CN109553669B - 一种降低花生蛋白Ara h 1致敏性的处理方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种降低花生蛋白Ara h 1致敏性的处理方法，本发明先通过TG酶处理使蛋白Ara h 1交联聚合，然后进一步通过超高静压使得蛋白结构发生变化再聚合，使得蛋白的致敏位点包埋在蛋白内，从而降低蛋白Ara h 1的致敏性。本发明工艺步骤简单、耗能低、处理时间短、处理温度低、不会对花生蛋白自身的品质有影响，安全无毒，并且有一定的杀死和钝化食品中微生物的作用。

Description

一种降低花生蛋白Ara h 1致敏性的处理方法
技术领域
本发明属于食品加工的技术领域，具体涉及一种降低花生蛋白Ara h 1致敏性的处理方法。
背景技术
花生被粮食与农业组织(FAO)认定为“八大”过敏原之一。在几个欧洲国家和北美洲，花生过敏是北美洲和一些欧洲国家常见的、严重的、长期性的食物过敏。据国际免疫联合会命名小组委员会称，目前已确定并命名了17种花生过敏原。Ara h 1是一种主要的花生过敏原，占花生总蛋白的12％-16％，超过90％的花生敏感患者血清IgE可识别Ara h1。天然Ara h 1是稳定的三聚体(180kDa或以上)由单体(63.5kDa)之间的疏水相互作用结合，它具有良好的热稳定性，且不易被酶消化。
花生过敏的临床表现为血压降低，面部和喉咙肿胀，从而会导致呼吸困难甚至休克。经研究表明，极少量的花生过敏原即可引起过敏反应，现阶段医生可以治疗过敏症状，但无法彻底治愈过敏。对于花生过敏，唯一有效的治疗方法就是避免食用过敏原。因此，利用各种加工手段降低花生产品的致敏性对人类的健康生活有着深远的意义。
目前，降低花生蛋白致敏性的方法主要有热处理，酶处理，辐射处理，基因工程法等等。虽然这些处理方法能够一定程度的降低花生蛋白致敏性，但是同时也会降低产品中的营养品质及感官品质。超高静压(HHP)是一种新兴的非热食品加工技术，是指将密封在柔性容器中的材料置于压力容器(通常用水或其他流体作为压力传递介质)中，在静态高压(＞100MPa)下处理一段时间从而改变其性能。HHP在加工过程中不会损害食品中的小分子营养素，且能在常温下杀死和钝化食品中微生物和酶，比其他食品加工方法更安全、更健康，同时这也是一种节能技术，一旦达到一定的压力，它就不需要额外的能量。另外，转谷氨酰胺酶(TG)是一种交联酶，其可以使蛋白发生聚集使蛋白上的致敏位点被包埋，从而降低蛋白的致敏性，但其单独作用于花生蛋白Ara h 1仅仅使得致敏性降低16.85％，效果并不显著。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术缺陷，提供一种降低花生蛋白Ara h 1致敏性的处理方法。
本发明的技术方案如下：
一种降低花生蛋白Ara h 1致敏性的处理方法，包括如下步骤：
(1)将新鲜花生剥壳去红衣，再依次经液氮研磨、脱脂、浸提、硫酸铵盐分级沉淀、透析和阴离子交换层析柱纯化，获得Ara h1蛋白液；
(2)将上述Ara h 1蛋白液用TG酶进行处理，获得处理液，TG酶与Ara h 1蛋白的质量比为0.8-1.2∶8-12，处理温度为36-38℃，处理时间为1.5-2.3h；
(3)将上述处理液进行真空包装后，置于超高静压设备中进行超高静压处理，即成，其中超高静压处理的压力为180-220MPa，时间为8-12min，温度为室温。
在本发明的一个优选实施方案中，所述TG酶与Ara h1蛋白的质量比为0.9-1.1∶9-11。
进一步优选的，所述TG酶与Ara h 1蛋白的质量比为1∶10。
在本发明的一个优选实施方案中，所述步骤(2)中的处理温度为37℃，处理时间为2h。
在本发明的一个优选实施方案中，所述超高静压处理的压力为190-210MPa，时间为9-11min。
进一步优选的，所述超高静压处理的压力为200MPa，时间为10min。
本发明的有益效果是：
1、本发明先通过TG酶处理使蛋白Ara h 1交联聚合，然后进一步通过超高静压使得蛋白结构发生变化再聚合，使得蛋白的致敏位点包埋在蛋白内，从而降低蛋白Ara h 1的致敏性。
2、本发明工艺步骤简单、耗能低、处理时间短、处理温度低、不会对花生蛋白自身的品质有影响，安全无毒，并且有一定的杀死和钝化食品中微生物的作用。
附图说明
图1为本发明实施例1至6中的实验结果对比图。
具体实施方式
以下通过具体实施方式结合附图对本发明的技术方案进行进一步的说明和描述。
实施例1
(1)花生经过剥壳去红衣，液氮研磨、脱脂、浸提、硫酸铵盐分级沉淀、透析、阴离子交换层析柱(DEAE-Sepharose Fast Flow)纯化等一系列提取过程最终得到较纯的Ara h 1蛋白；
(2)将上述得到的Ara h 1蛋白液用TG酶进行酶处理，TG酶酶处理的条件为：酶与蛋白的质量比为1∶10，酶反应温度为37℃，酶反应时间为2h；
(3)对照未经上述步骤(2)处理的Ara h 1蛋白，采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)来测定蛋白致敏性的变化程度。往预先包被Ara h 1蛋白(Ara h 1)抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的Ara h 1蛋白(Ara h 1)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，计算样品含量。过敏蛋白致敏性的计算公式为：致敏性＝(OD待测样品/OD空白对照)×100％。经过双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)法测得致敏性为83.15％，相对空白(未处理蛋白的致敏性为100％)下降了16.85％。
实施例2
(1)花生经过剥壳去红衣，液氮研磨、脱脂、浸提、硫酸铵盐分级沉淀、透析、阴离子交换层析柱(DEAE-Sepharose Fast Flow)纯化等一系列提取过程最终得到较纯的Ara h 1蛋白；
(2)将上述得到的Ara h 1蛋白液用TG酶进行酶处理，TG酶酶处理的条件为：酶与蛋白的质量比为1∶10，酶反应温度为37℃，酶反应时间为2h；
(3)将上述得到的蛋白液(即处理液)自封袋装袋后真空包装，然后置于超高静压设备中进行超高静压处理，超高静压处理的条件为：压力为200MPa，时间为10min，温度为常温。
(4)对照未经上述步骤(2)和(3)处理的蛋白，采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)来测定蛋白致敏性的变化程度。往预先包被Ara h 1蛋白(Ara h 1)抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的Ara h 1蛋白(Ara h 1)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，计算样品含量。过敏蛋白致敏性的计算公式为：致敏性＝(OD待测样品/OD空白对照)×100％。经过双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)法测得致敏性为31.86％，相对空白(未处理蛋白的致敏性为100％)下降了68.14％。
实施例3
(1)花生经过剥壳去红衣，液氮研磨、脱脂、浸提、硫酸铵盐分级沉淀、透析、阴离子交换层析柱(DEAE-Sepharose Fast Flow)纯化等一系列提取过程最终得到较纯的Ara h 1蛋白；
(2)将上述得到的Ara h 1蛋白液用TG酶进行酶处理，TG酶酶处理的条件为：酶与蛋白的质量比为1∶10，酶反应温度为37℃，酶反应时间为2h；
(3)将上述得到的蛋白液自封袋装袋后真空包装，然后置于超高静压设备中进行超高静压处理，超高静压处理的条件为：压力为300MPa，时间为10min，温度为常温。
(4)对照未经上述步骤(2)和(3)处理的蛋白，采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)来测定蛋白致敏性的变化程度。往预先包被Ara h 1蛋白(Ara h 1)抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的Ara h 1蛋白(Ara h 1)呈正相关。用酶标仪在450m波长下测定吸光度(OD值)，计算样品含量。过敏蛋白致敏性的计算公式为：致敏性＝(OD待测样品/OD空白对照)×100％。经过双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)法测得致敏性为70.52％，相对空白(未处理蛋白的致敏性为100％)下降了29.48％。
实施例4
(1)花生经过剥壳去红衣，液氮研磨、脱脂、浸提、硫酸铵盐分级沉淀、透析、阴离子交换层析柱(DEAE-Sepharose Fast Flow)纯化等一系列提取过程最终得到较纯的Ara h 1蛋白；
(2)将上述得到的Ara h 1蛋白液用TG酶进行酶处理，TG酶酶处理的条件为：酶与蛋白的质量比为1∶10，酶反应温度为37℃，酶反应时间为2h；
(3)将上述得到的蛋白液自封袋装袋后真空包装，然后置于超高静压设备中进行超高静压处理，超高静压处理的条件为：压力为400MPa，时间为10min，温度为常温。
(4)对照未经上述步骤(2)和(3)处理的蛋白，采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)来测定蛋白致敏性的变化程度。往预先包被Ara h 1蛋白(Ara h 1)抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的Ara h 1蛋白(Ara h 1)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，计算样品含量。过敏蛋白致敏性的计算公式为：致敏性＝(OD待测样品/OD空白对照)×100％。经过双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)法测得致敏性为60.37％，相对空白(未处理蛋白的致敏性为100％)下降了39.63％。
实施例5
(1)花生经过剥壳去红衣，液氮研磨、脱脂、浸提、硫酸铵盐分级沉淀、透析、阴离子交换层析柱(DEAE-Sepharose Fast Flow)纯化等一系列提取过程最终得到较纯的Ara h 1蛋白；
(2)将上述得到的Ara h 1蛋白液用TG酶进行酶处理，TG酶酶处理的条件为：酶与蛋白的质量比为1∶10，酶反应温度为37℃，酶反应时间为2h；
(3)将上述得到的蛋白液自封袋装袋后真空包装，然后置于超高静压设备中进行超高静压处理，超高静压处理的条件为：压力为500MPa，时间为10min，温度为常温。
(4)对照未经上述步骤(2)和(3)处理的蛋白，采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)来测定蛋白致敏性的变化程度。往预先包被Ara h 1蛋白(Ara h 1)抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的Ara h 1蛋白(Ara h 1)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，计算样品含量。过敏蛋白致敏性的计算公式为：致敏性＝(OD待测样品/OD空白对照)×100％。经过双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)法测得致敏性为76.24％，相对空白(未处理蛋白的致敏性为100％)下降了23.76％。
实施例6
(1)花生经过剥壳去红衣，液氮研磨、脱脂、浸提、硫酸铵盐分级沉淀、透析、阴离子交换层析柱(DEAE-Sepharose Fast Flow)纯化等一系列提取过程最终得到较纯的Ara h 1蛋白；
(2)将上述得到的Ara h 1蛋白液用TG酶进行酶处理，TG酶酶处理的条件为：酶与蛋白的质量比为1∶10，酶反应温度为37℃，酶反应时间为2h；
(3)将上述得到的蛋白液自封袋装袋后真空包装，然后置于超高静压设备中进行超高静压处理，超高静压处理的条件为：压力为600MPa，时间为10min，温度为常温。
(4)对照未经上述步骤(2)和(3)处理的蛋白，采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)来测定蛋白致敏性的变化程度。往预先包被Ara h 1蛋白(Ara h 1)抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的Ara h 1蛋白(Ara h 1)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，计算样品含量。过敏蛋白致敏性的计算公式为：致敏性＝(OD待测样品/OD空白对照)×100％。经过双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)法测得致敏性为80.78％，相对空白(未处理蛋白的致敏性为100％)下降了19.22％。
将上述实施例1至6的结果进行对比，具体如图1所示，0(TG)、200、300、400、500、600依次对应实施例1至6。
以上所述，仅为本发明的较佳实施例而已，故不能依此限定本发明实施的范围，即依本发明专利范围及说明书内容所作的等效变化与修饰，皆应仍属本发明涵盖的范围内。

Claims (4)

1.一种降低花生蛋白Ara h 1致敏性的处理方法，其特征在于：包括如下步骤：
（1）将新鲜花生剥壳去红衣，再依次经液氮研磨、脱脂、浸提、硫酸铵盐分级沉淀、透析和阴离子交换层析柱纯化，获得Ara h 1蛋白液；
（2）将上述Ara h 1蛋白液用TG酶进行处理，获得处理液，TG酶与Ara h 1蛋白的质量比为0.9-1.1:9-11，处理温度为36-38℃，处理时间为1.5-2.3h；
（3）将上述处理液进行真空包装后，置于超高静压设备中进行超高静压处理，即成，其中超高静压处理的压力为190-210MPa，时间为9-11min，温度为室温。
2.如权利要求1所述的处理方法，其特征在于：所述TG酶与Ara h 1蛋白的质量比为1:10。
3.如权利要求1所述的处理方法，其特征在于：所述步骤（2）中的处理温度为37℃，处理时间为2h。
4.如权利要求1所述的处理方法，其特征在于：所述超高静压处理的压力为200MPa，时间为10min。
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SE01 Entry into force of request for substantive examination
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GR01 Patent grant
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