CN107827957B - 抗临床多重耐药菌小肽 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一组抗临床多重耐药菌作用的小肽。其特征在于该组小肽具有抗临床分离的多重耐药菌作用。体外活性测定结果表明，11条小肽对多种临床多重耐药菌表现出不同的抗菌活性，按不同细菌，其MIC值在4~128μg/L之间；与母版相比，增强了抗绿脓杆菌及白色念珠菌的活性。选取抗菌活性较好的6条肽做体内实验，结果表明，该6条小肽能明显降低由绿脓杆菌标准菌株和临床泛耐药绿脓杆菌败血症模型小鼠的死亡率，并与多粘菌素具有协同作用；6条小肽的浓度在10 mg/ml时未发生溶血反应，产品安全性较高；兔眼结膜局部刺激实验结果表明，该组小肽未见急性毒性刺激反应。
Description
技术领域
本发明属于生物医药领域，具体地说涉及一组抗临床多重耐药菌的小肽。
背景技术
随着第一支青霉素在20世纪40年代的使用，抗生素的发展在人类医学史上具有重要的意义，挽救了无数的生命，使人的预期寿命增加了十年以上。但是随着人们对抗生素的广泛使用，细菌也逐渐适应并对其产生了耐药性。随着时间的推移，临床上对多种抗生素耐药的细菌越来越常见，出现了临床多重耐药菌(multiple resistant bacteria，MDR)。根据美国疾病控制中心(CDC)提供的数据，早在1980年到1992年之间，由于耐药菌的出现，传染病的平均死亡率上升了58％，使传染病成为心脏病和癌症之后的第三大杀手。
在临床多重耐药菌中，革兰阴性杆菌占较大比例，如肺炎克雷伯氏菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、阴沟杆菌、粘质沙雷菌、枸橼酸菌属、志贺菌属、沙门菌属等；其中，肺炎克雷伯氏菌、大肠杆菌及绿脓杆菌占多重耐药菌的80％以上；此外，革兰阳性菌中有甲氧西林耐药葡萄球菌(MRS)，万古霉素耐药肠球菌(VRE)；近年来，重症监护室(ICU)中的真菌(如白色念珠菌)的耐药率也逐年增高；因此，寻找新型抗耐药菌药物已成为各制药企业的研究热点之一。
虽然目前临床上使用的抗生素有上百种之多，但都属于化学小分子，新研制的抗生素也一般是其结构修饰物，很难解决细菌对抗生素耐药的问题。随着耐药菌问题的出现，新型的抗耐药菌的抗生素的研发已成为国际上广泛关注的问题。在自然界中的许多生物，如昆虫、两栖类动物、植物和哺乳类动物中产生的保护机体的具有抗菌活性的小分子肽，这些肽能与生物体的细胞膜发生作用，从而达到杀死细菌、真菌和病毒的作用。由于其分子量小,化学结构简单,抗菌谱广,无抗生素抗性,免疫反应性很低和便于合成等优点,近年已成为研究的热点。目前国际上已经报道的具有抗菌活性的小肽约有500种(http:// www.bbcm.univ.trieste.it/～tossi/antimic.html)。同时，由于这些小肽是利用生物体自身免疫机制而达到抗菌作用，与传统抗生素的作用有很大不同，被国际上认为是一类具有广阔应用前景的新型抗菌药。但是直接利用天然小肽作为抗菌药物的尝试很少。主要原因有：很多天然的小肽抗菌活性不高；作用机制还不清楚；毒性研究较少。然而，对天然小肽进行结构改造和分子修饰以克服自身缺陷，仍具有良好的研究和应用前景。
发明内容
本发明的内容涉及一组具有如下结构的抗临床多重耐药菌小肽及其应用：
T1.
Gly-Ser-Lys-Lys-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Gln-Arg-Arg-Thr-Gly-Lys-Cys-Gln-Arg-Met(12Asn→12Gln)；
T2.
Gly-Ser-Lys-Lys-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Asn-Arg-Arg-Ala-Gly-Lys-Cys-Gln-Arg-Met(15Thr→15Ala)；
T3.
Gly-Ser-Lys-Lys-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Asn-Arg-Arg-Thr-Ala-Lys-Cys-Gln-Arg-Met(16Gly→16Ala)；
T4.
Gly-Ser-Lys-Lys-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Gln-Arg-Arg-Ser-Gly-Lys-Cys-Gln-Arg-Met(12Asn→12Gln,15Thr→15Ser)；
T5.
Gly-Ser-Lys-Lys-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Gln-Arg-Arg-Thr-Ala-Lys-Cys-Gln-Arg-Met(12Asn→12Gln,16Gly→16Ala)；
T6.
Gly-Ser-Lys-Lys-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Asn-Arg-Arg-Ser-Ala-Lys-Cys-Gln-Arg-Met(15Thr→15Ser,16Gly→16Ala)；
T7.
Gly-Ser-Lys-Lys-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Asn-Lys-Lys-Thr-Gly-Arg-Cys-Gln-Arg-Met(13Arg→13Lys，14Arg→14Lys，17Lys→17Arg)；
T8.
Gly-Ser-Lys-Lys-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Asn-Lys-Arg-Thr-Gly-Lys-Cys-Gln-Arg-Met(13Arg→13Lys)；
T9.
Gly-Ser-Lys-Lys-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Asn-Arg-Lys-Thr-Gly-Lys-Cys-Gln-Arg-Met(14Arg→14Lys)；
T10.
Gly-Ser-Lys-Lys-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Asn-Lys-Arg-Thr-Gly-Arg-Cys-Gln-Arg-Met(13Arg→13Lys，17Lys→17Arg)；
T11.
Gly-Ser-Lys-Lys-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Asn-Arg-Lys-Thr-Gly-Arg-Cys-Gln-Arg-Met(14Arg→14Lys，17Lys→17Arg)。
将制备的上述小肽用于抗菌活性测定，对临床分离的多种耐药菌在体内外都表现出了很好的抑制效果。
本发明对1996年法国科学家Fehlbaum等报道的抗菌肽thanatin氨基酸序列(Gly-Ser-Lys-Lys-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Gln-Arg-Arg-Thr-Gly-Lys-Cys-Gln-Arg-Met)，利用生物信息学软件和分子模拟，通过序列比较、结构分析、功能预测及分子对接，在母版序列的基础上，对2个半胱氨酸之间的6个氨基酸进行突变，以获得更广的抗菌谱及更强的抗真菌活性。在6个氨基酸中有3个碱性氨基酸，分别为13Arg，14Arg和17Lys，由于碱性氨基酸的正电荷为细菌负电荷磷脂膜结合所必须，增加碱性氨基酸数目会增加非特异结合，增加溶血毒性，减少数目则会影响与细菌的结合，而改变电荷的位置可能会减少结合的空间位阻，增加与细菌的亲和力；同时，改变3个中性氨基酸的侧链长度及疏水性，可增加小肽二级结构的稳定性及柔性，增强与不同细菌种属、耐药菌及真菌表面多糖的结合能力，如苏氨酸(-CHOH-CH3)→丝氨酸(-CH2-OH)，谷氨酰胺(-CH2-CH2CO-NH2)→天门冬氨酸(-CH2-CHNH2-CH2-COOH)，丙氨酸(-CH2(NH2)-CH3)→甘氨酸(无侧链)等，通过固相合成，活性筛选，获得了一组具有较高抗菌活性、较低溶血副作用的抗临床多重耐药菌小肽；且这些肽表现出比母版更高的抗肺炎克雷伯氏菌、大肠杆菌、绿脓杆菌及白色念珠菌活性。同时，可将这些小肽应用于制备治疗革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌感染的药物中。
有益效益
本发明具有以下有益效益：
1.计算机辅助设计的小肽对多株临床耐药菌及真菌表现出了良好的抗菌活性，对某些菌株的MIC可达到1μg/ml。与传统抗生素相比，它们是一组新型的多肽类抗菌活性物质，特异性强，不会诱导细菌产生耐药性，有望替代传统抗生素用于治疗临床多重耐药菌引起的感染。
2.通过固相合成法获得了一组具有较高抗菌活性的抗临床多重耐药菌小肽，制备工艺稳定、简单，适合于大规模工业化生产。
3.抗临床多重耐药菌的体外活性测定结果表明，通过突变后的某些肽(如T9、T10、T11)在抗大肠杆菌(Escherichia coli)、肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)、绿脓杆菌(P.aeruginosa)及白色念珠菌(canidia Albicans)标准及临床耐药菌株中均表现出远远超过母版的抗菌活性；对阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)、产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)、解鸟氨酸克雷伯菌(Klebsiella ornithinolytica)、产酸克雷伯菌(Klebsiella oxytoca)等临床多重耐药菌也表现出了良好的抗菌活性。
4.选取抗菌活性最优的3条肽T9、T10、T11，体内实验表明，该3条肽能明显降低由绿脓杆菌标准菌株和临床耐药菌株败血症小鼠的死亡率，并与多粘菌素有协同效应；3条肽的浓度在10mg/ml时均未发生溶血反应，产品安全性较高；兔眼结膜局部刺激实验结果表明，这些肽具有较低的急性毒性刺激反应。
5.将上述结构的小肽单独或组合使用作为其它药物的辅料，或作为食品、化妆品、饲料等添加剂。既能治疗耐药菌引起的感染，又不诱导耐药性细菌的产生，同时，小肽降解后变为生物体可以利用的氨基酸，无残留问题，对环境友好。
具体实施方式
实施例1
抗临床多重耐药菌小肽的固相合成
各小肽的氨基酸序列如下：
T1.
Gly-Ser-Lys-Lys-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Gln-Arg-Arg-Thr-Gly-Lys-Cys-Gln-Arg-Met(12Asn→12Gln)；(GSKKPVPIIYCQRRTGKCQRM)见Seq NO：1；
T2.
Gly-Ser-Lys-Lys-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Asn-Arg-Arg-Ala-Gly-Lys-Cys-Gln-Arg-Met(15Thr→15Ala)；(GSKKPVPIIYCNRRAGKCQRM)见Seq NO：2；
T3.
Gly-Ser-Lys-Lys-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Asn-Arg-Arg-Thr-Ala-Lys-Cys-Gln-Arg-Met(16Gly→16Ala)；(GSKKPVPIIYCNRRTAKCQRM)见Seq NO：3；
T4.
Gly-Ser-Lys-Lys-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Gln-Arg-Arg-Ser-Gly-Lys-Cys-Gln-Arg-Met(12Asn→12Gln,15Thr→15Ser)；(GSKKPVPIIYCQRRSGKCQRM)见Seq NO：4；
T5.
Gly-Ser-Lys-Lys-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Gln-Arg-Arg-Thr-Ala-Lys-Cys-Gln-Arg-Met(12Asn→12Gln,16Gly→16Ala)；(GSKKPVPIIYCQRRTAKCQRM)见Seq NO：5；
T6.
Gly-Ser-Lys-Lys-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Asn-Arg-Arg-Ser-Ala-Lys-Cys-Gln-Arg-Met(15Thr→15Ser,16Gly→16Ala)；(GSKKPVPIIYCNRRSAKCQRM)见Seq NO：6；
T7.
Gly-Ser-Lys-Lys-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Asn-Lys-Lys-Thr-Gly-Arg-Cys-Gln-Arg-Met(13Arg→13Lys，14Arg→14Lys，17Lys→17Arg)；(GSKKPVPIIYCNKKTGRCQRM)见Seq NO：7；
T8.
Gly-Ser-Lys-Lys-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Asn-Lys-Arg-Thr-Gly-Lys-Cys-Gln-Arg-Met(13Arg→13Lys)；(GSKKPVPIIYCNKRTGKCQRM)见Seq NO：8；
T9.
Gly-Ser-Lys-Lys-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Asn-Arg-Lys-Thr-Gly-Lys-Cys-Gln-Arg-Met(14Arg→14Lys)；(GSKKPVPIIYCNRKTGKCQRM)见Seq NO：9；
T10.
Gly-Ser-Lys-Lys-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Asn-Lys-Arg-Thr-Gly-Arg-Cys-Gln-Arg-Met(13Arg→13Lys，17Lys→17Arg)；(GSKKPVPIIYCNKRTGRCQRM)见Seq NO：10；
T11.
Gly-Ser-Lys-Lys-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Asn-Arg-Lys-Thr-Gly-Arg-Cys-Gln-Arg-Met(14Arg→14Lys，17Lys→17Arg)；(GSKKPVPIIYCNRKTGRCQRM)见Seq NO：11；
thanatin氨基酸序列(母版)：
Gly-Ser-Lys-Lys-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Asn-Arg-Arg-Thr-Gly-Lys-Cys-Gln-Arg-Met；(GSKKPVPIIYCNRRTGKCQRM)见Seq NO：12；
采用Fmoc法固相合成上述各序列小肽，由C端至N端合成，即将该多肽C端的第一个Fmoc-AA的羧基活化后与HMP树脂结合，再脱去Fmoc-保护基，与第二个羧基活化的Fmoc-AA结合，再脱去Fmoc-保护基，循环重复，直至得到肽树脂。然后用TFA将肽从肽树脂上切下，得到粗品肽。再将多肽以1mg/mL的浓度溶解在缓冲液(100mmol/L醋酸铵，pH8.5)中，并在室温下不断搅拌3天，采用高效液相色谱法对上述粗品进行纯化和纯度检测。洗脱系统为：①A液：0.1TFA/100％乙腈，②B液；0.1％TFA/100％H2O。手动进样，1mL/次，流速4mL/min，线性梯度，25min内A液从体积分数15％升到体积分数40％，然后5min内升到体积分数95％，A液做最后洗脱。220nm处检测紫外吸收，按峰收集组分，冻干，进行纯度检测，贮藏在-20℃冰箱中备用。HPLC/MS结果显示，用本法合成的多肽纯度都在95％以上，用于后续实验。
也可委托吉尔(上海)生化合成。
实施例2
对临床耐药菌抗菌活性测定
2.1菌株来源
本实验所用的所有临床耐药菌均由东南大学附属中大医院细菌室分离获得。其中，大肠杆菌(Escherichia coli)4株，肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)4株，阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)4株，产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)6株，解鸟氨酸克雷伯菌(Klebsiella ornithinolytica)4株，绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)3株，产酸克雷伯菌(Klebsiella oxytoca)4株，屎肠球菌(Enterococcus faecium)5株，白色念珠菌(Canidia Albicans)3株。所用标准菌株Escherichia coli ATCC 25922，Klebsiella pneumoniae ATCC 700603，Enterobacter cloacae ATCC13047，Enterobacteraerogenes ATCC 49701,Klebsiella ornithinolytica ATCC31898,Klebsiella oxytocaATCC 43086，Enterococcus faecium ATCC 29212,Pseudomonas aeruginosa ATCC 15442，Canidia Albicans ATCC10231由卫生部临检中心提供。
2.2临床耐药菌的抗生素敏感性测试
利用VITEK2全自动细菌鉴定系统进行抗生素敏感性分析。革兰氏阴性菌受试药物分别为：氨苄西林Ampicillin(AMP)，氨苄西林/舒巴坦Ampicillin-sulbactam(SAM)，哌拉西林/他唑巴坦Piperacillin-tazobactam(TZP)(β-内酰胺/β-内酰胺酶抑制剂)，头孢唑林Cefazolin(CFZ)，头孢替坦Cefotetan(CTT)，头孢他啶Ceftazidime(CAZ)，头孢曲松Ceftriaxone(CRO)，头孢吡肟Cefepime(FEP)，氨曲南Aztreonam(ATM)，厄他培南Ertapenem(ETP)，亚胺培南Imipenem(IPM)，阿米卡星Amikacin(AMI)，庆大霉素Gentamicin(GEN)，妥布霉素Tobramycin(TOB)，环丙沙星Ciprofloxacin(CIP)，左氧氟沙星Levofloxacin(LEV)，呋喃妥因Furadantin(NIT)，复方新诺明Cotrimoxazole(SMZ)；革兰氏阳性菌受试药物分别为：青霉素G Penicillin(PEN)，苯唑西林Oxacillin(OXS)，庆大霉素Cefotetan(CTT)，环丙沙星ciprofloxacin(CIP)，左氧氟沙星Levofloxacin(LEV)，莫西沙星Moxifloxacin(MXF)，红霉素Erythromycin(ERY)，氯洁霉素Clindamycin(CLI)，喹奴普汀/达福普汀Quinupristin-dalfopristin(SYN)，利奈咗烷Linezoid(LZ)，万古霉素Vancomycin(VAN)，四环素Tetracycline(TET)，替加环素Tigecycline(TC)，呋喃妥因Nitrofurantoin(NIT)，利福平Rifampin(RIF)，复方新诺明Cotrimoxazole(SMZ)。
2.3MIC的测定
按照国家临床实验标准委员会(NCCLS)的微量肉汤稀释法操作要求测定MIC，用灭菌生理盐水配制浓度为5.12mg/mL多肽样品溶液。试验用菌种分别接种于营养肉汤，于37℃培养24小时，临用前用无菌生理盐水作1：105倍稀释，取12支细菌培养管并编号，于第1管中加入营养肉汤1.6mL，其余11管中均加入0.8mL肉汤。于第1管加入0.2mL多肽溶液，混匀后取出1.0mL加入到第2管中，如此反复，依次稀释到第12管，每管各加菌液0.2mL，轻轻振摇均匀，置37℃培养24h。以无菌生长的最低多肽浓度，即为抑制细菌生长的最低样品浓度(MIC)。所有实验均重复3次。表1为实施例1中制备的抗临床多重耐药菌小肽对几种菌的最低抑菌浓度。
结果表明，小肽T9、T10、T11对大肠杆菌(Escherichia coli)、肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)、阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)、产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)、绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)、解鸟氨酸克雷伯菌(Klebsiella ornithinolytica)、产酸克雷伯菌(Klebsiella oxytoca)、屎肠球菌(Enterococcus faecium)临床多重耐药菌及白色念珠菌(Canidia Albicans)的MIC表现出了最好的抗菌活性。
同时也说明经过生物信息学软件和分子模拟，只能初步预测其活性，但事实上并非所有的设计多肽都具有相应的活性。从表1或表2获知上述3个小肽具有很好的抗菌活性，通过氨基酸的突变、增加或减少碱性氨基酸的数量都会影响其抗菌活性。
表1.标准及临床多重耐药菌的耐药谱及小肽的MIC
*S，表示敏感；I，表示中介；R，代表耐药。
表2.标准及临床多重耐药白色念珠菌的耐药谱及小肽的MIC
*FCT,氟胞嘧啶；AB,两性霉素B；FLU,氟康唑；ITR,伊曲康唑；VRC,伏立康唑。S，表示敏感；I，表示中介；R，代表耐药。
从以上体外活性测定结果表明，T9、T10、T11在抗大肠杆菌(Escherichia coli)、肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)、绿脓杆菌(P.aeruginosa)及白色念珠菌(canidia Albicans)标准及临床耐药菌株中均表现出远远超过母版的抗菌活性；对阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)、产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)、解鸟氨酸克雷伯菌(Klebsiella ornithinolytica)、产酸克雷伯菌(Klebsiella oxytoca)等临床多重耐药菌也表现出了良好的抗菌活性。
由于肺炎克雷伯氏菌、大肠杆菌及绿脓杆菌占多重耐药菌的80％以上，尤其是绿脓杆菌，临床上甚至出现了全耐药菌株，造成临床无药可用的局面；此外，白色念珠菌的耐药一直是临床治疗的难点；T9、T10、T11具有强大的抗大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、绿脓杆菌及白色念珠菌活性，且与细菌/真菌的耐药谱无关，具有重要的临床意义及实用价值。
实施例3
小肽单独或与多粘菌素合用对绿脓杆菌败血症小鼠的作用
小鼠败血症模型建立：绿脓杆菌标准菌株(Pseudomonas aeruginosa)ATCC15442和临床分离的多重耐药菌以MH培养基培养至对数生长期，1000×g离心15min，弃上清，菌体用无菌生理盐水重悬至浓度为1×108CFU/mL。以氯胺酮30mg/kg肌肉注射麻醉小鼠，腹腔注射0.2mL浓度为2.0×108CFU的菌液，观察72h。分组及给药情况如下(每组10只)：对照组，生理盐水；第一组，2mg/kg多粘菌素；第二组，2mg/kg母版，第三组至第五组分别为2mg/kg T9、T10、T11；第六组至第八组：2mg/kg多粘菌素和2mg/kg小肽。给药后连续观察72h。
表3显示，各小肽与多粘菌素均具有协同作用，2mg/kg小肽与2mg/kg多粘菌素联合使用，能明显降低由绿脓杆菌标准菌株和临床耐药绿脓杆菌致败血症小鼠的死亡率，较单独使用小肽或多粘菌素作用明显。
表3多粘菌素和小肽单独或联合使用对绿脓杆菌败血症模型小鼠死亡率的影响
实施例4
溶血活性的测定
将人血红细胞悬浮在磷酸盐缓冲液(pH7.4)中，得到红细胞悬浮液(5％v/v)。将多肽(T9、T10、T11)溶解在磷酸盐缓冲液中，配成约5mg/ml储备液，取14支1.5ml离心管，于第1支离心管中加1ml多肽储备液，其余各管中加0.5ml磷酸盐缓冲液，从第1管中取出0.5ml多肽储备液加至第2管中，用微量混合仪混合均匀，再从第2管中取出0.5ml溶液加至第3管中混合均匀，以此类推，即以倍比稀释法依次稀释到第14管，弃去0.5ml，各管补加0.5ml配好的5％血红细胞悬浮液至终体积1.0ml，轻轻摇匀，37℃恒温箱中保温60min后，于4000rpm离心10分钟，取上清液在414nm下比色，以红细胞悬浮在磷酸盐缓冲液中为空白，以红细胞悬浮在1％TritonX-100中为100％溶血。溶血百分率用下式计算：
定义溶血百分率为50％时的小肽浓度为半数溶血剂量(HC50)。结果表明，小肽(T9、T10、T11)HC50均>10mg/ml。
实施例5
兔眼结膜局部刺激实验
取健康家兔6只，实验前先检查眼结膜血管、角膜透明度及眼分泌物等状况，选用正常者供试。将供试药物用生理盐水配制成等渗。取实施例1中制备的小肽(T9、T10、T11)各0.1ml(5mg/ml)滴入左眼结膜囊中，停留2min；右眼滴入同量生理盐水作为对照。使用放大镜观察给药后1、24、48、72h的眼部情况。结果显示，至72h时，兔眼角膜无浑浊，虹膜正常，结膜无充血水肿，无分泌物出现。表明药液小肽(T9、T10、T11)对兔眼无急性刺激作用。
序列表
<110> 吴国球
<120> 抗临床多重耐药菌小肽
<160> 12
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial)
<400> 1
Gly Ser Lys Lys Pro Val Pro Ile Ile Tyr Cys Gln Arg Arg Thr Gly
1 5 10 15
Lys Cys Gln Arg Met
20
<210> 2
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial)
<400> 2
Gly Ser Lys Lys Pro Val Pro Ile Ile Tyr Cys Asn Arg Arg Ala Gly
1 5 10 15
Lys Cys Gln Arg Met
20
<210> 3
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial)
<400> 3
Gly Ser Lys Lys Pro Val Pro Ile Ile Tyr Cys Asn Arg Arg Thr Ala
1 5 10 15
Lys Cys Gln Arg Met
20
<210> 4
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial)
<400> 4
Gly Ser Lys Lys Pro Val Pro Ile Ile Tyr Cys Gln Arg Arg Ser Gly
1 5 10 15
Lys Cys Gln Arg Met
20
<210> 5
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial)
<400> 5
Gly Ser Lys Lys Pro Val Pro Ile Ile Tyr Cys Gln Arg Arg Thr Ala
1 5 10 15
Lys Cys Gln Arg Met
20
<210> 6
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial)
<400> 6
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1 5 10 15
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20
<210> 7
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial)
<400> 7
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1 5 10 15
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20
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<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial)
<400> 8
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1 5 10 15
Lys Cys Gln Arg Met
20
<210> 9
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial)
<400> 9
Gly Ser Lys Lys Pro Val Pro Ile Ile Tyr Cys Asn Arg Lys Thr Gly
1 5 10 15
Lys Cys Gln Arg Met
20
<210> 10
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial)
<400> 10
Gly Ser Lys Lys Pro Val Pro Ile Ile Tyr Cys Asn Lys Arg Thr Gly
1 5 10 15
Arg Cys Gln Arg Met
20
<210> 11
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial)
<400> 11
Gly Ser Lys Lys Pro Val Pro Ile Ile Tyr Cys Asn Arg Lys Thr Gly
1 5 10 15
Arg Cys Gln Arg Met
20
<210> 12
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial)
<400> 12
Gly Ser Lys Lys Pro Val Pro Ile Ile Tyr Cys Gln Arg Arg Thr Gly
1 5 10 15
Lys Cys Gln Arg Met
20
Claims (4)
1.一种小肽及其适用于药用的盐，其特征在于其氨基酸序列如下任意一条：
T9. Gly-Ser-Lys-Lys-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Asn-Arg-Lys-Thr-Gly-Lys-Cys-Gln-Arg-Met；
T10. Gly-Ser-Lys-Lys-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Asn-Lys-Arg-Thr-Gly-Arg-Cys-Gln-Arg-Met；
T11. Gly-Ser-Lys-Lys-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Asn-Arg-Lys-Thr-Gly-Arg-Cys-Gln-Arg-Met；
上述结构小肽的氨基酸是L型。
2.根据权利要求1所述的小肽及其适用于药用的盐在制备治疗革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌引起的败血症、炎症药物中的应用。
3.根据权利要求2所述的小肽及其适用于药用的盐的应用，其特征在于：将所述小肽制备治疗对抗滥用传统抗生素所致临床多重耐药菌的感染药物中的应用。
4.根据权利要求3所述的小肽及其适用于药用的盐的应用，其特征在于：将所述小肽与其他药物组合制备治疗对抗滥用传统抗生素所致临床多重耐药菌的感染药物中的应用。
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