CN109557235A - 一种瓜蒌片的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种瓜蒌片的检测方法，本发明的方法包括1)瓜蒌片的鉴别和2)瓜蒌片中精氨酸的含量测定，其中，含量测定部分，步骤如下：步骤1，对照品溶液的制备，步骤2，供试品溶液的制备，步骤3，测定，取上述对照品溶液及供试品溶液，加入磷酸盐缓冲溶液，茚三酮溶液置煮沸放冷，加水定容，照中国药典2010年版一部附录V A紫外－可见分光光度法，在560‑580nm的波长处测定吸光度，按外标两点法计算，计算精氨酸含量。
Description
技术领域：
本发明涉及一种药物制剂的检测方法，特别涉及一种中药制剂瓜蒌片的检测方法。
背景技术：
瓜蒌片是由瓜蒌皮和瓜蒌子的提取物加工制成。为薄膜衣片，除去包衣后，片芯显棕褐色；味微苦。其功能主治为：宽胸，理气。用于冠心病胸闷，心绞痛。
[规格]每片重0.3g
[用法用量]口服，一次4片，一日3次。
瓜蒌片制法如下：
取瓜蒌子65份，压碎去油后，与瓜蒌皮35份混合，加水煎煮2次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩稠膏状，在80℃以下干燥成干浸膏，加适量辅料，制成颗粒，压片，包薄膜衣，即得。
瓜蒌子：为葫芦科植物栝楼Trichosanthes kirilowii Maxim.的干燥成熟种
瓜蒌皮：为葫芦科植物栝楼Trichosanthes kirilowii Maxim.的干燥成熟果皮。
瓜蒌片是由瓜蒌皮和瓜蒌子的提取物加工制成。瓜蒌中含三萜皂苷，有机酸及盐类、树脂、糖类和色素、多种氨基酸及生物碱等。瓜蒌为中医治疗胸痹之要药，具有清热涤痰、宽胸散结、润燥滑肠之功效，临床上广泛用于肺热咳嗽、痰浊黄稠、胸痹心痛、结胸痞满、乳痈、肺痈、肠痈肿痛等症。药理实验表明：瓜蒌有扩张冠状动脉，增加血流量，提高耐缺氧能力，降低血清胆固醇，抗菌，抗癌等多种作用。所含皂苷及皮中总氨基酸有祛痰作用；瓜蒌注射液对豚鼠离体心脏有扩冠作用；对神经垂体引起的大鼠急性心肌缺血有明显的保护作用；并有降血脂作用。对金色葡萄球菌，肺炎链球菌，绿脓杆菌，溶血性链球菌及流感杆菌等杆菌等有抑制作用。
瓜蒌始载于《神农本草经》，具有多种生理活性，临床应用广泛，尤其在治疗心血管系统疾病具有独特的疗效，而且价格低廉，药材资源丰富，毒副作用小，具有重要的开发利用价值。
瓜蒌片的配方如下：
瓜蒌皮与瓜蒌子混合干浸膏260g
适量微晶纤维素17.7g
淀粉20.8g
硬脂酸镁1.6g
包衣粉15g
制成1000片
但由于瓜蒌片化学成分种类较多且理化性质差异较大，现有技术没有对有关的成分进行含量测定。因此有必要选择有关化学成分作为检测指标。以控制产品质量，本发明选择了关化学成分作为检测指标，并经过筛选获得了检测方法，为控制产品质量提供了保证。
发明内容：
本发明针对中药制剂瓜蒌片，建立了新的检测方法，实现对制剂的质量评价体系。本发明公开一种瓜蒌片的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)瓜蒌片的鉴别：
步骤1，供试品溶液的配制：取瓜蒌片，研碎，加乙醇回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解；
步骤2，对照品溶液溶液的配制：取精氨酸对照品，加甲醇制成溶液；
步骤3，鉴别
照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述2种溶液分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水＝3:1:1为展开剂，展开，取出，热风吹干，喷以茚三酮试液，加热至斑点显色清晰；
2)瓜蒌片中精氨酸的含量测定：
步骤1，对照品溶液的制备：称取精氨酸对照品加水溶解作为储备液，量取上述储备液0.8-1.2ml和3.5-4.5ml，分别置10ml容量瓶中，加水稀释至刻度；
步骤2，供试品溶液的制备：称定瓜蒌片加水回流，再加乙醇，过滤，乙醇蒸干，剩余水溶液定容；
步骤3，测定：取上述对照品溶液及供试品溶液，加入磷酸盐缓冲溶液，茚三酮溶液置煮沸放冷，加水定容，照中国药典2010年版一部附录V A紫外－可见分光光度法，在560-580nm的波长处测定吸光度，按外标两点法计算，计算精氨酸含量。
优选的，本发明所述的测定方法，步骤如下：
1)瓜蒌片的鉴别：
步骤1，供试品溶液的配制：取瓜蒌片，研碎，加乙醇50ml，回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解；
步骤2，对照品溶液溶液的配制：取精氨酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液；
步骤3，鉴别：照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述2种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水＝3:1:1为展开剂，展开，取出，热风吹干，喷以茚三酮试液，加热至斑点显色清晰；
2)瓜蒌片中精氨酸的含量测定：
步骤1，对照品溶液的制备：称取精氨酸对照品10mg，置10ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液，量取上述储备液1ml和4ml，分别置10ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得；
步骤2，供试品溶液的制备：称定瓜蒌片，加水回流1小时，加乙醇80ml，混匀，静置，过滤，乙醇蒸干，剩余水溶液转移置50ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得；
步骤3，测定：量取上述对照品溶液及供试品溶液1ml，另以水作为空白溶液，量取1ml，分别置25ml容量瓶中，再分别加入磷酸盐缓冲溶液0.5ml，茚三酮溶液0.5ml，摇匀，置沸水浴中煮沸15分钟，取出，迅速放冷，加水稀释至刻度，摇匀，照中国药典2010年版一部附录V A紫外－可见分光光度法，在570nm的波长处测定吸光度，按外标两点法计算，计算精氨酸含量。
最优选的，本发明所述的测定方法，步骤如下：
1)瓜蒌片的鉴别：
步骤1，供试品溶液的配制：取瓜蒌片0.5g，研碎，加75％乙醇50ml，回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解；
步骤2，对照品溶液溶液的配制：取精氨酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的混合溶液；
步骤3，鉴别：照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述2种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水＝3:1:1为展开剂，展开，取出，热风吹干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
2)瓜蒌片中精氨酸的含量测定：
步骤1，对照品溶液的制备：精密称取在105℃干燥至恒重的精氨酸对照品10mg，置10ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液。精密量取上述储备液1ml和4ml，分别置10ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得；
步骤2，供试品溶液的制备：精密称定供试品5g，加水50ml回流1小时，加乙醇80ml，混匀，静置0.5小时，过滤，乙醇蒸干，剩余水溶液转移置50ml容量瓶中，加水适量稀释至刻度，摇匀，即得；
步骤3，测定：精密量取上述两种浓度的对照品溶液及供试品溶液1ml，另以水作为空白溶液，精密量取1ml，分别置25ml容量瓶中，再分别加入pH8.0磷酸盐缓冲溶液0.5ml，2％茚三酮溶液0.5ml，摇匀，置沸水浴中煮沸15分钟，取出，迅速放冷，加水稀释至刻度，摇匀，照中国药典2010年版一部附录V A紫外－可见分光光度法，在570nm的波长处测定吸光度，按外标两点法计算，计算精氨酸含量。
本发明所述的测定方法，其中，pH8.0磷酸盐缓冲溶液配制方法如下：取0.067mol/L磷酸氢二钠溶液95ml和0.067mol/L磷酸二氢钾溶液5ml,混匀，即得。
本发明所述的测定方法，其中，2％茚三酮溶液配制方法如下：取水合茚三酮2g，加水50ml和氯化亚锡80mg，搅拌均匀，分次加少量水使溶解，放于暗处静置24小时，滤过，滤液加水至100ml，摇匀。
瓜蒌的有效成分包括三萜皂甙，氨基酸，生物碱等，本发明为此进行了研究，对不同成分的检测表明，其他有效成分含量的检测操作过程复杂，周期较长，灵敏度等不高，最终确定以测定瓜蒌片中精氨酸的含量为依据，提出了用紫外分光光度法检测样品中的精氨酸含量的方法，该法操作简便、准确、灵敏，可用于瓜蒌片质量控制。
本发明的检测方法是经过筛选获得的，筛选过程如下：
1.测定条件的选择
仪器：UV759s型紫外分光光度计
检测波长：570nm
2.供试品溶液的制备
精密称定供试品5g，加水50ml回流1小时，加乙醇80ml，混匀，静置0.5小时，过滤，乙醇蒸干，剩余水溶液转移置50ml容量瓶中，加水适量稀释至刻度，摇匀。
精密量取上述供试品溶液1ml，另以水作为空白溶液，精密量取1ml，分别置25ml容量瓶中，再分别加入磷酸盐缓冲溶液(pH8.0)0.5ml，2％茚三酮溶液0.5ml，摇匀，置沸水浴中煮沸15分钟，取出，迅速放冷，加水稀释至刻度，摇匀，即得。
本发明对供试品进行了研究，通过对原辅料成分的性质分析，筛选出用水回流提取再加入乙醇使有关物质沉淀除去，再通过磷酸缓冲液进行茚三酮反应得到供试品溶液的方法，该方法使本发明快捷灵敏，准确率大大提高。
3.对照品溶液的制备
精密称取在105℃干燥至恒重的精氨酸对照品10mg，置10ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液。精密量取上述储备液1ml和4ml，分别置10ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。
精密量取上述两种浓度的对照品溶液各1ml，另以水作为空白溶液，精密量取1ml，分别置25ml容量瓶中，再分别加入磷酸盐缓冲溶液(pH8.0)0.5ml，2％茚三酮溶液0.5ml，摇匀，置沸水浴中煮沸15分钟，取出，迅速放冷，加水稀释至刻度，摇匀，即得。
4.检测波长的选择
取精氨酸对照品溶液进行紫外扫描。精氨酸在570nm左右处有最大吸收，再参考相关文献资料，故以此波长为检测波长。
5.阴性样品考察
按工艺制备不含瓜蒌子和瓜蒌皮药材的阴性样品，按供试品溶液的制备方法制备，作为阴性对照品溶液。阴性无干扰。
6.线性关系和线性范围的考察
精密称取在105℃干燥至恒重的精氨酸对照品50.23mg，置50ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液。分别精密量取上述储备液1.0ml、2.0ml、4.0ml、6.0ml、8.0ml置10ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。上述5种浓度的对照品溶液，另以水作为空白溶液，精密量取1ml，分别置25ml容量瓶中，再分别加入磷酸盐缓冲溶液(pH8.0)0.5ml，2％茚三酮溶液0.5ml，摇匀，置沸水浴中煮沸15分钟，取出，迅速放冷，加水稀释至刻度，摇匀，在570nm处测定吸收度。以对照品精氨酸浓度(μg)为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。数据如表1：
表1：瓜蒌片标准曲线数据表
| 吸光度(A) | 0.0361 | 0.2874 | 0.7224 | 1.2023 | 1.5959 |
| 浓度(μg/ml) | 4.0184 | 8.0368 | 16.0736 | 24.1104 | 32.1472 |
结果表明精氨酸在4.0184μg/ml～32.1472μg/ml范围内，吸光度与浓度具有良好的线性关系。
7.样品重复性考察
取本品的同一批(20121001)样品5份，精密称定，按供试品的制备方法处理样品，依据测定法测定含量。结果如表2。
表2：样品重复性试验
| 实验次数 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 平均 | RSD％ |
| 含量(mg/片) | 0.73 | 0.71 | 0.72 | 0.72 | 0.73 | 0.73 | 1.2％ |
由表可知，5次测定结果的相对标准偏差RSD％＜2.0％，本方法重现性良好。
8.样品溶液稳定性考察
取同一批号(20121001)供试品溶液，分别在0，0.5，1,1.5，2小时按含量测定方法重复测定5次，记录吸光度。结果见表3：
表3：稳定性试验
| 时间(小时) | 0 | 0.5 | 1 | 1.5 | 2 | RSD％ |
| 吸光度 | 0.3614 | 0.3570 | 0.3514 | 0.3480 | 0.3460 | 1.8％ |
由表可知，此批的吸光度的RSD％＜2.0％，供试品在2小时内稳定。
9.样品精密度考察
取同一批号(20121001)供试品，按照含量测定方法重复测定6次，记录吸光度。结果见表4。
表4：供试品的精密度
| 供试品溶液 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | RSD％ |
| 吸光度 | 0.3415 | 0.3412 | 0.3423 | 0.3420 | 0.3418 | 0.3424 | 0.1％ |
精氨酸吸光度平均值为0.3419，RSD＜2.0％，n＝6。
10.样品回收率考察
采用加样回收法测定。
取已知含量的样品(20121001)(精氨酸含量2.467mg/g)，分别添加精氨酸对照品，按上述检验条件测定。依下列公式计算回收率，结果见下表。
表5：精氨酸回收率试验
精氨酸平均回收率：97.53％，RSD％：0.6％。结果表明：本法具有良好的回收率。
11.样品的测定
分别按拟定的含量测定方法对三批样品进行测定含量,结果见下表。
表6：三批样品含量测定
12.结论
根据多批含量测定结果，考虑到瓜蒌皮和瓜蒌子的原药材含量差异，以及制剂生产损耗、重量差异(±5％)、贮藏损耗等因素，暂定本品每片含总氨基酸以精氨酸(C6H14N4O2)计，不得少于0.50mg。
附图说明：
图1瓜蒌片标准曲线
具体实施方式：
以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。
实施例1
【含量测定】
对照品溶液的制备 精密称取在105℃干燥至恒重的精氨酸对照品10mg，置10ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液。精密量取上述储备液1ml和4ml，分别置10ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。
供试品溶液的制备 精密称定供试品5g，加水50ml回流1小时，加乙醇80ml，混匀，静置0.5小时，过滤，乙醇蒸干，剩余水溶液转移置50ml容量瓶中，加水适量稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法 精密量取上述两种浓度的对照品溶液及供试品溶液1ml，另以水作为空白溶液，精密量取1ml，分别置25ml容量瓶中，再分别加入磷酸盐缓冲溶液(pH8.0)(取0.067mol/L磷酸氢二钠溶液95ml和0.067mol/L磷酸二氢钾溶液5ml,混匀，即得)0.5ml，2％茚三酮溶液(取水合茚三酮2g，加水50ml和氯化亚锡80mg，搅拌均匀，分次加少量水使溶解，放于暗处静置24小时，滤过，滤液加水至100ml，摇匀)0.5ml，摇匀，置沸水浴中煮沸15分钟，取出，迅速放冷，加水稀释至刻度，摇匀。照紫外－可见分光光度法(中国药典2010年版一部附录V A)，在570nm的波长处测定吸光度，按外标两点法计算，计算精氨酸含量。
三批样品含量测定结果
Claims (5)
1.一种瓜蒌片的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)瓜蒌片的鉴别：
步骤1，供试品溶液的配制：取瓜蒌片，研碎，加乙醇回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解；
步骤2，对照品溶液溶液的配制：取精氨酸对照品，加甲醇制成溶液；
步骤3，鉴别
照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述2种溶液分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水＝3:1:1为展开剂，展开，取出，热风吹干，喷以茚三酮试液，加热至斑点显色清晰；
2)瓜蒌片中精氨酸的含量测定：
步骤1，对照品溶液的制备：称取精氨酸对照品加水溶解作为储备液，量取上述储备液0.8-1.2ml和3.5-4.5ml，分别置10ml容量瓶中，加水稀释至刻度；
步骤2，供试品溶液的制备：称定瓜蒌片加水回流，再加乙醇，过滤，乙醇蒸干，剩余水溶液定容；
步骤3，测定：取上述对照品溶液及供试品溶液，加入磷酸盐缓冲溶液，茚三酮溶液置煮沸放冷，加水定容，照中国药典2010年版一部附录V A紫外－可见分光光度法，在560-580nm的波长处测定吸光度，按外标两点法计算，计算精氨酸含量。
2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述方法步骤如下：
1)瓜蒌片的鉴别：
步骤1，供试品溶液的配制：取瓜蒌片，研碎，加乙醇50ml，回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解；
步骤2，对照品溶液溶液的配制：取精氨酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液；
步骤3，鉴别：照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述2种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水＝3:1:1为展开剂，展开，取出，热风吹干，喷以茚三酮试液，加热至斑点显色清晰；
2)瓜蒌片中精氨酸的含量测定：
步骤1，对照品溶液的制备：称取精氨酸对照品10mg，置10ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液，量取上述储备液1ml和4ml，分别置10ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得；
步骤2，供试品溶液的制备：称定瓜蒌片，加水回流1小时，加乙醇80ml，混匀，静置，过滤，乙醇蒸干，剩余水溶液转移置50ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得；
步骤3，测定：量取上述对照品溶液及供试品溶液1ml，另以水作为空白溶液，量取1ml，分别置25ml容量瓶中，再分别加入磷酸盐缓冲溶液0.5ml，茚三酮溶液0.5ml，摇匀，置沸水浴中煮沸15分钟，取出，迅速放冷，加水稀释至刻度，摇匀，照中国药典2010年版一部附录VA紫外－可见分光光度法，在570nm的波长处测定吸光度，按外标两点法计算，计算精氨酸含量。
3.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述方法步骤如下：
1)瓜蒌片的鉴别：
步骤1，供试品溶液的配制：取瓜蒌片0.5g，研碎，加75％乙醇50ml，回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解；
步骤2，对照品溶液溶液的配制：取精氨酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的混合溶液；
步骤3，鉴别：照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述2种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水＝3:1:1为展开剂，展开，取出，热风吹干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
2)瓜蒌片中精氨酸的含量测定：
步骤1，对照品溶液的制备：精密称取在105℃干燥至恒重的精氨酸对照品10mg，置10ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液。精密量取上述储备液1ml和4ml，分别置10ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得；
步骤2，供试品溶液的制备：精密称定供试品5g，加水50ml回流1小时，加乙醇80ml，混匀，静置0.5小时，过滤，乙醇蒸干，剩余水溶液转移置50ml容量瓶中，加水适量稀释至刻度，摇匀，即得；
步骤3，测定：精密量取上述两种浓度的对照品溶液及供试品溶液1ml，另以水作为空白溶液，精密量取1ml，分别置25ml容量瓶中，再分别加入pH8.0磷酸盐缓冲溶液0.5ml，2％茚三酮溶液0.5ml，摇匀，置沸水浴中煮沸15分钟，取出，迅速放冷，加水稀释至刻度，摇匀，照中国药典2010年版一部附录V A紫外－可见分光光度法，在570nm的波长处测定吸光度，按外标两点法计算，计算精氨酸含量。
4.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，其中，pH8.0磷酸盐缓冲溶液配制方法如下：取0.067mol/L磷酸氢二钠溶液95ml和0.067mol/L磷酸二氢钾溶液5ml，混匀，即得。
5.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，其中，2％茚三酮溶液配制方法如下：取水合茚三酮2g，加水50ml和氯化亚锡80mg，搅拌均匀，分次加少量水使溶解，放于暗处静置24小时，滤过，滤液加水至100ml，摇匀。
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Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1460493A (zh) * | 2003-06-09 | 2003-12-10 | 上海第一生化药业有限公司 | 瓜蒌皮注射液及制备方法 |
| CN103063542A (zh) * | 2013-01-01 | 2013-04-24 | 吉林草还丹药业有限公司 | 一种小儿白贝止咳糖浆的综合检测方法 |
| CN108517018A (zh) * | 2018-06-26 | 2018-09-11 | 安徽咱家田生态农业有限公司 | 一种瓜蒌皮活性成分提取工艺 |
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2019
- 2019-02-01 CN CN201910104440.4A patent/CN109557235A/zh active Pending
Patent Citations (3)
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| 鄢海燕 等: "瓜蒌薤白滴丸中总氨基酸的含量测定方法研究", 《中国药房》 * |
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