CN109414478A - 抗菌组合物和用抗菌组合物治疗葡萄球菌感染的方法 - Google Patents

抗菌组合物和用抗菌组合物治疗葡萄球菌感染的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN109414478A
CN109414478A CN201780006444.8A CN201780006444A CN109414478A CN 109414478 A CN109414478 A CN 109414478A CN 201780006444 A CN201780006444 A CN 201780006444A CN 109414478 A CN109414478 A CN 109414478A
Authority
CN
China
Prior art keywords
staphylococcus
infection
antibacterial
antibacterial protein
bactericidal composition
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201780006444.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109414478B (zh
Inventor
尹圣君
俊苏云
钟吉莫
康桑贤
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Yin Terong Biotech Inc
Original Assignee
Yin Terong Biotech Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Yin Terong Biotech Inc filed Critical Yin Terong Biotech Inc
Publication of CN109414478A publication Critical patent/CN109414478A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109414478B publication Critical patent/CN109414478B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/162—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/08—Solutions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

一种治疗葡萄球菌感染的方法包括向受试者施用有效量的具有宽的杀菌活性的抗菌组合物。所述抗菌组合物包括由如在SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列组成的第一抗菌蛋白和/或由如在SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列组成的第二抗菌蛋白。

Description

抗菌组合物和用抗菌组合物治疗葡萄球菌感染的方法
相关申请案
本申请要求于2016年1月12日提交的美国临时申请号62/277,506的权益，所述申请出于所有目的通过引用并入本文，如同在本文完全阐述一样。
技术领域
本发明涉及抗菌组合物和用抗菌组合物治疗葡萄球菌感染的方法。
背景技术
葡萄球菌是革兰氏阳性菌的属，并且通过毒素产生或渗透可引起人类和动物的众多种疾病。葡萄球菌相关疾病的范围可以从温和且不需要治疗到严重且潜在致命。超过30个不同的葡萄球菌属可以感染人类。葡萄球菌感染的表现通常取决于生物体引起的感染类型。感染的常见类型包括以下：皮肤感染(例如，毛囊炎、疖、脓疱病、伤口感染、烫伤皮肤综合征)、软组织感染(例如，化脓性肌炎、败血性滑囊炎、败血性关节炎)、中毒性休克综合征、暴发性紫癜、心内膜炎、骨髓炎、肺炎、假体装置(例如，假体关节和心脏瓣膜；血管分流器、移植物、导管)相关的感染以及尿道感染。免疫系统受抑制的人(服用免疫抑制药物或具有免疫缺陷的那些人)处于发生更严重感染的增加风险下。
葡萄球菌感染通常由金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)引起。由于其他葡萄球菌属的感染一直在稳步上升。举例来说，腐生性葡萄球菌占年轻女性非复杂性尿道感染的高达10％；施氏葡萄球菌、路邓葡萄球菌和溶血性葡萄球菌与天然瓣膜心内膜炎相关。凝固酶阴性葡萄球菌(CoNS)出现成为超过12％的住院患者中发现的临床相关病原体，并且涉及高达30％的与医疗护理相关的败血症病例。另外，许多葡萄球菌属对许多抗生素有抗性。
考虑到葡萄球菌所引起的问题，迫切要求研发一种治疗由抗生素敏感和抗生素抗性葡萄球菌引起的葡萄球菌感染的方法。即使抗生素仍然是治疗所述葡萄球菌感染的主要治疗剂，但基于抗生素的治疗具有严重的问题，例如治疗效果降低。因此，为了增强葡萄球菌感染的治疗效率，迫切要求一种新的有效替代(治疗剂)。
最近，内溶素作为治疗细菌感染的新方法的使用引起了我们的注意。噬菌体内溶素，也称为噬菌体溶素或溶素，是噬菌体编码的肽聚糖降解酶，其快速降解细菌细胞壁并释放噬菌体后代。美国专利号8,232,370报道了一种具有对金黄色葡萄球菌具有特异性的抗菌活性的抗菌蛋白。
此外，广泛报道内溶素具有物种特异性杀菌活性。举例来说，未来生物学.2012年10月；7(10):1147-1171在1148处报道，“内溶素相对于典型抗生素的重要优点是其对某些PG[肽聚糖]类型具有高度特异性，所述PG[肽聚糖]类型通常限制其对某一细菌属、种或甚至血清型的成员的抗微生物作用”(“细胞内溶素相对于经典细胞的重要优势抗生素是对某些PG[肽聚糖]类型的高度特异性通常将其抗菌作用限制在某一细菌属的成员，物种甚至血清型”)。应用和环境微生物学，2009年3月，第1388-1394页，在第1388-1389页报道，“[噬菌体溶素]不仅在不存在噬菌体下发挥其致死效应(引起‘自外溶菌作用’)，而且根据溶素还对细菌宿主、通常对特定属、种或甚至亚种展示特异性”(“[噬菌体溶素]不仅在没有噬菌体的情况下发挥其致死作用(导致'没有'裂解)，而且还显示出对细菌宿主的特异性，通常对于特定属，种，或甚至亚种，取决于溶素”)。应用与环境微生物学，2002年11月，第5311-5317页，在第5311页报道，“所有48个测试的产气荚膜梭菌菌株都对[噬菌体φ3626双重溶解系统的]胞壁质水解酶敏感，而其他梭状芽胞杆菌和属于其他属的细菌通常不受影响”(“48个测试的产气荚膜梭菌菌株对[噬菌体φ3626双裂解系统]的胞壁质水解酶敏感，而属于其他属的其他梭菌和细菌通常不受影响”)。
因此，需要研发具有对超过一种葡萄球菌属具有特异性的抗菌活性并且因此可治疗由多种葡萄球菌引起的感染的抗菌蛋白。
发明内容
本发明提供治疗葡萄球菌感染的方法。所述方法包括向受试者施用有效量的抗菌组合物，所述抗菌组合物具有针对以下葡萄球菌属的至少一种或全部的宽的杀菌活性：阿尔莱葡萄球菌(Staphylococcus arlettae)、金黄色葡萄球菌、耳葡萄球菌(Staphylococcus auricularis)、肉葡萄球菌(Staphylococcus carnosus)、山羊葡萄球菌(Staphylococcus carprae)、产色葡萄球菌(Staphylococcus chromogenes)、科氏葡萄球菌(Staphylococcus cohnii)、海豚葡萄球菌(Staphylococcus delphini)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)、马胃葡萄球菌(Staphylococcus equorum)、鸡葡萄球菌(Staphylococcus gallinarum)、溶血葡萄球菌(Staphylococcus hemolyticus)、人葡萄球菌(Staphylococcus hominis)、中间葡萄球菌(Staphylococcus intermedius)、克氏葡萄球菌(Staphylococcus kloosii)、缓慢葡萄球菌(Staphylococcus lentus)、路邓葡萄球菌(Staphylococcus lugdunensis)、蝇葡萄球菌(Staphylococcus muscae)、巴氏葡萄球菌(Staphylococcus pasteuri)、腐生性葡萄球菌(Staphylococcus saprophyticus)、瓦氏葡萄球菌(Staphylococcus warneri)和木糖葡萄球菌(Staphylococcus xylosus)。抗菌组合物包括由如在SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列组成的第一抗菌蛋白和/或由如在SEQ IDNO:2中所示的氨基酸序列组成的第二抗菌蛋白。
在一方面，抗菌组合物包括15-35摩尔％的第一抗菌蛋白和55-85摩尔％的第二抗菌蛋白。
在另一方面，抗菌组合物包括25摩尔％的第一抗菌蛋白和75摩尔％的第二抗菌蛋白。
在另一方面，葡萄球菌感染是皮肤感染、软组织感染、中毒性休克综合征、暴发性紫癜、心内膜炎、骨髓炎、肺炎、假体装置相关的感染或尿道感染。
在另一方面，皮肤感染是毛囊炎、疖、脓疱病、伤口感染或烫伤皮肤综合征。
在另一方面，软组织感染是化脓性肌炎、败血性滑囊炎或败血性关节炎。
在另一方面，假体装置是假体关节和心脏瓣膜、血管分流器、移植物或导管。
本发明提供由如在SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列组成的抗菌蛋白。抗菌蛋白具有针对以下葡萄球菌属的至少一种或全部的宽的杀菌活性：阿尔莱葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、耳葡萄球菌、肉葡萄球菌、山羊葡萄球菌、产色葡萄球菌、科氏葡萄球菌、海豚葡萄球菌、表皮葡萄球菌、马胃葡萄球菌、鸡葡萄球菌、溶血葡萄球菌、人葡萄球菌、中间葡萄球菌、克氏葡萄球菌、缓慢葡萄球菌、路邓葡萄球菌、蝇葡萄球菌、巴氏葡萄球菌、腐生性葡萄球菌、瓦氏葡萄球菌和木糖葡萄球菌。
在一方面，用于治疗葡萄球菌感染的药物组合物包括抗菌蛋白作为活性成分。
本发明提供由如在SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列组成的抗菌蛋白。抗菌蛋白具有针对以下葡萄球菌属的至少一种或全部的宽的杀菌活性：阿尔莱葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、耳葡萄球菌、肉葡萄球菌、山羊葡萄球菌、产色葡萄球菌、科氏葡萄球菌、海豚葡萄球菌、表皮葡萄球菌、马胃葡萄球菌、鸡葡萄球菌、溶血葡萄球菌、人葡萄球菌、中间葡萄球菌、克氏葡萄球菌、缓慢葡萄球菌、路邓葡萄球菌、蝇葡萄球菌、巴氏葡萄球菌、腐生性葡萄球菌、瓦氏葡萄球菌和木糖葡萄球菌。
在一方面，用于治疗葡萄球菌感染的药物组合物包括抗菌蛋白作为活性成分。
本发明提供包括由如在SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列组成的第一抗菌蛋白和由如在SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列组成的第二抗菌蛋白的抗菌组合物。抗菌组合物具有针对以下葡萄球菌属中的至少一种或全部的宽的杀菌活性：阿尔莱葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、耳葡萄球菌、肉葡萄球菌、山羊葡萄球菌、产色葡萄球菌、科氏葡萄球菌、海豚葡萄球菌、表皮葡萄球菌、马胃葡萄球菌、鸡葡萄球菌、溶血葡萄球菌、人葡萄球菌、中间葡萄球菌、克氏葡萄球菌、缓慢葡萄球菌、路邓葡萄球菌、蝇葡萄球菌、巴氏葡萄球菌、腐生性葡萄球菌、瓦氏葡萄球菌和木糖葡萄球菌。
在一方面，抗菌组合物包括15-35摩尔％的第一抗菌蛋白和55-85摩尔％的第二抗菌蛋白。
在另一方面，抗菌组合物包括25摩尔％的第一抗菌蛋白和75摩尔％的第二抗菌蛋白。
应理解，前述一般描述和以下详细描述两者都是例示性和解释性的且打算提供对所要求保护的本发明技术的进一步解释。
附图说明
包括用于提供对本发明的进一步理解并纳入本说明书中并构成本说明书的一部分的附图图解说明了本发明的实施方案，并且与描述一起用于解释本发明的原理。
在图式中：
图1是显示针对阿尔莱葡萄球菌的有效杀菌活性的结果。(A)菌苔上点样测定和(B)浊度减少测定。
图2是显示针对金黄色葡萄球菌的有效杀菌活性的结果。(A)菌苔上点样测定和(B)浊度减少测定。
图3是显示针对耳葡萄球菌的有效杀菌活性的结果。(A)菌苔上点样测定和(B)浊度减少测定。
图4是显示针对肉葡萄球菌的有效杀菌活性的结果。(A)菌苔上点样测定和(B)浊度减少测定。
图5是显示针对山羊葡萄球菌的有效杀菌活性的结果。(A)菌苔上点样测定和(B)浊度减少测定。
图6是显示针对产色葡萄球菌的有效杀菌活性的结果。(A)菌苔上点样测定和(B)浊度减少测定。
图7是显示针对科氏葡萄球菌的有效杀菌活性的结果。(A)菌苔上点样测定和(B)浊度减少测定。
图8是显示针对海豚葡萄球菌的有效杀菌活性的结果。(A)菌苔上点样测定和(B)浊度减少测定。
图9是显示针对表皮葡萄球菌的有效杀菌活性的结果。(A)菌苔上点样测定和(B)浊度减少测定。
图10是显示针对马胃葡萄球菌的有效杀菌活性的结果。(A)菌苔上点样测定和(B)浊度减少测定。
图11是显示针对鸡葡萄球菌的有效杀菌活性的结果。(A)菌苔上点样测定和(B)浊度减少测定。
图12是显示针对溶血葡萄球菌的有效杀菌活性的结果。(A)菌苔上点样测定和(B)浊度减少测定。
图13是显示针对人葡萄球菌的有效杀菌活性的结果。(A)菌苔上点样测定和(B)浊度减少测定。
图14是显示针对中间葡萄球菌的有效杀菌活性的结果。(A)菌苔上点样测定和(B)浊度减少测定。
图15是显示针对克氏葡萄球菌的有效杀菌活性的结果。(A)菌苔上点样测定和(B)浊度减少测定。
图16是显示针对缓慢葡萄球菌的有效杀菌活性的结果。(A)菌苔上点样测定和(B)浊度减少测定。
图17是显示针对路邓葡萄球菌的有效杀菌活性的结果。(A)菌苔上点样测定和(B)浊度减少测定。
图18是显示针对蝇葡萄球菌的有效杀菌活性的结果。(A)菌苔上点样测定和(B)浊度减少测定。
图19是显示针对巴氏葡萄球菌的有效杀菌活性的结果。(A)菌苔上点样测定和(B)浊度减少测定。
图20是显示针对腐生性葡萄球菌的有效杀菌活性的结果。(A)菌苔上点样测定和(B)浊度减少测定。
图21是显示针对瓦氏葡萄球菌的有效杀菌活性的结果。(A)菌苔上点样测定和(B)浊度减少测定。
图22是显示针对木糖葡萄球菌的有效杀菌活性的结果。(A)菌苔上点样测定和(B)浊度减少测定。
具体实施方式
现在将详细参考本发明的实施方案，在附图中图解说明这些实施方案的实例。
如本文所用的“有效量”意指足以显著诱导正面效应(例如，皮肤感染、软组织感染改善等)、但足够低以避克严重的副作用(例如，过度毒性或过敏反应)的组合物的量(如适用)。“以下葡萄球菌属中的至少一种或全部”意指任一种、两种、三种、四种、五种、六种至高达二十二种选自由以下各项组成的组的葡萄球菌属：阿尔莱葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、耳葡萄球菌、肉葡萄球菌、山羊葡萄球菌、产色葡萄球菌、科氏葡萄球菌、海豚葡萄球菌、表皮葡萄球菌、马胃葡萄球菌、鸡葡萄球菌、溶血葡萄球菌、人葡萄球菌、中间葡萄球菌、克氏葡萄球菌、缓慢葡萄球菌、路邓葡萄球菌、蝇葡萄球菌、巴氏葡萄球菌、腐生性葡萄球菌、瓦氏葡萄球菌和木糖葡萄球菌。
抗菌组合物具有针对各种葡萄球菌菌株的杀菌活性并且选择性诱导各种葡萄球菌菌株的溶菌作用，并且组合物含有一种或多种具有针对各种葡萄球菌菌株的宽的杀菌活性(溶解活性)谱的抗菌蛋白作为活性成分。
具有针对各种葡萄球菌菌株的宽的杀菌活性(溶解活性)谱的抗菌蛋白具有由SEQID NO:1和SEQ ID NO:2表示的氨基酸序列。具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的抗菌蛋白被认为是具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的抗菌蛋白的转译后修饰形式(即，从其缺失起始子甲硫氨酸)。
已知在其氨基端带有甲硫氨酸的分子与无甲硫氨酸的分子之间，三维结构、生物活性和稳定性可有所不同，即使两个分子在其他方面都是相同的蛋白质。也认为在氨基末端添加甲硫氨酸可引起蛋白质抗原性增加。因此，在工业应用中，建立选择性去除所述氨基末端甲硫氨酸的相对简单而有效的方法将是重要的。
在用于解决这个问题的现有方法中，提出了一种可以通过溴化氰(BrCN)裂解去除甲硫酸的方法；然而，没有获得令人满意的结果，因为这种方法不仅假定所需成熟蛋白质的分子中不存在其他甲硫氨酸残基，而且还使蛋白质经受剧烈的化学反应。
本发明的抗菌组合物有利地具有抗菌蛋白的转译后修饰形式(即，从其缺失起始子甲硫氨酸)，而无需裂解步骤。关于为什么抗菌组合物具有针对某些葡萄球菌属的宽的杀菌活性，不受任何特定理论的束缚，认为具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的抗菌蛋白(转译后修饰形式)有助于针对某些葡萄球菌的宽的杀菌活性。
本发明的抗菌蛋白还包括与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、95％、99％或99.5％同一性的其变体。氨基酸序列同一性在本文中定义为在比对相同阅读框中的序列并引入空位(如需要)以达成最大序列同一性百分比并且不考虑任何保守取代作为序列属性的一部分之后，候选序列中与抗菌蛋白序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基百分比。
为了确定两个氨基酸序列的同一性百分比，将序列对齐用于最佳比较目的(例如，可在第一序列的序列中引入空位)。然后比较相应氨基酸位置处的氨基酸。当第一序列中的位置被第二序列中与相应位置相同的氨基酸占据时，则这些分子在所述位置处相同。两个序列之间的同一性百分比随着所述序列所共享的相同位置数变化(即，同一性％＝相同位置数/总位置数×100)。
具有针对各种葡萄球菌菌株的宽的杀菌活性(溶解活性)谱的抗菌蛋白特有地展示针对一种或多种葡萄球菌菌株的宽的抗菌谱，所述葡萄球菌包括阿尔莱葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、耳葡萄球菌、肉葡萄球菌、山羊葡萄球菌、产色葡萄球菌、科氏葡萄球菌、海豚葡萄球菌、表皮葡萄球菌、马胃葡萄球菌、鸡葡萄球菌、溶血葡萄球菌、人葡萄球菌、中间葡萄球菌、克氏葡萄球菌、缓慢葡萄球菌、路邓葡萄球菌、蝇葡萄球菌、巴氏葡萄球菌、腐生性葡萄球菌、瓦氏葡萄球菌和木糖葡萄球菌。此外，这些葡萄球菌菌株是抗生素敏感性或抗生素抗性葡萄球菌菌株。具有针对各种葡萄球菌菌株的宽的杀菌活性(溶解活性)谱的抗菌蛋白的抗菌活性与细菌抗生素易感性型式无关。
具有针对各种葡萄球菌菌株的杀菌活性并选择性诱导各种葡萄球菌菌株的溶菌作用的抗菌组合物包括由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成的抗菌蛋白、由SEQ ID NO:2的氨基酸序列组成的抗菌蛋白或其混合物。抗菌蛋白混合物可包括15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34或35摩尔％的由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成的抗菌蛋白以及65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84或85摩尔％的由SEQ ID NO:2的氨基酸序列组成的抗菌蛋白。优选地，抗菌蛋白混合物包括约25摩尔％的由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成的抗菌蛋白以及约75摩尔％的由SEQ ID NO:2的氨基酸序列组成的抗菌蛋白。
抗菌组合物具有针对各种葡萄球菌菌株的杀菌活性并选择性诱导各种葡萄球菌菌株的溶菌作用，并展示针对抗生素敏感性或抗生素抗性的各种葡萄球菌菌株的宽的抗菌谱，所述葡萄球菌包括阿尔莱葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、耳葡萄球菌、肉葡萄球菌、山羊葡萄球菌、产色葡萄球菌、科氏葡萄球菌、海豚葡萄球菌、表皮葡萄球菌、马胃葡萄球菌、鸡葡萄球菌、溶血葡萄球菌、人葡萄球菌、中间葡萄球菌、克氏葡萄球菌、缓慢葡萄球菌、路邓葡萄球菌、蝇葡萄球菌、巴氏葡萄球菌、腐生性葡萄球菌、瓦氏葡萄球菌和木糖葡萄球菌。
因此，抗菌组合物可有效治疗由多种葡萄球菌菌株引起的感染。临床上有价值的是，本发明组合物在由多种葡萄球菌菌株引起的复杂葡萄球菌感染中仍有效。
葡萄球菌感染可发展成疾病。葡萄球菌感染和由葡萄球菌引起的疾病例示为如下：皮肤感染(例如，毛囊炎、疖、脓疱病、伤口感染、烫伤皮肤综合征)、软组织感染(例如，化脓性肌炎、败血性滑囊炎、败血性关节炎)、中毒性休克综合征、暴发性紫癜、心内膜炎、骨髓炎、肺炎、假体装置(例如，假体关节和心脏瓣膜；血管分流器、移植物、导管)相关的感染和尿道感染。
本发明的抗菌组合物可另外包括药学上可接受的，其由蔗糖、山梨醇、甘露醇和磷酸盐例示但并不限于此。除了上述成分外，本发明的抗菌组合物可另外包括乳化剂、悬浮剂和稳定剂，但并不限于此。
本发明的抗菌组合物可经口或非经肠(例如，静脉内、肌内、皮下、局部或腹膜注射)来施加和施用。
本发明的药物组合物的有效剂量因制剂、施用路径、患有由葡萄球菌引起的感染的动物或人类的年龄、体重和性别、感染的严重程度、饮食、施用频率和路径、排泄和敏感性而不同。一般来说，剂量可由有经验的医生考虑治疗效应的目标来确定。
本发明的抗菌组合物可以通过本领域技术人员通过使用药学上可接受的载体和/或赋形剂以单位剂量形式或以多剂量容器配制。制剂可呈油或水溶性介质中的溶液、悬浮液或乳液；提取物；粉末；颗粒；片剂或胶囊的形式。此时，可另外包括分散剂或稳定剂。
在本说明中，术语“治疗”(“treatment”或“treat”)指示(i)抑制由各种葡萄球菌菌株引起的感染；和(ii)减轻由各种葡萄球菌菌株引起的感染。
本发明的抗菌蛋白和抗菌组合物在其功效、速度、特异性和针对抗生素抗性菌株的活性方面与标准抗生素不同。特别是，考虑到其提供的临床有效性，针对抗生素敏感性和抗生素抗性葡萄球菌菌株的快速有效的杀菌活性是非常有价值的性质。与大部分抗生素不同，本发明的抗菌蛋白和含本发明的抗菌蛋白的药物组合物的活性不需要细菌代谢或生长，并且在接触时溶菌。这种快速杀灭性质使含有本发明的抗菌蛋白的抗菌组合物非常适合于快速降低感染宿主的细菌负荷。因此，本发明的抗菌蛋白和抗菌组合物可以解决葡萄球菌的抗生素抗性问题。另外，本发明的抗菌蛋白和本发明的抗菌组合物对葡萄球菌属具有高度特异性，并且很少溶解非靶细菌，包括共生细菌，这可减少临床并发症。一般来说，当使用常规抗生素时，普通住宅细菌也会因具有各种副作用而受损。
本发明的实用和目前优选的实施方案如以下实施例中所示是说明性的。
然而，应理解，考虑到本公开，所属领域的技术人员可在本发明的精神和范围内进行修改和改善。
实施例1：抗菌组合物的制备
通过将编码本发明的抗菌蛋白的由SEQ ID NO:3所示的基因常规次克隆到pBAD-TOPO载体(Invitrogen)中来构建本发明的抗菌蛋白的表达质粒。使用利用所得质粒转变的大肠杆菌BL21细胞作为本发明的抗菌蛋白的产生宿主。
用0.2％阿拉伯糖以2.0的600nm下光学密度(OD600)诱导本发明的抗菌蛋白的表达，并且随后将诱导的细菌细胞在19℃下再孵育10小时。通过离心(6,000×g，20分钟)回收细菌细胞，并将所得细胞团粒重新悬浮于溶解缓冲液[50mM Na2HPO4(pH 7.5)、10mM乙二胺四乙酸(EDTA)、1mM二硫苏糖醇(DTT)]中，并使用常规超声波处理破碎5分钟(1秒脉冲，脉冲之间3秒静止间隔)。在离心(13,000×g，20分钟)后，回收上清液并经受包含离子交换色谱(SP快流柱；GE Healthcare)和疏水相互作用色谱(Toyopearl PPG-600M柱；TosohBioscience)的两步色谱。
为了更具描述性，将制备的产生宿主接种于TSB(胰蛋白酶大豆肉汤)培养基(酪蛋白消化物，17g/L；大豆消化物，3g/L；右旋糖，2.5g/L；NaCl，5g/L；二磷酸钾，2.5g/L)中，并在37℃下进行孵育。当细胞浓度达到2.0的OD600时，添加最终浓度为0.2％的L-阿拉伯糖以诱导抗菌蛋白的表达。从诱导的角度，将细胞在19℃下再培养10小时。将培养肉汤以6,000×g离心20分钟以获得细胞沉淀。将沉淀悬浮于含有10mM EDTA和1mM DTT的50mM Na2HPO4缓冲液(pH 7.5)中(每1g细胞10mL缓冲液)。通过常规超声波使悬浮液中的细胞破碎。将细胞溶解物以13,000×g离心20分钟以去除细胞碎片。使上清液沉淀经受包含以下的两步色谱：离子交换色谱(缓冲液A：25mM Na2HPO4(pH 7.5)、10mM EDTA；缓冲液B：25mM Na2HPO4(pH7.5)、10mM EDTA、1M NaCl；缓冲液C：25mM Na2HPO4(pH 7.5)、10mM EDTA、50mM NaCl、0.5％Triton X-100；程序：样品加载→1.6CV的缓冲液A→30CV的缓冲液C→20CV的缓冲液A→5CV的22％缓冲液B→通过梯度洗脱(20CV的22-100％缓冲液B))以及疏水相互作用色谱(缓冲液A：10mM L-组氨酸(pH 7.5)、1M NaCl；缓冲液B：10mM L-组氨酸(pH 7.5)、1M尿素；程序：样品加载(通过离子交换色谱进行样品纯化)→10CV的缓冲液A→通过梯度洗脱(10CV的0-100％缓冲液B))。然后用0.2μm过滤器过滤蛋白溶液。
为了确定由SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2的氨基酸序列组成的抗菌蛋白的组成，进行两步分析。首先，使用蛋白酶处理的蛋白质样品进行液相色谱(LC)-质谱(MS)。使根据上述程序获得的蛋白溶液通过离心过滤到50mM Tris-HCl缓冲液(pH 7.6)中经受缓冲液交换并用6M尿素溶液稀释到2.5mg/mL的浓度。使稀释的蛋白溶液经受蛋白酶处理。使用测序级修饰的猪Glu-C蛋白酶(Promega,Madison,WI,USA)作为蛋白酶，并按照制造商的方案进行蛋白酶处理。蛋白酶处理后，使获得的蛋白酶处理的蛋白溶液经受反相HPLC和Q-TOF-MS。通过峰分析，基于估计的蛋白酶消化型式和质量计算鉴别对应于源自由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成的抗菌蛋白的MAKTQAE的肽片段以及源自由SEQ ID NO:2的氨基酸序列组成的抗菌蛋白的AKTQAE的肽片段的HPLC和MS峰。另外，通过比较使用化学合成的肽(MAKTQAE和AKTQAE)作为样品获得的峰图确认HPLC和MS峰。随后，通过反相HPLC分析利用蛋白酶处理的蛋白样品和化学合成的肽(MAKTQAE和AKTQAE)基于肽浓度与对应于其的峰面积之间的相关性测定抗菌蛋白制剂中由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成的抗菌蛋白的组成比率。作为利用三批抗菌蛋白的分析的结果，由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成的抗菌蛋白的组成比率测定为25、27和29摩尔％，并且由SEQ ID NO:2的氨基酸序列组成的抗菌蛋白的组成比率测定为分别75、73和72摩尔％。
实施例2：药物组合物的制备
通过缓冲液交换制备用于治疗葡萄球菌感染的药物组合物，其包含本发明的抗菌蛋白。在这个制备中，使用实施例1中制备的蛋白溶液，并且通过使用制剂缓冲液(1.56g/LL-组氨酸(pH 6.0)、50g/L D-山梨醇、1.47g/L CaCl2·2H2O和1g/L泊洛沙姆188)进行常规渗滤来执行缓冲液交换。
实施例3：针对葡萄球菌菌株的抗菌活性的检查
为了评价本发明药物组合物的抗菌活性，使用实施例2中制备的药物组合物进行抗菌活性测试。进行菌苔上点样测定和浊度减少测定作为抗菌活性测试。
菌苔上点样测定如下进行：在TSA(胰蛋白酶大豆琼脂；酪蛋白的胰脏消化物，17g/L；大豆的木瓜蛋白酶消化物，3g/L；氯化钠，5g/L；琼脂，15g/L)板上覆盖2mL各葡萄球菌菌株的培养物(McFarland标准为0.5)。风干后，将板在37℃下孵育过夜。孵育后，将10μL实施例2中制备的药物组合物的稀释液(抗菌蛋白的最终浓度：1μg/mL)点样到细菌菌苔上，并将板在37℃下再孵育30分钟。孵育后，检查清晰的区(溶解光圈)的形成，其指示药物组合物的杀菌效应。
浊度减少测定如下进行：将实施例2中制备的药物组合物添加到10mM磷酸盐缓冲盐水(PBS)(pH 7.2)中的葡萄球菌菌株(OD600＝0.5)的各悬浮液中，最终抗菌蛋白浓度为0.1μg/mL(在一些情形下，也使用0.5μg/mL或1.0μg/mL)。每30秒记录细菌细胞密度(OD600)的变化，共记录15分钟。从这个实验获得TOD50(活细菌的初始浓度的一半对数下降，以分钟表示)。
在这些实验中，使用以下菌株作为葡萄球菌菌株。
表1
测试菌株
结果提供于图1-22中。图1-22中所示的结果明显指示，本发明的药物组合物(即，本发明的抗菌组合物或本发明的抗菌蛋白)针对各种葡萄球菌菌株具有快速而有效的杀菌活性。对于几乎所有的测试的葡萄球菌菌株，药物组合物的TOD50都小于20分钟。
同时，检查本发明的药物组合物针对非葡萄球菌菌株的抗菌活性。作为非葡萄球菌菌株，测试5株粪肠球菌菌株、5株屎肠球菌菌株、2株草绿色链球菌菌株、1株乳房链球菌菌株、10株大肠杆菌菌株和7株沙门杆菌菌株。因此，本发明的药物组合物针对测试的这些非葡萄球菌菌株没有抗菌活性(表2)。
表2
针对非葡萄球菌菌株的抗菌活性
因此，推断出，本发明的药物组合物是葡萄球菌特异性的，并且在葡萄球菌内具有宽的抗菌谱，这表明本发明的药物组合物可以用作葡萄球菌感染的治疗剂。
实施例4：药物组合物对单一葡萄球菌感染的治疗效应
使用动物模型研究本发明的药物组合物对单一葡萄球菌感染的治疗效应。在这个实验中，选择表皮葡萄球菌和溶血葡萄球菌作为模型葡萄球菌菌株。
对于表皮葡萄球菌实验，使用重量为23g±20％(5周龄)的雌性ICR小鼠[无特异性病原体(SPF)等级]。向分成两组的总共20只小鼠(每组10只小鼠)静脉内注射表皮葡萄球菌菌株CCARM 3751的接种物(1×108CFU/小鼠)。在细菌攻击后30分钟、12小时和24小时，向一组(即，对照组)动物三次静脉内施用仅制剂缓冲液(1.56g/L L-组氨酸(pH 6.0)、50g/L D-山梨醇、1.47g/L CaCl2·2H2O和1g/L泊洛沙姆188)。在细菌攻击后30分钟、12小时和24小时，向另一组(即，治疗组)动物三次静脉内施用实施例2中制备的药物组合物(剂量：25mg/kg)。记录死亡小鼠的数目并每日观察临床体征。通过常规群落计数，使用细菌攻击(实验终点)后5天采集的血液检查本发明的药物组合物从血流中根除细菌的能力。
对于溶血葡萄球菌实验，使用重量为22g±20％(5周龄)的雌性ICR小鼠[无特异性病原体(SPF)等级]。向分成两组的总共20只小鼠(每组10只小鼠)静脉内注射溶血葡萄球菌菌株CCARM 3733的接种物(1×108CFU/小鼠)。在细菌攻击后30分钟、12小时和24小时，向一组(即，对照组)动物三次静脉内施用仅制剂缓冲液(1.56g/L L-组氨酸(pH 6.0)、50g/L D-山梨醇、1.47g/L CaCl2·2H2O和1g/L泊洛沙姆188)。在细菌攻击后30分钟、12小时和24小时，向另一组(即，治疗组)动物三次静脉内施用实施例2中制备的药物组合物(剂量：25mg/kg)。记录死亡小鼠的数目并每日观察临床体征。通过常规群落计数，使用细菌攻击(实验终点)后5天采集的血液检查本发明的药物组合物从血流中根除细菌的能力。
结果，观察到明显的治疗效应。两个实验显示了相似的结果。关于临床体征，尽管治疗组中的小鼠在整个实验时段内正常，但对照组中的小鼠在细菌攻击后2天开始出现各种临床体征，包括睑缘红斑、自发活动减少，毛皮损失、上睑下垂、立毛和转圈。本发明的药物组合物的静脉内注射显著提高了存活率(表3)。
表3
单一葡萄球菌感染模型实验中的死亡率
另外，本发明的药物组合物的静脉内注射显著降低了血液中的细菌计数。从表皮葡萄球菌实验中的对照组小鼠采集的血清中的平均CFU/mL>1×106并且在来自溶血葡萄球菌实验中的对照组小鼠的血清中为>1×105，而在两个治疗组的小鼠中未观察到细菌群落。
从上述结果确认，根据本发明制备的药物组合物可有效治疗单一葡萄球菌感染。因此，可推断出，本发明的药物组合物可有效地用于葡萄球菌感染的治疗。
实施例5：药物组合物对多种葡萄球菌感染的治疗效应
使用动物模型研究本发明的药物组合物对多种葡萄球菌感染的治疗效应。在这个实验中，选择表皮葡萄球菌、路邓葡萄球菌和瓦氏葡萄球菌作为模型葡萄球菌菌株。
使用重量为23g±20％(5周龄)的雌性ICR小鼠[无特异性病原体(SPF)等级]。向分成两组的总共20只小鼠(每组10只小鼠)静脉内注射表皮葡萄球菌CCARM 3751、路邓葡萄球菌CCARM 3734和瓦氏葡萄球菌KCTC 3340(ATCC 27836)的混合接种物(各1×108CFU/小鼠)。在细菌攻击后30分钟、12小时和24小时，向一组(即，对照组)动物三次静脉内施用仅制剂缓冲液(1.56g/L L-组氨酸(pH 6.0)、50g/L D-山梨醇、1.47g/L CaCl2·2H2O和1g/L泊洛沙姆188)。在细菌攻击后30分钟、12小时和24小时，向另一组(即，治疗组)动物三次静脉内施用实施例2中制备的药物组合物(剂量：25mg/kg)。记录死亡小鼠的数目并每日观察临床体征。通过常规群落计数，使用细菌攻击(实验终点)后5天采集的血液检查本发明的药物组合物从血流中根除细菌的能力。
结果，观察到明显的治疗效应。关于临床体征，尽管治疗组中的小鼠在整个实验时段内正常，但对照组中的小鼠出现各种临床体征，包括睑缘红斑、自发活动减少，毛皮损失、上睑下垂和立毛。本发明的药物组合物的静脉内注射显著提高了存活率(示于表4中)。
表4
多种葡萄球菌感染模型实验中的死亡率
另外，本发明的药物组合物的静脉内注射显著降低了血液中的细菌计数。从对照组小鼠采集的血清中的平均CFU/mL>1×106，而在治疗组小鼠中未观察到细菌群落。
从上述结果确认，根据本发明制备的药物组合物可有效治疗多种葡萄球菌感染。因此，可推断出，本发明的药物组合物可有效地用于葡萄球菌感染的治疗。
所属领域的技术人员应了解，上述说明中公开的概念和具体实施方案可容易地用作修饰或设计其他实施方案以进行本发明的相同目的基础。所属领域的技术人员还应了解，所述等效实施方案并不偏离如在随附权利要求书中所示的本发明的精神和范围。
所属领域的技术人员将明了，可在不背离本发明的精神或范围的情况下对本发明作出各种修改和变化。因此，本发明打算涵盖本发明的修改和变化，前提是其属于随附权利要求书和其等效物的范围。
SEQUENCE LISTING
<110> 尹特荣生物科技株式会社
<120> 抗菌组合物和用抗菌组合物治疗葡萄球菌感染的方法
<130> 0037-001PCT
<150> US 62/277,506
<151> 2016-01-12
<160> 3
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 495
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> antibacterial composition
<400> 1
Met Ala Lys Thr Gln Ala Glu Ile Asn Lys Arg Leu Asp Ala Tyr Ala
1 5 10 15
Lys Gly Thr Val Asp Ser Pro Tyr Arg Ile Lys Lys Ala Thr Ser Tyr
20 25 30
Asp Pro Ser Phe Gly Val Met Glu Ala Gly Ala Ile Asp Ala Asp Gly
35 40 45
Tyr Tyr His Ala Gln Cys Gln Asp Leu Ile Thr Asp Tyr Val Leu Trp
50 55 60
Leu Thr Asp Asn Lys Val Arg Thr Trp Gly Asn Ala Lys Asp Gln Ile
65 70 75 80
Lys Gln Ser Tyr Gly Thr Gly Phe Lys Ile His Glu Asn Lys Pro Ser
85 90 95
Thr Val Pro Lys Lys Gly Trp Ile Ala Val Phe Thr Ser Gly Ser Tyr
100 105 110
Gln Gln Trp Gly His Ile Gly Ile Val Tyr Asp Gly Gly Asn Thr Ser
115 120 125
Thr Phe Thr Ile Leu Glu Gln Asn Trp Asn Gly Tyr Ala Asn Lys Lys
130 135 140
Pro Thr Lys Arg Val Asp Asn Tyr Tyr Gly Leu Thr His Phe Ile Glu
145 150 155 160
Ile Pro Val Lys Ala Gly Thr Thr Val Lys Lys Glu Thr Ala Lys Lys
165 170 175
Ser Ala Ser Lys Thr Pro Ala Pro Lys Lys Lys Ala Thr Leu Lys Val
180 185 190
Ser Lys Asn His Ile Asn Tyr Thr Met Asp Lys Arg Gly Lys Lys Pro
195 200 205
Glu Gly Met Val Ile His Asn Asp Ala Gly Arg Ser Ser Gly Gln Gln
210 215 220
Tyr Glu Asn Ser Leu Ala Asn Ala Gly Tyr Ala Arg Tyr Ala Asn Gly
225 230 235 240
Ile Ala His Tyr Tyr Gly Ser Glu Gly Tyr Val Trp Glu Ala Ile Asp
245 250 255
Ala Lys Asn Gln Ile Ala Trp His Thr Gly Asp Gly Thr Gly Ala Asn
260 265 270
Ser Gly Asn Phe Arg Phe Ala Gly Ile Glu Val Cys Gln Ser Met Ser
275 280 285
Ala Ser Asp Ala Gln Phe Leu Lys Asn Glu Gln Ala Val Phe Gln Phe
290 295 300
Thr Ala Glu Lys Phe Lys Glu Trp Gly Leu Thr Pro Asn Arg Lys Thr
305 310 315 320
Val Arg Leu His Met Glu Phe Val Pro Thr Ala Cys Pro His Arg Ser
325 330 335
Met Val Leu His Thr Gly Phe Asn Pro Val Thr Gln Gly Arg Pro Ser
340 345 350
Gln Ala Ile Met Asn Lys Leu Lys Asp Tyr Phe Ile Lys Gln Ile Lys
355 360 365
Asn Tyr Met Asp Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Val Val Lys Asp Gly
370 375 380
Lys Thr Ser Ser Ala Ser Thr Pro Ala Thr Arg Pro Val Thr Gly Ser
385 390 395 400
Trp Lys Lys Asn Gln Tyr Gly Thr Trp Tyr Lys Pro Glu Asn Ala Thr
405 410 415
Phe Val Asn Gly Asn Gln Pro Ile Val Thr Arg Ile Gly Ser Pro Phe
420 425 430
Leu Asn Ala Pro Val Gly Gly Asn Leu Pro Ala Gly Ala Thr Ile Val
435 440 445
Tyr Asp Glu Val Cys Ile Gln Ala Gly His Ile Trp Ile Gly Tyr Asn
450 455 460
Ala Tyr Asn Gly Asn Arg Val Tyr Cys Pro Val Arg Thr Cys Gln Gly
465 470 475 480
Val Pro Pro Asn His Ile Pro Gly Val Ala Trp Gly Val Phe Lys
485 490 495
<210> 2
<211> 494
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> antibacterial composition
<400> 2
Ala Lys Thr Gln Ala Glu Ile Asn Lys Arg Leu Asp Ala Tyr Ala Lys
1 5 10 15
Gly Thr Val Asp Ser Pro Tyr Arg Ile Lys Lys Ala Thr Ser Tyr Asp
20 25 30
Pro Ser Phe Gly Val Met Glu Ala Gly Ala Ile Asp Ala Asp Gly Tyr
35 40 45
Tyr His Ala Gln Cys Gln Asp Leu Ile Thr Asp Tyr Val Leu Trp Leu
50 55 60
Thr Asp Asn Lys Val Arg Thr Trp Gly Asn Ala Lys Asp Gln Ile Lys
65 70 75 80
Gln Ser Tyr Gly Thr Gly Phe Lys Ile His Glu Asn Lys Pro Ser Thr
85 90 95
Val Pro Lys Lys Gly Trp Ile Ala Val Phe Thr Ser Gly Ser Tyr Gln
100 105 110
Gln Trp Gly His Ile Gly Ile Val Tyr Asp Gly Gly Asn Thr Ser Thr
115 120 125
Phe Thr Ile Leu Glu Gln Asn Trp Asn Gly Tyr Ala Asn Lys Lys Pro
130 135 140
Thr Lys Arg Val Asp Asn Tyr Tyr Gly Leu Thr His Phe Ile Glu Ile
145 150 155 160
Pro Val Lys Ala Gly Thr Thr Val Lys Lys Glu Thr Ala Lys Lys Ser
165 170 175
Ala Ser Lys Thr Pro Ala Pro Lys Lys Lys Ala Thr Leu Lys Val Ser
180 185 190
Lys Asn His Ile Asn Tyr Thr Met Asp Lys Arg Gly Lys Lys Pro Glu
195 200 205
Gly Met Val Ile His Asn Asp Ala Gly Arg Ser Ser Gly Gln Gln Tyr
210 215 220
Glu Asn Ser Leu Ala Asn Ala Gly Tyr Ala Arg Tyr Ala Asn Gly Ile
225 230 235 240
Ala His Tyr Tyr Gly Ser Glu Gly Tyr Val Trp Glu Ala Ile Asp Ala
245 250 255
Lys Asn Gln Ile Ala Trp His Thr Gly Asp Gly Thr Gly Ala Asn Ser
260 265 270
Gly Asn Phe Arg Phe Ala Gly Ile Glu Val Cys Gln Ser Met Ser Ala
275 280 285
Ser Asp Ala Gln Phe Leu Lys Asn Glu Gln Ala Val Phe Gln Phe Thr
290 295 300
Ala Glu Lys Phe Lys Glu Trp Gly Leu Thr Pro Asn Arg Lys Thr Val
305 310 315 320
Arg Leu His Met Glu Phe Val Pro Thr Ala Cys Pro His Arg Ser Met
325 330 335
Val Leu His Thr Gly Phe Asn Pro Val Thr Gln Gly Arg Pro Ser Gln
340 345 350
Ala Ile Met Asn Lys Leu Lys Asp Tyr Phe Ile Lys Gln Ile Lys Asn
355 360 365
Tyr Met Asp Lys Gly Thr Ser Ser Ser Thr Val Val Lys Asp Gly Lys
370 375 380
Thr Ser Ser Ala Ser Thr Pro Ala Thr Arg Pro Val Thr Gly Ser Trp
385 390 395 400
Lys Lys Asn Gln Tyr Gly Thr Trp Tyr Lys Pro Glu Asn Ala Thr Phe
405 410 415
Val Asn Gly Asn Gln Pro Ile Val Thr Arg Ile Gly Ser Pro Phe Leu
420 425 430
Asn Ala Pro Val Gly Gly Asn Leu Pro Ala Gly Ala Thr Ile Val Tyr
435 440 445
Asp Glu Val Cys Ile Gln Ala Gly His Ile Trp Ile Gly Tyr Asn Ala
450 455 460
Tyr Asn Gly Asn Arg Val Tyr Cys Pro Val Arg Thr Cys Gln Gly Val
465 470 475 480
Pro Pro Asn His Ile Pro Gly Val Ala Trp Gly Val Phe Lys
485 490
<210> 3
<211> 1488
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> antibacterial composition
<400> 3
atggctaaga ctcaagcaga aataaataaa cgtttagacg cttatgcaaa aggtacagta 60
gacagtcctt atagaattaa aaaagctaca agctatgacc catcgtttgg tgtaatggaa 120
gcaggagcaa ttgacgcaga tggttactat catgcacagt gccaagactt aattactgat 180
tatgtattat ggttaacaga taataaagtt agaacttggg gtaatgctaa agaccaaatc 240
aaacaaagtt atggtactgg atttaaaata catgaaaata aaccttctac agtacctaaa 300
aaaggatgga ttgctgtatt tacatccggt agttatcagc aatggggtca cataggtatt 360
gtatatgatg gaggtaatac ttctacattt actattttag agcaaaactg gaacggttac 420
gctaataaaa aacctacaaa acgtgtagat aattattacg gattaactca ttttattgag 480
atacctgtaa aagcaggaac tactgttaaa aaagaaacag ctaagaaaag tgcaagtaaa 540
acacctgcac ctaaaaagaa agcaacacta aaagtttcta agaaccatat taactataca 600
atggataaac gtggtaagaa acctgaagga atggtaatac acaacgatgc aggtcgttct 660
tcagggcaac aatacgagaa ttcattagct aacgcaggtt atgctagata tgctaatggt 720
attgctcatt actatggctc tgaaggttat gtatgggaag caatagatgc taagaatcaa 780
attgcttggc acacaggaga tggaacagga gcaaactcag gtaactttag atttgcaggt 840
attgaagtct gtcaatcaat gagtgctagt gatgctcaat tccttaaaaa cgaacaagca 900
gtattccaat ttactgcaga gaaatttaaa gaatggggtc ttactcctaa tcgtaaaact 960
gtaagattgc atatggaatt tgttccaaca gcttgtcctc atcgttctat ggttcttcat 1020
acaggattta atccagtaac acaaggaaga ccatctcaag caataatgaa taaactaaaa 1080
gattatttca ttaaacaaat taaaaactac atggataaag gaacttcaag ttctacagta 1140
gttaaagacg gtaaaacaag tagcgcaagt acaccggcaa ctagaccagt aacaggctct 1200
tggaaaaaga accagtacgg aacttggtac aaaccggaaa atgcaacatt tgttaatggt 1260
aaccaaccta tagtaactag aataggttct ccattcttaa atgctccagt aggaggtaac 1320
ttaccggcag gagctacaat tgtatatgac gaagtttgta tccaagcagg tcacatttgg 1380
ataggttaca atgcttacaa tggtaacaga gtatattgcc ctgttagaac ttgtcaagga 1440
gttccaccta atcatatacc tggggttgcc tggggagtat tcaaatag 1488

Claims (14)

1.一种治疗葡萄球菌感染的方法，其包括：
向受试者施用有效量的抗菌组合物，所述抗菌组合物具有针对以下葡萄球菌属的至少一种或全部的宽的杀菌活性：阿尔莱葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、耳葡萄球菌、肉葡萄球菌、山羊葡萄球菌、产色葡萄球菌、科氏葡萄球菌、海豚葡萄球菌、表皮葡萄球菌、马胃葡萄球菌、鸡葡萄球菌、溶血葡萄球菌、人葡萄球菌、中间葡萄球菌、兊氏葡萄球菌、缓慢葡萄球菌、路邓葡萄球菌、蝇葡萄球菌、巴氏葡萄球菌、腐生性葡萄球菌、瓦氏葡萄球菌和木糖葡萄球菌，
其中所述抗菌组合物包括由如在SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列组成的第一抗菌蛋白和/或由如在SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列组成的第二抗菌蛋白。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述抗菌组合物包括15-35摩尔％的所述第一抗菌蛋白以及55-85摩尔％的所述第二抗菌蛋白。
3.如权利要求2所述的方法，其中所述抗菌组合物包括25摩尔％的所述第一抗菌蛋白以及75摩尔％的所述第二抗菌蛋白。
4.如权利要求1所述的方法，其中所述葡萄球菌感染是皮肤感染、软组织感染、中毒性休兊综合征、暴发性紫癜、心内膜炎、骨髓炎、肺炎、假体装置相兲的感染或尿道感染。
5.如权利要求4所述的方法，其中所述皮肤感染是毛囊炎、疖、脓疱病、伤口感染或烫伤皮肤综合征。
6.如权利要求4所述的方法，其中所述软组织感染是化脓性肌炎、败血性滑囊炎或败血性兲节炎。
7.如权利要求4所述的方法，其中所述假体装置是假体兲节和心脏瓣膜、血管分流器、移植物或导管。
8.一种抗菌蛋白，其由如在SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列组成，其中所述抗菌蛋白具有针对以下葡萄球菌属中的至少一种或全部的宽的杀菌活性：阿尔莱葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、耳葡萄球菌、肉葡萄球菌、山羊葡萄球菌、产色葡萄球菌、科氏葡萄球菌、海豚葡萄球菌、表皮葡萄球菌、马胃葡萄球菌、鸡葡萄球菌、溶血葡萄球菌、人葡萄球菌、中间葡萄球菌、兊氏葡萄球菌、缓慢葡萄球菌、路邓葡萄球菌、蝇葡萄球菌、巴氏葡萄球菌、腐生性葡萄球菌、瓦氏葡萄球菌和木糖葡萄球菌。
9.一种用于治疗葡萄球菌感染的药物组合物，其包含权利要求8所述的抗菌蛋白作为活性成分。
10.一种抗菌蛋白，其由如在SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列组成，其中所述抗菌蛋白具有针对以下葡萄球菌属中的至少一种或全部的宽的杀菌活性：阿尔莱葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、耳葡萄球菌、肉葡萄球菌、山羊葡萄球菌、产色葡萄球菌、科氏葡萄球菌、海豚葡萄球菌、表皮葡萄球菌、马胃葡萄球菌、鸡葡萄球菌、溶血葡萄球菌、人葡萄球菌、中间葡萄球菌、兊氏葡萄球菌、缓慢葡萄球菌、路邓葡萄球菌、蝇葡萄球菌、巴氏葡萄球菌、腐生性葡萄球菌、瓦氏葡萄球菌和木糖葡萄球菌。
11.一种用于治疗葡萄球菌感染的药物组合物，其包含权利要求10所述的抗菌蛋白作为活性成分。
12.一种抗菌组合物，其包含由如在SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列组成的第一抗菌蛋白和由如在SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列组成的第二抗菌蛋白，
其中所述抗菌组合物具有针对以下葡萄球菌属的至少一种或全部的宽的杀菌活性：阿尔莱葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、耳葡萄球菌、肉葡萄球菌、山羊葡萄球菌、产色葡萄球菌、科氏葡萄球菌、海豚葡萄球菌、表皮葡萄球菌、马胃葡萄球菌、鸡葡萄球菌、溶血葡萄球菌、人葡萄球菌、中间葡萄球菌、兊氏葡萄球菌、缓慢葡萄球菌、路邓葡萄球菌、蝇葡萄球菌、巴氏葡萄球菌、腐生性葡萄球菌、瓦氏葡萄球菌和木糖葡萄球菌。
13.如权利要求12所述的方法，其中所述抗菌组合物包括15-35摩尔％的所述第一抗菌蛋白以及55-85摩尔％的所述第二抗菌蛋白。
14.如权利要求13所述的方法，其中所述抗菌组合物包括25摩尔％的所述第一抗菌蛋白以及75摩尔％的所述第二抗菌蛋白。
CN201780006444.8A 2016-01-12 2017-01-09 抗菌组合物和用抗菌组合物治疗葡萄球菌感染的方法 Active CN109414478B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201662277506P 2016-01-12 2016-01-12
US62/277,506 2016-01-12
PCT/IB2017/050087 WO2017122111A1 (en) 2016-01-12 2017-01-09 An antibacterial composition and a method of treating staphylococcal infections with the antibacterial composition

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109414478A true CN109414478A (zh) 2019-03-01
CN109414478B CN109414478B (zh) 2022-08-23

Family

ID=59310874

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201780006444.8A Active CN109414478B (zh) 2016-01-12 2017-01-09 抗菌组合物和用抗菌组合物治疗葡萄球菌感染的方法

Country Status (13)

Country Link
US (1) US11229677B2 (zh)
EP (1) EP3402506A4 (zh)
JP (1) JP7085483B2 (zh)
CN (1) CN109414478B (zh)
AU (1) AU2017208114B2 (zh)
BR (1) BR112018014175A2 (zh)
CA (1) CA3010564C (zh)
MX (1) MX2018008545A (zh)
RU (2) RU2707738C1 (zh)
SG (1) SG11201811479RA (zh)
UA (1) UA126022C2 (zh)
WO (1) WO2017122111A1 (zh)
ZA (1) ZA201804013B (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110734474A (zh) * 2019-11-29 2020-01-31 中山大学 一种抗菌肽的筛选方法及其应用
CN111235119A (zh) * 2020-03-05 2020-06-05 苏州十一方生物科技有限公司 一种融合抗菌蛋白的制备及应用

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112402591B (zh) * 2020-11-23 2022-12-16 中国农业科学院饲料研究所 防御素dlp4在治疗仔猪渗出性皮炎中的应用
KR20240015753A (ko) * 2022-07-26 2024-02-06 주식회사 인트론바이오테크놀로지 황색포도알균을 포함한 포도알균에 대하여 강력한 용균 활성을 갖는 항균단백질

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008001342A1 (en) * 2006-06-29 2008-01-03 Teagasc, The Agriculture And Food Development Authority Recombinant staphylococcal phage lysin as an antibacterial agent
US8232370B2 (en) * 2006-08-04 2012-07-31 Intron Biotechnology, Inc. Antimicrobial protein specific to Staphylococcus aureus
US20150224179A1 (en) * 2012-05-29 2015-08-13 Itron Biotechnology, Inc. Composition capable of improving stability of bacteriophage lysin proteins

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1151842C (zh) 1995-07-27 2004-06-02 基因技术股份有限公司 稳定等渗的冻干蛋白制剂
KR100910961B1 (ko) 2007-09-13 2009-08-05 주식회사 인트론바이오테크놀로지 황색포도상구균의 균막 처치에 효과적인 박테리오파지 또는그것 유래의 용균단백질
KR101016918B1 (ko) 2009-01-08 2011-02-25 주식회사 인트론바이오테크놀로지 박테리아 특이적 넓은 항균 활성을 갖는 신규한 리신 단백질
US8043613B2 (en) * 2009-02-12 2011-10-25 Intron Biotechnology, Inc. Podoviriedae bacteriophage having killing activity specific to Staphylococcus aureus
JP7085482B2 (ja) * 2016-01-12 2022-06-16 イントロン バイオテクノロジー，インコーポレイテッド スタフィロコッカス感染症のための凍結乾燥製剤を製造する方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008001342A1 (en) * 2006-06-29 2008-01-03 Teagasc, The Agriculture And Food Development Authority Recombinant staphylococcal phage lysin as an antibacterial agent
US8232370B2 (en) * 2006-08-04 2012-07-31 Intron Biotechnology, Inc. Antimicrobial protein specific to Staphylococcus aureus
US20150224179A1 (en) * 2012-05-29 2015-08-13 Itron Biotechnology, Inc. Composition capable of improving stability of bacteriophage lysin proteins

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
YOU-DI LIAO ET AL.: "Removal of N-terminal methionine from recombinant proteins by engineered E. coli methionine aminopeptidase", 《PROTEIN SCI》 *
布日额主编: "《乳源性致病菌研究》", 31 December 2013, 黑龙江大学出版社 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110734474A (zh) * 2019-11-29 2020-01-31 中山大学 一种抗菌肽的筛选方法及其应用
CN110734474B (zh) * 2019-11-29 2021-10-19 中山大学 一种抗菌肽的筛选方法及其应用
CN111235119A (zh) * 2020-03-05 2020-06-05 苏州十一方生物科技有限公司 一种融合抗菌蛋白的制备及应用

Also Published As

Publication number Publication date
CA3010564A1 (en) 2017-07-20
US11229677B2 (en) 2022-01-25
UA126022C2 (uk) 2022-08-03
AU2017208114B2 (en) 2023-04-13
CA3010564C (en) 2024-01-30
WO2017122111A1 (en) 2017-07-20
US20190282657A1 (en) 2019-09-19
MX2018008545A (es) 2018-12-19
RU2729934C2 (ru) 2020-08-13
AU2017208114A1 (en) 2018-07-26
JP7085483B2 (ja) 2022-06-16
CN109414478B (zh) 2022-08-23
EP3402506A1 (en) 2018-11-21
KR20180114010A (ko) 2018-10-17
RU2019136978A3 (zh) 2020-04-02
SG11201811479RA (en) 2019-01-30
ZA201804013B (en) 2019-07-31
EP3402506A4 (en) 2019-09-04
RU2019136978A (ru) 2019-12-19
RU2707738C1 (ru) 2019-11-29
BR112018014175A2 (pt) 2018-12-26
JP2019503379A (ja) 2019-02-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
O’Neill et al. Identification of a human skin commensal bacterium that selectively kills Cutibacterium acnes
CA2297083C (en) Pharmaceutical compositions containing lysostaphin alone or in combination with an antibiotic for the treatment of staphylococcal infections
CN109414478A (zh) 抗菌组合物和用抗菌组合物治疗葡萄球菌感染的方法
CN107735098A (zh) 抗微生物疗法
US20180104316A1 (en) Broad Spectrum of Streptococcus Lyase and Use Thereof
KR101957266B1 (ko) 엔테로코쿠스 패슘에 대하여 용균력을 가지는 신규한 항균단백질 efal-2
CN106413725A (zh) 大肠埃希氏杆菌感染的噬菌体疗法
CN107022539B (zh) 一种链球菌广谱嵌合裂解酶GBS-V12b及其编码基因和应用
Kokai-Kun 10 Lysostaphin: a silver bullet for staph
Rahimzadeh et al. Endolysins of bacteriophages as an anti-methicillin resistant staphylococcus aureus infection in children: A narrative review
CN108463215A (zh) 抗菌蛋白的冷冻干燥制剂
CN100485038C (zh) 小型化抗耐药金黄色葡萄球菌多肽及其应用与制备方法
CN107835691A (zh) 抵抗碳青霉烯耐药性阴性细菌的含有作为活性成分的adk蛋白的抗菌组合物
KR102097127B1 (ko) 황색포도상구균 유래 바이오필름 제거에 효과적인 박테리오파지 CSA13 및 그 유래의 엔도라이신 LysCSA13
KR102044421B1 (ko) 탄저균 특이적 용균능을 갖는 항균 단백질의 안정한 보관을 위한 동결건조 제형 및 이의 제조방법
Johnson et al. Development of an antibody fused with an antimicrobial peptide targeting Pseudomonas aeruginosa: A new approach to prevent and treat bacterial infections
KR101765393B1 (ko) 탄저균 특이 용균 단백질 b4의 제조 방법 및 탄저균에 의해 유발되는 질환의 치료 방법
EP4262843A1 (en) Antimicrobial protein, antimicrobial recombinant protein with lytic properties, expression vector, method of their preparation and use
Johnson et al. Development of an antibody fused with an antimicrobial peptide targeting Pseudomonas aeruginosa: A new approach to prevent and treat bacterial infections
CN107827957B (zh) 抗临床多重耐药菌小肽
KR20170052946A (ko) 탄저균 특이 용균 단백질 ap50-31의 제조 방법 및 탄저균에 의해 유발되는 질환의 치료 방법
KR20170040879A (ko) 바실러스 균종 특이적 용균 활성을 갖는 신규한 항균 단백질 ｂｐｓ13
EP3328412B1 (en) Antimicrobial peptide for nosocomial infections
KR102669340B1 (ko) 항균 조성물 및 항균 조성물로 스태필로코커스 감염들을 치료하는 방법
TWI522110B (zh) Novel antimicrobial peptides and their use

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant