CN106334149A

CN106334149A - 一种莪术油及其药物制剂

Info

Publication number: CN106334149A
Application number: CN201510390408.9A
Authority: CN
Inventors: 陈容; 徐朗; 黄娴; 冯仲异
Original assignee: HAINAN HUIYUANTANG PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: HAINAN HUIYUANTANG PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date: 2015-07-07
Filing date: 2015-07-07
Publication date: 2017-01-18

Abstract

本发明属于中药技术领域，本发明公开了一种莪术油及其药物制剂，该莪术油含有呋喃二烯、莪术二酮和吉马酮，其中呋喃二烯、莪术二酮和吉马酮的含量大于等于40％小于等于70％。本发明莪术油具有更好的稳定性以及更低的刺激性。

Description

一种莪术油及其药物制剂

技术领域

本发明属于中药技术领域，具体涉及一种新的莪术油及其以莪术油为原料的药物制剂。

本发明所述的莪术油是以温莪术为原料获得的莪术油，温莪术种植基地包括但不限于海南省。

背景技术

莪术为姜科植物，分为广西莪术、蓬莪术、温莪术，产于广西、江西、四川、浙江及海南等省。莪术油是从莪术干燥根茎中提取的挥发油，中医理论认为莪术油具有行气破血、消积止痛的功效，现代药理学研究表明莪术油还具有抗病毒、抗菌、抗肿瘤等功效。莪术油的化学成分较为复杂，大多数为倍半萜类化合物，沸点高而且具有热敏性，高温下容易发生氧化、分解或转化反应。

莪术油经过广泛的临床应用，证实其具有高效、低毒的特点且对多种疾病有效。莪术油制剂在宫颈癌、肝癌及心血管疾病治疗方面均取得了令人满意的疗效。临床使用的莪术油制剂一般包括莪术油注射液、莪术油葡萄糖注射液、复方莪术油栓剂、复方莪术油软胶囊等。

莪术油作为传统的活血化瘀中药近年来逐渐引起了医药界的重视，并在其资源、植化、药理、制剂、临床等方面进行了系统研究，证实莪术油是一个药理活性强、高效、安全的药物。肿瘤和心血管疾病是目前两大医学难题，同时也带来了两个具有广阔拓展空间的药品市场。莪术油的抗肿瘤和抗血栓活性及临床上的确切疗效，再加上其抗病毒和抗菌活性，都极大地预示着莪术油将会在未来的药品市场占据一席之地。总的来说，莪术油是一个很有发展前途的药物，随着今后对它的进一步开发研究，莪术油将会在我国的新药创制体系中大放异彩。

发明内容

基于上述原因，申请人经过多年研究，得到一种新的莪术油，该莪术油中莪术倍半萜类有效部位含量大于等于40％且小于等于70％；另外，对于有效成分以及刺激性成分莪术烯和桉油精进行深入的研究，发现莪术烯小于8％，桉油精小于1.0％的莪术油刺激性最小，稳定性最好；本发明得到的新莪术油可以作为药物原料使用。

本发明通过下述技术方案实现的。

一种莪术油，含有呋喃二烯、莪术二酮和吉马酮。

其中莪术油含有的呋喃二烯、莪术二酮和吉马酮的含量大于等于40％小于等于70％。

其中呋喃二烯含量大于等于10％小于等于32％；吉马酮含量大于等于5.5％小于等于10％，莪术二酮含量大于等于10％小于等于30％。

一种莪术油，莪术油含有的呋喃二烯、莪术二酮和吉马酮的含量大于等于40％小于等于70％；其中呋喃二烯含量大于等于10％小于等于32％；吉马酮含量大于等于5.5％小于等于10％，莪术二酮含量大于等于10％小于等于30％；莪术烯含量大于2％小于等于8％，桉油精含量大于0.1％小于1.0％。

一种莪术油，莪术油含有的呋喃二烯、莪术二酮和吉马酮的含量大于等于50％小于等于70％；其中呋喃二烯含量大于等于10％小于等于32％；吉马酮含量大于等于5.5％小于等于10％，莪术二酮含量大于等于10％小于等于30％；莪术烯含量大于2％小于等于8％，桉油精含量大于0.1％小于1.0％。

其中莪术油含有莪术烯，莪术烯含量大于2％小于等于8％。

其中莪术油中含有桉油精，桉油精含量大于0.1％小于1.0％。

进一步优选的莪术油，其中莪术油中含有桉油精，其中桉油精含量大于0.1％小于0.6％。

上述所述的莪术油为原料的药物制剂。

上述所述的药物制剂包括眼耳鼻喉、外阴、阴道、肛周、直肠、皮肤、粘膜等外用制剂，或者片剂、胶囊、颗粒剂等口服制剂，或者注射剂等。

上述所述的药物制剂包括：滴眼剂、滴耳剂、洗剂、阴道栓剂、直肠栓剂，软膏剂、胶囊剂、软胶囊剂、片剂、泡腾片、颗粒剂、口服液、凝胶剂、膜剂、泡沫剂等外用或口服制剂、或注射剂。

上述所述的药物制剂原料为莪术油为164重量份，冰片为150重量份。

上述所述药物制剂在制备预防和/或治疗人乳头瘤病毒感染的药物中的应用。

所述药物制剂在预防和/或治疗各种病毒、细菌、霉菌、衣原体、支原体、滴虫等感染、眼耳鼻喉感染、外阴炎、各种阴道炎、混合感染性阴道炎、皮肤感染、粘膜感染、痔疮感染、便秘、宫颈炎、附件炎、CIN I-CINIII、宫颈癌等药物中的应用。

上述所述的莪术油的制备方法包括但不限于为：

取莪术药材，洗净、切片2-5mm、40-80℃烘干、粉碎成莪术细粉过40-80目筛备用；取莪术细粉装于超临界CO2萃取设备的萃取釜中，调节萃取釜的工作压力为10-12MPa、工作温度为40-50℃；I级分离柱的工作压力为7～9MPa、工作温度为50-70℃；II级分离柱的工作压力为4～5MPa、工作温度为30-40℃，萃取90～120分钟，得萃取莪术油。

申请人通过多次研究，意外发现莪术在超临界CO₂萃取前处理过程中切片参数与烘干温度对于莪术烯和桉油精含量有着重要影响。

本发明所述的莪术油是以温莪术为原料获得的莪术油，产地包括但不限于海南省。

本发明莪术油具有现有技术的药理活性。

本发明莪术油为中药领域的“有效部位”概念。

所谓中药有效部位，是指当一味中药或复方中药提取物中的一类或几类化学成分的含量达到总提取物的50％以上，而且一类或几类已知化学成分被认为是有效成分，该一类或几类成分的混合体即被认为是有效部位。

呋喃二烯：CAS号：19912-61-9；吉马酮：CAS号：6902-91-6；莪术二酮：CAS号：13657-68-6；莪术烯：CAS号：17910-09-7；桉油精：CAS号：470-82-6。

上述所述的莪术油有效部位，可以按照本发明的超临界CO₂萃取的方法制备得到，也可以以符合药典标准的莪术油为原料，按照制备液相的方法制备得到：

液相色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，水为流动相B，进行梯度洗脱，梯度为：0～20min是等比例的把A60％和B40％变换成A95％和B5％，21～35min维持A95％和B5％；检测波长为216nm。

本发明下述试验，是在多次创造性试验基础上，针对本发明所要保护的技术方案进行的结论性试验。

一、不同莪术油稳定性试验

试验1组：莪术油：呋喃二烯含量28.72％，吉马酮含量7.57％，莪术二酮含量24.39％；莪术烯含量2.95％，桉油精含量0.13％。

制备方法为：取温莪术药材，洗净、切片3mm、40～50℃烘干、粉碎成莪术细粉过60目备用；取莪术细粉装于超临界CO2萃取设备的萃取釜中，调节萃取釜的工作压力为10.5MPa、工作温度为45℃；I级分离柱的工作压力为8.2MPa、工作温度为60℃；II级分离柱的工作压力为4.3MPa、工作温度为35℃，萃取1.5小时，得萃取莪术油。

试验2组：莪术油：呋喃二烯含量26.81％，吉马酮含量7.49％，莪术二酮含量20.09％；莪术烯含量4.20％，桉油精含量0.37％。

制备方法为：取温莪术药材，洗净、切片3mm、45～55℃烘干、粉碎成莪术细粉过80目备用；取莪术细粉装于超临界CO2萃取设备的萃取釜中，调节萃取釜的工作压力为10.5MPa、工作温度为45℃；I级分离柱的工作压力为8.2MPa、工作温度为60℃；II级分离柱的工作压力为4.3MPa、工作温度为35℃，萃取1.5小时，得萃取莪术油。

试验3组：莪术油：呋喃二烯含量26.22％，吉马酮含量7.60％，莪术二酮含量20.28％；莪术烯含量4.80％，桉油精含量0.41％。

制备方法为：取温莪术药材，洗净、切片3mm、50～60℃烘干、粉碎成莪术细粉过60目备用；取莪术细粉装于超临界CO2萃取设备的萃取釜中，调节萃取釜的工作压力为10.5MPa、工作温度为45℃；I级分离柱的工作压力为8.2MPa、工作温度为60℃；II级分离柱的工作压力为4.3MPa、工作温度为35℃，萃取2.0小时，得萃取莪术油。

试验4组：莪术油：呋喃二烯含量26.28％，吉马酮含量7.56％，莪术二酮含量19.89％；莪术烯含量5.81％，桉油精含量0.74％。

制备方法为：取温莪术药材，洗净、切片3mm、65～75℃烘干、粉碎成莪术细粉过80目备用；取莪术细粉装于超临界CO2萃取设备的萃取釜中，调节萃取釜的工作压力为10.5MPa、工作温度为45℃；I级分离柱的工作压力为8.2MPa、工作温度为60℃；II级分离柱的工作压力为4.3MPa、工作温度为35℃，萃取2.0小时，得萃取莪术油。

试验5组：莪术油：呋喃二烯含量26.10％，吉马酮含量6.93％，莪术二酮含量17.44％；莪术烯含量8.12％，桉油精含量1.14％。

制备方法为：取温莪术药材，洗净、切片7.5mm、90～95℃烘干、粉碎成莪术细粉过80目备用；取莪术细粉装于超临界CO2萃取设备的萃取釜中，调节萃取釜的工作压力为10.5MPa、工作温度为45℃；I级分离柱的工作压力为8.2MPa、工作温度为60℃；II级分离柱的工作压力为4.3MPa、工作温度为35℃，萃取2.0小时，得萃取莪术油。

加速试验条件：放置于温度40±2℃，相对湿度75％±5％的环境中，考察1、2、3、6月的性状、相对密度、折光度及含量变化。

含量检测方法：(中国药典2010年版一部附录VI D)测定。

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，水为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为216nm。理论板数按莪术二酮峰计算应不低于5000。

对照品溶液的制备取莪术二酮、呋喃二烯、吉马酮、莪术烯、桉油精对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含莪术二酮35μg、呋喃二烯50μg、吉马酮20μg、莪术烯20μg、桉油精10μg的混合溶液，即得。

供试品溶液的制备取本品0.1g，精密称定，置50ml量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，精密量取5ml，置25ml量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

试验结果：见表1。

试验结论：试验1-4组性状、相对密度、折光率均无明显变化；含量变化不超过5％；而当莪术烯含量大于8％、桉油精含量大于1.0％时(试验5组)，呋喃二烯和莪术二酮含量在2个月开始下降超过5％，充分说明莪术烯含量和桉油精含量对于莪术油稳定性有着很大的影响，而本发明的莪术油稳定性好。

二、不同莪术油家兔阴道刺激性试验

试验动物：健康性成熟雌性新西兰家兔，体重1.7～2.1kg。

试验药物：“一、不同莪术油稳定性试验”中试验2组、试验5组莪术油。

试验方法：取雌兔24只，随机分为6组，进行阴道刺激性试验，分为受试药完整阴道组(试验2组、试验5组莪术油)、受试药破损阴道组(试验2组、试验5组莪术油)、空白完整阴道组、空白破损阴道组，每组4只。破损阴道组采用前端钝圆、直径为0.6cm的圆形玻棒插入阴道2cm，每只连续反复5次摩擦，造成阴道粘膜损伤。取检疫合格家兔分组后，于每天上午给药1次，采用阴道给药，无菌操作，用直径约0.3cm圆形光滑玻璃滴管直接滴入入家兔阴道内，每次确保药物与阴道接触4h，若药物流出过多，要及时补给，连续7d。末次给药后72h处死动物，解剖下腹部并剖开阴道，用生理盐水冲洗干净后，肉眼观察给药处阴道粘膜有无充血、红斑和水肿等刺激反应症状，进行刺激性评价，用10％福尔马林固定后进行组织病理学检查。留余动物继续观察14d，再摘取阴道做病理检查。评判标准见表2、表3。

标记：24只家兔用油笔在家兔两耳腹面编号，其中1、2、3、4家兔进行受试药(试验2组莪术油)完整阴道刺激性试验；5、6、7、8号家兔进行受试药(试验5组莪术油)完整阴道刺激性试验，13、14、15、16家兔进行受试药(试验2组莪术油)破损阴道刺激性试验；17、18、19、20号家兔进行受试药(试验5组莪术油)破损阴道刺激性试验，9、10、11、12号家兔进行空白完整阴道刺激性试验，21、22、23、24号家兔进行空白破损阴道刺激性试验。

表2阴道刺激反应分值标准

表3阴道刺激性评价标准

分值	评价
		0	无刺激
1～3	最小刺激性
		4～6	轻度刺激性
7～9	中度刺激性
		10～12	明显刺激性

实验结果

末次给药后72h处死动物，解剖阴道，肉眼观察阴道粘膜：阴道完整家兔受试药组的1号、2号、3号和空白栓组的10号、11号家兔阴道干净，无红斑、水肿、坏死和异常分泌物，受试药组的5号轻度红斑、中度水肿、中度分泌物；6号重度红斑、中度水肿、轻度分泌物；7号中度红斑、中度水肿、轻度分泌物；空白栓组的9号有非常轻度红斑，无水肿、分泌物；阴道破损家兔受试药组的13号、14号、和空白栓组的21号、22号、23号家兔阴道干净，无红斑、水肿、坏死和异常分泌物。15号有轻度分泌物；17号中度红斑、中度水肿、中度分泌物；18号中度红斑、重度水肿、中度分泌物；19号重度红斑、中度水肿、中度分泌物。恢复期观察，受试药组的4号、16号及空白栓组12号未见异常，空白栓组24号家兔有非常轻度红斑；受试药组的8号及20号均中度红斑、轻度水肿、轻度分泌物。各组动物阴道粘膜评分结果见表4。

表4-1阴道刺激性试验阴道给药部位肉眼观察评分结果

表4-2阴道刺激性试验阴道给药部位肉眼观察评分结果

上述试验表明，试验2组对于家兔的阴道刺激为可接受，莪术油为本发明的莪术油。

三、药理学试验

莪术油：呋喃二烯含量28.68％；吉马酮含量7.44％，莪术二酮含量22.52％；莪术烯含量2.79％；桉油精含量0.13％。

制备方法为：取温莪术药材，洗净、切片2.5mm、40～45℃烘干、粉碎成莪术细粉过60目备用；取莪术细粉装于超临界CO2萃取设备的萃取釜中，调节萃取釜的工作压力为11MPa、工作温度为45℃；I级分离柱的工作压力为8.2MPa、工作温度为60℃；II级分离柱的工作压力为4.3MPa、工作温度为35℃，萃取1.5小时，得萃取莪术油。

试验药①：上述方法得到的莪术油。

试验药②：将上述方法得到莪术油和冰片制成的栓剂(每枚栓剂含莪术油164mg，冰片150mg)

(一)抗人乳头瘤病毒试验

试验药：试验药②将上述方法得到莪术油和冰片制成的栓剂(每枚栓剂含莪术油164mg，冰片150mg)

细胞系

CaSki细胞系，HPV16阳性的人宫颈癌细胞株；H8细胞系，人宫颈鳞状上皮永生化细胞系，均由中国医学科学院基础医学研究所生物物理室提供。

实验方法

1细胞培养

CaSki细胞在含5％胎牛血清的DMEM培养基中，H8细胞在含2％胎牛血清的DMEM培养基中，其所含试验药37℃，5％CO₂饱和湿度环境下培养。

2药物浓度的选择

将1枚受试药溶解于44ml无血清的DMEM培养基中，其所含试验药浓度为3.95×10⁴mg/L待溶液澄清后，孔径为22μm的滤器过滤除菌，分装后4℃避光保存备用。根据预试验结果，实验组最终加入的试验药浓度分别为19.77mg/L，39.55mg/L，79.09mg/L，对照组则加入等量的培养基。

3细胞形态观察

活细胞照相：将对数生长期的细胞接种于6孔板培养板，每孔10×10⁴个细胞，在各实验组的6孔培养板中每孔放置一片盖玻片，形成附有细胞的盖片，d2细胞贴壁后更换为含药培养基，培养3d后，在倒置显微镜下观察细胞形态。

4、四甲基偶氮唑蓝比色法检测不同浓度的试验药液对CaSki和H8细胞生长抑制情况

将细胞接种于六板96孔细胞培养板，每孔3000个细胞，d2更换为含药培养基，所含试验药浓度分别为19.77mg/L，39.55mg/L，79.09mg/L，并设正常对照，每个浓度平行5孔。37℃，5％CO₂饱和湿度下培养24h，后每孔加入5mg/ml四甲基偶氮唑蓝(MTT)22μl，继续培养4h，弃去上清液，每孔加入二甲基亚砜150μl，37℃培养20min，酶标仪测定OD值，波长492nm，连续6d，观察其生长情况。

5、细胞周期检测

在六孔培养板中以含不同浓度药物的培养基培养5d，每个药物浓度平行3孔，收集细胞，制备单细胞悬液，PBS清洗2次，预冷70％乙醇固定，4℃保存待检。经0.01％RNA酶处理细胞浆RNA，50mg/L碘化丙锭DNA染色30min后，经300目筛过滤除去成团细胞，应用流式细胞仪检测细胞周期中不同时相的细胞百分比和细胞凋亡率。每份标本测定5000个细胞。根据DNA含量区分细胞所处细胞周期时相。

6、mRNA表达检测

收集培养d5的细胞，TRIZOL处理后提取RNA，逆转录为cDNA，扩增HPV16E6、E7，同时扩增β-actin作为内参照，HPV16E6、E7引物(616bp)：上游5`-TGACTTTGCTTTTCGGGATT3`，下游：5`-GAGAACAGATGGGGCACAC-3`。β-actin(552bp)引物序列：上游：5`-ATCATGTTTGA-GACCTTCAACACC-3`，

下游：5`-CATGGTGGT-GCCGCCGCCAGACAG-3`。扩增参数为：94℃遇变性5min，94℃变性45s，50℃复性45s，72℃延伸1min，扩增30个循环；72℃延伸5min；PCR产物45℃保存。2％琼脂糖凝胶由泳观察结果，电压40V。应用Scion Image 4.0(NIH软件进行电泳条带图像灰度值的半定量分析。待测基因电泳条带灰度比值＝待测条带灰度值/同一份标本内参照β-actin条带灰度值。每个加药样本至少检测3次。

7、统计学方法

应用SPSS 13.0统计软件进行单因素方差分析(ANOVA)、t检验等。

结果

1、试验药对CaSki和H8细胞的生长抑制作用

MTT检测发现不同浓度试验药②对宫颈永生化细胞H8以及宫颈癌细胞CaSki生长均有抑制作用，随着作用时间以及药物浓度增加作用越明显。

2、试验药②对CaSki、H8细胞形态的影响

CaSki和H8，细胞用试验药药物处理后，可见细胞生长稀疏，部分细胞固缩。

3、试验药②作用下细胞周期和凋亡率

试验药作用于H8细胞，G1期细胞增加，G2期略细胞减少，但是均无统计学差异(P＞0.05)。试验药作用于CaSki细胞，G1期细胞增加(P＜0.05)，G2期细胞减少(P＜0.05)，S期细胞减少(P＜0.05)，使细胞阻滞于G1期。试验药作用于H8细胞，加药组凋亡率略增加，但无统计学差异(P＞0.05)，(见表5)。试验药作用于CaSki细胞，加药组虽无明显的凋亡峰，但有统计学差异(P＜0.05)(见表6)

表5试验药②作用下H8细胞周期分布和细胞凋亡率

表6试验药②作用下CaSki细胞周期分布和细胞凋亡率

表7 RT-PCR产物电泳条带灰度值

试验2：莪术油体外抗肿瘤筛选试验研究

试验药：试验药①(上述方法得到的莪术油)

实验细胞：

人直肠癌细胞株(HT-29)、人结直肠癌细胞株(DLD-1)：安普泽生物技术有限公司惠赠，来源：ATCC(美国标准生物品收藏中心)。

人肺癌细胞(淋巴结转移)NCI-H292、人高转移肺癌细胞95-D、人大细胞肺癌细胞NCI-H460[H460]、人非小细胞肺癌细胞NCI-H1650、人非小细胞肺癌细胞A549、人肝癌细胞Hep G2、宫颈癌细胞HeLa、人结肠癌细胞HCT 116、人恶性黑色素瘤细胞A-375、人胃癌细胞(未分化)HGC-27、人胃癌细胞MGC80-3。

实验方法：

调整细胞密度为5×10⁵～8×10⁵个/mL，96孔培养板内每孔加细胞悬液100μL(每孔约5×10⁴～8×10⁴个)。于37℃体积分数5％的CO₂饱和湿度培养箱中。试验药①溶解于培养基中，配制成7档浓度组(使其终浓度为6400μg/ml、3200μg/ml、1600μg/ml、800μg/ml、400μg/ml、200μg/ml、100μg/ml)。每孔试药加100μL；阴性对照组只加试剂不加药，每组样品设6个复孔。与药物作用48h后，每孔加入20μL MTT(终浓度0.5mg/ml)液，继续培养4h后，弃上清，每孔加入150μL DMSO，摇床摇匀至结晶全部溶解，酶联仪于测定波长为490nm，将各加试液孔均值(T)与对照孔值(C)比较，以下列公式计算出各浓度组的百分抑制率[抑制率＝(1-T/C)×100％]，按IC₅₀计算软件计算细胞的半数抑制浓度(IC₅₀)；实验重复2次。

统计方法

所有数据均输入EXCEL2003进行统计分析，各组计量数据均要计算各实验组进行组间比较之前先进行组间方差分析(F-test)，当组间方差齐同时，组间比较采用Student-T检验(非配对的T检验)进行统计，组间方差不齐时，采用校正的Student-T检验进行统计分析。

试验结果见(表8)

表8

在本实验研究条件下，试验药对肺癌、肝癌、宫颈癌、结肠癌、胃癌和人黑色素瘤都有很强的抑制和杀伤效应，IC₅₀在161.2～656.3μg/ml，其中对宫颈癌细胞(Hela)作用最强，IC₅₀为161.2±1.56μg/ml，且抑制率随着药物浓度的增加而增加，提示试验药有较强细胞毒作用和显著的浓度依赖，并且对宫颈癌的抑制作用最强。表明本方法制得的莪术油对不同的肿瘤细胞有一定的抑制特异性和不同的敏感性。

试验3：体外抗细菌试验

菌种

革兰氏阳性菌：金黄色葡萄球菌(含质控株ATCC25923，30株)，表皮葡萄球菌(30株)，粪肠球菌(30株)，溶血性链球菌(26株)，溶血性葡萄球菌(29株)，无乳链球菌(26株)，白喉杆菌(24株)；

革兰氏阴性菌：肺炎克雷伯菌(共18株)，大肠杆菌(含质控株ACTT25922，共22株)，鲍曼不动杆菌(19株)，溶血性不动杆菌(17株)，嗜麦芽窄食单胞菌(25株)，铜绿色假单胞菌(含质控株ATCC27853，共24株)，萘瑟氏淋球菌(22株)。

试验方法

最小抑菌浓度(MIC)测定方法：采用倍比稀释法制成含药平板，将每种受试菌液，滴入相应平板，待干后再把平板倒置，然后放入培养箱37℃培养24h(粪肠球菌培养48h)。在无药平板接种各菌株培养作阳性对照。

最小杀菌浓度(MBC)测定方法：在无药MH琼脂平板底面玻璃用油笔画上“#”，把每个平板分成12或16个区域(每个区域将培养不同菌株)，并写上相应菌株编号。受试菌在含药MH肉汤培养了24h(粪肠球菌48h)后，取出摇匀，用加样枪吸取10ul，根据菌株编号，滴入无药平板相应编号的区域内，待干后再把平板倒置，然后放入37℃培养箱培养24h(粪肠球菌48h)。阳性对照区域标“阳”，接种无药肉汤试管中菌株。

试验结果见表9、表10

表9体外抗细菌试验MIC测定结果

表10体外抗细菌试验MBC测定结果

由表9和表10可知，对14种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的342株受试临床菌株，试验药②及氧氟沙星栓均有抑菌和杀菌作用。制备实施例

实施例1

莪术油：呋喃二烯含量28.72％，吉马酮含量7.57％，莪术二酮含量24.39％；莪术烯含量2.95％，桉油精含量0.13％。

制备方法为：取温莪术药材，洗净、切片3mm、40～50℃烘干、粉碎成莪术细粉过60目备用；取莪术细粉装于超临界C02萃取设备的萃取釜中，调节萃取釜的工作压力为10.5MPa、工作温度为45℃；I级分离柱的工作压力为8.2MPa、工作温度为60℃；II级分离柱的工作压力为4.3MPa、工作温度为35℃，萃取1.5小时，得萃取莪术油。

实施例2

莪术油：呋喃二烯含量26.81％，吉马酮含量7.49％，莪术二酮含量20.09％；莪术烯含量4.20％，桉油精含量0.37％。

实施例3

莪术油：呋喃二烯含量26.22％，吉马酮含量7.60％，莪术二酮含量20.28％；莪术烯含量4.80％，桉油精含量0.41％。

实施例4

莪术油：莪术油：呋喃二烯含量26.28％，吉马酮含量7.56％，莪术二酮含量19.89％；莪术烯含量5.81％，桉油精含量0.74％。

上述实施例莪术油具有现有技术的药理活性，并比现有技术的莪术油具有更好的药理作用；

上述实施例莪术油为中药领域的“有效部位”概念。

上述通过具体实施方式的描述对本发明作进一步说明，但这并非是对本发明的限制，本领域技术人员根据本发明的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本发明的基本思想，均在本发明的范围之内。

Claims

1.一种莪术油，其特征在于莪术油含有呋喃二烯、莪术二酮和吉马酮。

2.根据权利要求1所述的一种莪术油，其中莪术油含有的呋喃二烯、莪术二酮和吉马酮的含量大于等于40％小于等于70％。

3.根据权利要求1所述的一种莪术油，其中呋喃二烯含量大于等于10％小于等于32％；吉马酮含量大于等于5.5％小于等于10％，莪术二酮含量大于等于10％小于等于30％。

4.根据权利要求1-3任一项所述的一种莪术油，其中莪术油含有莪术烯，莪术烯含量大于2％小于等于8％。

5.根据权利要求1-3任一项所述的一种莪术油，其中莪术油中含有桉油精，桉油精含量大于0.1％小于1.0％。

6.根据权利要求1-5任一项所述的一种莪术油，其特征在于以莪术油为原料制备的药物制剂。

7.根据权利要求6所述的一种莪术油，其中药物制剂包括眼耳鼻喉、外阴、阴道、肛周、直肠、皮肤、粘膜等外用制剂，或者片剂、胶囊、颗粒剂等口服制剂，或者注射剂等。

8.根据权利要求6所述的一种莪术油，其中药物制剂包括：滴眼剂、滴耳剂、洗剂、阴道栓剂、直肠栓剂，软膏剂、胶囊剂、软胶囊剂、片剂、泡腾片、颗粒剂、口服液、凝胶剂、膜剂、泡沫剂等外用或口服制剂、或注射剂。

9.根据权利要求1-5所述的一种莪术油，其中药物制剂原料为莪术油为164重量份，冰片为150重量份。

10.根据权利要求8所述的一种莪术油，其特征在于所述药物制剂在制备预防和/或治疗人乳头瘤病毒感染的药物中的应用。

11.根据权利要求8所述的一种莪术油，其特征在于所述药物制剂在预防和/或治疗各种病毒、细菌、霉菌、衣原体、支原体、滴虫等感染、眼耳鼻喉感染、外阴炎、各种阴道炎、混合感染性阴道炎、皮肤感染、粘膜感染、痔疮感染、便秘、宫颈炎、附件炎、CIN I-CINIII、宫颈癌等药物中的应用。

12.根据权利要求1-5任一项所述的一种莪术油，其特征在于制备方法为：

取莪术药材，洗净、切片2-5mm、40-80℃烘干、粉碎成莪术细粉过40-80目筛备用；取莪术细粉装于超临界C02萃取设备的萃取釜中，调节萃取釜的工作压力为10-12MPa、工作温度为40-50℃；I级分离柱的工作压力为7～9MPa、工作温度为50-70℃；II级分离柱的工作压力为4～5MPa、工作温度为30-40℃，萃取90～120分钟，得萃取莪术油。