CN109513001A - 一种a群c群脑膜炎球菌多糖吸附白喉破伤风联合疫苗及生产工艺 - Google Patents
一种a群c群脑膜炎球菌多糖吸附白喉破伤风联合疫苗及生产工艺 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109513001A CN109513001A CN201710845710.8A CN201710845710A CN109513001A CN 109513001 A CN109513001 A CN 109513001A CN 201710845710 A CN201710845710 A CN 201710845710A CN 109513001 A CN109513001 A CN 109513001A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- tetanus
- vaccine
- polysaccharide
- tetanus toxoid
- toxoid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/095—Neisseria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/05—Actinobacteria, e.g. Actinomyces, Streptomyces, Nocardia, Bifidobacterium, Gardnerella, Corynebacterium; Propionibacterium
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/08—Clostridium, e.g. Clostridium tetani
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/0003—General processes for their isolation or fractionation, e.g. purification or extraction from biomass
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/04—Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/70—Multivalent vaccine
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
本发明提供一种A群C群脑膜炎球菌多糖吸附白喉破伤风联合疫苗,包括吸附白喉破伤风疫苗和A群C群脑膜炎多糖疫苗,所述吸附白喉破伤风疫苗和A群C群脑膜炎多糖疫苗分装在两个试剂瓶中,其中,每1ml所述吸附白喉破伤风疫苗中含白喉类毒素为20Lf以下,破伤风类毒素为3Lf以下,氢氧化铝为3mg以下,氯化钠为7.5mg‑9mg;所述A群C群脑膜炎多糖疫苗每1次人用剂量0.5ml中含A群脑膜炎球菌多糖50微克,C群脑膜炎球菌多糖50微克,乳糖8毫克,本发明主要针对5‑6岁儿童进行多种高发病的预防,起到一针多防的作用,同时,本发明还提供一种A群C群脑膜炎球菌多糖吸附白喉破伤风联合疫苗生产工艺。
Description
技术领域
本发明属于疫苗生产技术领域,尤其是涉及一种A群C群脑膜炎球菌多糖吸附白喉破伤风联合疫苗及生产工艺。
背景技术
流脑是由脑膜炎奈瑟氏菌(Neisseria 1eningitides,Nm)引起的急性呼吸道传染病,此病起病急,病情发展快,病死率高,可以引起大流行,危害极其严重,过去在我国此病的发病率很高,曾发生几次周期性大流行,夺取了成千上万人的生命,造成了巨大的损失,近年来,流脑多次在我国中小学生人群中引起爆发和流行,给广大中小学生的身体健康带来了巨大威胁。
白喉(diphtheria)是由白喉杆菌所引起的一种急性呼吸道传染病,以发热,气憋,声音嘶哑、犬吠样咳嗽、咽(扁)桃体及其周围组织出现白色伪膜为特征,严重者全身中毒症状明显,可并发心肌炎和周围神经麻痹。
破伤风是破伤风梭状芽胞杆菌经由皮肤或黏膜伤口侵入人体,在缺氧环境下生长繁殖,产生毒素而引起肌痉挛的一种特异性感染,破伤风毒素主要侵袭神经系统中的运动神经元,因此本病以牙关紧闭、阵发性痉挛、强直性痉挛的为临床特征,主要波及的肌群包括咬肌、背棘肌、腹肌、四肢肌等,破伤风潜伏期通常为7~8天,可短至24小时或长达数月、数年。
最近几十年国家根据免疫计划对儿童免费注射流脑疫苗、白喉、破伤风疫苗,但是这些疫苗作用单一,在注射流脑疫苗的期间,还需另外注射白喉疫苗、破伤风疫苗才能起到预防白喉和破伤风的作用,而且5-6岁儿童是这四种流行病的高发群体,需要加强免疫保护,A群C群流脑多糖吸附白喉破伤风联合疫苗针对以上情况,只需注射一剂,就能对5-6岁儿童同时预防4种流行病。
发明内容
本发明提供一种能够同时预防多种疾病、符合2010版《中国药典》相关要求的A群C群脑膜炎球菌多糖吸附白喉破伤风联合疫苗。
本发明还提供一种A群C群脑膜炎球菌多糖吸附白喉破伤风联合疫苗的生产工艺。
为解决上述技术问题,本发明采用的技术方案是:一种A群C群脑膜炎球菌多糖吸附白喉破伤风联合疫苗,包括:吸附白喉破伤风疫苗和A群C群脑膜炎多糖疫苗,所述吸附白喉破伤风疫苗和A群C群脑膜炎多糖疫苗分装在两个试剂瓶中,
其中,每1ml所述吸附白喉破伤风疫苗中含白喉类毒素为20Lf以下,破伤风类毒素为3Lf以下,氢氧化铝为3mg以下,氯化钠为7.5mg-9mg;
所述A群C群脑膜炎多糖疫苗每1次人用剂量0.5ml中含A群脑膜炎球菌多糖50微克,C群脑膜炎球菌多糖50微克,乳糖8毫克。
进一步地,所述吸附白喉破伤风疫苗加入到A群C群脑膜炎多糖疫苗中后的pH值在6.0-7.0。
进一步地,所述吸附白喉破伤风疫苗加入到A群C群脑膜炎多糖疫苗中后游离甲醛的含量为0.2mg/ml以下。
进一步地,所述吸附白喉破伤风疫苗加入到A群C群脑膜炎多糖疫苗中后渗透压摩尔浓度为280-320mOsmol/kg。
一种A群C群脑膜炎球菌多糖吸附白喉破伤风联合疫苗的生产工艺,包括以下步骤:
步骤一、A群脑膜炎球菌多糖单价原液制备
(1)启开A群脑膜炎奈瑟球菌(CMCC 29201)工作种子批菌种,经传代后,检测培养特性经镜检合格后接种于培养基上,发酵罐培养,在培养过程中进行纯菌检查,涂片做革兰氏染色镜检,于菌对数生长期的后期进行取 样,检测菌浓度和纯菌检查,合格后在培养液中加入终浓度1%的甲醛进行灭活,并将灭活后的培养液在18000rpm进行连续流离心,收取上清液,向上清液中加入终浓度3%的十六烷基三甲基溴化铵,充分混匀后,18000rpm进行连续流离心,收集沉淀物;
(2)向沉淀物中加入适量的氯化钙溶液,慢慢研磨,使多糖与十六烷基三甲基溴化铵完全解离后,加入乙醇至终浓度为25%,在2-8℃下静置4小时以上,18000rpm进行连续流离心,收集上清液,在上清液中加入冷乙醇,至终浓度为80%,充分混匀,18000rpm进行连续流离心,收集沉淀物,即为粗多糖;
(3)将粗多糖溶解于20m mol/L、pH8.0的Tris-HCl缓冲液中,用AKTA纯化系统通过Capto adhere和DEAE Sepharosetm串联层析柱进行纯化,检测波长为206nm、280nm和260nm,去除杂蛋白和核酸,收集得到A群脑膜炎球菌多糖溶液;
(4)向A群脑膜炎球菌多糖溶液中加入乙醇至终浓度75%,轻轻搅拌,静置4小时以上,4℃下6000rpm离心1小时,收集沉淀物,用无水乙醇进行洗涤,干燥后用灭菌注射用水溶解,除菌过滤,即为A群脑膜炎球菌多糖单价原液;
(5)对A群脑膜炎球菌多糖单价原液按《中华人民共和国药典》要求进行检定,经检定合格后的A群脑膜炎球菌多糖单价原液在-20℃以下冻存;
步骤二、C群脑膜炎球菌多糖单价原液制备
(1)制备生产用种子:启开C群脑膜炎奈瑟球菌(CMCC 29205)工作种子批菌种,经传代后,检测培养特性经镜检合格后接种于培养基上,发酵罐培养,在培养过程中进行纯菌检查,涂片做革兰氏染色镜检,于菌对数生长期的后期进行取样,检测菌浓度和纯菌检查,合格后在培养液中加入终浓度1%的甲醛进行灭活,将灭活后的培养液18000rpm进行连续流离心,收取 上清液,向上清液中加入终浓度3%的十六烷基三甲基溴化铵,充分混匀后,18000rpm进行连续流离心,收集沉淀物;
(2)向沉淀物中加入适量的氯化钙溶液,慢慢研磨,使多糖与十六烷基三甲基溴化铵完全解离后,加入乙醇至终浓度为25%,在2-8℃下静置4小时以上,18000rpm进行连续流离心,收集上清液,向上清液中加入冷乙醇,至终浓度为80%,充分混匀,18000rpm进行连续流离心,收集沉淀物,得到粗多糖;
(3)将粗多糖溶解于20m mol/L、pH8.0的Tris-HCl缓冲液中,用AKTA纯化系统通过Capto adhere和DEAE Sepharosetm串联层析柱进行纯化,检测波长为206nm、280nm和260nm,去除杂蛋白和核酸,收集得到C群脑膜炎球菌多糖溶液;
(4)向C群脑膜炎球菌多糖溶液中加入乙醇至终浓度75%,轻轻搅拌,静置4小时以上,4℃下6000rpm离心1小时,收集沉淀物,用无水乙醇进行洗涤,干燥后用灭菌注射用水溶解,除菌过滤,即为C群脑膜炎球菌多糖单价原液;
(5)对C群脑膜炎球菌多糖单价原液按《中华人民共和国药典》要求进行检定,经检定合格后的C群多糖单价原液在-20℃以下冻存;
步骤三、白喉类毒素原液制备
(1)启开白喉杆菌(CMCC 38007)工作种子批菌种,传代至产毒培养基种子管2-3代,再传至胰酶牛肉消化液培养基中进行培养,在培养过程中进行纯菌检查,涂片做革兰氏染色镜检,并检查毒素效价,当毒素效价不再升高时,停止培养,将培养液在4℃、6000rpm离心1小时,收取上清液,向上清液中加入终浓度0.5%甲醛溶液在35-37℃下脱毒48小时后,采用硫酸铵、活性炭二段盐析法进行精制,收集毒素;
(2)将收集的毒素用0.9%的氯化钠溶液,进行透析,去除残留的硫酸 铵;
(3)检测脱毒到期的类毒素絮状单位,并做脱毒检查;
(4)对白喉类毒素原液按《中华人民共和国药典》要求进行检定,检定合格后于2-8℃避光保存;
步骤四、破伤风类毒素原液制备
(1)启开破伤风梭状芽胞杆菌(CMCC 64008)工作种子批菌种,传代至产毒培养基种子管2-3代,再传至酸水解酪蛋白培养基培养,在培养过程中进行纯菌检查,涂片做革兰氏染色镜检,并检查毒素效价,7-8天后,当毒素效价不再升高时,停止培养,加入终浓度0.3%甲醛在36℃脱毒25天,期间进行脱毒检查;
(2)脱毒结束后,将培养液调节pH至6.8-7.4,过滤除去菌体,将滤液用孔径为10-40KD的超滤膜进行超滤,直至滤液的体积为原体积的20%,再向滤液中加入质量体积比为25%的硫酸铵盐析,静置24小时后离心分离,将离心后的沉淀用注射用水完全溶解后,再次用孔径为30KD的超滤膜超滤,直至滤液中硫酸铵的质量百分含量小于0.025%,过滤收集类毒素;
(3)将收集的类毒素用0.9%的氯化钠溶液,进行透析,去除残留的硫酸铵,即为破伤风类毒素原液;
(4)对破伤风类毒素原液按《中华人民共和国药典》要求进行检定,检定合格后于2-8℃保存;
步骤五、吸附白喉破伤风疫苗的配制
配制氢氧化铝佐剂,将白喉类毒素原液和破伤风类毒素原液依次加入到稀释的氢氧化铝佐剂,得到吸附白喉破伤风疫苗;
步骤六、A群C群脑膜炎多糖疫苗的配制
将A群脑膜炎球菌多糖单价原液和C群脑膜炎球菌多糖单价原液混合后,加入乳糖分装冻干,得到A群C群脑膜炎多糖疫苗;
步骤七、A群C群脑膜炎球菌多糖吸附白喉破伤风联合疫苗的制备
根据《中华人民共和国药典》要求,对吸附白喉破伤风疫苗半成品、冻干A群C群脑膜炎多糖疫苗半成品进行无菌检查,经检查,无菌符合规定的,按“生物制品分装和冻干规程”进行分装,每盒含有冻干A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗和吸附白喉破伤风疫苗各1支,按“生物制品包装规程”进行包装,即得到A群C群脑膜炎球菌多糖吸附白喉破伤风联合疫苗。
进一步地,步骤一(1)和步骤二(1)中A群、C群脑膜炎奈瑟球菌(CMCC 29201)工作种子批菌种的生产工艺为:A群脑膜炎奈瑟球菌(CMCC 29201)、C群脑膜炎奈瑟球菌(CMCC29205)主种子批启开,接种于10%羊血琼脂培养基上进行传代,35℃二氧化碳环境中培养16-20小时后,长出光滑、湿润、灰白色菌落,将菌落在无菌环境下刮到已灭菌的20%的脱脂牛奶溶液中,混匀,再将含菌种的牛奶分装至1ml的菌种管中冻干,即为工作种子批。
进一步地,步骤三(1)中白喉杆菌(CMCC 38007)工作种子批菌种的生产工艺为:白喉杆菌(CMCC 38007)主种子批启开,接种于适宜培养基上进行传代,35℃培养16-20小时后,长出光滑、灰白色菌落,将菌落在无菌环境下刮到已灭菌的20%的脱脂牛奶溶液中,混匀,再将含菌种的牛奶分装至1ml的菌种管中冻干,即为工作种子批。
进一步地,步骤四(1)中破伤风梭状芽胞杆菌(CMCC 64008)工作种子批菌种的生产工艺为:破伤风梭状芽胞杆菌(CMCC 64008)主种子批启开,接种于适宜培养基上进行传代,37℃培养24-48小时后,分装至冻存管,即为工作种子批。
与现有技术相比,本发明具有的优点和有益效果是:由于疫苗的成分复杂,仅是疫苗成分的简单混合可能会引起抗原干扰,导致多糖特异性抗体滴度降低,因此经过长期的经验积累和临床研究反馈,得到本发明的A群C群脑膜炎球菌多糖吸附白喉破伤风联合疫苗,明确了联合疫苗中白喉类毒素和 破伤风类毒素的毒素效价范围及其它有效组分的质量范围,和A群C群脑膜炎多糖疫苗每1次人用剂量0.5ml中含A群脑膜炎球菌多糖、C群脑膜炎球菌多糖和乳糖的具体含量,此规格的联合疫苗主要针对的是5-6岁儿童,预防效果更好,同时,联合疫苗混合后的pH值在6.0-7.0之间,更接近人体的体液的pH值,降低排异反应,具有显著的进步,另外本发明详细描述了A群C群脑膜炎球菌多糖吸附白喉破伤风联合疫苗的生产工艺,过程公开充分,生产安全可控,本发明的A群C群脑膜炎球菌多糖吸附白喉破伤风联合疫苗能够同时预防白喉、破伤风和由A、C群脑膜炎球菌引起的脑脊髓膜炎,有效降低了5-6岁儿童的发病概率。
具体实施方式
下面对本发明的具体实施方式作详细说明。
一种A群C群脑膜炎球菌多糖吸附白喉破伤风联合疫苗,包括:吸附白喉破伤风疫苗和A群C群脑膜炎多糖疫苗,所述吸附白喉破伤风疫苗和A群C群脑膜炎多糖疫苗分装在两个试剂瓶中,
其中,每1ml所述吸附白喉破伤风疫苗中含白喉类毒素为20Lf以下,破伤风类毒素为3Lf以下,氢氧化铝为3mg以下,氯化钠为7.5mg-9mg;
所述A群C群脑膜炎多糖疫苗每1次人用剂量0.5ml中含A群脑膜炎球菌多糖50微克,C群脑膜炎球菌多糖50微克,乳糖8毫克。
进一步地,所述吸附白喉破伤风疫苗加入到A群C群脑膜炎多糖疫苗中后的pH值在6.0-7.0,更接近人体的体液的pH值,降低排异反应。
进一步地,所述吸附白喉破伤风疫苗加入到A群C群脑膜炎多糖疫苗中后游离甲醛的含量为0.2mg/ml以下,防止残留过多的游离甲醛随疫苗注入身体后产生制激性反应,实验证明,在游离甲醛为0.2mg/ml以下时,符合大部分5-6岁儿童的身体体质。
进一步地,所述吸附白喉破伤风疫苗加入到A群C群脑膜炎多糖疫苗中 后渗透压摩尔浓度为280-320mOsmol/kg,接近正常人体血液的渗透压摩尔浓度范围285-310mOsmol/kg,不需要对联合疫苗进行稀释处理。
一种A群C群脑膜炎球菌多糖吸附白喉破伤风联合疫苗的生产工艺,包括以下步骤:
1、A群、C群脑膜炎奈瑟球菌、白喉杆菌和破伤风梭状芽胞杆菌工作种子批菌种的生产
A群、C群脑膜炎奈瑟球菌(CMCC 29201)工作种子批菌种的生产工艺为:A群脑膜炎奈瑟球菌(CMCC 29201)、C群脑膜炎奈瑟球菌(CMCC 29205)主种子批启开,接种于10%羊血琼脂培养基上进行传代,35℃二氧化碳环境中培养16-20小时后,长出光滑、湿润、灰白色菌落,将菌落在无菌环境下刮到已灭菌的20%的脱脂牛奶溶液中,混匀,再将含菌种的牛奶分装至1ml的菌种管中冻干,即为工作种子批。
白喉杆菌(CMCC 38007)工作种子批菌种的生产工艺为:白喉杆菌(CMCC 38007)主种子批启开,接种于适宜培养基上进行传代,35℃培养16-20小时后,长出光滑、灰白色菌落,将菌落在无菌环境下刮到已灭菌的20%的脱脂牛奶溶液中,混匀,再将含菌种的牛奶分装至1ml的菌种管中冻干,即为工作种子批。
破伤风梭状芽胞杆菌(CMCC 64008)工作种子批菌种的生产工艺为:破伤风梭状芽胞杆菌(CMCC 64008)主种子批启开,接种于适宜培养基上进行传代,37℃培养24-48小时后,分装至冻存管,即为工作种子批。
2、A群C群脑膜炎球菌多糖吸附白喉破伤风联合疫苗的生产工艺
步骤一、A群脑膜炎球菌多糖单价原液制备
(1)启开A群脑膜炎奈瑟球菌(CMCC 29201)工作种子批菌种,经传代后,检测培养特性经镜检合格后接种于培养基上,发酵罐培养,在培养过程中进行纯菌检查,涂片做革兰氏染色镜检,于菌对数生长期的后期进行取 样,检测菌浓度和纯菌检查,合格后在培养液中加入终浓度1%的甲醛进行灭活,并将灭活后的培养液在18000rpm进行连续流离心,收取上清液,向上清液中加入终浓度3%的十六烷基三甲基溴化铵,充分混匀后,18000rpm进行连续流离心,收集沉淀物;
(2)向沉淀物中加入适量的氯化钙溶液,慢慢研磨,使多糖与十六烷基三甲基溴化铵完全解离后,加入乙醇至终浓度为25%,在2-8℃下静置4小时以上,18000rpm进行连续流离心,收集上清液,在上清液中加入冷乙醇,至终浓度为80%,充分混匀,18000rpm进行连续流离心,收集沉淀物,即为粗多糖;
(3)将粗多糖溶解于20m mol/L、pH8.0的Tris-HCl缓冲液中,用AKTA纯化系统通过Capto adhere和DEAE Sepharosetm串联层析柱进行纯化,检测波长为206nm、280nm和260nm,去除杂蛋白和核酸,收集得到A群脑膜炎球菌多糖溶液;
(4)向A群脑膜炎球菌多糖溶液中加入乙醇至终浓度75%,轻轻搅拌,静置4小时以上,4℃下6000rpm离心1小时,收集沉淀物,用无水乙醇进行洗涤,干燥后用灭菌注射用水溶解,除菌过滤,即为A群脑膜炎球菌多糖单价原液;
(5)对A群脑膜炎球菌多糖单价原液按《中华人民共和国药典》要求进行检定,经检定合格后的A群脑膜炎球菌多糖单价原液在-20℃以下冻存;
步骤二、C群脑膜炎球菌多糖单价原液制备
(1)制备生产用种子:启开C群脑膜炎奈瑟球菌(CMCC 29205)工作种子批菌种,经传代后,检测培养特性经镜检合格后接种于培养基上,发酵罐培养,在培养过程中进行纯菌检查,涂片做革兰氏染色镜检,于菌对数生长期的后期进行取样,检测菌浓度和纯菌检查,合格后在培养液中加入终浓度1%的甲醛进行灭活,将灭活后的培养液18000rpm进行连续流离心,收取 上清液,向上清液中加入终浓度3%的十六烷基三甲基溴化铵,充分混匀后,18000rpm进行连续流离心,收集沉淀物;
(2)向沉淀物中加入适量的氯化钙溶液,慢慢研磨,使多糖与十六烷基三甲基溴化铵完全解离后,加入乙醇至终浓度为25%,在2-8℃下静置4小时以上,18000rpm进行连续流离心,收集上清液,向上清液中加入冷乙醇,至终浓度为80%,充分混匀,18000rpm进行连续流离心,收集沉淀物,得到粗多糖;
(3)将粗多糖溶解于20m mol/L、pH8.0的Tris-HCl缓冲液中,用AKTA纯化系统通过Capto adhere和DEAE Sepharosetm串联层析柱进行纯化,检测波长为206nm、280nm和260nm,去除杂蛋白和核酸,收集得到C群脑膜炎球菌多糖溶液;
(4)向C群脑膜炎球菌多糖溶液中加入乙醇至终浓度75%,轻轻搅拌,静置4小时以上,4℃下6000rpm离心1小时,收集沉淀物,用无水乙醇进行洗涤,干燥后用灭菌注射用水溶解,除菌过滤,即为C群脑膜炎球菌多糖单价原液;
(5)对C群脑膜炎球菌多糖单价原液按《中华人民共和国药典》要求进行检定,经检定合格后的C群多糖单价原液在-20℃以下冻存;
步骤三、白喉类毒素原液制备
(1)启开白喉杆菌(CMCC 38007)工作种子批菌种,传代至产毒培养基种子管2-3代,再传至胰酶牛肉消化液培养基中进行培养,在培养过程中进行纯菌检查,涂片做革兰氏染色镜检,并检查毒素效价,当毒素效价不再升高时,停止培养,将培养液在4℃、6000rpm离心1小时,收取上清液,向上清液中加入终浓度0.5%甲醛溶液在35-37℃下脱毒48小时后,采用硫酸铵、活性炭二段盐析法进行精制,收集毒素;
(2)将收集的毒素用0.9%的氯化钠溶液,进行透析,去除残留的硫酸 铵;
(3)检测脱毒到期的类毒素絮状单位,并做脱毒检查;
(4)对白喉类毒素原液按《中华人民共和国药典》要求进行检定,检定合格后于2-8℃避光保存;
步骤四、破伤风类毒素原液制备
(1)启开破伤风梭状芽胞杆菌(CMCC 64008)工作种子批菌种,传代至产毒培养基种子管2-3代,再传至酸水解酪蛋白培养基培养,在培养过程中进行纯菌检查,涂片做革兰氏染色镜检,并检查毒素效价,7-8天后,当毒素效价不再升高时,停止培养,加入终浓度0.3%甲醛在36℃脱毒25天,期间进行脱毒检查;
(2)脱毒结束后,将培养液调节pH至6.8-7.4,过滤除去菌体,将滤液用孔径为10-40KD的超滤膜进行超滤,直至滤液的体积为原体积的20%,再向滤液中加入质量体积比为25%的硫酸铵盐析,静置24小时后离心分离,将离心后的沉淀用注射用水完全溶解后,再次用孔径为30KD的超滤膜超滤,直至滤液中硫酸铵的质量百分含量小于0.025%,过滤收集类毒素;
(3)将收集的类毒素用0.9%的氯化钠溶液,进行透析,去除残留的硫酸铵,即为破伤风类毒素原液;
(4)对破伤风类毒素原液按《中华人民共和国药典》要求进行检定,检定合格后于2-8℃保存;
步骤五、吸附白喉破伤风疫苗的配制
配制氢氧化铝佐剂,将白喉类毒素原液和破伤风类毒素原液依次加入到稀释的氢氧化铝佐剂,得到吸附白喉破伤风疫苗,每1次人用剂量0.5ml,含白喉类毒素效价应不低于30IU,破伤风类毒素效价不低于40IU;
步骤六、A群C群脑膜炎多糖疫苗的配制
将A群脑膜炎球菌多糖单价原液和C群脑膜炎球菌多糖单价原液混合 后,加入乳糖分装冻干,得到A群C群脑膜炎多糖疫苗;
步骤七、A群C群脑膜炎球菌多糖吸附白喉破伤风联合疫苗的制备
根据《中华人民共和国药典》要求,对吸附白喉破伤风疫苗半成品、冻干A群C群脑膜炎多糖疫苗半成品进行无菌检查,经检查,无菌符合规定的,按“生物制品分装和冻干规程”进行分装,每盒含有冻干A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗和吸附白喉破伤风疫苗各1支,按“生物制品包装规程”进行包装,即得到A群C群脑膜炎球菌多糖吸附白喉破伤风联合疫苗。
3、根据《中华人民共和国药典》要求,对A群C群脑膜炎球菌多糖吸附白喉破伤风联合疫苗成品进行检定
(1)鉴别试验
a)经免疫双扩散法测定,本工艺制得的A群C群脑膜炎球菌多糖吸附白喉破伤风联合疫苗分别与A群脑膜炎奈瑟球菌抗血清、C群脑膜炎奈瑟球菌抗血清产生特异性沉淀线。
b)经凝胶免疫沉淀试验测定,本工艺制得的A群C群脑膜炎球菌多糖吸附白喉破伤风联合疫苗经解聚液溶解佐剂后取上清,做凝胶免疫沉淀试验,分别与白喉抗毒素、破伤风抗毒素出现免疫沉淀反应。
(2)外观检查:冻干A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗为白色疏松体,吸附白喉破伤风疫苗摇匀后为乳白色悬液,无凝块或异物,吸附白喉破伤风疫苗加入到A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗后,A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗迅速复溶,无异物。
(3)装量差异检查:根据《中华人民共和国药典》要求进行装量检查。
(4)冻干A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗水分测定:应不高于3.0%。
(5)冻干A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗多糖含量:每1次人用剂量含A群、C群多糖应在50-60微克。
(6)冻干A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗多糖分子量大小测定:A群、C 群多糖KD小于0.4,在KD小于0.5的多糖回收率,A群多糖大于75%,C群多糖大于80%。
(7)无菌检查:根据《中华人民共和国药典》要求,无菌检查应符合规定。
(8)冻干A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗异常毒性检查,根据《中华人民共和国药典》要求,异常毒性检查应符合规定。
(9)冻干A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗热原检查,根据《中华人民共和国药典》要求,热原检查应符合规定。
(10)冻干A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗内毒素检查,每一次人用剂量不高于1250EU。
(11)吸附白喉破伤风疫苗特异性毒性检查:根据《中华人民共和国药典》要求,特异性毒性检查应符合规定。
(12)效力试验:
a)将A群C群脑膜炎球菌多糖吸附白喉破伤风联合疫苗皮下注射12-14gBaLb/c小鼠,每组10只,另取同批小鼠10只作对照,注射生理氯化钠溶液,分别在第0天、第14天皮下注射两次,每次注射剂量分别含A群、C群多糖各2.5微克,于第一针后21-28天采血,以ELISA法测定血清中A群和C群多糖IgG抗体滴度,以生理氯化钠溶液对照组小鼠血清的吸光度值得出Cutoff值,疫苗组抗体阳转率为100%,具体数值如表1所示:
表1 A群和C群多糖IgG抗体滴度测试数据
b)根据《中华人民共和国药典》检测,每剂A群C群脑膜炎球菌多糖吸附白喉破伤风联合疫苗白喉类毒素效价应不低于30IU
用体重300~350g健康豚鼠30只,随机分成6组,每组5只,第1组每只皮下注射A群C群脑膜炎球菌多糖吸附白喉破伤风联合疫苗0.2ml;第2组每只皮下注射含5IU/ml白喉类毒素标准品0.2ml;第3组每只皮下注射含10IU/ml白喉类毒素标准品0.2ml;第4组每只皮下注射含20IU/ml白喉类毒素标准品0.2ml;第5组每只皮下注射含40IU/ml白喉类毒素标准品0.2ml;第6组每只皮下注射含80IU/ml白喉类毒素标准品0.2ml;于第30天各皮下攻击100个MLD白喉毒素,观察5天,同时另用体重240~270g豚鼠3只,每只皮下注射1个MLD白喉毒素作为对照,其中2只应发病,并在96小时内死亡,允许另1只晚死或发病,用平行线法计算出每剂A群C群脑膜炎球菌多糖吸附白喉破伤风联合疫苗白喉类毒素效价约为40IU,具体数值如表2所示:
表2 每剂联合疫苗中白喉类毒素效价对比试验数据
c)根据《中华人民共和国药典》检测,每剂A群C群脑膜炎球菌多糖吸附白喉破伤风联合疫苗破伤风类毒素效价应不低于40IU
用生理氯化钠溶液将破伤风类毒素标准品和A群C群脑膜炎球菌多糖吸 附白喉破伤风联合疫苗进行稀释,用0.2%明胶磷酸盐缓冲液稀释破伤风毒素,用体重300~350g健康豚鼠100只,随机分成10组,每组10只。第1组每只皮下注射2倍稀释的A群C群脑膜炎球菌多糖吸附白喉破伤风联合疫苗1ml;第2组每只皮下注射4倍稀释的A群C群脑膜炎球菌多糖吸附白喉破伤风联合疫苗1ml;第3组每只皮下注射8倍稀释的A群C群脑膜炎球菌多糖吸附白喉破伤风联合疫苗1ml;第4组每只皮下注射16倍稀释的A群C群脑膜炎球菌多糖吸附白喉破伤风联合疫苗1ml;第5组每只皮下注射32倍稀释的A群C群脑膜炎球菌多糖吸附白喉破伤风联合疫苗1ml;第6组每只皮下注射含40IU/ml破伤风类毒素标准品1ml;第7组每只皮下注射含20IU/ml破伤风类毒素标准品1ml;第8组每只皮下注射含10IU/ml破伤风类毒素标准品1ml;第9组每只皮下注射含5IU/ml破伤风类毒素标准品1ml;第10组每只皮下注射含2.5IU/ml破伤风类毒素标准品1ml;免疫30天后,每只免疫豚鼠皮下注射100LD50破伤风毒素1ml,另取体重300~350g健康豚鼠5只作为对照组,每只注射1LD50破伤风毒素1ml,攻击后观察5天,每日记录结果,用平行线法计算出每剂A群C群脑膜炎球菌多糖吸附白喉破伤风联合疫苗破伤风类毒素效价不低于40IU,具体数值如表3所示:
表3 每剂联合疫苗中破伤风类毒素效价对比试验数据
在本发明实施例的描述中,除非另有明确的规定和限定,术语“安装”、“相连”、“连接”应做广义理解,例如,可以是固定连接,也可以是可拆卸连接,或一体地连接;可以是机械连接,也可以是电连接;可以是直接相连,也可以通过中间媒介间接相连,可以是两个元件内部的连通。对于本领域的普通技术人员而言,可以具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。
在本发明的描述中,需要说明的是,术语“中心”、“上”、“下”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“内”、“外”等指示的方位或位置关系仅是为了便于描述本发明和简化描述,而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作,因此不能理解为对本发明的限制。此外,术语“第一”、“第二”、“第三”仅用于描述目的,而不能理解为指示或暗示相对重要性。
最后应说明的是:以上所述实施例,仅为本发明的具体实施方式,用以说明本发明的技术方案,而非对其限制,本发明的保护范围并不局限于此,尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明,本领域的普通技术人员应当理解:任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内,其依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改或可轻易想到变化,或者对其中部分技术特征进行等同替换;而这些修改、变化或者替换,并不使相应技术方案的本质脱离本发明实施例技术方案的精神和范围,都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此,本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。
Claims (8)
1.一种A群C群脑膜炎球菌多糖吸附白喉破伤风联合疫苗,其特征在于:包括:吸附白喉破伤风疫苗和A群C群脑膜炎多糖疫苗,所述吸附白喉破伤风疫苗和A群C群脑膜炎多糖疫苗分装在两个试剂瓶中,
其中,每1ml所述吸附白喉破伤风疫苗中含白喉类毒素为20Lf以下,破伤风类毒素为3Lf以下,氢氧化铝为3mg以下,氯化钠为7.5mg-9mg;
所述A群C群脑膜炎多糖疫苗每1次人用剂量0.5ml中含A群脑膜炎球菌多糖50微克,C群脑膜炎球菌多糖50微克,乳糖8毫克。
2.根据权利要求1所述的一种A群C群脑膜炎球菌多糖吸附白喉破伤风联合疫苗,其特征在于:所述吸附白喉破伤风疫苗加入到A群C群脑膜炎多糖疫苗中后的pH值在6.0-7.0。
3.根据权利要求2所述的一种A群C群脑膜炎球菌多糖吸附白喉破伤风联合疫苗,其特征在于:所述吸附白喉破伤风疫苗加入到A群C群脑膜炎多糖疫苗中后游离甲醛的含量为0.2mg/ml以下。
4.根据权利要求2所述的一种A群C群脑膜炎球菌多糖吸附白喉破伤风联合疫苗,其特征在于:所述吸附白喉破伤风疫苗加入到A群C群脑膜炎多糖疫苗中后渗透压摩尔浓度为280-320mOsmol/kg。
5.根据权利要求1-4任意所述的一种A群C群脑膜炎球菌多糖吸附白喉破伤风联合疫苗的生产工艺,其特征在于:包括以下步骤:
步骤一、A群脑膜炎球菌多糖单价原液制备
(1)启开A群脑膜炎奈瑟球菌(CMCC 29201)工作种子批菌种,经传代后,检测培养特性经镜检合格后接种于培养基上,发酵罐培养,在培养过程中进行纯菌检查,涂片做革兰氏染色镜检,于菌对数生长期的后期进行取样,检测菌浓度和纯菌检查,合格后在培养液中加入终浓度1%的甲醛进行灭活,并将灭活后的培养液在18000rpm进行连续流离心,收取上清液,向上清液中加入终浓度3%的十六烷基三甲基溴化铵,充分混匀后,18000rpm进行连续流离心,收集沉淀物;
(2)向沉淀物中加入适量的氯化钙溶液,慢慢研磨,使多糖与十六烷基三甲基溴化铵完全解离后,加入乙醇至终浓度为25%,在2-8℃下静置4小时以上,18000rpm进行连续流离心,收集上清液,在上清液中加入冷乙醇,至终浓度为80%,充分混匀,18000rpm进行连续流离心,收集沉淀物,即为粗多糖;
(3)将粗多糖溶解于20m mol/L、pH8.0的Tris-HCl缓冲液中,用AKTA纯化系统通过Capto adhere和DEAE Sepharosetm串联层析柱进行纯化,检测波长为206nm、280nm和260nm,去除杂蛋白和核酸,收集得到A群脑膜炎球菌多糖溶液;
(4)向A群脑膜炎球菌多糖溶液中加入乙醇至终浓度75%,轻轻搅拌,静置4小时以上,4℃下6000rpm离心1小时,收集沉淀物,用无水乙醇进行洗涤,干燥后用灭菌注射用水溶解,除菌过滤,即为A群脑膜炎球菌多糖单价原液;
(5)对A群脑膜炎球菌多糖单价原液按《中华人民共和国药典》要求进行检定,经检定合格后的A群脑膜炎球菌多糖单价原液在-20℃以下冻存;
步骤二、C群脑膜炎球菌多糖单价原液制备
(1)制备生产用种子:启开C群脑膜炎奈瑟球菌(CMCC 29205)工作种子批菌种,经传代后,检测培养特性经镜检合格后接种于培养基上,发酵罐培养,在培养过程中进行纯菌检查,涂片做革兰氏染色镜检,于菌对数生长期的后期进行取样,检测菌浓度和纯菌检查,合格后在培养液中加入终浓度1%的甲醛进行灭活,将灭活后的培养液18000rpm进行连续流离心,收取上清液,向上清液中加入终浓度3%的十六烷基三甲基溴化铵,充分混匀后,18000rpm进行连续流离心,收集沉淀物;
(2)向沉淀物中加入适量的氯化钙溶液,慢慢研磨,使多糖与十六烷基三甲基溴化铵完全解离后,加入乙醇至终浓度为25%,在2-8℃下静置4小时以上,18000rpm进行连续流离心,收集上清液,向上清液中加入冷乙醇,至终浓度为80%,充分混匀,18000rpm进行连续流离心,收集沉淀物,得到粗多糖;
(3)将粗多糖溶解于20m mol/L、pH8.0的Tris-HCl缓冲液中,用AKTA纯化系统通过Capto adhere和DEAE Sepharosetm串联层析柱进行纯化,检测波长为206nm、280nm和260nm,去除杂蛋白和核酸,收集得到C群脑膜炎球菌多糖溶液;
(4)向C群脑膜炎球菌多糖溶液中加入乙醇至终浓度75%,轻轻搅拌,静置4小时以上,4℃下6000rpm离心1小时,收集沉淀物,用无水乙醇进行洗涤,干燥后用灭菌注射用水溶解,除菌过滤,即为C群脑膜炎球菌多糖单价原液;
(5)对C群脑膜炎球菌多糖单价原液按《中华人民共和国药典》要求进行检定,经检定合格后的C群多糖单价原液在-20℃以下冻存;
步骤三、白喉类毒素原液制备
(1)启开白喉杆菌(CMCC 38007)工作种子批菌种,传代至产毒培养基种子管2-3代,再传至胰酶牛肉消化液培养基中进行培养,在培养过程中进行纯菌检查,涂片做革兰氏染色镜检,并检查毒素效价,当毒素效价不再升高时,停止培养,将培养液在4℃、6000rpm离心1小时,收取上清液,向上清液中加入终浓度0.5%甲醛溶液在35-37℃下脱毒48小时后,采用硫酸铵、活性炭二段盐析法进行精制,收集毒素;
(2)将收集的毒素用0.9%的氯化钠溶液,进行透析,去除残留的硫酸铵;
(3)检测脱毒到期的类毒素絮状单位,并做脱毒检查;
(4)对白喉类毒素原液按《中华人民共和国药典》要求进行检定,检定合格后于2-8℃避光保存;
步骤四、破伤风类毒素原液制备
(1)启开破伤风梭状芽胞杆菌(CMCC 64008)工作种子批菌种,传代至产毒培养基种子管2-3代,再传至酸水解酪蛋白培养基培养,在培养过程中进行纯菌检查,涂片做革兰氏染色镜检,并检查毒素效价,7-8天后,当毒素效价不再升高时,停止培养,加入终浓度0.3%甲醛在36℃脱毒25天,期间进行脱毒检查;
(2)脱毒结束后,将培养液调节pH至6.8-7.4,过滤除去菌体,将滤液用孔径为10-40KD的超滤膜进行超滤,直至滤液的体积为原体积的20%,再向滤液中加入质量体积比为25%的硫酸铵盐析,静置24小时后离心分离,将离心后的沉淀用注射用水完全溶解后,再次用孔径为30KD的超滤膜超滤,直至滤液中硫酸铵的质量百分含量小于0.025%,过滤收集类毒素;
(3)将收集的类毒素用0.9%的氯化钠溶液,进行透析,去除残留的硫酸铵,即为破伤风类毒素原液;
(4)对破伤风类毒素原液按《中华人民共和国药典》要求进行检定,检定合格后于2-8℃保存;
步骤五、吸附白喉破伤风疫苗的配制
配制氢氧化铝佐剂,将白喉类毒素原液和破伤风类毒素原液依次加入到稀释的氢氧化铝佐剂,得到吸附白喉破伤风疫苗;
步骤六、A群C群脑膜炎多糖疫苗的配制
将A群脑膜炎球菌多糖单价原液和C群脑膜炎球菌多糖单价原液混合后,加入乳糖分装冻干,得到A群C群脑膜炎多糖疫苗;
步骤七、A群C群脑膜炎球菌多糖吸附白喉破伤风联合疫苗的制备
根据《中华人民共和国药典》要求,对吸附白喉破伤风疫苗半成品、冻干A群C群脑膜炎多糖疫苗半成品进行无菌检查,经检查,无菌符合规定的,按“生物制品分装和冻干规程”进行分装,每盒含有冻干A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗和吸附白喉破伤风疫苗各1支,按“生物制品包装规程”进行包装,即得到A群C群脑膜炎球菌多糖吸附白喉破伤风联合疫苗。
6.根据权利要求5所述的一种A群C群脑膜炎球菌多糖吸附白喉破伤风联合疫苗的生产工艺,其特征在于:步骤一(1)和步骤二(1)中A群、C群脑膜炎奈瑟球菌(CMCC 29201)工作种子批菌种的生产工艺为:A群脑膜炎奈瑟球菌(CMCC 29201)、C群脑膜炎奈瑟球菌(CMCC29205)主种子批启开,接种于10%羊血琼脂培养基上进行传代,35℃二氧化碳环境中培养16-20小时后,长出光滑、湿润、灰白色菌落,将菌落在无菌环境下刮到已灭菌的20%的脱脂牛奶溶液中,混匀,再将含菌种的牛奶分装至1ml的菌种管中冻干,即为工作种子批。
7.根据权利要求5所述的一种A群C群脑膜炎球菌多糖吸附白喉破伤风联合疫苗的生产工艺,其特征在于:步骤三(1)中白喉杆菌(CMCC 38007)工作种子批菌种的生产工艺为:白喉杆菌(CMCC 38007)主种子批启开,接种于适宜培养基上进行传代,35℃培养16-20小时后,长出光滑、灰白色菌落,将菌落在无菌环境下刮到已灭菌的20%的脱脂牛奶溶液中,混匀,再将含菌种的牛奶分装至1ml的菌种管中冻干,即为工作种子批。
8.根据权利要求5所述的一种A群C群脑膜炎球菌多糖吸附白喉破伤风联合疫苗的生产工艺,其特征在于:步骤四(1)中破伤风梭状芽胞杆菌(CMCC64008)工作种子批菌种的生产工艺为:破伤风梭状芽胞杆菌(CMCC 64008)主种子批启开,接种于适宜培养基上进行传代,37℃培养24-48小时后,分装至冻存管,即为工作种子批。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201710845710.8A CN109513001A (zh) | 2017-09-18 | 2017-09-18 | 一种a群c群脑膜炎球菌多糖吸附白喉破伤风联合疫苗及生产工艺 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201710845710.8A CN109513001A (zh) | 2017-09-18 | 2017-09-18 | 一种a群c群脑膜炎球菌多糖吸附白喉破伤风联合疫苗及生产工艺 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN109513001A true CN109513001A (zh) | 2019-03-26 |
Family
ID=65767647
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201710845710.8A Pending CN109513001A (zh) | 2017-09-18 | 2017-09-18 | 一种a群c群脑膜炎球菌多糖吸附白喉破伤风联合疫苗及生产工艺 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN109513001A (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110452838A (zh) * | 2019-07-18 | 2019-11-15 | 艾美卫信生物药业(浙江)有限公司 | 一种crm197菌种培养基、配制方法及发酵培养方法 |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101428144A (zh) * | 2008-12-19 | 2009-05-13 | 长春长生生物科技股份有限公司 | 流脑多糖联合疫苗及制备工艺 |
CN102813917A (zh) * | 2012-08-17 | 2012-12-12 | 武汉生物制品研究所有限责任公司 | 无细胞百白破/b型流感嗜血杆菌-AC群脑膜炎球菌联合疫苗 |
CN104689309A (zh) * | 2015-03-27 | 2015-06-10 | 成都欧林生物科技股份有限公司 | 一种分离纯化的无细胞百白破-b型流感嗜血杆菌-A群C群脑膜炎球菌联合疫苗及其制备方法 |
CN104707134A (zh) * | 2015-03-27 | 2015-06-17 | 成都欧林生物科技股份有限公司 | 一种无细胞百日破联合疫苗及其制备方法 |
CN105031634A (zh) * | 2015-08-31 | 2015-11-11 | 成都欧林生物科技股份有限公司 | A群c群脑膜炎球菌多糖结合疫苗活化工艺 |
CN106367451A (zh) * | 2016-08-29 | 2017-02-01 | 成都欧林生物科技股份有限公司 | 一种a群c群脑膜炎球菌多糖的制备方法 |
-
2017
- 2017-09-18 CN CN201710845710.8A patent/CN109513001A/zh active Pending
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101428144A (zh) * | 2008-12-19 | 2009-05-13 | 长春长生生物科技股份有限公司 | 流脑多糖联合疫苗及制备工艺 |
CN102813917A (zh) * | 2012-08-17 | 2012-12-12 | 武汉生物制品研究所有限责任公司 | 无细胞百白破/b型流感嗜血杆菌-AC群脑膜炎球菌联合疫苗 |
CN104689309A (zh) * | 2015-03-27 | 2015-06-10 | 成都欧林生物科技股份有限公司 | 一种分离纯化的无细胞百白破-b型流感嗜血杆菌-A群C群脑膜炎球菌联合疫苗及其制备方法 |
CN104707134A (zh) * | 2015-03-27 | 2015-06-17 | 成都欧林生物科技股份有限公司 | 一种无细胞百日破联合疫苗及其制备方法 |
CN105031634A (zh) * | 2015-08-31 | 2015-11-11 | 成都欧林生物科技股份有限公司 | A群c群脑膜炎球菌多糖结合疫苗活化工艺 |
CN106367451A (zh) * | 2016-08-29 | 2017-02-01 | 成都欧林生物科技股份有限公司 | 一种a群c群脑膜炎球菌多糖的制备方法 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
任军 等: "联合疫苗应用现状及评价", 《中国生物工程杂志》 * |
国家药典委员会 编: "《中华人民共和国药典》", 30 June 2015, 中国医药科技出版社 * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110452838A (zh) * | 2019-07-18 | 2019-11-15 | 艾美卫信生物药业(浙江)有限公司 | 一种crm197菌种培养基、配制方法及发酵培养方法 |
CN110452838B (zh) * | 2019-07-18 | 2020-12-29 | 艾美卫信生物药业(浙江)有限公司 | 一种crm197菌种培养基、配制方法及发酵培养方法 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN103656631B (zh) | 多价肺炎球菌荚膜多糖-蛋白缀合物组合物及其制备方法 | |
CN103656632B (zh) | 多价肺炎球菌荚膜多糖组合物、其制备方法及应用 | |
CN103263666B (zh) | 猪圆环病毒2型、猪支原体肺炎二联灭活疫苗及其制备方法 | |
CN104689309A (zh) | 一种分离纯化的无细胞百白破-b型流感嗜血杆菌-A群C群脑膜炎球菌联合疫苗及其制备方法 | |
CN102813917B (zh) | 无细胞百白破/b型流感嗜血杆菌-AC群脑膜炎球菌联合疫苗 | |
CN101600459A (zh) | 多价肺炎球菌多糖-蛋白质共轭物组合物 | |
WO2013026385A1 (zh) | 四价脑膜炎球菌多糖疫苗的制备工艺 | |
CN103623401A (zh) | 多价肺炎球菌荚膜多糖-蛋白质共轭组合物及其制备方法 | |
CN105744951A (zh) | 细菌疫苗及其制备方法 | |
CN102294026A (zh) | 奶牛链球菌乳房炎灭活疫苗及其制备方法 | |
CN111500482A (zh) | 一种羊a型产气荚膜梭菌菌株及其灭活疫苗和疫苗制备方法 | |
CN108721616B (zh) | 一种禽巴氏杆菌荚膜多糖-蛋白结合疫苗及其制备方法 | |
CN104069488A (zh) | 多价肺炎球菌荚膜多糖-蛋白质共轭组合物及其制备方法 | |
CN104998255A (zh) | 新型acyw135群脑膜炎球菌结合疫苗及其制备方法 | |
CN103160555A (zh) | 一种促进产气荚膜梭菌高产外毒素的培养基及其培养方法和其应用 | |
CN104888209B (zh) | 一种b群流行性脑膜炎球菌重组蛋白疫苗及其制备方法 | |
CN106834168B (zh) | 一种猪链球菌2型弱毒株及其应用 | |
CN103721249B (zh) | 一种流脑疫苗及其制备方法 | |
CN109513001A (zh) | 一种a群c群脑膜炎球菌多糖吸附白喉破伤风联合疫苗及生产工艺 | |
CN105112342B (zh) | 一种副猪嗜血杆菌菌株五价疫苗的制备方法 | |
CN108295253A (zh) | 一种A、C群脑膜炎球菌-b型流感嗜血杆菌/乙型脑炎联合疫苗 | |
CN109010814A (zh) | 副猪嗜血杆菌和猪肺炎支原体二联灭活疫苗的生产方法 | |
CN110917344B (zh) | 一种液体疫苗组合物及其应用 | |
CN105749266A (zh) | 一种水貂出血性肺炎、肉毒梭菌中毒症二联灭活疫苗及其制备方法 | |
CN110904007B (zh) | 兽用诺维氏梭菌外毒素及其制备方法、产毒培养基和应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20190326 |
|
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |