CN109463164A - 一种通过联合盐胁迫富集发芽海蓬子中γ-氨基丁酸和黄酮类物质的生产方法 - Google Patents

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王笃军
李凤伟
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Abstract

一种通过联合盐胁迫富集发芽海蓬子中γ‑氨基丁酸和黄酮类物质的生产方法：挑选饱满均匀的海蓬子种子，氯化钠盐胁迫培养48 h使其适应盐生环境，再通过添加氯化钙联合胁迫发芽，以此来富集γ‑氨基丁酸和黄酮类物质。本发明的方法具有工艺简单，生产成本低，γ‑氨基丁酸和黄酮类物质含量同时提高等特点，适用于海蓬子芽生产保健食品级γ‑氨基丁酸和黄酮类物质，可以为盐碱地种植海蓬子带来经济效益。

Description

一种通过联合盐胁迫富集发芽海蓬子中γ-氨基丁酸和黄酮 类物质的生产方法
技术领域
本发明属于海蓬子资源化利用技术领域，具体涉及一种通过联合盐胁迫富集发芽海篷子中γ-氨基丁酸和黄酮类物质的生产方法。
背景技术
海蓬子(Salicornia Bigelivii Torr)又名海芦笋、海豆、海虫草等，其为藜科盐角草属，属于肉质化真盐生植物，一般生长于盐碱地、盐湖及海滩地区。海蓬子的营养价值极高，是上佳的无公害绿色保健食品，素有“植物海鲜”和“海人参”的美誉。海蓬子的嫩茎富含18种氨基酸，其中人体所必需的氨基酸含量占比高达36.59％，非常接近FAO/WHO给出的高质量蛋白质的标准(40％)。海蓬子的维生素和矿物质的含量也均高于普通蔬菜，其含有的多糖、黄酮类、甾醇、皂苷等活性物质被证实具有抗氧化、抗癌、抑菌、抗炎等活性，对于肥胖、糖尿病、癌症、肝炎等多种疾病均有预防作用，因此海蓬子是一种兼具生态效益、经济效益和社会效益的经济作物。
发芽是改变植物营养成分和抗营养因子的一种方法。植物种子吸水发芽后会发生一系列的生理代谢变化，主要表现在细胞生理活性的恢复和复杂的生化代谢，从而使籽粒的营养成分发生重大的变化。研究表明，植物在冷害、热激、盐、机械刺激和低氧等胁迫条件发芽下能够增强谷氨酸脱羧酶、苯丙氨酸解氨酶等活性，从而富集γ-氨基丁酸(GABA)和黄酮类物质。
目前对于海蓬子的研究更多的集中在植株的营养物质方面，对于通过海蓬子芽的利用研究甚少。因此，通过氯化钠和氯化钙联合胁迫促进发芽海蓬子富集γ-氨基丁酸和黄酮类物质，为改善海蓬子的营养价值、开发海蓬子产品并应用于医药保健行业提供依据。
发明内容
针对现有问题的不足，本发明的目的是提供一种通过联合盐胁迫富集发芽海蓬子中γ-氨基丁酸和黄酮类物质的生产方法；该方法能够有效的提高海蓬子芽中的活性物质含量，充分的利用我国盐碱地上海蓬子植物资源。
本发明解决其技术问题采用的技术方案是：
一种通过联合盐胁迫富集发芽海蓬子中γ-氨基丁酸和黄酮类物质的生产方法，挑选饱满均匀的海蓬子种子，氯化钠盐胁迫培养48h使其适应盐生环境，再通过添加氯化钙联合胁迫发芽，以此来富集γ-氨基丁酸和黄酮类物质。
作为本申请的优选技术方案，具体包括以下步骤：
(1)挑选种子：挑选饱满均匀的海蓬子种子，清洗，除去悬浮瘪粒和杂质；
(2)种子消毒：用1％的次氯酸钠消毒30min，再用水洗净；
(3)温水浸泡：在温度为25℃的水中浸泡8h，置于培养盒，分布均匀；
(4)盐胁迫发芽：将培养盒置于24℃光照条件下培养48h，每隔12h关闭光照一次，每8h用7.5g/L氯化钠培养液喷洒种子，使其保持湿润；
(5)联合胁迫发芽：选取盐胁迫下生长整齐一致的海蓬子芽，用7.5g/L氯化钠和5mmol/L氯化钙每隔8h喷洒混合培养液一次，对照组为单纯氯化钠处理和单纯去离子水处理；
(6)烘干：将收集的芽取出后，先用水清洗，表面干燥后于80～90℃下烘干24h；
(7)保藏：收集的海蓬子芽贮藏于4℃冰箱；
(8)物质含量测定：将所得的海蓬子芽去根、磨粉，测定芽中γ-氨基丁酸和黄酮类物质的含量。
作为本申请的优选技术方案，所述步骤(4)中，氯化钠培养液的pH值为8.0。
作为本申请的优选技术方案，所述步骤(5)中，7.5g/L氯化钠和5mmol/L氯化钙联合处理时间为24～96h。
作为本申请的优选技术方案，所述步骤(6)中，表面干燥采用吸水纸吸干表面的水分。
本发明制得的海蓬子芽γ-氨基丁酸含量在376.52mg/100g，是单纯氯化钠盐胁迫处理的1.2倍，是单纯去离子水处理的1.38倍。
本发明制得的海蓬子芽总黄酮含量在0.0376mg/mL，是单纯氯化钠盐胁迫处理的1.19倍，是单纯去离子水处理的1.32倍。
有益效果
本发明的有益效果：本发明所述的富集海蓬子芽中γ-氨基丁酸和黄酮类物质的生产方法具有以下的优点：
(1)本发明生产的海蓬子芽富含γ-氨基丁酸和黄酮类物质，具有良好的保健功能和药用价值；
(2)本发明在发芽期间通过氯化钠和氯化钙联合胁迫发芽，实现了海蓬子芽中γ-氨基丁酸和黄酮类物质的高效富集；
(3)本发明生产的海蓬子芽γ-氨基丁酸和黄酮类物质含量在联合胁迫48小时后同时达到富集最大值；
(4)本发明具有富集方法简单，效果显著等特点，可以为盐碱地海蓬子的开发利用提供依据。
附图说明
图1是联合盐胁迫和单纯盐胁迫下海蓬子发芽过程中γ-氨基丁酸含量变化趋势；
图2是联合盐胁迫和单纯盐胁迫下海蓬子发芽过程中黄酮类物质含量变化趋势。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明做进一步详细说明。所用试剂或者仪器设备未注明生产厂商的，均视为可以通过市场购买的常规产品。
实施例1：
盐胁迫发芽
挑选饱满均匀的海蓬子种子，用去离子水清洗，除去悬浮的瘪粒和杂质后，用1％的次氯酸钠消毒30min，再用去离子水洗净，在温度为25℃的去离子水中浸泡8h。将种子置于铺有一层纱布的培养盒中，分布均匀，于24℃光照条件下培养48h每隔12h关闭光照一次，每8h用7.5g/L氯化钠培养液(pH为8.0)喷洒种子，使其保持湿润。
实施例2
联合胁迫发芽
取生长整齐一致的发芽48h的海蓬子，用7.5g/L氯化钠和5mmol/L氯化钙处理96h，发芽期间每隔8h喷洒混合培养液一次，每24h取样一次，将各时段收集的芽取出后，用先去离子水清洗，吸水纸吸干表面的水分后于80～90℃下烘干24h。对收集的海蓬子芽贮藏于4℃冰箱。将所得的海蓬子芽去根、磨粉用高效液相色谱测定γ-氨基丁酸含量，用亚硝酸钠-硝酸铝法测定黄酮类物质含量，重复5次。
实施例3
γ-氨基丁酸和黄酮类物质含量测定：
(1)利用高效液色谱法测定海蓬子芽中γ-氨基丁酸含量：称取0.2g发芽海蓬子干粉溶于5mL质量分数为8％的三氯乙酸溶液，在40℃水浴振荡2h，离心分离，上清液经0.45μm滤膜过滤后用于测定GABA含量。GABA测定采用柱前OPA(邻苯二甲醛)衍生化反相高效液色谱法来检测GABA。高效液相色谱HPLC(Agilent 1290)，检测器波长为338nm，色谱柱为C18ODS反相柱(250mm×4.6mm，5μm)，色谱柱温度25℃；流动相为0.1mol/L磷酸缓冲液(pH值为6.0)52％，甲醇46％，四氢呋喃2％，使用前经0.22μm微孔滤膜过滤，超声波脱气后使用，流动相流速为1mL/min。
(2)采用亚硝酸钠-硝酸铝法进行测定黄酮类物质含量：称取0.2g发芽海蓬子，置于150mL的干燥锥形瓶中，然后加入60％的乙醇溶液40mL，将超声破碎清洗仪的参数设定为需要的40℃，超声1h，将提取液过滤后置于50mL的容量瓶中，用60％的乙醇溶液定容，得到总黄酮的提取液。将5.0mL提取液转入50mL的容量瓶中，同时加入5mL 5％的NaNO2溶液，振荡3-4次，使之充分混合，放置5min后加入浓度为6％Al(NO2)3溶液2mL，振荡混合均匀，接着再放置5min，移入10％NaOH溶液5mL，最后用60％乙醇定容至50mL，振荡摇匀，静置15min，然后用60％的乙醇溶液做为空白参照溶液，吸光值设定为500nm，将数据代入芦丁标准曲线，可以计算出总黄酮的含量。
(3)统计分析
参照图1和图2，在本发明中，发芽海蓬子GABA含量和黄酮类物质含量呈现先升高后下降的趋势，Ga2+和NaCl联合处理48h，GABA含量达到最大，为376.53mg/100g，是单纯NaCl处理的1.20倍，是单纯去离子水处理的1.38倍；Ga2+和NaCl联合处理48h黄酮含量最大，为0.0376mg/mL，是单纯NaCl处理的1.19倍，是单纯去离子水处理的1.32倍。
结论：本实施例采用HPLC测定γ-氨基丁酸含量，采用亚硝酸钠-硝酸铝法进行测定黄酮类物质含量。结果表明氯化钠和氯化钙联合盐胁迫处理发芽海蓬子中γ-氨基丁酸和黄酮类物质含量较单纯氯化钠胁迫和单纯去离子水培养显著提高。
本发明的保护内容不局限于以上实施例。在不背离发明构思的精神和范围下，本领域技术人员能够想到的变化和优点都被包括在本发明中，并且以所附的权利要求为保护范围。

Claims (5)

1. 一种通过联合盐胁迫富集发芽海蓬子中γ-氨基丁酸和黄酮类物质的生产方法，其特征在在于，挑选饱满均匀的海蓬子种子，氯化钠盐胁迫培养48 h使其适应盐生环境，再通过添加氯化钙联合胁迫发芽，以此来富集γ-氨基丁酸和黄酮类物质。
2.根据权利要求1所述的通过联合盐胁迫富集发芽海蓬子中γ-氨基丁酸和黄酮类物质的生产方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
（1）挑选种子：挑选饱满均匀的海蓬子种子，清洗，除去悬浮瘪粒和杂质；
（2）种子消毒：用1%的次氯酸钠消毒30 min，再用水洗净；
（3）温水浸泡：在温度为25 ℃的水中浸泡8 h，置于培养盒，分布均匀；
（4）盐胁迫发芽：将培养盒置于24 ℃光照条件下培养48 h，每隔12 h关闭光照一次，每8 h用7.5 g/L氯化钠培养液喷洒种子，使其保持湿润；
（5）联合胁迫发芽：选取盐胁迫下生长整齐一致的海蓬子芽，用7.5 g/L氯化钠和5mmol/L氯化钙每隔8 h喷洒混合培养液一次，对照组为单纯氯化钠胁迫和单纯去离子水处理；
（6）烘干：将收集的芽取出后，先用水清洗，表面干燥后于80～90 ℃下烘干24 h；
（7）保藏：收集的海蓬子芽贮藏于4 ℃冰箱；
（8）物质含量测定：将所得的海蓬子芽去根、磨粉，测定芽中γ-氨基丁酸和黄酮类物质的含量。
3.根据权利要求1所述的通过联合盐胁迫富集发芽海篷子中γ-氨基丁酸和黄酮类物质的生产方法，其特征在于，所述步骤（4）中，氯化钠培养液的pH值为8.0。
4. 根据权利要求1所述的通过联合盐胁迫富集发芽海篷子中γ-氨基丁酸和黄酮类物质的生产方法，其特征在于，所述步骤（5）中，7.5 g/L氯化钠和5 mmol/L氯化钙联合处理时间为24~96 h。
5.根据权利要求1所述的通过联合盐胁迫富集发芽海篷子中γ-氨基丁酸和黄酮类物质的生产方法，其特征在于，所述步骤（6）中，表面干燥采用吸水纸吸干表面的水分。
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