CN109406681A - 白芷药材的uplc特征图谱构建方法和检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种白芷药材的UPLC特征图谱构建方法和检测方法。该方法包括如下步骤：参照物溶液的制备：称定欧前胡素对照品，加溶剂溶解，即得参照物溶液；供试品溶液的制备：称定白芷药材，加入提取溶剂进行超声或回流提取，滤过，取续滤液，即得所述供试品溶液；特征图谱的建立：分别吸取所述参照物溶液和供试品溶液，注入超高效液相色谱仪，测定，即得所述特征图谱；其中所述超高效液相色谱采用的洗脱条件为：以乙腈为流动相A，以体积浓度为0.05‑0.15％的乙酸水溶液为流动相B；采用梯度洗脱。通过该方法建立的特征图谱能够较全面地反映白芷药材的特征，方法准确可靠、重复性好、操作简便。

Description

白芷药材的UPLC特征图谱构建方法和检测方法

技术领域

本发明涉及中药材质量研究，特别是涉及一种白芷药材的UPLC特征图谱构建方法和检测方法。

背景技术

白芷为伞形科植物白芷Angelica dahurica(Fisch.exHoffm.)Benth.et Hook.f.或杭白芷Angelica dahurica(Fisch.ex Hoffm.)Benth.et Hook.f.var.formosana(Boiss.)Shan et Yuan.的干燥根。始载于《神农本草经》，辛、温，归胃、大肠、肺经，具有解表散寒、祛风止痛、宣通鼻窍、燥湿止带、消肿排脓等作用，常被用于治疗感冒头痛、眉棱骨痛、鼻塞流涕、鼻鼽、鼻渊、牙痛、带下、疮疡肿痛等。

已有文献报道，白芷主要化学成分及药效成分为黄酮类及其衍生物、挥发油。现代药理研究表明，白芷具有解热、镇痛、抗炎、抗菌、抗氧化、抗衰老、心血管保护、抗肿瘤等作用。白芷水提取物具有较强的解热作用，香豆素类是白芷产生解热、镇痛、抗炎的主要成分，白芷总香豆素联合挥发油使用可明显增强镇痛抗炎作用。欧前胡素能够抑制毒激素-L所诱导的脂肪分解和抑制HIF-1靶标基因的表达，从而发挥抗肿瘤作用，通过抑制毒激素-L所诱导的脂肪分解，消除抑郁样行为，对5-HT有明显的刺激作用。

中药是多种成分针对多个靶点叠加起作用，而目前的质控标准是以某种特定成分为指标，随着中药研究的现代化，中药的质量研究逐渐从单一有效成分或指标成分的定性定量分析转向有效成分群分析。

中国药典2015年版白芷的质量控制仅限于欧前胡素含量测定。因此，白芷药材的质量控制，除要建立有效成分欧前胡素含量测定方法，制定含量测定限度外，建立有效成分群的特征图谱分析方法，更有利于全面掌握药材的质量。中药特征图谱技术对增加中药质控含量，提高中药工业整体水平，实现中药走向世界，具有非常重要的现实意义。

传统方法中对白芷的特征图谱研究中，主要涉及HPLC、GC及RRLC等方法，研究对象主要涉及挥发油类和香豆素类化学成分，对于黄酮类成分研究较少，且建立的特征图谱共有峰较少。

基于此，为了更好的评价白芷药材的质量，建立更全面的白芷药材特征图谱，特别是针对白芷中的黄酮类成分的质量评价体系是十分必要的。

发明内容

基于此，有必要提供一种白芷药材的UPLC特征图谱构建方法。通过该方法建立的特征图谱具有16个共有峰，其中包括9种明确的黄酮类成分，能够较全面地反映白芷药材的特征，方法准确可靠、重复性好、操作简便。

一种白芷药材的UPLC特征图谱构建方法，包括如下步骤：

参照物溶液的制备：称定欧前胡素对照品，加溶剂溶解，即得参照物溶液；

供试品溶液的制备：称定白芷药材，加入提取溶剂进行超声或回流提取，滤过，取续滤液，即得所述供试品溶液；所述提取溶剂为甲醇、体积浓度为45-55％的甲醇水溶液、乙醇或体积浓度为45-55％的乙醇水溶液；

特征图谱的建立：分别吸取所述参照物溶液和供试品溶液，注入超高效液相色谱仪，测定，即得所述特征图谱；所述特征图谱包括水合氧化前胡素、白当归素、8-甲氧基补骨脂素、佛手苷内酯、白当归脑、氧化前胡素、欧前胡素、珊瑚菜素、异欧前胡素特征峰；

其中所述超高效液相色谱采用的洗脱条件为：以乙腈为流动相A，以体积浓度为0.05-0.15％的乙酸水溶液为流动相B；采用梯度洗脱。

在其中一个实施例中，所述梯度洗脱的方法为：

0-5.5min，流动相A的体积百分数由15％上升至28％，流动相B的体积百分数由85％降低至72％；

5.5-7min，流动相A的体积百分数由28％上升至40％，流动相B的体积百分数由72％降低至60％；

7-9.5min，保持流动相A的体积百分数为40％，流动相B的体积百分数为60％；

9.5-15.5min，流动相A的体积百分数由40％上升至65％，流动相B的体积百分数由60％降低至35％；

15.5-15.51min，流动相A的体积百分数由65％下降至15％，流动相B的体积百分数由35％降低至85％；

15.51-18min，保持流动相A的体积百分数为15％，流动相B的体积百分数为85％。

在其中一个实施例中，所述提取溶剂为体积浓度为45-55％的乙醇水溶液，用量为每0.5g白芷药材加入10-50mL；提取时间为20-40min。

在其中一个实施例中，所述超高效液相色谱的条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；所述流动相的流速为0.25-0.4mL/min；柱温为30-40℃；检测波长为300nm或254nm。

在其中一个实施例中，所述参照物溶液的制备中，所述溶剂为甲醇，所述参照物溶液中欧前胡素的浓度为8-12μg/mL。

在其中一个实施例中，所述特征图谱包括16个特征峰，以峰13欧前胡素的色谱峰为参照峰S峰，各特征峰的相对保留时间应在规定值的±10％之内，所述规定值为：峰1：0.19、峰2：0.26、峰3：0.35、峰4：0.43、峰5(水合氧化前胡素)：0.49、峰6(白当归素)：0.51、峰7：0.58、峰8(8-甲氧基补骨脂素)：0.61、峰9(佛手苷内酯)：0.67、峰10：0.71、峰11(白当归脑)：0.79、峰12(氧化前胡素)：0.81、峰13(欧前胡素)：1、峰14(珊瑚菜素)：1.05、峰15(异欧前胡素)：1.11、峰16：1.12。

一种白芷药材的检测方法，包括如下步骤：

待测样品溶液的制备：称定待测白芷药材，加入提取溶剂进行超声或回流提取，滤过，取续滤液，即得所述供试品溶液；所述提取溶剂为甲醇、体积浓度为45-55％的甲醇水溶液、乙醇或体积浓度为45-55％的乙醇水溶液；

检测：吸取所述待测样品溶液，注入超高效液相色谱仪，测定，即可；

其中所述超高效液相色谱采用的洗脱条件为：以乙腈为流动相A，以体积浓度为0.05-0.15％的乙酸水溶液为流动相B；采用梯度洗脱。

在其中一个实施例中，所述梯度洗脱的方法为：

0-5.5min，流动相A的体积百分数由15％上升至28％，流动相B的体积百分数由85％降低至72％；

5.5-7min，流动相A的体积百分数由28％上升至40％，流动相B的体积百分数由72％降低至60％；

7-9.5min，保持流动相A的体积百分数为40％，流动相B的体积百分数为60％；

9.5-15.5min，流动相A的体积百分数由40％上升至65％，流动相B的体积百分数由60％降低至35％；

15.5-15.51min，流动相A的体积百分数由65％下降至15％，流动相B的体积百分数由35％降低至85％；

15.51-18min，保持流动相A的体积百分数为15％，流动相B的体积百分数为85％。

在其中一个实施例中，所述提取溶剂为体积浓度为45-55％的乙醇水溶液，用量为每0.5g白芷药材加入10-50mL。

在其中一个实施例中，所述提取的时间为20-40min。

在其中一个实施例中，所述超高效液相色谱的条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；所述流动相的流速为0.25-0.4mL/min；柱温为30-40℃；检测波长为300nm或254nm。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

(1)本发明通过采用超高效液相色谱(UPLC)法，并对色谱条件进行合理控制，以欧前胡素为参照峰，以乙腈为流动相A，以体积浓度为0.05-0.15％的乙酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱，共确定了16个特征峰，其中包括化学结构明确的9个黄酮类成分特征峰，构成白芷药材特征图谱的全貌，使白芷药材的质量控制从原来的某几个成分含量测定或少数几个共有峰的测定，上升为对整个白芷药材内在的品质检测，尤其是对黄酮类成分的检测，能够较全面地反映白芷药材的特征，避免了单一或少数几个的化学成分检验的缺陷，可用于测定白芷中的化学组分和白芷药材的鉴别。

(2)本发明方法简单，重现性良好，准确可靠，UPLC的梯度洗脱的条件简单，便于操作，相比于HPLC法测定白芷特征图谱，本发明建立的特征图谱方法更加省时，且溶剂消耗更少。

(3)从白芷药材特有的特征图谱角度，选取欧前胡素为参照峰，计算特征峰的相对保留时间与相对峰面积，能够提高多个特征成分的定量化的准确性。

附图说明

图1为不同提取溶剂条件下白芷药材的UPLC色谱图；

图2为不同提取方式条件下白芷药材的UPLC色谱图；

图3为不同提取时间条件下白芷药材的UPLC色谱图；

图4为全波扫描下白芷药材的3D UPLC色谱图；

图5为300nm和254nm波长条件下白芷药材的UPLC色谱图；

图6为流动相采用不同水相条件下白芷药材的UPLC色谱图；

图7为流动相采用不同乙酸浓度条件下白芷药材的UPLC色谱图；

图8为白芷药材的UPLC对照图谱，其中，峰5：水合氧化前胡素；峰6：白当归素；峰8：8-甲氧基补骨脂素；峰9：佛手苷内酯；峰11：白当归脑；峰12：氧化前胡素；峰13：欧前胡素；峰14：珊瑚菜素；峰15：异欧前胡素；

图9为17批白芷药材UPLC特征图谱叠加图；

图10为白芷药材色谱峰的指认图；

图11为白芷药材的UPLC对照图谱构建的专属性考察色谱图；

图12为白芷药材的UPLC对照图谱构建的整体性考察色谱图；

图13为待测白芷药材的UPLC色谱图。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明的白芷药材的UPLC特征图谱构建方法和检测方法作进一步详细的说明。

实施例1：

本实施例为白芷药材的UPLC特征图谱构建方法。

1、仪器与材料

Waters H-class超高效液相色谱仪，Waters PDA检测器，Empower工作站；AgilentSB C₁₈色谱柱(100mm×2.1mm，1.8μm)；ACQUITY UPLC I-Class超高效液相飞行时间高分辨质谱联用系统，数据处理系统为MarkerLynx 4.1工作站；Mettler XP26百万分之一天平(瑞士Mettler Toledo公司)；Milli-Q超纯水净化系统(美国Millipore公司)；KQ5500DE型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。甲醇、乙腈为色谱纯(Merk)；水为Mili-Q纯化水；其余试剂为分析纯。

欧前胡素(批号：1108206-201616)、异欧前胡素(批号：110827-201611)由中国食品药品检定研究院提供；白当归素(批号：wkq16031401)、水合氧化前胡素(批号：wkq17062205)、珊瑚菜素(批号：wkq17101106)由四川省维克奇生物科技有限公司提供；8-甲氧基补骨脂素(批号：Whar0912)、氧化前胡素(批号：B21471-20mg)由南京元宝峰医药科技有限公司提供；佛手苷内酯(批号：C1420110)由上海阿拉丁生化科技股份有限公司提供；白当归脑(批号：PO1030SA13)由上海源叶生物科技有限公司提供；白芷药材分别采于主产区河北、河南、安徽、山东地区，经广东一方制药有限公司陈向东制药高级工程师鉴定为伞形科植物白芷Angelica dahurica(Fisch.exHoffm.)Benth.et Hook.f.的干燥根，药材信息见表1。

表1白芷药材信息表

评价软件：“中药色谱特征图谱相似度评价系统”2012.0版本(国家药典委员会)。

2、色谱条件与供试品溶液的制备

2.1色谱条件：以Agilent SB C₁₈(100mm×2.1mm，1.8μm)为色谱柱，流速为0.35mL/min；柱温为35℃；检测波长为300nm；以乙腈(A)-体积浓度0.1％乙酸水溶液(B)为流动相，按下表2规定进行梯度洗脱。

表2梯度洗脱表

2.2参照物溶液的制备：取欧前胡素对照品、异欧前胡素对照品和白当归素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含欧前胡素10μg、异欧前胡素1μg、白当归素15μg的混合溶液，摇匀，即得。

2.3供试品溶液的制备：取白芷药材粉末适量，研细，过三号筛，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇(体积浓度为45-55％的乙醇水溶液)20mL，称定重量，超声处理(300W，50kHz)30min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4对照品溶液的制备：取欧前胡素、异欧前胡素、白当归素、水合氧化前胡素、8-甲氧基补骨脂素、佛手苷内酯、白当归脑、氧化前胡素、珊瑚菜素对照品适量，置25mL量瓶中，加入甲醇定容至刻度，配制成质量浓度为10、1、15、101、107、105、108、110、115mg/L的对照品溶液。

2.5测定方法

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μL，注入超高液相色谱仪，测定。

2.6质谱条件：电喷雾离子源正离子模式检测；毛细管电压：3000V；锥孔电压：35V；离子源温度：100℃；脱溶剂气温度：300℃；脱溶剂气流速：800L/h；质量扫描范围m/z 150～1500。

3、供试品溶液制备方法考察

3.1提取溶媒考察

取白芷药材粉末(过三号筛)(S1)约0.5g，平行5份，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入甲醇、体积浓度50％甲醇水溶液、稀乙醇、乙醇、水20mL，称定重量，超声处理(功率300W，频率50KHz)30分钟，放冷，再称定重量，分别用甲醇、体积浓度50％甲醇水溶液、稀乙醇、乙醇、水补足重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。按“2.1”项下色谱条件，进样，测定，结果见表3。

表3不同提取溶剂考察结果

结果如图1所示，采用不同的提取溶剂，色谱峰的数量相差较为明显，且以甲醇、体积浓度50％甲醇水溶液、稀乙醇提取所得的色谱峰信息量相当，综合考虑溶剂提取能力、溶液稳定性及溶剂配置安全性，稀乙醇是较为合适的溶剂。

3.2提取方式考察

分别考察不同提取方式白芷药材特征图谱的影响，本研究选取超声提取和回流提取两种提取方式进行对比。

取白芷药材粉末(过三号筛)(S1)约0.5g，平行2份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇20mL，称定重量，分别超声处理(功率300W，频率50KHz)30分钟，加热回流30分钟。放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得。按“2.1”项下色谱条件，进样，测定，结果见表4。

表4不同提取方式考察结果

结果如图2所示，采用超声处理和加热回流两种提取方式的色谱图相差不大，考虑操作的简便性，采用超声处理提取方式。

3.3提取时间考察

取白芷药材粉末(过三号筛)(S1)约0.5g，平行3份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇20ml，称定重量，分别超声处理(功率300W，频率50KHz)20、30、40分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得。按“2.1”项下色谱条件，进样，测定，结果见表5。

表5不同提取方式考察结果

结果如图3所示，上述提取时间设置对色谱图影响不大，为了保证提取完全，选择超声30分钟。

4、色谱条件优化

4.1检测波长的确定

取白芷药材粉末(过三号筛)(S1)取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇20mL，称定重量，超声处理(300W，50kHz)30min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。按照下表6梯度进行洗脱，记录190～400nm范围内的吸收光谱。

表6

结果如图4及图5所示，实验结果表明，300nm和254nm波长下色谱峰的吸收较好，考虑到基线的稳定性，采用300nm。

4.2流动相的选择

取同一供试品溶液，分别考察流动相乙腈—水、乙腈—体积浓度0.1％磷酸水溶液、乙腈—体积浓度0.1％甲酸水溶液和乙腈－体积浓度0.1％乙酸水溶液，以及乙腈－体积浓度0.05％乙酸水溶液和乙腈－体积浓度0.1％乙酸水溶液为洗脱系统，按“2.1”色谱条件进样分析。

结果如图6及图7所示，实验结果，乙腈-体积浓度0.1％的乙酸峰信息量相对较多，各个峰的分离效果较好，各成分峰形佳，故选用乙腈－体积浓度0.1％乙酸水溶液系统。

5、白芷药材特征图谱的建立

5.1取白芷药材17批，按“2.3”项下制备成供试品溶液，按“2.1”项下的色谱条件进样测定。

5.2白芷药材特征图谱共有峰的确定：采用国家药典委员会推荐的“中药色谱特征图谱相似度评价系统(2012.0版本)”对17批白芷药材UPLC图谱进行结果分析，共确定16个共有峰。16个共有峰中，第13号峰(欧前胡素)分离度好，峰形对称、峰面积大，且为白芷发挥解热、镇痛、抗炎的主要成分之一，故以第13号峰(欧前胡素)为参照峰(即为S峰)，对照图谱见图8，分别计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积，结果见表7，表8。从样品共有峰的相对保留时间(表7)可以看出，各样品共有峰的相对保留时间非常接近，RSD在0.06％～2.76％，表明共有峰选择的准确性。从样品共有峰的相对峰面积(表8)可以看出，不同样品各共有峰的峰面积相差比较大，表明不同产地的白芷的共有峰含量存在一定的差异。

表7白芷药材的相对保留时间值

表8白芷药材的相对峰面积值

结果表明：供试品特征图谱中应呈现16个特征峰，并应与对照药材参照物色谱中的16个特征峰相对应；与欧前胡素参照物峰相应的峰13为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±10％之内，规定值为：峰1：0.19、峰2：0.26、峰3：0.35、峰4：0.43、峰5：0.49、峰6：0.51、峰7：0.58、峰8：0.61、峰9：0.67、峰10：0.71、峰11：0.79、峰12：0.81、峰13：1、峰14：1.05、峰15：1.11、峰16：1.12，计算各特征峰与峰13的相对峰面积，其相对峰面积应在规定的范围内，规定范围为：峰1：0.01～0.08、峰2：0.01～0.03、峰3：0.01～0.03、峰4：0.01～0.04、峰5：0.18～1.15、峰6：0.01～0.21、峰7：0.01～0.05、峰8：0.05～0.21、峰9：0.07～0.22、峰10：0.01～0.12、峰11：0.12～0.40、峰12：0.38～1.24、峰13：1、峰14：0.22～0.45、峰15：0.23～0.50、峰16：0.02～0.04。

5.3白芷药材特征图谱相似度评价：采用国家药典委员会推荐的“中药色谱特征图谱相似度评价系统((2012.0版本)”对S1～S17号白芷药材样品特征图谱进行叠加，考察色谱峰相似度的一致性，进行相似度评价，结果见图9、表9。结果表明4个不同产地白芷药材样品的相似度均在0.9以上，说明样品特征图谱与对照图谱的相似度较高，16个共有峰在各样品中均能稳定出现，且吻合度较好，因此该图谱可作为白芷药材的特征图谱。

表9不同白芷样品的相似度

6、共有峰的指认

采用“2.1”项下色谱条件和“2.6”项下质谱条件，分别对供试品溶液和对照品溶液进行检测。通过化合物的色谱峰保留行为、精确分子量及与对照品进行比对，共确定了9个化合物。根据保留时间先后，分别为水合氧化前胡素(峰5)、白当归素(峰6)、8-甲氧基补骨脂素(峰8)、佛手苷内酯(峰9)、白当归脑(峰11)、氧化前胡素(峰12)、欧前胡素(峰13，S)、珊瑚菜素(峰14)和异欧前胡素(峰15)。供试品溶液与9个对照品溶液色谱峰叠加图见图10，各色谱峰的相关信息见下表10。

表10

7、方法学考察

(1)专属性考察

取白芷药材粉末(过三号筛)(S1)，按“2.3”项下确定的方法制备成供试品溶液、空白溶剂(稀乙醇)、按“2.2”项下确定的方法制备成参照物溶液，按“2.1”项下的色谱条件进样测定，记录色谱图。

实验结果：如图11所示，白芷药材特征图谱16个色谱峰不受阴性空白溶剂的干扰，其中药材中特征图谱白当归素、欧前胡素、异欧前胡素峰与参照物溶液的保留时间一致，本方法具有良好的专属性。

(2)整体性考察

取白芷药材粉末(过三号筛)(S1)，按“2.3”项下确定的方法制备成供试品溶液。按“2.1”项下的色谱条件，保持最后梯度，并将洗脱时间延长至原来总时间的2倍，分析色谱峰，梯度如下表11所示：

表11白芷药材特征图谱整体性考察梯度洗脱程序

实验结果如图12所示：在18分钟后无明显色谱峰，在当前色谱条件下色谱峰基本满足了信息量最大原则。

(3)精密度考察

取白芷药材粉末(过三号筛)(S1)，按“2.3”项下确定的方法制备成供试品溶液，按“2.1”项下的色谱条件，连续进样6次进行测定，以欧前胡素色谱峰为参照峰S，计算峰1～峰16的相对保留时间，并计算RSD值。

实验结果：在连续进样6次的精密度考察中白芷药材16个色谱峰相对保留时间的RSD<2％，相对峰面积的RSD<2％，表明该特征图谱方法精密度良好。

(4)稳定性考察

取白芷药材粉末(过三号筛)(S1)，按“2.3”项下确定的方法制备成供试品溶液，按“2.1”项下的色谱条件，于室温下放置，在0h、2h、4h、6h、8h、12h小时进样测定，以欧前胡素色谱峰为参照峰S，计算峰1～峰16的相对保留时间以及相对峰面积，并计算RSD值。

实验结果：白芷药材特征图谱16个色谱峰相对保留时间的RSD<2％，相对峰面积的RSD<2％，表明该特征图谱方法重复性良好。

(5)重复性考察

取白芷药材粉末(过三号筛)(S1)，平行6份，按“2.3”项下确定的方法制备成供试品溶液，按“2.1”项下的色谱条件，进样测定，以欧前胡素色谱峰为参照峰S，计算峰1～峰16的相对保留时间以及相对峰面积，并计算RSD值。

实验结果：白芷药材特征图谱16个色谱峰相对保留时间的RSD<2％，相对峰面积的RSD<2％，表明该特征图谱方法重复性良好。

实施例2

本实施例为一种白芷药材的检测方法，步骤如下：

1、色谱条件

以Agilent SB C₁₈(100mm×2.1mm，1.8μm)为色谱柱，流速为0.35mL/min；柱温为35℃；检测波长为300nm；以乙腈(A)-体积浓度0.1％乙酸水溶液(B)为流动相，按下表2规定进行梯度洗脱。

表2梯度洗脱表

2、待测样品溶液的制备：取待测白芷药材(S18)，研细，过三号筛，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇(体积浓度为45-55％的乙醇水溶液)20mL，称定重量，超声处理(300W，50kHz)30min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

3、测定：精密吸取待测样品溶液1μL，注入超高效液相色谱仪，按照1的色谱条件进行测定，即得。

结果如图13所示，与实施例1建立的白芷对照药材特征图谱(图8)进行对比可知，结果如图13所示，供试品特征图谱中呈现16个特征峰，并与白芷对照药材特征图谱中的16个特征峰相对应；与欧前胡素参照物峰相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间和相对峰面积，其相对保留时间和相对峰面积在规定范围之内，且相似度为0.94，大于0.90，说明该药材符合质量要求。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.一种白芷药材的UPLC特征图谱构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

参照物溶液的制备：称定欧前胡素对照品，加溶剂溶解，即得参照物溶液；

供试品溶液的制备：称定白芷药材，加入提取溶剂进行超声或回流提取，滤过，取续滤液，即得所述供试品溶液；所述提取溶剂为甲醇、体积浓度为45-55％的甲醇水溶液、乙醇或体积浓度为45-55％的乙醇水溶液；

特征图谱的建立：分别吸取所述参照物溶液和供试品溶液，注入超高效液相色谱仪，测定，即得所述特征图谱；所述特征图谱中包括水合氧化前胡素、白当归素、8-甲氧基补骨脂素、佛手苷内酯、白当归脑、氧化前胡素、欧前胡素、珊瑚菜素、异欧前胡素特征峰；

其中所述超高效液相色谱采用的洗脱条件为：以乙腈为流动相A，以体积浓度为0.05-0.15％的乙酸水溶液为流动相B；采用梯度洗脱。

2.根据权利要求1所述的白芷药材的UPLC特征图谱构建方法，其特征在于，所述梯度洗脱的方法为：

0-5.5min，流动相A的体积百分数由15％上升至28％，流动相B的体积百分数由85％降低至72％；

5.5-7min，流动相A的体积百分数由28％上升至40％，流动相B的体积百分数由72％降低至60％；

7-9.5min，保持流动相A的体积百分数为40％，流动相B的体积百分数为60％；

9.5-15.5min，流动相A的体积百分数由40％上升至65％，流动相B的体积百分数由60％降低至35％；

15.5-15.51min，流动相A的体积百分数由65％降低至15％，流动相B的体积百分数由35％上升至85％；

15.51-18min，保持流动相A的体积百分数为15％，流动相B的体积百分数为85％。

3.根据权利要求1所述的白芷药材的UPLC特征图谱构建方法，其特征在于，所述提取溶剂为体积浓度为45-55％的乙醇水溶液，用量为每0.5g白芷药材加入10-50mL；提取时间为20-40min。

4.根据权利要求1-3任一项所述的白芷药材的UPLC特征图谱构建方法，其特征在于，所述超高效液相色谱的条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；所述流动相的流速为0.25-0.4mL/min；柱温为30-40℃；检测波长为300nm或254nm。

5.根据权利要求1-3任一项所述的白芷药材的UPLC特征图谱构建方法，其特征在于，所述特征图谱包括16个特征峰，以峰13欧前胡素的色谱峰为参照峰S峰，各特征峰的相对保留时间应在规定值的±10％之内，所述规定值为：峰1：0.19、峰2：0.26、峰3：0.35、峰4：0.43、峰5：0.49、峰6：0.51、峰7：0.58、峰8：0.61、峰9：0.67、峰10：0.71、峰11：0.79、峰12：0.81、峰13：1、峰14：1.05、峰15：1.11、峰16：1.12。

6.一种白芷药材的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

待测样品溶液的制备：称定待测白芷药材，加入提取溶剂进行超声或回流提取，滤过，取续滤液，即得所述供试品溶液；所述提取溶剂为甲醇、体积浓度为45-55％的甲醇水溶液、乙醇或体积浓度为45-55％的乙醇水溶液；

检测：吸取所述待测样品溶液，注入超高效液相色谱仪，测定，即可；

其中所述超高效液相色谱采用的洗脱条件为：以乙腈为流动相A，以体积浓度为0.05-0.15％的乙酸水溶液为流动相B；采用梯度洗脱。

7.根据权利要求6所述的白芷药材的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱的方法为：

0-5.5min，流动相A的体积百分数由15％上升至28％，流动相B的体积百分数由85％降低至72％；

5.5-7min，流动相A的体积百分数由28％上升至40％，流动相B的体积百分数由72％降低至60％；

7-9.5min，保持流动相A的体积百分数为40％，流动相B的体积百分数为60％；

9.5-15.5min，流动相A的体积百分数由40％上升至65％，流动相B的体积百分数由60％降低至35％；

15.5-15.51min，流动相A的体积百分数由65％下降至15％，流动相B的体积百分数由35％降低至85％；

15.51-18min，保持流动相A的体积百分数为15％，流动相B的体积百分数为85％。

8.根据权利要求6所述的白芷药材的检测方法，其特征在于，所述提取溶剂为体积浓度为45-55％的乙醇水溶液，用量为每0.5g白芷药材加入10-50mL。

9.根据权利要求6所述的白芷药材的检测方法，其特征在于，所述提取的时间为20-40min。

10.根据权利要求6-9任一项所述的白芷药材的检测方法，其特征在于，所述超高效液相色谱的条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；所述流动相的流速为0.25-0.4mL/min；柱温为30-40℃；检测波长为300nm或254nm。