 이하의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포 및/또는 (e) 약 1 x 107의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포내지 약 1.5 x 108의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포를 포함하는 세포 투여량을 투여하기 위한 수를 포함하는 것인 제조 물품.
75. 구체예 73에 있어서, 플루다라빈을 포함하는 림프구고갈 요법과 함께, 또는 그 후 또는 그와 연계한 사용에 대한 지침을 추가로 포함하는 제조 물품.
76. 구체예 73 또는 구체예 75에 있어서, 상기 지침은 세포 요법이:
경우에 따라 FISH에 의해 검출되는 바와 같이, 경우에 따라 고위험 CLL과 연계되고, 경우에 따라: 복합 핵형, 염색체 13의 장완의 결실 (del 13q), del 11, 삼염색체 12, del 17p, del 6q, 및 del 13q.14로부터 선택되는 하나 이상의 세포유전학적 이상을 갖는 것으로 동정되거나 동정된 바 있는 대상자;
고위험 CLL에 걸린 것으로 동정되거나 동정된 바 있는 대상자; 및/또는
골수외(extramedullary) 질환을 갖는 것으로 동정되거나 동정된 바 있는 대상자; 및/또는
중추신경계 (CNS) 질환을 갖는 것으로 동정되거나 동정된 바 있는 대상자; 및/또는
성인이거나 및/또는 약 30, 40, 50, 60, 또는 70 세 이상인 대상자
에게 투여되는 것임을 명시한 것인 제조 물품.
77. 구체예 73-76 중 어느 하나에 있어서, 지침은 세포 요법이:
림프구고갈 요법 이외 및/또는 CAR을 발현하는 세포의 또 다른 투여량으로 2회 이상, 경우에 따라 3, 4, 5, 6, 7, 8, 또는 9회 이상 CLL에 대해 치료된 바 있는 대상자; 및/또는
키나아제 억제제, 경우에 따라 Btk의 억제제, 경우에 따라 이브루티닙으로 CLL에 대해 치료된 바 있는 대상자; 및/또는
CLL의 세포에 의해 발현되거나 또는 이전에 발현된 항원에 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체로 CLL에 대해 치료된 바 있는 대상자; 및/또는
플루다라빈과 리툭시맙을 포함하는 조합 요법, 베네토클락스, 방사선 요법 및/또는 조혈 줄기 세포 이식 (HSCT)에 의해 CLL에 대해 치료된 바 있는 대상자
에게 투여되는 것임을 명시한 것인 제조 물품.
78. 구체예 73-77 중 어느 하나에 있어서, 상기 지침은 세포 요법이 CLL에 대한 하나 이상의 이전 요법으로 치료 후 관해 후 재발하거나 또는 CLL에 대한 하나 이상의 이전 요법에 불응성이 있는 대상에게 투여됨을 명시한 것인 제조 물품.
79. 세포 요법제의 하나 이상의 투여량 및 세포 요법제의 투여에 대한 지침을 포함하는 제조 물품으로서, 상기 각 투여량은 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 세포를 포함하는 것이고, 여기서:
상기 지침은 비-호지킨 림프종(NHL)를 앓는 대상자에게 투여될 세포의 투여량을 명시하고; 및
상기 지침은 다수의 CAR-발현 또는 세포 수의 투여를 명시하거나, 또는 상기 특정 수의 세포에 상응하거나 또는 이를 포함하는 하나 이상의 제형의 양 또는 부피의 투여를 명시하며, 여기서 투여될 특정 세포 수는 (a) 대상자의 킬로그램 체중 당 약 2 x 105 세포(세포/kg); (b) 약 2 x 106 세포/kg, (c) 약 2 x 106 이하의 세포/kg, (d) 약 2 x 105 이하의 세포/kg 및/또는 (e) 약 2 x 105 세포/kg 내지 또는 약 2 x 106 세포/kg를 포함하는 세포 투여량을 투여하기 위한 수를 포함하는 것인 제조 물품.
80. 세포 요법제의 하나 이상의 투여량 및 세포 요법제의 투여에 대한 지침을 포함하는 제조 물품으로서, 상기 각 투여량은 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 세포를 포함하는 것이고, 여기서:
상기 지침은 비-호지킨 림프종(NHL)를 앓는 대상자에게 투여될 세포의 투여량을 명시하고; 및
상기 지침은 다수의 CAR-발현 또는 세포 수의 투여를 명시하거나, 또는 상기 특정 수의 세포에 상응하거나 또는 이를 포함하는 하나 이상의 제형의 양 또는 부피의 투여를 명시하며, 여기서 투여될 특정 세포 수는 (a) 약 1 x 107 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포; (b) 약 1.5 x 108 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포, (c) 약 1 x 107 이하의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포, (d) 약 1.5 x 108 이하의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포 및/또는 (e) 약 1 x 107의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포내지 약 1.5 x 108의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포를 포함하는 세포 투여량을 투여하기 위한 수를 포함하는 것인 제조 물품.
81. 구체예 79에 있어서, 플루다라빈을 포함하는 림프구고갈 요법과 함께, 또는 그 후 또는 그와 연계한 사용에 대한 지침을 추가로 포함하는 제조 물품.
82. 구체예 79 또는 구체예 81에 있어서, 지침은:
경우에 따라 고위험 NHL과 연관된 하나 이상의 세포유전학적 이상을 갖는 것으로 동정되거나 동정된 바 있는 대상자;
고위험 NHL을 갖는 것으로 동정되거나 동정된 바 있는 대상자; 및/또는
공격성 NHL, 미만성 거대 B 세포 림프종 (DLBCL), 원발성 종격동 거대 B 세포 림프종 (PMBCL), T 세포/조직구가 풍부한 거대 B 세포 림프종 (TCHRBCL), 버킷 림프종, 외투세포 림프종 (MCL), 및/또는 소포성 림프종 (FL)으로 이루어진 군으로부터 선택되거나; 및/또는
성인이거나 및/또는 연령이 약 30, 40, 50, 60, 또는 70세 이상인 대상자
에게 세포 요법제가 투여됨을 명시하는 것인 제조 물품.
83. 구체예 79-82 중 어느 하나에 있어서, 지침은 림프구고갈 요법을 제외한 및/또는 CAR을 발현하는 세포의 또 다른 투여량으로 2회 이상, 경우에 따라 2, 3 또는 4회 이상 NHL에 대한 치료를 받은 적이 있는 대상자에게 세포 요법제가 투여됨을 명시하는 것인 제조 물품.
84. 구체예 79-83 중 어느 하나에 있어서, 지침은 NHL에 대한 1종 이상의 이전 치료 후 관해에 이어 재발하였거나 또는 불응성이 된 대상자에게 세포 요법제가 투여됨을 명시하는 것인 제조 물품.
85. 구체예 73-84 중 어느 하나에 있어서, 림프구고갈 요법은:
(i) 경우에 따라 사이클로포스파미드인 플루다라빈 이외의 다른 화학요법제를 투여하는 것을 포함하거나; 및/또는
(ii) 약 30-60 mg/kg의 사이클로포스파미드를 경우에 따라 1일 또는 2일 동안 1일 1회, 및/또는 약 25 mg/m2의 플루다라빈을 3-5일 동안 매일 투여하는 것을 포함하는 것인 제조 물품.
86. 구체예 73-84 중 어느 하나에 있어서, 지침은 림프구고갈 요법이 세포 요법제 투여로부터 적어도 약 48 시간 전 또는 투여 전 약 48 시간 내지 약 96 시간 사이에 개시되어야 함을 명시하는 것인 제조 물품.
87. 구체예 73-86 중 어느 하나에 있어서, 지침은 세포 요법제를 CAR을 발현하는 CD4+ 세포 대 CD8+ 세포의 소정 비율로 투여할 것을 명시하거나, 또는 이러한 소정 비율에 상응하는 제형(들)의 양 또는 부피를 투여할 것을 명시하거나 또는 제형은 세포를 그러한 비율로 갖거나 또는 CAR을 발현하는 그러한 비율 및/또는 CD4+ 세포 대 CD8+ 세포의 비율로 함유하며, 상기 비율은 경우에 따라 대략 1:1 또는 대략 1:3 내지 대략 3:1인 것인 제조 물품.
88. 구체예 73-87 중 어느 하나에 있어서, 지침은 세포 요법제가 비경구 투여, 경우에 따라 정맥 투여용임을 추가로 명시하는 것인 제조 물품.
89. 구체예 73-88 중 어느 하나에 있어서, 지침은 세포 요법제가 외래 환자 환경 및/또는 환자를 병원에 하룻밤 또는 1일 이상 연속하여 입원하지 않고 투여되거나 및/또는 1일 이상 병원에 대상자의 입원없이 투여됨을 추가로 명시하는 것인 제조 물품.
90. 구체예 73-89 중 어느 하나에 있어서, 세포 요법제는 대상자로부터 수득된 일차 T 세포를 포함하는 것인 제조 물품.
91. 구체예 89에 있어서, T 세포는 대상자에 대해 자가인 것인 제조 물품.
92. 구체예 91에 있어서, T 세포는 대상자에 대해 동종인 것인 제조 물품.
93. 구체예 73-92 중 어느 하나에 있어서, CAR은 항원에 특이적인 scFv, 막관통 도메인, 경우에 따라 4-1BB인 공동자극 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인, 및 경우에 따라 CD3제타인 일차 시그널링 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인을 포함하는 것인 제조 물품.
94. 구체예 73-93 중 어느 하나에 있어서, CAR은 경우에 따라 각각 인간 IgG로부터 유래된 스페이서 및/또는 힌지 영역을 포함하는 것인 제조 물품.
95. 구체예 93 또는 구체예 94에 있어서, 항원은 경우에 따라 CD19인 B 세포 항원인 것인 제조 물품.
96. 구체예 73-95 중 어느 하나에 있어서:
CAR은 하기 순서대로, 항원에 특이적인 scFv, 막관통 도메인, 경우에 따라 4-1BB 시그널링 도메인이거나 이를 함유하는 공동자극 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인, 및 경우에 따라 CD3제타인 일차 시그널링 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인을 함유하거나; 또는
CAR은 하기 순서대로 항원에 특이적인 scFv, 스페이서, 막관통 도메인, 경우에 따라 4-1BB인 공동자극 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인, 및 경우에 따라 CD3제타 시그널링 도메인이거나 이를 포함하는 일차 시그널링 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인을 함유하고;
및 여기서:
스페이서는 경우에 따라 (a) 면역글로불린 힌지 또는 그의 변형된 버젼 전부 또는 그의 일부를 함유하거나 이것으로 구성되고 또는 약 15개 이하의 아미노산을 함유하며, CD28 세포외 영역 또는 CD8 세포외 영역을 함유하지 않거나, (b) 면역글로불린 힌지, 경우에 따라 IgG4 힌지, 또는 그의 변형된 버젼의 전부 또는 일부를 함유하거나 이것으로 구성되고 및/또는 약 15개 이하의 아미노산을 함유하며, CD28 세포외 영역 또는 CD8 세포외 영역을 함유하지 않거나, (c) 길이가 약 12 아미노산이고 및/또는 면역글로불린 힌지, 경우에 따라 IgG4 힌지, 또는 그의 변형된 버젼의 전부 또는 일부를 함유하거나 이것으로 구성되거나; 또는 (d) SEQ ID NO: 1의 서열, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34, 또는 전술한 임의의 서열에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 변이체에 의해 인코딩된 서열을 갖거나 또는 이들로 구성되거나, 또는 (e) 식 X1PPX2P (X1은 글리신, 시스테인 또는 아르기닌이고 X2는 시스테인 또는 트레오닌임)을 포함하거나 이것으로 구성되는 폴리펩타이드 스페이서이고; 및/또는
공동자극 도메인은 SEQ ID NO: 12 또는 이에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 변이체를 함유하거나; 및/또는
일차 시그널링 도메인은 SEQ ID NO: 13 또는 14 또는 15 또는 이에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖거나; 및/또는
scFv는 RASQDISKYLN (SEQ ID NO: 35)의 CDRLl 서열, SRLHSGV (SEQ ID NO: 36)의 CDRL2 서열, 및/또는 GNTLPYTFG (SEQ ID NO: 37)의 CDRL3 서열 및/또는 DYGVS (SEQ ID NO: 38)의 CDRH1 서열, VIWGSETTYYNSALKS (SEQ ID NO: 39)의 CDRH2 서열, 및/또는 YAMDYWG (SEQ ID NO: 40)의 CDRH3 서열을 함유하거나 또는 scFv는 FMC63의 중쇄 가변 영역 및 FMC63의 경쇄 가변 영역 및/또는 FMC63의 CDRLl 서열, FMC63의 CDRL2 서열, FMC63의 CDRL3 서열, FMC63의 CDRH1 서열, FMC63의 CDRH2 서열, 및 FMC63의 CDRH3 서열을 포함하거나 또는 동일한 에피토프에 결합하거나 또는 전술한 임의의 것들과의 결합을 놓고 경쟁하고, 경우에 따라 scFv는 하기의 순서로 VH, 경우에 따라 SEQ ID NO: 24를 포함하는 링커, 및 VL를 함유하고, 및/또는 scFv는 유연한 링커를 함유하거나 및/또는 SEQ ID NO: 24에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것인 제조 물품.
97. 만성 림프구성 백혈병 (CLL)에 걸리거나 걸린 것으로 의심되는 대상자를 치료하는데 사용되기 위한, CLL의 표적 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 세포를 함유하는 조성물로서, 여기서 상기 치료는 대상자에게 CAR을 발현하는 세포 투여량을 투여하는 것을 포함하되, 상기 투여량은 (a) 대상자의 킬로그램 체중 당 약 2 x 105 세포 (세포/kg); (b) 약 2 x 106 세포/kg, (c) 약 2 x 106 이하의 세포/kg, (d) 약 2 x 105 이하의 세포/kg 및/또는 (e) 약 2 x 105의 세포/kg 내지 약 2 x 106의 세포/kg을 함유하고,
여기서 투여에 앞서, 상기 대상자는 플루다라빈 투여를 포함하는 림프구고갈 요법으로 사전 컨디셔닝된 대상자인 것인 조성물.
98. 만성 림프구성 백혈병 (CLL)에 걸리거나 걸린 것으로 의심되는 대상자를 치료하는데 사용되기 위한, CLL의 표적 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 세포를 함유하는 조성물로서, 여기서 상기 치료는 CAR을 발현하는 세포의 투여량을 대상자에게 투여하는 것을 포함하되, 상기 투여량은 (a) 약 1 x 107 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포; (b) 약 1.5 x 108 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포, (c) 약 1 x 107 이하의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포, (d) 약 1.5 x 108 이하의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포 및/또는 (e) 약 1 x 107의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포내지 약 1.5 x 108의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포를 포함하고,
여기서 투여 전, 상기 대상자는 플루다라빈의 투여를 포함하는 림프구고갈 요법으로 사전 컨디셔닝된 대상자인 것인 조성물.
99. 구체예 97 또는 구체예 98에 있어서, 조성물은 세포 투여량의 투여시 또는 투여 전에 다음 대상자에게 사용되기 위한 것인 용도:
경우에 따라 FISH에 의해 검출되는 바와 같이, 경우에 따라 고위험 CLL과 연계되고, 경우에 따라: 복합 핵형, 염색체 13의 장완의 결실 (del 13q), del 11, 삼염색체 12, del 17p, del 6q, 및 del 13q.14로부터 선택되는 하나 이상의 세포유전학적 이상을 갖는 것으로 동정되거나 동정된 바 있는 대상자;
고위험 CLL에 걸린 것으로 동정되거나 동정된 바 있는 대상자; 및/또는
골수외(extramedullary) 질환을 갖는 것으로 동정되거나 동정된 바 있는 대상자; 및/또는
대상자가 중추신경계 (CNS) 질환을 갖는 것으로 동정되거나 동정된 바 있는 대상자; 및/또는
성인이거나 및/또는 약 30, 40, 50, 60, 또는 70 세 이상인 대상자.
100. 구체예 97-99 중 어느 하나에 있어서, 조성물은 세포 투여량 투여 전에, 2 이상, 선택적으로 3, 4, 5, 6, 7, 8 또는 9 이상의 림프구고갈 요법 이외의 CLL에 대한 치료, 및/또는 CAR을 발현하는 세포의 다른 투여량 이외의 다른 치료법으로 치료된 바 있는 대상자를 치료하는데 사용되기 위한 것인 용도.
101. 구체예 97-100 중 어느 하나에 있어서, 조성물은 세포 투여량 투여 전에, CAR을 발현하는 세포의 다른 투여량 또는 CAR을 발현하는 세포의 다른 투여량 및 사전컨디셔닝 요법을 제외한, 2 이상, 선택적으로 3, 4, 5, 6, 7, 8 또는 9 이상의 CLL에 대한 치료법으로 치료된 바 있는 대상자를 치료하는데 사용되기 위한 것인 용도.
102. 구체예 97-101 중 어느 하나에 있어서, 조성물은 세포 투여량의 투여에 앞서, CLL에 대해 키나아제 억제제, 경우에 따라 Btk의 억제제, 경우에 따라 이브루티닙으로 치료된 바 있는 대상자를 치료하는데 사용되기 위한 것인 용도.
103. 구체예 97-102 중 어느 하나에 있어서, 조성물은 세포 투여량의 투여에 앞서, 대상자가 CLL의 세포에 의해 발현되는 또는 이전에 발현된 항원에 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체로 CLL에 대한 치료를 받은 적이 있는 대상자를 치료하는데 사용되기 위한 것인 용도.
104. 구체예 97-102 중 어느 하나에 있어서, 조성물은 세포 투여량의 투여에 앞서, 대상자가 플루다라빈 및 리툭시맙을 포함하는 조합 요법, 베네토클락스, 방사선 요법 및/또는 조혈 줄기 세포 이식 (HSCT)으로 CLL에 대한 치료를 받은 바 있는 대상자를 치료하는데 사용되기 위한 것인 용도.
105. 구체예 97-102 중 어느 하나에 있어서, 조성물은 세포 투여량의 투여시 또는 투여 직전에, 대상자가 CLL에 대한 하나 이상의 이전 치료법에 대해 불응성이 되거나 또는 그러한 치료 후 관해 후에 재발된 바 있는 대상자를 치료하는데 사용되기 위한 것인 용도.
106. 비-호지킨 림프종 (NHL)에 걸리거나 걸린 것으로 의심되는 대상자를 치료하는데 사용되기 위한, NHL의 표적 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 세포를 함유하는 조성물로서, 여기서 상기 치료는 대상자에게 NHL에 의해 발현되는 표적 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 세포의 투여량을 투여하는 것을 포함하되, 여기서 상기 치료는 대상자에게 CAR을 발현하는 세포의 투여량을 투여하는 것을 포함하고, 상기 투여량은 (i) (a) 대상자의 킬로그램 체중 당 약 2 x 105 세포 (세포/kg); (b) 약 2 x 106 세포/kg, (c) 약 2 x 106 이하의 세포/kg, (d) 약 2 x 105 이하의 세포/kg 및/또는 (e) 약 2 x 105의 세포/kg 내지 약 2 x 106의 세포/kg을 포함하거나, 및 (ii) CAR을 발현하는 CD4+ 세포 대 CAR을 발현하는 CD8+ 세포의 소정 비율 및/또는 CD4+ 세포 대 CD8+ 세포의 소정 비율을 포함하되, 상기 비율은 경우에 따라 대략 1:1 또는 대략 1:3 내지 대략 3:1이고,
여기서 투여 전에 상기 대상자는 플루다라빈의 투여를 포함하는 림프구고갈 요법에 의해 사전컨디셔닝된 대상자인 것인 조성물.
107. 비-호지킨 림프종 (NHL)에 걸렸거나 걸린 것으로 의심되는 대상자의 치료에 사용되기 위한 NHL의 표적 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 세포를 함유하는 조성물로서, 여기서 상기 치료는 대상자에게 CAR을 발현하는 세포의 투여량을 투여하는 것을 포함하되, 상기 투여량은 (i) (a) 약 1 x 107 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포; (b) 약 1.5 x 108 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포, (c) 약 1 x 107 이하의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포, (d) 약 1.5 x 108 이하의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포 및/또는 (e) 약 1 x 107 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포내지 약 1.5 x 108 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포를 함유하거나, 및 (ii) CAR을 발현하는 CD4+ 세포 대 CAR을 발현하는 CD8+ 세포의 소정 비율 및/또는 CD4+ 세포 대 CD8+ 세포의 소정 비율을 함유하되, 상기 비율은 경우에 따라 대략 1:1이거나 또는 대략 1:3 내지 대략 3:1이고,
여기서, 투여 전에 상기 대상자는 플루다라빈의 투여를 포함하는 림프구고갈 요법으로 사전컨디셔닝된 대상자인 것인 조성물.
108. 구체예 106 또는 구체예 107에 있어서, 조성물은 세포 투여량의 투여시 또는 투여 전에 대상자가:
고위험 NHL과 연관된 하나 이상의 세포유전학적 이상을 갖는 것으로 동정되거나 동정된 바 있는 대상자;
고위험 NHL을 갖는 것으로 동정되거나 동정된 바 있는 대상자; 및/또는
NHL이 공격성 NHL, 미만성 거대 B 세포 림프종 (DLBCL), 원발성 종격동 거대 B 세포 림프종 (PMBCL), T 세포/조직구가 풍부한 거대 B 세포 림프종 (TCHRBCL), 버킷 림프종, 외투세포 림프종 (MCL), 및/또는 소포성 림프종 (FL)으로 이루어진 군으로부터 선택되거나; 및/또는
성인이거나 및/또는 연령이 약 30, 40, 50, 60, 또는 70세 이상인 대상자
를 치료하는데 사용되기 위한 것인 용도.
109. 구체예 106-108 중 어느 하나에 있어서, 조성물은 세포 투여량의 투여에 앞서 대상자가 림프구고갈 요법 이외에 및/또는 CAR 발현 세포의 또 다른 투여량 이외에 2종 이상, 경우에 따라 2, 3, 또는 4종 이상의 NHL 치료법으로 치료된 바 있는 대상자인 것인 용도.
110. 구체예 106-109 중 어느 하나에 있어서, 조성물은 세포 투여량의 투여시 또는 투여 직전에, 대상자가 NHL에 대한 하나 이상의 종전 치료법에 의한 치료 후 관해에 이어 재발하거나 또는 그러한 치료에 대해 불응성이 된 대상자를 치료하는데 사용되기 위한 것인 용도.
111. 구체예 97-110 중 어느 하나에 있어서, 림프구고갈 요법은:
(i) 플루다라빈 이외의 다른 화학요법제, 경우에 따라 사이클로포스파미드를 투여하는 것을 더 포함하고;
(ii) 세포 투여로부터 적어도 또는 약 48 시간 전 또는 세포 투여 전 약 48 시간 내지 약 96 시간 사이에 개시되며; 및
(iii) 약 30-60 mg/kg의 사이클로포스파미드를, 경우에 따라 1일 또는 2일 동안 하루 한번, 및/또는 약 25 mg/m2의 플루다라빈을 3-5일 동안 매일 투여하는 것을 포함하는 것인 용도.
112. 구체예 97-101 중 어느 하나에 있어서, 치료는 세포 투여량의 투여 및/또는 외래 환자 전달을 통한 림프구고갈 요법을 포함하는 것인 용도.
113. 구체예 97-112 중 어느 하나에 있어서, 조성물 및/또는 세포 투여량은 CAR을 발현하는 CD4+ 세포 대 CAR을 발현하는 CD8+ 세포의 소정 비율을 포함하되 상기 소정 비율은 경우에 따라 약 1:1 또는 약 1:3 내지 약 3:1인 것인 용도.
114. 구체예 97-113 중 어느 하나에 있어서, 조성물 및/또는 세포 투여량은 비경구 투여, 경우에 따라 정맥 투여용으로 조성되는 것인 용도.
115. 구체예 97-114 중 어느 하나에 있어서, 항원은 B 세포 항원이고, 경우에 따라 CD19인 것인 용도.
116. 구체예 97-115 중 어느 하나에 있어서, CAR은 항원에 특이적인 scFv, 막관통 도메인, 경우에 따라 4-1BB인 공동자극 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인, 및 경우에 따라 CD3제타인 일차 시그널링 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인을 포함하는 것인 용도.
117. 구체예 97-116 중 어느 하나에 있어서, CAR은 경우에 따라 각기 인간 IgG 로부터 유래된 스페이서 및/또는 힌지 영역을 포함하는 것인 용도.
118. 구체예 97-117 중 어느 하나에 있어서:
CAR은 하기 순서대로, 항원에 특이적인 scFv, 막관통 도메인, 경우에 따라 4-1BB 시그널링 도메인이거나 이를 함유하는 공동자극 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인, 및 경우에 따라 CD3제타인 일차 시그널링 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인을 함유하거나; 또는
CAR은 하기 순서대로 항원에 특이적인 scFv, 스페이서, 막관통 도메인, 경우에 따라 4-1BB인 공동자극 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인, 및 경우에 따라 CD3제타 시그널링 도메인이거나 이를 포함하는 일차 시그널링 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인을 함유하고;
및 여기서:
스페이서는 경우에 따라 (a) 면역글로불린 힌지 또는 그의 변형된 버젼 전부 또는 그의 일부를 함유하거나 이것으로 구성되고 또는 약 15개 이하의 아미노산을 함유하며, CD28 세포외 영역 또는 CD8 세포외 영역을 함유하지 않거나, (b) 면역글로불린 힌지, 경우에 따라 IgG4 힌지, 또는 그의 변형된 버젼의 전부 또는 일부를 함유하거나 이것으로 구성되고 및/또는 약 15개 이하의 아미노산을 함유하며, CD28 세포외 영역 또는 CD8 세포외 영역을 함유하지 않거나, (c) 길이가 약 12 아미노산이고 및/또는 면역글로불린 힌지, 경우에 따라 IgG4 힌지, 또는 그의 변형된 버젼의 전부 또는 일부를 함유하거나 이것으로 구성되거나; 또는 (d) SEQ ID NO: 1의 서열, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34, 또는 전술한 임의의 서열에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 변이체에 의해 인코딩된 서열을 갖거나 또는 이들로 구성되거나, 또는 (e) 식 X1PPX2P (X1은 글리신, 시스테인 또는 아르기닌이고 X2는 시스테인 또는 트레오닌임)을 포함하거나 이것으로 구성되는 폴리펩타이드 스페이서이고; 및/또는
공동자극 도메인은 SEQ ID NO: 12 또는 이에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 변이체를 함유하거나; 및/또는
일차 시그널링 도메인은 SEQ ID NO: 13 또는 14 또는 15 또는 이에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖거나; 및/또는
scFv는 RASQDISKYLN (SEQ ID NO: 35)의 CDRLl 서열, SRLHSGV (SEQ ID NO: 36)의 CDRL2 서열, 및/또는 GNTLPYTFG (SEQ ID NO: 37)의 CDRL3 서열 및/또는 DYGVS (SEQ ID NO: 38)의 CDRH1 서열, VIWGSETTYYNSALKS (SEQ ID NO: 39)의 CDRH2 서열, 및/또는 YAMDYWG (SEQ ID NO: 40)의 CDRH3 서열을 함유하거나 또는 scFv는 FMC63의 중쇄 가변 영역 및 FMC63의 경쇄 가변 영역 및/또는 FMC63의 CDRLl 서열, FMC63의 CDRL2 서열, FMC63의 CDRL3 서열, FMC63의 CDRH1 서열, FMC63의 CDRH2 서열, 및 FMC63의 CDRH3 서열을 포함하거나 또는 동일한 에피토프에 결합하거나 또는 전술한 임의의 것들과의 결합을 놓고 경쟁하고, 경우에 따라 scFv는 하기의 순서로 VH, 경우에 따라 SEQ ID NO: 24를 포함하는 링커, 및 VL를 함유하고, 및/또는 scFv는 유연한 링커를 함유하거나 및/또는 SEQ ID NO: 24에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
VII. 정의
[326] 용어 "폴리펩타이드"및 "단백질"은 아미노산 잔기의 폴리머를 지칭하기 위해 상호교환적으로 사용되고, 최소 길이로 제한되지 않는다. 제공된 수용체 및 다른 폴리펩타이드, 예를 들어, 링커 또는 펩타이드를 비롯한 폴리펩타이드는 천연 및/또는 비 - 천연 아미노산 잔기를 포함하는 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 상기 용어는 또한 폴리펩타이드의 발현 후 변형, 예를 들어 글리코실화, 시알릴화, 아세틸화 및 인산화를 포함한다. 일부 측면에서, 폴리펩타이드는 단백질이 원하는 활성을 유지하는 한 천연 또는 천연 서열에 대한 변형을 포함 할 수 있다. 이러한 변형은 부위 특이적 돌연변이 유발을 통해 의도적으로 이루어지거나, PCR 증폭으로 인해 단백질을 생성하는 숙주의 돌연변이 또는 우연히 발생할 수 있다.
[327] 본원에 사용 된 바와 같이, "대상자"는 인간 또는 다른 동물과 같은 포유동물이며 전형적으로 인간이다. 일부 구체예에서, 제제 또는 제제들, 세포, 세포 집단 또는 조성물이 투여되는 환자 등의 대상자는 포유동물, 전형적으로 사람과 같은 영장류이다. 일부 구체예에서, 영장류는 원숭이 또는 유인원이다. 대상자는 남성 또는 여성이 될 수 있으며 유아, 청소년, 청소년, 성인 및 노인을 포함한 적절한 연령일 수 있다. 일부 구체예에서, 대상자는 설치류와 같은 비영장류 포유동물이다.
[328] 본원에 사용된 "치료" (및 "치료하다" 또는 "치료하는"과 같은 문법적 파생어)는 질환 또는 상태 또는 장애, 또는 증상, 부작용 또는 결과의 완전 또는 부분적 개선 또는 감소, 또는 표현형과 관련된다. 치료의 바람직한 효과는 질병의 발생 또는 재발 방지, 증상의 완화, 질병의 직접 또는 간접적인 병리학적 결과의 감소, 전이 방지, 질병 진행속도 감소, 질병 상태의 완화 또는 경감 및 관해 또는 개선된 예후를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 이 용어는 질병의 완전한 완치 또는 임의의 증상의 완전한 제거 또는 모든 증상 또는 결과에 대한 효과(들)을 의미하지는 않는다.
[329] 본원에 사용된 바와 같이, "질병 발달 지연"은 질환 (암과 같은)의 발달을 지연, 방해, 둔화, 지연, 안정화, 억제 및/또는 연기하는 것을 의미한다. 이러한 지연은 병력 및/또는 치료대상 개체에 따라 그 기간이 달라질 수 있다. 당해 기술 분야의 숙련자에게 명백한 바와 같이, 개체가 질병을 발병하지 않는다는 점에서, 충분하거나 현저한 지연은 사실상 예방을 포함할 수 있다. 예를 들어, 전이의 발달과 같은 말기 암이 지연될 수 있다.
[330] 본원에서 사용된 용어 "예방"은 질병에 걸리기 쉽지만 아직 질병에 노출되지 않은 대상자에서 질병의 발생 또는 재발에 관한 예방을 제공하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 제공된 세포 및 조성물은 질환의 발달을 지연시키거나 질환의 진행을 늦추는데 사용된다.
[331] 본원에서 사용 된 바와 같이, 기능 또는 활성을 "억제"시키는 것은 관심대상 조건 또는 매개 변수를 제외하고 달리 동일한 조건과 비교할 때, 또는 대안 적으로는 다른 조건과 비교하여 기능 또는 활성을 감소시키는 것이다. 예를 들어, 종양 성장을 억제하는 세포는 그 세포가 없는 경우의 종양의 성장 속도에 비해 종양의 성장 속도를 감소시킨다.
[332] 투여 관점에서 어떤 제제, 예컨대 의약 제형, 세포 또는 조성물의 "유효량"은 소망되는 결과 예컨대 치료학적 또는 예방적 결과를 달성하는데 필요한 기간 동안 투여량/양으로 효과적인 양을 의미한다.
[333] 제제, 예를 들어, 약학 제형 또는 세포의 "치료학적 유효량"은 필요한 기간 및 투여량에서, 질환, 상태 또는 장애의 치료, 및/또는 치료의 약동학적 또는 약력학적 효과와 같은 목적하는 치료 결과를 달성하는데 효과적인 양을 가리킨다.치료학적 유효량은 대상자의 질병 상태, 연령, 성별, 및 체중 및 투여된 세포 집단과 같은 인자에 따라 달라질 수 있다. 일부 구체예에서, 제공된 방법은 세포 및/또는 조성물을 유효량, 예를 들어, 치료 유효량으로 투여하는 것을 포함한다.
[334] "예방적 유효량"은 필요한 기간 및 투여량에서, 목적하는 예방적 결과를 달성하는데 효과적인 효과적인 양을 지칭한다. 예방적 유효량은 대상자들에서 발병 전 또는 질병 초기 단계에 사용되기 때문에 일반적으로 (그러나 반드시 그러하지는 않음) 예방적 유효량은 치료적 유효량 미만일 것이다. 보다 낮은 종양 부담 맥락에서, 일부 측면에서 예방적 유효량은 치료 유효량보다 높을 것이다.
[335] 본 명세서에 사용된 용어 "약"은 이 기술 분야에서 당업자에게 용이하게 공지된 각각의 값에 대한 통상적인 오차 범위를 나타낸다. 본 명세서에서 어떤 값 또는 파라미터에 대한 "약"이라는 표현은 그 값 또는 파라미터 그 자체에 지향된 구체예를 포함한다(및 설명한다).
[336] 본원에서 사용된 단수 형태 "a", "an" 및 "the"는 문맥상 명백히 달리 지시하지 않는 한 복수 대상을 포함한다. 예를 들어, "a" 또는 "an"은 "적어도 하나" 또는 "하나 이상"을 의미한다.
[337] 본 개시 내용 전반에 걸쳐, 청구된 주제의 다양한 관점이 범위 형식으로 제시된다. 범위 형식에서의 설명은 편의상 및 간략화를 위한 것이며 청구된 주제의 범위에 대한 융통성 없는 제한으로 해석되어서는 아니됨을 이해해야 한다. 따라서, 범위의 설명은 가능한 모든 하위 범위 및 그 범위 내의 개별적인 수치를 구체적으로 개시한 것으로 간주되어야 한다. 예를 들어, 값의 범위가 제공되는 경우, 그 범위의 상한과 하한 사이의 각각의 개재된 값 및 언급된 범위 내의 다른 명시된 또는 개재된 값은 청구된 주제 내에 포함되는 것으로 이해된다. 이들 작은 범위의 상한 및 하한은 독립적으로 작은 범위에 포함될 수 있으며, 기술된 범위 내에서 특별히 배제된 한계를 조건으로 청구 범위 내에 포함될 수 도있다. 언급된 범위가 하나의 한도 또는 한도 모두를 포함하는 경우, 포함된 한도 각각 또는 모두를 제외한 범위가 청구 대상에 또한 포함된다. 이는 범위의 폭에 관계없이 적용된다.
[338] 본 발명에 사용된 바와 같이, 조성물은 세포를 비롯한 2종 이상의 제품, 물질 또는 화합물의 임의의 혼합물을 지칭한다. 이는 용액, 현탁액, 액체, 분말, 페이스트, 수성, 비수성 또는 이들의 임의의 조합일 수 있다.
[339] 본원에 사용된 바와 같이, 하나 이상의 특정 세포 유형 또는 세포 집단을 언급할 때 "풍부하게 하다/농축하다(enriching)"라는 표현은 예컨대 세포의 총 수 또는 조성물의 부피에 비해, 또는 집단 또는 세포에 의해 발현된 마커에 기반한 양성 선택 또는 고갈될 세포 또는 세포 집단에 존재하지 않는 마커에 기반한 음성 선택에 의한 것과 같이 다른 세포 유형에 상대적으로, 그 세포 유형 또는 집단의 수 또는 백분율이 증가됨을 가리킨다. 이 용어는 조성물로부터 다른 세포, 세포 유형 또는 개체군의 완전히 제거를 요하지 않으며 그렇게 농축된 세포가 농축 된 조성물 내에 100% 또는 그 근방으로라도 존재할 것을 요구하지 않는다.
[340] 본원에서, 세포 또는 세포 집단이 특정 마커에 대해 "양성(positive)"이라는 설명은 그 세포 상 또는 세포내에 전형적으로는 표면 마커와 같은 특정 마커가 검출가능하게 존재함을 가리킨다. 표면 마커라는 용어는, 예컨대 상기 마커에 특이적으로 결합하는 항체로 염색하여 상기 항체를 검색하는 것에 의한, 유세포분석법에 의해 검출되는 표면 발현의 존재를 가리키는 것으로, 여기서 상기 염색은 이소형-맷칭된 대조군 또는 형광 마이너스 원(FMO: fluorescence minus one) 게이팅 대조군을 이용한 것을 제외하고는 동일 조건에서 동일한 공정 수행시 검출되는 염색 수준보다 실질적으로 더 높은 수준에서, 및/또는 그 마커에 대해 양성인 것으로 알려진 세포의 수준과 실질적으로 동일한 수준에서, 및/또는 그 마커에 대해 음성인 것으로 알려진 세포의 수준보다 실질적으로 더 높은 수준에서 유세포분석법에 의해 검출가능하다.
[341] 본원에서, 세포 또는 세포 집단이 특정 마커에 대해 "음성(negative)"라는 설명은 그 세포 상 또는 세포내에 전형적으로는 표면 마커와 같은 특정 마커의 실질적으로 검출가능한 존재가 부재함을 가리킨다. 표면 마커라는 용어는, 예컨대 상기 마커에 특이적으로 결합하는 항체로 염색하여 상기 항체를 검색하는 것에 의한, 유세포분석법에 의해 검출되는 표면 발현의 부재를 가리키는 것으로, 여기서 상기 염색은 이소형-맷칭된 대조군 또는 형광 마이너스 원 (FMO) 게이팅 대조군을 이용한 것을 제외하고는 동일 조건에서 동일한 공정 수행시 검출되는 염색 수준보다 실질적으로 더 높은 수준에서, 및/또는 그 마커에 대해 양성인 것으로 알려진 세포의 수준과 실질적으로 더 낮은 수준에서, 및/또는 그 마커에 대해 음성인 것으로 알려진 세포의 수준과 비교시 실질적으로 유사한 수준에서는 유세포분석법에 의해서 검출되지 아니한다.
[342] 본 발명에 사용된 용어 "벡터"는 그것이 연결된 다른 핵산을 증식시킬 수 있는 핵산 분자를 말한다. 상기 용어는 도입된 숙주 세포의 게놈에 혼입된 벡터뿐만 아니라 자기 복제 핵산 구조로서의 벡터를 포함한다. 특정 벡터는 작동 가능하게 연결된 핵산의 발현을 지시할 수 있다. 이러한 벡터는 본원에서 "발현 벡터"로 불린다.
[343] 달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술용어, 해설 및 기타 기술 과학 용어는 본원발명이 속한 기술분야에서 통상의 기술자가 공통적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는 것으로 의도된다. 일부 경우, 명확성과 참조의 간편성을 위해 공통적으로 이해되는 의미를 갖는 용어들을 본문에 정의하였는데, 본 명세서에 이러한 정의가 포함되었다 해서 기술분야에서 일반적으로 이해되는 것과의 실질적인 차이가 있는 것으로 상정될 필요는 없다.
[344] 특허문헌, 과학논문 및 데이터베이스를 비롯하여 본 출원에서 참조된 모든 간행물은 그 각각의 간행물이 개별적으로 참조된 것과 같이, 동일한 정도로 모든 목적상, 그 내용 전체가 본 출원에 참조 통합된다. 만일 본 발명에서 제시된 정의가 본 발명에 참조 병합된 특허, 출원, 공개 출원 및 기타 간행물에 제시된 것과 반대되거나 불일치할 경우, 본 발명에서 제시된 정의가, 참조를 위해 언급된 문헌 상의 정의보다 우선한다.
[345] 본 명세서에서 사용된 섹션의 제목은 오직 조직적 목적을 위한 것일 뿐 설명된 내용을 한정하는 것으로 이해되어서는 아니된다.
VIII. 실시예
[346] 다음의 실시예들은 어디까지나 설명 목적을 위해 포함된 것으로 본 발명의 범위를 한정하려는 의도로 포함된 것이 아니다.
실시예 1
CD19에 특이적인 키메라 항원-수용체 (CAR)을 이용한, 재발된 또는 불응성 (R/R) CD19 + 만성 림프구성 백혈병 (CLL)을 갖는 대상자들의 치료
[347] CD19에 특이적인 키메라 항원 - 수용체 (CAR)를 발현하는 자가 T 세포를 재발성 또는 불응성 (R/R) CD19+ 만성림프성 백혈병(CLL)을 가진 13 명의 성인 환자에게 투여하였다. 대상자는 40 세에서 73 세 사이의 평균 연령대로 평균 61 세였다. 어떤 대상자도 림프구 감소증, 순환 종양, 이전 이식 또는 시험 확장을 근거로 제외하지 않았다. 대상자 그룹은 고위험 세포유전학 (10/13 (77 %) del17p, 8/13 (62 %) 복합 핵형)을 보였고; 12/13 (92 %)에서 골수외 질환을 나타냈다. 모든 대상자는 이전에 CLL에 대한 하나 이상의 다른 치료법 (중간값 5 및 이전 치료 라인 범위 3 내지 9)을 사용하여 이전에 치료를 받았으며, 여기에는 각 경우 이브루티닙이 포함된다 (7명 (54 %)이 불응성이고 2명(15 %)은 불내성). 치료 직전, 모든 대상자의 골수내 비정상적인 B 세포의 중앙값은 66 % (0.4 % ~ 90 % 범위)였다.
[348] CAR은 CD29에 특이적인 scFv (VL- 링커 -VH- 배향으로)와 함께 FMC63, IgG 힌지 영역, 막관통 영역 및 인간 41BB 및 CD3 제타로부터 유도된 세포내 시그널링 영역으로부터 유도된 가변 영역들을 포함하였다. 구조물은 CAR 발현의 대리 마커 역할을 하는 절단된 EGFR (EGFRt)을 추가로 인코딩하였다; EGFRt-코딩 영역을 T2A 스킵 시퀀스에 의해 CAR 서열로부터 분리하였다. 세포 투여 전에 환자들은 백혈구 제거술을 받았다; CD4+ 및 CD8+ 집단을 면역친화성에 기초한 농축 방법으로 선택하고, CAR 구조물을 갖는 바이러스 벡터로 형질도입하여, 15일 이상 배양 증폭시켰다. CAR+ T 세포의 제조를 위해 CD8+ 중심 기억 T 세포 집단을 조작하였으며, 단 중증 림프구 감소증으로 인해 결과적으로 CD8+ 중심 기억 T 세포 수준이 낮아진 환자에서는 벌크 CD8+ T 세포를 조작하였다. CD4+ T 세포로부터 제조된 CAR+ T 세포가 투여된 환자와 벌크 CD8+ T 세포 또는 CD8+ 중심 기억 T 세포로부터 제조된 CAR+ T 세포가 투여된 환자들 사이에는 임상 결과의 차이가 관찰되지 않았다.
[349] CAR+ T 세포 주입 전 최소 48 시간 (및 최대 96 시간)에 시작하여, 대상자는 (a) 에토포시드 존재 또는 부재 하에 사이클로스포스파미드 (Cy, 60 mg/kg) (2/13 대상자), 또는 (b) 플루다라빈 (flu, 3-5일 동안 매일 25 mg/m2)과 조합적으로 사이클로포스파미드(Cy, 60 mg/kg) (cy/flu, 11/13 대상자)를 이용하여 림프구고갈 요법을 받았다.
[350] 투여를 위한 세포는 일반적으로 약 1 : 1의 CAR+ CD4+ T 세포 대 CAR+ CD8+ T 세포 비율로 제형화 되었다. 모든 대상자에 대해 치료용 조성물이 성공적으로 생산되었다. 1/13 대상자의 경우 표적 투여량 (2x106/kg CAR+) 보다 적은 양의 세포가 생성되었다.
[351] 3 가지 (대상자의 킬로그램 (kg) 체중 당 2x105 (N=4) 2x106 (N=8) 또는 2x107 (N=1) CAR+ T 세포) 상이한 투여 수준 중 하나에서 CD4+ CAR-T 세포에 대한 CD8+ CAR+ T 세포의 비율이 대략 1 : 1 인 조성물을 대상자에게 주입하였다. 림프구고갈 요법 및 T 세포 주입은 외래 환자를 대상으로 시행되었다. 2x107 CAR+ T 세포/kg을 투여받은 1 명의 CLL 환자가 4 등급 CRS와 3 등급 신경 독성을 발병 한 후, 이후의 CLL 환자에게 2x106 CAR+ T 세포/kg의 최대 용량으로 선택하였다.
[352] 환자는 CAR+ T 세포 조성물 투여 전 및 투여로부터 4 주 후에 진단 품질의 CT 스캔으로 전신 화상 진단을 받았다. 응답은 만성 림프성 백혈병 에 대한 국제 워크숍 (IWCLL) 반응 기준 (Hallek, et al., Blood 2008, Jun 15; 111 (12) : 5446-5456; IWCLL (2008))에 의해 결정되었다. 림프절 종양 벌크는 진단 품질 CT 스캔에서 확인된 6 개의 가장 큰 인덱스 림프절의 단면적 합계로 평가하였다. 어떤 경우에는 루가노 기준 (Cheson 외, JCO, 2014년 9월 20일, 32권, 27, 3059-3067)에 의한 전신 PEG 촬영도 수행되었다.
[353] 림프구고갈 전 및 CAR+ T 세포 조성물 투여 4주 후에 골수 질환이 있는 대상자들에서 CAR-T 세포 주입 4주 후에 골수 흡인 및 생검에 의해 골수 반응을 평가하였다. 전통적인 핵형 검사와 확인된 세포유전학적 이상을 가진 환자에서 FISH를 이용하여 형태학적 분석과 고해상도 유세포 분석법을 골수에 대해 수행하였다. CAR-T 세포 주입 4주 후 유세포 분석법으로 골수 질환이 발견되지 않은 환자의 골수에 대해 IGH 딥 시퀀싱(Adaptive Biotechnologies)을 시행하였고, 림프구고갈 전에 악성 클론 서열을 확인하였다. CAR-T 세포 주입 후 2주, 1, 2, 3, 6, 12 개월에 혈액에 대해 고해상도 유세포 분석법을 시행하였다.
[354] 독성은 National Cancer Institute-Common Toxicity Criteria 버전 4.03 (NCI-CTCAE v4.03)을 사용하여 등급을 매겼지만, 사이토카인 방출 증후군은 문헌 [Lee 외, Blood. 2014;124(2):188-95]에 설명된 바에 따라 등급을 매겼다.
[355] 사이클로포스파미드와 플루다라빈 (cy/flu)의 조합 요법을 받은 11 명의 환자 중 객관적 반응률 (ORR)은 91 % (10/11 명)였고, 10/11명 (91 %)의 대상자는 유세포 분석법으로 측정한 골수 내 종양 세포에서 음성인 것으로 관찰되었으며, 11명 중 5명 (45 %)은 루가노 기준에 따라 측정시 완전 관해 (CR)를 달성한 것으로 관찰되었다. Cy/flu로 사전컨디셔닝되지 않은 두 명의 대상자들에서 ORR은 50 % (1/2 대상자)였으며, 2 명의 대상자 중 1 명은 유세포 분석법으로 측정시 골수 내 종양 세포가 음성으로 관찰되었지만, 루가노 기준에 따라 CR을 달성한 것으로 관찰되지는 않았다. 부분 관해 (PR)를 달성한 것으로 평가된 2 명의 대상자에서, 최대 17-18 mm 림프절이 관찰되었다. CR을 달성한 대상자 네 명 (4 명)에서 치료 후 골수의 IGH 딥 시퀀싱을 실시했다. 이들 대상자의 4/4 (100 %)에서 골수에서 인덱스 클론이 발견되지 않았다.
[356] 사이클로포스파미드로 사전 컨디셔닝된 11 명의 대상자 중 무진행 생존 (PFS) 및 전체 생존 (OS)을 도 1에 나타내었다. 도 1A와 1B는 CR을 달성한 대상자 그룹과 그렇지 않은 대상자 그룹에 대한 곡선을 나타낸다. CR을 달성한 대상자에서는 PFS 중앙값에 도달하지 못했다; PFS는 첫 번째 CAR+ T 세포 주입 후 3+ 내지 19+ 개월의 범위였다.
[357] 이 연구에서, Lee 외, Blood. 2014;124(2):188-95에 의해 측정시 13 명의 대상자 중 23 % (23 %)는 심각한 사이토카인 방출 증후군 (CRS)을 나타냈고; 23%는 3 등급 이상의 신경 독성을 나타냈다.
[358] 이러한 결과는 소정의 CD4+/CD8+ 비율로 CD19-특이적 CAR+-T 세포를 투여하면 고위험의 재발성/불응성 CLL 환자의 대다수에서 내구성있는 CR이 나타남을 입증한 것이다.
실시예 2
CD19에 특이적인 키메라 항원 수용체 (CAR)를 이용한 비- 호지킨 림프종 (NHL)에 걸린 대상자들의 치료
[359] CD19에 특이적인 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 자가 T 세포를 CD19+ 비-호지킨 림프종 (NHL)을 가진 41 명의 성인 대상자에게 투여 하였다. 대상자 그룹의 연령은 28세 내지 70세 사이였고 평균 연령은 56세였다. 어떤 대상자도 림프구 감소증, 순환 종양, 이전 이식 또는 시험 확장을 근거로 제외하지 않았다. 대상자 그룹은 공격적인 NHL (미만성 거대 B 세포 림프종 (DLBCL), 1차 종격동 B 세포 림프종 (PMBCL), T 세포/조직구가 풍부한 거대 B 세포 림프종(TCHRBCL), 버킷 림프종 (Burkitt lymphoma), 외투세포 림프종 (MCL, 5/41 대상자) 및 소포성 림프종 (FL; 6/41 대상자)을 비롯한 몇가지 질병 유형을 나타내었다. 모든 대상자는 1 내지 11번의 종전 치료를 받은 바 있고 종전 치료의 중앙값은 4회였으며, 27명의 대상자는 4 이상의 이전 치료로 치료된 바 있었다. 41명의 대상자 중 19명은 이전에 자가조혈모세포 이식 (HSCT)을 받은 바 있다.
[360] CAR은 항-CD19 scFv (VL-링커-VH 방향으로)와 함께 FMC63, IgG 힌지 영역, 인간 CD28으로부터 유래된 막관통 영역 및 인간 41BB와 CD3제타로부터 유래된 세포내 시그널링 도메인을 포함하는 가변 영역들을 포함하였다. 구조물은 CAR 발현의 대리 마커 역할을 하는 절단된 EGFR (EGFRt)을 추가로 인코딩하였다; EGFRt-코딩 영역을 T2A 스킵 시퀀스에 의해 CAR 서열로부터 분리하였다. 세포 투여 전에 환자들은 백혈구 제거술을 받았다; CD4+ 및 CD8+ 집단을 면역친화성에 기초한 농축 방법으로 선택하고, CAR 구조물을 갖는 바이러스 벡터로 형질도입하여, 15일 이상 배양 증폭시켰다. 투여용 세포는 일반적으로 투여 전에 약 1 : 1의 CD4+ T 세포 대 CD8+ T 세포 비율로 제형화 되었다. 모든 대상자에 대해 치료용 조성물이 성공적으로 생산되었다.
[361] CAR+ T 세포 주입 전 최소 48 시간 (및 최대 96 시간)에 시작하여, 39 명의 대상자들에게 (a) 에토포시드 존재 또는 부재 하에 사이클로포스파미드 (Cy, 60 mg/kg), 또는 (b) 플루다라빈 (flu, 3-5 일간 매일 25 mg/m2)과 조합한 사이클로포스파미드 (Cy, 60 mg/kg)(cy/flu, 27/39 대상자들)으로 림프구고갈 화학요법을 실시하였다.
[362] 3 가지 상이한 투여량 수준 (대상자의 킬로그램(kg) 체중 당 2x105 (N=5) 2x106 (N=27) 또는 2x107 (N=9) CAR+ T 세포) 중 하나로, 대상자에게 대략 1:1 비율의 CD8+ CAR+ T 세포 대 CD4+ CAR-T 세포를 갖는 조성물을 주입하였다. 림프 구고갈 요법과 T 세포 주입은 외래 환자 기반으로 실시되었다. 이 연구에서 최대 허용 용량은 투여량 수준 2 (kg 당 2x106 CAR+ T 세포)였다.
[363] 사이클로포스파미드 및 플루다라빈 (cy/flu)으로 사전컨디셔닝된 27 명의 대상자 중, 객관적 반응률 (ORR)은 74 % (20/27 대상자)였다. 27 명 중 12 명 (44 %)은이 완전 관해 (CR)를 달성한 것으로 관찰되었다.
[364] cy/flu로 사전컨디셔닝된 27 명의 대상자 중, 20명에게 개략된 모든 질병 서브타입에 걸쳐 투여 수준 2 (kg 당 2x106 CAR+ T 세포)를 투여했다. 이들 중 ORR은 80 % (16/20)였고 20 명 중 10 명 (50 %)이 CR을 달성한 것으로 관찰되었다. 공격성 림프종을 가진 30 명의 대상자 중 16 명은 cy/flu 요법으로 사전컨디셔닝되었고 투여량 수준 2를 투여받았다. 이들 16 명의 대상자에서 ORR은 81 % (13/16 명)였고 8 명 (50 %)은 CR을 달성하였다. FL을 가진 6 명의 대상자 중 2 명은 cy/flu 요법으로 사전컨디셔닝되었고 투여량 수준 2를 투여받았다. 이들 2명의 대상자 중 ORR은 50 % (1/2)이었고 1명 (50 %)은 CR을 달성했다. MCL 환자 5 명 중 2 명은 cy/flu 요법으로 사전컨디셔닝되었고 투여량 수준 2를 투여받았다. 이들 중 ORR은 100 % (2/2)였고 1 명 (50 %)은 CR을 달성하였다.
[365] 사이클로포스파미드 및 플루다라빈 (cy/flu)으로 사전컨디셔닝되고 kg 당 2x106 CAR+ T 세포를 투여받은 20명의 대상자들 중 무진행 생존 (PFS) 및 전체 생존 (OS)을 도 2A 및 2B에 나타내었고, CR을 달성한 대상자들 대 그렇지 못한 대상자들에 대한 별도 곡선도 함께 나타내었다. CR을 달성한 대상자들에서는 중앙 PFS에 도달하지 못하였다; PFS는 최초 CAR+ T 세포 주입으로부터 3 내지 11+ 개월의 범위였다. CR을 달성하지 못한 대상자들에서 중앙 PFS는 4.1 개월이었다.
[366] 이 연구에서, Lee 외, Blood. 2014;124(2):188-95에 따라 평가시, 대상자들의 모든 투여량 수준에서 대상자의 17 %가 심각한 사이토카인 방출 증후군 (CRS)을 나타냈고; 5 % (2/41)는 5 등급 CRS를, 그리고 20 %는 3 등급 이상의 신경 독성을 나타냈다. cy/flu로 사전컨디셔닝 후 (20 대상자들) kg 당 2x106 CAR+ T 세포가 투여된 이들 대상자들 중 오직 10%만이 중증 사이토카인 방출 증후군 (CRS)을 나타냈고 단지 10%만이 등급 3 이상의 신경독성을 나타내었다.
실시예 3
CD19에 특이적인 키메라 항원-수용체 (CAR)를 이용한 재발성 또는 불응성 (R/R) CD19 + CLL에 걸린 대상자들의 치료: 부가적인 환자들
[367] 실시예 1에서 기술된 연구의 연장선상에서, 재발성 또는 불응성 (R/R) CD19+ 만성 림프성 백혈병 (CLL)을 갖는 추가 대상자를 평가하였다. 18 명의 성인 인간 대상자들에게 CD19에 특이적인 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 자가 T 세포를 투여하고 하기 기술 된 바와 같이 평가하였다.
[368] 대상자들의 연령은 40-73 세 범위였고 중앙 연령은 60세였다. 12 명의 대상자는 복합 핵형을 가졌고 11 명은 17p의 결실을 보였다. 모든 대상자는 골수 외 질병이 있었고 2명은 중추신경계 (CNS) 질환이 있었다. 모든 대상자는 이전에 CLL에 대한 하나 이상의 다른 치료법 (중앙값 5) 및 3 내지 9의 이전 치료 라인 범위로 치료받은 바 있으며, 각 경우, 이브루티닙 치료를 포함하였다 (11명(61 %)은 불응성이었고 3명 (17 %)은 불내성이었음). 3명의 (17 %) 대상자는 동종 이형 줄기 세포 이식에 실패했으며 4명 (22 %)의 대상자는 베네노클락스에 대해 불응성이었다. 또한 모든 환자는 플루다라빈과 리툭시맙을 함유하는 고갈 화학 요법을 받은 후 불응성이거나 재발하였다. 치료 직전, 모든 대상자 중 골수에서 비정상적인 B 세포의 평균 백분율은 77 % (0.4 % 내지 90 % 범위)였다.
[369] 실시예 1에 설명된 바와 같이 모든 대상자들에 대해 자가 CAR-T 세포를 제조하여 투여하으나, 부가적인 대상자들을 치료하였다. 16/18 대상자들은 대략 CAR+ CD4+ T 세포 대 CAR+ CD8+ T 세포 비율이 대략 1:1인 세포 조성물을 투여받았다. 대상자들에게 다음과 같은 상이한 투여량 수준으로 세포 조성물을 주입하였다: (대상자 체중 킬로그램(kg) 당 2 x 105 (N=4); 2 x 106 (N=13); 또는 2 x 107 (N=1) CAR+ T 세포).
[370] CAR-T 세포 주입 전에, 치료된 대상자들에게 (a) 사이클로포스파미드 30-60 mg/kg x 1 및 이와 조합된 플루다라빈 25 mg/m2/일 x 3 일 (cy/flu, 15/18 대상자들), (b) 플루다라빈 25 mg/m2/day x 3 일 (flu, 2/18 대상자들) 또는 (c) 사이클로포스파미드 60 mg/kg (cy, 1/18 대상자들)의 림프구고갈 화학요법을 실시하였다. 지속적인 질환을 앓는 4명의 대상자들에게 첫 번째 주입보다 10배 더 높은 투여량으로 림프구고갈 화학요법 및 CAR+ T 세포를 두 번째 사이클로 투여하였다
[371] 실시예 1에 설명된 바와 같이 마지막 CAR+ T 세포 주입으로부터 4주 후에 대상자들을 평가하였다.
[372] 17명의 대상자들은 반응 및 독성 평가를 완료하였다. 평가된 17명의 대상자들 중, 객관적 반응률 (ORR)은 76%였다 (13/17 대상자들; 8명은 부분 관해(PR) 및 5명은 완전 관해 (CR)를 동반함). 림프절 크기 기준(IWCLL 2008)에 근거하여 PR이 있는 2명의 대상자들은 치료 후 음성 PET 스캔을 나타내었다. 13명의 이브루티닙-불응성 또는 불내성 대상자들 중, ORR은 77%였다 (10/13 대상자들, 7명은 PR 및 3명은 CR). 4명의 베네토클락스-불응성 대상자들 중, ORR은 50%였다 (2/4 대상자들, 2명이 PR). cy/flu 조합에 의한 사전컨디셔닝을 받지 않은 3명의 대상자들 중, ORR은 33%였다 (1/3 대상자들).
[373] 제28일에, cy/flu 림프구고갈요법 및 2 x 105 또는 2 x 106 CAR+ T 세포/kg가 투여된 13명의 대상자들 중, 11명(85%)은 유세포 분석법에 의할 때 골수 질환의 완전한 제거를 나타냈고; 림프절 질환이 있는 10/13 (77%)은 PR 또는 CR을 나타냈으며; 1/13 (8%)은 혼합 반응을 나타냈고; 및 2/13 (15%)은 진행성 질환(PD)을 나타냈다.
[374] CR을 달성한 4명의 대상자들에서 골수의 IGH 딥 시퀀싱을 수행하였다. 이들 대상자들 4/4 (100%)에서 악성 서열은 검출되지 않았다.
[ 375] cy/flu 림프구고갈 요법 및 2 x 105 또는 2 x 106 CAR+ T 세포/kg이 투여된 13명의 대상자들 중 무진행 생존 (PFS)을 도 3에 도시하였고, CR을 달성한 대상자와 그렇지 못한 대상자 그룹들에 대해 별도 곡선을 나타냈다. 전체 생존 (OS)은 이 그룹에서 100%였다. CR을 달성한 대상자들 중 아무도 8.4 개월의 중앙 추적 처리 기간 후 재발하거나 사망하지 않았다. 이 결과는 또한 CR을 달성한 대상자들이 혈액에서 CD8+의 더 높은 피크 백분율을 나타내지만 CD4+ CAR+ T 세포는 그러하지 않음을 보여주었다. 일부 비-반응자들에서 굳건한 CAR-T 세포 증폭이 관찰되었다.
[376] 상기 결과는, CD6+/CD8+ 비율로서 정의된 CD19-특이적 CAR+-T 세포를 투여한 결과, 이브루티닙 치료가 실패한 바 있는 환자와 같은 고위험의 재발성/불응성 CLL을 가진 대상자의 대다수에서 높은 반응률 및 내구성 있는 CR을 결과시켰음을 추가로 입증한다.
실시예 4
CD19에 특이적인 키메라 항원-수용체 (CAR)를 이용한, 재발성 또는 불응성 (R/R) CD19 + CLL을 갖는 대상자들의 치료: 추가 환자들
A. 대상자들 및 치료
[377] 실시예 1 및 3에 설명된 연구의 연장선상에서, 재발성 또는 불응성 (R/R) CD19+ 만성 림프구성 백혈병 (CLL)에 걸린 부가적인 대상자들을 평가하였다. 종합적으로, 이전에 치료를 받은 바 있는 24명의 성인 인간 대상자들에게 CD19에 특이적인 키메라 항원-수용체 (CAR)를 발현하는 자가 T 세포, 이어서 면역고갈요법제를 투여하고 실시예 1과 3 및 하기 설명에 따라 평가하였다.
[378] 표 4에 설명된 바와 같이, 대상자들의 연령은 40 내지 73세였고 중앙 연령은 61세였다. 16명의 대상자들은 복합 핵형을 가졌고 14명의 대상자들은 17p 결실을 가졌다. 8명의 대상자들은 고위험 조직학을 가졌다. 23명의 대상자들은 골수외 질환을 가졌다. 모든 대상자들은 각 경우 이브루티닙에 의한 치료 (19명 (79%)은 불응성이었고; 3명 (13%)은 불내성이었음)를 포함하여, 치료 전에 중앙값 5 (3-9 범위)의 하나 이상의 다른 CLL 치료 라인으로 치료된 바 있다. 18명의 이브루티닙-불응성 대상자들 중 9명은 BTK 또는 PLCG2 돌연변이를 가졌다(50%; BTK, n=7; PLCG2, n=2). 이브루티닙은 림프구고갈요법 전에 모든 대상자들에서 중단되었다. 4명(17%)의 대상자들은 이전의 동종 줄기 세포 이식에 실패하였고 6명 (25%)의 대상자들은 베네토클락스에 불응성이었다. 치료 직전에 모든 대상자들 중 골수 내 이상 B 세포의 중앙 백분율은 61.6%% (0.0%-96% 범위)였다. 치료 직전에 모든 대상자들 중 골수 내 이상 B 세포 중앙 카운트는 1.1 x 103 /νL (0.0-76.68 범위 x 103 /νL)였다.
Figure pct00005
[379] 실시예 1 및 3에 설명된 바와 같이 모든 대상자들에 대해 자가 CAR-T 세포를 제조하여 투여하되, 부가적인 대상자들도 치료하였다. 24명의 대상자들 중 22명에게 CAR+ CD4+ T 세포 대 CAR+ CD8+ T 세포를 대략 1:1 비율로 포함하는 세포 조성물을 투여하고 2명의 환자에게는 표적 CD8+ CAR-T 세포 투여량 미만을 투여하였다 (58.5% 및 56.3%). 대상자들에게 다음과 같이 여러 투여량 수준으로 세포 조성물을 투여하였다: 대상자 체중 킬로그램(kg) 당 2 x 105 (N=4); 2 x 106 (N=19); 또는 2 x 107 (N=1) CAR+ T 세포. CAR-T 세포 주입에 앞서, 21명의 대상자들에게 표 5에 개략된 바와 같은 림프구고갈 화학요법을 실시하였다. 처리된 대상자들은 (a) 사이클로포스파미드 30-60 mg/kg (1-2 g/m2) x 1과 조합된 플루다라빈 25 mg/m2/day x 3 일 (cy/flu, 18/24 대상자들), (b) 사이클로포스파미드 60 mg/kg (1-2 g/m2) x 1과 조합된 플루다라빈 25 mg/m2/day x 5 일 (cy/flu, 1/24 대상자들), (c) 플루다라빈 25 mg/m2/일 x 3 일 (flu, 2/24 대상자들), (d) 사이클로포스파미드 60 mg/kg (cy, 1/24 대상자들) 또는 (e) 500 mg/m2 x 3 및 플루다라빈 25 mg/m2/일 x 3 일 (cy/flu, 2/24 대상자들) 중 어느 하나의 림프구고갈 화학요법을 받았다. 연구 대상 15명의 총 환자들은 Cy/Flu 림프구고갈요법 및 2 x 106 CAR+ T 세포를 받았다.
Figure pct00006
[380] 지속적인 질환이 있는 6명의 대상자들에게 1차 주입과 동량 (N=1) 또는 10배 더 높은 투여량 (N=5)으로 림프구고갈 화학요법 및 CAR+ T 세포 주입의 두 번째 사이클을 실시하였다.
[381] 백혈구 제거술과 림프구고갈 화학 요법 사이의 3주 동안, 6명의 환자는 진행성 질환을 조절하기 위해 고용량 코르티코스테로이드를 필요로 하였고, 다른 2명은 종양과 관련된 고칼슘혈증 치료를 필요로 하였다.
B. 치료에 대한 반응
[382] 대상자들의 반응을 실시예 1에 설명된 바와 같이 마지막 CAR+ T 세포 주입으로부터 4주일 후 평가하였다. Cy/Flu 림프구고갈요법을 받은 21명의 대상자들에 대한 평가 결과 표 8에 나타난 바와 같이 주입으로부터 4주일 후 고위험 CLL 환자에서 높은 반응율이 입증되었다. 대상자들에서의 반응은: (a) 골수 분석; (b) PET-CT; 및 (c) CLL에 대한 국제 워크샵 그룹 (IWCLL) 기준에 의해 측정하였다.
Figure pct00007
1. CAR-T 세포 증폭 및 지속성
[383] CAR-T 세포 주입 후, 증폭(expansion)과 지속성 평가를 위해 모든 환자들에서 유세포 분석법에 의해 혈액 내 CAR-T 세포를 검출하였다. 도 4A-4C에 도시된 바와 같이, 사이클로포스파미드/플루다라빈 (Cy/Flu) 림프구고갈요법을 받고 2 x 106 CAR-T 세포가 주입된 대상자들 중 보다 큰 CAR-T 세포의 증폭은 골수에 존재하는 비정상적인 B 세포의 비율 (r=0.67, p = 0.006), 종양 단면적 (r=0.57, p=0.025) 및 혈액 내 절대적인 비정상 B 세포 수와 각각 양성적인 상관관계를 나타내었다. 또한, 전처리 PEG 스캔에서 FDG-친화(avid) 질환을 가진 대상자에서 CAR-T 세포 증폭과 SUVmax 사이에는 역 상관관계가 있었다 (도 4D). 평가된 모든 환자 (n=11)에서 QPCR에 의해 CAR-T 세포가 검출되었고 후속적인 동종 이식성 HCT를 겪지 않았다.
[384] Cy/Flu 림프구고갈요법을 받고 2 x 106 CAR-T 세포가 주입된 대상자들에서, CAR-T 세포 증폭은 도 4E에 도시된 바와 같이 면역 체크포인트 바이오마커 CD200 (r=-0.25, p=0.4)와 역 상관관계를 나타냈다. CAR-T 세포 증폭은 또한 체크포인트 바이오마커 PDL1 및 PDL2와도 역 상관관계를 나타냈다.
2. 림프절 반응율 (Lymph Node Response Rate)
[385] IWCLL 기준에 의해 CAR-T 세포 주입으로부터 4주 후 23명의 환자들의 림프절에 대한 반응을 평가하였다. 23명의 재스테이지된(restaged) 환자들 중, IWCLL 림프절 기준에 의한 CAR+ T 세포 주입으로부터 4주일 후 전체 반응률 (ORR)은 70% (16/23)였다. Cy/Flu 림프구고갈요법을 받지 않은 3명의 환자들 중 1명은 골수 질환이 소거되었고, 1명은 부분 반응(PR)을 나타내었으며, 모두 진행성 질환을 가지고 있었다.
[386] IWCLL 분석을 마치고 Cy/Flu 림프구고갈요법 및 ≤2x106 CAR-T 세포/kg으로 단일 CD19 CAR-T 세포 주입을 받은 19명의 대상자들 중, 74%의 환자 (14/19)에서 IWCLL 기준에 의한 림프절 반응이 관찰되었고 [95% 신뢰구간 (CI): 49-91%]: 21% (4/19) CR; 53% (10/19)에서 PR이 관찰되었다. 이브루티닙-불응성이었던 16명의 환자들만을 고려한 경우 유사한 반응율이 관찰되었다: 69% (11/16) ORR [95% CI: 41-89%]; 25% (4/26) CR).
[387] 가능한 경우, 림프절 반응은 CAR-T 세포 주입 4 주 후 PET 촬영에 의해 평가되었다. PET-CT 재스테이징 후 이브루티닙-불응성 환자의 CR 비율은 64 % (7/11) [95 % CI : 31-89 %] 였고, 도빌 점수는 1-2 점이었다. PET-CT로 IWCLL에 의한 경우보다 PET-CT에 의한 경우 보다 많은 환자가 CR로서 스테이징되었다 (64 % 대 25 %). IWCLL에 의해 PR을 달성하고 PET 촬영을 받은 5명의 환자들 중 4명은 CAR-T 세포 주입 후 FDG-산성 질환이 없었다. CAR-T 세포 주입 4 주 후 PET-CT에 따라 안정된 질병을 가진 추가 환자 1명은, 8주 후의 추적 PET-CT에서 CR을 달성하였다.
3. 골수로부터의 악성 IGH 서열의 평가
[388] 24명의 환자 중 22 명은 치료 전 골수 질환을 앓았고 21 명의 환자는 CAR+ T 세포 투여 4 주 후에 골수 검사를 받았다. 21 명의 환자 중 17 명 (81 %)은 고해상도 유세포 분석에 의할 때 골수 질환이 발견되지 않았다. Cy/Flu 림프구고갈요법을 투여 받고, 치료 전 ≤2x106 CAR-T 세포/kg를 투여받았으며 치료 전 골수가 관된 대상자들 가운데, 17명 중 15명(15/17)은 고해상도 유세포 분석에 의할 때 골수-질환이 제거되었다 (88 % [95 % CI: 64-99 %]). 이브루티닙-불응성 환자들의 서브세트에서 유동-음성 골수 반응율은 유사하였다 (12/14; 86 % [95 % CI: 57-98 %]). FISH 및 통상적인 핵형 검사는 유세포 분석에 의해 검출 가능한 질환이 없는 환자의 잔류 CLL을 확인하지 못했다; 그러나 2명의 환자는 골수 계통에 대한 이전의 화학요법의 효과로 인한 것으로 여겨지는 이상이 있었고 하나는 지속적인 구조적인 전위(translocation)을 나타냈다.
[389] by 유세포 분석법에 의할 때 골수가 제거된 12명의 환자들은 또한, Cy/Flu 및 ≤2x106 CAR-T 세포/kg 주입 후, 치료 전 CLL 세포에서 동정된 클론성 악성 IGH 서열을 가졌다. 클론성 악성 IGH 서열을 갖는 것으로 동정된 대상자 12명 중 7명 (7/12; 58%)은, CAR-T 세포 주입 4주 후 IGH 시퀀싱에 의해 골수 질환의 소거를 나타내었다.
[390] 동량 (n=1) 또는 10배 더 높은 양 (n=5)으로 림프구고갈 화학요법 및 CAR-T 세포 주입의 2번째 사이클이 수행된 6명의 환자들 중, 2명 (2/6; 33%)은 CR (PET-CT)을 달성하였고 유세포 분석법 및 IGH 시퀀싱에 의해 골수 질환이 제거되었다. 6명의 환자들 중 4명(4/6; 67%)은 CRS가 있었고 (2 등급 =3) 1명은 두 번째 CAR-T 세포 주입 후 가역적인 신경학적 독성(등급 3)을 나타냈다.
[391] 제4주째에 초기 재스테이징시 IWCLL에 의해 PR을 달성한 환자들의 서브세트는 PET-CT 기준(4/5)에 의할 때 FDG-친화 질환이 없었고 및/또는 골수에서 검출 가능한 악성 IGH 서열을 갖지 않았다 (4/6). 이러한 관찰 결과는 IWCLL 기준이 CAR-T 세포로 달성한 반응을 과소평가한다는 발견과도 일치하는데, 이것은 IWCLL 반응으로 측정된 후술하는 생존 데이터, 즉 PR 또는 CR을 달성한 환자에서 동등한 PFS를 나타내고, 한 명의 환자에서 초기 반응 후 지속적인 종양 회귀를 나타낸 생존 데이터에 의해서도 추가로 뒷받침된다.
4. 무진행 생존 및 전체 생존
[392] 모든 CLl 환자에 대한 무진행 생존(PFS) 및 전체 생존(OS)을 도 5에 나타내었다. 림프절 반응 (IWCLL에 의한 CR/PR)은 반응 실패 (SD/PD)와 비교하여 더 긴 PFS 및 OS와 관련이 있다. Cy/Flu 림프구고갈 및 2 x 105 또는 2 x 106 CAR-T 세포/kg을 투여받은 대상자들 중 IWCLL 림프절(nodal) 반응 기준에 의해 측정된 무 진행 생존 (PFS) 및 전체 생존 (OS)을 도 6A에 도시하였다. 도 6B 역시, 재스테이징에 앞서 사망한 환자 1명을 배제한 것을 제외하고, 도 6A에서처럼, 대상자들의 동일한 그룹에서 IWCLL에 의해 측정된 PFS 및 OS를 나타낸다. 도 6A 및 6B 모두, CR을 달성한 대상자, PR을 달성한 대상자 및 비-반응자 그룹에 대한 별도 곡선을 나타내며, IWCLL 기준에 의해 PR을 달성한 환자들이 CR을 달성한 대상자들에 비해 열등한 PFS 및 OS를 나타내지 않음을 가리켰다. OS는 CR 또는 PR을 달성한 대상자들에서 100%였다. CR 또는 PR을 달성한 대상자들 중 어느 누구도 제1차 CAR-T 세포 주입으로부터 24개월 이내에 사망하지 않았다.
[393] 유세포 분석법에 의해 골수가 소거된 환자들의 생존을 CAR-T 세포 주입 4주 후에 골수에서 악성 IGS 서열의 존재(검출됨) 또는 부재(없음)에 대해 분석하였다. 14명의 대상자들 중, 7명의 대상자들은 IGH 딥 시퀀싱에 의해 검출된 악성 서열을 가졌다. PFS 및 OS를 도 7에 나타내었다. PFS 및 OS는 악성 서열이 없는 7 명과 비교하여, 악성 서열이 있는 7 명에서 감소하였다. 따라서, IWCLL 반응과 무관하게, 악성 IGH 서열에 음성인 환자는 지속적인 악성 IGH 서열을 가진 환자에 비해 더 나은 PFS를 보였다. 중앙 OS는 어느 그룹에서도 도달되지 않았다. 결과에 대한 IGH 시퀀싱에 의한 골수 소거의 긍정적인 효과는 IWCLL 기준에 의해 반응한 (CR/PR) PFS 환자로 분석이 국한된 경우에도 관찰되었다 (p=0.063, IGHseq-양성에 대한 mPFS = 8.5 개월, IGHseq-음성에 대한 mPFS는 도달되지 않음).
[394] 이러한 결과는 소정의 CD4+/CD8+ 비율로 CD19-특이적 CAR+-T 세포를 투여하면, 이브루티닙 및/또는 베네토클락스 치료가 실패하였단 환자들과 같이, 고위험 재발성/불응성 CLL을 갖는 대상자들의 대다수에서 높은 반응율 및 내구성 는 CR이 결과된다는 것을 추가로 입증한다. 또한, CAR T-세포 요법 후 골수의 IGH 딥시퀀싱에 의한 악성 서열의 검출은 내구성 있는 반응의 조기 징후를 제공할 수 있음을 가리킨다.
C. 독성
[395] 각각 표 6 및 표 7에 나타낸 바와 같이 사이토카인 방출 증후군 (CRS) 및 신경독성의 증상에 대해 24명의 대상자들을 평가하였다.
Figure pct00008
Figure pct00009
[396] 인텐시브 케어 유닛(ICU)에서 관리를 필요로 하거나 ICU 치료에 대한 평가 중인 환자에게 토실리주맙(4-8 mg/kg I.V.) 및 덱사메타손 (10 mg bid I.V.)을 투여하였다. 개재(intervention)는 정맥내 체액 및/또는 저용량 혈압상승제와 2-3 등급 신경독성에 반응하지 않는 2-3 등급 사이토카인 방출 증후군 (Lee et al, Blood, 2014) 환자로부터 개시되었다. 치료받은 환자 중 토실리주맙과 덱사메타손에 불응성이었던 1명의 환자가 4일째부터 CRS 3-4 등급으로 진행되어 제9일에 실툭시맙과 만니톨에 불응성인 뇌부종으로 발전하여 CAR-T 세포 주입 후 11일째 사망했다. 다른 환자는 CRS 2 등급 이상으로 발전하지 않았고 오직 4명만 3 등급 신경독성을 나타냈다. 6/24 명의 환자만이 개재 요법을 요하는데 충분한 중증 임상 증상을 나타내었고 치명적인 뇌부종 환자를 제외하고는 이 기준에 따라 치료된 모든 환자에서 CRS와 신경독성이 해소되었다.
실시예 5
고위험 CLL 환자에서 피크 CAR T 세포 증폭에 기초한 반응 및/또는 독성과 상관관계가 있는 인자들
[397] 상기 실시예 1, 3 및 4에서 기술된 바와 같이, 재발성 또는 불응성 (R/R) CD19+ 만성 림프구성 백혈병 (CLL)에 대한 CD19 CAR-T 세포 요법에 대한 반응 및 증폭에 대한 평가 후, 재발성 또는 불응성 (R/R) CD19+ 만성 림프구성 백혈병 (CLL)이 있는 대상자들을 증폭 및 반응에 대해 평가하였다.
[398] 주입 후 상승된 피크 CD4+ 또는 CD8+ CAR-T 세포 수는 CAR-T 세포 주입 4주일 후 골수에서 악성 IGH 서열의 존재(검출됨) 또는 부재(없음)에 의해 평가되는 바와 같이 고위험 CLL 대상자들에서 더 나은 골수 반응과 연관이 있었다 (도 8). 피크 CD4+/EGFRt+ 및 CD8+/EGFRt+ CAR-T 세포 수는, 골수에서 CLL을 제거하지 못한 환자에 비해 유세포 분석법에 의해 궁극적으로 골수가 소거된 환자에서 더 높았고 (도 9A), 검출가능한 악성 IHG 서열을 갖고 유세포 분석법에 의해 CR을 가진 대상자들에 비해 골수에서 악성 IGH 서열이 검출되지 않은, 유세포 분석법에 의해 CR을 달성한 대상자들에서도 더 높았다 (FIG 9B).
[399] 혈액 중 CD4+/EGFRt+ 및 CD8+/EGFRt+ CAR-T 세포 수와 연관된 임상적 결과의 로지스틱 회귀법에 의해 추정된 확률을 묘사하는 확률 곡선을 생성하여 도10A 및 10B에 도시하였다. 3-5 등급의 신경독성이 발병할 평가 확률 및 반응의 추정 확률 곡선을 혈액 중 CD4+/EGFRt+ 또는 CD8+/EGFRt+ CAR-T 세포 수에 기초하여 작제하였다 (도 10A). 2-5 등급의 신경독성 또는 CRS가 발명할 추정 확률 및 반응의 추정 확률 곡선을 혈액 중 CD4+/EGFRt+ 또는 CD8+/EGFRt+ CAR-T 세포 수에 기초하여 작제하였다 (도 10B). 일반적으로, CAR-T 세포 수가 증가할수록, 골수 반응의 확률이 증가한 다음 평탄해지고 반면 독성 발달 확률, 3-5 등급 신경독성 (도 10A) 또는 2-5 등급 신경독성 또는 CRS (도 10B)은 증가하였다. 이들 곡선은 골수 소거가 고위험 신경독성 또는 CRS가 없는 대부분의 환자에서 달성될 수도 있다는, 피크 CD4+/EGFRt+ 및 CD8+/EGFRt+ CAR-T 세포 수의 치료 범위(therapeutic window)를 입증한다.
[400] IWCLL 촬영 기준에 의한 CT 스캔에서의 6 개의 최대 림프절의 단면적 변화로 결정되는 강력한 항-종양 활성이, 리히터 변형이 있는 환자를 포함하여 큰 림프절 종양 부담을 갖는 환자들의 서브세트에서 관찰되었지만 (도 11), 보다 높은 림프절 종양 벌크를 갖는 환자들은 이전에 받은 치료가 더 적은 환자들(CR/PR 대 NR, IWCLL에 의함; 5.5 대 4; p=0.04)에서와 같이, CAR-T 세포 에 대해 반응할 가능성이 전반적으로 더 낮다(CR 대 PR 대 NR, IWCLL에 의함, p=0.098). 이것은 부피가 크고 공격적인 결절성 질환이 CAR-T 세포 치료에 덜 부합할 수 있음을 시사한다. 혈액 내 피크 CAR-T 세포 수와 림프절 내반응 확률 간의 관계는 골수에 대해 언급된 것보다 덜 강했지만 혈액 내 더 높은 피크 CD3+/EGFRt+ CAR-T 세포 수의 증가는 고위험 CLL 환자에서의 질병 진행 및 사망 위험 감소와 관련이 있었다 (HR 0.56, 95% 신뢰구간 0.34-0.93, p=0.025).
[401] 본 발명은 본 발명의 다양한 측면을 설명하기 위해 제공된 특정 구체예로 한정되도록 의도된 것이 아니다. 기술된 조성물 및 방법에 대한 다양한 변형은 본원의 설명 및 교시로부터 명백해질 것이다. 이러한 변형은 본원 개시 내용의 진정한 범위와 정신으로부터 벗어남이 없이 실시가능하며 본원 개시 내용의 범위 내에 속하는 것으로 의도된다.
Figure pct00010
Figure pct00011
Figure pct00012
Figure pct00013
SEQUENCE LISTING <110> Fred Hutchinson Cancer Research Center Juno Therapeutics, Inc. Turtle, Cameron Maloney, David Riddell, Stanley Gilbert, Mark <120> METHODS FOR THE TREATMENT OF B CELL MALIGNANCIES USING ADOPTIVE CELL THERAPY <130> 735042006740 <150> 62/346,547 <151> 2016-06-06 <150> 62/417,292 <151> 2016-11-03 <150> 62/429,737 <151> 2016-12-03 <160> 56 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <223> spacer (IgG4hinge) <400> 1 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 2 <211> 36 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <223> spacer (IgG4hinge) <400> 2 gaatctaagt acggaccgcc ctgcccccct tgccct 36 <210> 3 <211> 119 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <223> Hinge-CH3 spacer <400> 3 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Gly Gln Pro Arg 1 5 10 15 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 20 25 30 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 35 40 45 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 50 55 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Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro 20 25 30 Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser 35 40 <210> 12 <211> 42 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <223> 4-1BB (amino acids 214-255 of Q07011.1) <400> 12 Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met 1 5 10 15 Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe 20 25 30 Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu 35 40 <210> 13 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <223> CD3 zeta <400> 13 Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly 1 5 10 15 Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr 20 25 30 Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys 35 40 45 Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys 50 55 60 Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg 65 70 75 80 Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala 85 90 95 Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met 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Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys 50 55 60 Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg 65 70 75 80 Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala 85 90 95 Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 100 105 110 <210> 16 <211> 335 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> tEGFR <400> 16 Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu 1 5 10 15 Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile 20 25 30 Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe 35 40 45 Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr 50 55 60 Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn 65 70 75 80 Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg 85 90 95 Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile 100 105 110 Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val 115 120 125 Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp 130 135 140 Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn 145 150 155 160 Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala Leu 165 170 175 Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val Ser 180 185 190 Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys Asn Leu 195 200 205 Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys Ile Gln 210 215 220 Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys Thr Gly 225 230 235 240 Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp Gly Pro 245 250 255 His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met Gly Glu Asn Asn Thr 260 265 270 Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys His Leu Cys His 275 280 285 Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly Cys Pro 290 295 300 Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala Thr Gly Met Val Gly Ala 305 310 315 320 Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly Ile Gly Leu Phe Met 325 330 335 <210> 17 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> exemplary degenerate sequence of the V region of IGH <400> 17 acacggcctc gtgtattact gt 22 <210> 18 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> exemplary degenerate sequence of the J region of IGH <400> 18 acctgaggag acggtgacc 19 <210> 19 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> T2A <400> 19 Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro 1 5 10 15 Gly Pro <210> 20 <211> 22 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> P2A <400> 20 Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val 1 5 10 15 Glu Glu Asn Pro Gly Pro 20 <210> 21 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2A <400> 21 Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn 1 5 10 15 Pro Gly Pro <210> 22 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> E2A <400> 22 Gln Cys Thr Asn Tyr Ala Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu Ser 1 5 10 15 Asn Pro Gly Pro 20 <210> 23 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> F2A <400> 23 Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val 1 5 10 15 Glu Ser Asn Pro Gly Pro 20 <210> 24 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker <400> 24 Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr 1 5 10 15 Lys Gly <210> 25 <211> 735 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence encoding scFv <400> 25 gacatccaga tgacccagac cacctccagc ctgagcgcca gcctgggcga ccgggtgacc 60 atcagctgcc gggccagcca ggacatcagc aagtacctga actggtatca gcagaagccc 120 gacggcaccg tcaagctgct gatctaccac accagccggc tgcacagcgg cgtgcccagc 180 cggtttagcg gcagcggctc cggcaccgac tacagcctga ccatctccaa cctggaacag 240 gaagatatcg ccacctactt ttgccagcag ggcaacacac tgccctacac ctttggcggc 300 ggaacaaagc tggaaatcac cggcagcacc tccggcagcg gcaagcctgg cagcggcgag 360 ggcagcacca agggcgaggt gaagctgcag gaaagcggcc ctggcctggt ggcccccagc 420 cagagcctga gcgtgacctg caccgtgagc ggcgtgagcc tgcccgacta cggcgtgagc 480 tggatccggc agccccccag gaagggcctg gaatggctgg gcgtgatctg gggcagcgag 540 accacctact acaacagcgc cctgaagagc cggctgacca tcatcaagga caacagcaag 600 agccaggtgt tcctgaagat gaacagcctg cagaccgacg acaccgccat ctactactgc 660 gccaagcact actactacgg cggcagctac gccatggact actggggcca gggcaccagc 720 gtgaccgtga gcagc 735 <210> 26 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hinge <220> <221> VARIANT <222> (1)..(1) <223> X = G, C, or R <220> <221> VARIANT <222> (4)..(4) <223> X = C or T <400> 26 Xaa Pro Pro Xaa Pro 1 5 <210> 27 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <223> Hinge <400> 27 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 15 <210> 28 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <223> Hinge <400> 28 Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 29 <211> 61 <212> PRT <213> Homo Sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <223> Hinge <400> 29 Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr His Thr Cys Pro Arg Cys Pro 1 5 10 15 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Glu 20 25 30 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Sequence <220> <223> FMC63 CDR L2 <400> 36 Ser Arg Leu His Ser Gly Val 1 5 <210> 37 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> FMC63 CDR L3 <400> 37 Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly 1 5 <210> 38 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> FMC63 CDR H1 <400> 38 Asp Tyr Gly Val Ser 1 5 <210> 39 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> FMC63 CDR H2 <400> 39 Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 40 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> FMC63 CDR H3 <400> 40 Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 1 5 <210> 41 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> FMC63 VH <400> 41 Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu 65 70 75 80 Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 42 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> FMC63 VL <400> 42 Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr 100 105 <210> 43 <211> 245 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> FMC63 scFv <400> 43 Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Ser 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Gly Gln Gly Thr Ser 225 230 235 240 Val Thr Val Ser Ser 245 <210> 44 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SJ25C1 CDR L1 <400> 44 Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala 1 5 10 <210> 45 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SJ25C1 CDR L2 <400> 45 Ser Ala Thr Tyr Arg Asn Ser 1 5 <210> 46 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SJ25C1 CDR L3 <400> 46 Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr Thr 1 5 <210> 47 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SJ25C1 CDR H1 <400> 47 Ser Tyr Trp Met Asn 1 5 <210> 48 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SJ25C1 CDR H2 <400> 48 Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 49 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SJ25C1 CDR H3 <400> 49 Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 50 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SJ25C1 VH <400> 50 Glu Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu 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Claims (118)

  1. 만성 림프구성 백혈병 (CLL)을 앓거나 앓는 것으로 의심되는 대상자의 치료 방법으로서, 상기 방법은 대상자에게 대상자 CLL에 의해 발현된 표적 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)을 발현하는 세포의 투여량을 투여하는 것을 포함하되, 상기 투여량은 (a) 대상자의 킬로그램 체중 당 약 2 x 105의 세포 (세포/kg); (b) 약 2 x 106 세포/kg, (c) 약 2 x 106 세포/kg 이하, (d) 약 2 x 105 세포/kg 이하 및/또는 (e) 약 2 x 105 세포/kg 내지 약 2 x 106 세포/kg을 포함하며, 여기서 투여에 앞서, 상기 대상자는 플루다라빈 투여를 포함하는 림프구고갈 요법으로 사전컨디셔닝된 것인 방법.
  2. 만성 림프구성 백혈병 (CLL)을 앓거나 앓는 것으로 의심되는 대상자의 치료 방법으로서, 상기 방법은 대상자에게 대상자 CLL에 의해 발현된 표적 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)을 발현하는 세포의 투여량을 투여하는 것을 포함하되, 상기 투여량은 (a) 약 1 x 107개의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포; (b) 약 1.5 x 108개의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포, (c) 약 1 x 107개 이하의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포, (d) 약 1.5 x 108개 이하의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포 및/또는 (e) 약 1 x 107개의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포내지 약 1.5 x 108개의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포이며, 여기서 투여에 앞서, 상기 대상자는 플루다라빈 투여를 포함하는 림프구고갈 요법으로 사전컨디셔닝된 것인 방법.
  3. 청구항 1에 있어서, 세포 투여량의 투여시 또는 투여 전에:
    대상자는 경우에 따라 고위험 CLL과 연관되고, 경우에 따라 FISH로 검출시 복합 핵형, 염색체 13의 장완의 결실 (del 13q), del 11, 삼염색체 12, del 17p, del 6q, 및 del 13q.14로부터 선택된 하나 이상의 세포유전학적 이상을 갖거나 가졌던 것으로 동정되며;
    대상자는 고위험 CLL을 갖거나 가졌던 것으로 동정되고; 및/또는
    대상자는 골수외 질환을 갖거나 가졌던 것으로 동정되며; 및/또는
    대상자는 중추신경계(CNS) 질환을 갖거나 가졌던 것으로 동정되고; 및/또는
    대상자는 성인이거나 및/또는 연령이 약 30, 40, 50, 60, 또는 70세 이상인 것인 방법.
  4. 청구항 1 또는 청구항 3에 있어서, 세포 투여량의 투여 전에, 대상자는 CLL 치료법으로서 림프구고갈 요법 이외 및/또는 CAR을 발현하는 세포의 또 다른 투여량 이외의 2 가지 이상, 경우에 따라 3, 4, 5, 6, 7, 8, 또는 9 가지 이상의 치료를 받은 대상자인 것인 방법.
  5. 청구항 1 또는 청구항 3에 있어서, 세포 투여량의 투여 전에, 대상자는 CLL 치료법으로서 CAR을 발현하는 세포의 또 다른 투여량 이외 또는 CAR을 발현하는 세포의 또 다른 투여량 이외 및 사전컨디셔닝 요법을 2 가지 이상, 경우에 따라 3, 4, 5, 6, 7, 8, 또는 9 가지 이상의 치료를 받은 대상자인 것인 방법.
  6. 청구항 1-5 중 어느 하나의 항에 있어서, 세포 투여량의 투여 전에, 대상자는 키나아제 억제제, 경우에 따라 Btk의 억제제, 경우에 따라 이브루티닙에 의해 CLL 치료를 받은 바 있는 대상자인 것인 방법.
  7. 청구항 1-6 중 어느 하나의 항에 있어서, 세포 투여량의 투여 전에, 대상자는 CLL의 세포에 의해 발현되거나 이전에 발현된 항원에 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체에 의해 CLL 치료를 받은 바 있는 대상자인 것인 방법.
  8. 청구항 1-7 중 어느 하나의 항에 있어서, 세포 투여량의 투여 전에, 대상자는 베네토클락스, 조합 요법으로서 플루다라빈 및 리툭시맙을 포함하는 조합 요법, 방사선 요법 및/또는 조혈 줄기 세포 이식 (HSCT)에 의해 CLL 치료를 받은 바 있는 대상자인 것인 방법.
  9. 청구항 1-8 중 어느 하나의 항에 있어서, 세포 투여량의 투여시 또는 투여 직전에, 대상자는 CLL에 대한 하나 이상의 이전 치료에 의해 관해된 후 재발되거나 또는 불응성이된 대상자인 것인 방법.
  10. 청구항 1-9 중 어느 하나의 항에 있어서, 세포 투여량의 투여 전에 대상자에게 림프구고갈 요법제를 투여하는 것을 더 포함하는 방법.
  11. 청구항 1-10 중 어느 하나의 항에 있어서, 림프구고갈 요법은:
    (i) 플루다라빈 이외의 또 다른 화학요법제, 경우에 따라 사이클로포스파미드를 투여하는 것을 더 포함하고
    (ii) 세포 투여로부터 적어도 또는 약 48 시간 전 또는 세포 투여로부터 약 48 내지 약 96 시간 전에 개시되며; 및
    (iii) 약 30-60 mg/kg의 사이클로포스파미드를, 경우에 따라 1일 또는 2일 동안 하루 한번, 및/또는 약 25 mg/m2의 플루다라빈을 3-5 일 동안 하루 한번 투여하는 것을 포함하는 것인 방법.
  12. 청구항 1-11 중 어느 하나의 항에 있어서, 세포 투여량의 투여 및/또는 림프구고갈 요법은 외래 환자 전달을 통해 수행되는 것인 방법.
  13. 청구항 1-12 중 어느 하나의 항에 있어서, 세포 투여량은 CAR을 발현하는 CD4+ 세포 대 CAR을 발현하는 CD8+ 세포의 소정 비율 및/또는 대략 1:1 또는 대략 1:3 내지 대략 3:1인 CD4+ 세포 대 CD8+ 세포의 소정 비율인 것인 방법.
  14. 청구항 1-13 중 어느 하나의 항에 있어서, 세포 투여량은 비경구적으로, 경우에 따라 정맥내 투여되는 것인 방법.
  15. 청구항 1-14 중 어느 하나의 항에 있어서:
    상기 방법에 따라 치료된 대상자들의 적어도 50%는 완전 관해 (CR) 및/또는 객관적 반응 (OR)를 달성하거나; 및/또는
    상기 방법에 따라 치료된 대상자들의 적어도 50%는 완전 관해 (CR) 및/또는 객관적 반응 (OR)을 달성하거나; 및/또는
    경우에 따라 세포 투여량 투여로부터 약 또는 적어도 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 12, 18, 또는 24 개월 이내의 시점에서, 경우에 따라, 면역글로불린 중쇄 (IGH) 딥 시퀀싱(deep sequencing)에 의해 평가되는 바와 같이, 대상자의 골수에서(또는 상기 방법에 따라 치료된 대상자의 50% 이상의 골수에서) CLL의 인덱스 클론 및/또는 악성 면역글로불린 중쇄 (IGH) 자리가 검출되지 않는 것인 방법.
  16. 청구항 1-15 중 어느 하나의 항에 있어서:
    상기 방법에 따라 치료되고, 완전 관해(CR)을 달성한 대상자들의 적어도 50%는 무진행 생존 (PFS) 및/또는 12 개월 이상의 전체 생존 (OS)을 나타내고;
    평균적으로, 상기 방법에 따라 치료된 대상자들은 약 6 개월, 12 개월, 또는 18 개월 이상의 PFS 또는 OS 중앙치(median)를 나타내며; 및/또는
    대상자는 치료 후 적어도 또는 약 6, 12, 18 개월 또는 그 이상의 기간 동안 PFS 또는 OS를 나타내는 것인 방법.
  17. 청구항 1-16 중 어느 하나의 항에 있어서, 항원은 B 세포 항원이고, 경우에 따라 CD19인 것인 방법.
  18. 청구항 1-17 중 어느 하나의 항에 있어서, CAR은 항원에 특이적인 scFv, 막관통 도메인, 경우에 따라 4-1BB인 공동자극 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인, 및 경우에 따라 CD3제타인 일차 시그널링 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인을 포함하는 것인 방법.
  19. 청구항 1-18 중 어느 하나의 항에 있어서, CAR은 스페이서 및/또는 힌지 영역을 포함하되, 이들 각각은 경우에 따라 인간 IgG로부터 유래된 것인 방법.
  20. 비-호지킨 림프종 (NHL)을 앓거나 앓는 것으로 의심되는 대상자의 치료 방법으로서, 상기 방법은 대상자에게 대상자 NHL에 의해 발현된 표적 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)을 발현하는 세포의 투여량을 투여하는 것을 포함하되, 상기 투여량은 (i) (a) 대상자의 킬로그램 체중 당 약 2 x 105의 세포 (세포/kg); (b) 약 2 x 106 세포/kg, (c) 약 2 x 106 세포/kg 이하, (d) 약 2 x 105 세포/kg 이하 및/또는 (e) 약 2 x 105 세포/kg 내지 약 2 x 106 세포/kg을 포함하고 (ii) CAR을 발현하는 CD4+ 세포 대 CAR을 발현하는 CD8+ 세포의 소정 비율 및/또는 CD4+ 세포 대 CD8+ 세포의 소정 비율로서 경우에 따라 대략 1:1 또는 대략 1:3 내지 대략 3:1인 소정 비율을 포함하며,
    여기서 투여에 앞서, 상기 대상자는 플루다라빈 투여를 포함하는 림프구고갈 요법으로 사전컨디셔닝된 것인 방법.
  21. 비-호지킨 림프종 (NHL)을 앓거나 앓는 것으로 의심되는 대상자의 치료 방법으로서, 상기 방법은 대상자에게 대상자 NHL에 의해 발현된 표적 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)을 발현하는 세포의 투여량을 투여하는 것을 포함하되, 상기 투여량은 (i) (a) 약 1 x 107개의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포; (b) 약 1.5 x 108개의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포, (c) 약 1 x 107개 이하의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포, (d) 약 1.5 x 108개 이하의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포 및/또는 (e) 약 1 x 107개의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포내지 약 1.5 x 108개의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포를 포함하고, (ii) CAR을 발현하는 CD4+ 세포 대 CAR을 발현하는 CD8+ 세포의 소정 비율 및/또는 CD4+ 세포 대 CD8+ 세포의 소정 비율로서 경우에 따라 대략 1:1 또는 대략 1:3 내지 대략 3:1인 소정 비율을 포함하며, 여기서 투여에 앞서, 상기 대상자는 플루다라빈 투여를 포함하는 림프구고갈 요법으로 사전컨디셔닝된 것인 방법.
  22. 청구항 20에 있어서, 세포 투여량의 투여시 또는 투여 전에:
    대상자는 경우에 따라 고위험 NHL과 연관된 하나 이상의 세포유전학적 이상을 갖거나 가졌던 것으로 동정되며;
    NHL은 공격성 NHL, 미만성 거대 B 세포 림프종 (DLBCL), 원발성 종격동 거대 B 세포 림프종 (PMBCL), T 세포/조직구가 풍부한 거대 B 세포 림프종 (TCHRBCL), 버킷 림프종, 외투세포 림프종 (MCL), 및/또는 소포성 림프종 (FL)으로 이루어진 군으로부터 선택되고; 및/또는
    대상자는 성인이거나 및/또는 연령이 약 30, 40, 50, 60, 또는 70세 이상인 것인 방법.
  23. 청구항 20 또는 청구항 22에 있어서, 세포 투여량의 투여 전에, 대상자는 NHL 치료법으로서 림프구고갈 요법 이외 및/또는 CAR을 발현하는 세포의 또 다른 투여량 이외의 두 가지 이상, 경우에 따라 2, 3, 또는 4 가지 이상의 치료를 받은 대상자인 것인 방법.
  24. 청구항 20-23 중 어느 하나의 항에 있어서, 세포 투여량의 투여시 또는 투여 직전에, 대상자는 NHL에 대한 하나 이상의 이전 치료에 의해 관해된 후 재발되거나 또는 불응성이 된 대상자인 것인 방법.
  25. 청구항 20-24 중 어느 하나의 항에 있어서, 세포 투여량의 투여 전에 대상자에게 림프구고갈 요법제를 투여하는 것을 더 포함하는 방법.
  26. 청구항 20-25 중 어느 하나의 항에 있어서, 림프구고갈 요법은:
    (i) 플루다라빈 이외의 또 다른 화학요법제, 경우에 따라 사이클로포스파미드를 투여하는 것을 더 포함하고
    (ii) 세포 투여로부터 적어도 또는 약 48 시간 전 또는 세포 투여로부터 약 48 내지 약 96 시간 전에 개시되며; 및
    (iii) 약 30-60 mg/kg의 사이클로포스파미드를, 경우에 따라 1일 또는 2일 동안 하루 한번, 및/또는 약 25 mg/m2의 플루다라빈을 3-5 일 동안 하루 한번 투여하는 것을 포함하는 것인 방법.
  27. 청구항 20-26 중 어느 하나의 항에 있어서, 세포 투여량의 투여 및/또는 림프구고갈 요법은 외래 환자 전달을 통해 수행되는 것인 방법.
  28. 청구항 20-27 중 어느 하나의 항에 있어서, 소정 비율은 약 1:1의 CAR을 발현하는 CD4+ 세포 대 CAR을 발현하는 CD8+ 세포의 소정 비율로 정의되거나 및/또는 약 1:1인 CD4+ 세포 대 CD8+ 세포의 소정 비율로 정의되는 것인 방법.
  29. 청구항 20-28 중 어느 하나의 항에 있어서, 세포 투여량은 비경구적으로, 경우에 따라 정맥내 투여되는 것인 방법.
  30. 청구항 20-20 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 방법에 따라 치료된 대상자들의 적어도 50%는 완전 관해 (CR) 및/또는 객관적 반응 (OR)를 달성하는 것인 방법.
  31. 청구항 20-30 중 어느 하나의 항에 있어서:
    상기 방법에 따라 치료되고, 완전 관해(CR)을 달성한 대상자들의 적어도 50%는 무진행 생존 (PFS) 및/또는 12 개월 이상의 전체 생존 (OS)을 나타내고;
    평균적으로, 상기 방법에 따라 치료된 대상자들은 약 6 개월, 12 개월, 또는 18 개월 이상의 PFS 또는 OS 중앙치(median)를 나타내며; 및/또는
    대상자는 치료 후 적어도 또는 약 6, 12, 18 개월 또는 그 이상의 기간 동안 PFS 또는 OS를 나타내는 것인 방법.
  32. 청구항 20-31 중 어느 하나의 항에 있어서, 항원은 B 세포 항원이고, 경우에 따라 CD19인 것인 방법.
  33. 청구항 20-32 중 어느 하나의 항에 있어서, CAR은 항원에 특이적인 scFv, 막관통 도메인, 경우에 따라 4-1BB인 공동자극 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인, 및 경우에 따라 CD3제타인 일차 시그널링 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인을 포함하는 것인 방법.
  34. 청구항 20-33 중 어느 하나의 항에 있어서, CAR은 스페이서 및/또는 힌지 영역을 포함하고, 이들 각각은 경우에 따라 인간 IgG로부터 유래된 것인 방법.
  35. 청구항 1-34 중 어느 하나의 항에 있어서:
    CAR은 하기 순서로 항원에 특이적인 scFv, 막관통 도메인, 경우에 따라 4-1BB 시그널링 도메인이거나 이를 포함하는 공동자극 분자로부터 유래한 세포질 시그널링 도메인, 및 경우에 따라 CD3제타 시그널링 도메인인 일차 시그널링 ITAM-포함 분자로부터 유래한 세포질 시그널링 도메인을 포함하거나; 또는
    CAR은 하기 순서로 항원에 특이적인 scFv, 스페이서, 막관통 도메인, 경우에 따라 4-1BB 시그널링 도메인인 공동자극 분자로부터 유래한 세포질 시그널링 도메인, 및 경우에 따라 CD3제타 시그널링 도메인이거나 이를 포함하는 일차 시그널링 ITAM-포함 분자로부터 유래한 세포질 시그널링 도메인을 포함하며;
    여기서 스페이서는 경우에 따라 (a) 면역글로불린 힌지 또는 그의 변형된 버젼 전부 또는 그의 일부를 포함하거나 이것으로 구성되고 또는 약 15개 이하의 아미노산을 포함하며, CD28 세포외 영역 또는 CD8 세포외 영역을 포함하지 않거나, (b) 면역글로불린 힌지, 경우에 따라 IgG4 힌지, 또는 그의 변형된 버젼의 전부 또는 일부를 포함하거나 이것으로 구성되고 및/또는 약 15개 이하의 아미노산을 포함하며, CD28 세포외 영역 또는 CD8 세포외 영역을 포함하지 않거나, (c) 길이가 약 12 아미노산이고 및/또는 면역글로불린 힌지, 경우에 따라 IgG4 힌지, 또는 그의 변형된 버젼의 전부 또는 일부를 포함하거나 이것으로 구성되거나; 또는 (d) SEQ ID NO: 1의 서열, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34, 또는 전술한 임의의 서열에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 변이체에 의해 인코딩된 서열을 갖거나 또는 이들로 구성되거나, 또는 (e) 식 X1PPX2P (X1은 글리신, 시스테인 또는 아르기닌이고 X2는 시스테인 또는 트레오닌임)을 포함하거나 이것으로 구성되는 폴리펩타이드 스페이서이고; 및/또는
    공동자극 도메인은 SEQ ID NO: 12 또는 이에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 변이체를 포함하거나; 및/또는
    일차 시그널링 도메인은 SEQ ID NO: 13 또는 14 또는 15 또는 이에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖거나; 및/또는
    scFv는 RASQDISKYLN (SEQ ID NO: 35)의 CDRLl 서열, SRLHSGV (SEQ ID NO: 36)의 CDRL2 서열, 및/또는 GNTLPYTFG (SEQ ID NO: 37)의 CDRL3 서열 및/또는 DYGVS (SEQ ID NO: 38)의 CDRH1 서열, VIWGSETTYYNSALKS (SEQ ID NO: 39)의 CDRH2 서열, 및/또는 YAMDYWG (SEQ ID NO: 40)의 CDRH3 서열을 포함하거나 또는 scFv는 FMC63의 중쇄 가변 영역 및 FMC63의 경쇄 가변 영역 및/또는 FMC63의 CDRLl 서열, FMC63의 CDRL2 서열, FMC63의 CDRL3 서열, FMC63의 CDRH1 서열, FMC63의 CDRH2 서열, 및 FMC63의 CDRH3 서열을 포함하거나 또는 동일한 에피토프에 결합하거나 또는 전술한 임의의 것들과의 결합을 놓고 경쟁하고, 경우에 따라 scFv는 하기의 순서로 VH, 경우에 따라 SEQ ID NO: 24를 포함하는 링커, 및 VL를 포함하고, 및/또는 scFv는 유연한 링커를 포함하거나 및/또는 SEQ ID NO: 24에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
  36. B 세포 악성종양을 갖는 대상자로부터의 샘플에서의 악성 면역글로불린 중쇄 자리 (IGH) 서열의 존재 또는 부재를 검사하는 것을 포함하는, 예후 방법으로서, 상기 대상자는 B 세포 악성종양을 치료하기 위한 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 투여량 또는 조성물을 포함하는 세포 요법제를 이전에 투여받은 적이 있는 대상자이고, 여기서 상기 악성 IGH 서열의 존재 또는 부재의 검사는 세포 요법에 반응하는 대상자의 예후를 결정하는 것인 방법.
  37. 청구항 36에 있어서, 악성 IGH 서열의 존재 또는 부재 검사는 세포 요법 개시 후 약 3 내지 6주일 이내, 경우에 따라 세포 요법제 투여 개시로부터 약 4주일 이내에 수행되는 것인 방법.
  38. 청구항 36 또는 청구항 37에 있어서, 악성 IGH 서열이 검출되면, 그 대상자는 그 세포 요법에 대해 반응하지 않거나 또는 완전 반응 (CR) 또는 전체 반응 (OR)을 나타내지 않는 것으로 또는 그 세포 요법에 대해 재발할 가능성이 있는 것으로 동정되는 것인 방법.
  39. 청구항 36-38 중 어느 하나의 항에 있어서, 악성 IGH 서열이 검출되면 그 대상자를 추가 치료의 후보로서 및/또는 변경된 치료법 또는 대체 요법을 받을 후보로서 동정하는 것인 방법.
  40. 청구항 36-38 중 어느 하나의 항에 있어서, 악성 IGH 서열이 검출되면 그 세포 요법제의 투여 중단, 대상자에게 세포 요법제의 또 다른 투여량 투여, 대상자에게 세포 요법제의 보다 높은 투여량으로 투여, 대상자에게 상이한 세포 요법제, 경우에 따라, 상이한 재조합 수용체를 발현하는 세포 요법제의 투여, 및/또는 B 세포 악성 종양을 치료하기 위한 대체 치료제를 대상자에게 투여하는 방법.
  41. 청구항 36 또는 청구항 37에 있어서, 악성 IGH 서열이 검출되지 않으면, 그 대상자는 그 세포 요법에 반응하거나 및/또는 그 세포 요법에 대해 완전 반응 (CR) 또는 전체 반응 (OR)을 나타내거나 또는 그 세포 요법에 대해 재발할 가능성이 낮은 것으로 동정되는 것인 방법.
  42. 청구항 36, 37 및 41 중 어느 하나의 항에 있어서, 악성 IGH 서열이 검출되지 않으면, 그 대상자는 추가 치료가 필요하지 않은 후보로서 동정되거나 및/또는 추가 치료되지 않거나, 경우에 따라 세포 요법에 의해 추가 치료되지 않으며 및/또는 B 세포 악성 종양에 대한 대체 요법으로 추가 치료되지 않는 것인 방법.
  43. 세포 요법에 대한 반응의 지속성(durability)을 예측하는 방법으로서, 상기 방법은 B 세포 악성종양을 갖는 대상자로부터의 샘플 중 악성 면역글로불린 중쇄 자리 (IGH) 서열의 존재 또는 부재를 검사하는 것을 포함하되, 상기 대상자는 B 세포 악성종양의 치료를 위해 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 투여량 또는 조성물을 포함하는 세포 요법제를 이전에 투여받은 적이 있는 대상자이고, 여기서 악성 IGH 서열의 존재 또는 부재는 세포 요법에 대한 반응의 지속성을 예측하는 것인 방법.
  44. 청구항 43에 있어서, 악성 IGH 서열의 존재 또는 부재의 검사는 세포 요법 개시 후 약 또는 약 4 주일, 6 주일, 8 주일, 12 주일 또는 16 주일 이내에 수행되는 것인 방법.
  45. 청구항 43 또는 청구항 44에 있어서, 악성 IGH 서열이 검출되지 않으면, 그 대상자는 그 세포 요법에 대해 지속적인 반응을 나타내거나 또는 나타낼 가능성이 있는 것으로 예측되며 및/또는 특정 기간 이내에 재발 위험이 낮거나 또는 상대적으로 낮을 것으로 예측되거나 및/또는 적어도 특정 기간 동안 무진행 생존을 나타낼 가능성이 높다고 예측되는 것인 방법.
  46. 청구항 43-45 중 어느 하나의 항에 있어서, 악성 IGH 서열이 검출되지 않으면, 그 대상자는:
    세포 요법 개시로부터 약 3개월 이상, 약 6개월 이상, 약 9개월 이상 또는 약 12개월 이상 동안 무진행 생존을 나타낼 것으로; 및/또는
    세포 요법 개시로부터 약 3개월 이상, 약 6개월 이상, 약 9개월 이상 또는 약 12개월 이상 동안 생존할 것으로; 및/또는
    세포 요법 개시로부터 약 3개월 이상, 약 6개월 이상, 약 9개월 이상 또는 약 12개월 이상 동안 지속적인 CR 또는 OR을 나타낼 것으로; 및/또는
    세포 요법제 투여 개시 후 재발할 가능성이 낮은 것으로, 경우에 따라 세포 요법 개시로부터 약 3개월 이상, 약 6개월 이상, 약 9개월 이상 또는 약 12개월 이내에 재발할 가능성이 낮은 것으로 예측되는 것인 방법.
  47. 청구항 43 또는 청구항 44에 있어서, 악성 IGH 서열이 검출되면, 그 대상자는:
    그 세포 요법에 대해 지속적이지 않은 반응을 나타내거나 나타낼 가능성이 있는 것으로 및/또는 특정 기간 이내에 재발 위험이 높거나 상대적으로 높을 것으로 및/또는 적어도 특정 기간 동안 무진행 생존을 나타낼 가능성이 낮은 것으로 예측되는 것인 방법.
  48. 청구항 43 또는 청구항 44에 있어서, 악성 IGH 서열이 검출되지 않으면, 그 대상자는:
    세포 요법 개시 후 약 3개월 이상, 약 6 개월 이상, 약 9 개월 이상 또는 약 12 개월 이상 동안 무진행 생존을 나타내지 않을 것으로; 및/또는
    세포 요법 개시 후 약 3개월 이상, 약 6 개월 이상, 약 9 개월 이상 또는 약 12 개월 이상 동안 생존한채 남아있지 않을 것으로; 및/또는
    세포 요법 개시 후 약 3개월 이상, 약 6 개월 이상, 또는 약 9 개월 이상 동안 지속적인 CR 또는 OR을 나타내지 않을 것으로 예측되는 것인 방법.
  49. 청구항 43, 44 및 48에 있어서, 악성 IGH 서열이 검출되면, 대상자에게 세포 요법제의 추가 투여량을 투여하거나, 대상자에게 세포 요법제를 더 고용량으로 투여하거나, 대상자에게 상이한 세포 요법제, 경우에 따라 상이한 재조합 수용체를 발현하는 세포 요법제를 투여하거나, 및/또는 대상자에게 B 세포 악성 종양을 치료하기 위한 대체 치료제를 투여하는 것인 방법.
  50. 청구항 36-49 중 어느 하나의 항에 있어서, 악성 IGH 서열의 존재 또는 부재는 경우에 따라 IGH 표적 DNA의 PCR 증폭을 포함하는 IGH 시퀀싱에 의해 결정되는 것인 방법.
  51. 청구항 36-38 중 어느 하나의 항에 있어서, 샘플은 B 세포를 포함하는 방법.
  52. 청구항 36-51 중 어느 하나의 항에 있어서, 샘플은 혈액 또는 골수 샘플를 포함하는 방법.
  53. 청구항 36-52 중 어느 하나의 항에 있어서, 샘플 대상자로부터 수득된 것인 방법.
  54. 청구항 36-53 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 방법은 생체외에서 수행되는 것인 방법.
  55. 청구항 36-54 중 어느 하나의 항에 있어서, B 세포 악성종양은 암인 방법.
  56. 청구항 36-55 중 어느 하나의 항에 있어서, B 세포 악성종양은 백혈병이거나 이를 포함하는 방법.
  57. 청구항 37-56 중 어느 하나의 항에 있어서, B 세포 악성종양은 CD19, CD20, CD22, CD30, CD33 또는 CD38, ROR1으로부터 선택된 항원 또는 이와 관련된 항원을 포함하는 것인 방법.
  58. 청구항 36-57 중 어느 하나의 항에 있어서, B 세포 악성종양은 급성 림프모구 백혈병 (ALL), 성인 ALL, 만성 림프모구 백혈병 (CLL), 비-호지킨 림프종 (NHL), 및 미만성 거대 B-세포 림프종 (DLBCL)이거나 이로부터 선택되는 것인 방법.
  59. 청구항 37-58 중 어느 하나의 항에 있어서, B 세포 악성종양은 만성 림프모구 백혈병 (CLL) 또는 고위험 CLL이거나 이를 포함하는 것인 방법.
  60. 청구항 37-58 중 어느 하나의 항에 있어서, B 세포 악성종양은 비-호지킨 림프종 (NHL)이거나 이를 포함하는 것인 방법.
  61. 청구항 60에 있어서, NHL은 공격성 NHL, 미만성 거대 B 세포 림프종 (DLBCL), NOS (드 노보 및 무통(indolent)으로부터 변환됨), 원발성 종격동 거대 B 세포 림프종 (PMBCL), T 세포/조직구가 풍부한 거대 B 세포 림프종 (TCHRBCL), 버킷 림프종, 외투세포 림프종 (MCL), 및/또는 소포성 림프종 (FL), 경우에 따라, 소포성 림프종 등급 3B (FL3B)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  62. 청구항 37-61 중 어느 하나의 항에 있어서, 재조합 수용체는 질환 또는 상태와 관련되고 B 세포 악성종양과 관련된 병변 환경의 세포에서 발현되는 항원에 특이적으로 결합하는 것인 방법.
  63. 청구항 37-62 중 어느 하나의 항에 있어서, 재조합 수용체는 T 세포 수용체 또는 기능성 비-T 세포 수용체인 것인 방법.
  64. 청구항 37-63 중 어느 하나의 항에 있어서, 재조합 수용체는 키메라 항원 수용체 (CAR)인 것인 방법.
  65. 청구항 64에 있어서, CAR은 항원에 특이적으로 결합하는 세포외 항원-인식 도메인 및 ITAM을 포함하는 세포내 시그널링 도메인을 함유하고, 여기서 경우에 따라, 세포내 시그널링 도메인은 CD3-제타 (CD3ζ) 사슬의 세포내 도메인을 포함하거나; 및/또는 CAR은 추가로 공동자극 시그널링 영역을 더 포함하고, 경우에 따라 이것은 CD28 또는 4-1BB의 시그널링 도메인을 포함하는 것인 방법.
  66. 청구항 37-65 중 어느 하나의 항에 있어서, CAR은 항원에 특이적인 scFv, 막관통 도메인, 경우에 따라 4-1BB인 공동자극 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인, 및 경우에 따라 CD3제타인 일차 시그널링 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인을 포함하는 것인 방법.
  67. 청구항 37-66 중 어느 하나의 항에 있어서, CAR은 경우에 따라 각각 인간 IgG로부터 유래된 스페이서 및/또는 힌지 영역을 포함하는 것인 방법.
  68. 청구항 37-67 중 어느 하나의 항에 있어서:
    CAR은 하기 순서로 항원에 특이적인 scFv, 막관통 도메인, 경우에 따라 4-1BB 시그널링 도메인이거나 이를 포함하는 공동자극 분자로부터 유래한 세포질 시그널링 도메인, 및 경우에 따라 CD3제타 시그널링 도메인인 일차 시그널링 ITAM-함유 분자로부터 유래한 세포질 시그널링 도메인을 포함하거나; 또는
    CAR은 하기 순서로 항원에 특이적인 scFv, 스페이서, 막관통 도메인, 경우에 따라 4-1BB 시그널링 도메인인 공동자극 분자로부터 유래한 세포질 시그널링 도메인, 및 경우에 따라 CD3제타 시그널링 도메인이거나 이를 포함하는 일차 시그널링 ITAM-함유 분자로부터 유래한 세포질 시그널링 도메인을 함유하며;
    및 여기서:
    스페이서는 경우에 따라 (a) 면역글로불린 힌지 또는 그의 변형된 버젼 전부 또는 그의 일부를 함유하거나 이것으로 구성되고 또는 약 15개 이하의 아미노산을 함유하며, CD28 세포외 영역 또는 CD8 세포외 영역을 함유하지 않거나, (b) 면역글로불린 힌지, 경우에 따라 IgG4 힌지, 또는 그의 변형된 버젼의 전부 또는 일부를 함유하거나 이것으로 구성되고 및/또는 약 15개 이하의 아미노산을 함유하며, CD28 세포외 영역 또는 CD8 세포외 영역을 함유하지 않거나, (c) 길이가 약 12 아미노산이고 및/또는 면역글로불린 힌지, 경우에 따라 IgG4 힌지, 또는 그의 변형된 버젼의 전부 또는 일부를 포함하거나 이것으로 구성되거나; 또는 (d) SEQ ID NO: 1의 서열, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34, 또는 전술한 임의의 서열에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 변이체에 의해 인코딩된 서열을 갖거나 또는 이들로 구성되거나, 또는 (e) 식 X1PPX2P (X1은 글리신, 시스테인 또는 아르기닌이고 X2는 시스테인 또는 트레오닌임)을 포함하거나 이것으로 구성되는 폴리펩타이드 스페이서이고; 및/또는
    공동자극 도메인은 SEQ ID NO: 12 또는 이에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 변이체를 함유하거나; 및/또는
    일차 시그널링 도메인은 SEQ ID NO: 13 또는 14 또는 15 또는 이에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖거나; 및/또는
    scFv는 RASQDISKYLN (SEQ ID NO: 35)의 CDRLl 서열, SRLHSGV (SEQ ID NO: 36)의 CDRL2 서열, 및/또는 GNTLPYTFG (SEQ ID NO: 37)의 CDRL3 서열 및/또는 DYGVS (SEQ ID NO: 38)의 CDRH1 서열, VIWGSETTYYNSALKS (SEQ ID NO: 39)의 CDRH2 서열, 및/또는 YAMDYWG (SEQ ID NO: 40)의 CDRH3 서열을 함유하거나 또는 scFv는 FMC63의 중쇄 가변 영역 및 FMC63의 경쇄 가변 영역 및/또는 FMC63의 CDRLl 서열, FMC63의 CDRL2 서열, FMC63의 CDRL3 서열, FMC63의 CDRH1 서열, FMC63의 CDRH2 서열, 및 FMC63의 CDRH3 서열을 포함하거나 또는 동일한 에피토프에 결합하거나 또는 전술한 임의의 것들과의 결합을 놓고 경쟁하고, 경우에 따라 scFv는 하기의 순서로 VH, 경우에 따라 SEQ ID NO: 24를 포함하는 링커, 및 VL를 함유하고, 및/또는 scFv는 유연한 링커를 함유하거나 및/또는 SEQ ID NO: 24에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
  69. 청구항 37-68 중 어느 하나의 항에 있어서, 조작된 세포는 T 세포, 경우에 따라 CD4+ 및/또는 CD8+을 포함하는 것인 방법.
  70. 청구항 69에 있어서, T 세포는 대상자로부터 수득된 일차 T 세포인 것인 방법.
  71. 청구항 37-70 중 어느 하나의 항에 있어서, 조작된 세포는 대상자에 대해 자가인 것인 방법.
  72. 청구항 37-71 중 어느 하나의 항에 있어서,, 조작된 세포는 대상자에 대해 동종인 것인 방법.
  73. 세포 요법제의 하나 이상의 투여량 및 세포 요법제의 투여에 대한 지침을 포함하는 제조 물품으로서, 상기 각 투여량은 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 세포를 포함하는 것이고, 여기서:
    상기 지침은 만성 림프구성 백혈병 (CLL)를 앓는 대상자에게 투여될 세포의 투여량을 명시하고; 및
    상기 지침은 다수의 CAR-발현 또는 세포 수의 투여를 명시하거나, 또는 상기 특정 수의 세포에 상응하거나 또는 이를 포함하는 하나 이상의 제형의 양 또는 부피의 투여를 명시하며, 여기서 투여될 특정 세포 수는 (a) 대상자의 킬로그램 체중 당 약 2 x 105 세포(세포/kg); (b) 약 2 x 106 세포/kg, (c) 약 2 x 106 이하의 세포/kg, (d) 약 2 x 105 이하의 세포/kg 및/또는 (e) 약 2 x 105 세포/kg 내지 또는 약 2 x 106 세포/kg를 포함하는 세포 투여량을 투여하기 위한 수를 포함하는 것인 제조 물품.
  74. 세포 요법제의 하나 이상의 투여량 및 세포 요법제의 투여에 대한 지침을 포함하는 제조 물품으로서, 상기 각 투여량은 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 세포를 포함하는 것이고, 여기서:
    상기 지침은 만성 림프구성 백혈병 (CLL)를 앓는 대상자에게 투여될 세포의 투여량을 명시하고; 및
    상기 지침은 다수의 CAR-발현 또는 세포 수의 투여를 명시하거나, 또는 상기 특정 수의 세포에 상응하거나 또는 이를 포함하는 하나 이상의 제형의 양 또는 부피의 투여를 명시하며, 여기서 투여될 특정 세포 수는 (a) 약 1 x 107 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포; (b) 약 1.5 x 108 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포, (c) 약 1 x 107 이하의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포, (d) 약 1.5 x 108 이하의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포 및/또는 (e) 약 1 x 107의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포내지 약 1.5 x 108의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포를 포함하는 세포 투여량을 투여하기 위한 수를 포함하는 것인 제조 물품.
  75. 청구항 73에 있어서, 플루다라빈을 포함하는 림프구고갈 요법과 함께, 또는 그 후 또는 그와 연계한 사용에 대한 지침을 추가로 포함하는 제조 물품.
  76. 청구항 73 또는 청구항 75에 있어서, 상기 지침은 세포 요법이:
    경우에 따라 FISH에 의해 검출되는 바와 같이, 경우에 따라 고위험 CLL과 연계되고, 경우에 따라: 복합 핵형, 염색체 13의 장완의 결실 (del 13q), del 11, 삼염색체 12, del 17p, del 6q, 및 del 13q.14로부터 선택되는 하나 이상의 세포유전학적 이상을 갖는 것으로 동정되거나 동정된 바 있는 대상자;
    고위험 CLL에 걸린 것으로 동정되거나 동정된 바 있는 대상자; 및/또는
    골수외(extramedullary) 질환을 갖는 것으로 동정되거나 동정된 바 있는 대상자; 및/또는
    중추신경계 (CNS) 질환을 갖는 것으로 동정되거나 동정된 바 있는 대상자; 및/또는
    성인이거나 및/또는 약 30, 40, 50, 60, 또는 70 세 이상인 대상자
    에게 투여되는 것임을 명시한 것인 제조 물품.
  77. 청구항 73-76 중 어느 하나의 항에 있어서, 지침은 세포 요법이:
    림프구고갈 요법 이외 및/또는 CAR을 발현하는 세포의 또 다른 투여량으로 2회 이상, 경우에 따라 3, 4, 5, 6, 7, 8, 또는 9회 이상 CLL에 대해 치료된 바 있는 대상자; 및/또는
    키나아제 억제제, 경우에 따라 Btk의 억제제, 경우에 따라 이브루티닙으로 CLL에 대해 치료된 바 있는 대상자; 및/또는
    CLL의 세포에 의해 발현되거나 또는 이전에 발현된 항원에 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체로 CLL에 대해 치료된 바 있는 대상자; 및/또는
    플루다라빈과 리툭시맙을 포함하는 조합 요법, 베네토클락스, 방사선 요법 및/또는 조혈 줄기 세포 이식 (HSCT)에 의해 CLL에 대해 치료된 바 있는 대상자
    에게 투여되는 것임을 명시한 것인 제조 물품.
  78. 청구항 73-77 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 지침은 세포 요법이 CLL에 대한 하나 이상의 이전 요법으로 치료 후 관해 후 재발하거나 또는 CLL에 대한 하나 이상의 이전 요법에 불응성이 있는 대상에게 투여됨을 명시한 것인 제조 물품.
  79. 세포 요법제의 하나 이상의 투여량 및 세포 요법제의 투여에 대한 지침을 포함하는 제조 물품으로서, 상기 각 투여량은 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 세포를 포함하는 것이고, 여기서:
    상기 지침은 비-호지킨 림프종(NHL)를 앓는 대상자에게 투여될 세포의 투여량을 명시하고; 및
    상기 지침은 다수의 CAR-발현 또는 세포 수의 투여를 명시하거나, 또는 상기 특정 수의 세포에 상응하거나 또는 이를 포함하는 하나 이상의 제형의 양 또는 부피의 투여를 명시하며, 여기서 투여될 특정 세포 수는 (a) 대상자의 킬로그램 체중 당 약 2 x 105 세포(세포/kg); (b) 약 2 x 106 세포/kg, (c) 약 2 x 106 이하의 세포/kg, (d) 약 2 x 105 이하의 세포/kg 및/또는 (e) 약 2 x 105 세포/kg 내지 또는 약 2 x 106 세포/kg를 포함하는 세포 투여량을 투여하기 위한 수를 포함하는 것인 제조 물품.
  80. 세포 요법제의 하나 이상의 투여량 및 세포 요법제의 투여에 대한 지침을 포함하는 제조 물품으로서, 상기 각 투여량은 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 세포를 포함하는 것이고, 여기서:
    상기 지침은 비-호지킨 림프종(NHL)를 앓는 대상자에게 투여될 세포의 투여량을 명시하고; 및
    상기 지침은 다수의 CAR-발현 또는 세포 수의 투여를 명시하거나, 또는 상기 특정 수의 세포에 상응하거나 또는 이를 포함하는 하나 이상의 제형의 양 또는 부피의 투여를 명시하며, 여기서 투여될 특정 세포 수는 (a) 약 1 x 107 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포; (b) 약 1.5 x 108 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포, (c) 약 1 x 107 이하의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포, (d) 약 1.5 x 108 이하의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포 및/또는 (e) 약 1 x 107의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포내지 약 1.5 x 108의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포를 포함하는 세포 투여량을 투여하기 위한 수를 포함하는 것인 제조 물품.
  81. 청구항 79에 있어서, 플루다라빈을 포함하는 림프구고갈 요법과 함께, 또는 그 후 또는 그와 연계한 사용에 대한 지침을 추가로 포함하는 제조 물품.
  82. 청구항 79 또는 청구항 81에 있어서, 지침은:
    경우에 따라 고위험 NHL과 연관된 하나 이상의 세포유전학적 이상을 갖는 것으로 동정되거나 동정된 바 있는 대상자;
    고위험 NHL을 갖는 것으로 동정되거나 동정된 바 있는 대상자; 및/또는
    공격성 NHL, 미만성 거대 B 세포 림프종 (DLBCL), 원발성 종격동 거대 B 세포 림프종 (PMBCL), T 세포/조직구가 풍부한 거대 B 세포 림프종 (TCHRBCL), 버킷 림프종, 외투세포 림프종 (MCL), 및/또는 소포성 림프종 (FL)으로 이루어진 군으로부터 선택되거나; 및/또는
    성인이거나 및/또는 연령이 약 30, 40, 50, 60, 또는 70세 이상인 대상자
    에게 세포 요법제가 투여됨을 명시하는 것인 제조 물품.
  83. 청구항 79-82 중 어느 하나의 항에 있어서, 지침은 림프구고갈 요법을 제외한 및/또는 CAR을 발현하는 세포의 또 다른 투여량으로 2회 이상, 경우에 따라 2, 3 또는 4회 이상 NHL에 대한 치료를 받은 적이 있는 대상자에게 세포 요법제가 투여됨을 명시하는 것인 제조 물품.
  84. 청구항 79-83 중 어느 하나의 항에 있어서, 지침은 NHL에 대한 1종 이상의 이전 치료 후 관해에 이어 재발하였거나 또는 불응성이 된 대상자에게 세포 요법제가 투여됨을 명시하는 것인 제조 물품.
  85. 청구항 73-84 중 어느 하나의 항에 있어서, 림프구고갈 요법은:
    (i) 경우에 따라 사이클로포스파미드인 플루다라빈 이외의 다른 화학요법제를 투여하는 것을 포함하거나; 및/또는
    (ii) 약 30-60 mg/kg의 사이클로포스파미드를 경우에 따라 1일 또는 2일 동안 1일 1회, 및/또는 약 25 mg/m2의 플루다라빈을 3-5일 동안 매일 투여하는 것을 포함하는 것인 제조 물품.
  86. 청구항 73-84 중 어느 하나의 항에 있어서, 지침은 림프구고갈 요법이 세포 요법제 투여로부터 적어도 약 48 시간 전 또는 투여 전 약 48 시간 내지 약 96 시간 사이에 개시되어야 함을 명시하는 것인 제조 물품.
  87. 청구항 73-86 중 어느 하나의 항에 있어서, 지침은 세포 요법제를 CAR을 발현하는 CD4+ 세포 대 CD8+ 세포의 소정 비율로 투여할 것을 명시하거나, 또는 이러한 소정 비율에 상응하는 제형(들)의 양 또는 부피를 투여할 것을 명시하거나 또는 제형은 세포를 그러한 비율로 갖거나 또는 CAR을 발현하는 그러한 비율 및/또는 CD4+ 세포 대 CD8+ 세포의 비율로 함유하며, 상기 비율은 경우에 따라 대략 1:1 또는 대략 1:3 내지 대략 3:1인 것인 제조 물품.
  88. 청구항 73-87 중 어느 하나의 항에 있어서, 지침은 세포 요법제가 비경구 투여, 경우에 따라 정맥 투여용임을 추가로 명시하는 것인 제조 물품.
  89. 청구항 73-88 중 어느 하나의 항에 있어서, 지침은 세포 요법제가 외래 환자 환경 및/또는 환자를 병원에 하룻밤 또는 1일 이상 연속하여 입원하지 않고 투여되거나 및/또는 1일 이상 병원에 대상자의 입원없이 투여됨을 추가로 명시하는 것인 제조 물품.
  90. 청구항 73-89 중 어느 하나의 항에 있어서, 세포 요법제는 대상자로부터 수득된 일차 T 세포를 포함하는 것인 제조 물품.
  91. 청구항 89에 있어서, T 세포는 대상자에 대해 자가인 것인 제조 물품.
  92. 청구항 91에 있어서, T 세포는 대상자에 대해 동종인 것인 제조 물품.
  93. 청구항 73-92 중 어느 하나의 항에 있어서, CAR은 항원에 특이적인 scFv, 막관통 도메인, 경우에 따라 4-1BB인 공동자극 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인, 및 경우에 따라 CD3제타인 일차 시그널링 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인을 포함하는 것인 제조 물품.
  94. 청구항 73-93 중 어느 하나의 항에 있어서, CAR은 경우에 따라 각각 인간 IgG로부터 유래된 스페이서 및/또는 힌지 영역을 포함하는 것인 제조 물품.
  95. 청구항 93 또는 청구항 94에 있어서, 항원은 경우에 따라 CD19인 B 세포 항원인 것인 제조 물품.
  96. 청구항 73-95 중 어느 하나의 항에 있어서:
    CAR은 하기 순서대로, 항원에 특이적인 scFv, 막관통 도메인, 경우에 따라 4-1BB 시그널링 도메인이거나 이를 함유하는 공동자극 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인, 및 경우에 따라 CD3제타인 일차 시그널링 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인을 함유하거나; 또는
    CAR은 하기 순서대로 항원에 특이적인 scFv, 스페이서, 막관통 도메인, 경우에 따라 4-1BB인 공동자극 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인, 및 경우에 따라 CD3제타 시그널링 도메인이거나 이를 포함하는 일차 시그널링 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인을 함유하고;
    및 여기서:
    스페이서는 경우에 따라 (a) 면역글로불린 힌지 또는 그의 변형된 버젼 전부 또는 그의 일부를 함유하거나 이것으로 구성되고 또는 약 15개 이하의 아미노산을 함유하며, CD28 세포외 영역 또는 CD8 세포외 영역을 함유하지 않거나, (b) 면역글로불린 힌지, 경우에 따라 IgG4 힌지, 또는 그의 변형된 버젼의 전부 또는 일부를 함유하거나 이것으로 구성되고 및/또는 약 15개 이하의 아미노산을 함유하며, CD28 세포외 영역 또는 CD8 세포외 영역을 함유하지 않거나, (c) 길이가 약 12 아미노산이고 및/또는 면역글로불린 힌지, 경우에 따라 IgG4 힌지, 또는 그의 변형된 버젼의 전부 또는 일부를 함유하거나 이것으로 구성되거나; 또는 (d) SEQ ID NO: 1의 서열, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34, 또는 전술한 임의의 서열에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 변이체에 의해 인코딩된 서열을 갖거나 또는 이들로 구성되거나, 또는 (e) 식 X1PPX2P (X1은 글리신, 시스테인 또는 아르기닌이고 X2는 시스테인 또는 트레오닌임)을 포함하거나 이것으로 구성되는 폴리펩타이드 스페이서이고; 및/또는
    공동자극 도메인은 SEQ ID NO: 12 또는 이에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 변이체를 함유하거나; 및/또는
    일차 시그널링 도메인은 SEQ ID NO: 13 또는 14 또는 15 또는 이에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖거나; 및/또는
    scFv는 RASQDISKYLN (SEQ ID NO: 35)의 CDRLl 서열, SRLHSGV (SEQ ID NO: 36)의 CDRL2 서열, 및/또는 GNTLPYTFG (SEQ ID NO: 37)의 CDRL3 서열 및/또는 DYGVS (SEQ ID NO: 38)의 CDRH1 서열, VIWGSETTYYNSALKS (SEQ ID NO: 39)의 CDRH2 서열, 및/또는 YAMDYWG (SEQ ID NO: 40)의 CDRH3 서열을 함유하거나 또는 scFv는 FMC63의 중쇄 가변 영역 및 FMC63의 경쇄 가변 영역 및/또는 FMC63의 CDRLl 서열, FMC63의 CDRL2 서열, FMC63의 CDRL3 서열, FMC63의 CDRH1 서열, FMC63의 CDRH2 서열, 및 FMC63의 CDRH3 서열을 포함하거나 또는 동일한 에피토프에 결합하거나 또는 전술한 임의의 것들과의 결합을 놓고 경쟁하고, 경우에 따라 scFv는 하기의 순서로 VH, 경우에 따라 SEQ ID NO: 24를 포함하는 링커, 및 VL를 함유하고, 및/또는 scFv는 유연한 링커를 함유하거나 및/또는 SEQ ID NO: 24에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것인 제조 물품.
  97. 만성 림프구성 백혈병 (CLL)에 걸리거나 걸린 것으로 의심되는 대상자를 치료하는데 사용되기 위한, CLL의 표적 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 세포를 함유하는 조성물로서, 여기서 상기 치료는 대상자에게 CAR을 발현하는 세포 투여량을 투여하는 것을 포함하되, 상기 투여량은 (a) 대상자의 킬로그램 체중 당 약 2 x 105 세포 (세포/kg); (b) 약 2 x 106 세포/kg, (c) 약 2 x 106 이하의 세포/kg, (d) 약 2 x 105 이하의 세포/kg 및/또는 (e) 약 2 x 105의 세포/kg 내지 약 2 x 106의 세포/kg을 함유하고,
    여기서 투여에 앞서, 상기 대상자는 플루다라빈 투여를 포함하는 림프구고갈 요법으로 사전 컨디셔닝된 대상자인 것인 조성물.
  98. 만성 림프구성 백혈병 (CLL)에 걸리거나 걸린 것으로 의심되는 대상자를 치료하는데 사용되기 위한, CLL의 표적 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 세포를 함유하는 조성물로서, 여기서 상기 치료는 CAR을 발현하는 세포의 투여량을 대상자에게 투여하는 것을 포함하되, 상기 투여량은 (a) 약 1 x 107 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포; (b) 약 1.5 x 108 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포, (c) 약 1 x 107 이하의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포, (d) 약 1.5 x 108 이하의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포 및/또는 (e) 약 1 x 107의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포내지 약 1.5 x 108의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포를 포함하고,
    여기서 투여 전, 상기 대상자는 플루다라빈의 투여를 포함하는 림프구고갈 요법으로 사전 컨디셔닝된 대상자인 것인 조성물.
  99. 청구항 97 또는 청구항 98에 있어서, 조성물은 세포 투여량의 투여시 또는 투여 전에 다음 대상자에게 사용되기 위한 것인 용도:
    경우에 따라 FISH에 의해 검출되는 바와 같이, 경우에 따라 고위험 CLL과 연계되고, 경우에 따라: 복합 핵형, 염색체 13의 장완의 결실 (del 13q), del 11, 삼염색체 12, del 17p, del 6q, 및 del 13q.14로부터 선택되는 하나 이상의 세포유전학적 이상을 갖는 것으로 동정되거나 동정된 바 있는 대상자;
    고위험 CLL에 걸린 것으로 동정되거나 동정된 바 있는 대상자; 및/또는
    골수외(extramedullary) 질환을 갖는 것으로 동정되거나 동정된 바 있는 대상자; 및/또는
    대상자가 중추신경계 (CNS) 질환을 갖는 것으로 동정되거나 동정된 바 있는 대상자; 및/또는
    성인이거나 및/또는 약 30, 40, 50, 60, 또는 70 세 이상인 대상자.
  100. 청구항 97-99 중 어느 하나의 항에 있어서, 조성물은 세포 투여량 투여 전에, 2 이상, 선택적으로 3, 4, 5, 6, 7, 8 또는 9 이상의 림프구고갈 요법 이외의 CLL에 대한 치료, 및/또는 CAR을 발현하는 세포의 다른 투여량 이외의 다른 치료법으로 치료된 바 있는 대상자를 치료하는데 사용되기 위한 것인 용도.
  101. 청구항 97-100 중 어느 하나의 항에 있어서, 조성물은 세포 투여량 투여 전에, CAR을 발현하는 세포의 다른 투여량 또는 CAR을 발현하는 세포의 다른 투여량 및 사전컨디셔닝 요법을 제외한, 2 이상, 선택적으로 3, 4, 5, 6, 7, 8 또는 9 이상의 CLL에 대한 치료법으로 치료된 바 있는 대상자를 치료하는데 사용되기 위한 것인 용도.
  102. 청구항 97-101 중 어느 하나의 항에 있어서, 조성물은 세포 투여량의 투여에 앞서, CLL에 대해 키나아제 억제제, 경우에 따라 Btk의 억제제, 경우에 따라 이브루티닙으로 치료된 바 있는 대상자를 치료하는데 사용되기 위한 것인 용도.
  103. 청구항 97-102 중 어느 하나의 항에 있어서, 조성물은 세포 투여량의 투여에 앞서, 대상자가 CLL의 세포에 의해 발현되는 또는 이전에 발현된 항원에 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체로 CLL에 대한 치료를 받은 적이 있는 대상자를 치료하는데 사용되기 위한 것인 용도.
  104. 청구항 97-102 중 어느 하나의 항에 있어서, 조성물은 세포 투여량의 투여에 앞서, 대상자가 플루다라빈 및 리툭시맙을 포함하는 조합 요법, 베네토클락스, 방사선 요법 및/또는 조혈 줄기 세포 이식 (HSCT)으로 CLL에 대한 치료를 받은 바 있는 대상자를 치료하는데 사용되기 위한 것인 용도.
  105. 청구항 97-102 중 어느 하나의 항에 있어서, 조성물은 세포 투여량의 투여시 또는 투여 직전에, 대상자가 CLL에 대한 하나 이상의 이전 치료법에 대해 불응성이 되거나 또는 그러한 치료 후 관해 후에 재발된 바 있는 대상자를 치료하는데 사용되기 위한 것인 용도.
  106. 비-호지킨 림프종 (NHL)에 걸리거나 걸린 것으로 의심되는 대상자를 치료하는데 사용되기 위한, NHL의 표적 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 세포를 함유하는 조성물로서, 여기서 상기 치료는 대상자에게 NHL에 의해 발현되는 표적 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 세포의 투여량을 투여하는 것을 포함하되, 여기서 상기 치료는 대상자에게 CAR을 발현하는 세포의 투여량을 투여하는 것을 포함하고, 상기 투여량은 (i) (a) 대상자의 킬로그램 체중 당 약 2 x 105 세포 (세포/kg); (b) 약 2 x 106 세포/kg, (c) 약 2 x 106 이하의 세포/kg, (d) 약 2 x 105 이하의 세포/kg 및/또는 (e) 약 2 x 105의 세포/kg 내지 약 2 x 106의 세포/kg을 포함하거나, 및 (ii) CAR을 발현하는 CD4+ 세포 대 CAR을 발현하는 CD8+ 세포의 소정 비율 및/또는 CD4+ 세포 대 CD8+ 세포의 소정 비율을 포함하되, 상기 비율은 경우에 따라 대략 1:1 또는 대략 1:3 내지 대략 3:1이고,
    여기서 투여 전에 상기 대상자는 플루다라빈의 투여를 포함하는 림프구고갈 요법에 의해 사전컨디셔닝된 대상자인 것인 조성물.
  107. 비-호지킨 림프종 (NHL)에 걸렸거나 걸린 것으로 의심되는 대상자의 치료에 사용되기 위한 NHL의 표적 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 세포를 함유하는 조성물로서, 여기서 상기 치료는 대상자에게 CAR을 발현하는 세포의 투여량을 투여하는 것을 포함하되, 상기 투여량은 (i) (a) 약 1 x 107 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포; (b) 약 1.5 x 108 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포, (c) 약 1 x 107 이하의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포, (d) 약 1.5 x 108 이하의 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포 및/또는 (e) 약 1 x 107 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포내지 약 1.5 x 108 총 세포 또는 총 CAR-발현 세포를 함유하거나, 및 (ii) CAR을 발현하는 CD4+ 세포 대 CAR을 발현하는 CD8+ 세포의 소정 비율 및/또는 CD4+ 세포 대 CD8+ 세포의 소정 비율을 함유하되, 상기 비율은 경우에 따라 대략 1:1이거나 또는 대략 1:3 내지 대략 3:1이고,
    여기서, 투여 전에 상기 대상자는 플루다라빈의 투여를 포함하는 림프구고갈 요법으로 사전컨디셔닝된 대상자인 것인 조성물.
  108. 청구항 106 또는 청구항 107에 있어서, 조성물은 세포 투여량의 투여시 또는 투여 전에 대상자가:
    고위험 NHL과 연관된 하나 이상의 세포유전학적 이상을 갖는 것으로 동정되거나 동정된 바 있는 대상자;
    고위험 NHL을 갖는 것으로 동정되거나 동정된 바 있는 대상자; 및/또는
    NHL이 공격성 NHL, 미만성 거대 B 세포 림프종 (DLBCL), 원발성 종격동 거대 B 세포 림프종 (PMBCL), T 세포/조직구가 풍부한 거대 B 세포 림프종 (TCHRBCL), 버킷 림프종, 외투세포 림프종 (MCL), 및/또는 소포성 림프종 (FL)으로 이루어진 군으로부터 선택되거나; 및/또는
    성인이거나 및/또는 연령이 약 30, 40, 50, 60, 또는 70세 이상인 대상자
    를 치료하는데 사용되기 위한 것인 용도.
  109. 청구항 106-108 중 어느 하나의 항에 있어서, 조성물은 세포 투여량의 투여에 앞서 대상자가 림프구고갈 요법 이외에 및/또는 CAR 발현 세포의 또 다른 투여량 이외에 2종 이상, 경우에 따라 2, 3, 또는 4종 이상의 NHL 치료법으로 치료된 바 있는 대상자인 것인 용도.
  110. 청구항 106-109 중 어느 하나의 항에 있어서, 조성물은 세포 투여량의 투여시 또는 투여 직전에, 대상자가 NHL에 대한 하나 이상의 종전 치료법에 의한 치료 후 관해에 이어 재발하거나 또는 그러한 치료에 대해 불응성이 된 대상자를 치료하는데 사용되기 위한 것인 용도.
  111. 청구항 97-110 중 어느 하나의 항에 있어서, 림프구고갈 요법은:
    (i) 플루다라빈 이외의 다른 화학요법제, 경우에 따라 사이클로포스파미드를 투여하는 것을 더 포함하고;
    (ii) 세포 투여로부터 적어도 또는 약 48 시간 전 또는 세포 투여 전 약 48 시간 내지 약 96 시간 사이에 개시되며; 및
    (iii) 약 30-60 mg/kg의 사이클로포스파미드를, 경우에 따라 1일 또는 2일 동안 하루 한번, 및/또는 약 25 mg/m2의 플루다라빈을 3-5일 동안 매일 투여하는 것을 포함하는 것인 용도.
  112. 청구항 97-101 중 어느 하나의 항에 있어서, 치료는 세포 투여량의 투여 및/또는 외래 환자 전달을 통한 림프구고갈 요법을 포함하는 것인 용도.
  113. 청구항 97-112 중 어느 하나의 항에 있어서, 조성물 및/또는 세포 투여량은 CAR을 발현하는 CD4+ 세포 대 CAR을 발현하는 CD8+ 세포의 소정 비율을 포함하되 상기 소정 비율은 경우에 따라 약 1:1 또는 약 1:3 내지 약 3:1인 것인 용도.
  114. 청구항 97-113 중 어느 하나의 항에 있어서, 조성물 및/또는 세포 투여량은 비경구 투여, 경우에 따라 정맥 투여용으로 조성되는 것인 용도.
  115. 청구항 97-114 중 어느 하나의 항에 있어서, 항원은 B 세포 항원이고, 경우에 따라 CD19인 것인 용도.
  116. 청구항 97-115 중 어느 하나의 항에 있어서, CAR은 항원에 특이적인 scFv, 막관통 도메인, 경우에 따라 4-1BB인 공동자극 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인, 및 경우에 따라 CD3제타인 일차 시그널링 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인을 포함하는 것인 용도.
  117. 청구항 97-116 중 어느 하나의 항에 있어서, CAR은 경우에 따라 각기 인간 IgG 로부터 유래된 스페이서 및/또는 힌지 영역을 포함하는 것인 용도.
  118. 청구항 97-117 중 어느 하나의 항에 있어서:
    CAR은 하기 순서대로, 항원에 특이적인 scFv, 막관통 도메인, 경우에 따라 4-1BB 시그널링 도메인이거나 이를 함유하는 공동자극 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인, 및 경우에 따라 CD3제타인 일차 시그널링 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인을 함유하거나; 또는
    CAR은 하기 순서대로 항원에 특이적인 scFv, 스페이서, 막관통 도메인, 경우에 따라 4-1BB인 공동자극 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인, 및 경우에 따라 CD3제타 시그널링 도메인이거나 이를 포함하는 일차 시그널링 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 시그널링 도메인을 함유하고;
    및 여기서:
    스페이서는 경우에 따라 (a) 면역글로불린 힌지 또는 그의 변형된 버젼 전부 또는 그의 일부를 함유하거나 이것으로 구성되고 또는 약 15개 이하의 아미노산을 함유하며, CD28 세포외 영역 또는 CD8 세포외 영역을 함유하지 않거나, (b) 면역글로불린 힌지, 경우에 따라 IgG4 힌지, 또는 그의 변형된 버젼의 전부 또는 일부를 함유하거나 이것으로 구성되고 및/또는 약 15개 이하의 아미노산을 함유하며, CD28 세포외 영역 또는 CD8 세포외 영역을 함유하지 않거나, (c) 길이가 약 12 아미노산이고 및/또는 면역글로불린 힌지, 경우에 따라 IgG4 힌지, 또는 그의 변형된 버젼의 전부 또는 일부를 함유하거나 이것으로 구성되거나; 또는 (d) SEQ ID NO: 1의 서열, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34, 또는 전술한 임의의 서열에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 변이체에 의해 인코딩된 서열을 갖거나 또는 이들로 구성되거나, 또는 (e) 식 X1PPX2P (X1은 글리신, 시스테인 또는 아르기닌이고 X2는 시스테인 또는 트레오닌임)을 포함하거나 이것으로 구성되는 폴리펩타이드 스페이서이고; 및/또는
    공동자극 도메인은 SEQ ID NO: 12 또는 이에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 변이체를 함유하거나; 및/또는
    일차 시그널링 도메인은 SEQ ID NO: 13 또는 14 또는 15 또는 이에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖거나; 및/또는
    scFv는 RASQDISKYLN (SEQ ID NO: 35)의 CDRLl 서열, SRLHSGV (SEQ ID NO: 36)의 CDRL2 서열, 및/또는 GNTLPYTFG (SEQ ID NO: 37)의 CDRL3 서열 및/또는 DYGVS (SEQ ID NO: 38)의 CDRH1 서열, VIWGSETTYYNSALKS (SEQ ID NO: 39)의 CDRH2 서열, 및/또는 YAMDYWG (SEQ ID NO: 40)의 CDRH3 서열을 함유하거나 또는 scFv는 FMC63의 중쇄 가변 영역 및 FMC63의 경쇄 가변 영역 및/또는 FMC63의 CDRLl 서열, FMC63의 CDRL2 서열, FMC63의 CDRL3 서열, FMC63의 CDRH1 서열, FMC63의 CDRH2 서열, 및 FMC63의 CDRH3 서열을 포함하거나 또는 동일한 에피토프에 결합하거나 또는 전술한 임의의 것들과의 결합을 놓고 경쟁하고, 경우에 따라 scFv는 하기의 순서로 VH, 경우에 따라 SEQ ID NO: 24를 포함하는 링커, 및 VL를 함유하고, 및/또는 scFv는 유연한 링커를 함유하거나 및/또는 SEQ ID NO: 24에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
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