CN109490434A - 益心舒中药制剂中黄芪甲苷的含量检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种益心舒中药制剂中黄芪甲苷的含量测定方法,采用高效液相色谱法进行测定,包括高效液相色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶;检测器为蒸发光散射检测器,蒸发光散射检测器漂移管温度为75‑85℃,气体流速为2.3‑2.7L/min;流动相为体积比为75:25的甲醇‑水,流速为0.7‑0.9ml/min等,与现有技术相比,本发明通过高效液相色谱法对益心舒制剂中黄芪甲苷成分的含量进行测定,本测定方法专属性强、精密度高、重复性好、回收率高、稳定性高、测量结果准确,达到了有效控制药物质量的目的,确保了产品质量的稳定以及临床用药的安全、有效。
Description
说明书
技术领域
本发明属于中药领域,具体涉及中药组合物中具体成分的含量测定方法。
背景技术
中药治疗疾病已经有几千年的历史了,随着科学技术的发展,中药也面临着现代化,要走上世界市场,这就要求必须做好中药质量的控制,中药的成分含量的质量控制则是最关键的,尤其是对于复方的中药制剂,要想全面的控制中药的质量,必须做好各成分的含量的精确测定。
益心舒中药制剂具有益气养阴,活血复脉;用于气阴两虚,心血内阻,胸痹心痛,胸闷不舒,心悸脉结代。具有载药量高、起效快、无异味、携带方便等特性。人参、黄芪、麦冬、五味子、丹参、川芎6味药材组成的复方制剂,其中
人参:具有大补元气,益血,养心安神的作用。生晒参能提高脑、体力活动能力和免疫功能,增强抗应激、抗疲劳、抗肿瘤、抗衰老、抗辐射、益心、复脉、安神生津、补肺健脾。
麦冬:具有甘寒清润,善清心肺之热而养阴除烦,兼可清润胃肠而止渴润燥。抗实验性心律失常、增加冠脉流量。
五味子:是一种具有辛、甘、酸、苦、咸五种药性。选用传统正品北五味入药,品质优良。收敛固涩,益气生津,补肾宁心。用于久嗽虚喘,梦遗滑精,遗尿尿频,久泻不止,自汗,盗汗,津伤口渴,短气脉虚,内热消渴,心悸失眠。
黄芪:有补气升阳、生血行滞之力,现在药理研究发现,黄芪还可清除氧自由基,减轻机体脂质过氧化损伤。
丹参:有活血祛瘀之功,不仅可以抑制血小板聚集,抑制血栓形成而且所含丹参素还可抑制胆固醇的合成、抗细胞氧化。
川芎:活血行气,祛风止痛。可提高血小板中cAMP含量,降低TXA2活性;降低血小板表面活性、抑制血小板聚集、使已聚集血小板解聚。
益心舒中药制剂的药物活性成分很多,主要包括:黄芪甲苷,人参皂苷、川芎嗪,三七皂苷,丹参酮等。
由于活性成分众多,因此需要灵敏的检测方法对益心舒中药制剂的活性成分进行检测,但现有检测方法仅包含性状、2个显色鉴别及检查项下的相关检测项,未进行药材的定性或定量检测,不能全面反映产品的质量状况,本发明针对君药黄芪建立了产品中黄芪甲苷含量测定的方法,使得对该产品能够进行更有效的质量分析,更全面反映产品的质量状况,保证该产品的质量稳定性,同时该方法节约检测成本。
发明内容
本发明目的是提供一种有效测定益心舒中药制剂中黄芪甲苷的含量的方法。
本发明所采用的技术方案是:
一种益心舒中药制剂中黄芪甲苷的含量测定方法,该中药制剂由下列重量份数的原料药组成:300份人参、300份麦冬、200份五味子、300份黄芪、400份丹参、200份川芎、300份山楂组成;测定方法由以下步骤组成:
a、供试品溶液的制备:取制剂,加入甲醇,浸泡过夜,超声处理,放冷,称重,用甲醇补足重量,滤过,量取续滤液,蒸干,残渣用水转移至分液漏斗中,再用三氯甲烷振摇提取3次,弃去三氯甲烷,水层用水饱和的正丁醇振摇提取5 次,合并正丁醇液,用0.5%NaOH溶液洗涤2次,再用正丁醇饱和的水洗涤2次,合并NaOH洗液和水洗液,再用水饱和的正丁醇振摇提取2次,与上述正丁醇液合并,蒸干,残渣加75%甲醇溶解,转移至10ml量瓶中至刻度,摇匀,即得;
b、对照品溶液的制备:取黄芪甲苷对照品,加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液,即得;
c、测定:分别精密吸取对照品溶液10μL、20μL以及供试品溶液10μL,注入高效液相色谱仪中测定,以外标两点法对数方程式计算,测得黄芪甲苷含量。
上述的测定方法由以下步骤组成:
a、供试品溶液的制备:取相当于该中药制剂生药量20-50g的制剂,加入甲醇50ml,浸泡过夜,超声处理30分钟,放冷,称重,用甲醇补足重量,滤过,量取续滤液25ml,蒸干,残渣用水20ml转移至分液漏斗中,再用三氯甲烷振摇提取3次,每次20ml,弃去三氯甲烷,水层用水饱和的正丁醇振摇提取5次,正丁醇每次用量分别是20ml、20ml、20ml、15ml、15ml,合并正丁醇液,用0.5%NaOH 溶液洗涤2次,每次10ml,再用正丁醇饱和的水洗涤2次,每次10ml,合并NaOH 洗液和水洗液,再用水饱和的正丁醇振摇提取2次,每次10ml,与上述正丁醇液合并,蒸干,残渣加75%甲醇溶解,转移至10ml量瓶中至刻度,摇匀,即得;
b、对照品溶液的制备:取黄芪甲苷对照品,加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液,即得;
c、测定:分别精密吸取对照品溶液10μL、20μL以及供试品溶液10μL,注入高效液相色谱仪中测定,以外标两点法对数方程式计算,测得黄芪甲苷含量。
上述的检测方法:所述步骤c中高效液相色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶;检测器为蒸发光散射检测器,蒸发光散射检测器漂移管温度为75-85℃,气体流速为2.3-2.7L/min;流动相为体积比为75:25的甲醇-水,流速为 0.7-0.9ml/min。
上述的测定方法,该中药组合物的制剂剂型为胶囊剂、片剂或丸剂
上述的测定方法,黄芪甲苷的含量测定由以下步骤组成:
a、供试品溶液的制备:取相当于生药量13.5g的该中药组合物胶囊4g,倒出内容物,研细,加入甲醇50ml,浸泡过夜,超声处理30分钟,放冷,称重,用甲醇补足重量,滤过,量取续滤液25ml,蒸干,残渣用水20ml转移至分液漏斗中,再用三氯甲烷振摇提取3次,每次20ml,弃去三氯甲烷,水层用水饱和的正丁醇振摇提取5次,正丁醇每次用量分别是20ml、20ml、20ml、15ml、15ml,合并正丁醇液,用0.5%NaOH溶液洗涤2次,每次10ml,再用正丁醇饱和的水洗涤2次,每次10ml,合并NaOH洗液和水洗液,再用水饱和的正丁醇振摇提取2 次,每次10ml,与上述正丁醇液合并,蒸干,残渣加75%甲醇溶解,转移至10ml 量瓶中至刻度,摇匀,即得;
b、对照品溶液的制备:取黄芪甲苷对照品,加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液,即得;
c、测定:分别精密吸取对照品溶液10μL、20μL以及供试品溶液10μL,注入高效液相色谱仪中,测定,高效液相色谱中填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶;检测器为蒸发光散射检测器,蒸发光散射检测器漂移管温度为80℃,气体流速为2.5L/min;流动相为体积比为75:25的甲醇-水,流速为0.8ml/min,以外标两点法对数方程式计算,测得黄芪甲苷含量。
由于采用了上述技术方案,本发明取得的技术进步是:
本发明的方法能准确的测定出益心舒中药制剂中黄芪甲苷的含量,有助于药物的质量控制,提高药物的安全性和可靠性。
本发明的测定方法的精密度、准确度、回收率等的检验
一、专属性试验
按实施例1处方量称取除黄芪外的药材,按制备工艺的要求制得空白样品,空白对照液的处理方法同供试品溶液的处理方法。分别吸取空白样品溶液、对照品溶液及供试品溶液,按照选定测定条件进行检测,结果表明:在黄芪甲苷相应的保留时间,空白样品无相应波峰出现,空白样品不干扰测定。
线性关系考察:
精密吸取黄芪甲苷对照品溶液3、5、10、20、50μl注入高效液相色谱仪中,进行测定。测定结果见表1:
表1线性关系测定结果
结果表明:样品量在3—50μl(即0.29664—4.944μg)范围内呈良好线性关系,其进样量与峰面积积分值自然对数回归方程为:Lny=1.7215Lnx+7.1601。
对照品纯度检测:经对黄芪甲苷对照品进行面积归一化法测定,结果黄芪对照甲苷对照品的纯度为99.43%。
精密度考察:
吸取实施例1的对照品溶液及供试品溶液各10μl,分别连续进样5次,测定峰面积。检测结果见表2:
表2精密度试验结果
结果表明:对照品和样品峰面积RSD值分别为0.39%和0.68%。表明仪器性能良好。
稳定性考察:
吸取实施例1的黄芪甲苷对照品溶液与供试品溶液各10μl,每隔一定时间注入高效液相色谱仪中测定一次峰面积,测定了24小时内的变化情况,结果见表3:
表3稳定性试验结果
结果表明:对照品和样品峰面积RSD值分别为2.63%和2.46%。表明在24 小时内,对照品和供试品溶液均稳定。
重现性试验:
取实施例1中的供试品,按高、中、低剂量取样,每个剂量取3份,进行提取,制备,测定,结果见表4:
表4重现性试验结果
结果表明:同一批供试品的5份平行供试品,所测定的黄芪甲苷的平均含量为0.5536mg/g,RSD为2.88%,说明方法的重现性良好。
具体实施方式
实施例1益心舒中药制剂的制备:
川芎100~150g与山楂150~250g、黄芪150~250g和麦冬150~250g加水煎煮二次,第一次2.5小时,第二次1.5小时,滤过,合并滤液,浓缩至相对密度为1.10~1.15(80℃),向浓缩液中加入一倍量的85%乙醇,混匀,静置,滤过,滤液浓缩,备用;将五味子100~150g与丹参250~300g加入85%乙醇回流提取二次,第一次3小时,第二次1.5小时,滤过,合并滤液,减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.25~1.30(80℃),得醇提浸膏,备用;将前述两种浸膏混合,加入人参细粉200g(或其醇提物),混匀,干燥,粉碎,
实施例2:益心舒中药制剂中黄芪甲苷的含量测定方法,由以下步骤组成:
a、供试品溶液的制备:取相当于生药量12g的益心舒中药制剂,倒出内容物,研细,加入甲醇50ml,浸泡过夜,超声处理30分钟,功率为250W,频率 40kHz,放冷,称重,用甲醇补足减失的重量,滤过,精密量取续滤液25ml,蒸干,残渣用水20ml转移至分液漏斗中,再用三氯甲烷振摇提取3次,每次20ml,弃去三氯甲烷,水层用水饱和的正丁醇振摇提取5次,正丁醇每次用量分别是 20ml、20ml、20ml、15ml、15ml,合并正丁醇液,用0.5%NaOH溶液洗涤2次,每次10ml,再用正丁醇饱和的水洗涤2次,每次10ml,合并NaOH洗液和水洗液,再用水饱和的正丁醇振摇提取2次,每次10ml,与上述正丁醇液合并,蒸干,残渣加75%甲醇溶解,转移至10ml量瓶中,加75%甲醇至刻度,摇匀,即得;
b、对照品溶液的制备:取黄芪甲苷对照品,加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液,即得;
c、测定:分别精密吸取对照品溶液10μL、20μL以及供试品溶液10μL,注入高效液相色谱仪中,高效液相色谱中填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶,检测器为蒸发光散射检测器,漂移管温度为80℃,气体流速为2.5L/min,流动相为体积比75:25的甲醇-水,流速为0.8ml/min测定,理论塔板数以黄芪甲苷峰计算不低于4000,以外标两点法对数方程式计算,每粒含黄芪以黄芪甲苷计,不少于0.19mg,测得黄芪甲苷含量为0.223g。
实施例2益心舒中药制剂中黄芪甲苷的含量测定方法,由以下步骤组成:
a、供试品溶液的制备:取相当于生药量45g的该中药组合物片剂,大约14g,研细,加入甲醇50ml,浸泡过夜,超声处理30分钟,功率为250W,频率40kHz,放冷,称重,用甲醇补足减失的重量,滤过,精密量取续滤液25ml,蒸干,残渣用水20ml转移至分液漏斗中,再用三氯甲烷振摇提取3次,每次20ml,弃去三氯甲烷,水层用水饱和的正丁醇振摇提取5次,正丁醇每次用量分别是20ml、 20ml、20ml、15ml、15ml,合并正丁醇液,用0.5%NaOH溶液洗涤2次,每次10ml,再用正丁醇饱和的水洗涤2次,每次10ml,合并NaOH洗液和水洗液,再用水饱和的正丁醇振摇提取2次,每次10ml,与上述正丁醇液合并,蒸干,残渣加75%甲醇溶解,转移至10ml量瓶中,加75%甲醇至刻度,摇匀,即得;
b、对照品溶液的制备:取黄芪甲苷对照品,加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液,即得;
c、测定:分别精密吸取对照品溶液10μL、20μL以及供试品溶液10μL,注入高效液相色谱仪中,高效液相色谱中填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶,检测器为蒸发光散射检测器,漂移管温度为75℃,气体流速为2.3L/min,流动相为体积比75:25的甲醇-水,流速为0.7ml/min测定,理论塔板数以黄芪甲苷峰计算不低于4000,以外标两点法对数方程式计算,测得黄芪甲苷含量为0.046g。
实施例3益心舒中药制剂中黄芪甲苷的含量测定方法,由以下步骤组成:
a、供试品溶液的制备:取相当于生药量13.5g的该中药组合物丸剂,大约 3.3g,研细,加入甲醇50ml,浸泡过夜,超声处理30分钟,功率为250W,频率 40kHz,放冷,称重,用甲醇补足减失的重量,滤过,精密量取续滤液25ml,蒸干,残渣用水20ml转移至分液漏斗中,再用三氯甲烷振摇提取3次,每次20ml,弃去三氯甲烷,水层用水饱和的正丁醇振摇提取5次,正丁醇每次用量分别是 20ml、20ml、20ml、15ml、15ml,合并正丁醇液,用0.5%NaOH溶液洗涤2次,每次10ml,再用正丁醇饱和的水洗涤2次,每次10ml,合并NaOH洗液和水洗液,再用水饱和的正丁醇振摇提取2次,每次10ml,与上述正丁醇液合并,蒸干,残渣加75%甲醇溶解,转移至10ml量瓶中,加75%甲醇至刻度,摇匀,即得;
b、对照品溶液的制备:取黄芪甲苷对照品,加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液,即得;
c、测定:分别精密吸取对照品溶液10μL、20μL以及供试品溶液10μL,注入高效液相色谱仪中,高效液相色谱中填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶,检测器为蒸发光散射检测器,漂移管温度为85℃,气体流速为2.7L/min,流动相为体积比75:25的甲醇-水,流速为0.9ml/min测定,理论塔板数以黄芪甲苷峰计算不低于4000,以外标两点法对数方程式计算,测得黄芪甲苷含量为0.117g。
Claims (5)
1.一种益心舒中药制剂中黄芪甲苷的含量测定方法,该中药制剂由下列重量份数的原料药组成:300份人参、300份麦冬、200份五味子、300份黄芪、400份丹参、200份川芎、300份山楂组成;其特征在于:测定方法由以下步骤组成:
a、供试品溶液的制备:取制剂,加入甲醇,浸泡过夜,超声处理,放冷,称重,用甲醇补足重量,滤过,量取续滤液,蒸干,残渣用水转移至分液漏斗中,再用三氯甲烷振摇提取3次,弃去三氯甲烷,水层用水饱和的正丁醇振摇提取5次,合并正丁醇液,用0.5%NaOH溶液洗涤2次,再用正丁醇饱和的水洗涤2次,合并NaOH洗液和水洗液,再用水饱和的正丁醇振摇提取2次,与上述正丁醇液合并,蒸干,残渣加75%甲醇溶解,转移至10ml量瓶中至刻度,摇匀,即得;
b、对照品溶液的制备:取黄芪甲苷对照品,加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液,即得;
c、测定:分别精密吸取对照品溶液10μL、20μL以及供试品溶液10μL,注入高效液相色谱仪中测定,以外标两点法对数方程式计算,测得黄芪甲苷含量。
2.根据权利要求1所述的测定方法,其特征在于测定方法由以下步骤组成:
a、供试品溶液的制备:取相当于该中药制剂生药量20-50g的制剂,加入甲醇50ml,浸泡过夜,超声处理30分钟,放冷,称重,用甲醇补足重量,滤过,量取续滤液25ml,蒸干,残渣用水20ml转移至分液漏斗中,再用三氯甲烷振摇提取3次,每次20ml,弃去三氯甲烷,水层用水饱和的正丁醇振摇提取5次,正丁醇每次用量分别是20ml、20ml、20ml、15ml、15ml,合并正丁醇液,用0.5%NaOH溶液洗涤2次,每次10ml,再用正丁醇饱和的水洗涤2次,每次10ml,合并NaOH洗液和水洗液,再用水饱和的正丁醇振摇提取2次,每次10ml,与上述正丁醇液合并,蒸干,残渣加75%甲醇溶解,转移至10ml量瓶中至刻度,摇匀,即得;
b、对照品溶液的制备:取黄芪甲苷对照品,加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液,即得;
c、测定:分别精密吸取对照品溶液10μL、20μL以及供试品溶液10μL,注入高效液相色谱仪中测定,以外标两点法对数方程式计算,测得黄芪甲苷含量。
3.根据权利要求1所述的测定方法,其特征在于:所述步骤c中高效液相色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶;检测器为蒸发光散射检测器,蒸发光散射检测器漂移管温度为75-85℃,气体流速为2.3-2.7L/min;流动相为体积比为75:25的甲醇-水,流速为0.7-0.9ml/min。
4.根据权利要求1-3任一项所述的测定方法,其特征在于该中药组合物的制剂剂型为胶囊剂、片剂或丸剂。
5.根据权利要求4所述的测定方法,其特征在于黄芪甲苷的含量测定由以下步骤组成:
a、供试品溶液的制备:取相当于生药量13.5g的该中药组合物胶囊4g,倒出内容物,研细,加入甲醇50ml,浸泡过夜,超声处理30分钟,放冷,称重,用甲醇补足重量,滤过,量取续滤液25ml,蒸干,残渣用水20ml转移至分液漏斗中,再用三氯甲烷振摇提取3次,每次20ml,弃去三氯甲烷,水层用水饱和的正丁醇振摇提取5次,正丁醇每次用量分别是20ml、20ml、20ml、15ml、15ml,合并正丁醇液,用0.5%NaOH溶液洗涤2次,每次10ml,再用正丁醇饱和的水洗涤2次,每次10ml,合并NaOH洗液和水洗液,再用水饱和的正丁醇振摇提取2次,每次10ml,与上述正丁醇液合并,蒸干,残渣加75%甲醇溶解,转移至10ml量瓶中至刻度,摇匀,即得;
b、对照品溶液的制备:取黄芪甲苷对照品,加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液,即得;
c、测定:分别精密吸取对照品溶液10μL、20μL以及供试品溶液10μL,注入高效液相色谱仪中,测定,高效液相色谱中填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶;检测器为蒸发光散射检测器,蒸发光散射检测器漂移管温度为80℃,气体流速为2.5L/min;流动相为体积比为75:25的甲醇-水,流速为0.8ml/min,以外标两点法对数方程式计算,测得黄芪甲苷含量。
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CN110967422A (zh) * | 2019-11-21 | 2020-04-07 | 吉林师范大学 | 一种益气补血片中黄芪甲苷含量测定方法 |
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2018
- 2018-11-01 CN CN201811293025.XA patent/CN109490434A/zh active Pending
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
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PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20190319 |
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WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |