CN109504666B - 锰过氧化物酶PcMnP1及其编码基因和应用 - Google Patents

锰过氧化物酶PcMnP1及其编码基因和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN109504666B
CN109504666B CN201811507429.4A CN201811507429A CN109504666B CN 109504666 B CN109504666 B CN 109504666B CN 201811507429 A CN201811507429 A CN 201811507429A CN 109504666 B CN109504666 B CN 109504666B
Authority
CN
China
Prior art keywords
ala
leu
pro
pcmnp1
manganese peroxidase
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201811507429.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109504666A (zh
Inventor
姚斌
苏小运
王晓璐
罗会颖
黄火清
柏映国
王亚茹
孟昆
涂涛
王苑
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Institute of Animal Science of CAAS
Original Assignee
Institute of Animal Science of CAAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Institute of Animal Science of CAAS filed Critical Institute of Animal Science of CAAS
Priority to CN201811507429.4A priority Critical patent/CN109504666B/zh
Publication of CN109504666A publication Critical patent/CN109504666A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109504666B publication Critical patent/CN109504666B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/0065—Oxidoreductases (1.) acting on hydrogen peroxide as acceptor (1.11)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L5/00—Preparation or treatment of foods or foodstuffs, in general; Food or foodstuffs obtained thereby; Materials therefor
    • A23L5/20—Removal of unwanted matter, e.g. deodorisation or detoxification
    • A23L5/25—Removal of unwanted matter, e.g. deodorisation or detoxification using enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y111/00—Oxidoreductases acting on a peroxide as acceptor (1.11)
    • C12Y111/01—Peroxidases (1.11.1)
    • C12Y111/01013—Manganese peroxidase (1.11.1.13)

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明属于农业生物领域，具体涉及锰过氧化物酶PcMnP1及其编码基因和应用。本发明提供了一种的锰过氧化物酶PcMnP1，其氨基酸序列如SEQ ID No.1或SEQ ID No.3所示，本发明的锰过氧化物酶能有效的降解不同结构类型的霉菌毒素，可作为一种新型的酶制剂，广泛用于食品和饲料霉菌毒素脱毒领域。

Description

锰过氧化物酶PcMnP1及其编码基因和应用
技术领域
本发明属于农业生物领域，具体涉及锰过氧化物酶PcMnP1及其编码基因和应用。
背景技术
霉菌毒素是真菌次级代谢产物，对家畜、家禽和人类的健康有害。常见的霉菌毒素包括黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素(脱氧雪腐镰刀菌烯醇)、桔霉素、赭曲霉毒素、伏马菌素、展青霉素和单端孢霉菌毒素，可以分为具环状结构和不具环状结构的两类毒素。大多数霉菌毒素，如黄曲霉毒素和玉米赤霉烯酮，属于具环状结构的亚组中，通常通过真菌聚酮途径进行合成。例如，黄曲霉毒素(aflatoxin)B1由黄曲霉(Aspergillus flavus)产生，具有一个核心的香豆素环和两侧的五元碳环和两个并列的二氢呋喃环，其是很强的肝脏致癌物。此外，玉米赤霉烯酮的结构是间二羟基苯甲酸酚内酯，伏马菌素则具有22碳对氨基苯酚线性骨架，侧链为两个丙三酸。
物理吸附(或灭活)以及生物转化是将食物和饲料中的霉菌毒素脱毒的两种主要方式。除此之外，使用微生物，特别是通过微生物产生的酶，进行霉菌毒素的脱毒是一种新兴的手段。现有技术中漆酶、泛解酸内酯水解酶、过氧化物酶以及一些尚不能分类的酶可通过氧化或水解机理降解黄曲霉毒素和玉米赤霉烯酮。来自于木质纤维素降解菌的锰过氧化物酶(MnP)是一组参与木质素氧化降解的酶。现有技术中公开的少数几个微生物产酶均只能特异性的降解黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮等一到两种霉菌毒素，因此，在实际应用中受到极大的限制。
发明内容
本发明的目的在于提供一种锰过氧化物酶PcMnP1。
本发明的再一目的在于提供上述锰过氧化物酶PcMnP1的编码基因。
本发明的再一目的在于提供含有上述编码基因的重组表达载体。
本发明的再一目的在于提供含有上述编码基因的重组菌株。
本发明的再一目的在于提供上述锰过氧化物酶PcMnP1的制备方法。
本发明的再一目的在于提供上述锰过氧化物酶PcMnP1的应用。
本发明的锰过氧化物酶PcMnP1，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示：
MAFGSLLAFVALAAITRAAPTAESAVCPDGTRVTNAACCAFIPLAQDLQETLFQGDCGEDAHEVIRLTFHDAIAISQSLGPQAGGGADGSMLHFPTIEPNFSANSGIDDSVNNLLPFMQKHDTISAADLVQFAGAVALSNCPGAPRLEFMAGRPNTTIPAVEGLIPEPQDSVTKILQRFEDAGNFSPFEVVSLLASHTVARADKVDETIDAAPFDSTPFTFDTQVFLEVLLKGTGFPGSNNNTGEVMSPLPLGSGSDTGEMRLQSDFALARDERTACFWQSFVNEQEFMAASFKAAMAKLAILGHSRSSLIDCSDVVPVPKPAVNKPATFPATKGPKDLDTLTCKALKFPTLTSDPGATETLIPHCSNGGMSCPGVQFDGPA
其中，该酶基因编码359个氨基酸，N端24个氨基酸为其信号肽序列，信号肽序列如SEQ ID No：2所示：
MAFGSLLAFVALAAITRAAPTAES
成熟的锰过氧化物酶PcMnP1的理论分子量为37.9kDa，其氨基酸序列如SEQIDNO.3所示：
AVCPDGTRVTNAACCAFIPLAQDLQETLFQGDCGEDAHEVIRLTFHDAIAISQSLGPQAGGGADGSMLHFPTIEPNFSANSGIDDSVNNLLPFMQKHDTISAADLVQFAGAVALSNCPGAPRLEFMAGRPNTTIPAVEGLIPEPQDSVTKILQRFEDAGNFSPFEVVSLLASHTVARADKVDETIDAAPFDSTPFTFDTQVFLEVLLKGTGFPGSNNNTGEVMSPLPLGSGSDTGEMRLQSDFALARDERTACFWQSFVNEQEFMAASFKAAMAKLAILGHSRSSLIDCSDVVPVPKPAVNKPATFPATKGPKDLDTLTCKALKFPTLTSDPGATETLIPHCSNGGMSCPGVQFDGPA
本发明还提供了编码上述锰过氧化物酶PcMnP1的基因序列，其基因组序列如SEQID No.4所示：
Atggccttcggttctctcctcgccttcgtggctctcgccgccataactcgcgccgccccgactgcggagtctgcagtctgtccagacggtacccgcgtcaccaacgcggcgtgctgcgctttcattccgctcgcacaggatttgcaagagactctgttccagggtgactgtggcgaagatgcccacgaagtcatccgtctgaccttccacgacgctattgcaatctcccagagcctaggtcctcaggctggcggcggtgctgacggctccatgctgcacttcccgacaatcgagcccaacttctccgccaacagcggcatcgatgactccgtcaacaacttgcttcccttcatgcagaaacacgacaccatcagtgccgccgatcttgtacagttcgccggtgcggtcgcgctgagcaactgcccaggtgctcctcgcctcgagttcatggctggacgtccgaacactaccatccccgcagttgagggcctcattcctgagcctcaagacagcgtcaccaaaatcctgcagcgcttcgaggacgccggcaacttctcgccgttcgaggtcgtctcgctcctggcttcacacaccgttgctcgtgcggacaaggtcgacgagaccatcgatgctgcgcccttcgactcgacacccttcaccttcgacacccaggtgttcctcgaggtcctgctcaagggcacaggcttcccgggctcgaacaacaacaccggcgaggtgatgtcgccgctcccactcggcagcggcagcgacacgggcgagatgcgcctgcagtccgactttgcgctcgcgcgcgacgagcgcacggcgtgcttctggcagtcgttcgtcaacgagcaggagttcatggcggcgagcttcaaggccgcgatggcgaagcttgcgatcctcggccacagccgcagcagcctcattgactgcagcgacgtcgtccccgtcccgaagcccgccgtcaacaagcccgcgacgttccccgcgacgaagggccccaaggacctcgacacgctcacgtgcaaggccctcaagttcccgacgctgacctctgaccccggtgctaccgagaccctcatcccccactgctccaacggcggcatgtcctgccctggtgttcagttcgatggccctgcctaa
锰过氧化物酶PcMnP1编码基因序列全长1149bp。其中，信号肽的碱基序列如SEQID No.5所示：
Atggccttcggttctctcctcgccttcgtggctctcgccgccataactcgcgccgccccgactgcggagtct
成熟的锰过氧化物酶PcMnP1的cDNA(去信号肽)序列如SEQ ID No.6所示：
Gcagtctgtccagacggtacccgcgtcaccaacgcggcgtgctgcgctttcattccgctcgcacaggatttgcaagagactctgttccagggtgactgtggcgaagatgcccacgaagtcatccgtctgaccttccacgacgctattgcaatctcccagagcctaggtcctcaggctggcggcggtgctgacggctccatgctgcacttcccgacaatcgagcccaacttctccgccaacagcggcatcgatgactccgtcaacaacttgcttcccttcatgcagaaacacgacaccatcagtgccgccgatcttgtacagttcgccggtgcggtcgcgctgagcaactgcccaggtgctcctcgcctcgagttcatggctggacgtccgaacactaccatccccgcagttgagggcctcattcctgagcctcaagacagcgtcaccaaaatcctgcagcgcttcgaggacgccggcaacttctcgccgttcgaggtcgtctcgctcctggcttcacacaccgttgctcgtgcggacaaggtcgacgagaccatcgatgctgcgcccttcgactcgacacccttcaccttcgacacccaggtgttcctcgaggtcctgctcaagggcacaggcttcccgggctcgaacaacaacaccggcgaggtgatgtcgccgctcccactcggcagcggcagcgacacgggcgagatgcgcctgcagtccgactttgcgctcgcgcgcgacgagcgcacggcgtgcttctggcagtcgttcgtcaacgagcaggagttcatggcggcgagcttcaaggccgcgatggcgaagcttgcgatcctcggccacagccgcagcagcctcattgactgcagcgacgtcgtccccgtcccgaagcccgccgtcaacaagcccgcgacgttccccgcgacgaagggccccaaggacctcgacacgctcacgtgcaaggccctcaagttcccgacgctgacctctgaccccggtgctaccgagaccctcatcccccactgctccaacggcggcatgtcctgccctggtgttcagttcgatggccctgcctaa
本发明还提供了包含上述锰过氧化物酶基因PcMnP1的重组载体，优选为pET28a-PcMnP1。将本发明的锰过氧化物酶基因插入到表达载体合适的限制性酶切位点之间，使其核苷酸序列可操作的与表达调控序列相连接。作为本发明的一个最优选的实施方案，将本发明的锰过氧化物酶基因PcMnP1插入到质粒pET28a上的EcoRI-NotI限制性酶切位点之间，使该核苷酸序列位于T7启动子的下游并受其调控，得到重组大肠杆菌表达质粒pET28a-PcMnP1。
本发明还提供了包含上述锰过氧化物酶基因PcMnP1的重组菌株，优选为重组大肠杆菌菌株BL21(DE3)/PcMnP1。
本发明还提供了一种制备锰过氧化物酶PcMnP1的方法，包括以下步骤：
(1)用包含编码锰过氧化物酶PcMnP1基因的重组表达载体转化宿主细胞，得到重组菌株；
(2)培养所述重组菌株，诱导锰过氧化物酶PcMnP1表达；
(3)纯化所述锰过氧化物酶PcMnP1。
本发明还提供了上述锰过氧化物酶PcMnP1的应用，尤其在霉菌毒素脱毒方面，其能够有效降解黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素、伏马菌素B1。
附图说明
图1显示重组锰过氧化物酶PcMnP1对黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素、伏马菌素B1的降解率；
图2显示重组锰过氧化物酶PcMnP1降解黄曲霉毒素B1的HPLC分析结果；
图3显示重组锰过氧化物酶PcMnP1降解玉米赤霉烯酮的HPLC分析结果；
图4显示重组锰过氧化物酶PcMnP1降解呕吐毒素的HPLC分析结果；
图5显示重组锰过氧化物酶PcMnP1降解伏马菌素B1的HPLC分析结果。
具体实施方式
试验材料和试剂
1、基因及载体：大肠杆菌表达载体pET-28a(+)及菌株BL21(DE3)；
2、酶类及其它生化试剂：内切酶、重组酶、黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和呕吐毒素、伏马菌素B1；
3、培养基：大肠杆菌培养基LB(1％蛋白胨、0.5％酵母提取物、1％NaCl,pH7.0)。
实施例1锰过氧化物酶PcMnP1编码基因的克隆
本发明的目的基因来源于白腐真菌黄孢原毛平革菌(Phanerochaetechrysosporium)。序列特异性引物：
PcMnP1-F:5'-ATGGGTCGCGGATCCGAATTCGCAGTCTGTCCAGACG-3'；
PcMnP1-R:5'-TGGTGGTGCTCGAGTGCGGCCGCGGCAGGGCCATC-3'。
以带有目的基因的质粒为模板进行PCR扩增。在1％琼脂糖凝胶上电泳，切胶得到目的片段，将该片段回收后与EcoRI-NotI双酶切的pET-28a(+)载体通过同源重组的方法相连，转化TransI克隆宿主，测序验证，得到过氧化物酶PcMnP1编码基因。
实施例2重组锰过氧化物酶PcMnP1的制备
将获得的含有成熟的锰过氧化物酶基因PcMnP1的重组大肠杆菌表达质粒pET28a-PcMnP1转化大肠杆菌BL21(DE3)，获得重组大肠杆菌菌株BL21(DE3)/PcMnP1。
以同样的方法构建含信号肽序列的锰过氧化物酶基因PcMnP1的重组表达载体。
取含有重组质粒的BL21(DE3)/PcMnP1菌株，接种于50mL LB培养液中，37℃220rpm振荡培养12h后，按2％比例转接于300mL LB培养基中，37℃220rpm振荡培养约3h(OD600≈0.6)，加入终浓度1mM的诱导剂IPTG诱导5h后，离心收集菌体。采取溶菌酶法裂解菌体，8M尿素溶解包涵体蛋白，配制如下复性体系pH 9.550mM Tris-HCl buffer,1M urea,0.4mMGSSG,0.1mM DTT,10μM hemin,5mMCaCl2,0.1mg/ml蛋白溶液，于15℃静置20小时。12000rpm离心5min，弃沉淀。将上清液进行膜包浓缩并透析换至磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液(20mM，pH6.5)。将更换缓冲液后的蛋白进行阴离子柱纯化，获得条带单一的PcMnP1。
实施例3重组锰过氧化物酶PcMnP1降解黄曲霉毒素B1
将黄曲霉毒素B1溶解到二甲基亚砜中配制成50mg/L的母液，按如下反应体系：70μL丙二酸缓冲液(0.2M，pH 5.0)，20μL黄曲霉毒素B1溶液(50mg/L)，5μL硫酸锰(40mM)，100μL锰过氧化酶(1000U/L)，5μL过氧化氢(4mM)。以未加入锰过氧化物酶的体系作为对照，反应体系设3个重复。反应在30℃下进行，48h后加入三倍体积的甲醇终止反应，采用高效液相色谱(HPLC)分析黄曲霉毒素B1的降解率。液相色谱为岛津Nexera UHPLC高效液相色谱分析系统，色谱分离柱为Zorbax SB-C18(4.6×250mm,5μm)，流动相A(0.06％TFA的水)，流动相B(0.05％TFA的乙腈)；梯度洗脱条件0％B洗脱4分钟，0％-100％B洗脱15分钟，100％B洗脱6分钟；检测波长365nm。
结果如图1、图2所示，可见部分黄曲霉毒素已被降解，降解率为28.9％。
实施例4重组锰过氧化物酶PcMnP1降解玉米赤霉烯酮
将玉米赤霉烯酮溶解到二甲基亚砜中配制成50mg/L的母液，按如下反应体系：70μL丙二酸缓冲液(0.2M，pH 5.0)，20μL玉米赤霉烯酮溶液(50mg/L)，5μL硫酸锰(40mM)，100μL锰过氧化酶(1000U/L)，5μL过氧化氢(4mM)。以未加入锰过氧化物酶的体系作为对照，反应体系设3个重复。反应在30℃下进行，48h后加入三倍体积的甲醇终止反应，采用高效液相色谱(HPLC)分析玉米赤霉烯酮的降解率。液相色谱为岛津Nexera UHPLC高效液相色谱分析系统，色谱分离柱为Zorbax SB-C18(4.6×250mm,5μm)，流动相A(0.06％TFA的水)，流动相B(0.05％TFA的乙腈)；梯度洗脱条件0％B洗脱4分钟，0％-100％B洗脱15分钟，100％B洗脱6分钟；检测波长316nm。
结果如图1、图3所示，可见部分玉米赤霉烯酮已被降解，降解率为25.3％。
实施例5重组锰过氧化物酶PcMnP1降解呕吐毒素
将呕吐毒素溶解到甲醇中配制成100mg/L的母液，按如下反应体系：70μL丙二酸缓冲液(0.2M，pH 5.0)，20μL呕吐毒素溶液(100mg/L)，5μL硫酸锰(40mM)，100μL锰过氧化酶(1000U/L)，5μL过氧化氢(4mM)。以未加入锰过氧化物酶的体系作为对照，反应体系设3个重复。反应在30℃下进行，48h后加入三倍体积的甲醇终止反应，采用高效液相色谱(HPLC)分析呕吐毒素的降解率。液相色谱为岛津Nexera UHPLC高效液相色谱分析系统，色谱分离柱为Zorbax SB-C18(4.6×250mm,5μm)，流动相A(水)，流动相B(甲醇)；梯度洗脱条件20％B洗脱20分钟，20％-100％B洗脱1分钟，100％B洗脱6分钟；检测波长220nm。结果如图1、图4所示，可见部分呕吐毒素已被降解，降解率为41.4％。
实施例6重组锰过氧化物酶PcMnP1降解伏马菌素B1
将伏马菌素B1溶解到DMSO中配制成100mg/L的母液，按如下反应体系：70μL丙二酸缓冲液(0.2M，pH 5.0)，20μL伏马菌素B1溶液(100mg/L)，5μL硫酸锰(40mM)，100μL锰过氧化酶(1000U/L)，5μL过氧化氢(4mM)。以未加入锰过氧化物酶的体系作为对照，反应体系设3个重复。反应在30℃下进行，48h后加入三倍体积的甲醇终止反应，采用高效液相色谱(HPLC)-质谱(MS)联用分析伏马菌素B1的降解率。液相色谱为岛津Nexera UHPLC高效液相色谱分析系统，色谱分离柱为Zorbax SB-C18(4.6X 250,5um)，流动相A(0.1％甲酸的水)，流动相B(乙腈:甲醇1:1)；梯度洗脱条件30％-100％B梯度洗脱10分钟，30％B洗脱18分钟，100％B洗脱2分钟；质谱为SCIEX Triple TOF分析系统，质谱条件为CE：35V±15V，Ion source gas：50，TEM 500℃，ISVF 5500V，sean：m/z 100-1000(目标物721)。
结果如图1、图5所示，可见部分伏马菌素已被降解，降解率为29.9％。
序列表
<110> 中国农业科学院饲料研究所
<120> 锰过氧化物酶PcMnP1及其编码基因和应用
<160> 6
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 382
<212> PRT
<213> 白腐真菌黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)
<400> 1
Met Ala Phe Gly Ser Leu Leu Ala Phe Val Ala Leu Ala Ala Ile Thr
1 5 10 15
Arg Ala Ala Pro Thr Ala Glu Ser Ala Val Cys Pro Asp Gly Thr Arg
20 25 30
Val Thr Asn Ala Ala Cys Cys Ala Phe Ile Pro Leu Ala Gln Asp Leu
35 40 45
Gln Glu Thr Leu Phe Gln Gly Asp Cys Gly Glu Asp Ala His Glu Val
50 55 60
Ile Arg Leu Thr Phe His Asp Ala Ile Ala Ile Ser Gln Ser Leu Gly
65 70 75 80
Pro Gln Ala Gly Gly Gly Ala Asp Gly Ser Met Leu His Phe Pro Thr
85 90 95
Ile Glu Pro Asn Phe Ser Ala Asn Ser Gly Ile Asp Asp Ser Val Asn
100 105 110
Asn Leu Leu Pro Phe Met Gln Lys His Asp Thr Ile Ser Ala Ala Asp
115 120 125
Leu Val Gln Phe Ala Gly Ala Val Ala Leu Ser Asn Cys Pro Gly Ala
130 135 140
Pro Arg Leu Glu Phe Met Ala Gly Arg Pro Asn Thr Thr Ile Pro Ala
145 150 155 160
Val Glu Gly Leu Ile Pro Glu Pro Gln Asp Ser Val Thr Lys Ile Leu
165 170 175
Gln Arg Phe Glu Asp Ala Gly Asn Phe Ser Pro Phe Glu Val Val Ser
180 185 190
Leu Leu Ala Ser His Thr Val Ala Arg Ala Asp Lys Val Asp Glu Thr
195 200 205
Ile Asp Ala Ala Pro Phe Asp Ser Thr Pro Phe Thr Phe Asp Thr Gln
210 215 220
Val Phe Leu Glu Val Leu Leu Lys Gly Thr Gly Phe Pro Gly Ser Asn
225 230 235 240
Asn Asn Thr Gly Glu Val Met Ser Pro Leu Pro Leu Gly Ser Gly Ser
245 250 255
Asp Thr Gly Glu Met Arg Leu Gln Ser Asp Phe Ala Leu Ala Arg Asp
260 265 270
Glu Arg Thr Ala Cys Phe Trp Gln Ser Phe Val Asn Glu Gln Glu Phe
275 280 285
Met Ala Ala Ser Phe Lys Ala Ala Met Ala Lys Leu Ala Ile Leu Gly
290 295 300
His Ser Arg Ser Ser Leu Ile Asp Cys Ser Asp Val Val Pro Val Pro
305 310 315 320
Lys Pro Ala Val Asn Lys Pro Ala Thr Phe Pro Ala Thr Lys Gly Pro
325 330 335
Lys Asp Leu Asp Thr Leu Thr Cys Lys Ala Leu Lys Phe Pro Thr Leu
340 345 350
Thr Ser Asp Pro Gly Ala Thr Glu Thr Leu Ile Pro His Cys Ser Asn
355 360 365
Gly Gly Met Ser Cys Pro Gly Val Gln Phe Asp Gly Pro Ala
370 375 380
<210> 2
<211> 24
<212> PRT
<213> 白腐真菌黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)
<400> 2
Met Ala Phe Gly Ser Leu Leu Ala Phe Val Ala Leu Ala Ala Ile Thr
1 5 10 15
Arg Ala Ala Pro Thr Ala Glu Ser
20
<210> 3
<211> 358
<212> PRT
<213> 白腐真菌黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)
<400> 3
Ala Val Cys Pro Asp Gly Thr Arg Val Thr Asn Ala Ala Cys Cys Ala
1 5 10 15
Phe Ile Pro Leu Ala Gln Asp Leu Gln Glu Thr Leu Phe Gln Gly Asp
20 25 30
Cys Gly Glu Asp Ala His Glu Val Ile Arg Leu Thr Phe His Asp Ala
35 40 45
Ile Ala Ile Ser Gln Ser Leu Gly Pro Gln Ala Gly Gly Gly Ala Asp
50 55 60
Gly Ser Met Leu His Phe Pro Thr Ile Glu Pro Asn Phe Ser Ala Asn
65 70 75 80
Ser Gly Ile Asp Asp Ser Val Asn Asn Leu Leu Pro Phe Met Gln Lys
85 90 95
His Asp Thr Ile Ser Ala Ala Asp Leu Val Gln Phe Ala Gly Ala Val
100 105 110
Ala Leu Ser Asn Cys Pro Gly Ala Pro Arg Leu Glu Phe Met Ala Gly
115 120 125
Arg Pro Asn Thr Thr Ile Pro Ala Val Glu Gly Leu Ile Pro Glu Pro
130 135 140
Gln Asp Ser Val Thr Lys Ile Leu Gln Arg Phe Glu Asp Ala Gly Asn
145 150 155 160
Phe Ser Pro Phe Glu Val Val Ser Leu Leu Ala Ser His Thr Val Ala
165 170 175
Arg Ala Asp Lys Val Asp Glu Thr Ile Asp Ala Ala Pro Phe Asp Ser
180 185 190
Thr Pro Phe Thr Phe Asp Thr Gln Val Phe Leu Glu Val Leu Leu Lys
195 200 205
Gly Thr Gly Phe Pro Gly Ser Asn Asn Asn Thr Gly Glu Val Met Ser
210 215 220
Pro Leu Pro Leu Gly Ser Gly Ser Asp Thr Gly Glu Met Arg Leu Gln
225 230 235 240
Ser Asp Phe Ala Leu Ala Arg Asp Glu Arg Thr Ala Cys Phe Trp Gln
245 250 255
Ser Phe Val Asn Glu Gln Glu Phe Met Ala Ala Ser Phe Lys Ala Ala
260 265 270
Met Ala Lys Leu Ala Ile Leu Gly His Ser Arg Ser Ser Leu Ile Asp
275 280 285
Cys Ser Asp Val Val Pro Val Pro Lys Pro Ala Val Asn Lys Pro Ala
290 295 300
Thr Phe Pro Ala Thr Lys Gly Pro Lys Asp Leu Asp Thr Leu Thr Cys
305 310 315 320
Lys Ala Leu Lys Phe Pro Thr Leu Thr Ser Asp Pro Gly Ala Thr Glu
325 330 335
Thr Leu Ile Pro His Cys Ser Asn Gly Gly Met Ser Cys Pro Gly Val
340 345 350
Gln Phe Asp Gly Pro Ala
355
<210> 4
<211> 1149
<212> DNA
<213> 白腐真菌黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)
<400> 4
atggccttcg gttctctcct cgccttcgtg gctctcgccg ccataactcg cgccgccccg 60
actgcggagt ctgcagtctg tccagacggt acccgcgtca ccaacgcggc gtgctgcgct 120
ttcattccgc tcgcacagga tttgcaagag actctgttcc agggtgactg tggcgaagat 180
gcccacgaag tcatccgtct gaccttccac gacgctattg caatctccca gagcctaggt 240
cctcaggctg gcggcggtgc tgacggctcc atgctgcact tcccgacaat cgagcccaac 300
ttctccgcca acagcggcat cgatgactcc gtcaacaact tgcttccctt catgcagaaa 360
cacgacacca tcagtgccgc cgatcttgta cagttcgccg gtgcggtcgc gctgagcaac 420
tgcccaggtg ctcctcgcct cgagttcatg gctggacgtc cgaacactac catccccgca 480
gttgagggcc tcattcctga gcctcaagac agcgtcacca aaatcctgca gcgcttcgag 540
gacgccggca acttctcgcc gttcgaggtc gtctcgctcc tggcttcaca caccgttgct 600
cgtgcggaca aggtcgacga gaccatcgat gctgcgccct tcgactcgac acccttcacc 660
ttcgacaccc aggtgttcct cgaggtcctg ctcaagggca caggcttccc gggctcgaac 720
aacaacaccg gcgaggtgat gtcgccgctc ccactcggca gcggcagcga cacgggcgag 780
atgcgcctgc agtccgactt tgcgctcgcg cgcgacgagc gcacggcgtg cttctggcag 840
tcgttcgtca acgagcagga gttcatggcg gcgagcttca aggccgcgat ggcgaagctt 900
gcgatcctcg gccacagccg cagcagcctc attgactgca gcgacgtcgt ccccgtcccg 960
aagcccgccg tcaacaagcc cgcgacgttc cccgcgacga agggccccaa ggacctcgac 1020
acgctcacgt gcaaggccct caagttcccg acgctgacct ctgaccccgg tgctaccgag 1080
accctcatcc cccactgctc caacggcggc atgtcctgcc ctggtgttca gttcgatggc 1140
cctgcctaa 1149
<210> 5
<211> 72
<212> DNA
<213> 白腐真菌黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)
<400> 5
atggccttcg gttctctcct cgccttcgtg gctctcgccg ccataactcg cgccgccccg 60
actgcggagt ct 72
<210> 6
<211> 1077
<212> DNA
<213> 白腐真菌黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)
<400> 6
gcagtctgtc cagacggtac ccgcgtcacc aacgcggcgt gctgcgcttt cattccgctc 60
gcacaggatt tgcaagagac tctgttccag ggtgactgtg gcgaagatgc ccacgaagtc 120
atccgtctga ccttccacga cgctattgca atctcccaga gcctaggtcc tcaggctggc 180
ggcggtgctg acggctccat gctgcacttc ccgacaatcg agcccaactt ctccgccaac 240
agcggcatcg atgactccgt caacaacttg cttcccttca tgcagaaaca cgacaccatc 300
agtgccgccg atcttgtaca gttcgccggt gcggtcgcgc tgagcaactg cccaggtgct 360
cctcgcctcg agttcatggc tggacgtccg aacactacca tccccgcagt tgagggcctc 420
attcctgagc ctcaagacag cgtcaccaaa atcctgcagc gcttcgagga cgccggcaac 480
ttctcgccgt tcgaggtcgt ctcgctcctg gcttcacaca ccgttgctcg tgcggacaag 540
gtcgacgaga ccatcgatgc tgcgcccttc gactcgacac ccttcacctt cgacacccag 600
gtgttcctcg aggtcctgct caagggcaca ggcttcccgg gctcgaacaa caacaccggc 660
gaggtgatgt cgccgctccc actcggcagc ggcagcgaca cgggcgagat gcgcctgcag 720
tccgactttg cgctcgcgcg cgacgagcgc acggcgtgct tctggcagtc gttcgtcaac 780
gagcaggagt tcatggcggc gagcttcaag gccgcgatgg cgaagcttgc gatcctcggc 840
cacagccgca gcagcctcat tgactgcagc gacgtcgtcc ccgtcccgaa gcccgccgtc 900
aacaagcccg cgacgttccc cgcgacgaag ggccccaagg acctcgacac gctcacgtgc 960
aaggccctca agttcccgac gctgacctct gaccccggtg ctaccgagac cctcatcccc 1020
cactgctcca acggcggcat gtcctgccct ggtgttcagt tcgatggccc tgcctaa 1077

Claims (1)

1.锰过氧化物酶PcMnP1用于同时降解黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素、伏马菌素B1的应用，其中，所述锰过氧化物酶PcMnP1的氨基酸序列如SEQ ID No. 1或SEQ ID No. 3所示。
CN201811507429.4A 2018-12-11 2018-12-11 锰过氧化物酶PcMnP1及其编码基因和应用 Active CN109504666B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811507429.4A CN109504666B (zh) 2018-12-11 2018-12-11 锰过氧化物酶PcMnP1及其编码基因和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811507429.4A CN109504666B (zh) 2018-12-11 2018-12-11 锰过氧化物酶PcMnP1及其编码基因和应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109504666A CN109504666A (zh) 2019-03-22
CN109504666B true CN109504666B (zh) 2021-05-25

Family

ID=65752114

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811507429.4A Active CN109504666B (zh) 2018-12-11 2018-12-11 锰过氧化物酶PcMnP1及其编码基因和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109504666B (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111154737B (zh) * 2020-01-14 2022-02-01 江南大学 一种能降解黄曲霉毒素b1的锰过氧化物酶及其应用
CN113528477B (zh) * 2021-08-20 2023-08-08 江南大学 一种能降解黄曲霉毒素b1的锰过氧化物酶的突变体构建方法及其应用
CN115779329B (zh) * 2022-11-18 2024-01-30 安徽大学 一种连续流加过氧化氢协同锰过氧化物酶降解黄曲霉毒素b1的方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106434584A (zh) * 2016-07-26 2017-02-22 中国农业科学院饲料研究所 一种锰过氧化物酶mnp‑2及其基因和应用
CN107012131A (zh) * 2017-01-12 2017-08-04 中国农业科学院饲料研究所 一种锰过氧化物酶及其基因和在霉菌毒素脱毒上的应用

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101297827B1 (ko) * 2011-08-01 2013-08-19 전북대학교산학협력단 백색부후균 파네로케이트 크리소스포리움 ｂｋｍ―ｆ―１７６７ 유래의 망간 퍼옥시다제 코딩 유전자의 발현방법

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106434584A (zh) * 2016-07-26 2017-02-22 中国农业科学院饲料研究所 一种锰过氧化物酶mnp‑2及其基因和应用
CN107012131A (zh) * 2017-01-12 2017-08-04 中国农业科学院饲料研究所 一种锰过氧化物酶及其基因和在霉菌毒素脱毒上的应用

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"Heterogeneity and Regulation of Manganese Peroxidases from Phanerochaete chrysosporium";ELIZABETH A. PEASE et al.;《JOURNAL OF BACTERIOLOGY》;19920630;第174卷(第11期);第3532-3540页 *
"KR 1020130014910-A/1: Mangenese Peroxidase coding gene separated from White rot fungi Phanerochaete chrysosporium BKM-F-1767 and their expression method"，Accession Number：DI249404;Park S. et al.;《EMBL》;20140709;第1页 *
"Manganese-dependent Peroxidase from Phanerochaete chrysosporium";ElizabethA. Pease et al.;《THE JOURNALOF BIOLOGICAL CHEMISTRY》;19891231;第264卷(第23期);第13531页摘要和第13533页图1 *
"Phanerochaete chrysosporium Mn-dependent peroxidase precursor, mRNA, complete cds";Pease,E.A. et al.;《GenBank》;20010409;第1页 *
Pease,E.A. et al.."Phanerochaete chrysosporium Mn-dependent peroxidase precursor, mRNA, complete cds".《GenBank》.2001,第1页. *
Pease,E.A. et al.."RecName: Full=Manganese peroxidase H4;AltName: Full=MP-I;AltName: Full=Peroxidase manganese-dependent H4;Flags: Precursor".《EMBL》.2018,第1-3页. *

Also Published As

Publication number Publication date
CN109504666A (zh) 2019-03-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109504666B (zh) 锰过氧化物酶PcMnP1及其编码基因和应用
CN107012131B (zh) 一种锰过氧化物酶及其基因和在霉菌毒素脱毒上的应用
US11634694B2 (en) Manganese peroxidase, gene thereof, and use thereof in detoxification of mycotoxin
CN110684748B (zh) 咖啡酸作为漆酶降解霉菌毒素的介体的应用
CN110637970B (zh) 丁香醛作为参与漆酶降解霉菌毒素的介体的应用
Moreira et al. Molecular characterisation of a versatile peroxidase from a Bjerkandera strain
Zelena et al. Functional expression of a valencene dioxygenase from Pleurotus sapidus in E. coli
CN107916266B (zh) 镰刀菌毒素脱毒路径相关基因adh、akr6d1、akr13b2及其应用
CN110527677B (zh) 玉米赤霉烯酮水解酶突变体zhdm2及其编码基因和应用
CN110669745B (zh) 一种热稳定性提高的玉米赤霉烯酮降解酶突变体及其应用
CN109370995B (zh) 锰过氧化物酶CsMnP及其编码基因和应用
KR20210132405A (ko) 알룰로스 에피머화 효소 변이체, 이의 제조방법 및 이를 이용한 알룰로스의 제조방법
CN110684754B (zh) 一种真菌毒素zen降解酶突变体及其应用
CN112322599B (zh) 一种转氨酶upta、制备方法和应用
CN112301010B (zh) 一种胺氧化酶acao、制备方法和应用
CN110272878A (zh) 漆酶TvLac及其编码基因和应用
CN109486776B (zh) 锰过氧化物酶NfMnP及其编码基因和应用
CN112143717B (zh) 比活力提高的葡萄糖氧化酶突变体
CN111394336A (zh) 一种玉米赤霉烯酮水解酶及其编码基因和应用
CN111549007B (zh) 一种转氨酶tsta、制备方法和应用
CN111607575B (zh) 一种转氨酶phta、制备方法和应用
CN110292105B (zh) 提高漆酶对真菌毒素降解率的黄瓜介体及其应用
CN114045276A (zh) 一种比酶活提高的中性玉米赤霉烯酮降解酶突变体
CN113699127B (zh) 一种提高染料脱色过氧化物酶的霉菌毒素降解率的方法
CN113699126B (zh) 染料脱色过氧化物酶StDyP用于同时降解黄曲霉毒素和玉米赤霉烯酮的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20200826

Address after: 100193 Beijing Old Summer Palace West Road, Haidian District, No. 2

Applicant after: Beijing Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Chinese Academy of Agricultural Sciences

Address before: 100081 Beijing, Zhongguancun, South Street, No. 12, No.

Applicant before: FEED Research Institute CHINESE ACADEMY OF AGRICULTURAL SCIENCES

TA01 Transfer of patent application right
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant