CN109481504A - 薜荔在制备预防和治疗呼吸道合胞体病毒感染的药物或保健品中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了薜荔及其提取物在制备预防和治疗呼吸道合胞体病毒感染的药物或保健品中的应用，本发明在薜荔原有功效的基础上，研发出薜荔及薜荔提取物在预防和治疗呼吸道合胞体病毒疾病中的新用途，且细胞毒性低，取得了很好的技术效果。
Description
技术领域
本发明涉及中药的新用途，具体涉及薜荔在制备预防和治疗呼吸道合胞体病毒感染的药物或保健品中的应用。
背景技术
薜荔(Ficus pumila Linn.)为桑科(Moraceae)榕属(Ficus)植物，别名馒头郎、凉粉果、木莲等。在我国主要分布在湖南、四川、海南和台湾等省。在海南主要产于昌江、儋州、文昌、保亭等市县。传统医学认为薜荔具有祛风，利湿，活血，解毒的功效，临床上用于风湿痹痛，泻痢，淋病，跌打损伤，痈肿疮疖的治疗。
人呼吸道合胞体病毒属于副粘膜病毒科肺炎病毒属。人呼吸道合胞体病毒是引起婴幼儿下呼吸道感染的主要病原体，也是1岁内婴儿细支气管炎和肺炎的最常见病因，2005年人呼吸道合胞体病毒在全球范围内引起340万人住院，6.6-19.9万5岁以下儿童死亡。流行病学调查显示，该病毒有明显的季节性，常于晚秋初冬发病，于冬末春初达到最高峰。目前该疾病的治疗主要依靠吸氧、雾化等支持治疗，临床上批准用于预防和治疗的药物为帕利珠单抗和利巴韦林，其治疗效果存在争议。
研究表明薜荔提取物具有多种药理活性，包括抗炎、镇痛、抗菌、抗氧化、抗肿瘤、降血糖血脂、抗高催乳素血症、保肝作用。但未发现薜荔抗病毒的相关报道，也未见薜荔预防和治疗呼吸道合胞体病毒的相关报道。
发明内容
发明目的：本发明的一个目的是通过大量实验筛选，在薜荔原有功效的基础上，研发出薜荔及薜荔提取物在预防和治疗呼吸道合胞体病毒疾病中的新用途。
技术方案，为了实现以上目的，本发明采取的技术方案为：
薜荔在制备预防和治疗病毒感染的药物或保健品中的应用。
作为更加优选，薜荔在制备预防和治疗呼吸道合胞体病毒感染的药物或保健品中的应用。
作为特别优选，薜荔提取物在制备预防和治疗呼吸道合胞体病毒感染的药物或保健品中的应用。
本发明所述的薜荔提取物在制备预防和治疗呼吸道合胞体病毒感染的药物或保健品中的应用，薜荔提取物由以下方法制备的得到：取薜荔地上部分，加入1～20倍量的溶剂，回流提取1～3次，每次1～3小时，收集合并提取液，减压浓缩成浸膏状，得到薜荔提取物。
作为优选方案，所述的薜荔提取物在制备预防和治疗呼吸道合胞体病毒感染的药物或保健品中的应用，其特征在于，薜荔提取物由以下方法制备的得到：取薜荔地上部分，加入10～20倍量的溶剂，回流提取1～3次，每次1～2小时，收集合并提取液，减压浓缩成浸膏状，得到薜荔提取物。
本发明所述的薜荔提取物在制备预防和治疗呼吸道合胞体病毒感染的药物或保健品中的应用，将薜荔提取物与药学上可接受的载体制备成贴剂、凝胶剂、片剂、胶囊剂、丸剂、注射剂和或颗粒剂剂型的药物。
有益效果：本发明通过大量实验筛选，实验结果表明，薜荔醇提物对呼吸道合胞体病毒具有很好的抑制作用，且对正常细胞毒性低，取得了非常好的技术效果。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述，但这些实施例不应解释为限制本发明。
实施例1
取薜荔400g，加入水3200ml，加热回流提取2次，每次1h，过滤收集滤液，合并，减压浓缩至稠膏状，得薜荔提取物。
实施例2
取薜荔400g，加入水4000ml，加热回流提取2次，每次1h，过滤收集滤液，合并，减压浓缩至稠膏状，得薜荔提取物。
实施例3
取薜荔400g，加入水4800ml，加热回流提取2次，每次1h，过滤收集滤液，合并，减压浓缩至稠膏状，得薜荔提取物。
实施例4
取实施例2中薜荔提取物，加入崩解剂、粘合剂、润滑剂和填充剂制成片剂。
实施例5
取实施例2中薜荔提取物，加入粘合剂、润滑剂、填充剂制成贴膏剂。
实施例6
取实施例2中薜荔提取物，加入粘合剂、润滑剂、填充剂制成凝胶剂。
实施例7体外抗病毒试验
1.试验材料：
Hep-2(人喉表皮样癌细胞)、人呼吸道合胞体病毒A型(ATCC VR-26)由中科院上海巴斯德研究所提供。DMEM培养基、胎牛血清、抗生素(青霉素和链霉素)、二甲亚砜(DMSO)、PBS均为Gibco BRL公司产品。96孔细胞培养板及6孔细胞培养板购自Corning公司。XDS-1B型生物倒置显微镜为重庆光学仪器厂产品。酶标仪型号为SpectraMax i3x购于MolecularDevices公司。CCK-8购于Dojindo东仁化学科技(上海)有限公司
2.试验方法与结果：
(1)药物对Hep-2细胞的毒性实验
取对数期Hep-2细胞，调整细胞悬液浓度为5×104/ml，向于96孔细胞培养板中每孔接种100μl细胞悬液，置于37℃5％CO2细胞培养箱中培养24小时至细胞长成单层。弃去孔中上清液，用磷酸缓冲液(PBS)洗1遍，将实施例2制备得到的薜荔提取物梯度稀释后，加入到96孔板的细胞中，每个浓度3个复孔，同时设定正常细胞对照及不含细胞的空白对照，将细胞培养板置于37℃5％CO2培养箱继续培养48h。每孔加入10μl的CCK-8，37℃5％CO2培养箱孵育2h，用酶标仪测定在450nm处的吸光度。依照CCK-8细胞毒性实验公式Cellviability/％＝(OD样品-OD空白)/(OD对照-OD空白)×100％计算细胞存活率及药物抑制率，利用改良寇式法计算CC50(The median cytotoxic concentration，中位浓度即对50％的细胞产生细胞毒性时对应的药物浓度)。选择细胞存活率大于50％的药物浓度进行后续抗病毒药物筛选实验。
结果显示，本发明制备得到的薜荔提取物对Hep-2细胞毒性作用表现为：细胞粘连、变圆、破碎脱落，胞质内颗粒增加，折光性增强并且吸光值明显下降。且随着薜荔提取物浓度逐渐增加细胞存活率呈递减趋势，薜荔提取物半数毒性浓度CC50为1.36mg/ml，结果见表1。薜荔提取物在0.5mg/mL范围内均未见明显的细胞毒性，从而确定该浓度为抗病毒实验的最高允许浓度。
表1.薜荔提取物对Hep-2细胞的毒性作用
(2)药物抗人呼吸道合胞体病毒A型药效实验
将1×105/ml Hep-2细胞接种于6孔细胞培养板中，置于37℃5％CO2培养箱培养24h。弃掉细胞上清后加入0.1MOI的人呼吸道合胞体病毒A型细胞和以无明显细胞毒性的最高浓度为起点倍比稀释的实施例2制备得到的薜荔提取物溶液，于37℃，5％CO2培养箱培养48h，取上清液氮中短时间冷冻后置于-80℃冰箱保存。本实验设不加入薜荔提取物的病毒感染为对照，实验重复两次。
取50ul，-80℃冰箱保存的人呼吸道合胞体病毒A型感染细胞上清，用含2％FBS和100U/ml双抗的DMEM细胞培养基按照10-1-10-8梯度稀释，加入到含有Hep-2细胞的96孔板上，同时设立正常细胞对照，病毒感染细胞对照组，置于37℃5％CO2细胞培养箱中培养48小时后,向每孔加入CCK-810μl，37℃培养2h，使用酶标仪测定450nm处的OD值，根据OD值计算出细胞存活率反映药物抗病毒效果。
结果显示，病毒感染细胞对照组各孔均出现以细胞肿胀变圆，折光度增强，聚集成葡萄串状为特征的典型CPE，不同浓度实施例2制备得到的薜荔提取物CPE病变程度减轻，且随着薜荔提取物浓度增加病毒抑制率呈递增趋势，结果见表2。本发明实施例2制备得到的薜荔提取物的抗病毒侵入的半数有效浓度EC50为0.044mg/ml，治疗指数(SI)为30.7。表明实施例2制备得到的薜荔提取物对RSV侵入细胞有阻断作用。
表2薜荔提取物对病毒侵入Hep-2细胞的阻断作用
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (6)
1.薜荔在制备预防和治疗病毒感染的药物或保健品中的应用。
2.薜荔在制备预防和治疗呼吸道合胞体病毒感染的药物或保健品中的应用。
3.薜荔提取物在制备预防和治疗呼吸道合胞体病毒感染的药物或保健品中的应用。
4.根据权利要求3所述的薜荔提取物在制备预防和治疗呼吸道合胞体病毒感染的药物或保健品中的应用，其特征在于，薜荔提取物由以下方法制备的得到：取薜荔地上部分，加入1～20倍量的溶剂，回流提取1～3次，每次1～3小时，收集合并提取液，减压浓缩成浸膏状，得到薜荔提取物。
5.根据权利要求4所述的薜荔提取物在制备预防和治疗呼吸道合胞体病毒感染的药物或保健品中的应用，其特征在于，薜荔提取物由以下方法制备的得到：取薜荔地上部分，加入10～20倍量的溶剂，回流提取1～3次，每次1～2小时，收集合并提取液，减压浓缩成浸膏状，得到薜荔提取物。
6.根据权利要求3所述的薜荔提取物在制备预防和治疗呼吸道合胞体病毒感染的药物或保健品中的应用，其特征在于，将薜荔提取物与药学上可接受的载体制备成贴剂、凝胶剂、片剂、胶囊剂、丸剂、注射剂和或颗粒剂剂型的药物。
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