CN109463284A - 以已结瓜的芋香冬瓜的芽为外植体的离体快繁技术 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及植物组织培养技术，具体的涉及一种以已结瓜的芋香冬瓜的芽为外植体的离体快繁技术。以以已结瓜的芋香冬瓜的芽为外植体，经过消毒和接种后，在芽诱导培养基上培养得到丛生芽，将诱导出的丛生芽接种到增殖培养基进行丛生芽增殖培养，得到增殖芽，当增殖芽长至2‑3cm时转接到生根培养基上进行诱导生根，形成完整植株，小苗经炼苗、驯化、移栽成活后获得扩繁苗。
Description
技术领域
本发明涉及植物组织培养技术，具体的涉及一种以已结瓜的芋香冬瓜的芽为外植体的离体快繁技术。
背景技术
芋香冬瓜是从从中国台湾地区引进的中小型冬瓜品种，为葫芦科冬瓜属植物。瓜肉肥厚，肉质绵软细腻，烹饪过程中散发出自然的芋香，风味独特，深受广大消费者喜爱；耐高温，适宜在热带及亚热带地区种植。然而一个“芋香冬瓜”品种的育成通常要经历5年以上。
目前国内外有关冬瓜组织培养方面的研究鲜有报道，但是利用无菌苗的顶芽及带腋芽茎段建立了中国台湾冬瓜的组织培养及快繁体系，或者以无菌苗的子叶为外植体初步建立了冬瓜的组培再生体系。但到目前为止，尚未见到从大田种植已结果实的芋香冬瓜上获得外植体，建立离体快繁技术体系的报道。
发明内容
本发明的主要目的在于提供一种以已结瓜的芋香冬瓜的芽为外植体的离体快繁技术，以解决现有技术中的芋香冬瓜培育周期长的问题。
为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种以已结瓜的芋香冬瓜的芽为外植体的离体快繁技术。
一种以已结瓜的芋香冬瓜的芽为外植体的离体快繁技术，包括如下步骤：
1)外植体的选取与处理：连续晴朗三天后的早晨，在大田中选取已结成熟商品瓜的芋香冬瓜苗的顶芽或腋芽作为外植体，将得到的外植体进行消毒处理；
2)丛生芽诱导培养：将消毒后的外植体接种于芽诱导培养基中进行丛生芽诱导培养，得到诱导培养的丛生芽，其中，培养条件为：光照强度1000-2000lx，光照时间16小时培养温度27±1℃，空气相对湿度为75％-80％，培养23-26天；
3)丛生芽增殖：将诱导出的丛生芽接种到增殖培养基进行丛生芽增殖培养，得到增殖芽，其中，培养条件为：光照强度1000-2000lx，光照时间16小时，培养温度27±1℃，空气相对湿度为75％-80％，培养25-28天；
4)生根培养：将得到的高约1.5-2cm增殖芽从基部切下，转入生根培养基中进行诱导生根，得到不定根，其中，培养条件为：光照强度2000-3000lx，光照时间16小时，培养温度27±1℃，空气相对湿度为75％-80％，培养5-10天；
5)炼苗移栽：将芋香冬瓜瓶苗进行室外炼苗6-7天，然后洗去附着于苗根系上的培养基，移栽至小育苗杯中进行培养，得到组培苗；
6)大田培养：将组培苗移至大田进行常规栽培，将植株顶部打掉，让其萌发侧芽，长侧枝，促进坐果生长。
进一步地，步骤1)所述的消毒步骤为：将外植体在流水下冲洗去除表面污垢后，切成带芽的节段；用质量百分比浓度为15-20％新洁尔灭浸泡带芽的芋香冬瓜节段，转入超净工作台上进行表面杀菌；将杀菌后的外植体经无菌水冲洗后，用质量百分比浓度75％的酒精浸泡后，再用无菌水冲洗，切去伤口部位，再用含有质量百分比浓度0.05-0.1％的HgCl2溶液消毒，无菌水冲洗，切去伤口部位后用无菌的过滤纸吸干表面水分。
进一步地，步骤1)所述的消毒步骤为：将外植体在流水下冲洗10-20min去除表面污垢后，切成带芽的节段；用质量百分比浓度为15-20％新洁尔灭浸泡带芽的芋香冬瓜节段5-10min，转入超净工作台上进行表面杀菌；将杀菌后的外植体经无菌水冲洗3-5次后，用质量百分比浓度75％的酒精浸泡30-60s后，再用无菌水冲洗3-5次，切去伤口部位，再用含有质量百分比浓度0.05-0.1％的HgCl2溶液消毒7-10min，无菌水冲洗5-6次，切去伤口部位后用无菌的过滤纸吸干表面水分。
进一步地，所述步骤1)中顶芽或腋芽选自刚刚有花芽。
已有的报道中，往往是采用消毒灭菌后的种子在无菌条件下萌发获得无菌苗，因此基本不存在消毒及污染问题，而本发明从大田中取已经明确性状的植株的顶芽或腋芽，因而，这些植株必须已经成苗并且结出成熟瓜，而从这种植株中取的芽存活能力通常是较弱的。因此，在消毒技术上需要对时间、消毒剂以及剂量上严格把握，消毒时间太短，易造成严重污染导致外植体死亡，消毒时间太长，会导致外植体直接死亡，因此本发明中取芽时的天气情况，芽的大小(5-6cm)和老嫩程度(刚刚有花芽)都决定整个体系的成败。
进一步地，步骤2)所述的芽诱导培养基为：MS,质量百分比浓度0.1-0.3mg/L的2-IP，质量百分比浓度30g/L蔗糖，质量百分比浓度6.0g/L琼脂，pH为5.8。
进一步地，步骤3)所述的增殖培养基含有MS，质量百分比浓度0.05-0.2mg/L2-IP，质量百分比浓度30g/L蔗糖，质量百分比浓度6.0g/L琼脂，pH为5.8。
进一步地，步骤4)所述的生根培养基为：生根培养基含有MS，质量百分比浓度0.1-0.2mg/L IBA，质量百分比浓度30g/L蔗糖，质量百分比浓度6.0g/L琼脂，pH为5.8。
进一步地，步骤5)中不定根长度达到5cm以上。
本发明的有益效果如下：
(1)应用本发明的技术方案，由于每个品种(或品系)只取一个单株作为外植体来培养成苗，可以在最大限度上保持品种在遗传上的高度一致，这比任何杂交种的纯度都要高，这对于冬瓜的生产性能的提高有着很重要的意义；
(2)该快繁技术成功应用于冬瓜杂交育种，将能大大缩短冬瓜杂交育种的年限，降低育种的成本，并且芋香冬瓜耐热抗病性好，苗进行脱毒组培技术后，杜绝了种子携带病毒的危害，植株适应性强；
(3)通过组培技术，瓜苗整齐一致，方便田间管理
(4)有效提高冬瓜生产性能，有力推动现代生物技术在冬瓜上的应用。
附图说明
构成本申请的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：
图1为芋香冬瓜在芽诱导培养基上的不定芽图；
图2为芋香冬瓜在不定根诱导培养基上生根，长成完整植株图；
图3为芋香冬瓜组培苗在小杯育苗；
图4为芋香冬瓜组培苗在大田种植并结瓜图。
具体实施方式
需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将参考附图并结合实施例来详细说明本发明。
实施例1：
一种以已结瓜的芋香冬瓜的芽为外植体的离体快繁技术，包括如下步骤：
步骤1：外植体的预处理：连续晴朗三天后的早晨，在大田中选取已结成熟商品瓜的芋香冬瓜苗的顶芽及腋芽作为外植体，在流水下冲洗10min去除表面污垢后，切成带芽的节段，用质量百分比浓度15％的新洁尔灭浸泡5min，转入超净工作台上进行表面杀菌。外植体经无菌水冲洗3次后用质量百分比浓度75％的酒精浸泡60s后，再用无菌水冲洗3次，切去伤口部位，再用含有质量百分比浓度0.1％的HgCl2溶液消毒7min，无菌水冲洗5次，切去伤口部位后用无菌的过滤纸吸干表面水分。
步骤2：芽诱导培养：将步骤1预处理好的外植体接种于芽诱导培养基中进行丛生芽诱导培养，接种后每天置于光照强度1000lx，培养温度26℃，空气相对湿度为75％的条件下光照16小时，培养23天，得到诱导培养的丛生芽。所述的诱导培养基含有MS，质量百分比浓度0.1mg/L的2-IP，质量百分比浓度30g/L蔗糖，质量百分比浓度6.0g/L琼脂，经混合配制后，使其pH为5.8，具体见表1。
步骤3：丛生芽增殖：将步骤2诱导切取诱导出的丛生芽接种到增殖培养基进行不定芽增殖培养，接种后每天置于光照强度1000lx，培养温度28℃，空气相对湿度为75％的条件下光照16小时，培养25天，得到增殖芽，所述的增殖培养基含有MS，质量百分比浓度0.05mg/L 2-IP，质量百分比浓度30g/L蔗糖，质量百分比浓度6.0g/L琼脂，经混合配制后，使其pH为 5.8。
步骤4：生根培养：将步骤3中株高约1.5cm左右的健壮增殖芽从基部切下，转入生根培养基中进行诱导生根，接种后每天置于光照强度2000lx，培养温度28℃，空气相对湿度为75％的条件下光照16小时，培养10天，即可出现不定根，生根率达95.5％，具体见表2。
所述的生根培养基含有MS，质量百分比浓度0.1mg/L IBA，质量百分比浓度30g/L蔗糖，质量百分比浓度6.0g/L琼脂，经混合配制后，使其pH为5.8。
步骤5：炼苗移栽：将步骤4中不定根长度达到5cm以上的芋香冬瓜瓶苗进行室外炼苗 6天，然后洗去附着于苗根系上的培养基，移栽至小育苗杯中进行培养，获得完整的再生植株。成活率可以达到90％以上。
待组培苗长至10cm高后，移至大田进行常规栽培，可获得和母株相同遗传性状的芋香冬瓜。
步骤6：大田管理：采用平棚架栽培，株距50cm/株，移栽到大田的组培苗，5天后经过缓苗期，生长到10片左右叶子时，将植株顶部打掉，让其萌发侧芽，长侧枝，隔10天左右增施一次，适当淋尿素和复合肥，座果期追施复合肥和钾肥，将壮苗移栽到大田后，。座果期及时防治美洲斑潜蝇、针蜂、蓟马等虫害。
实施例2：
一种以已结瓜的芋香冬瓜的芽为外植体的离体快繁技术，包括如下步骤：
步骤1：外植体的预处理：连续晴朗三天后的早晨，在大田中选取已结成熟商品瓜的芋香冬瓜苗的顶芽及腋芽作为外植体，在流水下冲洗20min去除表面污垢后，切成带芽的节段，用质量百分比浓度20％的新洁尔灭浸泡10min，转入超净工作台上进行表面杀菌。外植体经无菌水冲洗5次后用质量百分比浓度75％的酒精浸泡30s后，再用无菌水冲洗5次，切去伤口部位，再用含有质量百分比浓度0.05％的HgCl2溶液消毒10min，无菌水冲洗6次，切去伤口部位后用无菌的过滤纸吸干表面水分。
步骤2：芽诱导培养：将步骤1预处理好的外植体接种于芽诱导培养基中进行丛生芽诱导培养，接种后每天置于光照强度2000lx，培养温度28℃，空气相对湿度为80％的条件下光照 16小时，培养26天，得到诱导培养的丛生芽。所述的诱导培养基含有MS，质量百分比浓度0.3mg/L的2-IP，质量百分比浓度30g/L蔗糖，质量百分比浓度6.0g/L琼脂，经混合配制后，使其pH为5.8，具体见表1。
步骤3：丛生芽增殖：将步骤2诱导切取诱导出的丛生芽接种到增殖培养基进行不定芽增殖培养，接种后每天置于光照强度2000lx，培养温度26℃，空气相对湿度为80％的条件下光照16小时，培养28天，得到增殖芽，所述的增殖培养基含有MS，质量百分比浓度0.2mg/L 2-IP，质量百分比浓度30g/L蔗糖，质量百分比浓度6.0g/L琼脂，经混合配制后，使其pH为 5.8。
步骤4：生根培养：将步骤3中株高约2cm左右的健壮增殖芽从基部切下，转入生根培养基中进行诱导生根，接种后每天置于光照强度3000lx，培养温度26℃，空气相对湿度为80％的条件下光照16小时，培养5天，即可出现不定根，生根率达96.4％，具体见表2。
所述的生根培养基含有MS，质量百分比浓度0.2mg/L的IBA，质量百分比浓度30g/L蔗糖，质量百分比浓度6.0g/L琼脂，经混合配制后，使其pH为5.8。
步骤5：炼苗移栽：将步骤4中不定根长度达到5cm以上的芋香冬瓜瓶苗进行室外炼苗 7天，然后洗去附着于苗根系上的培养基，移栽至小育苗杯中进行培养，获得完整的再生植株。成活率可以达到90％以上。
待组培苗长至10cm高后，移至大田进行常规栽培，可获得和母株相同遗传性状的芋香冬瓜。
步骤6：大田管理：采用平棚架栽培，株距60cm/株，移栽到大田的组培苗，5天后经过缓苗期，生长到10片左右叶子时，将植株顶部打掉，让其萌发侧芽，长侧枝，隔10天左右增施一次，适当淋尿素和复合肥，座果期追施复合肥和钾肥，将壮苗移栽到大田后，。座果期及时防治美洲斑潜蝇、针蜂、蓟马等虫害。
对比芋香冬瓜侧枝萌发能力较强，座果性好，开花到采收商品瓜约15天，一棵植株可接到6-8个冬瓜，按一亩地800棵苗计算，单果重1.5kg，每亩的产量是7200-9600kg，目前广州种植的芋香冬瓜主要以出口为主，精品芋香冬瓜主要销售香港以及国外的市场，每公斤售价在8-10元/kg，每亩的收益在7万元以上，效益非常可观。
表1：芽诱导培养的结果
表2：生根培养的结果
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.一种以已结瓜的芋香冬瓜的芽为外植体的离体快繁技术，其特征在于，包括如下步骤：
1)外植体的选取与处理：连续晴朗三天后的早晨，在大田中选取已结成熟商品瓜的芋香冬瓜苗的顶芽或腋芽作为外植体，将得到的外植体进行消毒处理；
2)丛生芽诱导培养：将消毒后的外植体接种于芽诱导培养基中进行丛生芽诱导培养，得到诱导培养的丛生芽，其中，培养条件为：光照强度1000-2000lx，光照时间16小时，培养温度27±1℃，空气相对湿度为75％-80％，培养23-26天；
3)丛生芽增殖：将诱导出的丛生芽接种到增殖培养基进行丛生芽增殖培养，得到增殖芽，其中，培养条件为：光照强度1000-2000lx，光照时间16小时，培养温度27±1℃，空气相对湿度为75％-80％，培养25-28天；
4)生根培养：将得到的高约1.5-2cm增殖芽从基部切下，转入生根培养基中进行诱导生根，得到不定根，其中，培养条件为：光照强度2000-3000lx，光照时间16小时，培养温度27±1℃，空气相对湿度为75％-80％，培养5-10天；
5)炼苗移栽：将芋香冬瓜瓶苗进行室外炼苗6-7天，然后洗去附着于苗根系上的培养基，移栽至小育苗杯中进行培养，得到组培苗；
6)大田培养：将组培苗移至大田进行常规栽培，将植株顶部打掉，让其萌发侧芽，长侧枝，促进坐果生长。
2.如权利要求1所述的以已结瓜的芋香冬瓜的芽为外植体的离体快繁技术，其特征在于，步骤1)所述的消毒步骤为：将外植体在流水下冲洗去除表面污垢后，切成带芽的节段；用质量百分比浓度为15-20％新洁尔灭浸泡带芽的芋香冬瓜节段，转入超净工作台上进行表面杀菌；将杀菌后的外植体经无菌水冲洗后，用质量百分比浓度75％的酒精浸泡后，再用无菌水冲洗，切去伤口部位，再用含有质量百分比浓度0.05-0.1％的HgCl2溶液消毒，无菌水冲洗，切去伤口部位后用无菌的过滤纸吸干表面水分。
3.如权利要求2所述的以已结瓜的芋香冬瓜的芽为外植体的离体快繁技术，其特征在于，步骤1)所述的消毒步骤为：将外植体在流水下冲洗10-20min去除表面污垢后，切成带芽的节段；用质量百分比浓度为15-20％新洁尔灭浸泡带芽的芋香冬瓜节段5-10min，转入超净工作台上进行表面杀菌；将杀菌后的外植体经无菌水冲洗3-5次后，用质量百分比浓度75％的酒精浸泡30-60s后，再用无菌水冲洗3-5次，切去伤口部位，再用含有质量百分比浓度0.05-0.1％的HgCl2溶液消毒7-10min，无菌水冲洗5-6次，切去伤口部位后用无菌的过滤纸吸干表面水分。
4.如权利要求1所述的以已结瓜的芋香冬瓜的芽为外植体的离体快繁技术，其特征在于，所述步骤1)中顶芽或腋芽选自刚刚有花芽。
5.如权利要求1所述的以已结瓜的芋香冬瓜的芽为外植体的离体快繁技术，其特征在于，步骤2)所述的芽诱导培养基为：MS,质量百分比浓度0.1-0.3mg/L的2-IP，质量百分比浓度30g/L蔗糖，质量百分比浓度6.0g/L琼脂，pH为5.8。
6.如权利要求1所述的以已结瓜的芋香冬瓜的芽为外植体的离体快繁技术，其特征在于，步骤3)所述的增殖培养基含有MS，质量百分比浓度0.05-0.2mg/L 2-IP，质量百分比浓度30g/L蔗糖，质量百分比浓度6.0g/L琼脂，pH为5.8。
7.如权利要求1所述的以已结瓜的芋香冬瓜的芽为外植体的离体快繁技术，其特征在于，步骤4)所述的生根培养基为：生根培养基含有MS，质量百分比浓度0.1-0.2mg/L IBA，质量百分比浓度30g/L蔗糖，质量百分比浓度6.0g/L琼脂，pH为5.8。
8.如权利要求1所述的以已结瓜的芋香冬瓜的芽为外植体的离体快繁技术，其特征在于，步骤5)中不定根长度达到5cm以上。
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|---|---|---|---|---|
| CN113785773A (zh) * | 2021-08-20 | 2021-12-14 | 广州市农业科学研究院 | 一种粉皮冬瓜组培条件下加倍试验方法 |
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