CN109459435A - 橡胶树品种的筛选方法、橡胶树的育种方法以及橡胶树产量的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物技术领域，特别涉及橡胶树品种的筛选方法、橡胶树的育种方法以及橡胶树产量的检测方法。该方法较现有方法具有准确性高、效率高、操作简便、快捷的优势，能显著缩短橡胶树选育种周期，可用于规模化预测橡胶树杂交后代的产量，具有广阔的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，特别涉及橡胶树品种的筛选方法、橡胶树的育种方法以及橡胶树产量的检测方法。
背景技术
橡胶树(Hevea brasiliensis Muell-Arg)属大戟科橡胶属，是多年生的高大乔木，在热带地区广泛种植。橡胶树常规育种是选育出高产多抗的优良品种(系)的重要技术手段，从而达到大幅度提高天然橡胶产量目的。用常规方法培育出一个橡胶树良种需30年时间，而且要从大量参试材料中经过长期的各种系比大田试验才能选出。为了缩短良种选育时间，提高选种效果，减少土地、人力和物力的浪费，加速橡胶树选育种进程，前人发展了现有的橡胶树产量早期预测方法。据初步统计，采用现有早期预测方法，育种程序至少可以缩短15年时间。现有的橡胶树产量早期预测方法包括叶脉胶测定法、小叶脉胶测定法、刺检流胶量测定法、试割法。然而经过多年的实践却证明这些产量早期预测方法存在“不准”的缺点。例如中国热带农业科学院于1984年从马来西亚国际橡胶树种质保存中心引进8000多份野生种质，成活约6000份，对该批种质采用现有的产量早期预测方法进行筛选，于1986-1994年共筛选出200多份预测表现良好的种质材料，按常规生产的种植形式布置大田试验，2004-2005年对其进行全面测产，发现种质间存在较大差异，未能从中筛选出可供商业化栽培的材料，早期预测结果与大田鉴定结果间相关性不显著。
橡胶树存在两种形态乳管：初生乳管和次生乳管。初生乳管存在于橡胶树叶片、花、根、果实、枝条、幼龄树茎干中，这种形态乳管与橡胶树产量不相关；次生乳管存在于橡胶树茎干中，在橡胶树成龄后(定植7年后)，其茎干树皮乳管全为次生乳管，这种形态乳管与胶树产量密切相关，即次生乳管数量越多，该品种(系)产量越高。导致现有产量早期预测方法不准确的原因是所检测的基本为初生乳管的产量，而这种类型的乳管不能反映橡胶树的产量。如应用叶脉胶测定法和小叶柄胶测定法，所检测的胶乳均来自叶片中的初生乳管；应用刺检流胶量测定法和试割法，虽然检测的部位是橡胶树的茎干，但均为4龄期以下的幼龄树，其茎干树皮中次生乳管分化的部位少，初生乳管还占相当大的比重，所检测的胶乳主要来自初生乳管。因此寻求一种准确的、高效的新型产量早期预测方法在橡胶树选育种中具有重要的现实意义。
发明内容
有鉴于此，本发明提供一种橡胶树品种的筛选方法、橡胶树的育种方法以及橡胶树产量的检测方法。该方法具有预测准确性高、效率高、操作简便、快捷的优势。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了橡胶树品种筛选的方法，分别取待测橡胶树种和高产橡胶树种的外植体，预处理后分别接种于诱导愈伤组织培养基，培养、固定、碱法分离愈伤组织乳管细胞、脱水、染色，分别获得所述待测橡胶树种与所述高产橡胶树种的愈伤组织乳管细胞分化频率的检测结果，根据所述愈伤组织乳管细胞分化频率的差异，获得橡胶树品种的筛选结果。
在本发明的一些具体实施方案中，当所述待测橡胶树种的愈伤组织乳管细胞分化频率显著(P＜0.05)或极显著(P＜0.01)高于所述高产橡胶树种的愈伤组织乳管细胞分化频率时，所述待测橡胶树种为高产橡胶树种。
在本发明的一些具体实施方案中，所述待测橡胶树种或所述高产橡胶树种为苗期6个月至3年的幼龄树；所述高产橡胶树种为古铜期的RRIM600；所述外植体为叶柄或茎段。
在本发明的一些具体实施方案中，所述预处理为70％酒精消毒30～60s，然后用0.15％升汞消毒8～15min，再用无菌水清洗。
在本发明的一些具体实施方案中，所述诱导愈伤组织培养基以MS为基本培养基，添加2，4-D 1～4mg/L，6-BA0.2～2mg/L，NAA 0.5～3mg/L，蔗糖30～50g/L，植物凝胶2.2～2.5g/L，pH值为5.8～6.2。
在本发明的一些具体实施方案中，所述碱法分离愈伤组织乳管细胞为取10％KOH溶液与愈伤组织混合，90～100℃处理10～20min，冷却后，2000g离心10min离心收集沉淀，蒸馏水清洗。
在本发明的一些具体实施方案中，所述培养为25～28℃暗条件下培养60～100d。
在本发明的一些具体实施方案中，所述固定采用FAA，所述脱水采用酒精系列脱水，所述染色采用溴-碘染色液染色10min。
本发明还提供了橡胶树育种的方法，包括如下步骤：
步骤1：分别取待测橡胶树种和高产橡胶树种的外植体，预处理后分别接种于诱导愈伤组织培养基，培养、固定、碱法分离愈伤组织乳管细胞、脱水、染色，分别获得所述待测橡胶树种与所述高产橡胶树种的愈伤组织乳管细胞分化频率的检测结果，根据所述愈伤组织乳管细胞分化频率的差异，获得橡胶树品种的筛选结果；选取高产橡胶树种；
步骤2：重复步骤1，获得具有遗传稳定性的高产橡胶树种。
在本发明的一些具体实施方案中，当所述待测橡胶树种的愈伤组织乳管细胞分化频率显著(P＜0.05)或极显著(P＜0.01)高于所述高产橡胶树种的愈伤组织乳管细胞分化频率时，所述待测橡胶树种为高产橡胶树种。
在本发明的一些具体实施方案中，所述待测橡胶树种或所述高产橡胶树种为苗期6个月至3年的幼龄树；所述高产橡胶树种为古铜期的RRIM600；所述外植体为叶柄或茎段。
在本发明的一些具体实施方案中，所述预处理为70％酒精消毒30～60s，然后用0.15％升汞消毒8～15min，再用无菌水清洗。
在本发明的一些具体实施方案中，所述诱导愈伤组织培养基以MS为基本培养基，添加2，4-D 1～4mg/L，6-BA 0.2～2mg/L，NAA 0.5～3mg/L，蔗糖30～50g/L，植物凝胶2.2～2.5g/L，pH值为5.8～6.2。
在本发明的一些具体实施方案中，所述碱法分离愈伤组织乳管细胞为取10％KOH溶液与愈伤组织混合，90～100℃处理10～20min，冷却后，2000g离心10min离心收集沉淀，蒸馏水清洗。
在本发明的一些具体实施方案中，所述培养为25～28℃暗条件下培养60～100d。
在本发明的一些具体实施方案中，所述固定采用FAA，所述脱水采用酒精系列脱水，所述染色采用溴-碘染色液染色10min。
本发明还提供了橡胶树产量检测的方法，分别取待测橡胶树种和高产橡胶树种的外植体，预处理后分别接种于诱导愈伤组织培养基，培养、固定、碱法分离愈伤组织乳管细胞、脱水、染色，分别获得所述待测橡胶树种与所述高产橡胶树种的愈伤组织乳管细胞分化频率的检测结果，根据所述愈伤组织乳管细胞分化频率的差异，获得橡胶树产量的检测结果。
在本发明的一些具体实施方案中，当所述待测橡胶树种的愈伤组织乳管细胞分化频率显著(P＜0.05)或极显著(P＜0.01)高于所述高产橡胶树种的愈伤组织乳管细胞分化频率时，所述待测橡胶树的产量高。
在本发明的一些具体实施方案中，所述待测橡胶树种或所述高产橡胶树种为苗期6个月至3年的幼龄树；所述高产橡胶树种为古铜期的RRIM600；所述外植体为叶柄或茎段。
在本发明的一些具体实施方案中，所述预处理为70％酒精消毒30～60s，然后用0.15％升汞消毒8～15min，再用无菌水清洗。
在本发明的一些具体实施方案中，所述诱导愈伤组织培养基以MS为基本培养基，添加2，4-D 1～4mg/L，6-BA 0.2～2mg/L，NAA 0.5～3mg/L，蔗糖30～50g/L，植物凝胶2.2～2.5g/L，pH值为5.8～6.2。
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在本发明的一些具体实施方案中，所述培养为25～28℃暗条件下培养60～100d。
在本发明的一些具体实施方案中，所述固定采用FAA，所述脱水采用酒精系列脱水，所述染色采用溴-碘染色液染色10min。
本发明公开了一种橡胶树品种的筛选方法、橡胶树的育种方法以及橡胶树产量的检测方法：采集生长6个月至3年的待预测的幼龄树和橡胶树品种RRIM600的古铜期的叶柄或茎段作为外植体，70％酒精消毒30～60s，0.15％升汞消毒8～15min，无菌水清洗5遍，将消毒好的待预测的幼龄树和橡胶树品种RRIM600的叶柄或茎段切成0.5-1.5cm，分别接种于诱导愈伤组织培养基，25～28℃暗条件下培养60～100d。以待预测的幼龄树愈伤组织为处理组，RRIM600愈伤组织为对照组。FAA固定处理组和对照组的愈伤组织，加入10％KOH溶液，90-100℃处理10-20min，待冷却后离心收集愈伤组织沉淀，蒸馏水清洗愈伤组织沉淀2次，酒精系列脱水，溴-碘染色液染色10min，将染色后愈伤组织沉淀全部均匀涂布于干净载玻片上，光学显微镜下统计处理组和对照组愈伤组织乳管细胞分化频率。以处理组与对照组愈伤组织乳管细胞分化频率的差异为依据来筛选出潜在的高产品种(系)以及检测橡胶树的产量。该方法较现有方法具有预测准确性高、效率高、操作简便、快捷的优势，能显著缩短橡胶树选育种周期，可用于规模化预测橡胶树杂交后代的产量，具有广阔的应用前景。
具体实施方式
本发明公开了一种橡胶树品种的筛选方法、橡胶树的育种方法以及橡胶树产量的检测方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明提供如下技术方案：
采集生长6个月至3年的待预测的幼龄树和橡胶树品种RRIM600的古铜期的叶柄或茎段作为外植体，70％酒精消毒30-60s，0.15％升汞消毒8-15min，无菌水清洗5遍。将消毒好的待预测的幼龄树和橡胶树品种RRIM600的叶柄或茎段切成0.5-1.5cm，分别接种于诱导愈伤组织培养基。所述的诱导愈伤组织培养基是以MS为基本培养基，附加2，4-D 1-4mg/L，6-BA 0.2-2mg/L，NAA 0.5-3mg/L，蔗糖30-50g/L，植物凝胶2.2-2.5g/L，pH值5.8-6.2。25-28℃暗条件下培养60-100d。在实际应用中，以待预测幼龄树所诱导出的愈伤组织为处理组，以RRIM600所诱导出的愈伤组织为对照组。
分别称取50-300mg处理组和对照组的新鲜愈伤组织，FAA溶液固定48h，去除FAA溶液，采用碱法分离愈伤组织乳管细胞。愈伤组织沉淀经酒精系列脱水，再用溴-碘染色液染色10min。所述碱法分离愈伤乳管细胞是加入10％KOH溶液于愈伤组织中，90-100℃处理10-20min，待冷却后，离心收集沉淀，蒸馏水清洗愈伤组织沉淀2次。所述离心收集沉淀是2000g离心10min收集沉淀。所述酒精系列脱水是30％、50％、70％、80％、90％、95％、100％酒精各脱水50min。所述溴-碘染色液是100mL醋酸中含0.4g固体溴和4.5g碘。
将染色后沉淀全部均匀涂布于干净载玻片上，光学显微镜下统计对照组和处理组的乳管细胞数量。计算对照组和处理组的愈伤组织乳管细胞发生频率，具体公式如下：愈伤组织乳管细胞发生频率(个/mg)＝乳管细胞数量/愈伤组织鲜重。比较对照组和处理组的愈伤组织乳管细胞发生频率。在实际应用中，如果处理组的愈伤组织乳管细胞发生频率显著高于对照组的，说明待预测幼龄树具有较高产量潜力，可作为潜在筛选的高产品系。相反，如果处理组的愈伤组织乳管细胞发生频率相近或低于对照组的，说明待预测幼龄树产量接近或低于RRIM600产量，不作为潜在筛选的高产品系。
利用本发明对橡胶树授粉植株进行产量早期预测具有如下优势：1.采用本发明所诱导出的愈伤组织其乳管细胞类型为次生乳管，与产量密切相关，克服了初生乳管的干扰，愈伤组织乳管分化频率基本上反映出橡胶树的产量水平情况。2.在我国橡胶树常规育种中，一般以RRIM600的产量为对照来选择高产杂交后代。本发明以RRIM600幼苗的叶柄或茎段所诱导出的愈伤组织为对照组，以同龄的待预测幼苗叶柄或茎段所诱导出的愈伤组织为处理组，对它们的愈伤组织乳管分化频率进行方差，以处理组的愈伤组织乳管细胞发生频率显著高于对照组的作为潜在的筛选高产品系，具有筛选准确性高的优势，能显著缩短橡胶树选育种周期。3.愈伤组织诱导周期只需2-3个月，因此本发明能在较短时间内预测出授粉植株的产量情况并作为筛选高产品系的依据，具有筛选效率高的优势，可用于规模化预测橡胶树杂交后代产量。4.本发明采用碱法分离愈伤组织乳管细胞，将愈伤组织浸泡于10％KOH溶液中90-100℃处理10-20min，愈伤组织中的薄壁细胞基本被降解，而愈伤组织中的乳管细胞保持完整，再通过溴碘染色能快速鉴定出愈伤组织乳管细胞和统计出它们的数量，与传统的愈伤组织乳管细胞鉴定方法—石蜡制片的组织化学染色法相比，具有操作简便、快捷的优势。
本发明提供的橡胶树品种的筛选方法、橡胶树的育种方法以及橡胶树产量的检测方法中所用原料及试剂均可由市场购得。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1：本发明所述的橡胶树产量早期预测方法
诱导愈伤组织培养基：MS培养基+2，4-D 1mg/L+6-BA 0.2mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖30g/L+植物凝胶2.2g/L，pH值5.8。
橡胶树外植体：橡胶树品种热研8-79和RRIM600(从中国热带农业科学院橡胶种质圃购得)古铜期叶柄。
采集苗期6个月的橡胶树品种热研8-79和RRIM600的古铜期叶柄，70％酒精消毒30s，0.15％升汞消毒8min，无菌水清洗5遍。将消毒好的热研8-79和RRIM600的叶柄切成0.5cm，分别接种于愈伤组织诱导培养基。25℃暗条件下培养60d。以热研8-79叶柄诱导出的愈伤组织为处理组，以RRIM600叶柄诱导出的愈伤组织为对照组。
分别称取50mg处理组和对照组的新鲜愈伤组织，FAA溶液固定48h，去除FAA溶液，加入10％KOH溶液于愈伤组织中，90℃处理10min，冷却后2000g离心10min收集沉淀，蒸馏水清洗愈伤组织沉淀2次，再依次于30％、50％、70％、80％、90％、95％、100％酒精脱水50min，溴-碘染色液染色10min。
将染色后沉淀全部均匀涂布于干净载玻片上，光学显微镜下统计对照组和处理组的乳管细胞数量。愈伤组织乳管细胞发生频率(个/毫克)＝乳管细胞数量/愈伤组织鲜重。采用SPSS24.0统计软件进行方差分析。
表1
注：不同字母之间表明具有显著差异(P＜0.05)或极显著差异(P＜0.01)。
由表1结果可知，处理组愈伤组织中乳管细胞分化频率显著高于对照组，表明热研8-79为潜在的高产品种。
实施例2：本发明所述的橡胶树产量早期预测方法
诱导愈伤组织培养基：MS培养基+2，4-D 2mg/L+6-BA 1mg/L+NAA 1mg/L+蔗糖40g/L+植物凝胶2.3g/L，pH值6.0。
橡胶树外植体：橡胶树品种PR107和RRIM600(从中国热带农业科学院橡胶种质圃购得)古铜期茎段。
采集苗期1年的橡胶树品种PR107和RRIM600的古铜期茎段，70％酒精消毒45s，0.15％升汞消毒10min，无菌水清洗5遍。将消毒好的PR107和RRIM600的茎段切成1cm，分别接种于愈伤组织诱导培养基。26℃暗条件下培养75d。以PR107茎段诱导出的愈伤组织为处理组，以RRIM600茎段诱导出的愈伤组织为对照组。
分别称取100mg处理组和对照组的新鲜愈伤组织，FAA溶液固定48h，去除FAA溶液，加入15％KOH溶液于愈伤组织中，95℃处理15min，冷却后2000g离心10min收集沉淀，蒸馏水清洗愈伤组织沉淀2次，再依次于30％、50％、70％、80％、90％、95％、100％酒精脱水50min，溴-碘染色液染色10min。
将染色后沉淀全部均匀涂布于干净载玻片上，光学显微镜下统计对照组和处理组的乳管细胞数量。愈伤组织乳管细胞发生频率(个/毫克)＝乳管细胞数量/愈伤组织鲜重。采用SPSS24.0统计软件进行方差分析。
表2
注：不同字母之间表明具有显著差异(P＜0.05)或极显著差异(P＜0.01)。
由表2结果可知，处理组愈伤组织中乳管细胞分化频率显著高于对照组，表明PR107为潜在的高产品种。
实施例3：本发明所述的橡胶树产量早期预测方法
诱导愈伤组织培养基：MS培养基+2，4-D 3mg/L+6-BA 1.5mg/L+NAA 2mg/L+蔗糖50g/L+植物凝胶2.4g/L，pH值6.0。
橡胶树外植体：橡胶树品种IAN873和RRIM600(从中国热带农业科学院橡胶种质圃购得)古铜期叶柄。
采集苗期2年的橡胶树品种IAN873和RRIM600的古铜期叶柄，70％酒精消毒50s，0.15％升汞消毒12min，无菌水清洗5遍。将消毒好的IAN873和RRIM600的叶柄切成1.2cm，分别接种于愈伤组织诱导培养基。25℃暗条件下培养90d。以IAN873叶柄诱导出的愈伤组织为处理组，以RRIM600叶柄诱导出的愈伤组织为对照组。
分别称取200mg处理组和对照组的新鲜愈伤组织，FAA溶液固定48h，去除FAA溶液，加入18％KOH溶液于愈伤组织中，100℃处理18min，冷却后2000g离心10min收集沉淀，蒸馏水清洗愈伤组织沉淀2次，再依次于30％、50％、70％、80％、90％、95％、100％酒精脱水50min，溴-碘染色液染色10min。
将染色后沉淀全部均匀涂布于干净载玻片上，光学显微镜下统计对照组和处理组的乳管细胞数量。愈伤组织乳管细胞发生频率(个/毫克)＝乳管细胞数量/愈伤组织鲜重。采用SPSS24.0统计软件进行方差分析。
表3
注：不同字母之间表明具有显著差异(P＜0.05)或极显著差异(P＜0.01)。
由表3结果可知，处理组愈伤组织中乳管细胞分化频率与对照组的差异不显著，表明IAN873不能作为潜在的高产品种。
实施例4：本发明所述的橡胶树产量早期预测方法
诱导愈伤组织培养基：MS培养基+2，4-D 4mg/L+6-BA 2mg/L+NAA 3mg/L+蔗糖50g/L+植物凝胶2.5g/L，pH值6.2。
橡胶树外植体：橡胶树品种天任31-45和RRIM600(从中国热带农业科学院橡胶种质圃购得)古铜期茎段。
采集苗期3年的橡胶树品种天任31-45和RRIM600的古铜期茎段，70％酒精消毒60s，0.15％升汞消毒15min，无菌水清洗5遍。将消毒好的天任31-45和RRIM600的茎段切成1.5cm，分别接种于愈伤组织诱导培养基。25℃暗条件下培养100d。以天任31-45茎段诱导出的愈伤组织为处理组，以RRIM600茎段诱导出的愈伤组织为对照组。
分别称取300mg处理组和对照组的新鲜愈伤组织，FAA溶液固定48h，去除FAA溶液，加入20％KOH溶液于愈伤组织中，100℃处理20min，冷却后2000g离心10min收集沉淀，蒸馏水清洗愈伤组织沉淀2次，再依次于30％、50％、70％、80％、90％、95％、100％酒精脱水50min，溴-碘染色液染色10min。
将染色后愈伤组织沉淀全部均匀涂布于干净载玻片上，光学显微镜下统计对照组和处理组的乳管细胞数量。愈伤组织乳管细胞发生频率(个/毫克)＝乳管细胞数量/愈伤组织鲜重。采用SPSS24.0统计软件进行方差分析。
表4
注：不同字母之间表明具有显著差异(P＜0.05)或极显著差异(P＜0.01)。
由表4结果可知，处理组愈伤组织中乳管细胞分化频率显著低于对照组，表明天任31-45不能作为潜在的高产品种。
实施例5：本发明所述的橡胶树产量早期预测方法
热研8-79、PR107、RRIM600、IAN873和天任31-45等5个品种种植于保亭热带作物研究所，种植株距为3m×7m。每个品种重复3次，每一重复种植70棵植株。种植7年后开始开割测产，所采用的割制为1/2割面3天每刀(S/2d/3)，测量每个品种每次割胶产量。干胶含量采用干胶测定仪测量。月平均株产干胶量＝月总产干胶量(Kg)/测产株数。年平均株产干胶量＝各月平均株产干胶之和。统计各品种开割前3年的平均株产，采用SPSS24.0统计软件进行方差分析。
表5
注：不同字母之间表明具有显著差异(P＜0.05)或极显著差异(P＜0.01)。
由表5结果可知，热研8-79、PR107年平均株产干胶量极显著高于RRIM600，表明热研8-79、PR107为高产品种；IAN873年平均株产干胶量与RRIM600没有显著差异，表明IAN873为低产品种；天任31-45年平均株产干胶量极显著低于RRIM600，表明天任31-45为低产品种。
综合上述实验结果，已有的实验证实热研8-79、PR107为高产品种，IAN873、天任31-45为低产品种，利用本发明能快速准确地预测出早期的橡胶树杂交后代的产量情况，为筛选潜在的高产品种(系)提供依据，能显著缩短橡胶树选育种周期，因此本发明具有广阔的应用前景。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.橡胶树品种筛选的方法，其特征在于，分别取待测橡胶树种和高产橡胶树种的外植体，预处理后分别接种于诱导愈伤组织培养基，培养、固定、碱法分离愈伤组织乳管细胞、脱水、染色，分别获得所述待测橡胶树种与所述高产橡胶树种的愈伤组织乳管细胞分化频率的检测结果，根据所述愈伤组织乳管细胞分化频率的差异，获得橡胶树品种的筛选结果。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，当所述待测橡胶树种的愈伤组织乳管细胞分化频率显著(P＜0.05)或极显著(P＜0.01)高于所述高产橡胶树种的愈伤组织乳管细胞分化频率时，所述待测橡胶树种为高产橡胶树种。
3.橡胶树育种的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1：分别取待测橡胶树种和高产橡胶树种的外植体，预处理后分别接种于诱导愈伤组织培养基，培养、固定、碱法分离愈伤组织乳管细胞、脱水、染色，分别获得所述待测橡胶树种与所述高产橡胶树种的愈伤组织乳管细胞分化频率的检测结果，根据所述愈伤组织乳管细胞分化频率的差异，获得橡胶树品种的筛选结果；选取高产橡胶树种；
步骤2：重复步骤1，获得具有遗传稳定性的高产橡胶树种。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，当所述待测橡胶树种的愈伤组织乳管细胞分化频率显著(P＜0.05)或极显著(P＜0.01)高于所述高产橡胶树种的愈伤组织乳管细胞分化频率时，所述待测橡胶树种为高产橡胶树种。
5.橡胶树产量检测的方法，其特征在于，分别取待测橡胶树种和高产橡胶树种的外植体，预处理后分别接种于诱导愈伤组织培养基，培养、固定、碱法分离愈伤组织乳管细胞、脱水、染色，分别获得所述待测橡胶树种与所述高产橡胶树种的愈伤组织乳管细胞分化频率的检测结果，根据所述愈伤组织乳管细胞分化频率的差异，获得橡胶树产量的检测结果。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，当所述待测橡胶树种的愈伤组织乳管细胞分化频率显著(P＜0.05)或极显著(P＜0.01)高于所述高产橡胶树种的愈伤组织乳管细胞分化频率时，所述待测橡胶树的产量高。
7.如权利要求1至6任一项所述的方法，其特征在于，所述待测橡胶树种或所述高产橡胶树种为苗期6个月至3年的幼龄树；所述高产橡胶树种为古铜期的RRIM600；所述外植体为叶柄或茎段。
8.如权利要求1至7任一项所述的方法，其特征在于，所述预处理为70％酒精消毒30～60s，然后用0.15％升汞消毒8～15min，再用无菌水清洗。
9.如权利要求1至8任一项所述的方法，其特征在于，所述诱导愈伤组织培养基以MS为基本培养基，添加2，4-D 1～4mg/L，6-BA 0.2～2mg/L，NAA 0.5～3mg/L，蔗糖30～50g/L，植物凝胶2.2～2.5g/L，pH值为5.8～6.2。
10.如权利要求1至9任一项所述的方法，其特征在于，所述碱法分离愈伤组织乳管细胞为取10％KOH溶液与愈伤组织混合，90～100℃处理10～20min，冷却后，2000g离心10min离心收集沉淀，蒸馏水清洗。
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