CN109430559A - 一种用于仔猪的液体活性饲料的制备方法 - Google Patents

一种用于仔猪的液体活性饲料的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及用于仔猪的液体活性饲料的制备方法，可有效解决现有饲养成本高，动物胃肠健康欠佳，成活率低的问题，其解决的技术方案是，1）斜面培养；2）一级种子液培养；3）二级种子液培养；4）混合发酵；5）在步骤4）得到的发酵液中加入维生素3‑5%、微量元素0.3‑0.5%、糖蜜10‑15%、乳清粉10‑15%、氨基酸2‑4%，即得液体活性饲料；本发明方法简单，原料丰富，易生产制备，效果好，可有效解决现有饲养成本高，动物胃肠健康欠佳，成活率低的问题，是液体活性饲料上的创新。

Description

一种用于仔猪的液体活性饲料的制备方法
技术领域
本发明涉及饲料技术领域，特别是一种用于仔猪的液体活性饲料的制备方法。
背景技术
发酵液体饲料（Fermented liquid Feed，FLF）最早出现在20世纪80年代的荷兰，发酵液体饲料是指通过人为控制发酵条件下，有益微生物通过代谢活动将饲料中的抗营养因子分解或转化，产生适口性好，营养水平高的饲料原料。
养殖场仔猪在断奶后容易发生腹泻性疾病，而腹泻会导致仔猪死亡率增加，给养殖场造成一定的经济损失。发酵液体活性饲料作为一种新型饲料，相比于传统干料，液体活性饲料在生产过程中使用食品工业副产品，降低饲养成本，另外液体活性饲料中添加微生物菌剂，发酵过程中产生大量的乳酸、乙酸，能降低动物肠道pH值，有效抑制沙门氏菌、大肠杆菌等有害菌，维持动物肠道菌群平衡，减少腹泻，提高抗病能力，增强动物的胃肠道健康，同时避免了抗生素的使用，保证人类的健康，具有良好的应用前景。
我国农业部2014年1月发布的第2015号公告《饲料添加剂品种目录（2013）》中有34种常用发酵微生物，而发酵液体活性饲料常用的菌株主要有为乳酸菌，酵母菌，芽孢杆菌三种。不同的菌株组合发酵物料所产生的效果也有所不同，寻求一种合适的复合菌组合，保证产品的稳定性成为目前急需解决的技术问题。
发明内容
针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的是提供一种用于仔猪的液体活性饲料的制备方法，可有效解决现有饲养成本高，动物胃肠健康欠佳，成活率低的问题。
本发明解决的技术方案是，具体包括以下步骤：
1）斜面培养：将玉米乳杆菌和戊糖片球菌原始菌种在无菌条件下分别接种于MRS固体培养基斜面上，30~37℃培养24~48h；将布拉氏酵母菌原始菌株在无菌条件下接种于YPD固体培养基斜面上，25~30℃培养48~72h；
2）一级种子液培养：将步骤1）中的玉米乳杆菌和戊糖片球菌菌种在无菌条件下分别转接于MRS液体培养基，30-37℃，150-180rpm，摇床培养24h，得一级玉米乳杆菌种子液和一级戊糖片球菌种子液；将步骤1）中的布拉氏酵母菌菌种在无菌条件下转接于YPD液体培养基，25-28℃，150-180rpm，摇床培养24h，得一级布拉氏酵母菌种子液；
3）二级种子液培养：将步骤2）中得到的一级玉米乳杆菌种子液和一级戊糖片球菌种子液分别按2-5%的接种量接种到MRS液体培养基中，30-37℃，150-180rpm，摇床培养24h，得到二级玉米乳杆菌种子液和二级戊糖片球菌种子液；将步骤2）中得到的一级布拉氏酵母菌种子液按2-5%的接种量接种到YPD液体培养基中，25-28℃，150-180rpm，摇床培养24h，得到二级布拉氏酵母菌种子液；
4）混合发酵：将干料豆粕、玉米按重量比1:2~3粉碎，按料水重量比1:3-4的比例加入水后混匀，得到料液，然后将二级玉米乳杆菌种子液、二级戊糖片球菌种子液、二级布拉氏酵母菌种子液按1-2:1-2:1-2的比例接种至料液中，总接种量为5%，发酵温度为30-37℃，150-180rpm，发酵24h，得发酵液；
5）在步骤4）得到的发酵液中加入维生素3-5%、微量元素0.3-0.5%、糖蜜10-15%、乳清粉10-15%、氨基酸2-4%，即得液体活性饲料。
所述的MRS固体培养基成分组成：酪蛋白胨1%，牛肉膏1%，酵母粉0.5%，葡萄糖2%，乙酸钠0.5%，柠檬酸二胺0.2%，吐温-80 0.1%，磷酸氢二钾0.2%，硫酸镁0.058%，硫酸锰0.025%，琼脂粉1.8%，调节pH6.5~6.8。
所述的MRS液体培养基成分组成：酪蛋白胨1%，牛肉膏1%，酵母粉0.5%，葡萄糖2%，乙酸钠0.5%，柠檬酸二胺0.2%，吐温-80 0.1%，磷酸氢二钾0.2%，硫酸镁0.058%，硫酸锰0.025%，调节pH6.5~6.8。
所述的YPD固体培养基成分组成：葡萄糖2%，蛋白胨2%，酵母粉1%，琼脂粉1.8%。
所述的YPD液体培养基成分组成：葡萄糖2%，蛋白胨2%，酵母粉1%。
本发明方法简单，原料丰富，易生产制备，效果好，可有效解决现有饲养成本高，动物胃肠健康欠佳，成活率低的问题，是液体活性饲料上的创新。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明的具体实施方式做详细说明。
实施例1
本发明在具体实施时，具体包括以下步骤：
1）斜面培养：将玉米乳杆菌和戊糖片球菌原始菌种在无菌条件下分别接种于MRS固体培养基斜面上，30℃培养24h；将布拉氏酵母菌原始菌株在无菌条件下转接于YPD固体培养基斜面上，25℃培养48h；
2）一级种子液培养：将步骤1）中的玉米乳杆菌和戊糖片球菌菌种在无菌条件下分别转接于MRS液体培养基，30℃，180rpm，摇床培养24h，得一级玉米乳杆菌种子液和一级戊糖片球菌种子液；将步骤1）中的布拉氏酵母菌菌种在无菌条件下转接于YPD液体培养基，25℃，150rpm，摇床培养24h，得一级布拉氏酵母菌种子液；
3）二级种子液培养：将步骤2）中得到的一级玉米乳杆菌种子液、戊糖片球菌种子液分别按5%的接种量接种到MRS液体培养基中，30℃，150rpm，摇床培养24h，得到二级玉米乳杆菌种子液和二级戊糖片球菌种子液；将步骤2）中得到的一级布拉氏酵母菌种子液按2%的接种量接种到YPD液体培养基中，25℃，180rpm，摇床培养24h，得到二级布拉氏酵母菌种子液；
4）混合发酵：将干料豆粕、玉米按重量比1:2粉碎，按料水重量比1:4的比例加入水后混匀，得到料液，然后将二级玉米乳杆菌种子液、二级戊糖片球菌种子液、二级布拉氏酵母菌种子液按2:2:1的比例接种至料液中，总接种量为5%，发酵温度为30℃，180rpm，发酵24h，得发酵液；
5）在步骤4）得到的发酵液中加入维生素4%，微量元素0.3%，糖蜜10%，乳清粉15%，氨基酸4%，即得液体活性饲料。
实施例2
本发明在具体实施时，具体包括以下步骤：
1）斜面培养：将玉米乳杆菌和戊糖片球菌原始菌种在无菌条件下分别接种于MRS固体培养基斜面上，35℃培养36h；将布拉氏酵母菌原始菌株在无菌条件下接种于YPD固体培养基斜面上，27℃培养60h；
2）一级种子液培养：将步骤1）中的玉米乳杆菌和戊糖片球菌菌种在无菌条件下分别转接于MRS液体培养基，35℃，160rpm，摇床培养24h，得一级玉米乳杆菌种子液和一级戊糖片球菌种子液；将步骤1）中的布拉氏酵母菌菌种在无菌条件下转接于YPD液体培养基，28℃，160rpm，摇床培养24h，得一级布拉氏酵母菌种子液；
3）二级种子液培养：将步骤2）中得到的一级玉米乳杆菌种子液、戊糖片球菌种子液分别按2%的接种量接种到MRS液体培养基中，35℃，160rpm，摇床培养24h，得到二级玉米乳杆菌种子液和二级戊糖片球菌种子液；将步骤2）中得到的一级布拉氏酵母菌种子液按5%的接种量接种到YPD液体培养基中，28℃，160rpm，摇床培养24h，得到二级布拉氏酵母菌种子液；
4）混合发酵：将干料豆粕、玉米按重量比1:2.5粉碎，按料水重量比1:3.5的比例加入水后混匀，得到料液，然后将二级玉米乳杆菌种子液、二级戊糖片球菌种子液、二级布拉氏酵母菌种子液按2:1:2的比例接种至料液中，总接种量为5%，发酵温度为35℃，160rpm，发酵24h，得发酵液；
5）在步骤4）得到的发酵液中加入维生素3%，微量元素0.4%，糖蜜15%，乳清粉12%，氨基酸3%，即得液体活性饲料。
实施例3
本发明在具体实施时，具体包括以下步骤：
1）斜面培养：将玉米乳杆菌和戊糖片球菌原始菌种在无菌条件下接种于MRS固体培养基斜面上，37℃培养48h；将布拉氏酵母菌原始菌株在无菌条件下接种于YPD固体培养基斜面上，30℃培养72h；
2）一级种子液培养：将步骤1）中的玉米乳杆菌和戊糖片球菌菌种在无菌条件下分别转接于MRS液体培养基，37℃，150rpm，摇床培养24h；将步骤1）中的布拉氏酵母菌菌种在无菌条件下转接于YPD液体培养基，25℃，180rpm，摇床培养24h；
3）二级种子液培养：将步骤2）中得到的一级玉米乳杆菌种子液、戊糖片球菌种子液分别按2%的接种量接种到MRS液体培养基中，37℃，180rpm，摇床培养24h，得到二级玉米乳杆菌种子液和二级戊糖片球菌种子液；将步骤2）中得到的一级布拉氏酵母菌种子液按2%的接种量接种到YPD液体培养基中，25℃，150rpm，摇床培养24h，得到二级布拉氏酵母菌种子液；
4）混合发酵：将干料豆粕、玉米按重量比1:3粉碎，按料水重量比1:3的比例加入水后混匀，得到料液，然后将二级玉米乳杆菌种子液、二级戊糖片球菌种子液、二级布拉氏酵母菌种子液按1:2:2的比例接种至料液中，总接种量为5%，发酵温度为37℃，150rpm，发酵24h，得发酵液；
5）在步骤4）得到的发酵液中加入维生素5%，微量元素0.5%，糖蜜12%，乳清粉10%，氨基酸2%，即得液体活性饲料。
本发明利用复合菌制备的液体活性饲料应用于断奶仔猪，能增加断奶仔猪的日采食量，减少腹泻率，提高成活率，使用效果好，并经试验资料得到充分证明，相关实验资料如下：
1实验材料及菌种
本发明经反复大量的实验，先优选出三种复合菌的组合，分别是玉米乳杆菌，戊糖片球菌和布拉氏酵母菌；玉米乳杆菌，乳酸片球菌和产朊假丝酵母菌；植物乳杆菌，乳酸片球菌和布拉氏酵母菌。把三种不同的组合分别用经粉碎后的豆粕，玉米加水的液体料培养，记录不同组合的活菌数，及发酵液最终pH值，选择最终活菌数高，pH值适合的组合。
2实验设计
方案一：复合菌由玉米乳杆菌1、戊糖片球菌2和布拉氏酵母菌3组成。
方案二：复合菌由玉米乳杆菌1、乳酸片球菌2和产朊假丝酵母菌3组成。
方案三：复合菌由植物乳杆菌1、乳酸片球菌2和布拉氏酵母菌3组成。
1）斜面培养：将复合菌前两种菌种原始菌株在无菌条件下分别接种于MRS固体培养基斜面上，30~37℃培养24~48h；将复合菌后一种菌种原始菌株在无菌条件下接种于YPD固体培养基斜面上，25~30℃培养48~72h；
2）一级种子液培养：将步骤1）中的前两种菌种在无菌条件下分别转接于MRS液体培养基，30~37℃，120~150rpm，摇床培养12~24h；将步骤1）中的后一菌种在无菌条件下接种于YPD液体培养基，25~28℃，150~180rpm，摇床培养12~24h；
3）二级种子液培养：将步骤2）中得到的前两菌种一级种子液按2%~5%的接种量接种到二级种子培养基中，30~37℃，120~150rpm，摇床培养12~24h，得到前两菌种二级种子液；
将步骤2）中得到的后一菌种一级种子液按2%~5%的接种量接种到二级种子培养基中，25~28℃，150~180rpm，摇床培养12~24h，得到后一菌种二级种子液；
4）混合发酵：将干料玉米，豆粕粉碎，按料水重量比1:4的比例加入水后混匀，得到料液，接着将前两菌种二级种子液、后一菌种二级种子液按2:2:1的比例接种至料液中，总接种量为5%，发酵温度为30~37℃，150~180rpm，发酵7d，检测发酵液中的活菌数和发酵液的pH值。
以上所用培养基与本发明所用培养基组成一样，不再复述。
3实验结果
在以上同样的步骤与培养条件下：
方案一：玉米乳杆菌和戊糖片球菌的总活菌数达到6*109~1*1010CFU/mL，布拉氏酵母菌的活菌数达到3*108~1*109CFU/mL，最终发酵液pH值在4.0~5.0。
方案二：玉米乳杆菌和乳酸片球菌的总活菌数达到4*109~7*109CFU/mL，产朊假丝酵母菌的活菌数达到1*108~3*108CFU/mL，最终发酵液pH值在4.5~5.5。
方案三：植物乳杆菌和乳酸片球菌的总活菌数达到3*109~6*109CFU/mL，布拉氏酵母菌的活菌数达到2*108~4*108CFU/mL，最终发酵液pH值在5.0~7.0。
表1 三组方案活菌数与pH值对比表
方案一 方案二 方案三
乳酸菌活菌总数CFU/mL 6*10<sup>9</sup>~1*10<sup>10</sup> 4*10<sup>9</sup>~7*10<sup>9</sup> 3*10<sup>9</sup>~6*10<sup>9</sup>
酵母菌活菌数CFU/mL 3*10<sup>8</sup>~1*10<sup>9</sup> 1*10<sup>8</sup>~3*10<sup>8</sup> 2*10<sup>8</sup>~4*10<sup>8</sup>
pH值 4.0~5.0 4.5~5.5 5.0~7.0
根据以上实验结果，本发明最终确定所选复合菌组成为玉米乳杆菌，戊糖片球菌和布拉氏酵母菌。
4本发明液体活性饲料应用于断奶仔猪的试验
选用35日龄杜长大三元杂交断奶仔猪100头，随机进行分成4组，每组25头，试验周期为21天。
5试验方案
试验组1：本发明随机实施例得到的液体活性饲料1，试验组2：本发明随机实施例得到的液体活性饲料2，试验组3：本发明随机实施例得到的液体活性饲料3。
对照组：基础饲粮饲喂，基础饲粮包括玉米，豆粕，维生素，微量元素，糖蜜，乳清粉，氨基酸等。
试验组和对照组均自由采食，充足饮水。试验开始，结束时空腹称重，统计耗料量，注意观察腹泻情况和死亡情况，计算平均日增重量、采食量、腹泻发生率和死亡率。
6试验结果
试验结果如表2所示。
表2四组饲料的实试验结果对比表
组别 对照组 试验组1 试验组2 试验组3
平均日增重g/d 342 457 473 426
采食量g/d 573 658 691 674
腹泻率% 7.14 0.95 0.57 0.76
成活率% 96 100 100 100
从上表2中可以看出试验组仔猪的日增重量和采食量比对照组有所增加，同时腹泻率明显降低，可见该液体活性饲料可增加仔猪日采食量，减少腹泻，提高仔猪的成活率。
7结论
由以上情况表明，本发明液体活性饲料应用于断奶仔猪，能增加动物的日采食量，减少腹泻率，促进动物胃肠健康，提高成活率，增强免疫力，有效促进动物的健康生长，是液体活性饲料上的创新，经济和社会效益巨大。

Claims (3)

1.一种用于仔猪的液体活性饲料的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
1）斜面培养：将玉米乳杆菌和戊糖片球菌原始菌种在无菌条件下分别接种于MRS固体培养基斜面上，30~37℃培养24~48h；将布拉氏酵母菌原始菌株在无菌条件下接种于YPD固体培养基斜面上，25~30℃培养48~72h；
2）一级种子液培养：将步骤1）中的玉米乳杆菌和戊糖片球菌菌种在无菌条件下分别转接于MRS液体培养基，30-37℃，150-180rpm，摇床培养24h，得一级玉米乳杆菌种子液和一级戊糖片球菌种子液；将步骤1）中的布拉氏酵母菌菌种在无菌条件下转接于YPD液体培养基，25-28℃，150-180rpm，摇床培养24h，得一级布拉氏酵母菌种子液；
3）二级种子液培养：将步骤2）中得到的一级玉米乳杆菌种子液和一级戊糖片球菌种子液分别按2-5%的接种量接种到MRS液体培养基中，30-37℃，150-180rpm，摇床培养24h，得到二级玉米乳杆菌种子液和二级戊糖片球菌种子液；将步骤2）中得到的一级布拉氏酵母菌种子液按2-5%的接种量接种到YPD液体培养基中，25-28℃，150-180rpm，摇床培养24h，得到二级布拉氏酵母菌种子液；
4）混合发酵：将干料豆粕、玉米按重量比1:2~3粉碎，按料水重量比1:3-4的比例加入水后混匀，得到料液，然后将二级玉米乳杆菌种子液、二级戊糖片球菌种子液、二级布拉氏酵母菌种子液按1-2:1-2:1-2的比例接种至料液中，总接种量为5%，发酵温度为30-37℃，150-180rpm，发酵24h，得发酵液；
5）在步骤4）得到的发酵液中加入维生素3-5%、微量元素0.3-0.5%、糖蜜10-15%、乳清粉10-15%、氨基酸2-4%，即得液体活性饲料；
所述的MRS固体培养基成分组成：酪蛋白胨1%，牛肉膏1%，酵母粉0.5%，葡萄糖2%，乙酸钠0.5%，柠檬酸二胺0.2%，吐温-80 0.1%，磷酸氢二钾0.2%，硫酸镁0.058%，硫酸锰0.025%，琼脂粉1.8%，调节pH6.5~6.8；
所述的MRS液体培养基成分组成：酪蛋白胨1%，牛肉膏1%，酵母粉0.5%，葡萄糖2%，乙酸钠0.5%，柠檬酸二胺0.2%，吐温-80 0.1%，磷酸氢二钾0.2%，硫酸镁0.058%，硫酸锰0.025%，调节pH6.5~6.8；
所述的YPD固体培养基成分组成：葡萄糖2%，蛋白胨2%，酵母粉1%，琼脂粉1.8%；
所述的YPD液体培养基成分组成：葡萄糖2%，蛋白胨2%，酵母粉1%；
根据权利要求1所述的用于仔猪的液体活性饲料的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
1）斜面培养：将玉米乳杆菌和戊糖片球菌原始菌种在无菌条件下分别接种于MRS固体培养基斜面上，30℃培养24h；将布拉氏酵母菌原始菌株在无菌条件下转接于YPD固体培养基斜面上，25℃培养48h；
2）一级种子液培养：将步骤1）中的玉米乳杆菌和戊糖片球菌菌种在无菌条件下分别转接于MRS液体培养基，30℃，180rpm，摇床培养24h，得一级玉米乳杆菌种子液和一级戊糖片球菌种子液；将步骤1）中的布拉氏酵母菌菌种在无菌条件下转接于YPD液体培养基，25℃，150rpm，摇床培养24h，得一级布拉氏酵母菌种子液；
3）二级种子液培养：将步骤2）中得到的一级玉米乳杆菌种子液、戊糖片球菌种子液分别按5%的接种量接种到MRS液体培养基中，30℃，150rpm，摇床培养24h，得到二级玉米乳杆菌种子液和二级戊糖片球菌种子液；将步骤2）中得到的一级布拉氏酵母菌种子液按2%的接种量接种到YPD液体培养基中，25℃，180rpm，摇床培养24h，得到二级布拉氏酵母菌种子液；
4）混合发酵：将干料豆粕、玉米按重量比1:2粉碎，按料水重量比1:4的比例加入水后混匀，得到料液，然后将二级玉米乳杆菌种子液、二级戊糖片球菌种子液、二级布拉氏酵母菌种子液按2:2:1的比例接种至料液中，总接种量为5%，发酵温度为30℃，180rpm，发酵24h，得发酵液；
5）在步骤4）得到的发酵液中加入维生素4%，微量元素0.3%，糖蜜10%，乳清粉15%，氨基酸4%，即得液体活性饲料。
2.根据权利要求1所述的用于仔猪的液体活性饲料的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
1）斜面培养：将玉米乳杆菌和戊糖片球菌原始菌种在无菌条件下分别接种于MRS固体培养基斜面上，35℃培养36h；将布拉氏酵母菌原始菌株在无菌条件下接种于YPD固体培养基斜面上，27℃培养60h；
2）一级种子液培养：将步骤1）中的玉米乳杆菌和戊糖片球菌菌种在无菌条件下分别转接于MRS液体培养基，35℃，160rpm，摇床培养24h，得一级玉米乳杆菌种子液和一级戊糖片球菌种子液；将步骤1）中的布拉氏酵母菌菌种在无菌条件下转接于YPD液体培养基，28℃，160rpm，摇床培养24h，得一级布拉氏酵母菌种子液；
3）二级种子液培养：将步骤2）中得到的一级玉米乳杆菌种子液、戊糖片球菌种子液分别按2%的接种量接种到MRS液体培养基中，35℃，160rpm，摇床培养24h，得到二级玉米乳杆菌种子液和二级戊糖片球菌种子液；将步骤2）中得到的一级布拉氏酵母菌种子液按5%的接种量接种到YPD液体培养基中，28℃，160rpm，摇床培养24h，得到二级布拉氏酵母菌种子液；
4）混合发酵：将干料豆粕、玉米按重量比1:2.5粉碎，按料水重量比1:3.5的比例加入水后混匀，得到料液，然后将二级玉米乳杆菌种子液、二级戊糖片球菌种子液、二级布拉氏酵母菌种子液按2:1:2的比例接种至料液中，总接种量为5%，发酵温度为35℃，160rpm，发酵24h，得发酵液；
5）在步骤4）得到的发酵液中加入维生素3%，微量元素0.4%，糖蜜15%，乳清粉12%，氨基酸3%，即得液体活性饲料。
3.根据权利要求1所述的用于仔猪的液体活性饲料的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
1）斜面培养：将玉米乳杆菌和戊糖片球菌原始菌种在无菌条件下接种于MRS固体培养基斜面上，37℃培养48h；将布拉氏酵母菌原始菌株在无菌条件下接种于YPD固体培养基斜面上，30℃培养72h；
2）一级种子液培养：将步骤1）中的玉米乳杆菌和戊糖片球菌菌种在无菌条件下分别转接于MRS液体培养基，37℃，150rpm，摇床培养24h；将步骤1）中的布拉氏酵母菌菌种在无菌条件下转接于YPD液体培养基，25℃，180rpm，摇床培养24h；
3）二级种子液培养：将步骤2）中得到的一级玉米乳杆菌种子液、戊糖片球菌种子液分别按2%的接种量接种到MRS液体培养基中，37℃，180rpm，摇床培养24h，得到二级玉米乳杆菌种子液和二级戊糖片球菌种子液；将步骤2）中得到的一级布拉氏酵母菌种子液按2%的接种量接种到YPD液体培养基中，25℃，150rpm，摇床培养24h，得到二级布拉氏酵母菌种子液；
4）混合发酵：将干料豆粕、玉米按重量比1:3粉碎，按料水重量比1:3的比例加入水后混匀，得到料液，然后将二级玉米乳杆菌种子液、二级戊糖片球菌种子液、二级布拉氏酵母菌种子液按1:2:2的比例接种至料液中，总接种量为5%，发酵温度为37℃，150rpm，发酵24h，得发酵液；
5）在步骤4）得到的发酵液中加入维生素5%，微量元素0.5%，糖蜜12%，乳清粉10%，氨基酸2%，即得液体活性饲料。
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