UA126022C2 - Антибактеріальна композиція й спосіб лікування стафілококових інфекцій антибактеріальною композицією - Google Patents
Антибактеріальна композиція й спосіб лікування стафілококових інфекцій антибактеріальною композицією Download PDFInfo
- Publication number
- UA126022C2 UA126022C2 UAA201813040A UAA201813040A UA126022C2 UA 126022 C2 UA126022 C2 UA 126022C2 UA A201813040 A UAA201813040 A UA A201813040A UA A201813040 A UAA201813040 A UA A201813040A UA 126022 C2 UA126022 C2 UA 126022C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- test
- antibacterial
- infections
- turbidity
- bacterial
- Prior art date
Links
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 title claims abstract description 152
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 56
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 17
- 206010041925 Staphylococcal infections Diseases 0.000 title claims description 27
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 73
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 71
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 30
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 29
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 72
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 44
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 34
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 28
- 241000295644 Staphylococcaceae Species 0.000 claims description 11
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 10
- 206010062255 Soft tissue infection Diseases 0.000 claims description 7
- 206010040872 skin infection Diseases 0.000 claims description 7
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 6
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 6
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims description 5
- 206010014665 endocarditis Diseases 0.000 claims description 5
- 208000019206 urinary tract infection Diseases 0.000 claims description 5
- 206010053555 Arthritis bacterial Diseases 0.000 claims description 4
- 206010061022 Bursitis infective Diseases 0.000 claims description 4
- 206010016936 Folliculitis Diseases 0.000 claims description 4
- 206010021531 Impetigo Diseases 0.000 claims description 4
- 208000004575 Infectious Arthritis Diseases 0.000 claims description 4
- 206010031252 Osteomyelitis Diseases 0.000 claims description 4
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 claims description 4
- 201000001177 Pyomyositis Diseases 0.000 claims description 4
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 claims description 4
- 206010042033 Stevens-Johnson syndrome Diseases 0.000 claims description 4
- 206010044223 Toxic epidermal necrolysis Diseases 0.000 claims description 4
- 231100000087 Toxic epidermal necrolysis Toxicity 0.000 claims description 4
- 206010044248 Toxic shock syndrome Diseases 0.000 claims description 4
- 231100000650 Toxic shock syndrome Toxicity 0.000 claims description 4
- 206010048038 Wound infection Diseases 0.000 claims description 4
- 210000003709 heart valve Anatomy 0.000 claims description 4
- 201000001223 septic arthritis Diseases 0.000 claims description 4
- 206010052664 Vascular shunt Diseases 0.000 claims description 3
- 201000005380 purpura fulminans Diseases 0.000 claims description 3
- 101100123850 Caenorhabditis elegans her-1 gene Proteins 0.000 claims description 2
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims description 2
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 claims description 2
- 239000007789 gas Substances 0.000 claims 4
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 claims 1
- 244000089409 Erythrina poeppigiana Species 0.000 claims 1
- 241001547860 Gaya Species 0.000 claims 1
- 235000009776 Rathbunia alamosensis Nutrition 0.000 claims 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 claims 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 claims 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 claims 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 claims 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 abstract 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 64
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 34
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 21
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 19
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 15
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 12
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 10
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 10
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 9
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 9
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 9
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 7
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 7
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 7
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 7
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 6
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 6
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 5
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 5
- CTKXFMQHOOWWEB-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide/propylene oxide copolymer Chemical compound CCCOC(C)COCCO CTKXFMQHOOWWEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 4
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 4
- 229920001993 poloxamer 188 Polymers 0.000 description 4
- 229940044519 poloxamer 188 Drugs 0.000 description 4
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 201000000297 Erysipelas Diseases 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 206010034133 Pathogen resistance Diseases 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 3
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 3
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 201000004384 Alopecia Diseases 0.000 description 2
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 2
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 description 2
- ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N Erythromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)C[C@@](C)(O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 206010015995 Eyelid ptosis Diseases 0.000 description 2
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 2
- 206010035039 Piloerection Diseases 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 208000016063 arterial thoracic outlet syndrome Diseases 0.000 description 2
- 208000027697 autoimmune lymphoproliferative syndrome due to CTLA4 haploinsuffiency Diseases 0.000 description 2
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 210000000744 eyelid Anatomy 0.000 description 2
- 208000024963 hair loss Diseases 0.000 description 2
- 230000003676 hair loss Effects 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000006742 locomotor activity Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 230000005371 pilomotor reflex Effects 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 201000003004 ptosis Diseases 0.000 description 2
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 239000001974 tryptic soy broth Substances 0.000 description 2
- 239000006150 trypticase soy agar Substances 0.000 description 2
- 108010050327 trypticase-soy broth Proteins 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XHCNINMOALIGKM-UHFFFAOYSA-N 5,5,7,12,12,14-hexamethyl-1,4,8,11-tetrazacyclotetradecane Chemical compound CC1CC(C)(C)NCCNC(C)CC(C)(C)NCCN1 XHCNINMOALIGKM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000786798 Atya Species 0.000 description 1
- 244000075850 Avena orientalis Species 0.000 description 1
- 235000007319 Avena orientalis Nutrition 0.000 description 1
- 241001112696 Clostridia Species 0.000 description 1
- 244000241257 Cucumis melo Species 0.000 description 1
- 235000015510 Cucumis melo subsp melo Nutrition 0.000 description 1
- 235000017788 Cydonia oblonga Nutrition 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 description 1
- 206010015150 Erythema Diseases 0.000 description 1
- UOACKFBJUYNSLK-XRKIENNPSA-N Estradiol Cypionate Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H](C4=CC=C(O)C=C4CC3)CC[C@@]21C)C(=O)CCC1CCCC1 UOACKFBJUYNSLK-XRKIENNPSA-N 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 241000152447 Hades Species 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-IMJSIDKUSA-N L-1,4-dithiothreitol Chemical compound SC[C@H](O)[C@@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- UASDAHIAHBRZQV-YUMQZZPRSA-N Met-Arg Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N UASDAHIAHBRZQV-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N Muraminsaeure Natural products OC(=O)C(C)OC1C(N)C(O)OC(CO)C1O MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 108010013639 Peptidoglycan Proteins 0.000 description 1
- 206010037549 Purpura Diseases 0.000 description 1
- 241001672981 Purpura Species 0.000 description 1
- 241000124033 Salix Species 0.000 description 1
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 1
- 206010041349 Somnolence Diseases 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 235000013447 Xanthosoma atrovirens Nutrition 0.000 description 1
- 240000001781 Xanthosoma sagittifolium Species 0.000 description 1
- FJJCIZWZNKZHII-UHFFFAOYSA-N [4,6-bis(cyanoamino)-1,3,5-triazin-2-yl]cyanamide Chemical compound N#CNC1=NC(NC#N)=NC(NC#N)=N1 FJJCIZWZNKZHII-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000030961 allergic reaction Diseases 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000037358 bacterial metabolism Effects 0.000 description 1
- 230000001420 bacteriolytic effect Effects 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- -1 bo 5 g/l Substances 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 229960002227 clindamycin Drugs 0.000 description 1
- KDLRVYVGXIQJDK-AWPVFWJPSA-N clindamycin Chemical compound CN1C[C@H](CCC)C[C@H]1C(=O)N[C@H]([C@H](C)Cl)[C@@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](SC)O1 KDLRVYVGXIQJDK-AWPVFWJPSA-N 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 229960003276 erythromycin Drugs 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 125000001475 halogen functional group Chemical group 0.000 description 1
- 208000008025 hordeolum Diseases 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 244000144985 peep Species 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 1
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 229940021506 stye Drugs 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 1
- 238000001269 time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 229940035289 tobi Drugs 0.000 description 1
- NLVFBUXFDBBNBW-PBSUHMDJSA-N tobramycin Chemical compound N[C@@H]1C[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N NLVFBUXFDBBNBW-PBSUHMDJSA-N 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/162—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
- A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
- A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
- A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/08—Solutions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Винахід стосується антибактеріальної композиції для лікування стафілококових інфекцій, яка містить суміш 15-35 мол. % першого антибактеріального білка, що має амінокислотну послідовність, представлену в SEQ ID NO: 1, та 55-85 мол. % другого антибактеріального білка, що має амінокислотну послідовність, представлену в SEQ ID NO: 2, і де антибактеріальна композиція має широкий спектр бактерицидої активністі проти всіх з наступних видів Staphylococcus: Staphylococcus arlettae, Staphylococcus aureus, Staphylococcus auricularis, Staphylococcus carnosus, Staphylococcus carprae, Staphylococcus chromogenes, Staphylococcus cohnii, Staphylococcus delphini, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus equorum, Staphylococcus gallinarum, Staphylococcus haemolyticus, Staphylococcus hominis, Staphylococcus intermedius, Staphylococcus kloosii, Staphylococcus lentus, Staphylococcus lugdunensis, Staphylococcus muscae, Staphylococcus pasteuri, Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus warneri і Staphylococcus xylosus, де вказану суміш отримують за допомогою способу, що включає стадію культивування, на якій клітини, що індукуються, інкубують при температурі нижче 20 °C, без необхідності проведення стадії розщеплення.
Description
егарпуюсоссив: Єїарну!ососсиз апенає, єЄїарнусоссив ашйгеиз, єЄїарнуососсив апсшагів, егарнпуюсоссив сагтовзив, бїарнуіососсив сагргає, бїарпуососсив спготодепевз, Єїарнуососсив соНпії Єїарнуососсив аеїЇрніпі Єїарнуососсивз ерійегтійіх, бїарнпуососсиз /едиогит, оегарнпуюсоссиз дапнпагит, Єїарну!ососсивз Наетоуїсив, Єїарнуососсив Нпотіпів, єїарпуюсоссив іпіегптедіиз, єїарнусоссив Кіровії єЄбїарпусоссив Іепійбх, ЄїарнуІососсивз шдаийпепвів, егарпуюсоссиз тивсає, бїарнуососсив равіешгі, бїарнпуіососсив заргорнуйсив, єїарнуюсоссив ишатет і Єгарпуіососси5 хуюози5, де вказану суміш отримують за допомогою способу, що включає стадію культивування, на якій клітини, що індукуються, інкубують при температурі нижче 20 "С, без необхідності проведення стадії розщеплення. гарпуїосоєсих апіенсое
Штам: КСтТО ЗБ (АТО аЗ857І (А) (В)
Споттеєтнаїд о Тест на зниження мутності (0,5 мкг/мл) бактеріальному газоні х . | с у . | Ши ше пи
Бо ее Мене ання нн
Фіг.
Дана заявка витребовує пріоритет попередньої заявки США Мо 62/277,506, поданої 12 січня 2016 р., яка включена за допомогою посилання для всіх цілей як повністю викладена в даному документі.
ПОПЕРЕДНІЙ РІВЕНЬ ТЕХНІКИ
Область винаходу
Даний винахід відноситься до антибактеріальної композиції й до способу лікування стафілококових інфекцій антибактеріальною композицією.
Обговорення рівня техніки
Стафілококи являють собою рід грампозитивних бактерій і можуть викликати широкий ряд захворювань у людей і тварин або за допомогою продукції токсину, або за допомогою проникнення. Ступінь важкості захворювання, обумовленого стафілококами, може знаходитися в діапазоні від легкої, яка не потребує лікування, до важкої й потенційно несумісної з життям.
Більше 30 різних видів стафілококів можуть викликати інфекції в людей. Маніфестації стафілококових інфекцій зазвичай залежать від типу інфекції, викликаної в організмі. Типи інфекцій, що часто зустрічаються, включають наступні: шкірні інфекції (наприклад, фолікуліт, фурункули, імпетиго, ранові інфекції, токсичний епідермальний некроліз), інфекції м'яких тканин (наприклад, піоміозіт, септичний бурсит, септичний артрит) синдром токсичного шоку, блискавичну пурпуру, ендокардит, остеомієліт, пневмонію, інфекції, пов'язані з протезними пристроями (наприклад, протезами суглобів і серцевих клапанів, шунтами, трансплантатами, катетерами) і інфекцію сечовивідних шляхів. Особи з подавленою імунною системою (які приймають пригнічуючі імунітет лікарські препарати або які страждають імунодефіцитами) схильні до підвищеного ризику розвитку більш серйозних інфекцій.
Стафілококові інфекції зазвичай викликані Єїарпуіососсив ашцйгеиб5. Зростають випадки виникнення інфекцій, викликані іншими видами стафілококів. Наприклад, еїарпуіососсив варгорпуїїси5 відповідальний за аж до 10 95 неускладнених інфекцій сечовивідних шляхів у молодих жінок; їарнуіососсив 5сПіейегі, еїарнуососсив Ідсіпепбіз і еїарпуіососсив5
Ппаєтоїуїісиє пов'язані з ендокардитом нативного клапана. Коагулазонегативний стафілокок (Сом) виник як клінічно значимий патоген, що виявляється в понад 12 95 пацієнтів, госпіталізованих у стаціонар, і що є підозрюваним збудником, що складає аж до 30 95 частки випадків сепсису, пов'язаного з наданням медичної допомоги. Крім того, багато видів стафілококів резистентні до багатьох антибіотиків.
З урахуванням проблем, які викликані стафілококами, існує невідкладна потреба в розробці способу лікування стафілококових інфекцій, викликаних антибіотикочутливими (й антибіотикорезистентними видами стафілококів. Навіть незважаючи на те, що антибіотики дотепер є основними терапевтичними агентами для лікування таких стафілококових інфекцій, лікування, засноване на антибіотиках, характеризується серйозними проблемами, такими як знижений результат лікування. Тому для підвищення ефективності лікування стафілококових інфекцій існує невідкладна потреба в новому ефективному альтернативному терапевтичному агенті.
Недавно увагу авторів винаходу привернуло застосування ендолізинів у якості нового шляху лікування бактеріальних інфекцій. Ендолізини фагів, також відомі як фагові лізині або лізини, являють собою ферменти, які кодуються бактеріофагом, що розщеплюють пептидоглікан, які швидко руйнують клітинну стінку бактерій і вивільняють потомство фага. У патенті США Мо 8,232,370 описаний антибактеріальний білок, який має широкий спектр бактерицидної активності, специфічної до тарпуіососсив ашйгеийв.
Крім того, широко описано, що ендолізини мають видоспецифічну бактерицидну активність.
Наприклад, у публікації Ешите МістобріоІї. 2012 Осіорег; 7(10): 1147-1171, с. 1148, описано, що "важлива перевага ендолізинів перед класичними антибіотиками полягає в їхній високій специфічності до певних типів РО (пептидогліканівї що, як правило, обмежує їхню антибактеріальну дію представниками певного роду, виду або навіть серотипу бактерій". У публікації Арріїед апа Епмігоптепіа! Місторіоіоду, Маг. 2009, р, 1388-1394, на сторінках 1388- 1389 описано, що «рІлізини бактеріофагів не тільки спричиняють летальну дію під час відсутності бактеріофага (викликають лізис із нічого), але також проявляють специфічність до бактеріального хазяїна, часто до конкретного роду, виду або навіть підвиду залежно від лізину".
В Арріїєд апа Емігоптепіа! Містгоріоіоду, Мом. 2002, р. 5311-5317, на сторінці 5311 описано, що "48 досліджуваних штамів С.репгіпдепе були чутливі до муреїнгідролази (подвійної системи лізису бактеріофага Ф36261|, при цьому інші клостридії й бактерії, які належать до інших родів, як правило, не зазнавали впливу".
Таким чином, існує потреба в розробці антибактеріальних білків, які мають антибактеріальну активність, специфічну для більше одного виду стафілококів, і можна було, таким чином, лікувати інфекції, викликані множинними видами стафілококів.
КОРОТКИЙ ВИКЛАД СУТНОСТІ ВИНАХОДУ
У даному винаході запропонований спосіб лікування стафілококових інфекцій. Цей спосіб включає введення суб'єкту ефективної кількості антибактеріальної композиції, яка має широку антибактеріальну активність проти щонайменше одного або всіх з наступних видів еіарпуососсив: еїарпуіососсив агпєнав5, 5іарпуіососсив ашгеив5, 5іарпуїюсоссив ашгісціагів, еарнуіососсив сагтовзив, 5Зіарпуіососси5 сагргає, біарпуіососсив спгтогподепе5, єгарнуіососсив соНпії, еїарнуіососсив аеїрпіпі, еФарнуіососсив ерідептідії, еФарнуіососсив / єдиогит, еарнуіососсив даїйпагпт, єтарпуіососсив Наєтоїуїсив, єїарнуіососсив потіпів, Єбарпуіососсив іпіептеадіиє, ебФарнуіососсив Кіоозії, еіарпуіососсив Іепіи5, еїарнуіососсив | Індайпепвів, еарпуіососсив тивсає, еїарпуіососси5 равзівцшгі, еїарпуіососси5 заргорНуїїсив, єбарпуіососсив магтегі і еФарнуососсив хуобзиє. Антибактеріальна композиція містить у собі перший антибактеріальний білок, який складається з амінокислотної послідовності, представленої в
ЗЕБЕО І МО: 1, і/або другий антибактеріальний білок, який складається з амінокислотної послідовності, представленої в 5ЕО ІЮ МО: 2.
В одному аспекті винаходу антибактеріальна композиція містить у собі 15-35 мол. 95 першого антибактеріального білка й 55-85 мол. 95 другого антибактеріального білка.
В іншому аспекті винаходу антибактеріальна композиція містить у собі 25 мол. 95 першого антибактеріального білка й 75 мол, 95 другого антибактеріального білка.
В іншому аспекті винаходу стафілококові інфекції являють собою шкірні інфекції, інфекції м'яких тканин, синдром токсичного шоку, блискавичну пурпуру, ендокардит, остеомієліт, пневмонію, інфекції, пов'язані з протезними пристроями або інфекції сечовивідних шляхів.
В іншому аспекті винаходу шкірні інфекції являють собою фолікуліт, фурункули, імпетиго, ранові інфекції або синдром токсичного епідермального некролізу.
В іншому аспекті винаходу інфекції м'яких тканин являють собою піоміозіт, септичний бурсит або септичний артрит.
В іншому аспекті винаходу протезні пристрої являють собою протези суглобів і серцевих клапанів, судинні шунти, трансплантати або катетери.
У даному винаході запропонований антибактеріальний білок, який складається з амінокислотної послідовності, представленої в 5ЕО ІЮ МО: 1. Антибактеріальний білок, який має широкий спектр бактерицидної активності проти щонайменше одного або всіх з наступних видів біарпуіососсив: Єтарпуіососсив5 апейає, 5іарпуіососсив айгейв, Єїарпуіососсив ашйгісціагів, еарпуіососсив сатовзив, єїарпуіососсив сагргає, іарнуіососсив спготодепез, 5іарпуіососсив соНпії, еїарнуіососсив авїрпіпі, еФарнуіососсив / ерідептідіє. еФарнуіососсив / єдиогит, еарнуіососсив даїїїпагпит. єїарпнуіососсив Наєтоїуїісив, єтарпуіососсив Нпотіпів, Єбарпуіососсив іпіегтпедіиє, еїарнуіососсив Кіоові, ебарнуососсив Іепій5, еїарнуососсиб5 Індайпепвів, еарпуіососсив тивсає, еїарпуіососси5 равзівцшгі, еїарпуіососси5 заргорНуїїсив, єбарпуіососсив матеїі і бїарнуіососсив хуіо5ив.
В одному аспекті винаходу фармацевтична композиція для лікування стафілококових інфекцій містить у собі антибактеріальний білок як активний інгредієнт.
У даному винаході запропонований антибактеріальний білок, який складається з амінокислотної послідовності, представленої в ЕС ІО МО: 2. Цей антибактеріальний білок має широкий спектр бактерицидної активності проти щонайменше одного або всіх з наступних видів еарпуіососсив: ебарнуососсивз апенає, єїарпуіососси5 ашгеив. еїарнуіососсив ашгісшагів, еарпуіососсив сатовзив, єїарпуіососсив сагргає, іарнуіососсив спготодепез, 5іарпуіососсив соНпії, еїарнуіососсив авїрпіпі, еФарнуіососсив ерідептідії, еФарнуіососсив / єдиогит, еарнуіососсив даїїїпагпт, еїарпуіососсив Наєтоїуїісив, єтарпуіососсив потіпів. Єбарпуіососсив іпіептеадіиє, ебФарнуіососсив Кіоозії, еіарпуіососсив Іепіи5, еїарнуіососсив | Індайпепвів, еарпуіососсив тивсає, еїарпуіососси5 равзівцшгі, еїарпуіососси5 заргорНуїїсив, єбарпуіососсив жмагпеті і гарнуіососсив хуіовив.
В одному аспекті винаходу фармацевтична композиція для лікування стафілококових інфекцій містить у собі антибактеріальний білок як активний інгредієнт.
У даному винаході запропонована антибактеріальна композиція, яка включає в себе перший антибактеріальний білок. який складається з амінокислотної послідовності, представленої в
ЗЕБЕО ІО МО: 1. ії другий антибактеріальний білок, який складається з амінокислотної послідовності, представленої в 5ЕО ІЮО МО: 2. Антибактеріальна композиція має широкий спектр бактерицидної активності проти щонайменше одного або всіх з наступних видів Єіарпуіососсив: 60 еарпуососсив апейає, 5іарпуіососсив ашгєив, еїарпуіососси5 айпсшціагйв, еФарнуіососсив сатовзив, іарпуіососсив сагргає, еїарпуїососси5 спготодепев, біарнуіососсив -сопгпії, еарнуіососсив авеїрніпі, єФгарнуіососсив ерідептідіє, єФгарпуососсив едиогит, єбФарнуіососсив дайпагит, еєбФарнуіососсив Наєтоїуїїсив, ебїарнуіососсив Нотіпіє5, єарнуіососси5 іпіептеєаісив5, еарпуіососсив Кіоовії, еїарнуіососсив5 Іепійб, еїарнуіососсив Іпдайпепвів, 5іарнуіососсив тивсає, еїарпуіососси5 разівші, еїтарпуіососси5 заргорНуїіси5, еїарнуіососсив уагеїї і «еарнуіососсив хуіовив5.
В одному аспекті винаходу антибактеріальна композиція містить у собі 15-35 мол. 95 першого антибактеріального білка й 55-85 мол. 95 другого антибактеріального білка.
В іншому аспекті винаходу антибактеріальна композиція містить у собі 25 мол. 95 першого антибактеріального білка й 75 мол. 95 другого антибактеріального білка.
Слід розуміти, що й наведений вище загальний опис, і наступний докладний опис носить ілюстративний і пояснювальний характер і призначений для забезпечення додаткового пояснення заявленого винаходу.
КОРОТКИЙ ОПИС ГРАФІЧНИХ МАТЕРІАЛІВ
Супровідні графічні матеріали включені для забезпечення кращого розуміння винаходу, включені в даний опис і складають його частину, ілюструють варіанти здійснення винаходу й разом з описом слугують для пояснення принципів винаходу.
У цих графічних матеріалах:
На Фіг. 1 показаний результат, який демонструє ефективну бактерицидну активність проти еарпуіососсив апенає. (А) спот-тест на бактеріальному газоні й (В) тест на зниження мутності.
На Фіг. 2 показаний результат, який демонструє ефективну бактерицидну активність проти еарнуіососсив айгеив5. (А) спот-тест на бактеріальному газоні й (В) тест на зниження мутності.
На Фіг. 3 показаний результат, який демонструє ефективну бактерицидну активність проти еарпуіососсив айпсиціагв. (А) спот-тест на бактеріальному газоні й (В) тест на зниження мутності.
На Фіг. 4 показаний результат, який демонструє ефективну бактерицидну активність проти еарнуіососсив сатозив. (А) спот-тест на бактеріальному газоні й (В) тест на зниження мутності.
На Фіг. 5 показаний результат, який демонструє ефективну бактерицидну активність проти еарнуіососсиз сагргає. (А) спот-тест на бактеріальному газоні й (В) тест на зниження мутності.
Зо На Фіг. 6 показаний результат, який демонструє ефективну бактерицидну активність проти еарпуіососсив спготодепев. (А) спот-тест на бактеріальному газоні й (В) тест на зниження мутності.
На Фіг. 7 показаний результат, який демонструє ефективну бактерицидну активність проти «арнуіососсив соппії. (А) спот-тест на бактеріальному газоні й (В) тест на зниження мутності.
На Фіг. 8 показаний результат, який демонструє ефективну бактерицидну активність проти еарнуіососсиз авірнпіпі. (А) спот-тест на бактеріальному газоні й (В) тест на зниження мутності.
На Фіг. 9 показаний результат, який демонструє ефективну бактерицидну активність проти еарнуіососсив ерідептідібє. (А) спот-тест на бактеріальному газоні й (В) тест на зниження мутності.
На Фіг. 10 показаний результат, який демонструє ефективну бактерицидну активність проти еарпуіососсив едпогит. (А) спот-тест на бактеріальному газоні й (В) тест на зниження мутності.
На Фіг. 11 показаний результат, який демонструє ефективну бактерицидну активність проти еарпуіососсив даїйпагит, (А) спот-тест на бактеріальному газоні й (В) тест на зниження мутності.
На Фіг. 12 показаний результат, який демонструє ефективну бактерицидну активність проти еарпуіососсив Наетоїуїісив. (А) спот-тест на бактеріальному газоні й (В) тест на зниження мутності.
На Фіг. 13 показаний результат, який демонструє ефективну бактерицидну активність проти еарнуіососсив ротіпів. (А) спот-тест на бактеріальному газоні й (В) тест на зниження мутності.
На Фіг. 14 показаний результат, який демонструє ефективну бактерицидну активність проти еарпуіососсив іпіептедіиє, (А) спот-тест на бактеріальному газоні й (В) тест на зниження мутності.
На Фіг. 15 показаний результат, який демонструє ефективну бактерицидну активність проти еарнуіососсивз Кіоозвії, (А) спот-тест на бактеріальному газоні й (В) тест на зниження мутності,
На Фіг. 16 показаний результат, який що демонструє ефективну бактерицидну активність проти Єбарпуіососсив Іепій5. (А) спот-тест на бактеріальному газоні й (В) тест на зниження мутності.
На Фіг. 17 показаний результат, який демонструє ефективну бактерицидну активність проти еарпуіососсив Ішдапепвіз. (А) спот-тест на бактеріальному газоні й (В) тест на зниження бо мутності.
На Фіг. 18 показаний результат, який демонструє ефективну бактерицидну активність проти «арнуіососсизв гпизсає. (А) спот-тест на бактеріальному газоні й (В) тест на зниження мутності.
На Фіг. 19 показаний результат, який демонструє ефективну бактерицидну активність проти еарнуіососсизв равзієйгі. (А) спот-тєст на бактеріальному газоні й (В) тест на зниження мутності.
На Фіг, 20 показаний результат, який демонструє ефективну бактерицидну активність проти еарпуіососсив заргорпуїісив, (А) спот-тест на бактеріальному газоні й (В) тест на зниження мутності.
На Фіг. 21 показаний результат, який демонструє ефективну бактерицидну активність проти еарнуіососсив уатегі. (А) спот-тест на бактеріальному газоні й (В) тест на зниження мутності.
На Фіг. 22 показаний результат, який демонструє ефективну бактерицидну активність проти еарнуіососсив хуіозив5. (А) спот-тест на бактеріальному газоні й (В) тест на зниження мутності
ДОКЛАДНИЙ ОПИС ІЛЮСТРОВАНИХ ВАРІАНТІВ ЗДІЙСНЕННЯ ВИНАХОДУ
Далі наведений докладний опис варіантів здійснення винаходу з посиланням на ілюстративні приклади й супровідні графічні матеріали.
При використанні у даному документі "ефективна кількість" означає кількість композиції (у міру застосування), достатню для статистично значимої індукції позитивного ефекту (наприклад, поліпшення стану при шкірних інфекціях, інфекціях м'яких тканин і т.д.). але достатню низьку, щоб уникнути серйозних побічних ефектів (наприклад, невиправданої токсичності або алергійної реакції). "Цонайменше один з наступних видів єїарпуіососсив" означає будь-який один, будь-які два, три, чотири, п'ять, шість... аж до двадцяти двох видів еарнуіососсив, вибраних із групи, яка складається з біарпуіососсив апенає, 5іарпуіососсив ацгеив, ебарнуіососсив ацгісшагтіх, ебїарнпуіюососсив сагттозив, їарпуіососси5 сагргає, еарпуососсив спготодепев5, еїарнуіососсив соппії, єбарнуіососсив аеїрнНіпі, еіарпуіососсив ерідептідіє, єтарпуїососси5 еєдиогит, єЄбФарнуіососсив даїйпагит, єЄбарнуіососсив Наєтоїуїїсив, еарнуіососсив потіпів, барнуіососсиз іпіегтпедіи5, тарпуіососсив Кіоовії, Узарпуіососсиз Іепіцв, еарпуіососсив Ішдапепві5, еїарпуіососсив тивзсає, біарпуіососсив равієцгі, єЄФарпуіососсив заргторнуїісив, бїарпуіососсив улагпеті і Єтарпуіососсив хуіозив.
Антибактеріальна композиція має бактерицидну активність проти різних штамів еарпуососсиз і селективно індукує бактеріоліз різних штамів Єіарпуіососсив і містить як
Зо активний інгредієнт один або більше антибактеріальних білків, які мають широкий спектр бактерицидної активності (літичної активності) проти різних штамів 5іарнуіососсив.
Антибактеріальні білки, які мають широкий спектр бактерицидної активності (літичної активності) проти різних штамів еїарпуіососси5: мають амінокислотні послідовності, представлені ЕО ІЮО МО: 1 ї 5ЕО ІО МО: 2. Антибактеріальний білок, який має амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 2, вважають посттрансляційною модифікованою формою (тобто з делетильованим кодоном-ініціатором метіоніну) антибактеріального білка, який має амінокислотну послідовність ЕС ІО МО: 1.
Вважають, що тривимірна структура, біологічна активність і стабільність можуть різнитися між молекулами з метіоніном і без метіоніну на аміно-кінці, хоча ці молекули, однак, в іншому являють собою той самий білок. Також вважають, що приєднання метіоніну на аміно-кінці може викликати підвищення антигенності білка. Тому при промисловому застосуванні важливо встановити відносно простий і ефективний спосіб селективного видалення такого аміно- кінцевого метіоніну.
У способах вирішення цієї проблеми у попередньому рівні техніки був запропонований спосіб, за допомогою якого метіонін можна було вилучити шляхом розщеплення ціаногенбромідом (ВгСМ); однак задовільного результату не одержали, оскільки цей процес не тільки припускає відсутність інших залишків метіоніну а молекулі цільового зрілого білка, але також піддає білок сильнодіючої хімічної реакції.
Перевага антибактеріальної композиції за даним винаходом полягає в тому, що вона має посттрансляційно модифіковану форму (тобто з делетильованим кодоном-ініціатором метіоніну) антибактеріального білка без необхідності в стадії розщеплення. Не бажаючи обмежуватися будь-якою конкретною теорією, що пояснює, чому антибактеріальна композиція має широкий спектр бактерицидної активності проти певних видів єїарпуіососси5, вважають, що антибактеріальний білок, який має амінокислотну послідовність ЕС ІЮО МО: 2 (посттрансляційно модифікована форма), вносить вклад у широкий спектр бактерицидної активності проти певних видів тарпуіососсив.
Антибактеріальні білюи за даним винаходом також містять у собі їх варіанти, які мають щонайменше 8095, 8595, 9095, 9595, 99595 або 99,595 ідентичність амінокислотної послідовності 5ЕО ІО МО: 1 або 5ЕО ІО МО: 2. Ідентичність амінокислотної послідовності бо визначають у даному документі як процентний вміст у послідовності-кандидаті амінокислотних залишків, ідентичних амінокислотним залишкам у послідовності антибактеріального білка, після вирівнювання послідовності в одній і тій же рамці зчитування й при необхідності введення генів для досягнення максимальної ідентичності послідовності у відсотках, при цьому будь-які консервативні заміни не розглядають у складі ідентичності послідовності.
Для визначення ідентичності двох амінокислотних послідовностей у відсотках послідовності вирівнюють з метою оптимального порівняння (наприклад, у першу послідовність можуть бути введені гепи). Потім порівнюють амінокислоти у відповідних положеннях амінокислот. Якщо положення в першій послідовності зайняте тою же амінокислотою у відповідному положенні в другій послідовності, молекули є ідентичними в даному положенні. Ідентичність між двома послідовностями у відсотках залежить від числа ідентичних положень, загальних для цих послідовностей (тобто 95 ідентичності - М ідентичних положень/загальне М положень " 100).
Антибактеріальні білки, які мають широкий спектр бактерицидної активності (літичної активності) проти різних штамів єїарпуіососси5, характеризуються проявом широкого спектра антибактеріальної активності проти одного або більше штамів єтарпуіососси5, що включають еарпуососсив апейає. 5іарнуіососсив ашцйгеиб5, еїарнуіососсив апцгісціагіх, еФарнуіососсив сатозив, 5іарпуіососсив сагргає, їарнуіососсив спготодепез, еїарпуіососси5 -сонппії, еарнуіососсив аєїрпіпі, єтарпуіососсив5 ерідетптідіє, єЄїарнуіососсив едиогит. етарпуіососсив дайпагит, еїарпуіососсив Наєтоїуїїсив, єтарпуіососсиб5 Потіпіб5, 5іарпуіососсив іпіептеєаіив, еарпуіососсив Кіоовії, еїарпуіососсив Іепіи5, еїарпуіососсив Іюдапепвіз, еЄФарнуіососсив тивсає, 5їарпуіососсив равівші, еїарпуіїососсиб5 заргорпуїйсив, 5іарпуіососсив магпегі і еарпуососсив хуозив. Крім того, ці штами б(іарпуіїососси5 е антибіотикочутливими або антибіотикорезистеитними штамами Зіарпуіососсив. Антибактеріальна активність антибактеріальних білків, які мають широкий спектр бактерицидної активності (літичної активності) проти різних штамів єЄтарпуіососси5, не залежить від характеру бактеріальної антибіотикочутливості.
Антибактеріальна композиція, яка має бактерицидну активність проти різних штамів «арнуіососсиз і яка селективно індукує бактеріоліз різних штамів Єтарпуіососсив, містить у собі антибактеріальний білок, який складається з амінокислотної послідовності 5ЕСО ІО МО: 1, антибактеріальний білок, який складається з амінокислотної послідовності 5ЕО ІЮО МО: 2 або їх
Ко) суміш. Суміш антибактеріальних білків може містити в собі суміш 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 26, 26, 27, 28. 29, 30, 31, 32, 33, 34 або 35 мол. 95 антибактеріального білка, який складається з амінокислотної послідовності ФЕО ІЮО МО: 1, і 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74. 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84 або 85 мол. 95 антибактеріального білка, який складається з амінокислотної послідовності ФЕО ІЮ МО: 2. Переважно суміш антибактеріальних білків містить у собі близько 25 мол. 95 антибактеріального білка, який складається з амінокислотної послідовності ФЕО ІЮО МО: 1, ї близько 75 мол. 95 антибактеріального білка, який складається з амінокислотної послідовності зЗЕО ІО МО: 2.
Антибактеріальна композиція має бактерицидну активність проти різних штамів еарпуіососсивх, селективно індукує бактеріоліз різних штамів 5іарпуіососсив і проявляє широкий спектр антибактеріальної активності проти різних антибіотикочутливих або антибіотикорезистентних штамів еїарпуіососси5, що включають біарнуіососсив апейає, еіарпуососсив ацгеиб5, егарнуіососсив ашгісціагіє, еїарпуіососсив сагпозив, егарнуіососсив сагргає, еїарнуюососсив спготодепеб5, еїарпуіососсиб5 соппії, ебарнуососсив /аеїрнпіпі, еарнуіососсив ерідептіаів, єїарпуіососсив едиогит, етарпуіососсив5 даїйїпагпт, єФгарнуіососсив
Нпаеєетоїуїіси5, етарпуососсив Потіпіх, єтарпуіососсив іпівптєдіиє, етарнуіососсив Кіоозвії, еарпуіососсив Іепіи5, еїарнуіососсив Індапепвзі5, еїарпуіососсив тивзсає, 5барнуіососсив разівцгі, тарпуіососсив заргорпуїїсив, іарпуіососсив уагеті і тарпуіососсив хуіовив.
Таким чином, антибактеріальна композиція ефективна в лікуванні інфекцій, викликаних множинними штамами єїарнуіососсив. Клінічна значимість композиції за даним винаходом полягає в тому, що вона зберігає ефективність при комплексних стафілококових інфекціях, викликаних множиною штамів 5іарнуіососсив.
Стафілококові інфекції можуть розвиватися до захворювань. Прикладами стафілококових інфекцій і захворювань, які викликані Єтарпуіососсив, є наступні інфекції: шкірні інфекції (наприклад, фолікуліт, фурункули, імпетиго, ранові інфекції, токсичний епідермальний некроліз), інфекції м'яких тканин (наприклад, піоміозіт, септичний бурсит, септичний артрит), синдром токсичного шоку, блискавична пурпура, ендокардит, остеомієліт, пневмонія, інфекції, пов'язані з протезними пристроями (наприклад, протезами суглобів і серцевих клапанів, судинні шунти, трансплантати, катетери) і інфекції сечовивідних шляхів.
Антибактеріальна композиція за даним винаходом може додатково містити в собі бо фармацевтично прийнятну речовину, прикладами якої є без обмежень сахароза, сорбіт, маніт і фосфат. Антибактеріальна композиція за даним винаходом на додаток до описаних вище інгредієнтів може додатково містити в собі без обмежень емульгатори, суспендуючі агенти й стабілізатор.
Антибактеріальну композицію за даним винаходом можна застосовувати й вводити усередину або парентерально (наприклад, шляхом внутрішньовенної, внутрішньом'язової, підшкірної, локальної або інтраперитонеальної ін'єкції).
Ефективне дозування фармацевтичної композиції за даним винаходом змінюється залежно від лікарської форми, шляху введення, віку, маси тіла й статі тварин або людини з інфекціями, викликаними 5іарнуіососсив, від ступеня важкості інфекції, раціону харчування, періодичності й шляху введення, виведення й чутливості. Як правило, дозування може бути визначено досвідченим лікарем з урахуванням цільового ефекту лікування,
Антибактеріальну композицію за даним винаходом можна готовити в лікарській формі будь- яким способом, який може бути виконаний фахівцями в даній області техніки, шляхом використання фармацевтично прийнятного носія і/або ексципієнта у формі одиничної дози або а багатодозовому контейнері. Лікарська форма може мати форму розчину, суспензії або емульсії в жиророзчинному або водорозчинному середовищі, екстракту, порошку, гранули, таблетки або капсули. На цьому етапі може бути додатково включений диспергуючий агент або стабілізатор.
У даному описі термін "лікування" або "лікувати" вказує на (ї) пригнічення інфекцій, викликаних різними штамами 5іарнуіососсив; і (її) ослаблення інфекцій, викликаних різними штамами 5іарнпуіососсив.
Антибактеріальні білки й антибактеріальна композиція за даним винаходом відрізняються від антибіотиків, які є стандартом лікування, за питомою активністю, швидкістю дії, специфічністю й активністю проти антибіотикорезистентних штамів. Зокрема, швидка й ефективна бактерицидна активність проти як антибіотикочутливих, так і проти антибіотикорезистентних штамів біарпуіососсив є дуже важливою властивістю з урахуванням клінічної ефективності, що нею забезпечується. На відміну від більшості антибіотиків, для прояву активності антибактеріальних білків за даним винаходом й фармацевтичної композиції, яка містить антибактеріальний білок за даним винаходом, не потрібен бактеріальний метаболізм або ріст, і бактеріолітична здатність проявляється при контакті. Завдяки властивості
Зо швидкої бактерицидної дії антибактеріальна композиція, яка містить антибактеріальні білки за даним винаходом, добре пристосована до швидкого зниження бактеріального навантаження в інфікованих хазяїв. Тому антибактеріальні білюи й антибактеріальна композиція за даним винаходом дозволяють вирішити проблему антибіотикорезистентності стафілококів. Крім того, антибактеріальні білки за даним винаходом й антибактеріальна композиція за даним винаходом мають високу специфічність до видів Єїарпуіососсиб5 і рідко здійснюють лізис нецільових бактерій, включаючи бактерії-коменсали, що може зменшити клінічні ускладнення. Як правило, при застосуванні традиційних антибіотиків також ушкоджуються звичайні резидентні бактерії, що викликає різні побічні ефекти,
Практичні й у даний момент переважні варіанти здійснення даного винаходу носять ілюстративний характер, як показано в наведених нижче Прикладах.
Однак при розгляді даного опису фахівцям у даній області техніки буде зрозуміло, що в рамках сутності й обсягу даного винаходу можливі модифікації й удосконалення.
Приклад 1: Готування антибактеріальної композиції
Плазміду, яка експресує антибактеріальний білок за даним винаходом, конструювали шляхом традиційного субклонування гена, що кодує антибактеріальний білок за даним винаходом, представленого БЕО ІЮ МО: 3, у векторі РВАО-ТОРО (Іпмітодеп). Клітини ЕвзсНегісніа соїї ВІ 21, трансформовані отриманою в результаті використання плазміди в якості хазяїна- продуцента антибактеріального білка за даним винаходом.
Експресію антибактеріального білка за даним винаходом індукували 0,2 95 арабінозою при досягненні клітинами оптичної щільності при 600 нм (ООвоо), рівної 2,0, і згодом індуковані бактеріальні клітини інкубували додатково протягом 10 годин при 19 "С, Бактеріальні клітини виділяли шляхом центрифугування (6000 4 протягом 20 хвилин), і отриманий у результаті залишок клітин після центрифугування ресуспендували в буферному розчині для лізису |І5О ммоль/л МагНРО: (рН 7,5), 10 ммоль/л етилендиамінтетраоцтової кислоти (ЕДТА), 1 ммоль/л дітіотрейтолу (ДТТ))| і руйнували за допомогою традиційної обробки ультразвуком протягом 5 хвилин (1-секундні імпульси з 3З-секунудними перервами між імпульсами). Після центрифугування (13 000 д протягом 20 хвилин) супернатант вилучали й піддавали хроматографії у дві стадії, які містять іонообмінну хроматографію (колонка 5Р з високою швидкістю потоку; СЕ Неайнсагеє) і гідрофобну хроматографію (колонка Тоуореаг! РРО-6ООМ, 60 /То5оп Віовсієпсе).
У більш докладному описі отриманий хазяїн-продуцент засівали в живильне середовище
ТОБ (тріптіказо-соєвий бульйон) (гідролізат казеїну, 17 г/л; гідролізат сої, З г/л; декстроза, 2,5 г/л; Масі, 5 г/л; дикалійфосфат, 2,5 г/л) і проводили інкубацію при 37 "С. При досягненні концентрації клітин 2,0 ООвоо додавали І -арабінозу при кінцевій концентрації 0,2 95 для індукції експресії антибактеріального білка. Клітини культивували при 19 "С протягом ще 10 годин з моменту індукції. Культуральну рідину центрифугували при 6000 д протягом 20 хвилин з одержанням осаду клітин. Осад суспендували в буферному розчині 50 ммоль/л МагНРО» (рн 7,5), який містить 10 ммоль/л ЕДТА й 1 ммоль/л ДТТ (10 мл буферного розчину на 1 г клітин).
Клітини в суспензії руйнували за допомогою традиційної обробки ультразвуком. Лізат клітин центрифугували при 13 000 д протягом 20 хвилин для видалення клітинного дебрису.
Супернатант осаду піддавали хроматографії у дві стадії, які містять іонообмінну хроматографію (буфер А: 25 ммоль/л МагНРО» (рН 7,5), 10 ммоль/л ЕДТА; буфер В: 25 ммоль/л МагНРО» (рн 7,5), 10 ммоль/л ЕДТА; 1 моль/л Масі; буфер С: 25 ммоль/л Ма»НРО», (рН 7,5), 10 ммоль/л
ЕДТА, 50 ммоль/л Масі, 0,5 95 Тийоп Х-100; методика: нанесення проби -» 1,6 об'єму колонки (ОК) буфера А-»30 ОК буфера С-»20 ОК буфера А-»5 ОК 22 95 буфера В-» елюція градієнтом (20 ОК 22-100 95 буфера В)) і гідрофобну хроматографію (буфер А: 10 ммоль/л І -гістидину (рн 7,5), 1 моль/л Масі; буфер В; 10 ммоль/л І -гістидину (рН 7,5), 1 моль/л сечовини; методика; нанесення проби (проба очищена іонообмінною хроматографією) -» 10 ОК буфера А -» елюція градієнтом (10 ОК 0-100 95 буфера В)). Згодом розчин білка фільтрували через фільтр 0,2 мкм.
Для визначення композиції антибактеріальних білків, які складаються з амінокислотної послідовності ФЕО ІЮО МО: 1 ї БЕО ІО МО: 2, проводили аналіз у дві стадії. Спочатку проводили рідинну хроматографію (РХ) з мас-спектрометрією (МС), використовуючи оброблений протеазою зразок білка. Розчин білка, отриманий відповідно до описаної вище методики, піддавали обміну буфера шляхом центрифугування з фільтруванням у буферний розчин 50 ммоль/л Тріс-НСЇ (рН 7,6) і розводили до концентрації 2,5 мг/л розчином б моль/л сечовини.
Розведений розчин білка піддавали обробці протеазою. У якості протеази використовували модифіковану протеазу свині Сіи-С ступеня чистоти для секвенування (Рготеда, м. Медісон, штат Вісконсин, США) і проводили обробку протеазою відповідно до протоколу виробника.
Після обробки протеазою отриманий розчин обробленого протеазою білка піддавали обернено-
Зо фазової високоефективної рідинної хроматографії (ВЕРХ) і квадруполь-часопролітної мас- спектрометрії (О-ТОЕ-М5). Шляхом аналізу піків визначили, що піки на ВЕРХ і МС відповідають пептидному фрагменту МАКТОАЕ. що має походження з антибактеріального білка, який складається з амінокислотної послідовності 5ЕО ІО МО: 1, і пептидному фрагменту АКТОАЕ, що має походження з антибактеріального білка, який складається з амінокислотної послідовності
ЗЕО І МО: 2, на підставі встановленого зразка розщеплення протеазою і розрахунків маси.
Піки на ВЕРХ і МС були додатково підтверджені шляхом порівняння зі зразками піків, отриманими при використанні хімічно синтезованих пептидів (МАКТОАЕ і АКТОАЕ) у якості зразків. Згодом визначили частку в композиції антибактеріального білка, який складається з амінокислотної послідовності 5ЕО ІО МО: 1, у препараті антибактеріального білка шляхом аналізу методом обернено-фазової ВЕРХ зразка обробленого протеазою білка й хімічно синтезованих пептидів (МАКТОАЕ і АКТОАЕ), грунтуючись на кореляції концентрації пептиду й відповідної їй площі піка. У результаті аналізу, проведеного на трьох партіях антибактеріального білка, визначили, що частка в композиції антибактеріального білка, який складається з амінокислотної послідовності ФЕО ІЮО МО: 1, складає 25, 27 і 29 мол. 95, а частка в композиції антибактеріального білка, який складається з амінокислотної послідовності 5ЕО ІО МО: 2, складає 75, 73 і 72 мол, 95 відповідно.
Приклад 2: Приготування фармацевтичної композиції
Фармацевтичну композицію для лікування стафілококових інфекцій, яка містить антибактеріальні білюи за даним винаходом, готували шляхом заміною буфера. У цьому препараті використовували розчин білка, отриманий у прикладі 1, і проводили заміну буфера шляхом виконання традиційної діафільтрації в буфер для лікарської форми (1.56 г/л І -гістидину (рН 6,0), 50 г/л О-сорбіту, 1,47 г/л СасСі»:2Нео і 1 г/л полоксамеру 188).
Приклад 3: Дослідження антибактеріальної активності проти штамів ЄЇарнуіососсив
Для оцінки антибактеріальної активності фармацевтичної композиції за даним винаходом проводили тест на антибактеріальну активність, використовуючи фармацевтичну композицію, приготовлену, як описано в прикладі 2. Для тестування антибактеріальної активності виконували аналіз методом спот-тесту на бактеріальному газоні й тесту на зниження мутності.
Спот-тест на бактеріальному газоні виконували, як описано нижче: на чашки Петрі із ТСА (тріптіказо-соєвий агар; гідролізат казеїну, 17 г/л; папаїновий гідролізат сої, З г/л; хлорид натрію, бо 5 г/л, агар, 15 г/л) нашаровували 2 мл культури кожного штаму єїарпуіососси5 (стандарт мутності за МакФарландом був рівний 0,5). Після висушування на повітрі чашки інкубували протягом ночі при 37 "С. Після інкубації 10 мкл розведення фармацевтичної композиції, приготовленої, як описано в прикладі 2 (кінцева концентрація антибактеріального білка: 1 мкг/мл), наносили точково на бактеріальний газон, і чашки додатково інкубували при 37 "С протягом 30 хвилин. Після інкубації досліджували утворення чистої зони (ореолу лізису), що вказує на бактерицидний ефект фармацевтичної композиції.
Тест на зниження мутності виконували, як описано нижче: фармацевтичну композицію, приготовлену, як описано в прикладі 2, додавали до кожної суспензії штаму еїарнуіососсив (ООвоо-0,5)у фосфатно-сольовому буферному розчині (ФСБ) 10 ммоль/л (рН 7,2) до кінцевої концентрації антибактеріального білка 0,1 мкг/мл (у деяких випадках також використовували 0,5 мкг/мл або 1,0 мкг/мл). Зміни щільності бактеріальних клітин (ОЮвоо) реєстрували кожні 30 секунд протягом 15 хвилин. У результаті цього експерименту одержали ТОЮ»5о (час до напівлогарифмічного зниження вихідної концентрації життєздатних бактерій у хвилинах).
У цих експериментах у якості штамів Єіарпуіососсиз використовували наведені нижче штами.
Таблиця 1
Штами, що тестуються пише ши аа тооилем ТО Інформацятя ї рр сна ЛКооМ антибіотикорезистентніть. ш-і---арпуюсоссьв апейве КСТОЄ ЗБ (АТОС 3957) си ВСУ
СЯ Вернуосоосювошеме ОО ЗВБЕЕ. УА а щіарпуюсоссиз зов те ; дека несе :
Соолтинваловівів 00 МСЕ ВІР а ! Мерпуюсоссюе сто зБво(дтосВІЗ6Б) Відсутня
ОБОЇ Біббуососсиз сатияе КСТо без іАСС БО 0 Відсутя 2671 Біврпуюсоссия 010 КСТСЗБЛУ(АТССЯЗІВЯ) 00 Вдсуя 3,
Таблиця 1
Штами, що тестуються сн ОТО ДЕЛЄВ 0000000 нн донні ру ососеме соппї О0 КСТЄ ЗАТ ЯВ30) о000О ВІДСУТНЯ
Ши 8.- ар уюсоссив деірніві Її КСО ЗБ АТССЯ ССО ВАСУ сонної ше Шо ! і Ампіцилін-Разистентний, : | Е | кліндаміцин» ; Е и і : В сер ея ! ! Фжгарпуюсовсьв ! ЄСАвМ ЗІБ | резистентний; : ; я ерідвотідів : ССАВМ: | еритроміцин» : ! | ' ! резистентний. ! няню осли птн денно подунннн ВВТаМіцин-резистентний бзво о) 00ббарнуюсоссия 0000 сто ЗБВесАТССЯЗВ5В) Відсутня А
НИ ння Чт. ен А в ДО НН о. г сізову вагове Ще , . ! кош Я соя 0000 барпуюсоссьє 00 КстоЗБео(АТОСЗ5БОВ) Відсутня
МНН Ах яма НН КН ООеащн сАН нн Кн ооя» 0000 бврбуюсоссья ССАНМ 3733 | Відсутня 48) вербу юсоссяв потівів 0000009 АКМОЗИЯ ско - БІрОПОХаст ТОБІ. і се ин они Мт ранкове Ї ех й - -- і : і сла фо біврпуюсоєсья 00 котоззаасАТСС еВ Відсутня
Ксеня - (о «ОКептестуз і дпа нажннаанмн и Лан
Генні со ння сини : 18-х арбуюсоссьв юс ОО КСТе ЗО АТОС Я ОВІДВУТНЯ у ооо 468 Віерпуюсоссивієпне 0 КСТСЗБ/(АТСС2ЯО70) 00000000 Відсутня 80 боях о обіврбуюсоссюв ССАВМ 3734 ! Відсутня - 8 ЗІВрпУюсоссиз тизсве 0 КСТО 3570 АТСС Я) ооо ДУ о2о 0000 Маопуососсюю ССАВМ 3736 ! Відсутня
Ш-21 0 Барпуюсоссив тей КСТС ЗМО АТОСИТВІВІ 00000000 Відсутня 0000 с-же 0. БІарпуюсоссив хуювих 0 КСТО ЗМ (АТС СОВСУН
ОАТОС. Американська колекція типових культур: і
У ССАКМ: Колекція купетур антибіотикорезистентних мікроорганізмів і
ІКСТО: корейська колекція ТИПОВИХ КУЛЬТУр 0000000 потен тт
Результати представлені на Фіг. 1-22. Результати, показані на Фіг. 1-22, явно вказують на те, що фармацевтична композиція за даним винаходом (тобто антибактеріальна композиція за даним винаходом або антибактеріальні білки за даним винаходом) мають швидку й ефективну бактерицидну активність проти різних штамів Єтарпуіососси5. ТООзо фармацевтичної композиції складало менше 20 хвилин проти всіх штамів Єтарпуіососсив5, що тестувалися.
У той же час досліджували антибактеріальну активність фармацевтичної композиції за даним винаходом проти штамів бактерій, які відрізняються від біарпуіососсив. У якості штамів бактерій, які відрізняються від біарпуіососсивх, тестували 5 штамів Епіегососсив Гаєсаїв, 5 штамів Епієгососсиб5 їТаесішт, 2 штами бігеріососсив5 тіїї5, 1 штам 5бігеріососсив Цбрегі5, 10 штамів ЕвсНегіспіа сої і 7 штамів ЗаІтопеїйа. У результаті показали, що фармацевтична композиція за даним винаходом не має антибактеріальну активність проти штамів бактерій, що тестувалися, які відрізняються від тарпуіососсизв (таблиця 2).
Таблиця 2
Антибактеріальна активність проти штамів, які відрізняються від їарнуіососсив
Бактерії, що тестувалися «-Безультати тесту за антибактеріальну активність дн одн МИТО диня «(Епіегососсив'іаесайв | Шамо дуття
В рн я деннтінкнвожеєті нт т ї Мам тання ши: шини ня
С2ШНам 008000 ши попі пінних пл ши ни нн шу с--- А ОВЕС нн нн не Дует панк ! | Щі Штам 1 г : 5 шо
ТЕМИ МИМО он ЗО в, о нн ня ші МШИВМЯ 00000000 дили кшто
Коди, шле нема он по ЗОН ! Штам | - Шк : ше : снопа ВН: КС п в а п : Шамо 10000000 шля вит: ТВ ВИМ вний Ве НИЄ
СПВКТИВНОТВ ВІДСУТНЯ уекенд ннттттктінтітннінтнннінттнунюнту тенти пні
Таким чином, зробили висновок, що фармацевтична композиція за даним винаходом специфічна до Єіарпуіїососсиз і має широкий спектр антибактеріальної активності в межах еарпуїососсив, що дозволяє припустити можливість застосування фармацевтичної композиції за даним винаходом в якості терапевтичного агента проти стафілококових інфекцій.
Приклад 4: Терапевтична дія фармацевтичної композиції на одиночну стафілококову інфекцію
Терапевтична дія фармацевтичної композиції за даним винаходом на одиночні стафілококові інфекції досліджували за допомогою тваринної моделі. У цьому експерименті в якості модельних штамів їарпуіюососси5 були вибрані їіарнуіососсив ерідеттіаів5 і еарнуіососсив Наєто!/уїїсив.
Для експерименту на біарпуіососсив ерідептідіє використовували самок мишей лінії ІСВ
Івільної від специфічної патогенної мікрофлори (ЗРЕ)| з масою тіла 23 гя20 95 (вік 5 тижнів).
Мишам у загальній кількості 20, розділеним на дві групи (10 мишей на групу), вводили внутрішньовенно шляхом ін'єкції інокулят штаму біарпуіососсив еріаєгтідіє ССАВМ 3751 (1-108 колонієутворюючих одиниць (КУО)/миша). Тваринам однієї групи (тобто контрольної групи) вводили внутрішньовенно тільки буфер для лікарської форми (1.56 г/л І -гістидину (рН 6,0), 50 г/л Ю-сорбіту, 1,47 г/л СасСі»2НеО і 1 г/л полоксамеру 188) три рази через 30 хвилин, 12 годин і
24 години після контрольного зараження бактеріями. Тваринам іншої групи (тобто експериментальної групи) вводили внутрішньовенно фармацевтичну композицію, приготовлену, як описано в прикладі 2 (доза: 25 мг/кг), три рази через 30 хвилин, 12 годин і 24 години після контрольного зараження бактеріями. Щодня реєстрували кількість загиблих мишей і спостерігали за клінічними ознаками. Здатність фармацевтичної композиції за даним винаходом до усунення бактерій із кровотоку досліджували, використовуючи кров, зібрану через 5 днів після контрольного зараження бактеріями (кінцева точка експерименту), шляхом традиційного підрахунку колоній.
Для експерименту на єїарпуіососси5 Наєтоїуїйси5 використовували самок мишей лінії ІСВ
Івільної від специфічної патогенної мікрофлори (5РЕ)| з масою тіла 22 гж20 95 (вік 5 тижнів).
Мишам у загальній кількості 20, розділеним на дві групи (10 мишей на групу), вводили внутрішньовенно шляхом ін'єкції інокулят штаму 5іарпуіососсив Наєтоїуїйсиз ССАВМ 3733 (1108 КУО/миша). Тваринам однієї групи (тобто контрольної групи) вводили внутрішньовенно тільки буфер для лікарської форми (1,56 г/л І-гістидину (рН 6,0), 50 г/л ЮО-сорбіту, 1,47 г/л
Сасі»:2НгоО ії 1 Г/л полоксамеру 188) три рази через 30 хвилин, 12 годин і 24 години після контрольного зараження бактеріями. Тваринам іншої групи (тобто експериментальної групи) вводили внутрішньовенно фармацевтичну композицію, приготовлену, як описано в прикладі 2 (доза: 25 мг/кг), три рази через 30 хвилин, 12 годин і 24 години після контрольного зараження бактеріями. Щодня реєстрували кількість загиблих мишей і спостерігали за клінічними ознаками.
Здатність фармацевтичної композиції за даним винаходом до усунення бактерій із кровотоку досліджували, використовуючи кров, зібрану через 5 днів після контрольного зараження бактеріями (кінцева точка експерименту), шляхом традиційного підрахунку колоній.
У результаті спостерігали очевидні терапевтичні ефекти. У двох експериментах були показані подібні результати. Що стосується клінічних ознак, якщо миші в експериментальній групі відповідали нормі протягом усього періоду експерименту, у мишей у контрольній групі, починаючи з 2 днів після контрольного зараження бактеріями, проявлялися різні клінічні ознаки, які включають почервоніння по краю повіки, знижену локомоторну активність, випадіння шерсті, птоз, пілоерекцію й обертові рухи. У результаті внутрішньовенної ін'єкції фармацевтичної композиції за даним винаходом виживаність статистично значимо підвищилася (таблиця 3).
Коо)
Таблиця З
Смертність в експериментах на моделі одиночної стафілококової інфекції
Експеримент | Група у Кількють загиблих | Кіл-ть Смертність с ---188рИН 0. Загиблих С) ' Дні після і / | ' оо кфентрольного 0000жшянть | ' і зараження о заражених оообоерідетйв 00 Контроль о ВВ ВО о оВбойевтоуйсив 30 Контроль о нн тт 1 о о реларат 1 ВВ
Крім того, у результаті внутрішньовенної ін'єкції фармацевтичної композиції за даним винаходом кількість бактерій у крові статистично значимо зменшилася. У сироватці крові, зібраної в мишей контрольної групи в експерименті з єЄбарнуіососсив ерідептіадіє, середнє арифметичне КУО/мл складало більше 1-105, а в сироватці крові від мишей контрольної групи в експерименті з біарпуососсив Паєтоїуїйсив - більше 1105, при цьому в мишей обох експериментальних груп у сироватці крові бактеріальні колонії не виявлені.
На підставі описаних вище результатів підтвердили, що фармацевтична композиція, приготовлена відповідно до даного винаходу, мала ефективність у лікуванні окремих стафілококових інфекцій. Таким чином, був зроблений висновок, що фармацевтичну композицію за даним винаходом можна ефективно застосовувати для лікування стафілококових інфекцій.
Приклад 5: Терапевтична дія фармацевтичної композиції на множинну стафілококову інфекцію
Терапевтична дія фармацевтичної композиції за даним винаходом на множинні стафілококові інфекції досліджували за допомогою тваринної моделі. У цьому експерименті в якості модельних штамів біарнпуіососси5 були вибрані еїарпуіососси5 /ерідептіаів, еарнуіососсив Іпдаипепвів і арнуіососсив магпеті.
Використовували самок мишей лінії ІСА |вільної від специфічної патогенної мікрофлори (5РЕ)| з масою тіла 23 ге20 95 (вік 5 тижнів). Мишам у загальній кількості 20, розділеним на дві групи (10 мишей на групу), вводили внутрішньовенно шляхом ін'єкції змішаний інокулят штамів еіарпуососсив еріденптідіє ССАНМ 3751, їарпуіососсиб5 дацпепвіз ССАВМ 3734 і еарпуіососсив магпегі КСТО 3340 (АТС 27836) (14108 КУО кожного штаму/миша). Тваринам однієї групи (тобто контрольної групи) вводили внутрішньовенно тільки буфер для лікарської форми (1,56 г/л І -гістидину (рН 6,0), 50 г/л Ю-сорбіту, 1,47 г/л Сасі»2Нео і 1 г/л полоксамеру 188) три рази через 30 хвилин, 12 годин і 24 години після контрольного зараження бактеріями.
Тваринам іншої групи (тобто експериментальної групи) вводили внутрішньовенно фармацевтичну композицію, приготовлену, як описано в прикладі 2 (доза: 25 мг/кг), три рази через 30 хвилин, 12 годин і 24 години після контрольного зараження бактеріями. Щодня реєстрували кількість загиблих мишей і спостерігали за клінічними ознаками. Здатність фармацевтичної композиції за даним винаходом до усунення бактерій із кровотоку досліджували, використовуючи кров, зібрану через 5 днів після контрольного зараження бактеріями (кінцева точка експерименту), шляхом традиційного підрахунку колоній.
У результаті спостерігали очевидні терапевтичні ефекти. Що стосується клінічних ознак, якщо миші в експериментальній групі відповідали нормі протягом усього періоду експерименту, у мишей у контрольній групі проявлялися різні клінічні ознаки, які включають почервоніння по краю повіки, знижену локомоторну активність, випадіння шерсті, птоз і пілоерекцію. У результаті внутрішньовенної ін'єкції фармацевтичної композиції за даним винаходом виживаність статистично значимо підвищилася (як показано в таблиці 4).
Таблиця 4
Смертність в експериментах на моделі множинної стафілококової інфекції
Група 1 Кількість загиблих тварин Кіп-тьсзагиблих о Смертність (0).Дніпісля контрольного | ! зараження бактеріями З кІдетЬ ; ; . дн ВАДА ЖЕНИХ нин с. Препаратї 10 ВВ
Крім того, у результаті внутрішньовенної ін'єкції фармацевтичної композиції за даним винаходом кількість бактерій у крові статистично значимо зменшилася. У сироватці крові,
Зо зібраної в мишей контрольної групи, середнє арифметичне КУО/мл складало більше 1 105, а у мишей в експериментальній групі бактеріальних колоній не виявлено.
На підставі описаних вище результатів підтвердили, що фармацевтична композиція, приготовлена відповідно до даного винаходу, мала ефективність у лікуванні множинних стафілококових інфекцій. Таким чином, був зроблений висновок, що фармацевтичну композицію за даним винаходом можна ефективно застосовувати для лікування стафілококових інфекцій.
Фахівцям у даній області техніки буде зрозуміло, що концепції й конкретні втілення, розкриті в наведеному вище описі, можна легко використовувати як основу для модифікації або розробки інших варіантів здійснення винаходу для здійснення тих же цілей даного винаходу.
Фахівцям у даній області техніки також буде зрозуміло, що такі еквівалентні варіанти здійснення не відхиляються від сутності й обсягу винаходу, які представлені в прикладеній формулі винаходу.
Фахівцям у даній області техніки буде очевидно, що в даному винаході можуть бути виконані різні модифікації й зміни без відхилення від сутності й обсягу винаходу. Таким чином, мається на увазі, що даний винахід включає модифікації й варіації даного винаходу за умови їх відповідності обсягу прикладеної формули винаходу і її еквівалентів.
ПЕВЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
«10» РНТРОВ БАЙСТЕКНОЛОДЖІ. НК. «ій АНТИБАКТЕРІАЛЬНА ХОМПОЗИЦІЯ 1 СПОСІБ ЛІКУВАННЯ СтаФіІЛОКОКОВИХ
ІНФЕКЦІЙ АНТИБАКТЕРТАЛЬНОЮ КОМПОЗИЦІЄЮ
«1305 ВОЗ? О01РСт «ї505 уз беж, «ії 2016-91-11 «160» З «ий» вагелтта аврсіяй Ж,5 «аю 1. «Яр» 5 «й» ЛАТ . -ї1іх щтучна послідовність «деки» кке3»: с Антибайтертальнеї композиції «00 хек аАїй їм5 тиг Бій А1їа Сім ї11іа дей суя аго ге дв діа тує їй 1 5 10 її цу« с1у Пт уаї Аброявк го туго дго її був їуї АЛ Таб озег Туг 29 25 30
Ар обро Бог вп 03у чар мех бій Аїа бої АТЗ їв ар оАТа Або су 35 чо 45
Ту тут НІ5 АЇа бів Сми5 сій д5робен її8 тагсахр тує ма емо тгр
ЗУ 50 рес твк дв Ази риє ма аг тає оте боту дей та цу й Бій ЩІ 5 70 75 80
КУ бій зег оТук б1у ТНроБіу вне руз ї16 ніх аї: дай цу бко ще 85 по 55
Тве уа! ога бух уз б1у Тер її аїз Ма! РНя Те овес сту ес Туг 5 105 ХМ сій сів тер обу ній тів ту 112 Уаї Тук ар соту Ту дп тиг бек 115 120 125 твеорве те жТе сен бів бій аби тТеровяв о оіу тує Аж ави вух Кух ща 135 о все таб ор лгу я) АВроАва тує туго бом цей тв омів Ре тів б 155 150 ВХ 150 рів вго мМаф губ аТа сім тТвк о їНе хаї ру вуз би тва АТа вик ув 151 їг 175 звкоаіа зег вуз Тпгб овго А1яа вго Бу» су їуз Ала їйс оц ую ма 150 Не 198 его іу5 дкпонія 13е Ап оТук тТвг Мат дер бує де Ту Су ув Рго
НІ 200 205
Зі б1у меж ма! Хів Ні Ай Ар о ав біу Аку бег о бег бТу Та бій ій КУ 22
Луг 01) Ап зе Без діа А5пояїн біу їуб Аїд йо ТУує Зайва пу 225 2530 235 І 245
Ха Аза нів тує тує о1у зв ої у тує бат теробіу А1а Те АБО 245 250 У
Ат їуб ази бів Ме 13 Ткроміз Твг сту азо Ту вт оту АТА Ап 250 е5 27 зе су Аха Ре ага вне АТЗ б1у зів ої) Уаї був с1їв Зєс меї чек
Б І 280 Во а1а загодзроАта іп Ре сви гу Ай ОО І діа ха Бе бій. рве 29 295 390 чт оАТа ст вує Ре ії 41 тетб с1у (ец жтйг рРеб дб АКО бує ТР
ВН 310 315 320
Уа агар увиоснія мет Фіц рве ді бе тве АТа Суб его нів до ег 325 330 3 мет уйі цеи вів отйе біу Ве деп вго У тве бій біу дво пго заг 340 345 350 ій Аза тів Ме деп оруВ во су Ар отук рМне Ті уж бій ІТ ух 355 350 355 звпотут Меж даеробуз піу Те бек обев Бак їпг о жаї Уаї буз а5в Сію но 375 Зо їук ТвВе бек о5ек АТа бег ТВ Овго Аа їбгодго Рго Уа! ТвВгобІ1у бек 385 390 385 00
Ттроіує губ Аяп СІ тує 01у тТвг отгр тує ув его бів Авт АТЯ Те 410 415 рве уд! депо біу Аяпобій Бгостзе ма? тає ду 118 біу ба" в рРНае яго ах 30
Беца АТа Ргосмат офу шіу Ап шен вго діа о1у аїа ТВгоІїе Уві 835 350 445 тує Ан стро ува Суб Те соз1й Ав оїу Ні те тер ІТ п1У тує Ап 250 455 з60 від туго лава у Ап ай Уаї тує сСує Бо мазі Аго тпг Су сів о1у а 47 ж 450
МА РКО РО де" НіЄ ті вро Оу ма) дій тероб1іУ ха Ре ув 85 49 455 «вій й «ВІЇ» ЯЗ «км пе «її» штучна воспздовність «200 І «айіїз днитибактеріальної кампожиція
Не й аїд вух Те бій АТа пі хів аж губ Арго їв» АзроАТа Туг о д1а зу
КЕ 5 10 15 сіу ткгожаї д5робеговго Ту Аго їЇе гух уз АТа Твгт об5ег Туг яр 2 5 35
Бго зар орРпе біу маї мет о біц аз б1у АТа їіе дер діа АзробіУ тТуг їх 49 45 тут чі АТ бій Су ФІ ахросвь І Таб оаєр о тук Уаї юеи тс) Бен 55 а тТвгоАнр од мух маї Аг Тв тк ОФіУ дб азз су АЗе дів 116 ух 1 ве ТУ о піп Бек туго с1у таб сту рив вух ХЛІБ Ні СП АЄЙ був вко аг ТК 85 чо 5 хаї рго Кук бу б1у терта дів уаї вва тйт 5егобіу бетотує ТА щО 5 шо віпотгвовТу ніє ї1е біу її Уві тут Ахр бу Є1у дви ТК охеготве 115 120 125 вве Тве о ї18 рев обі Оп Аа їгтр ап бі Тук діа яп тує суб РгО
І30 в їжа
Жвговує Ага таї або айва Туг Тук уфж рес їве мія Ре гів бю її 145 ї5о 5 155 вті хаї вуз Аза ОТУ ТВ ОТВК омаї уз же біш ТК оАТа Суб м» бег 165 170 175
АТа Зег їУу5 Тс оРго а1а га уз уз буз Аа твгоїен вуз маї бек 150 її мю су АБИ НТ І1е дей Туг ТВ ОМЕК АчО Руб Ага бу фув туз РЕ у 195 Ой 505 сту мет Уаї ТЕ ніб5 дай ар й Ба сту Ага о беб яег ові Фів вів о туУк 210 віл 280 сіє ап ояек ем іа вай АТа оТу Туг АТа дго Тук АТа АзнОСТУ 118 75 230 73У 24
Кіа ні тує Ту осіу Бек обои біжу тує мат тгр обі мія ті ду АВ "45 250 235 їу5 ап обір їі Аїа їкр ові твгосту дерозіу тег ооіу дій дяй бог 250 265 273
Зіу Ап ре дго ве АТа сіу їі бін ба су» Фі 5ег мет Зог 14 275 280 85 зегодєр Аа бій рве рев гсує абпобів сіп Аїд Уді ре бій вне ТТН, 2 295 БО
Аа бів УЖ рве бух Сі) тТетрооту ден отлвг о вко аа аку був тако УМ 305 ЗМ 315 320 дбу їбо мів Мет бі вйеоУВї вго Твб Аза Сух ргО Ні Ага бек мех 3І5 зз3а 333 чаї кеш нів ТВ ос1у Ре аяп его Мді тб ост ту АбдовБго Беб б'я 3 345 350 вій тв мех деп о суз гри фу» др отук опе 116 Бу біпотів Му Ахи 355 зо зах туго мет Ар гу б1іу Твг обвгобес вег тп Мак уд ву АзвоБ1У су 170 375 зва ппгобеак ат АЛа Бек Твт РКО АТа ТвВе о Аго вго маї Тс бі б5еготго 385 ЗХ 395 зво
Бут вує ап сів Ту о біу їве о теротуг ув тт та лай дій тяг Бр 05 10 415 чаї Аза біу Ажп сій Рго Хе Уа! Твголте ІТе б1у зе? обко вав рем 450 425 430
Аза А1а РРО Уві! бу ту Ай їеу ско Аза біу аїа Тв о ї1Те о уаї тТук 435 440 445
Ази оби мя1 Суб о їТе Біфж АТассу нів стіє Тв 115 ріу туг Ази АТа 450 455 Я тукоаєп сіу Аза Зк Уа1 ТугосСуз о вго ті дво Тс бух бів бі Уді а ато их аво
Вгб рга ле нії 112 ко ші Маїс аїй ттробіу маї Ре бух 490 «а» 3 хвіїї» 1АКВ зоіфйв днЕ «2135 штучна послідовність сфе «дух АнНтИиВактартальної композеції «аб» 8 акзсктазца сесвадсада ввіязавтсааа состєвзцасо сітатосаза яоутаєадєа бо дасвасссєт атадвасказ завадстаса аусіаєцасєс сатсусіко сосаякодає 153
Здс:годадсаз стоасосада суостастає ситосасадє дссаадаєть зебтасспах 155 шІжагсах одкїнасаза таатазауїк зоавастседаЗ обаагасеза гаассааатс що азасвааїт зїтоутастдо асттаавата саїтопдлата засетостас адкаєстааа з0ю павосасоса соска свсатссоої вотїассязос аватодоотся сатайотаєх 360 пкетакччата дадзослакає ткстасатіє астаїсттаб засазчаєто оаасодетас за детазїадад апссізсвав асвсотацає аастастасо даткаасксом ТЕсЕЗХТовО Б) акасстотаз зазсаузавс тастоскаая паадайвасво стаадавацу тесавусния 345 асасстасас стузалайоаа восаасаста аваоіссста аудаєтаєві сдаствтаса БО атодаїавяє уІсатаацаа асссавачай аоротаатає псбазсдаєос адоїсатся БО «садодсаас саатасозаяа кІсвттаст засосанок «БостаЗаєа коставесоду КО віхдсксатї астатуастс тозаодстає дїзїзооаао саззсазаєюс тавозлатеав 75о пітоєттуоє ясасадазох судоаасвдоз зсваасієзуо дсозастокаЗ астеасвод г 85о зітовадестї дксаєстсзах дазтоствОЄ пвхостсаві гссіхайдаах созасавоуєа оо чЧіаттссват стастуєзсова дазатуттааа Фзакосподкс ствстостай тодсваваєт 950 чтазодаттає атагозуваєк гоассссвянка йсстовсежхс пісогесках спуссттаї 4020 асапдатсти атсеауїтвзс асазодвада сейбстсвад сапідватоае кааеаставав, това чдастактьсз тхачасялавт сазааастаю зідовсааао Чайсіхсава ЕссСтасвуєа МО
Чссзаздясу піззавсзац кадсосапоє асассодсаз стадассвох пастудееее 1213 кофаававой спасає засіїоасвс апаєсоуана асослаєвиє хостаасов 1260 айсслвсстя тадсластад айгтадассєк ссаттсстаа атостссаст аббадогане Іа гІзссвоасад дадетаєаах коатятасовс оаватітака гСсваасаво сабо 1380 зІщвстасч асуєттасай гоусзасава чкатаїкосс стада с кЕоссааОца. зала птиссасста атсасатасєс тост сосс хасодаосат тевазкау 1488
Claims (7)
1. Антибактеріальна композиція для лікування стафілококових інфекцій, яка містить суміш 15-35 мол. 95 першого антибактеріального білка, що має амінокислотну послідовність, представлену в ЗЕО ІЮО МО: 1, та 55-85 мол. 95 другого антибактеріального білка, що має амінокислотну послідовність, представлену в 5ЕО ІЮ МО: 2, і де антибактеріальна композиція має широкий спектр бактерицидної активності проти всіх з наступних видів Єарну!ососсив: Єїарнуюсоссив апенає, Єїарпу!юсоссив ашеив, бїарнпуососсив ашйгісшагіх, єЄбїарнуососсив / сатовив, оїарнпуососсив сагргає, бїарнпуососсиз спготодепез, бїарнуІососсив соппії, Єїарнуососсив ае!Ірніпі ЄїарнуІососсивз ерідептідіх, єЄїарнпуюсоссив едиогит, бЄїарнуососсив дайпагит, оїарнпуососсиз Ннаето/уїсив, ЄїарнуІососсив потіпів, Єгарнпуососсив іпіегтеаіив, бїарнуіососсив КіІровії бїарнпуососсивз Іепійбх, біарпуососсиз Пидбипепвії, Єбїарнуососсив / тивсавє, оїарнпуІососсив равзіеші, бїарнпуососсив заргорнуйсив, бїарнпуюсоссив татегі і Єїарпуососсив хуІозив, де вказану суміш отримують за допомогою способу, що включає стадію культивування, на якій клітини, що індукуються, інкубують при температурі нижче 20 "С, без необхідності проведення стадії розщеплення.
2. Композиція за п. 1, яка відрізняється тим, що суміш містить 25 мол. 95 першого антибактеріального білка й 75 мол. 95 другого антибактеріального білка.
3. Композиція за п. 1, яка відрізняється тим, що стафілококові інфекції являють собою шкірні інфекції, інфекції м'яких тканин, синдром токсичного шоку, блискавичну пурпуру, ендокардит, остеомієліт, пневмонію, інфекції, пов'язані з протезними пристроями, або інфекції сечовивідних шляхів, що спричинені будь-якими з наступних видів стафілококів: Єїарпуюсоссив апейаеє,
оїарнпуососсиз ашеив, єїарнуососсив ашшісшагтв, єїарнпуососсиз сатовив, бїарнуіососсив сагргае, Єїарнуососсив спготодепев, біарнпуюососсив соРпії Єїарнуососсив ае!рніпі, оїарнпуІососсив ерідегтіаів, єЄгарпуюсоссив едиогит, єЄїарнуососсив даппагит, єбгарнуіососсив Раето!уїйсив, єїТарнуососсив потіпів, єЄїарнуососсив іпіептесіих, єїарнуюсоссив Кіоозвії, оїарнпуососсивз Іепіивх, Єбїарнуососсив Ппдайпепвзів, єїарнпуюсоссив тивсає, бїарнуососсив равзіешгі, ЄгарпуІососсив заргорпуйсив, Єїарпуососси5 уматетгі і ЄТарнуІососсив хуюзив.
4. Композиція за п. 3, яка відрізняється тим, що шкірні інфекції являють собою фолікуліт, фурункули, імпетиго, ранові інфекції або синдром токсичного епідермального некролізу.
5. Композиція за п. З, яка відрізняється тим, що інфекції м'яких тканин являють собою піоміозит, септичний бурсит або септичний артрит.
6. Композиція за п. 3, яка відрізняється тим, що протезні пристрої являють собою протези суглобів і серцевих клапанів, судинні шунти, трансплантати або катетери.
7. Композиція за п. 1, яка відрізняється тим, що додатково отримують суміші за допомогою способу, що включає стадію культивування, на якій клітини, що індукуються, інкубують при температурі 19 "С без необхідності проведення стадії розщеплення. мавпуїрсоссив спієнає Штам: КСО ЗБ АТС Зоб (в) (в) Сповтест на . ; зв знає ! у бактеріальному газоні Тест на зниження мутності (0,5 мкл І о в оо. . . й ше 3. ж З: НО ПС еуеку ОВ у . ЕЕ оо. ТОВ вх 15
Фі.
тарпусоссця шнтвих І Штам: АТСС 55558 (А) (в) Спот-тест на Таст на зниження мутності (0 мкм бактевідльному газоні б. ЕЕ ва пт о. а ш ШІ пом Ще ЗО я ШЕ У В у в 3 НИ и. (Б ш 5 5 МОН ронний ! ванні нн ення ТО: 8.2
Фіг. й ларвуюсоссих аигісціатіх Штам КСО ЗВ АТСС 33753) ІД) (8) Спот-тест на Тест назнаяження мутності (0 мем) бактеріальному газоні ЩЕ с Ск я ї с о ший Сс В с ниви я сени ОО Торо: 9.2
Фіг. З щДсавпуюсоссих сатпахих Штам: КОТ ЗВО (АТС 5168 (д) (8) Спот-тест на ще не ча патерійньному тазові Тест на зниження мутності (0 магми) ППД МЕ ОВО дров мк НН но що о ВШ фон й и о 5 Ма ша В ї 5 Ше ОКО СО о СЕН божу ВО пи с . ОК М рда ОО ОК в ОВ . о. я йон а НН Енн нав ООН ши В ТО: 20.0 Фіг Я шщперпуюсоєсих сагогає Шхеам: КСТС ЗВ АТО ЗАЯ) (А) (В) Свої-тест ни Тест на занкенвя музвості (ПИ мкг пактенальному газені й Й ОО ПЕВ і ОА КК ВИ ВО ше ОО о лщЩщ ай ! и -шоооОС ВЕЛИ нні нн нн
Фіг. 5 гарпуюсоссих сптотовдепех м ПШнам: КСТС ЗТ АТС ЯМИ (А) (8) Я еїтест ва соя Тест на зниження музності (9. кий бактері ачьНнОоу нин Й я й хх й й МНН їй КВК г о. оди те о: о я о. ШО ОХ ННЯ Мне Кн о. песен ц й ПОН НК Кн нн ТО0оз: 10.5
Фе. Бшопусоссих соппії Штаа КСО ЗАЯ САС НИ (А) (В) Спожтест на о Тествазнижевня мутност (5 крім) бакзтерівцьному газові і Ї ШЕ я ШК ОО шк п "ННх ОК ЗВО ЕНН чи 55 ШО В тоб: 15.0 Гея млеойулососсух беїрпіпі Шта КСТС З АТС АЛ (А) (в) Спот-хест ча Тесх на звиження мутносі (В меблі бактеріальним у газоні х он БОС УМ ММ У КУМУ ММ УМ УМ М, кове ЕЕ 0 У о. що з шин ВВ шк Шо як Е а ІІ
Фіг. РО И і ей ков; . ши сх х х марпуївсосси ерійеттоїх (д) (В) Штат ССАКМ З Сипоблевк на я І щк но бактеріальному газоні Бест ни зниження мУтност (БИ мес х- я кА. у, А Е й за й що то: З о: дк й пн ЗЕ ТОК ВО хх ОО І; и я Пе ГЖУ с ОЗ о. ОО ва ПЕН Го ооо КЕБОИ М НИ о з : с поко | я ЩО. ща ш- ший ен ТО: 7.4
Фіг. 8
«маврбуЇссоссих евиогит Штам: КСО ВО ГАС ЯОКН (д) (ві Свої-тест на Жостна зниження мутвост і мето пактерільному вазон вен по пп Ша Б Ж 2. 7. учення її и оо. ПОМ ВИННИЙ с ТО: 19.6
Фіг. 10 щгаврвнуюсоссих дапіватит Шеям: КС 585 САС ЗаК39) (А) (В) Ялимзіеек на Тест на ниюкений мухност ( мкл вактеріяженому газені є ши о оо В ! є й: Кс НА в М тор. 18.1 Фіг хадпуюсоссих петолЛутісих (В) ) Шви ССАВМ Спеттесе ня . Фест на зниження зіутності (МІ мкг/мл) пактерцЕльноМмуУ ГЯЯОНІ ц о. ше с ой о Я с: В ШИ ша тоб о: 8.4 ФО Та млаврпурсоєсси потіпів Шевве ССАВМ 3733 спот-теск на І Тесх на звиження мугнюті (БІ мкг бактенаннкму газані що їх ОМ ШИНКИ ва ЛЕМ Го ох ОО М 5 Тека ОО Чч Щщфп) с тоб»: 13.3 фіг З их. с н н шо ка Оу с чу МарпуУТсОосси Піеттетих й Штам: КСТО ЗАТ 39663 (А) (в) Слювт-тест ча І Тест на звижевния мутності (0 вм пиктеріальному КН о ВО ! о за аж Я ОККО КОН с ОККО во ПЕ залуження Ко » о Б БНО о ТЕ во о в є. 35 Е ни и З НІЦД ТОВ З.2 Фіг Я ларілососсих Кірох Штам КСО ОН АТС КИ (А) (В) Сивт-теск на | жаесг на хнижевви зує ОБ засл бактеріяльнему газоні З ЖЕ Дно ФОН Е З би ! : ші 0. шо З ОО Пе
0 З. ай ОВ ПОЕМИ осонні Й в І
Фк.
мавпу юсоссиз іти Шити КСТОС ЗТ АЛ 9070 Ід) (В) ОНИ век не зух худож пи сло романи Тест ва линжкення малчності (БА мислі бвкзтеровнеми гизані зва й й несете клжжння їх нн С: о. о ЕК в ШО Во
: Б. Ес ТО0о: 10.8
ФІ. 15
З . З с й ц Х ц сок, х мпарпуюсоссих івайипеввів Ша ССАКМ ТА (А) (8) й праве жі «чх хор о сивеву ня . Тест на зниження мухності (0,1 мкт/ма) бактеріяльному газоні І ак й М КСОВМИ оо В я : тв з ш-. й
М в. ПОВ ня ПЕРОВА ОМВК пн КО КЕШ он ХЕ лук ще . х ПОВ Бе ПОООЕВОВВВВВЕВЕЯ : їх хх ХХ З ЕИПИТИШИНШИ ж, ППП, ще БО оо, ОЇ в 5 шо чо й кожен се чи. інь бісів ав О.Д, т 0 ще 7.4 ФУ
5шопуУюСсОоссих тиме ( д) (В) Шває БСТС ЗКТ САССЄ ЗВНЬ Є к-терр на як «зх Я : і ще в на ; Тест на лниження масуності ЦІ мкс бактерінаенаму раза. -- о Ба киш, шо ШОЇ й ПН З М ПЕК її. йо с о: І я ВВ МОХ ПК ИН ВЕК ее 0 .'ї. о. ше о З В ша й шує ТО: 9.5 Фіг В ; й Ї : сіна жі я : ще щорпуюсоссих вагтецт Пево КОКС 1316 (А) (8) Спот-тест на , Терра зниження мутиость с яким бактеріальним газоні " ше | ні ! мини Ж о бів. о п ОП ОХ МО МИХ божа ИПИИНННИ НИ й х . ССО. Я Пезже ЕНН Б 000 о с ОМ нс Тори: 17
Фіг. 15
Карпуїососсих зхаргорпунсих ( Штач ССАКМ З Ід) В) Сірко т на Фест на зниження четностіє0ї мкг/мл бактевівльному газоні Тест на зниження мутності Ді мкг/л) шен щу - ниж т. о з . ше ОЕ о о. хх ВК х Я
ЕЕ. с о - г ї . о. | в о | Шин с
! ч. . Ес ТОВ 5.5
Фіг. 20 морпуососсих шагтеті Штям: КСТС ЗО САУТОС 27836) (А) (8) ен газоні Тест назниження мухності (5 мкг/мл сит ері Би ГАЗ и оон ДОД юн п . ої 5 Ш БЕН її о ШЕ с Її с я с її 1. яку, о. ВоооохозооаійЙ Ен нн Тр: ва Фі 8 парпуюсоссих хуїзих ( д) ( ві Штам: ЕСТЄ З АТС 29971 Споі-тесь ма й Тест на зниження нести якр/ма пак еонвьацУ грн і й нт ші а, КО с КК, КИ з ШОптннннно й ЕЕ ОО КК з ВЕК
З о. я Шо КЕ о НКУ НЕ ОО ще й Бо ОО ек оо ша ВІ то0.о: 13.1
Фі. 22
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201662277506P | 2016-01-12 | 2016-01-12 | |
| PCT/IB2017/050087 WO2017122111A1 (en) | 2016-01-12 | 2017-01-09 | An antibacterial composition and a method of treating staphylococcal infections with the antibacterial composition |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA126022C2 true UA126022C2 (uk) | 2022-08-03 |
Family
ID=59310874
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAA201813040A UA126022C2 (uk) | 2016-01-12 | 2017-01-09 | Антибактеріальна композиція й спосіб лікування стафілококових інфекцій антибактеріальною композицією |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US11229677B2 (uk) |
| EP (1) | EP3402506A4 (uk) |
| JP (1) | JP7085483B2 (uk) |
| CN (1) | CN109414478B (uk) |
| AU (1) | AU2017208114B2 (uk) |
| BR (1) | BR112018014175A2 (uk) |
| CA (1) | CA3010564C (uk) |
| MX (1) | MX2018008545A (uk) |
| RU (2) | RU2707738C1 (uk) |
| SG (1) | SG11201811479RA (uk) |
| UA (1) | UA126022C2 (uk) |
| WO (1) | WO2017122111A1 (uk) |
| ZA (1) | ZA201804013B (uk) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110734474B (zh) * | 2019-11-29 | 2021-10-19 | 中山大学 | 一种抗菌肽的筛选方法及其应用 |
| CN111235119B (zh) * | 2020-03-05 | 2021-11-23 | 苏州十一方生物科技有限公司 | 一种融合抗菌蛋白的制备及应用 |
| CN112402591B (zh) * | 2020-11-23 | 2022-12-16 | 中国农业科学院饲料研究所 | 防御素dlp4在治疗仔猪渗出性皮炎中的应用 |
| KR20240015753A (ko) * | 2022-07-26 | 2024-02-06 | 주식회사 인트론바이오테크놀로지 | 황색포도알균을 포함한 포도알균에 대하여 강력한 용균 활성을 갖는 항균단백질 |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1151842C (zh) | 1995-07-27 | 2004-06-02 | 基因技术股份有限公司 | 稳定等渗的冻干蛋白制剂 |
| IE20060488A1 (en) | 2006-06-29 | 2008-01-09 | Teagasc Agric Food Dev Authori | Recombinant staphylococcal phage lysin as an antibacterial agent |
| KR100759988B1 (ko) * | 2006-08-04 | 2007-09-19 | 주식회사 인트론바이오테크놀로지 | 황색포도상구균에 특이적인 항균 단백질 |
| KR100910961B1 (ko) | 2007-09-13 | 2009-08-05 | 주식회사 인트론바이오테크놀로지 | 황색포도상구균의 균막 처치에 효과적인 박테리오파지 또는그것 유래의 용균단백질 |
| KR101016918B1 (ko) | 2009-01-08 | 2011-02-25 | 주식회사 인트론바이오테크놀로지 | 박테리아 특이적 넓은 항균 활성을 갖는 신규한 리신 단백질 |
| US8043613B2 (en) * | 2009-02-12 | 2011-10-25 | Intron Biotechnology, Inc. | Podoviriedae bacteriophage having killing activity specific to Staphylococcus aureus |
| US9603909B2 (en) * | 2012-05-29 | 2017-03-28 | Intron Biotechnology, Inc. | Composition capable of improving stability of bacteriophage lysin proteins |
| JP7085482B2 (ja) * | 2016-01-12 | 2022-06-16 | イントロン バイオテクノロジー，インコーポレイテッド | スタフィロコッカス感染症のための凍結乾燥製剤を製造する方法 |
-
2017
- 2017-01-09 BR BR112018014175A patent/BR112018014175A2/pt unknown
- 2017-01-09 AU AU2017208114A patent/AU2017208114B2/en active Active
- 2017-01-09 JP JP2018536456A patent/JP7085483B2/ja active Active
- 2017-01-09 RU RU2018124798A patent/RU2707738C1/ru active
- 2017-01-09 EP EP17738258.7A patent/EP3402506A4/en active Pending
- 2017-01-09 US US16/300,566 patent/US11229677B2/en active Active
- 2017-01-09 WO PCT/IB2017/050087 patent/WO2017122111A1/en active Application Filing
- 2017-01-09 CA CA3010564A patent/CA3010564C/en active Active
- 2017-01-09 SG SG11201811479RA patent/SG11201811479RA/en unknown
- 2017-01-09 UA UAA201813040A patent/UA126022C2/uk unknown
- 2017-01-09 CN CN201780006444.8A patent/CN109414478B/zh active Active
- 2017-01-09 MX MX2018008545A patent/MX2018008545A/es unknown
- 2017-01-09 RU RU2019136978A patent/RU2729934C2/ru active
-
2018
- 2018-06-15 ZA ZA2018/04013A patent/ZA201804013B/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA3010564A1 (en) | 2017-07-20 |
| US11229677B2 (en) | 2022-01-25 |
| AU2017208114B2 (en) | 2023-04-13 |
| CN109414478A (zh) | 2019-03-01 |
| CA3010564C (en) | 2024-01-30 |
| WO2017122111A1 (en) | 2017-07-20 |
| US20190282657A1 (en) | 2019-09-19 |
| MX2018008545A (es) | 2018-12-19 |
| RU2729934C2 (ru) | 2020-08-13 |
| AU2017208114A1 (en) | 2018-07-26 |
| JP7085483B2 (ja) | 2022-06-16 |
| CN109414478B (zh) | 2022-08-23 |
| EP3402506A1 (en) | 2018-11-21 |
| KR20180114010A (ko) | 2018-10-17 |
| RU2019136978A3 (uk) | 2020-04-02 |
| SG11201811479RA (en) | 2019-01-30 |
| ZA201804013B (en) | 2019-07-31 |
| EP3402506A4 (en) | 2019-09-04 |
| RU2019136978A (ru) | 2019-12-19 |
| RU2707738C1 (ru) | 2019-11-29 |
| BR112018014175A2 (pt) | 2018-12-26 |
| JP2019503379A (ja) | 2019-02-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102071162B (zh) | 枯草芽孢杆菌lfb112、其产生的细菌素及应用 | |
| UA126022C2 (uk) | Антибактеріальна композиція й спосіб лікування стафілококових інфекцій антибактеріальною композицією | |
| EP0711305B1 (en) | Protegrins | |
| US9017692B2 (en) | Antimicrobial agent, bacterial strain, biosynthesis, and methods of use | |
| Celia et al. | Characterization of a bacteriophage lysin (Ply700) from Streptococcus uberis | |
| JP2021508740A (ja) | Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ感染症を処置するための治療的バクテリオファージ組成物 | |
| Kuboi et al. | Molecular characterization of AfuFleA, an L-fucose-specific lectin from Aspergillus fumigatus | |
| EA028912B1 (ru) | Новый антибиотик, содержащий миметическое антитело, способы его приготовления и применения | |
| Crupper et al. | Purification and partial characterization of a novel antibacterial agent (Bac1829) produced by Staphylococcus aureus KSI1829 | |
| WO1997018708A1 (en) | Broad spectrum antibiotic peptide | |
| Fischetti | 12 The Use of Phage Lytic Enzymes to Control Bacterial Infections | |
| KR101865782B1 (ko) | 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 k14로부터 단리된 신규 항균 펩타이드 및 그의 용도 | |
| KR101822809B1 (ko) | 바실러스 균종 특이적 용균 활성을 갖는 신규한 항균 단백질 ｂｐｓ13 | |
| KR101765393B1 (ko) | 탄저균 특이 용균 단백질 b4의 제조 방법 및 탄저균에 의해 유발되는 질환의 치료 방법 | |
| KR102669340B1 (ko) | 항균 조성물 및 항균 조성물로 스태필로코커스 감염들을 치료하는 방법 | |
| EP4141021A1 (en) | Antibacterial protein cdl200 having lytic activity against clostridioides difficile | |
| US11834687B1 (en) | Chimeric endolysin polypeptide | |
| KR20240015753A (ko) | 황색포도알균을 포함한 포도알균에 대하여 강력한 용균 활성을 갖는 항균단백질 | |
| 한재원 | Characterization of the Antibiotic Substance Produced by Weissella sp. SNUL2 Isolated from Korean Traditional Food and the Estimation Based on Probiotics Guidelines | |
| Foxfire | Antimicrobial Agents of the Burkholderia Genus and Those Produced by Burkholderia Contaminans MS14 | |
| EP4259793A1 (en) | A chimeric endolysin polypeptide. | |
| WO2023166155A1 (en) | A chimeric endolysin polypeptide | |
| Ahmed et al. | Application Of Microbes And Enzymes In The Advancement Of Medical Science-Mini Review | |
| Maguire et al. | Mortality and Morbidity Avoidance/Reduction of Respiratory Sickness Immediately Following Exposure to Bioweaponized Microbial Pathogens | |
| Wu | Peptidoglycan-targeting lytic enzymes for antimicrobial applications |